KR102352960B1

KR102352960B1 - 에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물

Info

Publication number: KR102352960B1
Application number: KR1020190160525A
Authority: KR
Inventors: 김범준; 구교탄
Original assignee: 주식회사 바이오빌리프; 한국유니온제약 주식회사
Priority date: 2019-06-07
Filing date: 2019-12-05
Publication date: 2022-01-19
Also published as: KR20200140681A

Abstract

본 발명은 비휘발성 용매로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합을 포함하는 에피나코나졸-함유 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 약학 조성물은 에피나코나졸의 피부 및 조갑 침투속도 및 투과도를 현저하게 증가시킬 수 있으며, 또한 우수한 안정성을 갖는다.

Description

에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물{Pharmaceutical compositions for topical administration in the form of solution comprising efinaconazole}

본 발명은 에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 비휘발성 용매로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물에 관한 것이다.

에피나코나졸(efinaconazole)은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 트리아졸계 항진균제로서, 화학명은 (2R,3R)-2-(2,4-디플루오로페닐)-3-(4-메틸렌피페리딘-1-일)-1-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)부탄-2-올[(2R,3R)-2-(2,4-difluorophenyl)-3-(4-methylenepiperidin-1-yl)-1-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)butan-2-ol]이다.

<화학식 1>

에피나코나졸은 에르고스테롤 생합성 경로에서 라노스테롤 14α-디메틸라아제(lanosterol 14α-demethylase)를 저해하는 활성을 가지며, 조갑진균증(onychomycosis)의 치료를 위한 10% 국소 용액 제제(상품명: JUBLIA^TM, Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.)로서 시판되고 있다. 상기 국소 용액 제제는, 에피나코나졸과 함께, 휘발성 용매로서 에탄올; 젖음제(wetting agent)로서 사이클로메티콘; 및 비휘발성 용매로서 디이소프로필 아디페이트 및 C₁₂-C₁₅ 알킬 락테이트를 함유한다(미국 특허 제7,214,506호, 제8,039,494호, 제8,486,978호, 제9,302,009호, 제9,566,272호, 제9,861,698호, 제9,877,955호 등).

에피나코나졸을 함유하는 용액 제제는 안정성 문제, 즉 짧은 저장 기간 내에 변색되어 황색으로부터 진한 적색 또는 갈색 범위의 조성물 색을 발생시키는 문제점을 갖는다. 이러한 안정성 문제를 해결하기 위하여, 미국특허 제US 9,662,394호 및 국제특허공개 제WO2015/051183호는 특정 킬레이트화제, 항산화제, 및 산, 즉 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 또는 이의 염, 부틸화 히드록시톨루엔(butylated hydroxytoluene, BHT), 및 시트르산을 포함하는 액체 또는 반고체 조성물을 개시한 바 있다.

한편, 겔제, 연고제, 크림제와 같은 반고형 제제는 용액 제제에 비하여 도포 후 피부 및 조갑에 머무는 시간이 상대적으로 길기 때문에 제제 중 에피나코나졸의 함량을 낮출 수 있는 장점이 있다. 그러나 겔제, 연고제, 크림제와 같은 반고형 제제는 점증제(예를 들어, 아크릴레이트/알킬 아크릴레이트 가교중합체)를 함유하고 있어 끈적거리는(sticky or gluey) 성질을 가지며 피부나 조갑을 통해 흡수되는 데 외용 액제에 비해 시간이 오래 소요된다. 따라서 겔제, 연고제, 크림제와 같은 반고형 제제는 사용자가 도포 후 일상생활을 하는데 불편함을 야기할 수 있어 복약 순응도가 저하되는 단점이 있다.

용액 제제는 에탄올과 같은 휘발성 용매를 비히클로서 함유하고 있으므로 도포 후 끈적거리는(sticky or gluey) 성질을 나타내지 않으며 단시간 내에 용액이 건조되기 때문에 일상생활에 불편함이 없다는 장점이 있다. 그러나 JUBLIA^TM (Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.)를 포함한 종래의 용액 제제는 도포 후 용매의 휘발속도에 비해 상대적으로 약물의 피부 및 조갑 침투속도 및 투과량이 여전히 만족스럽지 못하다. 또한, JUBLIA^TM (Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.)를 포함한 에피나코나졸 외용제는 제형 내 약물의 안정성을 확보하기 위해 특정 킬레이트화제, 항산화제 및 산의 사용을 필요로 하므로 다양한 형태의 외용제의 설계에 있어서 제한적이다.

본 발명자들은 피부 및 조갑 침투속도와 투과도를 개선할 수 있는 에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 제제를 개발하기 위하여 다양한 연구를 수행하였다. 그 결과, 비휘발성 용매로서, 디이소프로필 아디페이트 및 C₁₂-C₁₅ 알킬 락테이트 대신, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합을 사용하여 제제화를 수행할 경우, 에피나코나졸의 피부 및 조갑 침투속도 및 투과도를 현저하게 증가시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 또한, 비휘발성 용매로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합을 포함하는 용액 제제는 다양한 조합의 킬레이트화제, 항산화제, 및 산을 사용한 경우에도 EDTA/BHT/시트르산을 포함하는 공지의 제제와 동등한 안정성을 갖는다는 것이 밝혀졌다.

따라서, 본 발명은 비휘발성 용매로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 태양에 따라, 에피나코나졸, 에탄올, 사이클로메티콘, 및 비휘발성 용매를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물에 있어서, 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합인 것을 특징으로 하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 약학 조성물에 있어서, 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르이고, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르는 조성물 총 중량에 대하여 8 ∼ 20 중량%의 범위로 존재할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 있어서, 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합이고, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르는 조성물 총 중량에 대하여 8 ∼ 20 중량%의 범위로 존재하고, 이소프로필 미리스테이트가 조성물 총 중량에 대하여 5 ∼ 25 중량%의 범위로 존재할 수 있다. 바람직하게는, 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합이고, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르는 조성물 총 중량에 대하여 10 ∼ 15 중량%의 범위로 존재하고, 이소프로필 미리스테이트는 조성물 총 중량에 대하여 6 ∼ 20 중량%의 범위로 존재할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 킬레이트화제, 항산화제, 및 산으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 킬레이트화제는 에틸렌디아민테트라아세트산 또는 이의 소듐염, 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민, 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산일 수 있다. 상기 항산화제는 부틸화 히드록시아니솔 또는 부틸화 히드록시톨루엔일 수 있다. 또한, 상기 산은 소르빈산 또는 시트르산일 수 있다.

비휘발성 용매로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합을 사용하여 제제화를 수행할 경우, 에피나코나졸의 피부 및 조갑 침투속도 및 투과도를 현저하게 증가시킬 수 있다는 것이 본 발명에 의해 밝혀졌다. 따라서 본 발명의 약학 조성물은 높은 복약 순응도 및 피부 및 조갑 침투속도와 투과도를 갖는 국소 투여용 제제로서 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 우수한 안정성을 가짐으로써, 다양한 조합의 킬레이트화제, 항산화제, 및 산을 사용할 수 있다.

도 1 내지 도 3은 본 발명의 약학 조성물의 피부 및 조갑 침투속도와 투과도를 평가한 결과를 나타낸다.
도 1은 본 발명의 약학 조성물의 도포 1일차 조갑 투과농도의 변화를 근거로 조갑 투과도를 계산한 결과를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 약학 조성물의 1주 누적 도포 후 조갑 투과농도의 변화를 측정한 결과를 나타낸다.
도 3은 도 2의 결과를 근거로 조갑 투과도를 계산한 결과를 나타낸다.

본 발명은 에피나코나졸, 에탄올, 사이클로메티콘, 및 비휘발성 용매를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물에 있어서, 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합인 것을 특징으로 하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 약학 조성물은 활성성분으로서 에피나코나졸을 함유한다. 에피나코나졸은 치료학적으로 유효한 양(therapeutically effective amounts)로 함유될 수 있으며, 예를 들어 조성물 총 중량에 대하여 8 ∼ 12 중량%의 범위, 바람직하게는 약 10 중량%로 함유될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 비휘발성 용매로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 또는 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합을 포함함으로써, 에피나코나졸의 피부 및 조갑 투과도를 현저하게 증가시킬 수 있다. 상기 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르로는, 상업적으로 판매되는 트랜스큐톨 P(Transcutol^TM P, Gattefosse)를 사용할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 있어서, 바람직하게는 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르이고, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르는 조성물 총 중량에 대하여 8 ∼ 20 중량%의 범위로 존재할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물에 있어서, 바람직하게는 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합이고, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르는 조성물 총 중량에 대하여 8 ∼ 20 중량%의 범위로 존재하고, 이소프로필 미리스테이트는 조성물 총 중량에 대하여 5 ∼ 25 중량%의 범위로 존재할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르와 이소프로필 미리스테이트의 조합이고, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르는 조성물 총 중량에 대하여 10 ∼ 15 중량%의 범위로 존재하고, 이소프로필 미리스테이트가 조성물 총 중량에 대하여 6 ∼ 20 중량%의 범위로 존재할 수 있다.

일 구현예에서, 에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%, 에탄올 50 ∼ 65 중량%, 사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%, 및 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 8 ∼ 20 중량%를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다. 다른 구현예에서, 에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%, 에탄올 40 ∼ 65 중량%, 사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 8 ∼ 20 중량% 및 이소프로필 미리스테이트 5 ∼ 25 중량%를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%, 에탄올 40 ∼ 65 중량%, 사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 10 ∼ 15 중량% 및 이소프로필 미리스테이트 6 ∼ 20 중량%를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 약학 조성물은 우수한 안정성을 가짐으로써, 다양한 조합의 킬레이트화제, 항산화제, 및 산을 사용한 경우에도. EDTA/BHT/시트르산을 포함하는 공지의 제제와 동등한 안정성을 갖는다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 킬레이트화제, 항산화제, 및 산으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 필요할 경우, 소량(예를 들어 약 1.0 중량% 이하)의 물을 추가로 포함할 수도 있다.

상기 킬레이트화제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 또는 이의 소듐염, 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민(tetrahyroxypropyl ethylenediamine), 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산(diethylenetriaminepentaacetic acid)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 상기 킬레이트화제는 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산일 수 있다. 상기 항산화제가 부틸화 히드록시아니솔(butylated hydroxyanisole, BHA) 또는 부틸화 히드록시톨루엔(butylated hydroxytoluene, BHT)일 수 있다. 또한, 상기 산은 소르빈산(sorbic acid) 또는 시트르산(citric acid)일 수 있다.

일 구현예에서, 에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%, 에탄올 50 ∼ 65 중량%, 사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 8 ∼ 20 중량%, 킬레이트화제 0.00025 ∼ 0.05 중량%, 항산화제 0.1 ∼ 0.2 중량%, 산 0.1 ∼ 0.2 중량%, 및 물 0 ∼ 1.0 중량%를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다. 다른 구현예에서, 에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%, 에탄올 40 ∼ 65 중량%, 사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 8 ∼ 20 중량%, 이소프로필 미리스테이트 5 ∼ 25 중량%, 킬레이트화제 0.00025 ∼ 0.05 중량%, 항산화제 0.1 ∼ 0.2 중량%, 산 0.1 ∼ 0.2 중량%, 및 물 0 ∼ 1.0 중량%를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%, 에탄올 40 ∼ 65 중량%, 사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 10 ∼ 15 중량%, 이소프로필 미리스테이트 6 ∼ 20 중량%, 킬레이트화제 0.00025 ∼ 0.05 중량%, 항산화제 0.1 ∼ 0.2 중량%, 산 0.1 ∼ 0.2 중량%, 및 물 0 ∼ 1.0 중량%를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 특히 바람직한 일 구현예에서, 에피나코나졸 10 중량%, 에탄올 52.75 중량%, 사이클로메티콘 15 중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 12 중량%, 이소프로필 미리스테이트 10 중량%, 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민 0.05 중량%, 부틸화 히드록시톨루엔 0.1 중량%, 및 시트르산 0.1 중량%로 구성된 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다. 본 발명의 특히 바람직한 다른 구현예에서, 에피나코나졸 10 중량%, 에탄올 52.29975 중량%, 사이클로메티콘 15 중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 12 중량%, 이소프로필 미리스테이트 10 중량%, 디에틸렌트리아민펜타아세트산 0.00025 중량%, 부틸화 히드록시톨루엔 0.1 중량%, 시트르산 0.1 중량%, 및 물 0.5 중량%로 구성된 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 약학 조성물은 상기한 성분을 사용하여 통상의 방법에 따라 혼합함으로써 제조될 수 있다. 필요할 경우, 킬레이트화제를 함유하는 스톡 용액 및 에피나코나졸을 함유하는 스톡 용액을 각각 제조한 후, 다른 성분들과 적절히 혼합하여 용액을 형성함으로써, 본 발명의 약학 조성물을 제조할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하는 것이며, 본 발명이 이들에 한정되는 것은 아니다.

하기 실시예에서 고속액체크로마토그래피(HPLC) 분석은 아래 조건하에서 수행하였다.

- 컬럼: Luna C18 (150 ×4.6 mm, 5 μm)

- 컬럼온도: 30℃

- 이동상: 아세토니트릴:정제수(64:36, v/v)

- 유속: 1.0 mL/min

- 검출: 205 nm

- 시료 주입량: 20 μL

또한, LC/MS 분석은 하기와 같이 수행하였다.

<1> 검량선용 용액 및 시료 용액의 제조

200 μL 에피나코나졸 에탄올 용액에, 200 μL의 4 %(w/v) 소혈청알부민(bovine serum albumin) 및 0.01 %(w/v) 소듐 아지드를 포함하는 인산염완충액(PBS, pH 7.4) 용액을 첨가하여 에피나코나졸의 농도가 0, 50, 100, 250, 500, 1,000, 2,500, 및 5,000 ng/mL가 되도록 희석하여 검량선용 용액을 제조하였다. 상기 에피나코나졸 검량선용 용액 및 시료 용액 200 μL에 쿼르세틴(quercetin, QCN, 내부표준물질)의 메탄올 용액(1 μg/mL)을 각각 200 μL씩 첨가한 후 혼합하였다. 얻어진 검량선용 용액 및 시료 용액에 각각 1 mL 메탄올 및 1 mL 에탄올을 첨가한 후 혼합하고, 4,000 rpm에서 10분간 원심분리 후 상층액을 유리 바이알(glass vial)로 옮겨 담고 회전 증발기(rotary evaporator)에서 용매를 제거하였다. 용매가 제거된 유리 바이알에 100 μL 에탄올과 100 μL 이동상(아세토니트릴:정제수, 64:36, v/v)을 첨가하여 재용해한 다음, 10,000 rpm에서 10분간 원심분리 후 상등액을 취해 LC/MS로 하기 조건하에서 에피나코나졸의 농도를 측정하였다.

<2> LC 분석조건

- 컬럼: Luna C18 (150 ×4.6 mm, 5 μm)

- 컬럼온도: 30℃

- 이동상: 아세토니트릴:정제수(64:36, v/v)

- 유속: 1.0 mL/min

- 검출: 205 nm

- 시료 주입량: 20 μL

<3> Mass 분석조건

- 에피나코나졸: 양성 이온화 모드(positive ionization mode)

- 쿼르세틴: 음성 이온화 모드(negative ionization mode)

- 이온원(Source): API-ES (atmospheric pressure ionization-electron spray)

- 모세관 전압(Capillary voltage): 3,000 V

- 건조 가스 흐름 속도(Drying gas flow rate): 12.0 L/min

- 건조 가스 온도: 304℃

- 상기 모세관 전압에서 프래그먼트 이온(fragment ions)은 에피나코나졸 및 쿼르세틴에 대하여 각각 [M+H]⁺=349.3 및 [M+H]⁺=301.0 에서 검출 및 정량하였다.

실시예 1∼7. 용액의 제조 및 피부 투과도 평가

(1) 용액의 제조

하기 표 1의 성분 및 함량에 따라, 에피나코나졸을 함유하는 용액을 제조하였다. 표 1의 각 성분의 함량은 용액 중 중량%를 나타낸다. 에틸렌디아민테트라아세트산 디소듐염(EDTA 디소듐)을 정제수에 0.025 mg/mL의 농도로 용해시켜 스톡 용액을 제조하였다. 또한, 에피나코나졸(0.2 g)을 에탄올(0.076 g)에 용해시켜 에피나코나졸-함유 스톡 용액을 제조하였다. 에피나코나졸-함유 에탄올 용액에 사이클로메티콘, 트랜스큐톨 P(Transcutol^TM P, Gattefosse), 이소프로필 미리스테이트, 부틸화 히드록시아니솔(BHA), 소르빈산, 및 EDTA 디소듐(스톡 용액 형태로 첨가)을 차례로 가하고, 혼합하여 에피나코나졸을 함유하는 용액을 제조하였다.

	실시예 (중량%)
	1	2	3	4	5	6	7
에피나코나졸	10	10	10	10	10	10	10
에탄올	56.79975	51.79975	55.79975	50.79975	59.79975	50.79975	45.79975
사이클로메티콘	10	15	13	13	13	13	13
트랜스큐톨 P	12	12	10	15	10	10	10
이소프로필 미리스테이트	10	10	10	10	6	15	20
EDTA 디소듐	0.00025	0.00025	0.00025	0.00025	0.00025	0.00025	0.00025
BHA	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
정제수	1	1	1	1	1	1	1
소르빈산	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
합계(%)	100	100	100	100	100	100	100

(2) 인공 피부를 사용한 피부 투과도 평가

인공 피부를 사용하여, 프란즈 확산 셀(Franz diffusion cell)에서 실시예 1∼7에서 제조한 용액의 피부 투과도를 평가하였다. 대조 제제로서 JUBLIA^TM (에피나코나졸 10% 함유-국소 용액 제제, Kalen Pharmaceutical Co., Ltd.)를 사용하였다. 인공 피부로서 Strat-M^TM Membrane(transdermal diffusion test membrane, Millipore)을 사용하였으며, 1시간 이상 충분히 수화(hydration)시킨 후 각각의 도너 컴파트먼트(donor compartment)에 200 μL씩 도포하였다. 피부 투과도 시험은 각각 4회 수행하였으며(n=4), 프란즈 확산 셀을 사용한 피부 투과도 시험 조건은 다음과 같다.

- 확산 면적(Diffusion area): 0.785 cm²

- 샘플 로딩: 실시예 1∼7에서 제조한 용액 각 200 μL

- 리시버 컴파트먼트(Receiver compartment): 1.5 %(w/v) Brij^TM O20 (Sigma-Aldrich) 및 0.1 %(w/v) 소듐 아지드를 포함하는 인산염완충액(phosphate buffered saline, PBS) (pH 7.4) 5 mL;

- 리시버 컴파트먼트의 교반속도 600 rpm

- 온도: 32℃

- 검체 채취: 12시간 및 24시간에 각각의 리시버 컴파트먼트로부터 200 μL씩 채취 후, 상기 1.5 %(w/v) Brij^TM O20 (Sigma-Aldrich) 및 0.1 %(w/v) 소듐 아지드를 포함하는 인산염완충액으로 200 μL씩 보충.

얻어진 검체는 HPLC로 분석하였으며, 얻어진 결과는 다음 표 2와 같다.

제제	12시간	24시간
제제	투과 농도(μg/mL)	투과 농도(μg/mL)
대조 제제	146 ±21.8	326 ±29.0
실시예 1	475 ±42.8	548 ±12.2
실시예 2	825 ±22.1	841 ±13.4
실시예 3	770 ±199	832 ±177
실시예 4	689 ±141	783 ±80.5
실시예 5	783 ±20.5	805 ±34.8
실시예 6	762 ±100	891 ±9.48
실시예 7	608 ±119	717 ±74.6

상기 표 2의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라 얻어진 용액은 대조 제제에 비하여 피부 투과도가 현저하게 증가하였다. 특히, 실시예 2 및 5의 용액은 12시간에서의 피부 투과도가 대조 제제에 비하여 5배 이상 증가하였다.

(3) 인간 피부를 사용한 피부 투과도 평가

인간 피부를 사용하여, 프란즈 확산 셀에서 실시예 2에서 제조한 용액의 피부 투과도를 평가하였다. 대조 제제로서 JUBLIA^TM (에피나코나졸 10% 함유-국소 용액 제제, Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.)를 사용하였다. 인간 피부로서 HuSkin^TM(HansBiomed Corp.)을 사용하였으며, 1시간 이상 충분히 수화(hydration)시킨 후 각각의 도너 컴파트먼트(donor compartment)에 200 μL씩 도포하였다. 피부 투과도 시험은 각각 4회 수행하였으며(n=4), 시험 조건은 상기 인공 피부를 사용한 피부 투과도 시험 조건과 동일하다.

얻어진 검체는 HPLC로 분석하였으며, 얻어진 결과는 다음 표 3과 같다.

제제	24시간 동안의 투과 농도(μg/mL)
대조 제제	16.91 ± 1.03
실시예 2	22.49 ± 2.14

상기 표 3의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라 얻어진 용액은 대조 제제에 비하여 24시간 동안의 피부 투과도가 대조 제제에 비하여 2배 이상 증가하였다.

(4) 안정성 평가

실시예 1∼7에서 제조한 용액을 각각 65℃에서 4주 동안 보관한 후, 초기(0주) 및 4주 후의 용액에 대한 400 nm, 500 nm, 및 600 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 흡광도의 컷오프 값은 400 nm에서 0.4 AU(흡광도 단위) 이하, 500 nm에서 0.1 AU 이하, 및 600 nm에서 0.1 AU로 하여 평가하였다. 그 결과는 다음 표 4 내지 표 6과 같다.

400 nm에서의 흡광도

	0 주	4 주
실시예 1	0.0532 ± 0.0002	0.060 ± 0.0020
실시예 2	0.0527 ± 0.0003	0.057 ± 0.0011
실시예 3	0.0536 ± 0.0004	0.061 ± 0.0047
실시예 4	0.0534 ± 0.0004	0.059 ± 0.0008
실시예 5	0.0530 ± 0.0000	0.058 ± 0.0023
실시예 6	0.0533 ± 0.0003	0.061 ± 0.0006
실시예 7	0.0535 ± 0.0001	0.065 ± 0.0006

500 nm에서의 흡광도

	0 주	4 주
실시예 1	0.0424 ± 0.0002	0.047 ± 0.0022
실시예 2	0.0423 ± 0.0005	0.045 ± 0.0015
실시예 3	0.0437 ± 0.0005	0.048 ± 0.0048
실시예 4	0.0419 ± 0.0004	0.046 ± 0.0010
실시예 5	0.0423 ± 0.0010	0.047 ± 0.0018
실시예 6	0.0421 ± 0.0005	0.048 ± 0.0010
실시예 7	0.0421 ± 0.0008	0.051 ± 0.0004

600 nm에서의 흡광도

	0 주	4 주
실시예 1	0.0407 ± 0.0003	0.043 ± 0.0017
실시예 2	0.0403 ± 0.0005	0.042 ± 0.0016
실시예 3	0.0409 ± 0.0001	0.046 ± 0.0046
실시예 4	0.0403 ± 0.0003	0.042 ± 0.0008
실시예 5	0.0399 ± 0.0004	0.044 ± 0.0022
실시예 6	0.0412 ± 0.0005	0.044 ± 0.0013
실시예 7	0.0410 ± 0.0009	0.045 ± 0.0006

상기 표 4 내지 표 6의 결과로부터, 본 발명에 따라 얻어진 용액은 65℃의 보관 조건에서 주성분의 함량변화 없이 우수한 안정성을 가짐을 알 수 있다. 특히, 부틸화 히드록시톨루엔 대신에 부틸화 히드록시아니솔을 사용하고, 시트르산 대신에 소르빈산을 사용하더라도, 본 발명에 따라 얻어진 용액은 주성분의 함량변화 없이 우수한 안정성을 가짐을 알 수 있다.

실시예 8∼21. 용액의 제조 및 안정성 평가

(1) 용액의 제조

하기 표 7 및 표 8의 성분 및 함량에 따라, 에피나코나졸을 함유하는 용액을 실시예 1∼7과 동일한 방법으로 제조하였다. 표 7 및 표 8의 각 성분의 함량은 용액 중 중량%를 나타낸다. 하기 표 7 및 표 8에서, EDTA 디소듐은 에틸렌디아민테트라아세트산 디소듐염을 나타내고, TED는 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민을 나타내고, DTPA는 디에틸렌트리아민펜타아세트산를 나타내고, BHA는 부틸화 히드록시아니솔을 나타내고, BHT는 부틸화 히드록시톨루엔을 나타낸다.

	실시예 (중량%)
	8	9	10	11	12	13	14	15
에피나코나졸	10	10	10	10	10	10	10	10
에탄올	51.6995	59.7998	52.75	52.75	51.79975	60.75	60.75	59.79975
사이클로메티콘	15	13	15	15	15	13	13	13
트랜스큐톨 P	12	10	12	12	12	10	10	10
이소프로필 미리스테이트	10	10	10	10	10	6	6	6
EDTA 디소듐	0.0005	0.0005	0	0	0.00025	0	0	0.00025
TED	0	0	0.05	0.05	0	0.05	0.05	0
DTPA	0	0	0	0	0	0	0	0
BHA	0.2	0.2	0	0.1	0.1	0	0.1	0.1
BHT	0	0	0.1	0	0	0.1	0	0
정제수	1	1	0	0	1	0	0	1
소르빈산	0.1	0.1	0	0	0	0	0	0
시트르산	0	0	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
합계(%)	100	100	100	100	100	100	100	100

	실시예 (중량%)
	16	17	18	19	20	21
에피나코나졸	10	10	10	10	10	10
에탄올	52.29975	52.29975	52.29975	52.29975	62.29975	60.29975
사이클로메티콘	15	15	15	15	15	13
트랜스큐톨 P	12	12	12	12	12	10
이소프로필 미리스테이트	10	10	10	10	0	6
EDTA 디소듐	0	0	0	0	0	0
TED	0	0	0	0	0	0
DTPA	0.00025	0.00025	0.00025	0.00025	0.00025	0.00025
BHA	0	0	0.1	0.1	0	0
BHT	0.1	0.1	0	0	0.1	0.1
정제수	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
소르빈산	0	0.1	0	0.1	0	0.1
시트르산	0.1	0	0.1	0	0.1	0
합계(%)	100	100	100	100	100	100

(2) 안정성 평가

실시예 8∼21에서 제조한 용액을 각각 65℃에서 4주 동안 보관한 후, 실시예 1∼7의 (4)와 동일한 방법으로 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 다음 표 9 내지 표 11과 같다.

400 nm에서의 흡광도

	0 주	4 주
실시예 8	0.0537 ±0.0002	0.0878 ±0.0022
실시예 9	0.0545 ±0.0017	0.0996 ±0.0090
실시예 10	0.0526 ±0.0005	0.0579 ±0.0008
실시예 11	0.0571 ±0.0009	0.0750 ±0.0017
실시예 12	0.0536 ±0.0005	0.0751 ±0.0025
실시예 13	0.0528 ±0.0014	0.0565 ±0.0011
실시예 14	0.0539 ±0.0021	0.0581 ±0.0007
실시예 15	0.0534 ±0.0005	0.0884 ±0.0018
실시예 16	0.0538 ±0.0013	0.0541 ±0.0004
실시예 17	0.0534 ±0.0004	0.0587 ±0.0018
실시예 18	0.0532 ±0.0021	0.0592 ±0.0075
실시예 19	0.0540 ±0.0012	0.0483 ±0.0007
실시예 20	0.0545 ±0.0026	0.0527 ±0.0019
실시예 21	0.0538 ±0.0009	0.8537 ±0.1217

500 nm에서의 흡광도

	0 주	4 주
실시예 8	0.0433 ±0.0003	0.0653 ±0.0018
실시예 9	0.0447 ±0.0019	0.0749 ±0.0076
실시예 10	0.0431 ±0.0005	0.0468 ±0.0016
실시예 11	0.0447 ±0.0017	0.0523 ±0.0012
실시예 12	0.0451 ±0.0012	0.0529 ±0.0012
실시예 13	0.0419 ±0.0002	0.0439 ±0.0013
실시예 14	0.0437 ±0.0023	0.0448 ±0.0009
실시예 15	0.0433 ±0.0001	0.0597 ±0.0005
실시예 16	0.0436 ±0.0022	0.0430 ±0.0002
실시예 17	0.0427 ±0.0002	0.0446 ±0.0007
실시예 18	0.0436 ±0.0027	0.0452 ±0.0017
실시예 19	0.0427 ±0.0010	0.0429 ±0.0009
실시예 20	0.0440 ±0.0037	0.0467 ±0.0019
실시예 21	0.0435 ±0.0013	0.0508 ±0.0024

600 nm에서의 흡광도

	0 주	4 주
실시예 8	0.0409 ±0.0008	0.0432 ±0.0005
실시예 9	0.0426 ±0.0021	0.0563 ±0.0080
실시예 10	0.0422 ±0.0007	0.0421 ±0.0010
실시예 11	0.0422 ±0.0022	0.0423 ±0.0008
실시예 12	0.0425 ±0.0016	0.0444 ±0.0015
실시예 13	0.0403 ±0.0006	0.0407 ±0.0009
실시예 14	0.0412 ±0.0003	0.0419 ±0.0007
실시예 15	0.0423 ±0.0015	0.0430 ±0.0003
실시예 16	0.0414 ±0.0024	0.0407 ±0.0003
실시예 17	0.0411 ±0.0007	0.0409 ±0.0006
실시예 18	0.0414 ±0.0019	0.0419 ±0.0012
실시예 19	0.0414 ±0.0010	0.0422 ±0.0025
실시예 20	0.0423 ±0.0026	0.0449 ±0.0014
실시예 21	0.0402 ±0.0005	0.0468 ±0.0038

표 9 내지 표 11의 결과로부터, 본 발명에 따라 얻어진 용액은 65℃의 보관 조건에서 주성분의 함량변화 없이 우수한 안정성을 가짐을 알 수 있다. 특히, EDTA 양을 0.0005 중량%로 증가시켜도 주성분의 함량에 있어서 유의성 있는 변화가 없으며(실시예 8 및 9), 또한 EDTA 대신에 TED 및 DTPA를 사용할 경우에도 주성분의 함량에 있어서 유의성 있는 변화가 없음을 알 수 있다(실시예 10 내지 21).

실시예 22. 조갑 투과도 평가

성인의 인체(adult human cadavers)로부터 얻어진 조갑(finger nails)을 사용하여, 조갑 투과용 프란즈 확산 셀(Labfine)에서 실시예 10 및 16에서 제조한 용액의 조갑 투과도를 평가하였다. 대조 제제로서 JUBLIA^TM (에피나코나졸 10% 함유-국소 용액 제제, Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.)를 사용하였다. 성인의 인체(different adult human cadavers)로부터 얻어진 조갑을 Science Care, 3836 E. Watkins St. Phoenix, AZ 85034에서 얻었으며, 사용시까지 밀폐된 용기에서 -70℃에서 보관하였다. 시험 전날, 조갑 플레이트(nail plates)를 실온에서 12시간 이상 해동시켰다. 시험 당일, 조갑 플레이트를 실온에서 생리식염수에 3시간 동안 담가 수화(hydration)시켰다. 수화된 조갑을 2개의 테플론 가스켓(Teflon gaskets) 사이에 단단히 고정시킨 후, 프란즈 확산 셀에 장착하였다(투과면적: 28.2743 mm²). 리시버 컴파트먼트(acceptor compartments)는 4 %(w/v) 소혈청알부민(bovine serum albumin) 및 0.01 %(w/v) 소듐 아지드를 포함하는 인산염완충액(pH 7.4)을 각각 5 mL씩 채우고, 32℃의 인큐베이터에 넣었다. 이후 50 μL의 시험용액(즉, 실시예 10의 용액, 실시예 16의 용액 및 JUBLIA^TM, 각각 n=4)을 도너 컴파트먼트(donor compartment)에 1일 1회, 7일 동안 도포하였다. 도포 첫째 날, 리시버 컴파트먼트로부터 200 μL의 검체를 시험용액 도포 후 1, 2, 4, 6, 8, 20, 및 24 시간째에 채취하였으며, 도포 둘째 날부터는 24시간 간격으로 검체를 채취하였다. 검체 채취 후, 동일한 양의 4 %(w/v) 소혈청알부민(bovine serum albumin) 및 0.01 %(w/v) 소듐 아지드를 포함하는 인산염완충액(pH 7.4)을 리시버 컴파트먼트에 보충하였다. 얻어진 검체는 LC/MS로 정량분석 하였다.

도포 1일차 조갑 투과농도의 변화를 근거로 조갑 투과도(nail flux)를 계산한 결과는 도 1과 같다. 또한, 1주간 누적 도포 후 조갑 투과농도의 변화는 도 2와 같고, 이를 근거로 조갑 투과도(nail flux)를 계산한 결과는 도 3과 같다. 도 1 내지 도 3의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 실시예 10의 용액은, 대조 제제에 비하여, 도포 1일차부터 에피나코나졸이 조갑을 통해 신속하게 침투하여 도포 후 24시간 째 투과농도 및 투과도(flux)가 각각 6.66배 및 4.24배 증가하였으며, 1주 누적도포 후 투과농도 및 투과도(flux)가 1.53배 및 1.60배 증가하였다. 또한, 실시예 16의 용액 역시, 대조 제제에 비하여, 도포 1일차부터 에피나코나졸이 조갑을 통해 신속하게 침투하여 도포 후 24시간 째 투과농도 및 투과도(flux)가 각각 6.31배 및 3.87배 증가하였으며, 1주 누적도포 후 투과농도 및 투과도(flux)가 1.53배 및 1.90배 증가하였다. 따라서 본 발명에 따라 얻어진 에피나코나졸 외용 액제는 대조 제제에 비하여 신속하고 현저하게 높은 에피나코나졸의 조갑 투과도를 나타낸다.

Claims

에피나코나졸, 에탄올, 사이클로메티콘, 및 비휘발성 용매를 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물에 있어서,
상기 비휘발성 용매가 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르이고, 상기 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르가 조성물 총 중량에 대하여 8 ∼ 20 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%,
에탄올 50 ∼ 65 중량%,
사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%, 및
디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 8 ∼ 20 중량%
를 포함하는 약학 조성물.
제1항 또는 제3항에 있어서, 킬레이트화제, 항산화제, 및 산으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 첨가제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제4항에 있어서, 상기 킬레이트화제가 에틸렌디아민테트라아세트산 또는 이의 소듐염, 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민, 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제4항에 있어서, 상기 킬레이트화제가 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제4항에 있어서, 상기 항산화제가 부틸화 히드록시아니솔 또는 부틸화 히드록시톨루엔인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제4항에 있어서, 상기 산이 소르빈산 또는 시트르산인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서,
에피나코나졸 8 ∼ 12 중량%,
에탄올 50 ∼ 65 중량%,
사이클로메티콘 8 ∼ 20 중량%,
디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 8 ∼ 20 중량%,
킬레이트화제 0.00025 ∼ 0.05 중량%,
항산화제 0.1 ∼ 0.2 중량%,
산 0.1 ∼ 0.2 중량%, 및
물 0 ∼ 1.0 중량%
를 포함하는 약학 조성물.