KR102377396B1 - Th17 세포의 유도를 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

Abstract

복합 대변 샘플로부터 인간 유래 박테리아의 균주를 수득하였으며, 이는 장에서 Th17 세포의 축적을 유도하고, 면역 기능을 촉진시키는 것으로 밝혀졌다. 상기 박테리아를 함유하는 제약 조성물은 항감염제로서, 및 점막 백신에서 애주번트로서 사용될 수 있다.

Description

TH17 세포의 유도를 위한 조성물 및 방법 {COMPOSITIONS AND METHODS FOR INDUCTION OF TH17 CELLS}

본원에 기술된 주제는 T 헬퍼 17 (Th17) 세포의 증식을 유도하는 인간 유래 박테리아로 이루어진 조성물로, 활성 성분으로서 인간 유래 박테리아, 바람직하게, (a) 대변 샘플의 암피실린-저항성 박테리아 분획으로부터 단리되고, 배양된 하나 이상의 박테리아, 또는 (b) (a)의 하나 이상의 박테리아의 배양물 상청액을 포함하는 것인 조성물에 관한 것이다. 본 주제는 또한 Th17 세포의 증식을 유도하는 방법에 관한 것이다. 상기 (a) - (b) 중 임의의 것을 포함하는 조성물은 박테리아 조성물로 지칭된다. 또한, 본 주제는 Th17 세포 유도에 반응성을 띠는 1개 이상의 질환 또는 병태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 박테리아 조성물을 단독으로 또는 항원과 함께 조합하여 경구적으로 투여함으로써 Th17 세포 유도에 반응성을 띠는 1개 이상의 질환 또는 병태, 예컨대, 감염성 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

수백 여종의 공생 미생물이 포유동물의 위장관에 살며, 여기서 숙주 면역계와 상호작용한다. 무균 (GF) 동물을 사용한 연구 결과, 공생 미생물이 점막 면역계 발생, 예컨대, 페이에르판 (PP: Peyer's patch) 및 단리된 림프 여포 (ILF)의 조직 발생, 상피로부터 항미생물 펩티드의 분비, 및 면역글로불린 A-생산 혈장 세포, 상피내 림프구, IL-17-생산 CD4-양성 T 세포 (Th 17), 및 IL-22-생산 NK-유사 세포를 비롯한 독특한 림프구의 점막 조직내 축적에 영향을 주는 것으로 밝혀졌다 (비특허 문헌 (NPL: Non-Patent Literature) 1 내지 7). 결과적으로, 장내 박테리아의 존재가 점막의 보호 기능을 증진시키고, 이로써, 숙주가 체내 침입하는 병원성 미생물에 대한 강력한 면역 반응을 증가시킬 수 있도록 한다. 다른 한편으로는, 점막 면역계는 식이 항원 및 무해 미생물에는 무반응 상태로 유지시킨다 (NPL 문헌 3). 공생 박테리아와 면역계 사이의 상호 작용 조절의 이상 (장내 세균 불균형)이 환경 항원에의, 및 공생 및 병원성 미생물에 지나치게 강력한 또는 불충분하게 강력한 면역 반응을 유도할 수 있으며, 이로써, 질환을 유발할 수 있다 (NPL 8 내지 10). 신체가 침입성 병원성 미생물에 대해 효과적인 면역 반응을 증가시킬 수 있는 우수한 접근법이 요구되고 있다.

선행 기술 문헌

비특허 문헌

본 조성물 및 방법은 당업계의 상기 기술된 문제점들을 고려하여 제조되었다. 본원에 기술된 바와 같이, 비록 인간 미생물상에 존재하는 1,000개 초과의 종들 중 대부분의 박테리아 종이 Th17 세포를 자극할 수 있는 능력을 가지는 것은 아니지만, 본 발명자들은 인간으로부터 유래된 대변 샘플을 각종 항생제 처리로 변형시키고, 시험관내에서 순수한 균주를 단리시키는 방법을 적용시키고, 제약 및 식품 성분으로서 사용하기에 적합한, 균주를 함유하는 박테리아 조성물을 제조하는 배양 방법을 개발함으로써 인간으로부터, Th17 세포를 강력하게 유도할 수 있는 능력을 가진 수개의 박테리아 종을 얻었다. 또한, 본 발명자들은 시험관내 배양된 종을 동물에 접종시키면, 이 또한 Th17 세포의 강력한 축적을 일으킨다는 것을 밝혀내었다.

본원에서는 Th17 세포의 증식, 축적, 또는 증식 및 축적을 유도하는, 바람직하게는 강력하게 유도하는, 인간으로부터 단리된 장내 공생 박테리아를 수득하고, 배양하는 방법을 기술한다. 활성 성분으로서 (a) 본원 (하기 표 1)에 제공된 1개 이상의, 한 특정 종의 박테리아, 또는 본원에 제공된 서열과 97% 이상의 상동성 (예컨대, 97%의 상동성, 98%의 상동성, 99%의 상동성 또는 100%의 상동성)을 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 함유하는 박테리아 중 하나 이상의 것; 또는 (b) 하나 이상의 (1개 이상의, 한) 상기 박테리아의 배양물 상청액; 또는 (c) (a) 및 (b)의 조합을 포함하고, T 헬퍼 17 세포 (Th17 세포)의 증식 및/또는 축적을 유도하는, 박테리아 조성물로도 지칭되는 조성물을 기술한다.

더욱 구체적으로:

한 실시양태는 활성 성분으로서 (a) 클로스트리디움 심비오섬(Clostridium symbiosum), 클로스트리디움 하테와이이(Clostridium hathewayi), 클로스트리디움 시트로니아에(Clostridium citroniae), 클로스트리디움 볼테아에(Clostridium bolteae), 루미노코커스 종 M-1(Ruminococcus sp . M-1), 루미노코커스 그나부스(Ruminococcus gnavus), 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143(Blautia sp . canine oral taxon), 안에어로스티페스 카카에(Anaerostipes caccae), 클로스트리디움 락타티페르멘탄스(Clostridium lactatifermentans), 코프로바실러스 카테니포르미스(Coprobacillus cateniformis), 클로스트리디움 라모섬(Clostridium ramosum), cf. 클로스트리디움 종 MLG055(cf. Clostridium sp . MLG055), 클로스트리디움 이노쿰(Clostridium innocuum), 유박테리움 데스몰란스(Eubacterium desmolans), 클로스트리디움 오르비스신덴스(Clostridium orbiscindens), 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스(Anaerotruncus colihominis), 박테로이데스 도레이(Bacteroides dorei), 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검(Bifidobacterium pseudolongum subsp. Pseudolongum), 및 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 유기체; (b) (a)의 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 박테리아의 배양물 상청액; 또는 (c) (a)의 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 박테리아 및 (a)의 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 박테리아의 배양물 상청액의 조합을 포함하는, Th17 세포의 증식, 축적 또는 증식 및 축적, 둘 모두를 유도하는 (박테리아 조성물로서 지칭되는) 조성물이다.

한 실시양태는 활성 성분으로서 (a) 대변 샘플의 암피실린-저항성 박테리아 분획; (b) (a)의 하나 이상의 박테리아의 배양물 상청액; 또는 (a) 및 (b)의 조합을 포함하는, Th17 세포의 증식 및/또는 축적을 유도하는 조성물이다.

일부 실시양태에서, 활성 성분은 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베중 하나 이상의 것; 및 본원에 기술된/열거된 하나 이상의 박테리아의 배양물 상청액이다. 일부 실시양태에서, 활성 성분은 본원에 기술된/열거된 박테리아 중 하나 이상의 것의 배양물 상청액이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 박테리아 또는 상기 박테리아로부터 유래된, 하나 이상의 배양물 상청액은 3개 이상이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 박테리아 또는 상기 박테리아로부터 유래된, 하나 이상의 배양물 상청액은 5개 이상이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 박테리아 또는 상기 박테리아로부터 유래된, 하나 이상의 배양물 상청액은 10개 이상이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 박테리아 또는 상기 박테리아로부터 유래된, 하나 이상의 배양물 상청액은 15개 이상이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 박테리아 또는 상기 박테리아로부터 유래된, 하나 이상의 배양물 상청액은 20개이다.

본원에 기술된 바와 같은 박테리아 조성물은 하기: 본원에 기술된 바와 같은 한 박테리아; 한 박테리아 (또는 하나 이상의 것)가 존재하는 (성장하거나, 유지된) 배양물로부터 수득된 1개 이상의 배양물 상청액 또는 상기 상청액의 분획 중 적어도 하나를 포함한다. 상기 중 임의의 것의 조합을 포함할 수 있다. 조성물/박테리아 조성물이라는 용어는 상기의 모든 조합을 나타낸다.

Th17 세포의 증식 및/또는 축적을 유도하는, 조성물 중의 박테리아는 예를 들어, 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베, 또는 마지막 실시예 다음 페이지에 및 서열 목록에 열거되어 있는, 본원에 제공된 서열, 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 서열번호 1-20으로 표시된 뉴클레오티드 서열과 97% 이상의 상동성 (예컨대, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 상동성)을 포함하는 DNA를 함유하는 임의의 박테리아 (예컨대, 인간 유래 박테리아)일 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 박테리아는 서열번호: 1-20으로 표시된 하나 이상의 DNA 서열과 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 함유한다. 대안적으로, 박테리아는 하기: 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베 중 하나 이상의 것의 DNA와 97% 이상의 (97%, 98%, 99%, 100%의) 상동성을 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 함유한다.

한 실시양태에서, 조성물은 전사 인자 RORgt-양성 T 세포 또는 IL-17-생산 Th17 세포인 Th17 세포를 유도한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 점막 표면에서 보호 면역 반응을 촉진시킨다.

한 실시양태는 Th17 세포의 증식, 축적 또는 증식 및/또는 축적, 둘 모두를 유도하고, 면역 기능을 촉진시키는 제약 조성물이다. 제약 조성물은 본원에 기술된 박테리아 조성물 및 제약상 허용되는 성분, 예컨대, 담체, 용매 또는 희석제를 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 상기 제약 조성물은 (a) (1) 표 1에 열거되거나, 또는 본원에 기술된 바와 같은 박테리아의 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 종, (2) 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 상기 박테리아의 배양물 상청액, 또는 (3) 표 1에 열거되거나, 또는 본원에 기술된 바와 같은 박테리아의 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 종 및 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 상기 박테리아의 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 배양물 상청액의 조합, 및 (b) 제약상 허용되는 성분, 예컨대, 담체, 용매 또는 희석제를 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 상기 (a)는 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베, 및 박테리아 중 하나 이상의 것의 배양물 상청액으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 유기체 또는 물질이다. 일부 실시양태에서, 상기 (a) (2)는 박테리아의 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 것의 배양물 상청액이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 유기체 또는 물질은 2개 이상 또는 3개 이상이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 유기체 또는 물질은 4개 이상 또는 5개 이상이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 유기체 또는 물질은 10개 이상이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 유기체 또는 물질은 15개 이상이다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 유기체 또는 물질은 20개이다. 추가 실시양태에서, 상기 (a) (1)은 마지막 실시예 다음 페이지에 및 서열 목록에 열거되어 있는, 본원에 제공된 서열, 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 서열번호: 1-20으로 표시된 뉴클레오티드 서열과 97% 이상의 상동성 (예컨대, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 상동성)을 포함하는 DNA를 함유하는 임의의 박테리아 (예컨대, 인간 유래 박테리아)이다. 제약 조성물의 구체적인 실시양태에서, 박테리아는 서열번호: 1-20으로 표시된 하나 이상의 DNA 서열과 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 함유한다.

제약 조성물은 T 헬퍼 세포 (Th17 세포)의 증식 및/또는 축적을 유도하고, 면역 기능을 촉진시킨다.

개체 (예컨대, 그를 필요로 하는 개체, 예컨대, Th17 세포의 증식 및/또는 축적의 유도를 필요로 하는 개체)에서 Th17 세포의 증식, 축적, 또는 증식 및 축적, 둘 모두를 유도하는 방법 또한 제공한다. 본 방법은 개체에게 본원에 기술된 박테리아 조성물, 또는 본원에 기술된 박테리아 조성물을 포함하는 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 본 방법에서, 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베; 박테리아 중 하나 이상의 것의 배양물 상청액 또는 배양물 상청액의 하나 이상의 성분; 또는 상기 중 임의 개수의 것의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 유기체 또는 물질은 건강한 개체, 또는 병태 또는 질환의 예방, 감소 또는 치료를 필요로 하는 개체일 수 있는 개체 (이는 또한 그를 필요로 하는 개체로도 지칭된다)에게 투여된다. 예를 들어, 기술된 박테리아 조성물은 질환 또는 병태, 예컨대, 감염성 질환의 치료, 그의 중증도 감소, 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다.

임의적으로, 박테리아 조성물의 투여는 하나 이상의 항생제 과정과 함께 조합될 수 있거나, 또는 그 이전에 수행될 수 있다.

임의적으로, 박테리아 조성물의 투여는 다른 인간 공생 박테리아 종의 성장보다는 박테리아 조성물 중의 종의 성장을 우선적으로 선호하는 1종 이상의 프라바이오틱 물질의 투여와 함께 조합될 수 있다. 한 실시양태에서, 프리바이오틱 물질(들)은 예를 들어, 비소화성 올리고당이다.

추가 실시양태에서, 박테리아 조성물은 점막 백신 제제의 효능을 개선시키는 애주번트로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 박테리아 조성물은 감염성 질환 또는 암의 예방용 또는 치료용 백신에 대한 애주번트로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 박테리아 조성물 또는 제약 조성물을 백신 애주번트로서 투여하는 단계를 포함하는, 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 박테리아 조성물 또는 제약 조성물은 현 점막 백신과 함께 애주번트로서 투여될 수 있다.

추가 실시양태에서, 박테리아 조성물은 활성 성분으로서 이종성 단백질 또는 펩티드, 예컨대, 항원을 발현하는 벡터로도 또한 지칭되는, 이종성 유전자를 함유하는 발현 벡터를 포함하는, 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 유기체를 포함한다.

본원에 기술된 조성물의 투여로부터 유발되는 Th17 세포의 증식 또는 축적의 유도 정도를 평가하는 것은 다양한 접근법에 의해, 예컨대, 투여 이전 및 그 이후 Th17 세포의 개수를 평가함으로써, 또는 Th17 활성을 평가함으로써, 예컨대, 박테리아 조성물을 개체에 투여함으로써 집락형성이 이루어지는 데, 투여 이전에 측정된 RORgt, IL-17A, IL-17F, IL-22, IL-23, IL-23R, CD161, 및 CCR6 중 적어도 하나의 발현과 비교하여 투여 이후의 RORgt, IL-17A, IL-17F, IL-22, IL-23, IL-23R, CD161, 및 CCR6 중 적어도 하나의 발현을 측정함으로써 수행될 수 있다. 평가 결과는 개체에서 Th17 세포의 증식 또는 축적의 유도에 관한 지수로서 사용된다.

한 실시양태에서, 본원에 기술된 조성물의 투여는 전사 인자 RORgt-양성 Th17 세포 또는 IL-17-생산 Th17 세포인 Th17 세포의 유도를 일으킨다.

본원에 기술된 조성물은 다양한 경로에 의해 투여될 수 있고, 한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 개체에게, 예컨대, 그를 필요로 하는 환자에게 경구적으로 투여된다. 조성물은 다수의 경구용 형태로, 예컨대, 건식 분제로, 동결건조물로, 또는 액체 제제 중에 용해된 형태로, 장용 캡슐제로, 사쉐로 또는 식품 매트릭스, 예컨대, 요거트 또는 음료로 투여될 수 있다.

(a) 본원에 기술된 박테리아 조성물 처리 이전에 환자로부터 한 (1개 이상의; 하나 이상의) 샘플, 예컨대, 대변 샘플 또는 결장 생검 샘플을 수득하는 단계; (b) 본원에 기술된 박테리아 조성물 처리 이후 환자로부터 한 (1개 이상의; 하나 이상의) 상응하는 샘플을 수득하는 단계; 및 (c) (a)에서 수득된 샘플 중의 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 박테리아 종의 비율(%) 또는 절대 계수를 측정하고, 그를 (b)에서 수득된 샘플 중의 동일의 1개 이상의 박테리아 종의 비율(%) 또는 절대 계수와 비교하는 단계로서, 여기서, (박테리아 조성물 처리 이후의) (b)에서 수득된 샘플 중의 값이 (처리 이전의) (a)에서 수득된 샘플 중의 값보다 더 높다면, 이는 대상체가 처리에 대하여 호의적으로 반응하였다는 것을 시사하는 것인 (예컨대, 이는 대상체에서 증진된 면역 반응에 대한 양성 인디케이터인 것인) 단계를 포함하는, 본 발명의 박테리아 조성물 처리에 대한 대상체의 반응을 모니터링하는 방법 또한 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 (d) (c)의 비교에 기초하여 환자에게 박테리아 조성물을 투여하거나, 또는 환자에게로의 박테리아 조성물 투여를 중단하는 단계를 추가로 포함한다.

(a) 대상체를 항생제 암피실린, 또는 스펙트럼이 유사한 항생제, 예를 들어, 아미노페니실린 계열의 구성원, 예컨대, 아목시실린, 페니실린, 또는 벤질페니실린으로 처리하는 단계; (b) 대상체로부터 (1개 이상의) 샘플, 예컨대, 대변 샘플 또는 장 생검 샘플 ("대변 샘플의 암피실린-저항성 박테리아 분획")을 수득하는 단계; (c) (b)로부터의 샘플을 배양하고, 생성된 콜로니로부터 순수한 박테리아 균주를 단리시키는 단계를 포함하는, Th17-유도 박테리아 조성물을 수득하는 방법 또한 제공한다. 바람직한 실시양태에서, (a)의 대상체는 인간 기증자로부터 수득된 대변 샘플로 집락형성이 이루어진 외부 세균이 없는 동물이다. 바람직한 실시양태에서, (c)의 순수한 박테리아 균주의 단리는 엄격한 혐기성 조건하에서 플레이팅함으로써 배양된 맹장 내용물 샘플의 연속 희석에 의해 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 본 방법은 (a) 대상체로부터 한 (1개 이상의; 하나 이상의) 샘플, 예컨대, 대변 샘플 또는 장 생검을 수득하는 단계; (b) (a)의 샘플을 암피실린으로 처리하는 단계; (c) (b)의 암피실린-처리 샘플을 배양하고, 순수한 박테리아 균주를 단리시키는 단계를 포함한다.

개체에게 항생제, 예컨대, 반코마이신 및/또는 메트로니다졸을 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 Th17-유도 박테리아 조성물을 억제시켜 자가면역 및 염증성 질환을 치료하는 방법 또한 제공한다.

발명의 효과

본원에 기술된 조성물은 T 헬퍼 17 세포 (Th17 세포)의 증식 또는 축적을 유도하는 데 탁월하다. 개체의 면역은 대상 조성물의 투여를 통해, 예컨대, 식품 또는 음료로 또는 식이 보충제로부터 박테리아 조성물을 섭취함으로써 또는 박테리아 조성물을 포함하는 제약 조성물의 투여를 통해 촉진될 수 있다. 대상 조성물은 예를 들어, 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 데 뿐만 아니라, 미생물 등에 의해 유발되는 질환을 예방하는 점막 백신과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 추가로, 식품 또는 음료, 예컨대, 건강 식품이 대상 조성물을 포함하는 경우, 건강한 개체는 조성물을 쉽게 및 일상적으로 섭취할 수 있다. 그 결과, Th17 세포의 증식 및/또는 축적을 유도할 수 있고, 이로써, 면역 기능을 개선시킬 수 있다.

본원에 기술된 조성물은 감염성 질환에 대한 치료 대안으로서 강력한 효능이 있고, 장기간 지속되며, 환자 친화적이고, 양호한 치료 대안을 제공한다. 예를 들어, 감염성 질환은 대개 항생제로 관리되는 데, 이는 항생제-저항성 및/또는 기회성 감염을 일으킬 수 있고; 전신용 백신은, 혈액 매개성 (blood-borne) 감염을 확산시킬 수 있는 위험을 초래할 수 있는 그의 주사가능한 성질에 기인하여 광범위한 정제를 필요로 하며, 대량 백신 접종에는 전혀 실용적이지 못하고; 현 점막 백신은 충분히 강력한 면역 반응을 달성하지 못하며, 대개는 생 약독화된 제제만큼 안정적이지 못하다.

점막 백신 항원과 함께 조합하여 사용되는 본원에 기술된 조성물은 또한 항원에 대한 면역 반응을 증가시키거나, 또는 항원에 대한 면역 반응의 지속 기간을 연장시키거나, 또는 보호를 달성하는 데 필요한 항원의 투여 용량 및 투여 빈도를 감소시킬 수 있거나 (예를 들어, 항원 함유 조성물의 추가 주사 횟수를 감소시킬 수 있거나), 혈청 전환을 달성하는 환자의 비율을 증가시키거나, 다른 백신 접종 전략법이 효과가 없는 환자 (예를 들어, 소아 또는 노인 집단)에서 최적의 면역 반응을 유도하는 효과를 가진다.

도 1a는 무균 (GF) 마우스의 결장 점막고유층 (좌측 상단 패널), 또는 궤양성 대장염 환자로부터의 대변으로 집락이 형성되고, 비처리된 GF 마우스 (GF+UC+NT, 우측 상단 패널), 또는 궤양성 대장염 환자로부터의 대변으로 집락이 형성되고, 음용수 중의 암피실린으로 처리된 GF 마우스 (GF+UC+ABPC, 좌측 하단 패널), 또는 궤양성 대장염 환자로부터의 대변으로 집락이 형성되고, 음용수 중의 메트로니다졸으로 처리된 GF 마우스 (GF+UC+MNZ, 우측 하단 패널)로부터 단리된 CD4+ 림프구에서의 IL-17의 발현 결과 분석을 보여주는 FACS 점도표 다이어그램이다.
도 1b는 무균 마우스 (GF), 궤양성 대장염 환자로부터의 대변으로 집락이 형성되고, 비처리된 GF 마우스 (NT), 및 궤양성 대장염 환자로부터의 대변으로 집락이 형성되고, 음용수 중의 암피실린 (ABPC) 또는 반코마이신 (VCM) 또는 폴리믹신-B (PL-B) 또는 메트로니다졸 (MNZ)로 처리된 GF 마우스의 CD4+ 림프구 중의 IL-17+ 세포의 비의 분석 결과를 보여주는 그래프이다.
도 2는 궤양성 대장염 환자로부터의 인간 대변으로 집락이 형성되고, 오직 물만 제공받았거나 (비처리: NT), 또는 음용수 중의 암피실린 (+ABPC; 1 g/L), 또는 반코마이신 (+VCM; 500 mg/L), 또는 폴리믹신 B (+PL-B; 200 mg/L), 또는 메트로니다졸 (+MNZ; 1 g/L)을 제공받은 IQI 무균 마우스로부터의 맹장 샘플 중 동일의 가장 가까운 계통을 가지는 OTU의 상대 존재비를 보여주는 것이다 (각 군당 n=5). Th17 세포 개수와 음의 상관관계를 가진 OTU는 청색 또는 회색으로 표시되어 있고, Th17 세포 개수와 양의 상관관계를 가진 OTU는 적색으로 마킹되어 있다.
도 3a는 무균 마우스, 및 표 1에 열거된 20개의 균주로 집락이 형성된 무균 마우스의 결장 점막고유층에서 CD4+T 세포 집단 내의 IL-17+ 세포 및 IFN-g+의 비율(%)을 보여주는 것이다.
도 3b는 표 1에 열거된 20개의 균주로 집락이 형성된 무균 마우스와 비교하였을 때, 무균 마우스의 결장 점막고유층 (CLP) 또는 소장 점막고유층 (SILP)에서 CD4+ 림프구 중의 IL-17+ 세포의 비의 분석 결과를 보여주는 그래프이다.
표 1은 인간 환자 대변으로 집락이 형성되고, 암피실린으로 처리된 마우스의 맹장 내용물로부터 단리된 20개의 박테리아 균주 각각에 대한 RDP (리보솜 데이터베이스 프로젝트(Ribosomal Database Project)) 데이터베이스로부터의 공지된 종 중의 가장 가까운 계통, 및 상기 가장 가까운 계통과의 최대 유사성을 보여주는 것이다.

최근 연구에서는 개별 공생 박테리아가 점막 면역계에서 그의 특정 면역 세포의 분화를 제어하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 마우스에서의 장내 공생 박테리아인 분절형 사상성 박테리아는 점막 Th17 세포 반응을 유도하고, 병원체에 의한 숙주의 위장관 감염에 대한 저항성을 증진시킨다 (NPL 11 내지 13). 비록 예컨대, 분절형 사상성 박테리아와 같이, Th17 세포를 강력하게 자극시킬 수 있는 뮤린 박테리아 공생물의 특정 종이 확인되기는 하였지만 (NPL 11 내지 13), 인간 공생 박테리아 종이 인간 면역계에 대하여 등가인 영향을 발휘하는지 여부는 여전히 알려져 있지 않은 상태이다. 추가로, 인간의 장관에는 1,000개 초과의 박테리아 종이 살고 있으며, 그 중 다수는 아직도 배양된 바 없다 (NPL 14). 만약 있다면 어느 것이 Th17 세포에 영향을 미칠 수 있는지, 그를 선험적으로 추측한다는 것은 실현 불가능하다.

인간용으로 유익한 면역 기능이 있는 약물, 백신, 식이 보충제, 또는 식품을 개발하기 위해서는 천연적으로 인간에서 집락을 형성하고, 면역 조절 특성을 가진 공생 미생물을 확인하는 것이 바람직할 수 있다. 추가로, 인간 마이크로바이옴 중 다수의 공생물이 아직도 배양된 바 없기 때문에, 산업상 발효 프로세스에 의해 제조될 수 있고, 이어서, 제약 또는 식품 제제에 혼입될 수 있도록 하기 위해 상기와 같은 공생물을 배양하는 방법이 개발되어야 할 필요가 있다.

T 헬퍼 17 (Th17) 세포는 점막 표면에서 항미생물 면역을 제공하는 CD4⁺ T 헬퍼 세포의 서브세트로, 이는 미생물, 예컨대, 박테리아 및 진균에 대한 방어에 중요할 수 있다. Th17 세포는 분화를 위해 TGF-베타 및 IL-6에 의존하고, 계통 특이 전사 인자 RORgt에 의해 정의된다 (NPL 11, 15, 및 16). RORgt 발현 Th17 세포는 위장관에 다수 존재한다 (NPL 6, 17). 기억 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 또한 점막 백신 접종의 결과로서 생성될 수 있다. 특히, 보호 기능이 있는 기억 Th17 세포는 점막 백신 접종에 의해 유도될 수 있다 (NPL 18).

다수의 감염성 질환은 점막으로 한정되거나, 감염원은 감염 조기 단계 동안 점막을 통과하여야 한다. 그러므로, 백신 접종의 결과로서 전신 점막 면역 반응 뿐만 아니라, 국소화된 점막 면역 반응도 얻는 것이 바람직할 수 있고, 이는 감염에 대한 보호를 증진시킬 수 있다. 따라서, 점막 경로에 의해 투여된 백신은 특히 점막 병원체에 대해 보호하는 데 효과적일 수 있다. 그러나, 현 점막 백신은 점막에서 강력한 면역 반응을 촉진시킬 수 있는 그의 능력에 있어 제한되어 있는데, 그 이유는 항원에의 노출이 충분히 지속되지 않거나, 제공된 항원의 양이 강력한 반응을 일으키는 데에는 불충분하거나, 또는 항원이 충분한 면역원성 또는 안정성을 띠지 않기 때문이다. 부분적으로는 상기와 같은 이유 때문에, 현재 사용되는 대부분의 백신이 여전히 비경구 경로를 통해 투여되고 있다. 면역원성 항원에 대한 숙주의 면역 반응이 매우 약하기 때문에, 애주번트를 공동으로 투여함으로써 상기 면역 반응을 증진시켜야 할 필요가 있을 수 있다.

따라서, Th17 세포를 강력하게 유도할 수 있는 능력을 가진 인간 유래 공생 박테리아 조성물이 요구되고 있으며, 상기 조성물을 제조하는 방법도 그러하다. 상기 조성물은 숙주가 체내 침입하는 병원성 미생물에 대한 강력한 면역 반응을 증가시킬 수 있도록 하는 데 사용될 수 있으며, 따라서, 항감염제로서 또는 점막 백신의 애주번트로서 적용될 수 있다.

"T 헬퍼 17 세포 (Th17 세포)"라는 용어는 면역 반응을 촉진시키고, 면역 방어에서 중요한 역할을 하는 T 세포를 의미한다. Th17 세포는 전형적으로 전사 인자 RORgt-양성 CD4-양성 T 세포이다. 본 발명의 Th17 세포로는 또한 IL-17-생산 CD4-양성 T 세포인 전사 인자 RORgt-음성 T 세포를 포함한다.

"Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도한다"라는 용어는 미성숙 T 세포의 Th17 세포로의 분화를 유도하는 효과로서, 상기 분화는 Th17 세포의 증식 및/또는 축적을 일으키는 것을 의미한다. 추가로, "Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도한다"라는 의미는 생체내 효과, 시험관내 효과, 및 생체외 효과를 포함한다. 하기 효과 모두 포함된다: 상기 언급된 박테리아, 또는 박테리아의 배양물 상청액 또는 상청액 성분(들)의 투여 또는 섭취를 통한 생체내 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 효과; 상기 언급된 박테리아, 또는 박테리아의 배양물 상청액 또는 상청액 성분(들)이 배양되는 Th17 세포에 작용하도록 함으로써 배양되는 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 효과; 및 상기 언급된 박테리아, 또는 박테리아의 배양물 상청액 또는 상청액 성분(들), 또는 박테리아로부터 유래된 생리학적으로 활성인 물질이 Th17 세포에 작용하도록 함으로써 살아있는 유기체로부터 수집되고, 이어서, 살아있는 유기체, 예컨대, Th17의 수득 기점이 되는 유기체, 또는 또 다른 유기체 내로 도입시키고자 하는 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 효과. Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 효과는 예를 들어, 하기와 같이 평가될 수 있다. 구체적으로, 상기 언급된 박테리아, 또는 박테리아의 배양물 상청액 또는 상청액 성분(들), 또는 박테리아로부터 유래된 생리학적으로 활성인 물질을 실험 동물, 예컨대, 무균 마우스에 경구적으로 투여한 후, 위장관 내의 CD4-양성 세포를 단리시키고, CD4-양성 세포에 함유되어 있는 Th17 세포의 비를 유세포 분석법에 의해 측정한다.

그의 증식 또는 축적이 본 발명의 조성물에 의해 유도되는 Th17 세포는 바람직하게, 전사 인자 RORgt-양성 Th17 세포 또는 IL-17-생산 Th17 세포이다.

본 발명에서, "인간 유래 박테리아"란, 대변 샘플로부터 또는 인간 개체로부터 수득된 위장 생검으로부터 단리된 박테리아 종, 또는 그의 조상이 대변 샘플로부터 또는 인간으로부터 수득된 위장 생검으로부터 단리된 것인 (예컨대, 대변 샘플 또는 위장 생검으로부터 수득된 박테리아의 자손인) 박테리아 종을 의미한다. 예를 들어, 박테리아 종은 대변 샘플로부터 또는 인간로부터 수득된 위장 생검으로부터 미리 단리되고, 자손 생성을 위해 충분한 시간 동안 배양될 수 있다. 이어서, 자손을 추가로 배양하거나, 냉동시킬 수 있다.

본 발명에서, "면역 반응"이라는 용어는 기능성 면역계를 가진 숙주에서 항원, 예컨대, 단백질 항원에 의해 발생되는 임의의 반응을 의미한다. 면역 반응은 면역글로불린 또는 항체 생산을 포함하는 체액성 면역 반응, 또는 각종 유형의 B 및 T 림프구, 수지상 세포, 대식세포, 항원 제시 세포를 포함하는 세포성 면역 반응, 또는 그 둘 모두일 수 있다. 면역 반응은 또한 다양한 이펙터 분자, 예컨대, 시토카인의 생산 또는 동화를 포함한다.

< Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 효과가 있는 조성물>

본원에서는 Th17 세포의 증식, 축적 또는 Th17 세포의 증식 및 축적, 둘 모두를 유도하는 조성물을 기술한다. 조성물은 활성 성분으로서 하기 중 하나 이상의 것을 포함한다: 클로스트리디움 심비오섬 (서열번호: 16), 클로스트리디움 하테와이이 (서열번호: 12), 클로스트리디움 시트로니아에 (서열번호: 20), 클로스트리디움 볼테아에 (서열번호: 19), 루미노코커스 종 M-1 (서열번호: 14), 루미노코커스 그나부스 (서열번호: 9), 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143 (서열번호: 4), 안에어로스티페스 카카에 (서열번호: 18), 클로스트리디움 락타티페르멘탄스 (서열번호: 3), 코프로바실러스 카테니포르미스 (서열번호: 15), 클로스트리디움 라모섬 (서열번호: 1), cf. 클로스트리디움 종 MLG055 (서열번호: 5), 클로스트리디움 이노쿰 (서열번호: 6), 유박테리움 데스몰란스 (서열번호: 11), 클로스트리디움 오르비스신덴스 (서열번호: 7), 루미노코커스 종 16442 (서열번호: 8), 안에어로트룬커스 콜리호미니스 (서열번호: 10), 박테로이데스 도레이 (서열번호: 17), 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검 (서열번호: 2), 및 비피도박테리움 브레베 (서열번호: 13)로 이루어진 군으로부터 선택되는 한 (1개 이상의, 하나 이상의) 유기체 (박테리아), 박테리아 중 하나 이상의 것의 배양물 상청액, 본원에 기술된 한 (1개 이상의, 하나 이상의) 박테리아의 성장이 그 안에서 이루어진 것인 배양 배지의 성분; 및 본원에 기술된 박테리아 종 중 임의의 것, 예컨대, 상기 열거된 것의 DNA의 뉴클레오티드 서열과 97% 이상의 상동성을 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 함유하는 한 (1개 이상의; 하나 이상의) 박테리아. 본원에 기술된 박테리아는 실시예 1 내지 3에 개략적으로 설명된 방법을 사용하여 인간 대변 샘플로부터 단리된 것이다.

박테리아 조성물 또는 제약 조성물은 본원에 열거되거나, 또는 기술된 박테리아 종 중 임의의 것의 한 균주만 단독으로 (단 하나의 균주)를 포함할 수 있고; 2개 이상의 박테리아 균주가 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, Th17 세포에 영향을 미치도록 표 1에 열거된, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 균주가 임의 조합으로 함께 사용될 수 있다.

1개 초과의 박테리아 균주가 사용될 경우, 사용되는 균주의 개수 및 비는 광범위하게 달라질 수 있다. 사용되는 개수 및 비는 다양한 인자 (예컨대, 원하는 효과, 예컨대, Th17 세포의 증식 또는 축적의 유도 또는 억제; 치료하거나, 예방하거나, 증증도를 감소시키고자 하는 질환 또는 병태; 수혜자의 연령 또는 성별; 건강한 인간에서의 균주의 전형적인 양)에 기초하여 결정될 수 있다. 균주는 단일 조성물에 존재할 수 있으며, 이러한 경우, 균주는 (단일 조성물로) 함께 소비되거나, 섭취될 수 있거나, 1개 초과의 조성물에 존재할 수 있으며 (예컨대, 각각이 별개의 조성물에 존재할 수 있으며), 이러한 경우, 균주는 개별적으로 소비될 수 있거나, 조성물은 조합되고, 생성된 조합물 (조합 조성물)이 소비되거나, 섭취될 수 있다. 효과적인 것으로 입증된 균주의 임의 개수 또는 조합 (예컨대, 1 내지 20개에서 임의의 개수, 예컨대, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개, 및 그 사이의 임의의 개수)이 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 본 개시내용에 기술된 20개 균주 (예컨대, 표 1의 20개의 균주) 중 일부 또는 그들 모두의 조합이 사용된다. 예를 들어, 20개의 균주를 비롯한, 기술된 20개의 균주 중 1개 이상, 2개 이상, 3개, 3개 이상, 4개, 4개 이상, 5개, 5개 이상, 6개, 6개 이상, 또는 임의의 다른 개수의 균주가 사용될 수 있다. 상기 균주는 서로 조합되어, 및 인용된 참고 문헌에 기술되어 있지 않은 균주와 조합되어 사용될 수 있다.

상기 언급된 박테리아 조성물을 배지에서 배양할 때, 박테리아에 함유되어 있는 물질, 분비 생성물, 및 박테리아에 의해 생산된 대사산물은 박테리아로부터 방출된 것이다. 조성물 중 활성 성분인 "박테리아의 배양물 상청액"이라는 의미는 상기 물질, 분비 생성물, 및 대사산물을 포함한다. 배양물 상청액은, 배양물 상청액이 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 효과가 있는 한, 특별히 제한되지 않는다. 배양물 상청액의 예로는 배양물 상청액의 단백질 분획, 배양물 상청액의 다당류 분획, 배양물 상청액의 지질 분획, 및 배양물 상청액의 저분자량 대사산물 분획을 포함한다.

박테리아 조성물 중의 박테리아 균주는 살아있는 형태로 투여될 수 있거나, 또는 약독화된, 불활성화된, 또는 사멸된 형태 (예를 들어, 열-사멸된 형태)로 투여될 수 있다.

박테리아 조성물은 제약 조성물, 식이 보충제, 또는 식품 또는 음료 (이는 또한 사료일 수도 있다) 형태로 투여될 수 있거나, 또는 동물 모델 실험용 시약으로서 사용될 수 있다. 제약 조성물, 식이 보충제, 식품 또는 음료, 및 시약은 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도한다. 본원에 제시된 실시예를 통하여 박테리아 조성물은 동물에게 투여되었을 때, Th17 세포를 유도한 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 조성물은 면역 반응을 촉진시키는 효과가 있는 조성물로서 적합하게 사용될 수 있다.

본 발명의 박테리아 조성물은 예를 들어, 감염성 질환, 예컨대, 박테리아 감염, 바이러스 감염, 기생충 감염, 및 진균 감염을 예방 또는 치료하기 위한 (상기 감염의 유해 효과를 부분적으로 또는 완전히 감소시키기 위한) 제약 조성물로서 사용될 수 있다. 새로 확인된 조성물의 경구 투여, 및 위장관에서의 그의 후속된 집락형성이 점막 표면에서 Th17 세포를 유도한다. 상기 Th17 세포는 점막 표면에서 박테리아, 바이러스, 진균, 및 기생충을 비롯한 다수의 감염원에 대한 보호 면역 반응을 매개한다.

조성물이 그를 치료하는 데 (유해 효과를 감소시키는 데 또는 예방하는 데) 유용한 것인 표적 감염성 질환에 대한 더욱 구체적인 예로는 P. 아에루기노사(P. aeruginosa), E. 콜라이(E. coli), C. 테타니(C. tetani), N. 고노레아에(N. gonorrhoeae), C. 보툴리눔(C. botulinum), 클렙시엘라 종(Klebsiella sp .), 세라티아 종(Serratia sp .), 슈도모나스 종(Pseudomanas sp .), P. 세파시아(P. cepacia), 악티네박터 종(Acinetobacter sp .), S. 에피데르미스(S. epidermis), E. 파에칼리스(E. faecalis), S. 뉴모니아스(S. pneumonias), S. 아우레우스(S. aureus); S. 뮤탄스(S. mutans), 헤모필루스 종(Haemophilus sp .), 나이세리아 종(Neisseria Sp .), N. 메닌기티데스(N. meningitides), 박테로이데스 종(Bacteroides sp .), 시트로박터 종(Citrobacter sp .), 브란하멜라 종(Branhamella sp .), 살모넬리아 종(Salmonelia sp .), 시겔라 종(Shigella sp .), S. 피오게네스(S. pyogenes), 프로테우스 종(Proteus sp.), 클로스트리디움 종(Clostridium　sp.), 에리시펠로트릭스 종(Erysipelothrix sp.), 리스테리아 종(Listeria sp.), 파스튜렐라 물토시다(Pasteurella multocida), 스트렙토바실러스 종(Streptobacillus sp.), 스피릴룸 종(Spirillum sp.), 푸소스피로체타 종(Fusospirocheta sp.), 트레포네마 팔리듐(Treponema pallidum), 보렐리아 종(Borrelia sp.), 악티노미세테스(Actinomycetes), 미코플라즈마 종(Mycoplasma sp.), 클라미디아 종(Chlamydia sp.), 리케챠 종(Rickettsia sp.), 스피로카에타(Spirochaeta), 보렐리아 복도페리(Borellia burgdorferi), 레지오넬라 종(Legionella sp.), 미코박테리아 종(Mycobacteria sp), 유레아플라스마 종(Ureaplasma sp.), 스트렙토미세스 종(Streptomyces sp .), 트리코모라스 종(Trichomoras sp.), P. 미라빌리스(P. mirabilis); 비브리오 콜레라(vibrio cholera), 장독성 에스케리키아 콜라이(enterotoxigenic Escherichia coli), 클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile), 살모넬라 티피(Salmonella typhi), C. 디프테리아(C. diphtheria), 미코박테리움 레프라에(Mycobacterium leprae), 미코박테리움 레프로마토시(Mycobacterium lepromatosi)를 포함하나, 이에 제한되지 않는 박테리아 감염; 피코나비리다에(picornaviridae), 칼리시비리다에(caliciviridae), 토가비리다에(togaviridae), 플라비비리다에(flaviviridae), 코로나비리다에(coronaviridae), 랍도비리다에(rhabdoviridae), 필로비리다에(filoviridae), 파라믹소비리다에(paramyxoviridae), 오르토믹소비리다에(orthomyxoviridae), 분야비리다에(bunyaviridae), 아레나비리다에(arenaviridae), 레오비리다에(reoviridae), 레트로비리다에(retroviridae), 헤파드나비리다에(hepadnaviridae), 파르보비리다에(parvoviridae), 파포바비리다에(papovaviridae), 아데노비리다에(adenoviridae), 헤르페스비리다에(herpesviridae), 폭스비리다에(poxviridae), 로타바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 인플루엔자 바이러스 A 및 B, 매독, HIV, 광견병 바이러스, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스, 및 단순 포진 바이러스를 포함하나, 이에 제한되지 않는 박테리아 감염; 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum), P. 비박스(P. vivax), P. 오발레(P. ovale), P. 말라리아(P. malaria), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 리슈마니아 멕시카나(Leishmania mexicana), L. 트로피카(L. tropica), L. 메이저(L. major), L. 아에티오피카(L. aethiopica), L. 도노바니(L. donovani), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), T. 브루세이(T. brucei), 쉬스토소마 만소니(Schistosoma mansoni), S. 해마토비움(S. haematobium), S. 자포니움(S. japonium), 트리키넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 부케레리아 반크로프티(Wuchereria bancrofti), 브루기아 말라일리(Brugia malayli), 엔타모에바 히스톨리티카(Entamoeba histolytica), 엔테로비우스 베르미쿨로아루스(Enterobius vermiculoarus), 태니아 솔리움(Taenia solium), T. 사기나타(T. saginata), 트리코모나스 바기나티스(Trichomonas vaginatis), T. 호미니스(T. hominis), T. 테낙스(T. tenax); 기아르디아 람블리아(Giardia lamblia), 크립토스포리디움 파르붐(Cryptosporidium parvum), 슈모시티스 카리니이(Pneumocytis carinii), 바베시아 보비스(Babesia bovis), B. 디베르겐스(B. divergens), B. 마이크로티(B. microti), 이소스포라 벨리(Isospora belli), I. 호미니스(I. hominis), 디엔타모에바 프라길레스(Dientamoeba fragiles), 온코세르카 볼불루스(Onchocerca volvulus), 아스카리스 룸브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 네카토르 아메리카니스(Necator americanis), 안실로스토마 두오데날레(Ancylostoma duodenale), 스트론길로이데스 스테르코랄리스(Strongyloides stercoralis), 카필라리아 필리피넨시스(Capillaria philippinensis), 안지오스트론길루스 칸토넨시스(Angiostrongylus cantonensis), 히메놀레피스 나나(Hymenolepis nana), 디필로보트리움 라툼(Diphyllobothrium latum), 에키노코쿠스 그라눌로수스(Echinococcus granulosus), E. 멀티로쿨라리스(E. multilocularis), 파라고니무스 웨스테르마니(Paragonimus westermani), P. 칼리엔시스(P. caliensis), 클로노르키스 시넨시스(Chlonorchis sinensis), 오피스토르키스 펠리네아스(Opisthorchis felineas), G. 비베리니(G. Viverini), 파스시올라 헤파티카(Fasciola hepatica), 사르콥테스 스카비에이(Sarcoptes scabiei), 페디쿨루스 휴마누스(Pediculus humanus), 프티를루스 푸비스(Phthirius pubis), 및 데르마토비아 호미니스(Dermatobia hominis)를 포함하나, 이에 제한되지 않는 기생충 감염; 및 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 발라스토미세스 데르마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 아이엘로미세스 데르마티티디스(Aiellomyces dermatitidis), 히스토플라즈마 캅술라툼(Histoplasfria capsulatum), 콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis), C. 알비칸스(C. albicans), C. 트로피칼리스(C. tropicalis), C. 파라실로시스(C. parapsilosis), C. 구일리에르몬디이(C. guilliermondii) 및 C. 크루세이(C. krusei)를 비롯한 칸디다(Candida) 종, A. 푸미가투스(A. fumigatus), A. 팔라부스(A. flavus) 및 A. 니거(A. niger)를 비롯한 아스페르길루스(Aspergillus) 종, 리조푸스(Rhizopus) 종, 리조무코르(Rhizomucor) 종, 쿠닝하멜라(Cunninghammella) 종, A. 삭세나아에(A. saksenaea), A. 무코르(A. mucor) 및 A. 압시디아(A. absidia)를 비롯한 아포피소미세스(Apophysomyces) 종, 스포로트릭스 쉔키이(Sporothrix schenckii), 파라코시디오이데스 브라실리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 슈달렌체리아 보이디이(Pseudallescheria boydii), 토룰롭시스 갈라브라타(Torulopsis glabrata); 및 데르마토피레스(Dermatophyres) 종을 포함하나, 이에 제한되지 않는 진균 감염을 포함한다.

박테리아 조성물은 항원성 물질과 함께 조합되어 애주번트로서 투여될 수 있다. 항원성 물질은 병원체의 단백질 코트, 단백질 코어, 또는 기능성 단백질 및 펩티드의 하나 이상의 일부분, 또는 전체 병원체 (살아있는, 사멸된, 불활성화된, 또는 약독화된 것)을 포함할 수 있거나, 또는 하나 또는 복수 개의 암 에피토프 또는 암 항원을 포함할 수 있다. 항원성 물질은 박테리아 조성물과 함께 공동 투여되거나, 박테리아 조성물 이전 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 박테리아 조성물은 또한 현 점막 백신, 예컨대, 인플루엔자 백신, (예컨대, 메드이뮨(MedImmune)으로부터의 플루미스트(FluMist) 또는 인도의 세럼 인스티튜트(Serum Institute)로부터의 NASOVAC), 로타바이러스 백신 (예컨대, 머크(Merck)로부터의 로타테크(RotaTeq) 또는 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)으로부터의 로타릭스(Rotarix)), 장티푸스 백신 (예컨대, 크루셀(Crucell)로부터의 비보티프(Vivotif), Ty21A), 콜레라 백신 (예컨대, 크루셀로부터의 오로콜(Orochol), 산타 바이오테크닉스(Shantha Biotechnics)로부터의 산콜(Shanchol)), 여행자 설사병 백신 (예컨대, 크루셀로부터의 듀코랄(Dukoral))과 함께, 및 살아있는 약독화된 인플루엔자 A 바이러스 H1 균주의 항원, 살아있는 약독화된 인플루엔자 A 바이러스 H3 균주의 항원, 인플루엔자 B 바이러스의 항원, 살아있는 약독화된 H1N1 인플루엔자 바이러스 (돼지 독감)의 항원, 살아있는 약독화된 로타바이러스의 항원, 1가 및 다가 폴리오바이러스의 항원, 살아있는 약독화된 살모넬라 티피의 항원, 콜레라 독소 서브유니트 A가 없는, 살아있는 재조합 비브리오 콜레라에(Vibrio cholerae)의 항원, 콜레라 독소 서브유니트 B를 포함하거나, 또는 포함하지 않는, 전체 사멸된 비브리오 콜레라에 O1 고전적 및 El Tor 바이오타입의 항원, 암 항원, 암 에피토프, 및 그의 조합과 함께 투여될 수 있다.

박테리아 조성물은 당업자에게 널리 공지되어 있는 유전자 조작 방법을 사용하여 선택된 병원체로부터의 특이 항원 또는 암 항원을 발현하도록 조작될 수 있고, 예를 들어, 상기 항원에 대한 노출을 연장시키고, 가용성 항원의 단독 경구 투여보다 더욱 강력한 점막 면역 반응을 유도하기 위한 제약 조성물로서 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 표 1로부터의 유기체는 이종성 항원을 발현하는 발현 벡터의 도입에 의해 조작될 수 있다. 상기 이종성 항원으로는 인플루엔자 HA, NA, M2, HIV gp120, 미코박테리움 투베르쿨로시스(mycobacterium tuberculosis) Ag85B 및 ESAT6, 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumonia) PspA, PsaA, 및 CbpA, 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) F 및 G 단백질, 인간 유두종 바이러스 단백질, 및 암 항원을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 추가로, Th-17 유도 균주는 또한 면역화 부위에는 충분히 높은 항원 로드를 전달하면서, 숙주에서 제한된 복제능을 가지도록 조작될 수 있으며, 이로써, 상기 균주에 의한 장기간 집락형성은 막을 수 있다.

본원에 기술된 박테리아 조성물 및 다른 Th17-유도 균주는 자가면역 및 염증성 질환을 예방 또는 치료하는 데에서의 (그의 유해 효과를 부분적으로 또는 완전히 감소시키는 데에서의) 사용을 위해 억제될 수 있다. Th17 세포는 또한 숙주에서 만성 자가면역 및 염증성 반응을 촉진시키는 유해한 효과를 가질 수 있다. 따라서, Th17-유도 균주의 성장 및/또는 기능을 손상시키거나, 또는 Th17-유도 균주를 직접적으로 사멸시키는 분자의 투여를 통해 Th17-유도 균주를 억제시키는 방법이 Th17 반응에 의해 매개되는 자가면역 및 염증성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 반코마이신 및 메트로니다졸을 포함하나, 이에 제한되지 않는 항생제가 Th17-유도 균주를 억제시키는 데 사용될 수 있다. 치료를 위해 Th17-유도 균주 억제가 유용한 표적 질환으로는 그 중에서도 특히 염증성 장 질환 (IBD), 궤양성 대장염, 크론병, 스프루, 자가면역 관절염, 류머티스성 관절염, I형 당뇨병, 다발성 경화증, 골관절염, 전신 홍반성 루프스, 인슐린 의존성 당뇨병, 천식, 건선, 아토피성 피부염, 이식 편대 숙주 질환, 기관 이식과 관련된 급성 또는 만성 면역 질환, 사르코이드증, 아테롬성 동맥경화증, 아토피성 알레르기, 식품 알레르기, 예컨대, 땅콩 알레르기, 견과류 알레르기, 달걀 알레르기, 우유 알레르기, 대두 알레르기, 밀 알레르기, 해산물 알레르기, 갑각류 알레르기, 또는 참깨 알레르기, 알레르기성 비염 (꽃가루 알레르기), 아나필락시스, 반려동물 알레르기, 라텍스 알레르기, 약물 알레르기, 알레르기성 비결막염, 호산구성 식도염, 및 설사를 포함한다.

제약 제제는 기술된 박테리아 조성물로부터 당업자에게 공지된 약물 제제화 방법에 의해 제제화될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 캡슐제, 정제, 환제, 사쉐, 액제, 분제, 과립제, 미세 과립제, 필름 코팅된 제제, 펠릿, 트로키, 설하용 제제, 츄어블, 협측용 제제, 페이스트, 시럽, 현탁제, 엘릭시르, 및 에멀젼 형태로 경구적으로 사용될 수 있거나, 좌제 또는 관장제로 사용될 수 있다.

점막 백신 접종용 제약 제제는 수성 또는 오일성 용매 중의 액제, 현탁제 또는 에멀젼과 같은 경구용 형태로 제제화되거나, 또는 분제로서 건조된 형태로 제제화될 수 있다. 추가로, 용도에 따라, 완충제, 등장화제, 슈딩제, 보존제 또는 항산화제가 점막 백신 제제에 첨가될 수 있다.

이들 제제를 제제화하기 위해, 박테리아 조성물은 하기 중 하나 이상의 것: 멸균수, 생리학적 염수, 식물성 오일, 용매, 베이스 물질, 유화제, 현탁화제, 계면활성제, 안정제, 향미제, 방향제, 부형제, 비히클, 보존제, 결합제, 희석제, 장성 조절제, 슈딩제, 벌크화제, 붕해제, 완충제, 코팅제, 윤활제, 착색제, 감미제, 증점제, 향미 교정제, 가용제, 및 다른 첨가제 비롯한, 약리학상 허용되는 또는 섭취하는 데 허용되는 담체와 함께 적절한 조합물로, 예컨대, 식품 또는 음료로 사용될 수 있다.

제약 제제 또는 제제, 및 특히, 경구 투여용 제약 제제는 결장에서 Th17의 증식 또는 축적을 더욱 효율적으로 유도하기 위해 본 발명의 박테리아 조성물이 결장으로 효율적으로 전달될 수 있도록 하는 추가 성분을 포함할 수 있다. 박테리아 조성물을 결장으로 전달할 수 있는 다양한 제약 제제가 사용될 수 있다. 그의 예로는 pH 감수성 조성물, 더욱 구체적으로, 완충처리된 사쉐 제제, 또는 장용 중합체가 위를 통과한 후, pH가 알칼리성이 되었을 때, 그의 내용물을 방출하는 장용 중합체를 포함한다. 제약 제제를 제제화하는 데 pH 감수성 조성물이 사용될 때, pH 감수성 조성물은 바람직하게, 그의 분해 pH 역치가 약 6.8 내지 약 7.5인 중합체이다. 상기 수치값의 범위는 pH가 위의 원위부에서 알칼리성 쪽 방향으로 이동하는 범위이고, 따라서, 결장으로의 전달에 사용되는 데 적합한 범위이다.

박테리아 조성물을 결장으로 전달하는 데 유용한 제약 제제의 또 다른 실시양태는 내용물 (예컨대, 박테리아 조성물)의 방출을 소장 통과 시간에 상응하는 대략 3 내지 5시간까지 지연시킴으로써 확실하게 결장으로까지 전달될 수 있도록 하는 제약 제제이다. 지연 방출용 제약 제제의 한 실시양태에서, 히드로겔은 쉘로서 사용된다. 히드로겔은 위장관액과의 접촉시 수화되고, 팽창하게 되며, 그 결과로 내용물은 효과적으로 방출된다 (이는 주로 결장에서 방출된다). 지연 방출형 투여 단위는 투여하고자 하는 약물 또는 활성 성분을 코팅 또는 선택적으로 코팅하는 물질을 가지는 약물 함유 조성물을 포함한다. 상기 선택적 코팅 물질의 예로는 생체내 분해성 중합체, 점진적으로 가수분해 가능한 중합체, 점진적으로 수용성 중합체, 및/또는 효소 분해성 중합체를 포함한다. 방출을 효율적으로 지연시키는 매우 다양한 코팅 물질이 이용가능하고, 이는 예를 들어, 셀룰로스계 중합체 예컨대, 히드록시프로필 셀룰로스, 아크릴산 중합체 및 공중합체, 예컨대, 메타크릴산 중합체 및 공중합체, 및 비닐 중합체 및 공중합체, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈을 포함한다.

결장으로 전달할 수 있는 조성물의 예로는 결장 점막에 특이적으로 부착되는 생체부착성 조성물 (예를 들어, 미국 특허 번호 6.368.586의 명세서에 기술되어 있는 중합체), 및 특히 위장관 중의 바이오제약 제제를 프로테아제의 활성에 기인한 분해로부터 보호하기 위해 프로테아제 억제제가 혼입되어 있는 조성물을 추가로 포함한다.

박테리아 조성물은 식품 또는 음료, 예컨대, 건강 식품 또는 음료, 여행자용, 유아용, 임산부용, 운동선수용, 노인용 또른 기타 표시된 군을 위한 식품 또는 음료, 기능성 식품, 특정 보건용 식품 또는 음료, 식이 보충제, 환자용 식품 또는 음료, 또는 동물 사료로서 사용될 수 있다.

박테리아 조성물을 무항생제 동물 사료에 첨가함으로써 동물 사료를 섭취한 동물의 체중을, 항생제 함유 동물 사료의 섭취에 달성된 것과 같은 수준 또는 그보다 높은 수준으로까지 증가시킬 수 있으며, 이는 또한 위장관 중의 병원성 박테리아를 전형적인 항생제 함유 동물 사료를 소비한 동물에서의 것과 같은 수준으로까지 감소시킬 수 있다. 박테리아 조성물은 항생제 첨가를 필요로 하지 않는 동물 사료의 성분으로서 사용될 수 있다. 박테리아 조성물을 포함하는 동물 사료는 매우 다양한 유형의 동물 및 다양한 연령대의 동물에게 먹이로 공급될 수 있고, 규칙적인 간격으로 또는 특정 기간 동안 (예를 들어, 출생시, 이유기 동안, 또는 동물을 이동시키거나, 수송할 때) 먹이로 공급될 수 있다.

박테리아 조성물의 박테리아 활성 성분은 발효 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 한 실시양태에서, 박테리아 활성 성분은 혐기성 발효기를 사용하여 제조되는데, 이는 박테리아 균주의 빠른 성장을 지원할 수 있다. 혐기성 발효기는 예를 들어, 교반식 탱크 반응기 또는 1회용 웨이브 생물반응기일 수 있다. 배양 배지, 예컨대, BL 아가, 또는 동물 성분이 없는, 상기 배지의 유사 버전이 박테리아 종의 성장을 지원하는 데 사용될 수 있다. 박테리아 생성물은 예컨대, 원심분리 및 여과와 같은 기술에 의해 발효 브로쓰로부터 정제되고, 농축되고, 임의적으로 건조되고, 동결건조될 수 있다.

투여 또는 섭취되는 박테리아 조성물의 양은 상기 조성물을 받게 되는 개체의 연령, 체중, 성별, 증상, 건강 상태 뿐만 아니라, 투여 또는 섭취되는 박테리아 조성물 (제약 제품, 식품 또는 음료)의 종류와 같은 인자를 고려하여 실험으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 1회 투여 또는 섭취당 그 양은 일반적으로 0.01 mg/kg (체중) 내지 100 mg/kg (체중), 구체적인 실시양태에서, 1 mg/kg (체중) 내지 10 mg/kg (체중)이다. 본원에서는 또한 박테리아 조성물을 상기 기술된 바와 같이 대상체에게 투여하거나, 또는 대상체가 섭취하는 것을 특징으로 하는 것인, 대상체의 면역을 촉진시키는 (면역 반응을 강화시키는) 방법도 기술한다.

박테리아 조성물은 개체에게 1회 투여될 수 있거나, 또는 1회 초과로 투여될 수 있다. 조성물이 1회 초과로 투여되는 경우, 정기적으로 (예를 들어, 1일 1회, 2일마다 1회씩, 주 1회, 2주마다 1회씩, 월 1회, 6개월마다 1회씩, 또는 연 1회) 또는 필요에 따라 또는 불규칙적으로 투여될 수 있다. (다른 인자들 중에서도 숙주의 유전적 특징, 대상체의 연령, 성별, 및 건강 또는 질환 상태에 의존할 수 있는) 적절한 투여 빈도는 실험적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 환자는 1회 투약으로 조성물을 투여받을 수 있고, 환자로부터 수득된 대변 샘플 중 조성물의 박테리아 균주의 수준은 다른 시점 (예를 들어, 1일 후, 2일 후, 1주 후, 2주 후, 1개월 후)에 측정될 수 있다. 박테리아 수준이 예를 들어, 그의 투약 후 최대값의 절반에 포함될 때, 2차 투약을 투여할 수 있고, 계속 그와 같이 진행될 수 있다.

박테리아 조성물을 포함하는 제품 (제약 제품, 식품 또는 음료, 또는 시약) 또는 그의 매뉴얼은 상기 제품이 면역을 촉진시키는 데 사용될 수 있다는 것을 설명하는 문서 또는 설명서 (제품이 면역을 촉진시키는 효과가 있음을 설명하는 설명서, 및 제품이 Th17 세포의 증식 또는 기능을 촉진시키는 효과가 있음을 설명하는 설명서 포함)를 수반할 수 있다. 여기서, "제품 또는 그의 매뉴얼에 노트를 제공"이라는 것은, 문서 또는 설명서는 제품의 본체, 용기, 패키지 등에 제공되거나, 또는 제품에 대한 정보를 개시하는 것인 노트는 매뉴얼, 패키지 인서트, 전단지, 또는 다른 인쇄물에 제공된다는 것을 의미한다.

<Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 방법>

상기 기술된 바와 같이, 및 실시예 1 내지 3에 제시된 바와 같이, 박테리아 조성물의 개체에게로의 투여가 개체에서 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도할 수 있다. 이는 개체에게 (a) 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베; (b) 본원에 기술된/열거된 박테리아 중 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 것의 배양물 상청액; 또는 (a) 및 (b)의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 구성원을 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 방법을 제공한다. 박테리아 조성물은 Th17 세포의 증식, 축적, 또는 증식 및 축적, 둘 모두를 유도하는 바람직한 효과를 일으키는 데 충분한 양으로 개체에게 투여된다 (제공된다). 이는 감염성 질환의 치료 또는 그의 중증도의 감소를 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다. 이는 또한 감염성 질환의 예방을 필요로 하는 개체에게 점막 백신 제제의 애주번트로서 투여될 수 있다.

"개체" 또는 "대상체" (예컨대, 인간)는 건강한 상태 또는 이환된 상태일 수 있다는 점에 주의한다. 본 방법은 박테리아 조성물을 선행하여, 또는 그와 조합하여 1개 이상의 (한, 하나 이상의) 항생제를 투여하는 임의적 단계를 추가로 포함할 수 있다.

또한, 프리바이오틱 조성물은 다른 인간 공생 박테리아 종의 성장보다는 박테리아 조성물 중의 종의 성장을 유리하게 하는 데 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 프리바이오틱 물질(들)은 비소화성 올리고당이다. 개체에서 Th17의 증식 및/또는 축적을 유도하는 방법은 개체에게 박테리아 조성물과 조합하여 1종 이상의 프라바이오틱 또는 1개 이상의 항생제를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본원에서는 박테리아 조성물 및 프리바이오틱 조성물 또는 항생제 조성물을 포함하는 조성물 또한 고려된다.

박테리아 조성물, "점막 백신 제제," "점막 백신 항원", "항생제," 및 "프리바이오틱 조성물"로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 물질과 치료학적 조성물의 조합 사용에 부과되는 특별한 제한은 없다. 예를 들어, "한 물질" 및 치료학적 조성물은 동시에 또는 순차적으로/개별적으로 임의의 적절한 시점에 개체에게 경구적으로 또는 비경구적으로 투여된다.

박테리아 조성물의 투여가 Th17 세포의 증식 및/또는 축적을 유도하는지 여부는 하기: Th17 세포의 개수, 위장관의 T 세포 군 중 Th17 세포의 비, Th17 세포의 기능, 또는 Th17 세포의 마커의 발현 중 1개 이상의 증가 또는 증강을 지표로 사용함으로써 측정될 수 있다. 구체적인 접근법은 Th17 세포의 증식 또는 축적의 유도에 관한 지수로서, 환자 샘플, 예컨대, 생검 또는 혈액 샘플 중 RORgt-발현 Th17 세포의 계수 또는 비율(%), IL-17 발현의 촉진 (증진), 또는 투여받은 박테리아 조성물에 의한 개체의 집락형성을 측정하는 것이다. 상기 발현을 검출하는 방법으로는 전사 수준으로 유전자 발현을 검출하기 위한 노던 블롯팅, RT-PCR, 및 도트 블롯팅; 번역 수준으로 유전자 발현을 검출하기 위한 ELISA, 방사성면역검정법, 면역블롯팅, 면역침강법, 및 유세포 분석법을 포함한다. 상기 지수를 측정하는 데 사용될 수 있는 샘플로는 개체로부터 수득된 조직 및 유체, 예컨대, 혈액, 수득된 생검, 및 대변 샘플을 포함한다.

<박테리아 조성물에 대한 대상체의 반응을 모니터링하는 방법>

(a) 본원에 기술된 박테리아 조성물 처리 이전에 환자로부터 한 (하나 이상의, 1개 이상의) 샘플, 예컨대, 대변 샘플 또는 결장 생검을 수득하는 단계; (b) 본원에 기술된 박테리아 조성물 처리 이후 환자로부터 한 (하나 이상의, 1개 이상의) 상응하는 샘플을 수득하는 단계; 및 (c) (a)에서 수득된 샘플 중의 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상의 박테리아 종의 비율(%) 또는 절대 계수를 (b)에서 수득된 샘플 중의 동일의 1개 이상의 박테리아 종의 비율(%) 또는 절대 계수와 비교하는 단계로서, 여기서, (박테리아 조성물 처리 이후의) (b)에서 수득된 샘플 중의 값이 (처리 이전의) (a)에서 수득된 샘플 중의 값보다 더 높다면, 이는 대상체가 처리에 대하여 호의적으로 반응하였다는 것을 시사하는 것인 (예컨대, 이는 대상체에서 증진된 면역 반응에 대한 양성 인디케이터인 것인) 단계를 포함하는, 본원에 기술된 박테리아 조성물 처리에 대한 대상체의 (예컨대, 인간의) 반응을 모니터링하는 방법 또한 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 (d) (c)의 비교에 기초하여 환자에게 박테리아 조성물을 투여하거나, 또는 환자에게로의 박테리아 조성물 투여를 중단하는 단계를 추가로 포함한다. 본원에 기술된 모니터링 방법에서, 박테리아 종의 비율(%) 또는 절대 계수를 측정하는 데 공지된 다양한 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 16S rRNA 서열분석이 사용될 수 있다.

<Th17-유도 박테리아 조성물을 수득하는 방법>

대변 샘플에 적용된 특정 변형을 통하여 Th17-유도 박테리아 조성물을 획득할 수 있다. 놀랍게도, 암피실린을 동물에 투여하면, 샘플에서 Th17-유도 균주의 재현은 강화된다. 실시예 2에 기술된 특정 배지 중에서 엄격한 혐기성 조건하에 플레이팅함으로써 암피실린 처리된 동물로부터 얻은 샘플의 연속 희석액을 배양한 결과, 강력한 효능을 지닌 Th17-유도 박테리아 조성물을 획득할 수 있다. 따라서, (a) 대상체를 항생제 암피실린, 또는 스펙트럼이 유사한 항생제, 예를 들어, 아미노페니실린 계열의 구성원, 예컨대, 아목시실린, 페니실린, 또는 벤질페니실린으로 처리하는 단계; (b) 대상체로부터 (한, 하나 이상의, 1개 이상의) 샘플, 예컨대, 대변 샘플 또는 장 생검을 수득하는 단계; (c) (b)로부터의 샘플을 배양하고, 생성된 콜로니로부터 순수한 박테리아 균주를 단리시키는 단계를 포함하는, Th17-유도 박테리아 조성물을 수득하는 방법을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, (a)의 대상체는 먼저 인간 기증자로부터 수득된 대변 샘플로 집락형성이 이루어지고, 이후 암피실린으로 처리된 후, 맹장 샘플이 본 동물로부터 수득되고, 실시예 2에 기술된 바와 같이 배양되는 것인, 외부 세균이 없는 동물이다. 한 실시양태에서, (c)의 순수한 박테리아 균주의 단리는 엄격한 혐기성 조건하에서 플레이팅함으로써 배양된 맹장 내용물 샘플의 연속 희석에 의해 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 본 방법은 (a) 대상체로부터 (1개 이상의) 샘플, 예컨대, 대변 샘플 또는 장 생검을 수득하는 단계; (b) (a)의 샘플을 암피실린으로 처리하는 단계; (c) (b)의 암피실린-처리 샘플을 배양하고, 순수한 박테리아 균주를 단리시키는 단계를 포함한다.

<Th17-유도 박테리아 조성물을 사용하여 항생제 처리를 받은 개체의 미생물상을 재증식시키는 방법>

박테리아 조성물은 항생제 처리 또한 받고 있는 개체에게 투여될 수 있다. 본 발명자들은 항생제, 예컨대, 반코마이신 또는 메트로니다졸이 포유동물의 위장관으로부터 Th17-유도 박테리아 종을 효과적으로 제거하거나, 또는 크게 감소시키고, 이어서, Th17 세포 수준을 감소시킬 수 있다는 것을 입증하였다 (실시예 1). 이론으로 제한하고자 하지 않으면서, 면역 반응을 촉진시킨다는 Th17-유도 박테리아의 중요한 역할은 그의 존재 또는 높은 수준이 자가면역 질환에서 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 강력하게 시사한다. 따라서, 항생제, 예컨대, 반코마이신 또는 메트로니다졸 과정을 받고 있는 개체로서, Th17-유도 박테리아의 손실을 경험할 위험이 높고, 이로써 면역 결핍을 경험하게 되는 개체에서는 박테리아 조성물의 사용을 통하여 예방적으로 "재증식"이 이루어질 수 있다. 박테리아 조성물은 항생제 처리 이전, 그와 동시에 또는 그 이후에 투여될 수 있지만, 바람직하게는, 항생제 처리와 동시에 또는 그 이후에 투여된다.

구체적인 측면을 기술하는 실시예는 하기와 같다. 이는 어느 방식으로든 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예

실시예 1:

임상적으로 활성 상태인 궤양성 대장염 (UC)을 앓는 일본인 환자로부터의 인간 대변 (2 g)을 20% 글리세롤을 함유하는 8 ml 포스페이트 완충처리된 염수 (PBS) 중에 현탁시키고, 액체 질소에서 급냉시키고, 사용시까지 -80℃에서 보관하였다. 냉동된 스톡을 해동시키고, IQI 무균 (GF) 마우스에 경구적으로 접종하였다 (250 ㎕/마우스). UC 환자 대변 접종 후 1 d를 시작으로 분석일까지 마우스의 음용수 중 암피실린 (ABPC; 1 g/L), 반코마이신 (VCM; 500 mg/L), 폴리믹신 B (PL-B; 200 mg/L), 메트로니다졸 (MNZ; 1 g/L), 또는 오직 물만 (비처리: NT)을 마우스에 제공하였다. 외부 세균이 없는(ex-GF) 마우스로 이루어진 각 군 (각 군당 n=5)을 4주 동안 비닐 격리실에서 따로따로 유지시켰다.

결장을 수집하고, 종방향으로 열고, PBS로 세척하여 관강내 내용물 모두를 제거하고, 37℃에서 20 min 동안 행크스 평형 염 용액(Hanks' balanced salt solution: HBSS) 중에서 진탕시켰다. 겸자를 이용하여 상피 세포, 근육층 및 지방 조직을 제거한 후, 점막고유층인 층을 작은 조각으로 절단하고, 진탕 수조 중에서 37℃에서 1 h 동안 4% 우태아 혈청 (FBS), 0.5 mg/mL 콜라게나제 D, 0.5 mg/mL 디스파제 및 40 mg/mL DN아제 I (이들 모두 로슈 다이아그나스틱스(Roche Diagnostics))를 함유하는 RPMI1640과 함께 인큐베이션시켰다. 분해된 조직을, 5 mM EDTA를 함유하는 HBSS로 세척하고, 5 mL의 40% 퍼콜(Percoll) (GE 헬쓰케어(GE Healthcare)) 중에 재현탁시키고, 15 ml 팔콘(Falcon) 튜브 중 2.5 ml의 80% 퍼콜 상에 중첩시켰다. 25℃에서 20 min 동안 800 g으로 원심분리하여 퍼콜 구배 분리를 수행하였다. 퍼콜 구배의 계면으로부터 점막고유층 림프구를 수집하고, 10% FBS를 함유하는 RPMI1640 중에서 현탁시켰다. Th1 및 Th17 세포 분석을 위해, 단리된 림프구를 골지스톱(GolgiStop) (BD 바이오사이언시스(BD Biosciences))의 존재하에서 50 ng/mL 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트 (PMA, 시그마(Sigma)) 및 750 ng/mL 이오노마이신 (시그마)으로 4 h 동안 자극시켰다. 4 h 동안 인큐베이션시킨 후, 세포를 PBS 중에서 세척하고, 라이브/데드(LIVE/DEAD) 고정가능한 사세포 염료 키트 (인비트로겐(Invitrogen))로 표지하고, 표면 CD4 및 CD3을 PECy7-표지된 항-CD4 Ab (RM4-5, BD 바이오사이언시스) 및 BV605-표지된 항-CD3 Ab (17A2, 바이오레전드(BioLegend))로 염색하였다. 세포를 세척하고, 고정시키고, 폭스p3 스테이닝 버퍼(Foxp3 Staining Buffer) 세트 (e사이언스(eBioscience))로 투과화시키고, APC-표지된 항-IL-17 Ab (e바이오17B7(eBio17B7), e사이언스) 및 BV421-표지된 항-IFN-g Ab (XMG1.2, 바이오레전드)로 염색하였다. Ab 염색된 세포를 LSR 포르테사(LSR Fortessa) (BD 바이오사이언시스)로 분석하고, 플로우조(FlowJo) 소프트웨어 (트리스타(Treestar))로 데이터를 분석하였다.

UC 환자 대변을 경구적으로 접종받은 마우스에서, Th17 세포의 실질적인 유도가 관찰되었다. 놀랍게도, Th17 유도는 오직 물만을 제공받은 마우스 (비처리: NT)와 비교하였을 때, 음용수 중 암피실린 (ABPC)을 제공받은 마우스에서 증진되어 나타났다. 대조적으로, Th17 유도는 반코마이신 (VCM) 또는 메트로니다졸 (MNZ) 처리에 의해서는 유의적으로 손상되었다. 다른 한편으로, 폴리믹신 B (PL-B) 처리는 Th17 세포 개수에는 어떤 영향도 미치지 않았다 (도 1).

그러므로, Th17-유도 박테리아는 인간 대변에 존재하고, 박테리아 종은 암피실린 및 폴리믹신 B에는 저항성을 띠지만, 반코마이신 및 메트로니다졸에는 감수성을 띤다.

실시예 2:

실시예 1에 기술된 각 외부 세균이 없는(exGF) 마우스로부터의 맹장 내용물을 10 mM 트리스(Tris)-HCl 및 1 mM EDTA를 함유하는 10 mL의 트리스-EDTA (pH 8) 중에 현탁시키고, 온화하게 혼합시키면서, 37℃에서 1 h 동안 리소자임(Lysozyme) (시그마, 15 mg/mL)과 함께 인큐베이션시켰다. 정제된 아크로모펩티다제 (와코(Wako))를 첨가하고 (최종 농도 2,000 유닛/ mL), 37℃에서 추가로 30 min 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 소듐 도데실 술페이트 (최종 농도 1%)를 세포 현탁액에 첨가하고, 잘 혼합하였다. 이어서, 프로테이나제 K (머크) (최종 농도 1 mg/mL)를 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 55℃에서 1 h 동안 인큐베이션시켰다. 고분자량 DNA를 단리시키고, 페놀/클로로포름 추출, 에탄올, 및 마지막으로 폴리에틸렌글리콜 침전에 의해 정제하였다. Ex Taq (다카라(TAKARA)) 및 (i) 변형된 프라이머 8F [5'-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG (454 어댑터 서열, 서열번호: 21) + 바코드(Barcode) (10개 염기) + AGRGTTTGATYMTGGCTCAG (서열번호: 22)-3'] 및 (ii) 변형된 프라이머 338R [5'-CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTCTCAG (454 어댑터 서열, 서열번호: 23) + TGCTGCCTCCCGTAGGAGT (서열번호: 24)-3']를 이용하여 16S rRNA 유전자의 V1-V2 영역에 대한 PCR을 수행하였다. 이어서, 각 샘플로부터 생성된 앰플리콘 (~330 bp)을 AM퓨어 XP(AMPure XP) (벡크만 쿨터(BECKMAN COULTER))를 이용하여 정제하였다. 콴트-iT 피코그린 dsDNA 어세이 키트(Quant-iT Picogreen dsDNA Assay Kit) (인비트로겐) 및 TBS-380미니 플루오로미터(TBS-380mini Fluorometer) (터너 바이오시스템즈(Turner Biosystems))를 이용하여 DNA의 양을 정량화하였다. 이어서, 증폭된 DNA를 이온PGM(IonPGM) 서열분석기를 위한 주형으로서 사용하였다. 생성된 서열 (각 샘플에 대해 3,000개의 리드가 제조되었다)을 서열 유사성 (≥96% 동일성)에 기초하여 OTU로 분류하였다. BLAST를 이용하여 각 OTU로부터의 대표적인 서열을 핵산 데이터베이스 (리보솜 데이터베이스 프로젝트) 또는 게놈DB(GenomeDB) (NCBI + HMP + Hattori Lab data base) 중의 서열과 비교하여 가장 가까운 균주를 결정하였다.

도 2에서 Th17 세포 개수와 음의 상관관계를 가진 OTU는 청색 또는 회색으로 표시되어 있고, Th17 세포 개수와 양의 상관관계를 가진 OTU는 적색으로 마킹되어 있다.

UC 환자 대변으로 집락이 형성되고, 암피실린을 제공받은 마우스로부터의 맹장 내용물의 연속 희석액을 엄격한 혐기성 조건 (80% N₂ 10% H₂ 10% CO₂)하에, 말의 5% 탈섬유소 혈액 (니폰 바이오-섭.센터(Nippon Bio-Supp.Center))으로 보충된 BL 아가 (에이켄 케미컬(Eiken Chemical)), 말의 5% 탈섬유소 혈액으로 보충된 GAM 아가 (니쯔이(Nissui)), 말의 5% 탈섬유소 혈액으로 보충된 트립틱 소이 아가(Tryptic soy agar) (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson)), 말의 5% 탈섬유소 혈액으로 보충된 레인포스드 클로스트리디알 아가(Reinforced clostridial agar) (옥소이드(Oxoid)), 새들러(Schaedler) 아가 (벡톤 디킨슨) 또는 브레인 하트 인퓨전 아가(Brain Heart Infusion agar) (벡톤 디킨슨) 상에 플레이팅함으로써 배양하였다. 37℃에서 2일 동안 배양한 후, 각 단일 콜로니를 채취하고 (총 250개의 콜로니), 10% 글리세롤을 함유하는 새들러 브로쓰(Schaedler Broth) (벡톤 디킨슨) 중에서 -80℃에서 보관하였다. 단리된 균주를 확인하기 위해, KOD FX (토요보(TOYOBO)) 및 16S rRNA 유전자-특이 프라이머 쌍: 8F (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3') (서열번호: 25) 및 1492R (5'-GGYTACCTTGTTACGACTT-3') (서열번호: 26)을 이용하여콜로니-PCR에 의해 16S rRNA 유전자를 증폭시켰다. 증폭 프로그램은 98℃에서 2 min 동안 1회 사이클, 이어서, 98℃에서 10 s 동안, 57℃에서 30 s 동안, 및 68℃에서 90 s 동안 수행하는 35회 사이클로 이루어졌다. AM퓨어 XP를 사용하여 반응 혼합물로부터 각각의 증폭된 DNA를 정제하였다. 빅다이 터미네이터 V3.1 사이클 시퀀싱 키트(BigDye Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kit) (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)) 및 어플라이드 바이오시스템즈 3730xl DNA 분석기 (어플라이드 바이오시스템즈)를 이용하여 서열 분석을 수행하였다. 생성된 서열을 RDP 데이터베이스중의 서열과 비교하여 가장 가까운 계통을 결정하였다. 상기 채취된 콜로니의 16S rRNA 유전자 서열에 관한 BLAST 검색을 통해 본 발명자들은 20개의 균주를 단리시키는 데 성공한 것으로 밝혀졌다 (하기 표 1).

실시예 3:

단리된 20개의 균주 (표 1)가 Th17 세포를 유도할 수 있는 능력이 있는지 여부를 조사하기 위해, 20개의 균주 모두를 배양하고, 혼합하여 칵테일을 제조하고, 상기 칵테일을 GF 마우스에 경구적으로 접종하였다. 단리된 20개의 균주를 개별적으로 혐기성 챔버 (코이 라보라토리 프로덕츠(Coy Laboratory Products))에서 엄격한 혐기성 조건 (80% N₂, 10% H₂, 10% CO₂)하에 37℃에서 새들러 또는 PYG 브로쓰 중에서 배양한 후, 동량의 배지 부피와 혼합하여 박테리아 혼합물을 제조하였다. 분취량의 박테리아 혼합물을 마우스에 경구적으로 접종하였다 (0.5 ml/마우스). 4주 경과 후, 결장 및 소장을 수집하고, Th17 및 Th1 세포에 대하여 분석하였다. 표시된 마우스의 결장 점막고유층 및 소장 점막고유층에서 CD4+T 세포 집단내 IL-17+ 세포 및 IFN-g+의 비율(%)이 도 3에 제시되어 있다. 20개의 균주로 집락이 형성된 마우스에서, Th17 세포의 강력한 유도가 관찰되었다.

서열번호: 2H6, 1B11, 1D10, 2E3, 1C12, 2G4, 2H11, 1E11, 2D9, 2F7, 1D1, 1F8, 1C2, 1D4, 1E3, 1A9, 2G11, 2E1, 1F7, 1D2는 각각 서열번호: 1-20이다.

산업상 적용가능성

상기 기술된 바와 같이, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 특정 인간 유래 박테리아 또는 박테리아로부터 유래된 상청액 등을 이용함으로써 Th17의 증식 또는 축적을 유도하기 위한 조성물로서, 탁월하고, 특징이 잘 규명되어 있는 것인 조성물을 제공할 수 있다. 박테리아 조성물은 면역 반응을 촉진시키는 효과를 가지는 바, 박테리아 조성물은 예를 들어, 감염을 치료하는 데 뿐만 아니라, 점막 백신의 성분으로서 감염을 예방하는 데에도 사용될 수 있다. 추가로, 건강한 개체는 예컨대, 식품 또는 음료 (예컨대, 건강 식품)로 박테리아 조성물을 쉽게 및 일상적으로 섭취함으로써 그의 면역 기능을 개선시킬 수 있다.

본 출원은 미국 가특허 출원 번호 61/978,182 (출원일: 2014년 4월 10일)를 기반으로 한 것이며, 상기 특허 출원은 그 내용 전문이 본원에 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> RIKEN THE UNIVERSITY OF TOKYO SCHOOL CORPORATION, AZABU VETERINARY MEDICINE EDUCATIONAL INSTITUTION <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR INDUCTION OF TH17 CELLS <130> IPA161350-JP <150> US 61/978,182 <151> 2014-04-10 <160> 26 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1419 <212> DNA <213> Clostridium ramosum <400> 1 ggggcggctg ctataatgca gtcgacgcga gcacttgtgc tcgagtggcg aacgggtgag 60 taatacataa gtaacctgcc ctagacaggg ggataactat tggaaacgat agctaagacc 120 gcatatgtac ggacactgca tggtgaccgt attaaaagtg cctcaaagca ctggtagagg 180 atggacttat ggcgcattag ctggttggcg gggtaacggc ccaccaaggc gacgatgcgt 240 agccgacctg agagggtgac cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg 300 gaggcagcag tagggaattt tcggcaatgg gggaaaccct gaccgagcaa cgccgcgtga 360 aggaagaagg ttttcggatt gtaaacttct gttataaagg aagaacggcg gctacaggaa 420 atggtagccg agtgacggta ctttattaga aagccacggc taactacgtg ccagcagccg 480 cggtaatacg taggtggcaa gcgttatccg gaattattgg gcgtaaagag ggagcaggcg 540 gcagcaaggg tctgtggtga aagcctgaag cttaacttca gtaagccata gaaaccaggc 600 agctagagtg caggagagga tcgtggaatt ccatgtgtag cggtgaaatg cgtagatata 660 tggaggaaca ccagtggcga aggcgacgat ctggcctgca actgacgctc agtcccgaaa 720 gcgtggggag caaataggat tagataccct agtagtccac gccgtaaacg atgagtacta 780 agtgttggat gtcaaagttc agtgctgcag ttaacgcaat aagtactccg cctgagtagt 840 acgttcgcaa gaatgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg 900 tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatactc ataaaggctc 960 cagagatgga gagatagcta tatgagatac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt 1020 cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tatcgttagt taccatcatt 1080 aagttgggga ctctagcgag actgccagtg acaagctgga ggaaggcggg gatgacgtca 1140 aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta caatggatgg tgcagaggga 1200 agcgaagccg cgaggtgaag caaaacccat aaaaccattc tcagttcgga ttgtagtctg 1260 caactcgact acatgaagtt ggaatcgcta gtaatcgcga atcagcatgt cgcggtgaat 1320 acgttctcgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccacga gagttgataa cacccgaagc 1380 cggtggccta accgcaagga aggagcttct aaggtggat 1419 <210> 2 <211> 1433 <212> DNA <213> Bifidobacterium pseudolongum subsp. Pseudolongum <400> 2 ctgcggcgtc taccatgcag tcgaacggga tccctggcag cttgctgccg gggtgagagt 60 ggcgaacggg tgagtaatgc gtgaccgacc tgccccatgc accggaatag ctcctggaaa 120 cgggtggtaa tgccggatgt tccacatgag cgcatgcgag tgtgggaaag gctttttgcg 180 gcatgggatg gggtcgcgtc ctatcagctt gttggtgggg taacggccta ccaaggcgtt 240 gacgggtagc cggcctgaga gggcgaccgg ccacattggg actgagatac ggcccagact 300 cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgc acaatgggcg caagcctgat gcagcgacgc 360 cgcgtgcggg atggaggcct tcgggttgta aaccgctttt gttcaagggc aaggcacggt 420 ctttggccgt gttgagtgga ttgttcgaat aagcaccggc taactacgtg ccagcagccg 480 cggtaatacg tagggtgcaa gcgttatccg gatttattgg gcgtaaaggg ctcgtaggcg 540 gttcgtcgcg tccggtgtga aagtccatcg cttaacggtg gatccgcgcc gggtacgggc 600 gggcttgagt gcggtagggg agactggaat tcccggtgta acggtggaat gtgtagatat 660 cgggaagaac accaatggcg aaggcaggtc tctgggccgt tactgacgct gaggagcgaa 720 agcgtgggga gcgaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac ggtggatgct 780 ggatgtgggg ccctttttcc gggtcctgtg tcggagctaa cgcgttaagc atcccgcctg 840 gggagtacgg ccgcaaggct aaaactcaaa gaaattgacg ggggcccgca caagcggcgg 900 agcatgcgga ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc tgggcttgac atgtgccgga 960 cgcccgcgga gacgcgggtt cccttcgggg ccggttcaca ggtggtgcat ggtcgtcgtc 1020 agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctc gccgcgtgtt 1080 gccagcgggt catgccggga actcacgtgg gaccgccggg gttaactcgg aggaaggtgg 1140 ggatgacgtc agatcatcat gccccttacg tccagggctt cacgcatgct acaatggccg 1200 gtacaacggg gtgcgacacg gtgacgtggg gcggatccct gaaaaccggt ctcagttcgg 1260 atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagg tggagtcgct agtaatcgcg gatcagcaac 1320 gccgcggtga atgcgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcaagtcat gaaagtgggc 1380 agcacccgaa gacggtggcc taacccttgt ggggggagcc gtctaaggta gtg 1433 <210> 3 <211> 1428 <212> DNA <213> Clostridium lactatifermentans <400> 3 ctgccggctc taccatgcag tcgaacgaag atagttagaa tgagagcttc ggcaggattt 60 ttttctatct tagtggcgga cgggtgagta acgtgtgggc aacctgccct gtactgggga 120 ataatcattg gaaacgatga ctaataccgc atgtggtcct cggaaggcat cttctgagga 180 agaaaggatt tattcggtac aggatgggcc cgcatctgat tagctagttg gtgagataac 240 agcccaccaa ggcgacgatc agtagccgac ctgagagggt gatcggccac attgggactg 300 agacacggcc caaactccta cgggaggcag cagtggggaa tattgcacaa tgggcgaaag 360 cctgatgcag caacgccgcg tgaaggatga agggtttcgg ctcgtaaact tctatcaata 420 gggaagaaac aaatgacggt acctaaataa gaagccccgg ctaactacgt gccagcagcc 480 gcggtaatac gtagggggca agcgttatcc ggaattactg ggtgtaaagg gagcgtaggc 540 ggcatggtaa gccagatgtg aaagccttgg gcttaacccg aggattgcat ttggaactat 600 caagctagag tacaggagag gaaagcggaa ttcctagtgt agcggtgaaa tgcgtagata 660 ttaggaagaa caccagtggc gaaggcggct ttctggactg aaactgacgc tgaggctcga 720 aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa cgatgagtgc 780 taggtgtcgg ggaggaatcc tcggtgccgc agctaacgca ataagcactc cacctgggga 840 gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca 900 tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaagg cttgacatcc cgatgaccgt 960 cctagagata ggacttctct tcggagcatc ggtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc 1020 tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttatc ttcagtagcc 1080 atcattcagt tgggcactct ggagagactg ccgtggataa cacggaggaa ggtggggatg 1140 acgtcaaatc atcatgcccc ttatgtcttg ggctacacac gtgctacaat ggctggtaac 1200 aaagtgacgc gagacggcga cgttaagcaa atcacaaaaa cccagtccca gttcggattg 1260 tagtctgcaa ctcgactaca tgaagctgga atcgctagta atcgcgaatc agcatgtcgc 1320 ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac accatgggag ttggaagcac 1380 ccgaagtcgg tgacctaacc gtaaggaaga gccgccgaag taggggat 1428 <210> 4 <211> 1422 <212> DNA <213> Blautia sp. canine oral taxon 143 <400> 4 cggcgctcta ccatgcagtc gacgaagcga tttgaatgaa gttttcggat ggattttaaa 60 ttgactgagt ggcggacggg tgagtaacgc gtgggtaacc tgccccatac agggggataa 120 cagttagaaa tgactgctaa taccgcataa gaccacagcg ccgcatggtg caggggtaaa 180 aactccggtg gtatgggatg gacccgcgtc tgattagctt gttggcgggg taacggccca 240 ccaaggcgac gatcagtagc cgacctgaga gggtgaccgg ccacattggg actgagacac 300 ggcccaaact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgc acaatggggg aaaccctgat 360 gcagcgacgc cgcgtgagtg atgaagtatt tcggtatgta aagctctatc agcagggaag 420 aaaatgacgg tacctgacta agaagccccg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata 480 cgtagggggc aagcgttatc cggatttact gggtgtaaag ggagcgtaga cggctgtgca 540 agtctggagt gaaagcccgg ggctcaaccc cgggactgct ttggaaactg tacggctgga 600 gtgctggaga ggcaagcgga attcctagtg tagcggtgaa atgcgtagat attaggagga 660 acaccagtgg cgaaggcggc ttgctggaca gtaactgacg ttgaggctcg aaagcgtggg 720 gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgaatg ctaggtgtcg 780 gggagcaaag ctcttcggtg ccgccgcaaa cgcaataagc attccacctg gggagtacgt 840 tcgcaagaat gaaactcaaa ggaattgacg gggacccgca caagcggtgg agcatgtggt 900 ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aagtcttgac atccccctga ccggcaagta 960 atgtcgcctt tccttcggga caggggagac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt 1020 cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tatcctcagt agccagcagg 1080 tgaagctggg cactctgtgg agactgccag ggataacctg gaggaaggtg gggacgacgt 1140 caaatcatca tgccccttat gacttgggct acacacgtgc tacaatggcg taaacaaagg 1200 gaagcgagag ggtgacctgg agcaaatccc aaaaataacg tctcagttcg gattgtagtc 1260 tgcaactcga ctacatgaag ctggaatcgc tagtaatcgc gaatcagcat gtcgcggtga 1320 atacgttccc gggtcttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtcagc aacgcccgaa 1380 gccggtgacc taaccgcaag gaaggagccg tcgaagtcgt cg 1422 <210> 5 <211> 1425 <212> DNA <213> cf. Clostridium sp. MLG055 <400> 5 cggcgctgct atactgcagt cgaacgaagc gaaggtagct tgctatcgga gcttagtggc 60 gaacgggtga gtaacacgta gataacctgc ctgtatgacc gggataacag ttggaaacga 120 ctgctaatac cggataggca gagaggaggc atctcttctc tgttaaagtt gggatacaac 180 gcaaacagat ggatctgcgg tgcattagct agttggtgag gtaacggccc accaaggcga 240 tgatgcatag ccggcctgag agggcgaacg gccacattgg gactgagaca cggcccaaac 300 tcctacggga ggcagcagta gggaattttc ggcaatgggg gaaaccctga ccgagcaatg 360 ccgcgtgagt gaagacggcc ttcgggttgt aaagctctgt tgtaagggaa gaacggcata 420 gagagggaat gctctatgag tgacggtacc ttaccagaaa gccacggcta actacgtgcc 480 agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttatccgga attattgggc gtaaagggtg 540 cgtaggcggc tggataagtc tgaggtaaaa gcccgtggct caaccacggt aagccttgga 600 aactgtctgg ctggagtgca ggagaggaca atggaattcc atgtgtagcg gtaaaatgcg 660 tagatatatg gaggaacacc agtggcgaag gcggttgtct ggcctgtaac tgacgctgaa 720 gcacgaaagc gtggggagca aataggatta gataccctag tagtccacgc cgtaaacgat 780 gagaactaag tgttggggaa actcagtgct gcagttaacg caataagttc tccgcctggg 840 gagtatgcac gcaagtgtga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag 900 tatgtggttt aattcgacgc aacgcgaaga accttaccag gccttgacat ggtatcaaag 960 gccctagaga tagggagata ggtatgatac acacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc 1020 gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttgtttc tagttaccaa 1080 cagtaagatg gggactctag agagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac 1140 gtcaaatcat catgcccctt atggcctggg ctacacacgt actacaatgg cgtctacaaa 1200 gagcagcgag caggtgactg taagcgaatc tcataaagga cgtctcagtt cggattgaag 1260 tctgcaactc gacttcatga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc atgccgcggt 1320 gaatacgttc tcgggccttg tacacaccgc ccgtcaaacc atgggagttg ataatacccg 1380 aagccggtgg cctaaccgaa aggagggagc cgtcgaagta gattg 1425 <210> 6 <211> 1431 <212> DNA <213> Clostridium innocuum <400> 6 cggcgctgct ataatgcagt cgaacgaagt ttcgaggaag cttgcttcca aagagactta 60 gtggcgaacg ggtgagtaac acgtaggtaa cctgcccatg tgtccgggat aactgctgga 120 aacggtagct aaaaccggat aggtatacag agcgcatgct cagtatatta aagcgcccat 180 caaggcgtga acatggatgg acctgcggcg cattagctag ttggtgaggt aacggcccac 240 caaggcgatg atgcgtagcc ggcctgagag ggtaaacggc cacattggga ctgagacacg 300 gcccaaactc ctacgggagg cagcagtagg gaattttcgt caatggggga aaccctgaac 360 gagcaatgcc gcgtgagtga agaaggtctt cggatcgtaa agctctgttg taagtgaaga 420 acggctcata gaggaaatgc tatgggagtg acggtagctt accagaaagc cacggctaac 480 tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tatccggaat cattgggcgt 540 aaagggtgcg taggtggcgt actaagtctg tagtaaaagg caatggctca accattgtaa 600 gctatggaaa ctggtatgct ggagtgcaga agagggcgat ggaattccat gtgtagcggt 660 aaaatgcgta gatatatgga ggaacaccag tggcgaaggc ggtcgcctgg tctgtaactg 720 acactgaggc acgaaagcgt ggggagcaaa taggattaga taccctagta gtccacgccg 780 taaacgatga gaactaagtg ttggaggaat tcagtgctgc agttaacgca ataagttctc 840 cgcctgggga gtatgcacgc aagtgtgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag 900 cggtggagta tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggc cttgacatgg 960 atgcaaatgc cctagagata gagagataat tatggatcac acaggtggtg catggttgtc 1020 gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgtcgcat 1080 gttaccagca tcaagttggg gactcatgcg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg 1140 gggatgacgt caaatcatca tgccccttat ggcctgggct acacacgtac tacaatggcg 1200 accacaaaga gcagcgacac agtgatgtga agcgaatctc ataaaggtcg tctcagttcg 1260 gattgaagtc tgcaactcga cttcatgaag tcggaatcgc tagtaatcgc agatcagcat 1320 gctgcggtga atacgttctc gggccttgta cacaccgccc gtcaaaccat gggagtcagt 1380 aatacccgaa gccggtggca taaccgtaag gaggagccgt cgaagtgact g 1431 <210> 7 <211> 1428 <212> DNA <213> Clostridium orbiscindens <400> 7 agggcggctc ttaaatgcag tcgaacgggg tgctcatgac ggaggattcg tccaacggat 60 tgagttacct agtggcggac gggtgagtaa cgcgtgagga acctgccttg gagaggggaa 120 taacactccg aaaggagtgc taataccgca tgatgcagtt gggtcgcatg gctctgactg 180 ccaaagattt atcgctctga gatggcctcg cgtctgatta gctagtaggc ggggtaacgg 240 cccacctagg cgacgatcag tagccggact gagaggttga ccggccacat tgggactgag 300 acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttgggcaatg ggcgcaagcc 360 tgacccagca acgccgcgtg aaggaagaag gctttcgggt tgtaaacttc ttttgtcggg 420 gacgaaacaa atgacggtac ccgacgaata agccacggct aactacgtgc cagcagccgc 480 ggtaatacgt aggtggcaag cgttatccgg atttactggg tgtaaagggc gtgtaggcgg 540 gattgcaagt cagatgtgaa aactgggggc tcaacctcca gcctgcattt gaaactgtag 600 ttcttgagtg ctggagaggc aatcggaatt ccgtgtgtag cggtgaaatg cgtagatata 660 cggaggaaca ccagtggcga aggcggattg ctggacagta actgacgctg aggcgcgaaa 720 gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atggatacta 780 ggtgtggggg gtctgacccc ctccgtgccg cagttaacac aataagtatc ccacctgggg 840 agtacgatcg caaggttgaa actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagt 900 atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg gcttgacatc ccactaacga 960 ggcagagatg cgttaggtgc ccttcgggga aagtggagac aggtggtgca tggttgtcgt 1020 cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tattgttagt 1080 tgctacgcaa gagcactcta gcgagactgc cgttgacaaa acggaggaag gtggggacga 1140 cgtcaaatca tcatgcccct tatgtcctgg gccacacacg tactacaatg gtggttaaca 1200 gagggaggca ataccgcgag gtggagcaaa tccctaaaag ccatcccagt tcggattgca 1260 ggctgaaacc cgcctgtatg aagttggaat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg 1320 tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgagagtc gggaacaccc 1380 gaagtccgta gcctaaccgc aaggagggcg cggccgaaag ttgttcat 1428 <210> 8 <211> 1409 <212> DNA <213> Ruminococcus sp. 16442 <400> 8 cgggggctgc taccatgcag tcgaacggag ttaagagagc ttgctctttt aacttagtgg 60 cggacgggtg agtaacgcgt gagtaacctg cctttcagag gggaataaca ttctgaaaag 120 aatgctaata ccgcatgaga tcgtagtatc gcatggtaca gcgaccaaag gagcaatccg 180 ctgaaagatg gactcgcgtc cgattagcta gttggtgaga taaaggccca ccaaggcgac 240 gatcggtagc cggactgaga ggttgaacgg ccacattggg actgagacac ggcccagact 300 cctacgggag gcagcagtgg gggatattgc acaatggggg aaaccctgat gcagcaacgc 360 cgcgtgaagg aagaaggtct tcggattgta aacttctgtc ctcagggaag ataatgacgg 420 tacctgagga ggaagctccg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggagc 480 aagcgttgtc cggatttact gggtgtaaag ggtgcgtagg cggatctgca agtcagtagt 540 gaaatcccag ggcttaaccc tggaactgct attgaaactg tgggtcttga gtgaggtaga 600 ggcaggcgga attcccggtg tagcggtgaa atgcgtagag atcgggagga acaccagtgg 660 cgaaggcggc ctgctgggcc ttaactgacg ctgaggcacg aaagcatggg tagcaaacag 720 gattagatac cctggtagtc catgccgtaa acgatgatta ctaggtgtgg gtggtctgac 780 cccatccgtg ccggagttaa cacaataagt aatccacctg gggagtacgg ccgcaaggtt 840 gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcagtgg agtatgtggt ttaattcgaa 900 gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atcctgctaa cgaggtagag atacgttagg 960 tgcccttcgg ggaaagcaga gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1020 tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccctgctatt agttgctacg caagagcact 1080 ctaataggac tgccgttgac aaaacggagg aaggtgggga cgacgtcaaa tcatcatgcc 1140 ccttatgacc tgggctacac acgtactaca atggccgtca acagagagaa gcaaagccgc 1200 gaggtggagc aaaactctaa aaacggtccc agttcggatc gtaggctgca acccgcctac 1260 gtgaagttgg aattgctagt aatcgcggat catcatgccg cggtgaatac gttcccgggc 1320 cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gccggtaata cccgaagtca gtagtctaac 1380 cgcaagggga cgcgccgaaa ggtggagtg 1409 <210> 9 <211> 1426 <212> DNA <213> Ruminococcus gnavus <400> 9 ctggcgggtg ctaccatgca gtcgagcgaa gcacttttgc ggatttcttc ggattgaagc 60 aattgtgact gagcggcgga cgggtgagta acgcgtgggt aacctgcctc atacaggggg 120 ataacagttg gaaacggctg ctaataccgc ataagcgcac agtaccgcat ggtaccgtgt 180 gaaaaactcc ggtggtatga gatggacccg cgtctgatta gctagttggt ggggtaacgg 240 cctaccaagg cgacgatcag tagccgacct gagagggtga ccggccacat tgggactgag 300 acacggccca aactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttgcacaatg ggggaaaccc 360 tgatgcagcg acgccgcgtg agcgatgaag tatttcggta tgtaaagctc tatcagcagg 420 gaagaaaatg acggtacctg actaagaagc cccggctaac tacgtgccag cagccgcggt 480 aatacgtagg gggcaagcgt tatccggatt tactgggtgt aaagggagcg tagacggcat 540 ggcaagccag atgtgaaagc ccggggctca accccgggac tgcatttgga actgtcaggc 600 tagagtgtcg gagaggaaag cggaattcct agtgtagcgg tgaaatgcgt agatattagg 660 aggaacacca gtggcgaagg cggctttctg gacgatgact gacgttgagg ctcgaaagcg 720 tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg aatactaggt 780 gtcgggtggc aaagccattc ggtgccgcag caaacgcaat aagtattcca cctggggagt 840 acgttcgcaa gaatgaaact caaaggaatt gacggggacc 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gatcggtagc cggactgaga ggttgatcgg ccacattggg actgagacac ggcccagact 300 cctacgggag gcagcagtgg gggatattgc acaatggagg aaactctgat gcagcgacgc 360 cgcgtgaggg aagacggtct tcggattgta aacctctgtc tttggggacg ataatgacgg 420 tacccaagga ggaagctccg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggagc 480 gagcgttgtc cggaattact gggtgtaaag ggagcgtagg cggggtctca agtcgaatgt 540 taaatctacc ggctcaactg gtagctgcgt tcgaaactgg ggctcttgag tgaagtagag 600 gcaggcggaa ttcctagtgt agcggtgaaa tgcgtagata ttaggaggaa caccagtggc 660 gaaggcggcc tgctgggctt ttactgacgc tgaggctcga aagcgtgggg agcaaacagg 720 attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa cgatgattac taggtgtggg gggactgacc 780 ccttccgtgc cggagttaac acaataagta atccacctgg ggagtacgac cgcaaggttg 840 aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcagtgga ttatgtggtt taattcgaag 900 caacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tcgagtgacg gctctagaga tagagctttc 960 cttcgggaca caaagacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 1020 gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat tattagttgc tacattcagt tgagcactct 1080 aatgagactg 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480 aatacgtagg gagcaagcgt tatccggatt tactgggtgt aaagggcgcg caggcgggcc 540 ggcaagttgg gagtgaaatc ccggggctta accccggaac tgctttcaaa actgctggtc 600 ttgagtgatg gagaggcagg cggaattccg tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatacgg 660 aggaacacca gtggcgaagg cggcctgctg gacattaact gacgctgagg cgcgaaagcg 720 tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg gatactaggt 780 gtgggaggta ttgacccctt ccgtgccgca gttaacacaa taagtatccc acctggggag 840 tacggccgca aggttgaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc agtggagtat 900 gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatccc gatgaccggc 960 gtagagatac gccctctctt cggagcatcg gtgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct 1020 cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca acccttacgg ttagttgata 1080 cgcaagatca ctctagccgg actgccgttg acaaaacgga ggaaggtggg gacgacgtca 1140 aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtacta caatggcagt catacagagg 1200 gaagcaatac cgcgaggtgg agcaaatccc taaaagctgt cccagttcag attgcaggct 1260 gcaacccgcc tgcatgaagt cggaattgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa 1320 tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg agagccgtca atacccgaag 1380 tccgtagcct aaccgcaagg gggcgcgccg aagttacgt 1419 <210> 12 <211> 1423 <212> DNA <213> Clostridium hathewayi <400> 12 atcgggtgct acctgcaagt cgagcgaagc ggtttcgatg aagttttcgg atggaattga 60 aattgactta gcggcggacg ggtgagtaac gcgtgggtaa cctgccttac actgggggat 120 aacagttaga aatgactgct aataccgcat aagcgcacag ggccgcatgg tctggtgcga 180 aaaactccgg tggtgtaaga tggacccgcg tctgattagg tagttggtgg ggtaacggcc 240 caccaagccg acgatcagta gccgacctga gagggtgacc ggccacattg ggactgagac 300 acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt ggacaatggg cgaaagcctg 360 atccagcgac gccgcgtgag tgaagaagta tttcggtatg taaagctcta tcagcaggga 420 agaaaatgac ggtacctgac taagaagccc cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa 480 tacgtagggg gcaagcgtta tccggattta ctgggtgtaa agggagcgta gacggttaag 540 caagtctgaa gtgaaagccc ggggctcaac cccggtactg ctttggaaac tgtttgactt 600 gagtgcagga gaggtaagtg gaattcctag tgtagcggtg aaatgcgtag atattaggag 660 gaacaccagt ggcgaaggcg gcttactgga ctgtaactga cgttgaggct cgaaagcgtg 720 gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgaa tactaggtgt 780 cgggggacaa cgtccttcgg tgccgccgct aacgcaataa gtattccacc tggggagtac 840 gttcgcaaga atgaaactca aaggaattga cggggacccg cacaagcggt ggagcatgtg 900 gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaagtcttg acatcccatt gaaaatcctt 960 taaccgtggt ccctcttcgg agcaatggag acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt 1020 gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttatcctta gtagccagca 1080 catgatggtg ggcactctgg ggagactgcc agggataacc tggaggaagg tggggatgac 1140 gtcaaatcat catgcccctt atgatttggg ctacacacgt gctacaatgg cgtaaacaaa 1200 gggaagcaaa ggagcgatct ggagcaaacc ccaaaaataa cgtctcagtt cggattgcag 1260 gctgcaactc gcctgcatga agctggaatc gctagtaatc gcgaatcaga atgtcgcggt 1320 gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagttg gtaacgcccg 1380 aagtcagtga cccaaccgta aggaggagcg ccgaaggcga ggt 1423 <210> 13 <211> 1423 <212> DNA <213> Bifidobacterium breve <400> 13 cggggctgct taaatgcagt cgaacgggat ccatcaagct tgcttggtgg tgagagtggc 60 gaacgggtga gtaatgcgtg accgacctgc cccatgcacc ggaatagctc ctggaaacgg 120 gtggtaatgc cggatgctcc atcacactgc atggtgtgtt gggaaagcct ttgcggcatg 180 ggatggggtc gcgtcctatc agcttgatgg cggggtaacg gcccaccatg gcttcgacgg 240 gtagccggcc tgagagggcg accggccaca ttgggactga gatacggccc agactcctac 300 gggaggcagc agtggggaat attgcacaat gggcgcaagc ctgatgcagc gacgccgcgt 360 gagggatgga ggccttcggg ttgtaaacct cttttgttag ggagcaaggc attttgtgtt 420 gagtgtacct ttcgaataag caccggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag 480 ggtgcaagcg ttatccggaa ttattgggcg taaagggctc gtaggcggtt cgtcgcgtcc 540 ggtgtgaaag tccatcgctt aacggtggat ccgcgccggg tacgggcggg cttgagtgcg 600 gtaggggaga ctggaattcc cggtgtaacg gtggaatgtg tagatatcgg gaagaacacc 660 aatggcgaag gcaggtctct gggccgttac tgacgctgag gagcgaaagc gtggggagcg 720 aacaggatta gataccctgg tagtccacgc cgtaaacggt ggatgctgga tgtggggccc 780 gttccacggg ttccgtgtcg gagctaacgc gttaagcatc ccgcctgggg agtacggccg 840 caaggctaaa actcaaagaa attgacgggg gcccgcacaa gcggcggagc atgcggatta 900 attcgatgca acgcgaagaa ccttacctgg gcttgacatg ttcccgacga tcccagagat 960 ggggtttccc ttcggggcgg gttcacaggt ggtgcatggt cgtcgtcagc tcgtgtcgtg 1020 agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aaccctcgcc ccgtgttgcc agcggattgt 1080 gccgggaact cacgggggac cgccggggtt aactcggagg aaggtgggga tgacgtcaga 1140 tcatcatgcc ccttacgtcc agggcttcac gcatgctaca atggccggta caacgggatg 1200 cgacagcgcg agctggagcg gatccctgaa aaccggtctc agttcggatc gcagtctgca 1260 actcgactgc gtgaaggcgg agtcgctagt aatcgcgaat cagcaacgtc gcggtgaatg 1320 cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc aagtcatgaa agtgggcagc acccgaagcc 1380 ggtggcctaa ccccttgcgg gagggagccg tctaaggtag gtt 1423 <210> 14 <211> 1425 <212> DNA <213> Ruminococcus sp. M-1 <400> 14 cgggcgctgc ttacctgcag tcgagcgaag cacttgagcg gatttcttcg gattgaagtt 60 tttttgactg agcggcggac gggtgagtaa cgcgtgggta acctgcctca tacaggggga 120 taacagttag aaatggctgc taataccgca taagcgcaca ggaccgcatg gtctggtgtg 180 aaaaactccg gtggtatgag atggacccgc gtctgattag ctagttggag gggtaacggc 240 ccaccaaggc gacgatcagt agccggcctg agagggtgaa cggccacatt gggactgaga 300 cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gggaaaccct 360 gatgcagcga cgccgcgtga aggaagaagt atctcggtat gtaaacttct atcagcaggg 420 aagaaaatga cggtacctga ctaagaagcc ccggctaact acgtgccagc agccgcggta 480 atacgtaggg ggcaagcgtt atccggattt actgggtgta aagggagcgt agacggaaga 540 gcaagtctga tgtgaaaggc tggggcttaa ccccaggact gcattggaaa ctgtttttct 600 agagtgccgg agaggtaagc ggaattccta gtgtagcggt gaaatgcgta gatattagga 660 ggaacaccag tggcgaaggc ggcttactgg acggtaactg acgttgaggc tcgaaagcgt 720 ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga atactaggtg 780 tcgggtggca aagccattcg gtgccgcagc aaacgcaata agtattccac ctggggagta 840 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ggttggtgag gtaacggctc accaaggcga cgatgcgtag 240 ccgacctgag agggtggacg gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga 300 ggcagcagta gggaattttc ggcaatgggg gaaaccctga ccgagcaacg ccgcgtgagg 360 gaagaagtat ttcggtatgt aaacctctgt tataaaggaa gaacggtatg aataggaaat 420 gattcataag tgacggtact ttatgagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg 480 gtaatacgta ggtggcgagc gttatccgga atcattgggc gtaaagaggg agcaggcggc 540 aatagaggtc tgcggtgaaa gcctgaagct aaacttcagt aagccgtgga aaccaaatag 600 ctagagtgca gtagaggatc gtggaattcc atgtgtagcg gtgaaatgcg tagatatatg 660 gaggaacacc agtggcgaag gcgacgatct gggctgcaac tgacgctcag tcccgaaagc 720 gtggggagca aataggatta gataccctag tagtccacgc cgtaaacgat gagtactaag 780 tgttgggggt caaacctcag tgctgcagtt aacgcaataa gtactccgcc tgagtagtac 840 gttcgcaaga atgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg 900 gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg acatacctct aaaggctcta 960 gagatagaga gatagctata ggggatacag gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg 1020 tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg tcgctagtta ccatcattaa 1080 gttggggact ctagcgagac tgcctctgca aggaggagga aggcggggat gacgtcaaat 1140 catcatgccc cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tggacggatc aaagggaagc 1200 gaagccgcga ggtggagcga aacccaaaaa cccgttctca gttcggactg cagtctgcaa 1260 ctcgactgca cgaagttgga atcgctagta atcgcgaatc agaatgtcgc ggtgaatacg 1320 ttctcgggcc ttgtacacac cgcccgtcac accatgagag ttggtaacac ccgaagccgg 1380 tggcttaacc gcaaggagag agcttctaag gtgaat 1416 <210> 16 <211> 1424 <212> DNA <213> Clostridium symbiosum <400> 16 aggcgcgtgc taccatgcag tcgaacgaag caatttaacg gaagttttcg gatggaagtt 60 gaattgactg agtggcggac gggtgagtaa cgcgtgggta acctgccttg tactggggga 120 caacagttag aaatgactgc taataccgca taagcgcaca gtatcgcatg atacagtgtg 180 aaaaactccg gtggtacaag atggacccgc gtctgattag ctagttggta aggtaacggc 240 ttaccaaggc gacgatcagt agccgacctg agagggtgac cggccacatt gggactgaga 300 cacggcccaa actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gcgaaagcct 360 gatgcagcga cgccgcgtga gtgaagaagt atttcggtat gtaaagctct atcagcaggg 420 aagaaaatga cggtacctga ctaagaagcc ccggctaact acgtgccagc agccgcggta 480 atacgtaggg ggcaagcgtt atccggattt actgggtgta aagggagcgt agacggtaaa 540 gcaagtctga agtgaaagcc cgcggctcaa ctgcgggact gctttggaaa ctgtttaact 600 ggagtgtcgg agaggtaagt ggaattccta gtgtagcggt gaaatgcgta gatattagga 660 ggaacaccag tggcgaaggc gacttactgg acgataactg acgttgaggc tcgaaagcgt 720 ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga atactaggtg 780 ttggggagca aagctcttcg gtgccgtcgc aaacgcagta agtattccac ctggggagta 840 cgttcgcaag aatgaaactc aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg tggagcatgt 900 ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatcgatc cgacggggga 960 gtaacgtccc cttcccttcg gggcggagaa gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg 1020 tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttattcta agtagccagc 1080 ggttcggccg ggaactcttg ggagactgcc agggataacc tggaggaagg tggggatgac 1140 gtcaaatcat catgcccctt atgatctggg ctacacacgt gctacaatgg cgtaaacaaa 1200 gagaagcaag accgcgaggt ggagcaaatc tcaaaaataa cgtctcagtt cggactgcag 1260 gctgcaactc gcctgcacga agctggaatc gctagtaatc gcgaatcaga atgtcgcggt 1320 gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtca gtaacgcccg 1380 aagtcagtga cccaaccgca aggaggagcg ccgaaggcga ccgt 1424 <210> 17 <211> 1426 <212> DNA <213> Bacteroides dorei <400> 17 cggtctcggc ttaccatgca gtcgaggggc agcatggtct tagcttgcta aggctgatgg 60 cgaccggcgc acgggtgagt aacacgtatc caacctgccg tctactcttg gccagccttc 120 tgaaaggaag attaatccag gatggcatca tgagttcaca tgtccgcatg attaaaggta 180 ttttccggta gacgatgggg atgcgttcca ttagatagta ggcggggtaa cggcccacct 240 agtcaacgat ggataggggt tctgagagga aggtccccca cattggaact gagacacggt 300 ccaaactcct acgggaggca gcagtgagga atattggtca atgggcgatg gcctgaacca 360 gccaagtagc gtgaaggatg actgccctat gggttgtaaa cttcttttat aaaggaataa 420 agtcgggtat gcatacccgt ttgcatgtac tttatgaata aggatcggct aactccgtgc 480 cagcagccgc ggtaatacgg aggatccgag cgttatccgg atttattggg tttaaaggga 540 gcgtagatgg atgtttaagt cagttgtgaa agtttgcggc tcaaccgtaa aattgcagtt 600 gatactggat gtcttgagtg cagttgaggc aggcggaatt cgtggtgtag cggtgaaatg 660 cttagatatc acgaagaact ccgattgcga aggcagcctg ctaagctgca actgacattg 720 aggctcgaaa gtgtgggtat caaacaggat tagataccct ggtagtccac acggtaaacg 780 atgaatactc gctgtttgcg atatacggca agcggccaag cgaaagcgtt aagtattcca 840 cctggggagt acgccggcaa cggtgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg 900 gaggaacatg tggtttaatt cgatgatacg cgaggaacct tacccgggct taaattgcac 960 tcgaatgatc cggaaacggt tcagctagca atagcgagtg tgaaggtgct gcatggttgt 1020 cgtcagctcg tgccgtgagg tgtcggctta agtgccataa cgagcgcaac ccttgttgtc 1080 agttactaac aggtgatgct gaggactctg acaagactgc catcgtaaga tgtgaggaag 1140 gtggggatga cgtcaaatca gcacggccct tacgtccggg gctacacacg tgttacaatg 1200 gggggtacag agggccgcta ccacgcgagt ggatgccaat ccctaaaacc cctctcagtt 1260 cggactggag tctgcaaccc gactccacga agctggattc gctagtaatc gcgcatcagc 1320 cacggcgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcaagc catgggagcc 1380 gggggtacct gaagtgcgta accgcgagga tcgccctagg taatga 1426 <210> 18 <211> 1428 <212> DNA <213> Anaerostipes caccae <400> 18 cggcggctgc ttaccatgca gtcgaacgaa gcatttagga ttgaagtttt cggatggatt 60 tcctatatga ctgagtggcg gacgggtgag taacgcgtgg ggaacctgcc ctatacaggg 120 ggataacagc tggaaacggc tgctaatacc gcataagcgc acagaatcgc atgattcagt 180 gtgaaaagcc ctggcagtat aggatggtcc cgcgtctgat tagctggttg gtgaggtaac 240 ggctcaccaa ggcgacgatc agtagccggc ttgagagagt gaacggccac attgggactg 300 agacacggcc caaactccta cgggaggcag cagtggggaa tattgcacaa tgggggaaac 360 cctgatgcag cgacgccgcg tgagtgaaga agtatttcgg tatgtaaagc tctatcagca 420 gggaagaaaa cagacggtac ctgactaaga agccccggct aactacgtgc cagcagccgc 480 ggtaatacgt agggggcaag cgttatccgg aattactggg tgtaaagggt gcgtaggtgg 540 catggtaagt cagaagtgaa agcccggggc ttaaccccgg gactgctttt gaaactgtca 600 tgctggagtg caggagaggt aagcggaatt cctagtgtag cggtgaaatg cgtagatatt 660 aggaggaaca ccagtggcga aggcggctta ctggactgtc actgacactg atgcacgaaa 720 gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgaatacta 780 ggtgtcgggg ccgtagaggc ttcggtgccg cagcaaacgc agtaagtatt ccacctgggg 840 agtacgttcg caagaatgaa 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ctcaaccctg ggactgcttt 240 ggaaactgtt ttgctagagt gtcggagagg taagtggaat tcctagtgta gcggtgaaat 300 gcgtagatat taggaggaac accagtggcg aaggcggctt actggacgat aactgacgtt 360 gaggctcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac 420 gatgaatgct aggtgttggg gggcaaagcc cttcggtgcc gtcgcaaacg cagtaagcat 480 tccacctggg gagtacgttc gcaagaatga aactcaaagg aattgacggg gacccgcaca 540 agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccaa gtcttgacat 600 cctcttgacc ggcgtgtaac ggcgccttcc cttcggggca agagagacag gtggtgcatg 660 gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctta 720 tccttagtag ccagcaggta aagctgggca ctctagggag actgccaggg ataacctgga 780 ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga tttgggctac acacgtgcta 840 caatggcgta aacaaaggga agcaagacag tgatgtggag caaatcccaa aaataacgtc 900 ccagttcgga ctgtagtctg caacccgact acacgaagct ggaatcgcta gtaatcgcga 960 atcagaatgt cgcggtgaat acgttcccgg gtcttgtaca caccgcccgt cacaccatgg 1020 gagtcagcaa cgcccgaagt cagtgaccca actcgcaaga gagggagcgc cgaagtcgtc 1080 at 1082 <210> 20 <211> 1426 <212> DNA <213> Clostridium citroniae <400> 20 ctggcgcggc taccatgcag tcgagcgaag cattacagcg gaagttttcg gatggaagct 60 ttaatgactg agcggcggac gggtgagtaa cgcgtggata acctgcctca tacaggggga 120 taacagttag aaatgactgc taataccgca taagcgcaca gtatcgcatg atacggtgtg 180 aaaaactccg gtggtatgag atggatccgc gtctgattag ttagttggcg gggtaaaggc 240 ccaccaagac gacgatcagt agccggcctg agagggtgaa cggccacatt gggactgaga 300 cacggcccaa actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gggaaaccct 360 gatgcagcga cgccgcgtga gtgaagaagt atttcggtat gtaaagctct atcagcaggg 420 aagaaaatga cggtacctga ctaagaagcc ccggctaact acgtgccagc agccgcggta 480 atacgtaggg ggcaagcgtt atccggattt actgggtgta aagggagcgt agacggcaat 540 gcaagtctgg agtgaaaacc cagggctcaa ccctgggagt gctttggaaa ctgtatagct 600 agagtgctgg agaggtaagt ggaattccta gtgtagcggt gaaatgcgta gatattagga 660 ggaacaccag tggcgaaggc ggcttactgg acagtaactg acgttgaggc tcgaaagcgt 720 ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga atgctaggtg 780 ttggggggca aagcccttcg gtgccgtcgc aaacgcaata agcattccac ctggggagta 840 cgttcgcaag aatgaaactc aaaggaattg acggggaccc gcacaagcgg tggagcatgt 900 ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaagtctt gacatcctcc tgaccggtcc 960 gtaacggggc ctttccttcg ggacaagaga gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg 1020 tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttatcctt agtagccagc 1080 aggtagagct gggcactcta gggagactgc cagggataac ctggaggaag gtggggatga 1140 cgtcaaatca tcatgcccct tatgatttgg gctacacacg tgctacaatg gcgtaaacaa 1200 agggaggcga ccctgcgaag gcaagcaaat cccaaaaata acgtcccagt tcggactgta 1260 gtctgcaacc cgactacacg aagctggaat cgctagtaat cgcgaatcag aatgtcgcgg 1320 tgaatacgtt cccgggtctt gtacacaccg cccgtcacac catgggagtc agcaacgccc 1380 gaagtcagtg acccaactgc aggagaggga gcgccgaagt cgggct 1426 <210> 21 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 454 adaptor sequence <400> 21 ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag 30 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> partial sequence of modified primer 8F <400> 22 agrgtttgat ymtggctcag 20 <210> 23 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 454 adaptor sequence <400> 23 cctatcccct gtgtgccttg gcagtctcag 30 <210> 24 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> partial sequence of modified primer 338R <400> 24 tgctgcctcc cgtaggagt 19 <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 8F <400> 25 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 26 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 1492R <400> 26 ggytaccttg ttacgactt 19

Claims (14)

1. 삭제
2. 활성 성분으로서 클로스트리디움 심비오섬(Clostridium symbiosum), 클로스트리디움 하테와이이(Clostridium hathewayi), 클로스트리디움 시트로니아에(Clostridium citroniae), 클로스트리디움 볼테아에(Clostridium bolteae), 루미노코커스 종 M-1(Ruminococcus sp. M-1), 루미노코커스 그나부스(Ruminococcus gnavus), 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143(Blautia sp. canine oral taxon 143), 안에어로스티페스 카카에(Anaerostipes caccae), 클로스트리디움 락타티페르멘탄스(Clostridium lactatifermentans), 코프로바실러스 카테니포르미스(Coprobacillus cateniformis), 클로스트리디움 라모섬(Clostridium ramosum), cf. 클로스트리디움 종 MLG055(cf. Clostridium sp. MLG055), 클로스트리디움 이노쿰(Clostridium innocuum), 유박테리움 데스몰란스(Eubacterium desmolans), 클로스트리디움 오르비스신덴스(Clostridium orbiscindens), 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스(Anaerotruncus colihominis), 박테로이데스 도레이(Bacteroides dorei), 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검(Bifidobacterium pseudolongum subsp. pseudolongum), 및 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve)를 포함하는, Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 면역원성 조성물.
3. 활성 성분으로서 (a) 본원에서 서열번호 1-20으로 표시된 DNA 서열과 97% 이상의 상동성을 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 함유하는 20종의 박테리아 균주; 또는 (b) 하기: 클로스트리디움 심비오섬, 클로스트리디움 하테와이이, 클로스트리디움 시트로니아에, 클로스트리디움 볼테아에, 루미노코커스 종 M-1, 루미노코커스 그나부스, 블라우티아 종 케이나인 오랄 탁손 143, 안에어로스티페스 카카에, 클로스트리디움 락타티페르멘탄스, 코프로바실러스 카테니포르미스, 클로스트리디움 라모섬, cf. 클로스트리디움 종 MLG055, 클로스트리디움 이노쿰, 유박테리움 데스몰란스, 클로스트리디움 오르비스신덴스, 루미노코커스 종 16442, 안에어로트룬커스 콜리호미니스, 박테로이데스 도레이, 비피도박테리움 슈도롱검 아종 슈도롱검, 및 비피도박테리움 브레베의 16S 서열과 97% 이상의 상동성을 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 함유하는 20종의 박테리아 균주를 포함하는, Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 면역원성 조성물.
4. 삭제
5. 제2항 또는 제3항에 있어서, Th17 세포가 전사 인자 RORgt-양성 Th17 세포 또는 IL-17-생산 Th17 세포인 것인 면역원성 조성물.
6. 제2항 또는 제3항에 있어서, 조성물이 보호 면역 반응을 촉진시키는 것인 면역원성 조성물.
7. 제2항 또는 제3항에 따른 면역원성 조성물 및 제약상 허용되는 성분을 포함하는, 감염성 질환 및 암으로부터 선택되는 질환을 치료하거나, 질환 치료를 지원하거나, 질환의 중증도를 감소시키거나, 또는 질환을 예방하기 위한 제약 조성물.
8. 제2항 또는 제3항에 따른 면역원성 조성물 및 제약상 허용되는 성분을 포함하는 백신 조성물.
9. 삭제
10. 제2항 또는 제3항에 있어서, 개체에서 Th17 세포의 증식 또는 축적을 유도하는 데 사용하기 위한 것인 면역원성 조성물.
11. 제10항에 있어서, Th17 세포의 증식 또는 축적의 지수가, Th17 세포에 의한 RORgt의 발현 및 Th17 세포에 의한 IL-17의 생산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 측정값인 것인 면역원성 조성물.
12. 삭제
13. 제2항 또는 제3항에 따른 면역원성 조성물을 포함하는 식품.
14. 제2항 또는 제3항에 따른 면역원성 조성물을 포함하는 식이 보충제.

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