KR102067394B1 - 신경학적 염증성 장애의 치료를 위한 인자 ｘｉｉ 억제제 - Google Patents

신경학적 염증성 장애의 치료를 위한 인자 ｘｉｉ 억제제 Download PDF

Info

Publication number
KR102067394B1
KR102067394B1 KR1020147024214A KR20147024214A KR102067394B1 KR 102067394 B1 KR102067394 B1 KR 102067394B1 KR 1020147024214 A KR1020147024214 A KR 1020147024214A KR 20147024214 A KR20147024214 A KR 20147024214A KR 102067394 B1 KR102067394 B1 KR 102067394B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
fxii
seq
leu
val
glu
Prior art date
Application number
KR1020147024214A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20140117660A (ko
Inventor
스벤 모이스
케르스틴 괴벨
크리스토프 클라인슈니츠
브렌트 맥켄지
마르크 놀테
Original Assignee
체에스엘 베링 게엠베하
시에스엘 리미티드
율리우스-막시밀리안스 우니버지태트 뷔르츠부르크
베스트?리셰 빌헴스 우니베지태트 뮌스터
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 체에스엘 베링 게엠베하, 시에스엘 리미티드, 율리우스-막시밀리안스 우니버지태트 뷔르츠부르크, 베스트?리셰 빌헴스 우니베지태트 뮌스터 filed Critical 체에스엘 베링 게엠베하
Publication of KR20140117660A publication Critical patent/KR20140117660A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102067394B1 publication Critical patent/KR102067394B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/556—Angiotensin converting enzyme inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 출원은, 신경학적 염증성 질환(예: 다발성 경화증), 및 신경학적 염증성 질환(예: 다발성 경화증)의 영향을 예방하거나, 치료하거나, 또는 달리는 개선하기 위한 인자 XII 억제제의 투여 방법에 관한 것이다. 또한, 제제 및 FXII의 활성을 억제하는 제제를 포함하는 약제학적 조성물도 제공된다.

Description

신경학적 염증성 장애의 치료를 위한 인자 ＸＩＩ 억제제{FACTOR XII INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF NEUROLOGICAL INFLAMMATORY DISORDERS}
본 출원은, 신경학적 염증성 질환(예: 다발성 경화증)에 관한 것이고, 또한 신경학적 염증성 질환(예: 다발성 경화증)의 영향을 예방하거나, 치료하거나, 또는 달리는 개선하기 위한 인자 XII 억제제의 투여 방법에 관한 것이다. 또한, 제제 및 FXII의 활성을 억제하는 제제를 포함하는 약제학적 조성물도 제공된다.
다발성 경화증(MS)은, 이들의 병인학의 일부로서 면역 세포의 침윤, 탈수초화, 및 축삭/신경 손상을 포함하는 신경학적 염증성 질환 스펙트럼의 일부이다. 세계 보건 기구(The World Health Organization)(ICD-9-CM 진단 코드 340)는, 쇠약, 운동실조증, 지각이상 및 언어 장해와 같은 증상과 함께 중추 신경계에 수많은 탈수초화 영역의 존재를 특징으로 하는 만성 질환으로서 MS를 기술하고 있다. MS 및 이와 같은 다른 질환은, 염증성 세포가 신경계를 침입하여 탈수초화 및 조직 파괴를 초래하는 자가면역 공격에 의해 야기된다(Morales et al., Adv Neurol 2006; 98:27-45; Frohman et al., N Engl J Med 2006; 354:942-55). 조직병리학적인 추론은, 세포성 침윤이 있는 MS 플라크(T 세포, B 세포, 마크로파지)이고, 이는 결국 희소돌기아교세포 및 축삭 손상을 유발하리라 여겨진다. 파괴 과정이 진행됨에 따라, 탈수초화는 인지 기능의 손상을 초래한다(Ragonese et al., Eur J Neurol 2008;15:123-7; Bergamaschi et al., Neuroepidemiology 2005; 25:15-18).
탈수초화는, 신경 축삭 주위에 절연층을 형성하는 수초(myelin sheath)의 손실이다. 미엘린은, 해부학적 위치에 따른 상이한 세포 유형에 의해 생성된다: 희소돌기아교세포는 중추 신경계(CNS)의 축삭을 수초화하는 반면, 슈반 세포(Schwann cell)는 말단 축삭을 수초화한다. 미엘린은 미엘린 염기성 단백질(MBP), 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG), 단백지질 단백질(PLP), 갈락토세레브로사이드(GalC), 및 스핑고미엘린을 포함하는, 몇몇의 단백질 및 지질로 구성된다.
탈수초화 질환의 징후 및 증상은 탈수초화 위치에 따라 변한다. 일부 통상적인 징후 및 증상으로는 시각 문제(복시, 안진 또는 시각 손실), 아린감 또는 저린감(지각이상), 언어 장애, 기억 상실, 열 감수성, 근육 경련, 근육 쇠약 및 적응 문제 또는 균형 손실이 포함된다.
용어 "다발성 경화증(multiple sclerosis)"은, 미엘린이 손실된 영역의 뇌 및 척수에서 형성되는 다발성 상처("경화증") 또는 병변을 말한다. MS의 질환 패턴은 변할 수 있다. 미국 국립 다발성 경화증 협회(U.S. National Multiple Sclerosis Society)에 따르면, 4개의 표준화된 서브타입이 존재한다: (1) 재발성 경감형, (2) 이차 진행형, (3) 일차 진행형, 및 (4) 진행성 재발형. 재발성 경감형은 질환의 가장 흔한 초기 과정이고, 수개월 내지 수년 동안 질환의 새로운 징후가 없는 수개월 내지 수년 동안 지속될 수 있는 경감 기간으로의 분리된 공격을 특징으로 한다. 이차 진행형 질환은, 명칭이 의미하는 바와 같이, 재발성-경감형 MS로서 시작하지만, 한정된 경감 기간이 결국 사라진다. 일차 진행형 서브타입은, 초기 개시 후 의미 있는 경감이 전혀 없는 질환을 기술한다. 진행성 재발형 질환에서는, 개시로부터 꾸준한 신경학적 감소가 존재하지만, 또한, 중첩된 공격이 존재한다.
다발성 경화증은, 임상학적 표시와 결합된 자기 공명 영상화(MRI)에 의존하는, 맥도날드 기준(McDonald criteria)에 대한 2010 개정을 사용하여 진단할 수 있다(Polman et al., Ann Neurol 2011; 69:292-302). 일반적으로, 둘 이상의 공격 또는 둘 이상의 객관적인 임상학적 병변을 나타내는 환자는, 부가의 임상학적 증거에 대한 필요성 없이 MS를 갖는 것으로 고려된다. 소수의 공격 또는 소수의 입증가능한 병변을 갖는 환자에서, 진단은, 임상학적 또는 임상학적 및 진단적(MRI) 발견에 의한 공간 및/또는 시간으로 병변 파급의 객관적 입증을 근거로 한다.
MS의 병인학은 알려져 있지 않지만, 일반적으로, 신체의 면역계가 CNS에서 미엘린을 파괴하는 자가면역 질환임이 받아들여진다(International Multiple Sclerosis Genetics Consortium; Wellcome Trust Case Control Consortium 2, Nature 2011; 476:214-9). CNS로의 면역 세포 침윤에 대한 전제 조건은, CNS를 침윤으로부터 정상적으로 보호하는 뇌혈관 장벽에서의 파괴이다. 이 과정은 MS의 2차 병리학적 특징인, CNS 염증을 초래한다. 다수의 자가면역 질환에 관해서, MS는 남자보다 여자에서 더 흔하고, 100,000명당 대략 3명에 영향을 미친다(Alonso, 2008). MS 이외에도, 다른 탈수초성 염증성 질환들이 존재한다. 예를 들면, 중추 신경계의 다른 탈수초성 염증성 질환으로는 특발성 염증성 탈수초성 질환, 횡단성 척수염 및 시신경 척수염[데빅병(Devic's disease)]이 포함된다. 염증성 탈수초화는, 또한, 말초 신경계에서 일어날 수 있고; 그 예로는 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 밀러 피셔 증후군(Miller Fisher Syndrome), 및 항-MAG 말초 신경병증이 포함된다.
MS에 대한 현행 치료법은 질환의 자가면역 특성을 기반으로 하며, 적어도 부분적으로, 실험적 자가면역 뇌척수염(experimental autoimmune encephalomyelitis)(EAE) 동물 모델을 근거로 하여 개발되었다(Stuve et al., Arch Neurol. 2010; 67:1307-15). 재발성 형태의 MS의 치료를 위해 2010년 FDA에 의해 승인된 핑골리모드는, 미엘린의 파괴를 매개하는 것으로 여겨지는 면역 세포인, 림프구를 격리(sequestering)시킴으로써 작용하는 인지질이다(GILENYA (핑골리모드), 기재된 정보, 07/2011 개정). 핑골리모드는, 또한, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증의 치료를 위해 2010년 유럽에서 희귀 의약품 지정(EU/3/09/718)을 받았다. MS에 대한 보다 오래된 치료법으로는 면역조절제인 인터페론 베타-1a와 인터페론 베타-1b, 및 글라티라머 아세테이트가 포함된다(Herrmann et al., Am. J. Pathol. 2010; 177:3051-60; Stuve et al., Arch Neurol. 2010; 67:1307-15). 인테그린 α4에 대한 사람화 모노클로날 항체인 나탈리주맙은, 재발성 형태의 MS를 갖는 환자의 치료를 위해 2004년에 승인되었다(TYSABRI (나탈리주맙) 기재된 정보, 08/2011 개정). 이것은, 일반적으로, 이의 용도가 생명을 위협하는 바이러스 감염의 증가된 위험과 관련이 있기 때문에 제2선 치료요법으로서 사용된다(PML, 진행성 다소성 백질뇌증). 나탈리주맙은, 혈액으로부터 조직으로 세포의 통과에 관여하는 소정 세포 부착 분자에 대한 백혈구의 결합을 차단한다. 따라서, 나탈리주맙은, CNS로의 면역 세포의 통과를 방지함으로써, 미엘린의 파괴를 추가로 방지함으로써 작용하는 것으로 생각된다. 미토크산트론은, DNA 합성을 차단하는 제제이고, 따라서, 림프구의 증식하는 능력을 감소시킬 수 있다.
현재 승인된 치료요법 각각은 적어도 재발성 형태의 MS에서의 공격 수를 감소시키는 일부 유효성을 보임에도 불구하고, 이들의 유효성은 제한되고, 많은 경우에 유의한 부작용과 관련되어, 장기간 치료요법을 비실용적으로 만든다. 따라서, 부가적 치료요법에 대한 상당히 충족되지 않은 생물의학적인 필요성이 존재한다.
인자 XII(FXII)는, 내인성 응집 캐스케이드의 활성화에 관여되는 세린 프로테아제이다. 이것은, 다중 음이온과의 접촉에 의해 활성화(접촉 활성화)되는 응혈 인자로서 1955년에 동정되었다. 생체내에서, 이들 표면은, 활성화된 혈소판에 의해 분비되는 무기 폴리포스페이트(PolyP)(Muller et.al., 2010), 내피 세포 표면(qC1qR), 사이토케라틴1 , 우로키나제-플라스미노겐 활성화 수용체(u-PAR, CD87), 관절연골, 피부, 지방산, 내독소, 프로테오글리칸(헤파란 설페이트, 콘드로이틴 설페이트 E, 비만 세포 헤파린), 및 아밀로이드 단백질(Schmaier, 2008)을 포함한다. 일단 FXII가 활성화되어 FXIIa가 형성되면, FXIIa가, 순환하는 FXII를 활성화시키는, 포지티브 피드백 반응이 존재한다. 소분자로부터 단백질의 범위까지, 다양한 FXII 억제제가 이용가능하다. FXII는 내인성 경로에서 개시 인자임에도 불구하고, 인자 XII 결핍은, 외인성(조직 인자) 경로가 혈병 형성을 위한 주요 경로이기 때문에 출혈에 기여하지 않는다.
내인성 경로에서 이의 잘-정립된 역할에도 불구하고, 인자 XII의 생리학적 역할은 불명확하게 남아 있다(Schmaier, J. Clin. Invest. 2008; 118:3006-9; Stavrou & Schmaier, Thromb. Res. 2010). FXII는, 키닌-칼리크레인 시스템(kinin-kallikrein system)을 통한 브라디키닌의 형성을 통해 염증 과정에 관여한다. 브라디키닌은, 감각 신경 종말의 자극에 의해서뿐만 아니라, 혈관 투과성, 질산의 생성, 및 아라키돈산의 동원을 증가시키기 위한 내피 세포의 활성화에 의해 야기되는, 발적, 열, 종창 및 통증의 전형적인 염증성 파라미터에 기여한다. 이는, 또한, 허혈시 병리학적 혈전증에도 관여한다(Kleinschnitz et al., J. Exp. Med. 2006; 203:513-8). FXII의 또 다른 역할은 호중구의 주화성, 응집, 및 탈과립에 있다(Wachtfogel et.al., 1986). 이는, 또한, 전염증성 사이토카인 IL-1의 단핵 세포 생성을 향상시킬 수 있고, 보체계에 관여한다.
소정 실시형태들에 대한 요약
따라서, FXII가 다중의 복잡한 경로에 관여되지만, FXII가 생체내에서 이들 경로 중 어느 것에 대해 필수적인지는 명확치 않게 남아있다. 예를 들면, FXII가 결핍된 사람은 심지어 주요 수술 과정 동안에도, 비정상적인 출혈 체질로 고생하지 않는다 (Schmaier, J. Clin. Invest. 2008; 118:3006-9). 또한, FXII가 MS에서 활성화되는 것으로 보고된 피브린 침착 (Marik et al. Brain 2007; 130:2800-15), 및 MS에 또한 기여할 수 있는 브라디키닌의 활성화 (Gobel et al. J. Autoimmunity 2011; 36:106-14)에 관여될 수 있음에도 불구하고, 그것이 이들 효과를 유발하는 FXII-의존성 경로, 또는 동일한 최종 결과, 예를 들면, 외부 응고 경로에 의한 피브린 침착을 공유하는 다른 경로인지는 명확치 않다. 따라서, MS의 병리학적 특징 중 어느 하나에서 FXII에 대한 역할의 직접적 입증은 현재 결여되어 있다.
비록 염증성 탈수초화에서의 인자 XII(FXII)의 역할이 선행적으로 인지되지는 못했으나, 본 출원의 실시형태들은 다발성 경화증 및 다른 형태들의 염증성 탈수초화를 예방, 치료 또는 개선하기 위한 FXII의 억제제를 제공한다. 본 출원은, 다발성 경화증을 포함한, 신경학적 염증성 질환의 효과를 예방하거나, 치료하거나, 달리 개선하기 위한 인자 FXII 억제제의 투여 방법을 제공한다. "FXII 억제제"는 인자 XII 및 활성화된 인자 XII (FXIIa) 중 하나 또는 모두의 억제제를 의미한다.
따라서, 한 양상으로, 본 발명은, 신경학적 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선을 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의 인자 XII (FXII) 억제제를 투여함으로써, 신경학적 염증성 질환을 예방, 치료 또는 개선함을 포함하는, 신경학적 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선 방법을 제공한다.
다른 양상으로, 본 발명은, 신경학적 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선을 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의 인자 XII (FXII) 억제제를 투여함을 포함하는, 신경학적 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선에 사용하기 위한 인자 XII 억제제를 제공한다.
또 다른 양상으로, 본 발명은, 신경학적 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선을 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의 인자 XII (FXII) 억제제를 투여함을 포함하는, 신경학적 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선을 위한 인자 XII 억제제의 용도를 제공한다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, FXII 억제제는 야생형 인페스틴-4 폴리펩타이드 서열(서열번호 2), 또는 이의 변이체를 포함할 수 있으며, 여기서, 상기 변이체는 (a) 서열번호 2의 N-말단 아미노산 2 내지 13; 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이; 및/또는 (b) 6개의 보존된 시스테인 잔기; 및 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, FXII 억제제는 서열번호 2의 N-말단 아미노산 2 내지 13을 포함하도록 돌연변이된, SPINK-1(서열번호 3), 또는 돌연변이된 SPINK-1의 변이체를 포함할 수 있으며; 여기서, 상기 변이체는 (a) 서열번호 2의 N-말단 아미노산 2 내지 13; 및 야생형 SPINK-1 서열과의 차이를 초래하고, 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 변이체의 상동성을 증가시키는, N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이; 및/또는 (b) 6개의 보존된 시스테인 잔기; 및 야생형 SPINK-1 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, FXII 억제제는 SPINK-1, 또는 SPINK-1 돌연변이체 K1 , K2, 또는 K3 (각각 서열번호 3, 4, 5, 또는 6)을 포함할 수 있다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, FXII 억제제는 H-D-Pro-Phe-Arg-클로로메틸케톤 (PCK), AT III, 안지오텐신 전환 효소 억제제, C1 억제제, 아프로티닌, 알파-1 프로테아제 억제제, 안티파인 ([(S)-1-카복시-2-페닐에틸]-카바모일-L-Arg-L-Val-아르기날), Z-Pro-Pro-알데하이드-디메틸 아세테이트, DX88, 류펩틴, 프롤릴 올리고펩티다제의 억제제 (예: Fmoc-Ala-Pyr-CN), 옥수수-트립신 억제제, 소 췌장 트립신 억제제의 돌연변이체, 에코틴, YAP (각시가자미 항응고제 단백질), 서양계 호박(Cucurbita maxima) 트립신 억제제-V, 또는 서양계 호박 이소억제제를 포함할 수 있다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, FXII 억제제는 항-FXII 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있으며, 여기서, 상기 항체는 FXII에 결합하여, 이의 활성 및/또는 활성화를 억제한다.
FXII 억제제가 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 실시형태에서, 항-FXII 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 9로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR1, 서열번호 11로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR2, 및 서열번호 13으로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및/또는 (b) 서열번호 14로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR1, 서열번호 15로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR2 및 서열번호 17로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 이들 실시형태 중 일부에서, 항-FXII 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열번호 9로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR1, 서열번호 10으로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR2, 및 서열번호 12로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및/또는 (b) 서열번호 14로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR1, 서열번호 15로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR2 및 서열번호 16으로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 특정 실시형태로, 항-FXII 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열번호 7을 포함하는 VH 영역 및 서열번호 8을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 항체를 포함하는 실시형태 중 어느 하나에서, 항-FXII 항체는 IgG일 수 있다. 실시형태 중 어느 하나에서, 항-인자 XII/XIIa 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 1:0.2의 FXIIa-알파 대 항체의 몰 비로 사용되는 경우에 50% 초과만큼 사람 인자 XIIa-알파를 억제할 수 있다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, FXII 억제제는 알부민, 아파민, 알파-태아단백질 , 비타민 D 결합단백질, 사람 알부민 또는 이의 변이체, 면역글로불린 또는 이의 변이체, PEG 또는 이의 변이체, 또는 IgG의 Fc인 반감기 증진 폴리펩타이드에 연결될 수 있다. 이들 실시형태 중 일부에서, 반감기 증진 폴리펩타이드가 링커를 통해 FXII 억제제에 연결된다. 링커를 포함하는 실시형태 중 일부에서, 링커는 (a) 개열가능하고/하거나; (b) 고유의, 외부의 또는 통상적인 응고 경로의 응고 프로테아제에 의해 개열가능하고/하거나; (c) 인자 XIIa에 의해 개열가능할 수 있다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, FXII 억제제는 사람 알부민-링커-FXII 융합 단백질을 포함할 수 있다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, 신경학적 염증성 질환은 다발성 경화증(MS)일 수 있다. MS를 포함하는 이들 실시형태 중 일부에서, MS는 재발성 경감형 다발성 경화증일 수 있다. MS를 포함하는 다른 실시형태로, MS는 일차 진행형 다발성 경화증일 수 있다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, 신경학적 염증성 질환은 횡단성 척수염일 수 있다.
본 발명의 양상들 중 어느 하나의 다양한 실시형태들에서, 신경학적 염증성 질환은 시신경 척수염 (데빅병)일 수 있다.
본 출원의 실시형태들의 추가의 목적들 및 이점들은 하기의 상세한 설명에 일부 제시되고, 부분적으로 상세한 설명으로부터 명백해질 것이고, 또는 그들은 실시시에 파악될 수 있다. 실시형태들의 목적들 및 이점들은 첨부된 특허청구범위에서 특별히 지정된 요소들 및 조합들에 의해 자체적으로 입증될 것이다.
도 1은 인페스틴의 아미노산 서열을 나타낸다 (서열번호 1).
도 2는 인페스틴-4(서열번호 2), SPINK-1(서열번호 3) 및 3개의 SPINK-1 변이체 [K1(서열번호 4), K2(서열번호 5), 및 K3(서열번호 6)]의 아미노산 서열을 비교한다. *는 인페스틴-4 서열에 대해 동일한 아미노산을 나타내고, │은 유사한 아미노산을 나타낸다. 인페스틴-4의 밑줄친 서열은 K1을 생성하기 위해 SPINK-1의 15개 아미노산을 대체하기 위하여 사용되었다. 변이체 K2 및 K3은 K1 서열 상에 부가의 점돌연변이(밑줄친 아미노산)에 의해 생성되었다.
도 3은 사람 알부민의 아미노산 서열을 나타낸다(서열번호 19).
도 4A 내지 4D는 시간의 함수로서 마우스의 EAE 스코어를 도시한 것이다. 도 4A는 대조군 마우스(Con)와 비교한 FXII-/- 마우스를 나타낸다. 도 4B는 대조군 마우스(Con)와 비교한 FXI-/- 마우스를 나타낸다. 도 4C 및 4D는 면역화일로부터(도 4C) 및 12일째로부터(도 4D) 시작하여 대조군과 비교한 FXII 억제제 PCK로 처리한 마우스에 대한 스코어를 나타낸다.
도 5A 내지 5E는 조직학적 및 시험관내 기능적 데이터를 요약한 것이다. 도 5A는 염증성 병소의 수, 도 5B는 탈수초화 부위/슬라이스, 및 도 5C는 대조군(좌측 막대), PCK 처리(중간 막대) 및 FXII-/- 마우스(우측 막대)의 축삭 계수를 도시한 것이다. 대조군(Con)과 PCK-처리된 마우스 사이에 조직학적 비교의 예가 각 막대 그래프에 대해 제시되어 있다. 도 5D는 CD3/CD28 또는 MOG 자극에 대한 반응으로 비장세포의 증식을 나타낸다. 도 5E는 대조군(좌측 막대), PCK 처리(중간 막대) 및 FXII-/- 마우스(우측 막대)로부터 비장세포의 사이토카인 분비를 요약한 것이다.
도 6A는 FXII 억제제, rHA-인페스틴-4로 처리한 마우스에 대한 시간의 함수로서의 EAE 스코어를 나타낸다. 도 6B는 대조군(좌측 막대) 대 rHA-인페스틴-4-처리된(우측 막대) 마우스에서 사이토카인 IL-17의 수준을 비교한다.
도 7은 항-인자 XII 항체(채워진 다이아몬드형) 또는 이소타입 대조군 항체(개방된 네모형)로 처리된 마우스에 대한 시간의 함수로서의 마비 스코어를 나타낸다.
도 8은 사이토카인 GM-CSF, IFNγ, TNFα 및, IL-1β에 대한 항-FXII 처리 및 대조군 마우스의 혈액 중 사이토카인 수준을 나타낸다.
상세한 설명
본 출원의 실시형태는 신경학적 염증성 질환의 효과를 예방, 치료 또는 달리 개선하기 위하여 환자에 적어도 하나의 인자 XII(FXII) 억제제를 투여함을 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 출원의 실시형태의 한 이점은 FXII 억제제가 내성이 우수한 것으로(well-tolerated) 예상되므로, 그들이 다른 약제에 비하여 개선된 안전성 프로우필을 가질 수 있다는 것이다. 또한 FXII가 몇몇 생리학적 캐스케이드에 관여하므로, 이들 중 하나 이상이 염증성 탈수초성 질환(예: MS)에 관여될 수 있고, FXII 억제제는 단일 표적 치료법에 비하여 보다 양호한 효능 프로우필을 가질 수 있다.
I. 염증성 탈수초성 질환( inflammatory demyelinating disease )
본 발명의 한 양상은, 신경학적 염증성 질환의 효과를 예방, 치료 또는 개선을 필요로 하는 대상체에 적어도 하나의 인자 XII(FXII) 억제제를 투여함으로써 신경학적 염증성 질환의 효과를 예방, 치료 또는 개선을 포함하는, 염증성 탈수초성 질환의 효과를 예방, 치료 또는 달리 개선하는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 염증성 탈수초성 질환의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는데 사용하기 위한 인자 XII 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료하다(treat)" 및 "치료하는(treating)"은 증상의 완전한 제거가 필요치 않으며, 이들 용어는 "치유하다(cure)" 또는 "치유하는(curing)"과 동등하지 않다. 대신에, "치료하다(treat)" 및 "치료하는(treating)"은 질환의 적어도 하나의 징후 또는 증상이 감소, 억제, 경감되거나 지연되었음을 의미한다. 일부 실시형태에서, 징후 또는 증상은 하기 기술되는 하나 이상의 1차 또는 2차 엔드포인트(endpoint)이다. 특정 실시형태로, "치료하다(treat)" 또는 "치료하는(treating)"은 또한 질환 효과의 개선을 포함할 수 있다. 그러나, 일반적으로 "효과를 개선함(ameliorating the effects)"은 환자의 기능 손상을 반영하는 질환의 일부 양상이 개선됨을 의미한다. 하기 기술되는 바와 같이, 다발성 경화증(MS)에 대한 Kurtzke 확장장애상태 스코어(Expanded Disability Status Score : EDSS)(Kurtzke JF, Neuroepidemiol. 2008; 31:1-9)의 사용을 포함한, 질환에 대해 잘-정립된 기준을 사용하여 기능적 평가를 할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "예방함(Preventing)"은 염증성 탈수초성 질환의 발병 위험이 있는 것으로 공지된 대상체에 치료법의 투여를 의미하거나, 경감된 다음 재발된 질환에서, "예방함"은 경감된 환자에서 재발을 억제함을 의미할 수 있 다. MS에 대해 하기 주시되는 바와 같은 "예방함"은 또한 MS에 대한 진단 기준의 일부는 만족하지만 모두는 아닌 환자가 진단 기준에 완전히 부합되는 질환을 명시하는데 진전이 보이지 않음을 의미한다.
용어 "신경학적 염증성 질환" 및 "염증성 탈수초성 질환"은 필수적으로 뇌 또는 척수 중 하나 이상의 부위의 염증이 존재하는, 사람 환자에서 또는 동물에서의 상태를 정의하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 그러나, 상기 용어는 완전히 등가가 아니고, 숙련가는 탈수초화가 종종 발병된 다음 염증이 이어짐에도 불구하고, 신경학적 염증성 질환은 반드시 탈수초화를 필요치 않음을 이해할 것이다. 다발성 경화증은 사람에서 염증성 탈수초성 질환의 한 예이다. 마우스, 래트 및 원숭이를 포함한, 다양한 동물에서, 염증성 탈수초화는 사람 질환 모델로서 잘-정립되어 허용되는 몇몇 상이한 면역화 전략에 의해 실험적으로 유도할 수 있다 (Reviewed in Krishnamoorthy & Wekerle, Eur. J. Immunol 2009; 39:2031-35). 두 개의 상이한 면역화 전략이 실시예에 제시되어 있다. 비록 실험적 질환임에도 불구하고, 생성된 유도 질환, 실험적 자가면역성 뇌척수염 (EAE)은 염증성 탈수초성 질환의 다른 예이며, 따라서 비-사람 대상체로 한정된다.
일부 실시형태에서, 염증성 탈수초성 질환은 중추 신경계(CNS) 질환이다. 예시적 질환은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 다발성 경화증, 특발성 염증성 탈수초 질환, 횡단성 척수염 및 시신경 척수염(데빅병)을 포함한다.
일부 실시형태로, 염증성 탈수초성 질환은 말초신경계의 질환이다. 예시적 질환은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 밀러피셔 증후군(MillerFisher syndrome), 및 항-MAG 말초 신경병증을 포함한다.
특정 실시형태로, 본 발명은, 다발성 경화증의 예방 또는 치료나, 다발성 경화증의 효과 개선을 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의 적어도 하나의 인자 XII(FXII) 억제제를 투여함으로써 다발성 경화증의 예방 또는 치료나, 다발성 경화증의 효과 개선을 포함하는, 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 다발성 경화증을 예방 또는 치료하거나, 다발성 경화증의 효과를 개선하는데 사용하기 위한 인자 XII 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
다발성 경화증을 포함하는 실시형태에서, MS인 대상체는 임상학적 표시와 결합된 자기공명 영상(MRI)에 좌우되는, "맥도날드 기준"을 사용하여 진단할 수 있다(Polman et al., Ann Neurol 2011; 69:292-302.). 일반적으로, 둘 이상의 발병 또는 둘 이상의 객관적인 임상학적 병변을 갖는 환자는 부가의 임상학적 증거에 대한 필요성없이 MS인 것으로 고려된다. 소수의 발병 또는 소수의 입증될 수 있는 병변을 갖는 환자에서, 진단은 임상학적 또는 임상학적 및 진단적 (MRI) 발견에 의한 공간 및/또는 시간으로 병변 파급의 객관적 입증을 근거로 한다. 공간적으로 병변 파급의 임상학적 증거는 중추 신경계의 하기 부위 4개 중 적어도 2개에서 하나 이상의 T2 병변에 의해 입증된다: 뇌실주위, 피질주위, 천막하 또는 척수. 시간적으로 병변의 파급은 팔로우-업(follow-up) MRI 상에 새로운 T2 및/또는 가돌리늄-증진 병변이나, 임의의 시간에 무증상 가돌리늄-증진 및 비-증진 병변의 동시 존재에 의해 입증된다. 일차 진행형 MS는 1년의 질환 진행 + 다음 중 둘 이상인 대상체에서 진단된다(소급적용 포함): A) MS에 특유한 적어도 하나의 부위 (뇌실주위, 피질주위 또는 천막하)에서 뇌에 하나 이상의 T2 병변을 근거로 하는 공간적 파급의 증거, 또는 B) 2개의 T2 병변의 것보다 더 큰 것을 기준으로 하는 척수에서 공간적 파급에 대한 증거, 및 C) 뇌척수액에서 올리고클로날 밴드 및/또는 증가된 IgG 지수의 존재(Polman et al., Ann Neurol 2011; 69:292-302).
일부 실시형태에서, 환자는 적어도 하나의 임상학적 발병 또는 적어도 하나의 객관적인 임상학적 병변을 갖거나 가져왔지만, 맥도날드 기준을 사용하는 다발성 경화증의 진단을 정립하기 위한 충분한 수의 임상학적 발병 및 객관적인 임상학적 병변에 의해 제시되지 못했다. 이러한 환자는 다발성 경화증에 대한 "위험이 있는(at risk)" 환자이고, MS에 대한 "위험이 있는" 환자에 FXII 억제제의 투여는 대상체가 MS의 진단이 맥도날드 기준하에 되어질 수 있는 지점으로 진행되지 못한다는 의미에서 MS를 예방하기 위하여 사용될 수 있다. 따라서, 한 실시형태로, 다발성 경화증에 대한 위험이 있는 대상체에 적어도 하나의 FXII 억제제를 투여함으로써 다발성 경화증을 예방함을 포함하는 다발성 경화증의 예방법이 제공된다. 마찬가지로, 본 발명은 또한 다발성 경화증에 대한 위험이 있는 대상체에 다발성 경화증을 예방하는데 사용하기 위한 인자 XII 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
다발성 경화증으로 진단된 대상체를 포함하는 실시형태에서, 대상체는 질환 경과를 기준으로 하여 (1) 재발성 경감형, (2) 이차 진행형, (3) 일차 진행형, 및 (4) 진행성 재발형 MS를 가진 환자로 다시 분류할 수 있다.
따라서, 본 발명은 특정 실시형태로, 재발성 경감형 MS로 진단된 환자에 치료학적 유효량의 적어도 하나의 인자 XII 억제제를 투여함으로써 재발성 경감형 MS의 예방 또는 치료나, 재발성 경감형 MS의 효과 개선을 포함하는, 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 재발성 경감형 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는데 사용하기 위한 인자 XII 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
부가적 실시형태로, 본 발명은 이차 진행형 MS로 진단된 환자에 치료학적 유효량의 적어도 하나의 인자 XII 억제제를 투여함으로써 이차 진행형 MS의 예방 또는 치료나, 이차 진행형 MS의 효과 개선을 포함하는, 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 이차 진행형 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는데 사용하기 위한 인자 XII 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또 다른 실시형태로, 본 발명은 일차 진행형 MS로 진단된 환자에 치료학적 유효량의 적어도 하나의 인자 XII 억제제를 투여함으로써 일차 진행형 MS의 예방 또는 치료나, 일차 진행형 MS의 효과 개선을 포함하는, 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 일차 진행형 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는데 사용하기 위한 인자 XII 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
추가의 실시형태로, 본 발명은 진행성 재발형 MS로 진단된 환자에 치료학적 유효량의 적어도 하나의 인자 XII 억제제를 투여함으로써 진행성 재발형 MS의 예방 또는 치료나, 진행성 재발형 MS의 효과 개선을 포함하는, 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 진행성 재발형 다발성 경화증의 효과를 예방, 치료 또는 개선하는데 사용하기 위한 인자 XII 억제제 및 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
MS의 형태 중 어느 하나의 치료 효과를 개선하는 한 예는 대상체의 장애상태의 감소 또는 장애 진행에 대한 시간적 증가이다. 장애상태는 Kurtzke 확대장애상태 스코어 (EDSS)를 사용하여 평가(또는 등급매김)할 수 있다(Kurtzke JF, Neuroepidemiol 2008; 31:1-9). 예를 들면, 억제제는 12주 동안 지속된 기준선 EDSS ≥ 1.0으로부터 EDSS 상에 적어도 1 포인트의 증가, 또는 12주 동안 지속된 기준선 EDSS = 0으로부터 EDSS 상에 적어도 1.5 포인트의 증가로서 정의되는, "장애의 지속적 증가"의 개시까지 시간이 감소된다면 장애 스코어를 감소시킨다. MS의 형태 중 어느 하나의 치료 효과를 개선하는 다른 예는 MRI로 측정할 수 있다: 예를 들면, 한정된 기간, 예를 들면, 12, 24, 36 또는 48개월에 걸쳐 새로운 또는 새롭게 확대된 T2-고신호감도 병변의 중간수의 감소; 또는 한정된 기간, 예를 들면, 12, 24, 36 또는 48개월에 걸쳐 T1 가돌리늄-증진 병변 수의 감소.
일반적으로, 본 발명에 따르는 FXII 억제제가 MS를 치료하거나 MS의 효과 개선을 나타내기 위해 사용될 수 있는 기준은 단독으로 또는 임의의 서브 조합으로 다음의 결과를 포함한다: 콘트라스트-증진 MRI 병변 수의 정도 감소; 지속적 장애축적(Sustained Accumulation of Disability: SAD) 등급의 감소; 재발 발생의 감소; 재발되는 시간의 증가; 예를 들면, 초기 치료 후 1, 2, 3년 또는 그 이상에 재발이 없는 환자 비율의 증가; 뇌 스캔시 뇌위축 비율의 감소; MRI T2 병변 용적의 감소; 뇌척수액("CSF") 오스테오폰틴 수준의 변화; 확대된 장애상태 스케일(EDSS)의 개선; Timed 25-foot Walk (T25FW) 시험에서 개선; 다발성 경화증 손상 스코어 (Multiple Sclerosis Impairment Score: MSIS)의 개선; 다발성 경화증 Functional Composite Short Form 36 Health Survey(SF36)의 개선; 뇌척수액에서 신경필라멘트 중쇄 수준의 증가; 뇌척수액에서 미엘린 염기성 단백질 수준의 개선; 정상 뇌용적(NBV), 회색질 용적(GMV) 및/또는 백색질 용적(WMV)의 개선; 전뇌, 병변, 정상으로-나타나는 회색질(NAGM), 또는 정상으로-나타나는 백색질(NAWM)에서 자화전이율(Magnetization transfer ratio: MTR)의 개선; 병변, GM 및 NAWM의 FA 및 ADC에서 확산전달영상(Diffusion transfer imaging: DTI)의 개선; CSF 세포 계수에 있어서의 개선; IgG-지수의 개선; CSF 산화질소 대사물질에 있어서의 개선; CSF-혈청 알부민 농도 곱비의 개선; CSG CXCL13 수준에 있어서의 개선; 기질 메탈로프로테이나제-9(MMP-9) 수준의 개선; 신규 가돌리늄-증진 병변(GdEL)의 감소; T2-강조 MRI 영상에서 병변 용적의 감소, T2-강조 MRI 영상에서 신규 또는 확대 병변 수의 감소; 이들 기준의 임의 조합; 또는 이들 기준의 임의 서브조합. 기준 중 임의의 경우, 기준은 치료가 시작된 시간에 대해 판단될 수 있다.
재발성 형태의 MS를 포함하는 실시형태에서, 본 발명에 따르는 FXII 억제제는 또한 연간재발률을 감소시키거나, 한정된 기간(예: 6개월, 12개월, 18개월, 24개월, 36개월, 48개월 또는 60개월(또는 그 사이의 임의 시간 동안)) 동안 재발이 없는 환자%를 증가시킨다면, MS를 치료하거나 개선한 것이다.
EAE 모델은 특별한 FXII 억제제가 다발성 경화증을 예방, 치료 또는 개선할 것인지를 결정하는데 사용될 수 있다. EAE 모델은 허용되는 MS의 동물 모델이며, 다발성 경화증의 치료를 위해 FDA에 의해 승인된 약제를 개발하기 위하여 사용되어 왔다(E.g., Stuve et al., Arch. Neurol. 2010; 67:1307-15; Yednock et al., Nature 1992). 따라서, 특별한 FXII 억제제가 실시예에 기술된 것과 같은, 하나 이상의 EAE 모델에서 활성을 나타낸다면, 숙련가는 FXII 억제제가 또한 다발성 경화증의 효과를 예방하거나, 치료하거나, 개선하는데 활성을 나타낸다고 예상한다. 그러나, EAE 모델에서 비활성은 다발성 경화증에서 활성을 가능하게 한다는 것에 주목할만한 가치가 있다. 예를 들면, MS에 대한 한 초기 치료법인, 인터페론 베타는 EAE 모델에서 매우 효과적이지 못했다(Stuve et al., Arch. Neurol. 2010; 67:1307-15).
II. FXII 억제제
용어 "인자 XII" 및 "FXII"는 각각 인자 XII 및 활성화된 인자 XII (FXIIa) 중 하나 또는 모두를 의미한다. 따라서, "FXII 억제제"는 FXII 및 FXIIa 중 하나 또는 모두의 억제제 포함한다. 또한, 항-FXII 항체는 FXII 및 FXIIa 중 하나 또는 모두에 결합되어 억제하는 항체를 포함한다. 용어 "FXII 억제제"는 또한 일부 실시형태에서 링커를 포함하는, 반감기 확대 폴리펩타이드에 결합되는 FXII의 억제제를 포함함을 의미한다.
일부 실시형태로, FXII 억제제는 FXII의 직접적 억제제이다. 용어 "직접적" 억제제는 FXII(또는 FXIIa)과 접촉(예: 결합)을 통해 작용하는 억제제를 의미한다. 대조적으로, 간접적 억제제는 FXII(또는 FXIIa) 단백질과의 접촉없이 작용할 수 있으며; 예를 들면, 안티센스 RNA는 FXII 유전자의 발현을 감소시키기 위하여 사용될 수 있지만, FXII 단백질과 직접적으로 상호작용하지 않는다. 따라서, 직접적 억제제와 대조적으로, 간접적 억제제는 FXII 단백질로부터 상류 또는 하류로 작용한다. 직접적 억제제의 일부 예가 하기 제시되어 있다. FXII 억제제는 일반적으로 비-내인성 억제제이다; 즉 그들은 염증성 탈수초성 질환이 있는 대상체의 몸에 자연적으로 생성되는 억제제가 아니다.
A. 인페스틴 -4
한 실시형태로, 본 출원은 인페스틴 도메인 4, "인페스틴-4"를 포함하는 FXII 억제제를 제공한다. 최근에, 인페스틴-4는 활성화된 FXII (FXIIa)의 신규 억제제인 것으로 보고되었다. 인페스틴은 샤가스병(Chagas disease)을 유발하는 것으로 공지된, 기생충 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)에 대한 주요 벡터인, 흡혈성 곤충, 트리아토마 인페스탄스(Triatoma infestans)의 중장으로부터 유래된 세린 프로테아제 억제제의 그룹이다(Campos ITN et al. 32 Insect Biochem. Mol. Bio. 991 -997, 2002; Campos ITN et al. 577 FEBS Lett. 512-516, 2004). 이 곤충은 삼킨 혈액의 응고를 방지하기 위하여 이들 억제제를 사용한다. 인페스틴의 전장 전구체 폴리펩타이드 서열이 도 1에 제공되어 있다 (서열번호 1). 인페스틴 유전자는 응고 경로에서 상이한 인자를 억제할 수 있는 단백질을 생성하는 4개의 도메인을 암호화한다. 특히, 도메인 4는 FXIIa의 강한 억제제인 단백질(인페스틴-4)을 암호화한다. 인페스틴-4는 출혈 합병증없이 마우스에 투여되었다 (WO 2008/098720; Hagedorn et al., Circulation 2010; 121:1510-17).
따라서, 한 실시형태로, 인페스틴-4의 변이체를 포함하는 FXII 억제제가 제공된다. 다른 실시형태로, FXII 억제제는 인페스틴 도메인 4, 및 임의로 인페스틴 도메인 1, 2 및/또는 3을 포함한다. 이들 단백질은 FXII의 효능있는 억제제인 것으로 공지되어 있다(참조: WO 2008/098720; 또한 참조: Campos ITN et al. 577 FEBS Lett. 512-516, 2004). 한 실시형태로, FXII 억제제는 (His)6-표지된 인페스틴-4 작제물이다. 다른 실시형태로, FXII 억제제는 알부민-링커-인페스틴-4로 이루어진 융합 단백질이다. 한 실시형태로, 알부민-링커-인페스틴-4는 문헌(Hagedorn et al. Circulation 2010; 1 17:1 153-60)에 기술된 rHA-인페스틴-4 단백질이다. FXII의 인페스틴 억제제의 예가 WO 2008/098720 및 문헌(Hagedorn et al. Circulation 2010; 117:1153-60)에 기술되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 인페스틴의 "변이체(variant)"는 아미노산 돌연변이를 갖는 폴리펩타이드를 의미하며, 여기서, "돌연변이"는 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 치환, 결실 또는 부가로서 정의되고, 이때 상기 변화는 FXII를 억제하는 폴리펩타이드의 기능적 능력을 변화시키지 않는다. 용어 "변이체"는 야생형 또는 돌연변이된 인페스틴-4 서열의 단편을 포함한다. 상기 변이체의 추가 예가 하기에 제공된다.
한 실시형태로, 인페스틴-4 변이체는 야생형 인페스틴-4 서열의 아미노 말단으로부터의 아미노산 서열 VRNPCACFRNYV (서열번호 2의 잔기 2-13), 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이, 및/또는 6개의 보존된 시스테인 잔기, 및/또는 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다. 따라서, 일부 실시형태로, 인페스틴-4 변이체는 야생형 인페스틴-4 서열의 아미노산 2 내지 13의 보존된 N-말단 영역, 및 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 상기 보존된 N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 인페스틴 변이체의 "N-말단 아미노산들 이외의(outside the N-terminal amino acids)"는 서열 VRNPCACFRNYV, 즉, 서열번호 2의 아미노산 2 내지 13을 포함하는 아미노산의 인접한 연장이 아닌 다른 변이체의 폴리펩타이드 쇄에 따른 임의의 아미노산을 의미한다. 다른 실시형태로, 인페스틴-4 변이체는 6개의 보존된 시스테인 잔기를 포함하며, 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 적어도 70%의 상동성을 갖는다. 한 실시형태로, 6개의 보존된 시스테인 잔기는 야생형 인페스틴-4 서열, 서열번호 2의 6, 8, 16, 27, 31 및 48번 위치의 아미노산이다 (참조: 도 2). 한 실시형태로, 변이체는 48번 위치에 마지막 보존된 시스테인을 포함한다. 다른 실시형태로, 시스테인 잔기의 정확한 위치 및 서로에 대한 상대적 위치는 인페스틴-4 변이체에서 삽입 또는 결실로 인하여, 야생형 인페스틴-4 서열의 6, 8, 16, 27, 31 및 48번 위치로부터 변할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 이들 실시형태에서, 인페스틴-4 변이체는 6개의 모든 시스테인을 포함하며, 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70%, 75%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%나, 그 사이에 임의 %의 상동성을 공유할 수 있다.
한 실시형태로, FXII 억제제는 야생형 인페스틴-4 폴리펩타이드 서열 (서열번호 2)의 변이체를 포함하며, 이때 변이체는 서열번호 2의 N-말단 아미노산 2 내지 13; 야생형 인페스틴-4 서열과의 차이를 초래하는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이; 6개의 보존된 시스테인 잔기; 및 야생형 인페스틴-4 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다.
인페스틴-4 변이체 실시형태에서, 인페스틴-4의 변이체는 FXII를 억제함을 특징으로 한다. FXII를 억제하는 기능적 활성은, 예를 들면, FXII 효소 활성의 억제, 연장된 응고 시간, 즉 활성부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT: 고유의 응고 기전을 나타내는 임상학적 응고 시험)을 시험하기 위한 직접 검정법을 포함한, 시험관내 및/또는 생체내 특성분석, 또는 응고를 평가하기 위한 생체내 방법을 통해 평가할 수 있다.
인페스틴-4 변이체의 추가 예는 하기 기술되는 SPINK-1 돌연변이체이다.
B. SPINK-1 돌연변이체
한 실시형태는 사람에서 치료학적 사용을 위한 FXII 억제제를 포함한다. 인페스틴-4와 높은 유사성을 갖는 사람 단백질이 사용될 수 있다. 예를 들면, 인페스틴-4와 최고의 유사성을 갖는 사람 단백질은 췌장에서 발현되는 Kazal-형 세린 프로테아제 억제제인, SPINK-1이다 (췌장 분비 트립신 억제제, PSTI로서 또한 공지됨). Kazal-형 세린 프로테아제 억제제 그룹은 수많은 세린 프로테아제 억제제 그룹 중 하나이다. 상이한 종으로부터의 많은 단백질이 기술되어 왔다 (Laskowski M and Kato I, 49 Ann. Rev. Biochem. 593-626, 1980).
야생형 SPINK-1 서열 (서열번호 3)을 근거로 하여, 상이한 변이체가 인페스틴-4에 대한 SPINK-1 서열의 상동성을 증가시키기 위하여 생성될 수 있다. 한 실시형태로, SPINK-1은 서열번호 2의 N-말단 아미노산 2 내지 13을 포함하도록 돌연변이되며, 이는 FXII 억제 기능에 대해 중요한 것으로 여겨진다. K1로서 언급되는, 폴리펩타이드 서열은 서열번호 4로, 도 2에 제공된다.
한 실시형태로, 돌연변이된 SPINK-1의 변이체는 또한 야생형 인페스틴-4 서열 (서열번호 2)의 N-말단 아미노산 2 내지 13, 및 야생형 SPINK-1 서열과의 차이를 초래하고, 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 변이체의 상동성을 증가시키는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 다른 실시형태로, 돌연변이된 SPINK-1의 변이체는 6개의 보존된 시스테인 잔기를 포함하고, 야생형 SPINK-1 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 갖는다. 돌연변이는 치환, 결실 또는 부가일 수 있다. 상기 정의한 바와 같은 용어 "N-말단 아미노산들 이외의"은 서열 VRNPCACFRNYV, 즉 서열번호 2의 아미노산 2-13으로 구성된 아미노산의 인접한 연장이 아닌 다른 변이체의 폴리펩타이드 쇄에 따른 임의의 아미노산을 의미한다. 용어 "변이체"는 상기 돌연변이된 SPINK-1 서열의 단편을 포함한다. 한 실시형태로, 6개의 보존된 시스테인 잔기는 야생형 SPINK-1 서열 (서열번호 3, 도 2 참조)의 9, 16, 24, 35, 38, 및 56번 위치에 아미노산일 수 있다. 한 실시형태로, 변이체는 마지막 보존된 시스테인을 포함한다. 다른 실시형태로, 시스테인의 정확한 위치 및 서로에 대한 상대적 위치는 SPINK-1 변이체에서 삽입 또는 결실로 인하여, 야생형 SPINK-1 서열의 9, 16, 24, 35, 38, 및 56번 위치로부터 변할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 이들 실시형태에서, SPINK-1 변이체는 6개의 모든 시스테인을 포함한다. 실시형태에서, SPINK-1 변이체는 또한 FXII를 억제하는 것으로 특성분석된다.
한 실시형태로, FXII 억제제는 SPINK-1 (서열번호 3)의 변이체를 포함하며, 이때 SPINK-1 변이체는 서열번호 2의 N-말단 아미노산 2 내지 13; 야생형 SPINK-1 서열과의 차이를 초래하고, 야생형 인페스틴-4 서열에 대한 변이체의 상동성을 증가시키는 상기 N-말단 아미노산들 이외의 1개 이상 5개 이하의 아미노산 돌연변이; 6개의 보존된 시스테인 잔기; 및 야생형 SPINK-1 서열에 대해 70% 이상의 상동성을 포함한다.
SPINK-1 변이체의 예가 제공되며, K1, K2, 및 K3 (각각 서열번호 4, 5 및 6)으로 명명된다. SPINK-1 변이체 K2 및 K3에서는, K1에 비하여 인페스틴-4에 대한 상동성을 증가시키기 위하여 N-말단의 이외의 추가 아미노산 치환이 이루어졌고, 이때 변이체는 또한 그들이 FXII 활성을 억제함을 특징으로 한다 (참조: WO 2008/098720). 도 2는 이들 변이체의 아미노산 서열 및 SPINK-1 야생형 서열에 대한 변화 정도를 나타내고 있다. SPINK-1 변이체 K3의 경우에, 5개의 아미노산 치환은 인페스틴-4에 대한 상동성을 증가시킨다. 따라서, 실시형태에서, SPINK-1 변이체는 야생형 SPINK-1 서열과 70%, 75%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%나, 그 사이에 임의 %의 상동성을 공유할 수 있다.
C. 다른 FXII 억제제
FXII 및 FXIIa 모두의 억제제를 포함하는, FXII의 다른 억제제가 W02006/066878에 기술되어 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, FXII 억제제는 안티브로민 111 (AT 111), 안지오텐신 전환 효소 억제제, C1 억제제, 아프로티닌, 알파-1 프로테아제 억제제, 안티파인 ([(S)-1-카복시-2-페닐에틸]-카바모일-L-Arg-L-Val-아르기날), Z-Pro-프로알데하이드-디메틸 아세테이트, DX88 (Dyax Inc., 300 Technology Square, Cambridge, MA 02139, USA; Williams A and Baird LG, 29 Transfus Apheresis Sci. 255-258, 2003에 인용됨), 류펩틴, 프롤릴 올리고펩티다제의 억제제(예: Fmoc-Ala-Pyr-CN), 옥수수-트립신 억제제, 소 췌장 트립신 억제제의 돌연변이체, 에코틴, 각시가자미 항응고제 단백질, 서양계 호박 이소억제제를 포함하는 서양계 호박 트립신 억제제-V, 또는 하마다린 (문헌: Isawa H et al., 277 J. Biol. Chem. 27651 -27658, 2002에 기술된 바와 같은)이다.
여전히 다른 실시형태로, FXII 억제제는 H-D-Pro-Phe-Arg-클로로메틸케톤 (PCK)이다 (Tans et al., Eur. J. Biochem. 1987; 164:637-42; Kleinschnitz et al., J Exp Med. 2006; 203:513-8).
또 다른 실시형태로, FXII 억제제는 미국 특허 6,613,890, 칼럼 4 내지 8에 기술된 바와 같은 아밀로이드 전구체 단백질의 Kunitz 프로테아제 억제제 도메인의 유사체이다.
D. FXII 항체
다른 실시형태로, FXII 억제제는 FXII에 결합되어, FXII 활성화 및/또는 활성을 억제하는 항-FXII 항체이다. 항-FXII 항체가, 예를 들면, WO 2006/066878, 및 문헌(Ravon et al., 1 Blood 4134-43, 1995)에 기술되어 왔다. 사람 인자 XII에 대한 다른 모노클로날 항체 (mAbs)는 Pixley 등 (J Biol Chem 1987; 262, 10140-45)에 의해 기술된 B7C9 mAb, Small 등 (Blood 1985; 65:202-10)에 의해 기술된 mAb; Nuijens 등 (J. Biol. Chem. 1989; 264:12941-49)에 의해 기술된 mAbs F1 및 F3; WO89/11865에 기술된 FXII의 경쇄에 대한 B6F5, C6B7, 및 D2E10 mAb; WO90/08835에 기술된 FXII에 대해 FXIIa-β를 선택적으로 결합시키는 mAb; 및 WO91/17258에 기술된 항-FXII 항체 OT-2를 포함한다.
부가적인 항-인자 XII/FXIIa 모노클로날 항체 및 그의 항원-결합 단편이 본원에 참조로 인용된, 2011년 7월 22일자로 출원된, 미국 가출원 61/510,801에 기술되어 있다. 그들 항체는 사람 인자 XII에 대한 것보다 사람 인자 XIIa-베타에 대한 결합 친화성이 2배보다 더 크고, 사람 인자 XIIa의 가아미도분해 활성을 억제할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 하기 특징 중 하나 이상을 갖는다: (a) 쥐 FXII/FXIla에 결합된다; (b) 서열번호 7의 서열과 85% 초과 동일한 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다; (c) 서열번호 8의 서열과 85% 초과 동일한 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다; (d) 서열번호 9의 서열과 적어도 80% 동일한 중쇄 CDR1, 및/또는 서열번호 10과 적어도 60% 동일한 중쇄 CDR2, 및/또는 서열번호 12의 서열과 적어도 80% 동일한 중쇄 CDR3을 포함한다; (e) 서열번호 14와 적어도 50% 동일한 경쇄 CDR1, 및/또는 서열번호 15의 경쇄 CDR2, 및/또는 서열 A-X1-W-X2-X3-X4-X5-R-X6-X7 (여기서, X1은 A 또는 S일 수 있고, X5는 L 또는 V일 수 있으며, 다른 Xns는 임의의 아미노산일 수 있다)(서열번호 17)을 갖는 경쇄 CDR3을 포함한다; (f) 10-8M보다 양호한 KD를 갖는 사람 인자 XIIa-베타에 결합된다; (g) 사람 인자 XIIa-베타에 대한 결합에 대해 인페스틴-4와 경쟁한다; 또는 (h) 사람 IgG 또는 이의 변이체, 바람직하게는 사람 IgG4 또는 이의 변이체이다.
다른 실시형태로, 항-FXII 항체는 사람 FXII에 결합되고, (a) 서열번호 9로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR1, 서열번호 11로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR2, 및 서열번호 13으로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및/또는 (b) 서열번호 14로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR1, 서열번호 15로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR2, 및 서열번호 17로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함하는 IgG 항체이다. 서열번호 11을 포함하는 중쇄 CDR2는 서열 GIX1X2X3X4X5X6TVYADSVKG를 포함하며, 여기서, X1은 R, N 또는 D이고, X2는 P, V, I, 또는 M이며; X3은 S, P, 또는 A이고; X4는 G, L, V, 또는 T이며; X5는 임의의 아미노산일 수 있으며, 바람직하게는 X5는 G, Y, Q, K, R, N, 또는 M이고; X6은 T, G, 또는 S이다. 서열번호 13을 포함하는 중쇄 CDR3은 서열 ALPRSGYLX1X2X3X4YYYYALDV를 포함하며, 여기서, X1은 I, M 또는 V이고; X2는 S 또는 K이며; X3은 P, K, T, 또는 H이고; X4는 H, N, G, 또는 Q이다. 서열번호 17을 포함하는 경쇄 CDR3은 서열 AX1WX2X3X4X5RX6X7을 포함하며, 여기서, X1은 A 또는 S이고; X2는 D, Y, E, T, W, E, 또는 S이며; X3은 A, N, I, L, V, P, Q, 또는 E이고; X4는 S, D, P, E, Q, 또는 R이며; X5는 L 또는 V이고; X6은 G, L, 또는 K이며; X7은 V, A, D, T, M, 또는 G이다.
다른 실시형태로, 항-FXII 항체 항원-결합 단편은 사람 FXII에 결합되고, (a) 서열번호 9로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR1, 서열번호 10으로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR2, 및 서열번호 12로 제시된 바와 같은 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및/또는 (b) 서열번호 14로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR1, 서열번호 15로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR2, 및 서열번호 16으로 제시된 바와 같은 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함하는 IgG 항체의 단편이다.
한 실시형태로, 항-FXII 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 실시예 3에 사용된 항체 "3F7"이다. 3F7의 가변 영역 및 CDR의 서열이 표 1에 제시되어 있다.
Figure 112014082376847-pct00001
또 다른 실시형태로, 항-FXII 항체 또는 항원 결합 단편은 친화성 성숙(3F7에 비해) 항체 VR115, VR112, VR24, VR110, VR119로부터 선택된다.
Figure 112014082376847-pct00002
상기 알려진 바와 같이, 서열번호 11은 변성 서열이다. VR119는 X1이 N이고, X2는 V이며, X3은 P이고; X4는 L이며, X5는 Y이고; X6은 G인 서열번호 11을 포함한다. VR112는 X1이 N이고, X2는 V이며, X3은 P이고; X4는 V이며, X5는 Q이고; X6은 G인 서열번호 11을 포함한다. VR115는 X1이 D이고, X2는 I이며, X3은 P이고; X4는 T이며, X5는 K이고; X6은 G인 서열번호 11을 포함한다. VR110은 X1이 D이고, X2는 M이며, X3은 P이고; X4는 T이며, X5는 K이고; X6은 G인 서열번호 11을 포함한다. VR24는 독특한 LCDR1: SGSSEMTVHHYVY (서열번호 18)을 포함한다.
항체 CDR들을 포함하는 실시형태에서, CDR들은 캐뱃(KABAT) 넘버링 시스템에 따라 정의된다(Kabat EA, Wu TT, Perry HM, Gottesman KS, Foeller C (1991) Sequences of proteins of immunological interest, 5th edn. U.S. Department of Health and Human services, NIH, Bethesda, MD).
일부 실시형태로, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1:0.2의 FXIIa-알파 대 항체의 몰비로 사용된 경우에, 인자 XIIa-알파를 40% 초과, 50% 초과 또는 60% 초과만큼 억제하는 항-인자 XII/FXIIa 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시형태로, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1:0.5의 FXIIa-알파 대 항체의 몰비에서, 인자 XIIa-알파를 80% 초과, 85% 초과 또는 90% 초과만큼 억제한다. 한 실시형태로, 항체는 1:0.5의 몰비에서 FXIIa-알파의 완전한 억제를 성취한다. 한 실시형태로, FXIIa-알파는 사람 인자 XIIa-알파이다. 한 실시형태로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항체 3F7과 적어도 견줄만한 사람 FXIIa에 대한 친화성을 갖는다.
상기 논의된 바와 같은 "항-FXII 항체"는 FXII 및 FXIIa 중 하나 또는 모두에 결합되어 억제하는 항체를 포함한다. 한 실시형태로, 항체는 전장 Ig, Fab, F(ab)2, Fv, scFv의 형태, 또는 그의 다른 형태나 변이체로 존재할 수 있다. 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있다. 항체는 이소타입이 IgM, IgD, IgA, IgG, 또는 IgE이거나, 그의 임의 서브그룹, 예를 들면, IgG1, 또는 이의 변이체임을 특징으로 할 수 있다. 항체는 이로써 제한되는 것은 아니지만, 사람, 마우스, 래트, 토끼, 염소, 햄스터 또는 원숭이를 포함하는, 포유동물 종일 수 있다. 항체는 사람화되거나 CDR-이식될 수 있다. 항체는 면역원성, 반감기를 바꾸거나, 치료학적 항체와 관련된 다른 유용한 특성을 부여하기 위하여 돌연변이시키거나 개질시킬 수 있다. 한 실시형태로, 항체는 FXII의 중쇄 또는 경쇄 상의 에피토프 (여기서, "FXII"는 FXII 및 FXIIa를 포함함), 예를 들면, 중화 에피토프에 결합되는 항-FXII 항체이다. 항체는 FXII에 대한 결합에 대해 고친화성 및/또는 고결합활성일 수 있다. 항체는 폴리펩타이드, 핵산 또는 소분자에 접합될 수 있다.
다른 실시형태로, FXII 억제제는 단백질, 펩타이드, 핵산 또는 소분자이다. 용어 "소분자(small molecule)"는 저분자량 화합물을 의미한다. 소분자는, 예를 들면, 1000 달톤 미만이어서, 세포막을 통한 확산을 허용할 수 있다. 소분자는 FXII에 대한 높은 친화성으로 결합됨을 특징으로 할 수 있다. 바람직한 소분자는 GI 관으로부터 흡수될 수 있는 것이다.
E. 반감기 증진 폴리펩타이드에 연 결된 FXII 억제제
본 출원의 다른 양상은 반감기 증진 폴리펩타이드(half-life enhancing polypeptide: HLEP)에 연결되는 FXII 억제제를 제공한다. 한 실시형태로, FXII 억제제는 소단백질이다. 따라서, 다른 소단백질에 대해 공개된 바와 같은 신속한 신장 청소율(renal clearance)이 예상될 수 있다 (Werle M and Bernkop-Schnurch A, Amino Acids 2006; 30:351-367). 폴리펩타이드 화합물의 짧은 혈장 반감기를 해결하는 한 방법은 그것을 반복적으로 또는 연속 주입을 통해 주사하는 것이다. 다른 접근법은 폴리펩타이드 자체의 고유 혈장 반감기를 증가시키는 것이다. 예를 들면, 한 실시형태로, FXII 억제제는 반감기 확대 단백질에 연결된다.
"반감기 증진 폴리펩타이드"는 환자에서 또는 동물에서 생체내 FXII 억제제의 반감기를 증가시킨다. 예를 들면, 알부민 및 면역글로불린과 그들의 단편 또는 유도체가 반감기 증진 폴리펩타이드 (HLEP)로서 기술되어 왔다. Ballance 등 (WO 2001/79271)은 사람 혈청 알부민에 융합된 경우에, 생체내 증가된 기능적 반감기 및 확대된 저장 수명을 가지리라 예상되는 다수의 상이한 치료학적 폴리펩타이드의 융합 폴리펩타이드를 기술하였다.
용어 "알부민" 및 "혈청 알부민"은 사람 알부민(HA) 및 이의 변이체를 포함하며, 다른 종으로부터의 알부민 및 이의 변이체뿐만 아니라, 그의 완전 성숙 형태가 제공된다 (서열번호 19). 본원에 사용된 바와 같은 "알부민"은 알부민의 하나 이상의 기능적 활성 (예: 생물학적 활성)을 갖는, 알부민 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열이나, 알부민 변이체를 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 알부민은 FXII 억제제의 치료학적 활성을 안정화시키거나 연장할 수 있다. 알부민은 척추동물, 특히 임의의 포유동물, 예를 들면, 사람, 원숭이, 소, 양 또는 돼지로부터 유래될 수 있다. 비-포유동물 알부민은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 암탉 및 연어로부터의 알부민을 포함한다. 알부민-연결된 폴리펩타이드의 알부민 부분은 치료학적 폴리펩타이드 부분보다 상이한 동물로부터일 수 있다. 알부민 융합 단백질의 예에 대해 WO 2008/098720을 참조.
한 실시형태로, 알부민 변이체는 적어도 10, 20, 40, 또는 적어도 70개의 아미노산 길이이거나, 사람 알부민(HA) 서열로부터의 15, 20, 25, 30, 50개 또는 그 이상의 인접 아미노산을 포함할 수 있거나 (예: 도 3에 제시된 서열, 서열번호 19), HA의 특정 도메인 중 부분 또는 모두를 포함할 수 있다. 알부민 변이체는 아미노산 치환, 결실 또는 부가, 보존적 또는 비-보존적 치환을 포함할 수 있으며, 여기서, 상기 변화는 반감기 증진 폴리펩타이드의 치료학적 활성을 부여하는 활성 부위, 또는 활성 도메인을 실질적으로 바꾸지 못한다. 이들 변이체는 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%나 그 사이에 임의 %의 상동성을 공유할 수 있다.
한 실시형태로, 알부민 변이체는 단편을 포함하며, 적어도 하나의 알부민의 전체 도메인 또는 상기 도메인의 단편, 예를 들면, 도메인 1 (서열번호 19의 아미노산 1 -194), 2 (서열번호 19의 아미노산 195-387), 3 (서열확인번호 19ㅇ의 아미노산 388-585), 1 + 2 (서열확인번호 19의 1-387), 2 + 3 (서열확인번호 19의 195-585) 또는 1 + 3 (서열확인번호 19의 아미노산 1-194 + 서열확인번호 19의 아미노산 388-585)으로 이루어지거나, 이와 달리 이를 포함할 수 있다. 각 도메인은 2개의 상동성인 서브도메인 즉, 잔기 Lys106 내지 Glu119, Glu292 내지 Val315 및 Glu492 내지 Ala511을 포함하는 가요성 서브도메인간 링커 영역을 갖는, 서열확인번호 19의 잔기 1-105, 120-194, 195-291, 316-387, 388-491 및 512-585로 구성된 그 자체이다. .
다른 실시형태로, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 알파-태아단백질 (WO 2005/024044; Beattie and Dugaiczyk, 20 Gene 415-422, 1982), 아파민 (Lichenstein et al. 269 J. Biol. Chem. 18149-18154, 1994), 및 비타민 D 결합 단백질 (Cooke and David, 76 J. Clin. Invest. 2420-2424, 1985)을 포함하는, 알부민에 구조적으로 또는 진화적으로 관련된 다른 단백질이 HLEP로서 사용될 수 있다. 그들의 유전자는 사람, 마우스 및 래트에서 동일한 염색체 영역에 대해 구조적 및 기능적 유사성 맵핑을 갖는 다유전자 클러스터를 나타낸다. 알부민군 구성원의 구조적 유사성은 그들이 HLEP로서 사용될 수 있음을 제시한다. 예를 들면, 알파-태아단백질은 생체내 부착된 치료학적 폴리펩타이드의 반감기를 확대하기 위하여 청구되어 왔다 (WO 2005/024044). 치료학적 활성을 안정화시키거나 연장할 수 있는 이러한 단백질 또는 이의 변이체가 사용될 수 있고, 임의의 척추동물, 특히 임의의 포유동물, 예를 들면, 사람, 원숭이, 소, 양 또는 돼지나, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 암탉 또는 연어를 포함하는 비-포유동물로부터 유래될 수 있다 (참조: WO 2008/098720). 상기 변이체는 길이가 10개 이상의 아미노산일 수 있거나, 각 단백질 서열의 약 15, 20, 25, 30, 50개 또는 그 이상의 인접 아미노산을 포함할 수 있거나, 각 단백질의 특정 도메인 중 부분 또는 모두를 포함할 수 있다. 알부민군 구성원 융합 단백질은 천연으로 존재하는 다형성 변이체를 포함할 수 있다.
한 실시형태로, 모노- 또는 폴리- (예: 2-4) 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 잔기가 반감기를 확대하기 위하여 사용될 수 있다. 페길레이션(pegylation)은 이용가능한 페길레이션 반응 중 어느 하나에 의해 수행할 수 있다. 페길레이션 단백질 생성물의 제조 방법은 일반적으로 (a) 단백질이 하나 이상의 PEG 그룹에 결합되도록 하는 조건하에 폴리펩타이드와 폴리에틸렌 글리콜(예: PEG의 반응성 에스테르 또는 알데하이드 유도체)을 반응시키고; (b) 반응 생성물(들)을 수득함을 포함할 것이다. 일반적으로, 최적의 반응 조건은 공지된 파라미터 및 원하는 결과를 기준으로 하여 경우에 따라 결정할 것이다. 당해 분야에 공지된 수많은 PEG 결합법이 있다 (참조, 예를 들면, EP 0 401 384; Malik et al., Exp. Hematol., 20:1028-1035 (1992); Francis, Focus on Growth Factors, 3(2):4-10 (1992); EP 0 154 316; EP 0 401 384; WO 92/16221 ; WO 95/34326; 미국 특허 5,252,714).
다른 실시형태로, 면역글로불린 (Ig), 또는 이의 변이체가 HELP로서 사용될 수 있으며, 이때 변이체는 단편들을 포함한다. 한 실시형태로, 면역글로불린 불변 영역의 Fc 도메인 또는 부분이 사용된다. 불변 영역은 IgM, IgG, IgD, IgA, 또는 IgE 면역글로불린의 것일 수 있다. 치료학적 폴리펩타이드 부분은, 절단될 수 있는, 항체 또는 펩타이드 링커의 힌지 영역을 통해 Ig에 접속된다. 몇몇 특허 및 특허출원은 생체내 치료학적 단백질의 반감기를 확대하기 위하여 면역글로불린 불변 영역에 치료학적 단백질의 융합을 기술하고 있다 (US 2004/0087778, WO 2005/001025, WO 2005/063808, WO 2003/076567, WO 2005/000892, WO 2004/101740, US 6,403,077). 따라서, 다른 실시형태는 HLEP로서 상기 면역글로불린 서열, 예를 들면, 면역글로불린 및 이의 변이체의 Fc 단편을 사용하는 것이다. FXII의 억제제는 HLEP로서 면역글로불린 불변 영역의 Fc 도메인 또는 적어도 일부에 융합될 수 있고, 원핵 또는 진핵 숙주세포(예: 세균, 효모, 식물, 동물 (곤충 포함) 또는 사람 세포주)에서 또는 형질전환 동물에서 재조합 분자로서 제조될 수 있다 (WO 2008/098720).
하나의 SPINK 돌연변이체 Fc 융합 단백질의 한 예인, SPINK-K2-Fc 융합 단백질이 WO2008/098720에 기술되어 있다.
F. 링커
한 실시형태로, 개재 펩타이드 링커가 치료학적 폴리펩타이드와 HLEP 사이에 도입될 수 있다. 한 실시형태로, 절단가능한 링커는, 특히, HLEP가, 예를 들면, 입체장애에 의해 치료학적 폴리펩타이드의 특이 활성을 방해한다면, 도입된다. 특정 실시형태로, 링커는 고유, 외부, 또는 통상의 응고 기전의 응고 프로테아제와 같은 효소에 의해 개열된다. 고유 기전의 응고 프로테아제는, 예를 들면, FXIIa, FXIa, 또는 FIXa를 포함하는 접촉 활성화 경로의 프로테아제이다. 한 실시형태로, 링커는 FXIIa에 의해 절단된다. 외부 기전의 프로테아제는 조직인자 경로의 프로테아제, 예를 들면, FVIIa를 포함한다. 통상의 기전의 프로테아제는 피브리노겐의 피브린으로의 전환에 관여하는 프로테아제, 예를 들면, FXa, Flla, 및 FXIIIa를 포함한다.
G. 치료학적 제형 및 투여
FXII 억제제 또는 이의 변이체는 80%보다 크거나, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%보다 큰 순도를 가질 수 있다. 한 실시형태로, 변이체는 오염된 거대분자, 예를 들면, 다른 단백질 및 핵산에 대해 99.9% 순도보다 크고, 감염성 및 발열성 제제를 함유하지 않는 약제학적으로 순수한 상태를 갖는다.
정제된 FXII 억제제는 임의로 환자에서 염증성 탈수초성 질환의 효과를 예방, 치료 또는 개선하기 위한 약제학적 제제를 제공하는 약제학적 부형제가 부가될 수 있는 통상의 생리학적으로 혼화성인 완충제 수용액에 용해시킬 수 있다. 적절한 약제학적 제형뿐만 아니라, 상기 약제학적 담체 및 부형제가 당해 분야에 잘 공지되어 있다 [참조예: Kibbe et al. Handbook of Pharmaceutical Excipients, (3rd ed., Pharmaceutical Press), 2000]. 약제학적 조성물은 동결건조되거나 안정한 가용성 형태로 제형화될 수 있다. 폴리펩타이드는 당해 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 동결건조시킬 수 있다. 동결건조된 제형은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 희석제(예: 주사용 멸균수 또는 멸균된 생리식염수 용액)의 부가에 의해 사용 전에 재구성한다.
FXII 억제제의 제형은 임의의 약제학적으로 적절한 투여 수단에 의해 환자에 전달된다. 다양한 전달 시스템이 공지되어 있고, 임의의 편리한 경로에 의해 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다. 조성물은 전신 (예: 비경구) 투여될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "비경구(parenteral)"는 정맥내, 피하, 근육내, 동맥내 및 기관내 주사; 및 점적주사, 분무 적용, 및 주입 기술을 포함한다. 비경구 제형은 공지된 방법에 따라 볼루스 형태로 또는 일정한 주입으로서, 정맥내 또는 피하 투여될 수 있다. 비경구용으로 잘 알려진, 바람직한 액체 담체는 멸균수, 식염수, 수성 덱스트로스, 당 용액, 에탄올, 글리콜 및 오일을 포함한다. 전신 사용을 위해, 치료학적 단백질은 정맥 라인 또는 동맥 라인을 위해 제형화될 수 있다. 제형은 주입에 의해 또는 볼루스 주사에 의해 연속적으로 투여할 수 있다.
일부 실시형태로, 제형은 척추강내 주사에 의해 또는 두개내 주사에 의해 투여함으로써, 척수 및 뇌에 직접 접근을 이룰 수 있다. 이들 실시형태에서, 제형은 특별히 제형화될 수 있다; 예를 들면, 제형은 보존제가 없을 수 있다.
일부 실시형태로, 제형은 비내 투여를 통해 투여된다. 비내 전달은 바이러스 및 거대분자가 뇌척수액(CSF) 또는 CNS로 직접 도입될 수 있도록 하는 것으로 보고되어 왔다 (Mathison et al. J. Drug Target 1998; 5:415-41; Chou et al. Biopharm Drug Dispos. 1997; 18:335-46; Draghia et al., Gene Ther. 1995; 2(6):418-235). 한 실시형태로, 단백질인 FXII 억제제 중 임의의 것을 암호화하는 유전자를 포함하는 바이러스 벡터 (예: 아데노바이러스 벡터)가 뇌에서 암호화 단백질의 발현을 얻기 위하여 후각 수용체 뉴론을 통해 전달될 수 있다 (Draghia et al., Gene Ther. 1995; 2(6):418-23).
경구 투여용 정제 및 캡슐제는 통상적인 부형제, 예를 들면, 결합제, 충전제, 윤활제 또는 습윤제 등을 함유할 수 있다. 경구용 액체 제제는 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 에멀젼, 시럽, 엘릭시르 등의 형태로 존재하거나, 사용하기 위해 물 또는 다른 적절한 비히클과 재구성하기 위한 무수 생성물로서 존재할 수 있다. 상기 액체 제제는 통상적인 첨가제, 예를 들면, 현탁제, 유화제, 비-수성 비히클 및 보존제를 함유할 수 있다. 일부 제형은 서방출 시스템 (예: 패치)을 포함한다.
FXII 억제제의 용량은 많은 요인, 예를 들면, 용법, 제형 또는 투여 형태에 따라 좌우될 수 있고, 각각의 용법에 대한 전임상 및 임상 실험으로 결정될 수 있다. 예를 들면, 한 실시형태로, FXII 억제제의 용량은 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg, 200 mg/kg, 500 mg/kg, 1000 mg/kg, 또는 그 사이의 임의 용량, 또는 0.1-1000 mg/kg, 또는 1-1000 mg/kg, 또는 1-500 mg/kg, 또는 50-500 mg/kg, 50-200 mg/kg, 또는 100-200 mg/kg, 또는 그 사이의 임의 용량 범위이다.
치료학적 유효량의 항-FXII 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 실시형태에서, 치료학적 유효량은 치료가 필요한 환자 또는 대상체에 포지티브 치료학적 효과를 가져오는 용량이다. 치료학적 유효량은 일반적으로 약 0.01 내지 100 mg/kg, 약 0.01 내지 50 mg/kg, 약 0.1 내지 30 mg/kg, 약 0.1 내지 10 mg/kg, 약 0.1 내지 5 mg/kg, 약 0.1 내지 2 mg/kg 또는 약 0.1 내지 1 mg/kg, 또는 그 사이의 임의 용량 범위나, 상기 또는 실시예에 제시되는 FXII 억제제에 대한 용량 중 하나의 범위이다.
치료는 단일 용량 또는 다중 용량을 제공함을 포함할 수 있다. 다중 용량이 필요하면, 그들은 매일, 하루 걸러, 매주, 2주에 한번, 매달 또는 2달에 한번 또는 필요에 따라 투여할 수 있다. 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 서서히 연속적으로 방출하는 보관소(depository)가 또한 사용될 수 있다. 치료학적 유효량은 대상체에서 FXIIa를 적어도 50% 만큼, 바람직하게는 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 만큼, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 99% 또는 심지어 100% 만큼 (또는 그 사이에 임의 % 만큼) 억제하는 용량일 수 있다.
FXII 억제제는 단독으로 또는 다른 치료학적 제제와 함께 투여될 수 있다. 이들 제제는 함께 제형화되거나, 동시 또는 별도로 그리고 동일한 투여 경로나 상이한 투여 경로를 통해 별개의 제형으로서 투여될 수 있다. 투여 스케쥴 또는 FXII 억제제의 용량은 또한 다른 의학적 조건 또는 치료법과 같은 요인에 따라 동일한 용법 또는 상이한 용법으로 개개 환자 사이에 다를 수 있다.
실시형태는 하기의 실시예에 의해 다시 설명되며, 이는 제한하는 것으로서 간주되어서는 안된다. 다른 실시형태는 기술된 실시형태의 명세서 및 실행을 고려함으로써 당해 분야의 숙련가에게는 명확할 것이다. 본 출원을 통해 인용된 모든 참조문헌, 특허 및 공개된 특허출원의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1: 다발성 경화증에서 혁신적인 표적으로서의 혈장 혈액 응고 시스템
예비 연구는, 1차 및 2차 지혈이 MS에서 염증성 신경변성에 관여함을 시사한다. 예를 들면, 최근에, Ca2+-의존성 혈소판 활성화에서 주요 분자로서 이미 동정된 STIM1 및 STIM2가 염증성 반응 및 신경변성의 중요한 병리생리학적 결정인자를 나타냄이 EAE 동물 모델에서 입증되었다(Schuhmann et al., J. Immunol. 2010; 184:1536-42). 추가로, 피브리노겐 및 피브린의 침착이 MS 환자의 중추 혈관 및 뇌 실질에서 발견된다(Sobel & Mitchell, Am. J. Pathol. 1989; 135:161-68; Claudio et al., Acta Neuropathol 1995; 90:228-38; Marik et al., Brain 2007; I30:2800-15). 피브린은 소위 혈장 혈액 응고 시스템의 최종 생성물이고, 이는 결국 외인성 및 내인성 시스템으로 구성된다. 응고 인자 XII (FXII)은 고유의 혈액 응고 캐스케이드의 출발점이며, 이는 초기에 FXI의 활성화를 유도한다. 동시에, 이것은 전염증성 접촉(키닌) 시스템을 활성화하며, 이의 최종점은 브라디키닌의 형성이다.
본 발명자들의 작업은, 브라디키닌 수용체 B1R이 EAE 모델에서 염증성 세포 침입의 중요한 조절인자임을 입증했다(Gobel et al., J. Autoimmun 2011:36:106-14). B1R 결핍 마우스는 덜 심각한 EAE를 경험했다. 유사하게, B1R의 선택적 길항제로 치료된 야생형 마우스도, 또한, 비치료 마우스와 비교하여 최대로 하부 질환을 경험했다. 대조적으로, B2R 유전자의 파괴에 의한 브라디키닌 수용체 B2R의 차단은 EAE 질환 과정을 변경하지 않았다. 흥미롭게도, B1R 및 B2R 둘 다가 조직 손상 후 전형적인 염증성 과정을 매개함에도 불구하고, B2R은 브라디키닌 효과의 대부분을 매개한다. 추가로, 생체내 브라디키닌 활성을 유도하는 매커니즘은 명확하지 않고, 이는 브라디키닌이 적어도 2개의 경로에 의해 활성화될 수 있기 때문이다: 내인성 응고 경로 및 심지어 FXII 녹아웃 마우스에서도 일어나기 때문에 FXII와 무관해야만 하는 다른 경로 (Schmaier AH, Int. Immunopharmacol. 2008; 8:161-65).
또한, FXII가 EAE에도 기여하는지를 시험하기 위하여, EAE는, 10 내지 12주령 암컷 C57BI/6, FXII- 또는 FXI-결핍 마우스를 200μg MOG35-55로 면역화시켜 유도했다. C57BI/6 MOG35-55 마우스 모델이 치료학적 화합물의 전-임상 검증(pre-clinical validation)을 위해 통상 사용된다(Krishnamoorthy & Wekerle, Eur. J. Immunol 2009; 39:2031-35). 이 모델에서 EAE 과정은, 일차 진행형 형태의 MS와 유사하고, 이는 일단 유도되면 질환이 경감되지 않기 때문이다. 완전 프로인트 애쥬번트(complete Freund's Adjuvant: CFA)에 MOG를 보충하여 1mg/ml 에멀젼을 수득하였고, 2 x 100㎕를 깊게 마취시킨 마우스 옆구리의 2개의 상이한 부위에 피하 주사했다. 백일해 독소는 면역화 당일 및 2일 후에 주사했다(400ng, Alexis, San Diego, CA). 모든 동물은 표준 조건 하에 유지했고, 물과 사료에 임의로 접근시켰다.
약리학적 조절은, 또한, 매일 정맥내 주사에 의해 투여되는 FXII 길항제 H-D-Pro-Phe-Arg-클로로메틸케톤(PCK)(8㎍/g; Bachem)을 사용하여 수행하였다. PCK는, 활성화된 FXII(FXIIa)의 아미도 분해 활성 및 FXII의 혈장 칼리크레인-매개 활성화를 비가역적으로 억제한다(Tans et al., Eur. J. Biochem. 1987; 164:637-42; Kleinschnitz, J Exp Med. 2006 Mar 20;203(3):513-8).
EAE의 임상학적 과정은, 하기 스코어 시스템을 사용하여 2명의 맹검 조사자에 의해 매일 모니터링했다: 등급 0, 이상 없음; 등급 1, 꼬리 끝 처짐; 등급 2, 꼬리 처짐; 등급 3, 중간 뒷다리 쇠약; 등급 4, 완전한 뒷다리 쇠약; 등급 5, 경미한 하반신 불완전 마비; 등급 6, 하반신 불완전 마비; 등급 7, 중증의 하반신 불완전 마비 또는 하반신 마비; 등급 8, 사지 마비; 등급 9, 사지 마비 또는 전빈사(premoribund) 상태; 등급 10, 사망. 7보다 높은 스코어를 가진 동물을 안락사시키고, 실험의 종료까지 일치하는 스코어로 계속했다.
FXII-결핍 마우스에서, 최대 질환 비율이 유의적으로 감소되었다(도 4A). PCK에 의한 약리학적 차단에서 유사한 결과가 수득되었다(도 4C 및 4D). PCK는, 심지어 치료를 12일째에 개시한 경우, 동물이 이미 EAE 증상을 나타낸 경우에도 효과를 가졌다(도 4D). 그러나, FXI-결핍된 마우스에서는 EAE 질환 과정이 야생형 대조군 마우스에서와 유사했다(도 4B). FXI은 FXII의 바로 하류이고, FXIIa에 의해 활성화되므로, 이들 결과는, 이것이 EAE 모델에서 관찰된 보호 효과를 유도하는 내인성 응고 캐스케이드에서의 FXII의 역할이 아님을 나타낸다.
질환 스코어의 감소 이외에, 염증성 병소의 수 및 탈수초화와 축삭 손상 둘 다가 또한 FXII-결핍 동물에서 유의적으로 감소되었다. 도 5는, 대조군(좌측 막대), PCK 치료(중간 막대) 및 FXII-/- 마우스(우측 막대)에서의 염증성 병소의 수(도 5A), 탈수초화된 영역/슬라이스 (도 5B) 및 축삭 수(도 5C)를 도시한다. 정량화를 위해, 염색된 섹션은, CCD 카메라(Visitron Systems; Tuchheim, Germany)가 있는 현미경(Axiophot2, Zeiss; Oberkochen, Germany)에 의해 맹검 방식으로 검사했다. 염증성 병소(H&E), 탈수초화된 영역(LFB), 및 세포는 MetVue 소프트웨어 (Molecular Devices; Downingtown, USA)를 이용하여 5개의 무작위 선택된 샘플에 대해 카운팅했다. 축삭의 수는, 한정된 병변에서 분석했다. 형광 강도는 ImageJ(NIH, USA)를 이용하여 측정했다. 대조군(Con)과 PCK-치료된 마우스 사이의 조직학적 비교의 예는, 각 막대 그래프로 제시된다. 화살표는 염증(도 5A), 탈수초화(도 5B), 및 축삭 손상(도 5C)의 영역을 나타낸다.
시험관내 분석은, 또한, 변경된 면역 반응을 나타냈다(도 5D 및 5E). 비장세포는, 질환 최대 및 EAE 유도 후 50일째에 면역화된 마우스로부터 단리시켰고, MOG35-55 펩타이드(10mg/ml) 또는 CD3/CD28 비드(세포 대 비드 비 2:1)로 자극하였다. 도 5D에 제시된 증식 검정을 위해, 1 x 105 비장세포는, 10mM HEPES, 25mg/ml 겐타마이신, 50mM 머캅토에탄올, 5% FCS, 2mM 글루타민, 및 1% 비필수 아미노산(Cambrex; Verviers, Belgium)을 함유하는 1ml DMEM에서 3일 동안 배양하였고, CD3/CD28 비드(세포 대 비드 비 2:1; Dynal Biotech, Hamburg, Germany) 또는 10mg/ml MOG35 -55로 자극하였다. 3H 티미딘(Amerham; Piscataway, NJ)을 마지막 14시간 동안 가하고, 방사능은 베타-신틸레이션 계수기로 측정했다(TopCount NXT; PerkinElmer, Rodgau-Jugesheim, Germany). 실험은 4회 수행했다.
도 5D에 나타낸 바와 같이, CD3/CD28 비드로 자극된 대조군(좌측 막대), PCK 치료(중간 막대) 및 FXII-/- 마우스(우측 막대) 비장세포 중 증식은 유의적으로 상이하지 않았다. MOG35 -55 펩타이드를 이용하여 증식을 자극하는 경우에, 대조군과 PCK-치료된 마우스 사이에 유의적인 차이가 존재하였지만, 대조군과 FXII-/- 마우스 사이에는 차이가 없었다.
MOG 재자극된 비장세포의 상청액은, 제조업자의 지시에 따라, ELISA(R&D Systems; Wiesbaden, Germany)로 IFNγ, IL-17, IL-4 및 IL-6 단백질 수준에 대해서도 평가했다. 도 5E에 제시된 결과는, 대조군과 비교하여, PCK 치료(중간 막대) 및 FXII-/- 마우스(우측 막대) 둘 다로부터의 비장세포로부터 IL-17, TNFα 및 IL-6의 생성이 감소되었음을 나타낸다. IFNγ의 수준은 유의적으로 상이하지 않았다.
함께 고려해 보면, 이들 결과는, FXII의 억제가, 내인성 응고 캐스케이드의 변화와 관련되어 있지 않은 말초 면역 반응에서의 변화를 초래함을 시사한다.
실시예 2: FXII 의 단백질 억제제는, 또한, 신경학적 자가면역 염증의 일차 진행형 모델에서 질환의 임상학적 징후를 억제한다
FXII의 다른 억제제인 rHA-인페스틴-4도, 또한, 실시예 1에 상세히 기술된 EAE 모델에서 활성이었다. 이 연구에서, 마우스는, 링커를 통해 인페스틴 4 도메인에 융합된 사람 알부민을 포함하는 단백질, rHA-인페스틴-4[이는 문헌(Hagedorn et al. Circulation 2010; 117:1153-60)에 기술되어 있음]로 200㎍/g의 용량으로 매일 정맥내 주사에 의해 치료했다.
도 6A에 나타낸 바와 같이, rHA-인페스틴-4는, 또한, 질환의 과정 중 초기에 EAE 스코어를 감소시켰다. 그리고, PCK-치료 마우스 및 FXII-/- 마우스의 연구에서 알 수 있었던 바와 같이, rHA-인페스틴-4에 의한 치료는, 대조군과 비교하여, IL-17 생성의 유의적인 감소를 초래하였다(도 6B).
이들 결과는, FXII의 약리학적 차단이 MS의 치료를 위한 새로운 대안의 항-염증성 전략을 제공하는 부가적 증거를 제공한다.
실시예 3: 항- FXII 항체 치료는, 신경학적 자가면역 염증의 재발형 모델에서 질환의 임상학적 징후를 억제한다
항-인자 XII 항체는, 또한, 2차 EAE 모델 - PLP 펩타이드(미엘린 단백지질 단백질)로 면역화시킨 암컷 SJL 마우스에서 FXII의 역할을 시험하기 위해 사용되었다. 이 EAE 마우스 모델은, 운동 뉴런 기능의 변성을 포함하는, 많은 MS의 임상학적 및 조직병리학적 징후를 복제한다. C57BI/6 MOG35 -55 모델과 유사하게, PLP로 면역화된 SJL 마우스는, 치료학적 화합물의 전-임상 검증에 사용하기 위해 허용되는 모델이다(Krishnamoorthy & Wekerle, Eur. J. Immunol 2009; 39:2031-35). 그러나, SJL PLP 모델은, 또한, 재발성 경감형의 MS에서 발생되는 바와 같은, 경감 및 재발을 경험한다.
EAE는, 이들을 완전 프로인트 보조제(CFA)(Difco, BD San Diego, CA, USA)에 유화시킨 PLP 펩타이드(139-151)(Mimotopes, Clayton, Vic, Australia) 100μg으로 피하 면역화시킨 다음, 백일해 독소(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) 200ng을 0일째에 정맥내 투여함으로써 8 내지 12주령 암컷 SJL 마우스에서 유도했다. "-1일째"(즉, EAE 유도 주사 전날) 및 유도 후 1, 3, 6, 8, 10, 13, 및 15일째에, 대조군 동물에 200μg의 이소타입 대조군 모노클로날 항체를 피하 주사로 제공하였고, 한편, 실험 그룹에는 항-FXII mAb (3F7)를 투여했다. 질환은 0 내지 15일째에 모니터링했다. 임상학적 스코어는 문헌(Langrish et al., J Exp Med. 2005; 201:233-40)에 기술된 바와 같이 평가하였고, 각 마우스에 대한 최대 스코어는 6ㅇ이었다. 모든 동물 시술은 CSL 동물 윤리 위원회에 의해 승인되었다.
중화된 항-FXII 모노클로날 항체(mAb)로의 마우스의 치료는, 이러한 재발성 모델에서 EAE의 임상학적 진행을 억제했다(도 7). 억제는 질환의 초기 단계에 가장 효과적이었다.
시험관내 전염증성 사이토카인 반응에 대한 FXII 차단의 효과를 평가하기 위하여, 동물은 9일째에 출혈시켰고, 혈청은, 제조업자의 지시에 따라 Luminex 200 기기(Austin, TX, USA) 상에서 Luminex 검정(Millipore, Billerica, MA, USA)에 의한 사이토카인 분석을 위해 수거하였다. 항-FXII 항체 치료는, 혈액으로의 프로-염증성 사이토카인 방출의 감소를 유도했다. 도 8에 제시된 바와 같이, 항-FXII는 GM-CSF, IFNγ, TNFα 및 IL-1β의 수준을 감소시켰다.
마크로파지 및 수지상 세포(DC)는, EAE 및 MS 염증성 병변에서 현저하고, 조직 손상을 매개하는 역할을 한다. 이들은, 전염증성 사이토카인의 생성, 자가-반응성 림프구에 대한 항원 제시, 및 직접 미엘린 수초를 야기하는 반응성 산소 종의 생성에 기여한다(Graham et.al., 2009). 케메린은, 혈액 내에 지모겐으로서 순환되는 분자이며, 플라스민을 포함하는 세린 프로테아제, 호중구 엘라스타제, 및 더 적은 정도의 FXIIa에 의해 활성화된다. 그러나, FXIIa가 압도적인 활성화제이다(Qu and Chaikof, 2010). 활성화된 케메린은, ChemR23으로서도 공지되어 있는 케모카인-유사 수용체 1(CMKLR1)을 발현하는 세포에 대한 효능있는 주화성 인자(chemoattractant)이다. 이 수용체는 형질세포양 수지상 세포(pDC), 조직 거주 마크로파지, 단핵세포, 및 NK 세포에 의해 상당히 발현된다(Hart and Greaves, 2010). Graham 등(2009)에 의한 연구는, 케메린 수용체, CMKLR1, 또는 Chem23의 마우스 녹아웃이 EAE 실험에서 전반적인 낮은 임상학적 스코어를 가짐을 제시하였다. 따라서, 적어도 재발형 EAE 모델에서, 항체에 의한 FXII의 작용 차단은 적어도 부분적으로, 활성 케메린의 양을 감소시켜, EAE 실험에서 치료학적 효과를 일으킴으로써 작용할 수 있다.
본 발명의 다른 실시형태들은, 본원에 기술된 본 발명에 대한 상세한 설명 및 실행의 고려로부터 당해 분야의 숙련가에게는 명확할 것이다. 상기 상세한 설명 및 실시예들은 단지 예시로서 고려되어야 하며, 본 발명의 실제 범위 및 취지는 하기의 특허청구범위에 의해 제시하고자 한다.
SEQUENCE LISTING <110> CSL BEHRING GMBH; CSL LTD. JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET-WUERZBURG WESTFAELISCHE WILHELMS-UNIVERSITAET MUENSTER <120> FACTOR XII INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF NEUROLOGICAL INFLAMMATORY DISORDERS <130> A189 <150> EP 12153341.8 <151> 2012-01-31 <150> US 61/592,652 <151> 2012-01-31 <160> 19 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 409 <212> PRT <213> Triatoma infestans <400> 1 Met Arg Tyr Leu Leu Leu Leu Gly Leu Ala Ala Phe Ser Ala Val Ser 1 5 10 15 Ala Glu Lys Lys Asp Pro Pro Cys Val Cys Pro Leu Ile Trp Lys Pro 20 25 30 Val Cys Gly Ser Asp Gly Gln Thr Tyr Pro Ser Glu Cys Ile Leu Asn 35 40 45 Cys Val Lys Tyr Ala Leu Lys Lys Asp Ile Lys Val Ala Tyr Gln Gly 50 55 60 Ile Cys Lys His Val Thr Phe Ala Ala Glu Glu Glu Gln Glu Val Glu 65 70 75 80 Gly Trp Lys Gly Pro Cys Glu Cys Pro Arg Ala Leu His Arg Val Cys 85 90 95 Gly Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Ser Asn Pro Cys Thr Leu Asn Cys Ala 100 105 110 Lys His Glu Arg Lys Ser Asp Leu Val Gln Val His Glu Gly Pro Cys 115 120 125 Ser Pro Asp Glu His Glu Phe Glu Asp Pro Cys Glu Cys Asp Asn Lys 130 135 140 Phe Asp Pro Val Cys Gly Thr Gly Glu Val Thr Tyr Arg Asn Leu Cys 145 150 155 160 His Leu Glu Cys Ala Thr Phe Thr Thr Ser Pro Gly Val Glu Val Asp 165 170 175 Tyr Glu Gly Glu Cys Leu Ala Glu Thr Val Leu Leu Glu Glu Asn His 180 185 190 Cys Ala Cys Pro Arg Val Leu His Arg Val Cys Gly Ser Asp Gly Asn 195 200 205 Thr Tyr Ser Asn Pro Cys Thr Leu Asp Cys Ala Lys His Glu Gly Lys 210 215 220 Pro Asp Leu Val Gln Val His Glu Gly Pro Cys Asp Pro Asn Asp His 225 230 235 240 Asp Phe Glu Asp Pro Cys Glu Cys Asp Asn Lys Phe Glu Pro Val Cys 245 250 255 Gly Thr Asp His Ile Thr Tyr Ser Asn Leu Cys His Leu Glu Cys Ala 260 265 270 Ala Phe Thr Thr Ser Pro Gly Val Glu Val Lys Tyr Glu Gly Glu Cys 275 280 285 His Ala Glu Ile Met Glu Gln His Gln Ile Leu Lys Ser Cys Ile Cys 290 295 300 Thr Lys Met Tyr Lys Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly His Thr Tyr Pro 305 310 315 320 Asn Leu Cys Val Leu Lys Cys Arg Ile Ser Ser Lys Pro Gly Leu Lys 325 330 335 Leu Ala His Val Gly Lys Cys Gly Ile Gly Leu Leu Ala Val Glu Thr 340 345 350 Lys Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn Tyr Val Pro Val 355 360 365 Cys Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Gly Asn Pro Cys Met Leu Asn Cys 370 375 380 Ala Ala Gln Thr Lys Val Pro Gly Leu Lys Leu Val His Lys Gly Arg 385 390 395 400 Cys Gln Arg Ser Asp Val Glu Gln Phe 405 <210> 2 <211> 48 <212> PRT <213> Triatoma infestans <400> 2 Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn Tyr Val Pro Val Cys 1 5 10 15 Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Gly Asn Pro Cys Met Leu Asn Cys Ala 20 25 30 Ala Gln Thr Lys Val Pro Gly Leu Lys Leu Val His Glu Gly Arg Cys 35 40 45 <210> 3 <211> 56 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Ala Lys Cys Tyr Asn Glu Leu Asn Gly Cys 1 5 10 15 Thr Lys Ile Tyr Asp Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Pro 20 25 30 Asn Glu Cys Val Leu Cys Phe Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile 35 40 45 Leu Ile Gln Lys Ser Gly Pro Cys 50 55 <210> 4 <211> 53 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn 1 5 10 15 Tyr Val Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Pro Asn Glu Cys 20 25 30 Val Leu Cys Phe Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile Leu Ile Gln 35 40 45 Lys Ser Gly Pro Cys 50 <210> 5 <211> 53 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn 1 5 10 15 Tyr Val Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Gly Asn Glu Cys 20 25 30 Met Leu Cys Ala Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile Leu Ile Gln 35 40 45 Lys Glu Gly Pro Cys 50 <210> 6 <211> 54 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Asp Ser Leu Gly Arg Glu Val Arg Asn Pro Cys Ala Cys Phe Arg Asn 1 5 10 15 Tyr Val Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Asn Thr Tyr Gly Asn Glu Cys 20 25 30 Met Leu Asn Cys Ala Glu Asn Arg Lys Arg Gln Thr Ser Ile Leu Ile 35 40 45 Gln Lys Glu Gly Pro Cys 50 <210> 7 <211> 129 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Ile Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Arg Pro Ser Gly Gly Thr Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Ile Ser Pro His Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 8 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Gln Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Val Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Arg Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 9 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Lys Tyr Ile Met Gln 1 5 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Gly Ile Arg Pro Ser Gly Gly Thr Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain CDR2 showing variations <220> <221> variant <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from Arg, Asn, and Asp <220> <221> variant <222> (4)..(4) <223> Xaa is selected from Pro, Val, Ile and Met <220> <221> variant <222> (5)..(5) <223> Xaa is selected from Ser, Pro and Ala <220> <221> variant <222> (6)..(6) <223> Xaa is selected from Gly, Leu, Val and Thr <220> <221> variant <222> (7)..(7) <223> Xaa is selected from Gly, Tyr, Gln, Lys, Arg, Asn and Met <220> <221> variant <222> (8)..(8) <223> Xaa is selected from Thr, Gly and Ser <400> 11 Gly Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Ile Ser Pro His Tyr Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Leu Asp Val 20 <210> 13 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain CDR3 showing variations <220> <221> variant <222> (9)..(9) <223> Xaa is selected from Ala, Met and Val <220> <221> variant <222> (10)..(10) <223> Xaa is selected from Ser and Lys <220> <221> variant <222> (11)..(11) <223> Xaa is selected from Pro, Lys, Thr and His <220> <221> variant <222> (12)..(12) <223> Xaa is selected from His, Asn, Gly and Gln <400> 13 Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Leu Asp Val 20 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 15 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu Arg Gly Val 1 5 10 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> variant <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from Ala and Ser <220> <221> variant <222> (4)..(6) <223> Xaa can be any amino acid <220> <221> variant <222> (7)..(7) <223> Xaa is selected from Leu and Val <220> <221> variant <222> (9)..(10) <223> Xaa can be any amino acid <400> 17 Ala Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Xaa 1 5 10 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ser Gly Ser Ser Glu Met Thr Val His His Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 19 <211> 585 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu 1 5 10 15 Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln 20 25 30 Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu 35 40 45 Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys 50 55 60 Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu 65 70 75 80 Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro 85 90 95 Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu 100 105 110 Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His 115 120 125 Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg 130 135 140 Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg 145 150 155 160 Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala 165 170 175 Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser 180 185 190 Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu 195 200 205 Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro 210 215 220 Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys 225 230 235 240 Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp 245 250 255 Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser 260 265 270 Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His 275 280 285 Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser 290 295 300 Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala 305 310 315 320 Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg 325 330 335 Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr 340 345 350 Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu 355 360 365 Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro 370 375 380 Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Lys Gln Leu Gly Glu 385 390 395 400 Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro 405 410 415 Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys 420 425 430 Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys 435 440 445 Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His 450 455 460 Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser 465 470 475 480 Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr 485 490 495 Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp 500 505 510 Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala 515 520 525 Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu 530 535 540 Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys 545 550 555 560 Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val 565 570 575 Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu 580 585

Claims (16)

  1. 신경학적 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선에 사용하기 위한, 인자 XII(FXII) 억제제를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    상기 FXII 억제제가 직접적 FXII 억제제이고
    (i) 서열번호 2에 기재된 야생형 인페스틴-4 폴리펩타이드 서열 또는
    (ii) FXII에 결합하여 이의 활성 또는 활성화를 억제하는 항-FXII 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하며,
    상기 신경학적 염증성 질환이 다발성 경화증인, 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항-FXII 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 (a) 서열번호 9로 제시된 중쇄 CDR1, 서열번호 11로 제시된 중쇄 CDR2, 및 서열번호 13으로 제시된 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및 (b) 서열번호 14로 제시된 경쇄 CDR1, 서열번호 15로 제시된 경쇄 CDR2, 및 서열번호 17로 제시된 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항-FXII 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 (a) 서열번호 9로 제시된 중쇄 CDR1, 서열번호 10으로 제시된 중쇄 CDR2, 및 서열번호 12로 제시된 중쇄 CDR3을 포함하는 VH 영역; 및 (b) 서열번호 14로 제시된 경쇄 CDR1, 서열번호 15로 제시된 경쇄 CDR2, 및 서열번호 16으로 제시된 경쇄 CDR3을 포함하는 VL 영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항-FXII 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 7을 포함하는 VH 영역 및 서열번호 8을 포함하는 VL 영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 항-FXII 항체가 IgG인, 약제학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FXII 억제제가, 알부민, 아파민, 알파-태아 단백질 , 비타민 D 결합 단백질, 사람 알부민 또는 이의 변이체, 면역글로불린 또는 이의 변이체, PEG 또는 이의 변이체, 또는 IgG의 Fc인 반감기 증진 폴리펩타이드에 연결되는, 약제학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 반감기 증진 폴리펩타이드가 링커를 통해 FXII 억제제에 연결되는, 약제학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 링커가:
    (a) 절단가능한 것;
    (b) 내인성, 외인성 또는 공통의 응고 경로의 응고 프로테아제에 의해 절단가능한 것; 및
    (c) 인자 XIIa에 의해 절단가능한 것
    으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상인, 약제학적 조성물.
  9. 제6항에 있어서, 상기 FXII 억제제가 사람 알부민-링커-FXII 억제제 융합 단백질인, 약제학적 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 다발성 경화증이 재발성 경감형(relapsing remitting) 다발성 경화증 또는 일차성 진행형(primary progressing) 다발성 경화증인, 약제학적 조성물.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
KR1020147024214A 2012-01-31 2013-01-31 신경학적 염증성 장애의 치료를 위한 인자 ｘｉｉ 억제제 KR102067394B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261592652P 2012-01-31 2012-01-31
EP12153341.8 2012-01-31
EP12153341.8A EP2623110A1 (en) 2012-01-31 2012-01-31 Factor XII inhibitors for the treatment of neurological inflammatory disorders
US61/592,652 2012-01-31
PCT/EP2013/051832 WO2013113774A1 (en) 2012-01-31 2013-01-31 Factor xii inhibitors for the treatment of neurological inflammatory disorders

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140117660A KR20140117660A (ko) 2014-10-07
KR102067394B1 true KR102067394B1 (ko) 2020-01-17

Family

ID=45554534

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020147024214A KR102067394B1 (ko) 2012-01-31 2013-01-31 신경학적 염증성 장애의 치료를 위한 인자 ｘｉｉ 억제제

Country Status (12)

Country Link
US (1) US9957329B2 (ko)
EP (2) EP2623110A1 (ko)
JP (1) JP6243854B2 (ko)
KR (1) KR102067394B1 (ko)
CN (1) CN104080470B (ko)
AU (1) AU2013200498B2 (ko)
CA (1) CA2862903C (ko)
DK (1) DK2809336T3 (ko)
ES (1) ES2687018T3 (ko)
HK (1) HK1201728A1 (ko)
PL (1) PL2809336T3 (ko)
WO (1) WO2013113774A1 (ko)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2829037C (en) 2011-03-09 2022-05-17 Csl Behring Gmbh Factor xii inhibitors for the administration with medical procedures comprising contact with artificial surfaces
CN105188750A (zh) 2013-03-08 2015-12-23 德国杰特贝林生物制品有限公司 治疗和预防远端缺血-再灌注损伤
WO2015073514A1 (en) * 2013-11-13 2015-05-21 Viropharma Holdings Limited Compositions and methods useful for the treatment of neuromyelitis optica spectrum disorders
WO2015193457A1 (en) 2014-06-18 2015-12-23 Csl Behring Gmbh Therapy using a factor xii inhibitor in a neurotraumatic disorder
US20160130324A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. C1 Inhibitor Fusion Proteins and Uses Thereof
KR101744959B1 (ko) * 2014-12-05 2017-06-12 (주)케어젠 피부상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
KR102670705B1 (ko) * 2015-01-02 2024-05-31 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 혈장 칼리크레인 및 인자 xii에 대한 이중특이성 항체
WO2016114386A1 (ja) * 2015-01-15 2016-07-21 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 進行型免疫性脱髄疾患治療剤
MX2018008939A (es) 2016-01-22 2019-08-21 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos anti-factor de la coagulacion xi.
AU2017247004B2 (en) * 2016-04-06 2022-07-07 Csl Limited Method of treating atherosclerosis
EP3493832A1 (en) 2016-08-05 2019-06-12 CSL Behring GmbH Pharmaceutical formulations of c1 esterase inhibitor
US11413311B2 (en) 2017-05-15 2022-08-16 Mapi Pharma Ltd. Treatment of multiple sclerosis with long acting glatiramer and adipose-derived stem cells
CA3062123A1 (en) 2017-05-15 2018-11-22 Stem Cell Medicine Ltd. Treatment of multiple sclerosis with adipose-derived stem cells
KR20200100116A (ko) * 2017-12-15 2020-08-25 시에스엘 리미티드 신장 섬유증 및/또는 만성 콩팥 질환의 치료에서 FXIIa-억제제의 용도
CA3104470A1 (en) 2018-06-19 2019-12-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-factor xii/xiia antibodies and uses thereof
US20240352150A2 (en) * 2020-06-16 2024-10-24 Ningbo Comgen Biotech Co., Ltd. Anti-factor xii (fxii) nanobody or antigen-binding fragment thereof, and use thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006066878A1 (en) 2004-12-23 2006-06-29 Csl Behring Gmbh Prevention of thrombus formation and/or stabilization
WO2008098720A1 (en) 2007-02-12 2008-08-21 Csl Behring Gmbh Therapeutic application of kazal-type serine protease inhibitors
US20100143344A1 (en) 2006-10-10 2010-06-10 Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam Complement inhibition for improved nerve regeneration

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US4963657A (en) 1988-06-09 1990-10-16 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Monoclonal antibodies to the light chain region of human factor XII and methods of preparing and using the same
ATE135370T1 (de) 1988-12-22 1996-03-15 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
GB8901859D0 (en) 1989-01-27 1989-03-15 Shield Diagnostics Limited Diagnostic test
US6552170B1 (en) 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
CA2082643A1 (en) 1990-05-10 1991-11-11 Jan H. Nuijens Inhibitors of factor xii activation and applications thereof
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
SG47099A1 (en) 1991-03-15 1998-03-20 Amgen Boulder Inc Pegylation of polypeptides
DE69534265T2 (de) 1994-12-12 2006-05-04 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc., Boston Chimäre zytokine und ihre verwendung
ZA963619B (en) 1995-05-08 1996-11-22 Scios Inc Protease inhibitor peptides
GB9800817D0 (en) 1998-01-16 1998-03-11 Bio Discovery Ltd Serine protease inhibitors
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
CA2405557C (en) 2000-04-12 2013-09-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
DE60143544D1 (de) 2000-12-12 2011-01-05 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
AU2003210806A1 (en) 2002-03-05 2003-09-22 Eli Lilly And Company Heterologous g-csf fusion proteins
JP2006510896A (ja) 2002-12-20 2006-03-30 アクシス−シールド ダイアグノスティックス リミテッド Ｘｉｉａ因子の変異体
US20050176108A1 (en) * 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
ES2558102T3 (es) 2003-05-06 2016-02-02 Biogen Hemophilia Inc. Proteínas quiméricas del factor de coagulación para el tratamiento de un trastorno hemostático
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
EP2368909A1 (en) 2003-06-12 2011-09-28 Eli Lilly and Company GLP-1 analog fusion proteins
WO2005024044A2 (en) 2003-09-05 2005-03-17 Gtc Biotherapeutics, Inc. Method for the production of fusion proteins in transgenic mammal milk
CN1902222A (zh) 2003-12-31 2007-01-24 默克专利有限公司 具有改善药物代谢动力学的Fc－促红细胞生成素融合蛋白质
ES2387312T3 (es) 2004-09-22 2012-09-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anticuerpos IgG4 humanos estabilizados
US20070135620A1 (en) 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
GB0607515D0 (en) 2006-04-13 2006-05-24 Axis Shield Diagnostics Ltd Anti-factor xlla therapy
SG10201407908VA (en) 2008-12-19 2015-01-29 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
JP2012515556A (ja) 2009-01-23 2012-07-12 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 低下したエフェクタ機能を有する安定化Ｆｃポリペプチドおよび使用方法
EP2734552A1 (en) 2011-07-22 2014-05-28 CSL Behring GmbH Inhibitory anti -factor xii/xiia monoclonal antibodies and their uses

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006066878A1 (en) 2004-12-23 2006-06-29 Csl Behring Gmbh Prevention of thrombus formation and/or stabilization
US20100143344A1 (en) 2006-10-10 2010-06-10 Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam Complement inhibition for improved nerve regeneration
WO2008098720A1 (en) 2007-02-12 2008-08-21 Csl Behring Gmbh Therapeutic application of kazal-type serine protease inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
US9957329B2 (en) 2018-05-01
WO2013113774A1 (en) 2013-08-08
JP6243854B2 (ja) 2017-12-06
JP2015511221A (ja) 2015-04-16
ES2687018T3 (es) 2018-10-23
AU2013200498A1 (en) 2013-08-15
HK1201728A1 (en) 2015-09-11
KR20140117660A (ko) 2014-10-07
EP2809336A1 (en) 2014-12-10
CA2862903A1 (en) 2013-08-08
AU2013200498B2 (en) 2015-05-07
CA2862903C (en) 2021-07-13
EP2623110A1 (en) 2013-08-07
CN104080470A (zh) 2014-10-01
DK2809336T3 (en) 2018-09-17
US20140378653A1 (en) 2014-12-25
CN104080470B (zh) 2017-04-19
PL2809336T3 (pl) 2018-11-30
EP2809336B1 (en) 2018-06-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102067394B1 (ko) 신경학적 염증성 장애의 치료를 위한 인자 ｘｉｉ 억제제
RU2728861C1 (ru) Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
US10973891B2 (en) Treatment and prevention of remote ischemia-reperfusion injury
CA2916399C (en) Combination therapy using a factor xii inhibitor and a c1-inhibitor
JP6574431B2 (ja) Ｕｔｉ融合タンパク質
EP3157548B1 (en) Therapy using a factor xii inhibitor in a neurotraumatic disorder
JP2021506772A (ja) 視神経脊髄炎の処置のための組換えＩｇＧ Ｆｃ多量体
EP2999715A2 (en) Novel antibody useful in neurological or neurodegenerative disorders

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant