KR102376314B1 - 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102376314B1 KR102376314B1 KR1020210046729A KR20210046729A KR102376314B1 KR 102376314 B1 KR102376314 B1 KR 102376314B1 KR 1020210046729 A KR1020210046729 A KR 1020210046729A KR 20210046729 A KR20210046729 A KR 20210046729A KR 102376314 B1 KR102376314 B1 KR 102376314B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- itraconazole
- weight
- pharmaceutical composition
- topical
- skin
- Prior art date
Links
- VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 2-[(2r)-butan-2-yl]-4-[4-[4-[4-[[(2r,4s)-2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]phenyl]piperazin-1-yl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one Chemical compound O=C1N([C@H](C)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@@H]3O[C@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=2)C=C1 VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 0.000 title claims abstract description 254
- 229960004130 itraconazole Drugs 0.000 title claims abstract description 254
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 85
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 72
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 68
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- XXJWXESWEXIICW-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol monoethyl ether Chemical compound CCOCCOCCO XXJWXESWEXIICW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229940075557 diethylene glycol monoethyl ether Drugs 0.000 claims abstract description 18
- XMSXQFUHVRWGNA-UHFFFAOYSA-N Decamethylcyclopentasiloxane Chemical compound C[Si]1(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O1 XMSXQFUHVRWGNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 229940086555 cyclomethicone Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000003961 penetration enhancing agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 48
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 claims description 23
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 10
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004255 Butylated hydroxyanisole Substances 0.000 claims description 7
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 7
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N butylated hydroxyanisole Chemical group COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940043253 butylated hydroxyanisole Drugs 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000010410 dusting Methods 0.000 claims description 5
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NSOXQYCFHDMMGV-UHFFFAOYSA-N Tetrakis(2-hydroxypropyl)ethylenediamine Chemical compound CC(O)CN(CC(C)O)CCN(CC(C)O)CC(C)O NSOXQYCFHDMMGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 claims description 4
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 claims description 3
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 claims description 3
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 claims description 2
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940095259 butylated hydroxytoluene Drugs 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 54
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 54
- 230000035699 permeability Effects 0.000 abstract description 28
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract description 20
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 abstract description 15
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 abstract description 14
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 abstract description 5
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 abstract description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 89
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 84
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 53
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 44
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 42
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 42
- 210000000282 nail Anatomy 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 23
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 22
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 22
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 15
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 11
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 11
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 10
- NFEZZTICAUWDHU-RDTXWAMCSA-N efinaconazole Chemical compound N1([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)CCC(=C)CC1 NFEZZTICAUWDHU-RDTXWAMCSA-N 0.000 description 10
- 229960003937 efinaconazole Drugs 0.000 description 10
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 10
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 8
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 5
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 5
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 5
- 201000009862 superficial mycosis Diseases 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 4
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 4
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 4
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 231100000245 skin permeability Toxicity 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- KLSJWNVTNUYHDU-UHFFFAOYSA-N Amitrole Chemical group NC1=NC=NN1 KLSJWNVTNUYHDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 2
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 2
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000009513 drug distribution Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 2
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- XMAYWYJOQHXEEK-OZXSUGGESA-N (2R,4S)-ketoconazole Chemical compound C1CN(C(=O)C)CCN1C(C=C1)=CC=C1OC[C@@H]1O[C@@](CN2C=NC=C2)(C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)OC1 XMAYWYJOQHXEEK-OZXSUGGESA-N 0.000 description 1
- FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 10,10-dioxo-2-[4-(N-phenylanilino)phenyl]thioxanthen-9-one Chemical compound O=C1c2ccccc2S(=O)(=O)c2ccc(cc12)-c1ccc(cc1)N(c1ccccc1)c1ccccc1 FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000019300 CLIPPERS Diseases 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012504 Dermatophytosis Diseases 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 241001460074 Microsporum distortum Species 0.000 description 1
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000021930 chronic lymphocytic inflammation with pontine perivascular enhancement responsive to steroids Diseases 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- PLCQGRYPOISRTQ-FCJDYXGNSA-L dexamethasone sodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)COP([O-])([O-])=O)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O PLCQGRYPOISRTQ-FCJDYXGNSA-L 0.000 description 1
- 229960002344 dexamethasone sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000002828 disc diffusion antibiotic sensitivity testing Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008686 ergosterol biosynthesis Effects 0.000 description 1
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 210000004905 finger nail Anatomy 0.000 description 1
- 210000004904 fingernail bed Anatomy 0.000 description 1
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 229960004125 ketoconazole Drugs 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- UTZNELIJGYWMKS-UHFFFAOYSA-N phenylmethanol;hydrate Chemical compound O.OCC1=CC=CC=C1 UTZNELIJGYWMKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N voriconazole Chemical compound C1([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=NC=NC=C1F BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N 0.000 description 1
- 229960004740 voriconazole Drugs 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
본 발명은 (i) 이트라코나졸; (ii) 휘발성 비히클로서 에탄올; (iii) 가용화제로서 벤질 알코올; (iv) 양성자화제로서 염산; (v) pH 조절제; (vi) 투과촉진제로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 및 선택적으로 (vii) 습윤제 혹은 살포제로서 시클로메티콘을 포함하는, pH 4.5∼5.5를 갖는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 이트라코나졸의 용해도 및 안정성을 효과적으로 개선할 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 약학 조성물은 현저히 높은 피부 및 조갑 투과도를 나타낼 뿐만 아니라, 피부 및 조갑으로의 현저히 높은 약물 침적을 달성할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 약학 조성물은, 낮은 부작용을 나타내면서, 진균-감염된 피부 병변의 회복율을 높일 수 있으므로, 국소 진균 감염에 효과적으로 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 특정 휘발성 비히클, 가용화제, 양성자화제, 투과촉진제, 및 선택적으로 습윤제(혹은 살포제)를 포함하는, pH 4.5∼5.5를 갖는 용액 형태의 이트라코나졸-함유 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
표재성 진균증(superficial mycosis)은 주로 피부, 조갑 또는 모발의 외층에 국한되지만, 더 깊은 조직을 침범할 수 있는 진균 질환이다. 더욱이, 진균증은 환자의 심리적 및 심리사회적 요인에 부정적인 영향을 미치고, 삶의 질을 저하시키는 것으로 보고되어 있다. 다양한 유형의 광범위한 항진균 아졸류, 예를 들어, 에피나코나졸(efinaconazole, EFN), 플루코나졸(fluconazole), 케토코나졸(ketoconazole), 보리코나졸(voriconazole) 및 이트라코나졸(itraconazole, ITZ)을 진균증 치료에 사용할 수 있다. 중요하게는, 아졸 그룹은 14-α 데메틸라아제(시토크롬 P-450 효소)를 차단함으로써 필수 진균막 성분인 에르고스테롤의 합성을 방해한다. 또한, 포유류보다는 진균의 시토크롬 P-450 효소에 대한 아졸 그룹의 선택성은 다른 항진균 치료에 비하여 상대적으로 최소한의 부작용으로 매우 특이적인 항진균 작용을 가능하게 한다. 여러 아졸계 항진균제 중에서 2-부탄-2-일-4-[4-[4-[4-[[2-(2,4-디클로로페닐)-2-(1,2,4-트리아졸-1-일메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]메톡시]페닐]-1-피페라지닐]페닐]-1,2,4-트리아졸-3-온(2-butan-2-yl-4-[4-[4-[4-[[2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy] phenyl]-1-piperazinyl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one, 이트라코나졸)은 강한 친각질성(keratinophilic) 및 친유성 특성을 가지며, 따라서 표재성 진균증에 대한 효과적인 광범위 항진균 치료제로 등장하였다. 또한 이트라코나졸은 암포테리신 B보다 독성 부작용이 적어 아스퍼길루스(Aspergillus) 감염의 치료 및 예방에 성공적으로 사용되어 더 나은 치료 지수를 나타낸다.
이트라코나졸을 사용한 피부 진균증의 임상 치료는 일반적으로 경구 투여를 포함한다. 상당한 절대 경구 생체이용률(약 70%)에도 불구하고, 표피와 각질층에는 혈관이 없으므로, 원하는 작용 부위에서 이트라코나졸의 이용가능성을 제한할 수 있다(Kolarsick et al., J. Dermatol. Nurses Assoc. 2011, 3, 203-213; Shin et al., Antimicrob. Agents and Chemother. 2004, 48, 1756-1762). 경구 투여 후 흡수되어 전신 혈로 이행된 이트라코나졸은 큰 분자 크기(705.64 Da)와 혈장 단백질과의 높은 결합 친화성으로 인하여 진피 하위층 모세혈관으로부터 빠져나와 표피 및 각질층의 피부 조직으로 효과적으로 확산하지 않아서(Zheng et al., Int. J. Pharm. 2012, 436, 291-298), 일반적인 200-400 mg/day의 이트라코나졸을 경구로 투여하여 전신 혈중약물농도를 고농도로 유지해야 충분히 피부 조직에 약물이 전달됨이 확인된 바 있다(De Doncker et al., Indian J. Drugs Dermatol. 2017, 3, 4-10, Gupta et al. Dermatology. 1999, 199, 248-252). 그러나, 이트라코나졸의 높은 전신 농도는 신독성과 간손상 뿐만 아니라, 다양한 생식 합병증을 유발하는 것으로 보고되어 있다(Debruyne et al., Clin. Pharmacokinet. 2001, 40, 441-472). 따라서 이트라코나졸의 국소 투여는 경구 투여보다 부작용이 적고, 부위-특이적 전달에 유리할 수 있다.
크림, 연고, 페이스트, 리포좀 제제와 같은 접근법이 이트라코나졸의 국소 전달을 개선하는데 사용된 바 있다. 이트라코나졸을 함유하는 콜로이드 담체 시스템은 용해도를 적절히 향상시킬 수 있다. 그러나, 콜로이드 담체의 반고체 특성은 약물 방출을 최소화하고, 피부 표면 상제 제제가 퍼지는(spreading) 것을 감소시키며, 또한 피부 막을 통과하는 투과도를 제한하게 된다. 더욱이, 상기 제제의 적용 후 피부상의 미립자성 담체의 잔류물은 환자 순응도를 감소시킬 수 있다. 따라서 휘발성 비히클의 사용은 국소 이트라코나졸 용액(solution) 개발에 적합한 대안이 될 수 있다. 또한, 국소 제제에 사용되는 휘발성 비히클은 변성 현상(metamorphism phenomenon)을 따르는 것으로 보고된 바 있으며, 이는 시간 경과에 따라 적용된 부위에서 비히클 시스템 내에서 약물 과포화를 유발하여, 효과적이고 즉각적인 약물 전달을 증가시킬 수 있다(Surber, et al., Curr. Probl. Dermatol. 2018, 54, 152-165). 피부의 가장 바깥쪽 층에 존재하는 지질 및 단백질 성분과 상호작용하는 투과 촉진제의 사용은 약물의 침투 및 분배를 증가시킬 수 있다. 따라서 휘발성 비히클, 효과적인 투과 촉진제, 및 확산을 촉진하는 습윤제를 포함하는 안정적인 이트라코나졸 용액은 표재성 진균증에 대한 이트라코나졸의 임상 효과를 향상시킬 수 있을 것으로 기대된다.
본 발명자들은 이트라코나졸이 휘발성 및 비휘발성 성분으로 구성된 2상 시스템에 통합된 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물을 설계하였다. 특히, 특정 휘발성 비히클, 가용화제, 양성자화제, 투과촉진제, 및 선택적으로 습윤제(혹은 살포제)를 사용하여 pH 4.5∼5.5를 갖는 용액 형태로 이트라코나졸을 제제화할 경우, 이트라코나졸의 용해도 및 안정성을 효과적으로 개선할 수 있으며, 현저히 높은 피부 및 조갑 투과도를 나타낼 뿐만 아니라, 피부 및 조갑으로의 현저히 높은 약물 침적을 달성할 수 있다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명은 특정 첨가제들을 함유한 pH 4.5∼5.5를 갖는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 액 형태의 국소 투여용 약학 조성물의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 태양에 따라, (i) 이트라코나졸; (ii) 휘발성 비히클로서 에탄올; (iii) 가용화제로서 벤질 알코올; (iv) 양성자화제로서 염산; (v) pH 조절제; 및 (vi) 투과촉진제로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르를 포함하는, pH 4.5∼5.5를 갖는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 태양에 따라, (a) 이트라코나졸을 벤질 알코올에 용해하는 단계; (b) 단계(a)에서 얻어진 용액에 염산을 첨가하여 이트라코나졸을 양성자화하는 단계; (c) 단계(b)에서 얻어진 용액에 에탄올을 첨가하고 혼합하는 단계; (d) 단계(c)에서 얻어진 용액에 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르을 첨가하고 혼합하거나 혹은 단계(c)에서 얻어진 용액에 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 및 시클로메티콘을 첨가하고 혼합하는 단계; 및 (e) 단계(d)에서 얻어진 용액에 pH 조절제를 가하여 pH를 pH 4.5∼5.5로 조절하는 단계를 포함하는, 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물의 제조방법이 제공된다.
본 발명에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물은 이트라코나졸이 휘발성 및 비휘발성 성분으로 구성된 2상 시스템에 통합됨으로써, 이트라코나졸의 용해도 및 안정성을 효과적으로 개선할 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물은 현저히 높은 피부 및 조갑 투과도를 나타낼 뿐만 아니라, 피부 및 조갑으로의 현저히 높은 약물 침적을 달성할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물은, 낮은 부작용을 나타내면서, 진균-감염된 피부 병변의 회복율을 높일 수 있으므로, 국소 진균 감염에 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1은 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액, 이트라코나졸 국소 제제 #6, #8 및 #11로부터 이트라코나졸의 시험관 내 전-두께 인간 피부 및 조갑 투과성을 평가하여 얻어진 결과를 나타낸다.
(A) 24시간 동안 인간 피부를 투과하여 누적 투과된 이트라코나졸 농도의 시간 경과.
(B) 48시간 및 72시간에 인간 피부를 투과한 이트라코나졸의 누적 침투.
(C) 각질층, 표피 및 진피에서 조직 그램 당 침적된 이트라코나졸 농도.
(D) 1일부터 7일까지 인간 조갑을 투과하여 누적 분배된 약물 농도의 시간 경과.
각 값은 평균 ± 표준 편차 (n = 4)를 나타낸다. **p <0.01, ***p <0.001, 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액와 비교. #p<0.05, ##p<0.01, ###p<0.001, 이트라코나졸 국소 제제 #6과 비교. $p<0.05. 이트라코나졸 국소 제제 #8과 비교.
도 2는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클), 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액 및 이트라코나졸 국소 제제 #11의 시험관 내 항진균 효능을 평가하여 얻어진 결과를 나타낸다.
(A) 페트리 접시에서 칸디다 알비칸스(C. albicans)의 억제 영역을 보여주는 이미지.
(B) 억제 영역(mm). 각 값은 평균 ± 표준 편차 (n = 4)를 나타낸다.
***p<0.001, 이트라코나졸 국소 제제 # 11 (비히클)과 비교. ##p<0.01, 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액과 비교.
도 3a 및 도 3b는 칸디다 알비칸스(C. albicans) 감염 마우스 모델에서 이트라코나졸 제제를 사용한 1일 1회 경구 또는 국소 처리의 생체 내 항진균 효능을 평가하여 얻어진 결과를 나타낸다.
도 3a는 각각 40 mg/kg 이트라코나졸 및 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) 또는 40 mg/kg에 해당하는 이트라코나졸 국소 제제 #11의 1일 1회 경구 및 국소 투여에 대한 진균 감염 및 처리 일정을 나타낸다.
도 3b의 (A) 내지 (C)는 칸디다 알비칸스(C. albicans)에 감염되었거나 감염되지 않은 마우스에서 국소 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) 또는 이트라코나졸 국소 제제 #11 또는 경구 이트라코나졸로 10일 동안 처리된 마우스의 피부 병변에서 형성된 삼출물(A), 홍반(B), 및 병변 크기(C)를 각각 나타낸다.
도 3b의 (D)는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)(그룹 1) 또는 이트라코나졸 국소 제제 #11(그룹 2)로 처리된 정상 피부; 이트라코나졸 국소 제제 #11로 처리된 스크래치된 피부(그룹 3); 10일 동안 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)(그룹 4), 경구 이트라코나졸(그룹 5) 및 이트라코나졸 국소 제제 #11 (그룹 6)로 처리된 스크래치된 진균 감염 피부의 대표적인 사진을 나타낸다.
각 값은 평균 ± 표준 편차를 나타낸다 (각 그룹의 n = 10).
도 4는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)(그룹 1, 3, 4) 및 40 mg/kg 이트라코나졸에 근거한 이트라코나졸 국소 제제 #11(그룹 2 및 6) 또는 10일 동안 40 mg/kg 이트라코나졸의 1일 1회 경구 투여(그룹 5)를 사용한 1일 회 처리 후 균학적 평가를 수행하여 얻어진 결과를 나타낸다.
(A) 그룹 4, 5 및 6에서 칸디다 알비칸스(C. albicans)에 감염된 마우스 피부 병변에서 생존 가능한 진균 세포 수. 각 값은 평균 ± 표준 편차 (n = 5)를 나타낸다. **p<0.01, ***p<0.001, 각 그룹의 초기 log CFU/피부 섹션과 비교. #p<0.05, ##p <0.01, 10일간이 처리 후 그룹 4의 log CFU/피부 섹션과 비교.
(B) 10일간의 처리 후, 절제된 정상의, 스크래치된 또는 스크래치 및 진균 감염된 마우스 피부의 24시간 배양 후 생존 가능한 진균 세포의 대표적인 사진.
도 5는 10일의 경구 또는 국소 이트라코나졸 처리 후 헤마톡실린 & 에오신(H&E)(도 5a) 및 과요오드산-쉬프(PAS)(도 5b)로 염색된 정상의, 스크래치된 및 스크래치 및 진균 감염된 마우스 피부의 조직 절편의 대표적인 광학 현미경 사진을 나타낸다. PAS 양성 반응(빨간색)이 표피, 모낭 및 피지선(흑색 화살표)의 기저막에서 관찰되었다. 스케일 바 = 100 μm.
(A) 24시간 동안 인간 피부를 투과하여 누적 투과된 이트라코나졸 농도의 시간 경과.
(B) 48시간 및 72시간에 인간 피부를 투과한 이트라코나졸의 누적 침투.
(C) 각질층, 표피 및 진피에서 조직 그램 당 침적된 이트라코나졸 농도.
(D) 1일부터 7일까지 인간 조갑을 투과하여 누적 분배된 약물 농도의 시간 경과.
각 값은 평균 ± 표준 편차 (n = 4)를 나타낸다. **p <0.01, ***p <0.001, 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액와 비교. #p<0.05, ##p<0.01, ###p<0.001, 이트라코나졸 국소 제제 #6과 비교. $p<0.05. 이트라코나졸 국소 제제 #8과 비교.
도 2는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클), 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액 및 이트라코나졸 국소 제제 #11의 시험관 내 항진균 효능을 평가하여 얻어진 결과를 나타낸다.
(A) 페트리 접시에서 칸디다 알비칸스(C. albicans)의 억제 영역을 보여주는 이미지.
(B) 억제 영역(mm). 각 값은 평균 ± 표준 편차 (n = 4)를 나타낸다.
***p<0.001, 이트라코나졸 국소 제제 # 11 (비히클)과 비교. ##p<0.01, 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액과 비교.
도 3a 및 도 3b는 칸디다 알비칸스(C. albicans) 감염 마우스 모델에서 이트라코나졸 제제를 사용한 1일 1회 경구 또는 국소 처리의 생체 내 항진균 효능을 평가하여 얻어진 결과를 나타낸다.
도 3a는 각각 40 mg/kg 이트라코나졸 및 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) 또는 40 mg/kg에 해당하는 이트라코나졸 국소 제제 #11의 1일 1회 경구 및 국소 투여에 대한 진균 감염 및 처리 일정을 나타낸다.
도 3b의 (A) 내지 (C)는 칸디다 알비칸스(C. albicans)에 감염되었거나 감염되지 않은 마우스에서 국소 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) 또는 이트라코나졸 국소 제제 #11 또는 경구 이트라코나졸로 10일 동안 처리된 마우스의 피부 병변에서 형성된 삼출물(A), 홍반(B), 및 병변 크기(C)를 각각 나타낸다.
도 3b의 (D)는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)(그룹 1) 또는 이트라코나졸 국소 제제 #11(그룹 2)로 처리된 정상 피부; 이트라코나졸 국소 제제 #11로 처리된 스크래치된 피부(그룹 3); 10일 동안 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)(그룹 4), 경구 이트라코나졸(그룹 5) 및 이트라코나졸 국소 제제 #11 (그룹 6)로 처리된 스크래치된 진균 감염 피부의 대표적인 사진을 나타낸다.
각 값은 평균 ± 표준 편차를 나타낸다 (각 그룹의 n = 10).
도 4는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)(그룹 1, 3, 4) 및 40 mg/kg 이트라코나졸에 근거한 이트라코나졸 국소 제제 #11(그룹 2 및 6) 또는 10일 동안 40 mg/kg 이트라코나졸의 1일 1회 경구 투여(그룹 5)를 사용한 1일 회 처리 후 균학적 평가를 수행하여 얻어진 결과를 나타낸다.
(A) 그룹 4, 5 및 6에서 칸디다 알비칸스(C. albicans)에 감염된 마우스 피부 병변에서 생존 가능한 진균 세포 수. 각 값은 평균 ± 표준 편차 (n = 5)를 나타낸다. **p<0.01, ***p<0.001, 각 그룹의 초기 log CFU/피부 섹션과 비교. #p<0.05, ##p <0.01, 10일간이 처리 후 그룹 4의 log CFU/피부 섹션과 비교.
(B) 10일간의 처리 후, 절제된 정상의, 스크래치된 또는 스크래치 및 진균 감염된 마우스 피부의 24시간 배양 후 생존 가능한 진균 세포의 대표적인 사진.
도 5는 10일의 경구 또는 국소 이트라코나졸 처리 후 헤마톡실린 & 에오신(H&E)(도 5a) 및 과요오드산-쉬프(PAS)(도 5b)로 염색된 정상의, 스크래치된 및 스크래치 및 진균 감염된 마우스 피부의 조직 절편의 대표적인 광학 현미경 사진을 나타낸다. PAS 양성 반응(빨간색)이 표피, 모낭 및 피지선(흑색 화살표)의 기저막에서 관찰되었다. 스케일 바 = 100 μm.
본 발명자들은 향상된 용해도, 강력한 피부 침투 및 장기간의 저장 안정성을 갖는 이트라코나졸을 함유하는 새로운 국소 전달 시스템을 설계하였으며, 생체 내 항진균 효능을 상업적으로 이용가능한 경구 제제와 비교하였다. 여기에서 국소 이트라코나졸 제제(이트라코나졸 국소 제제)를 제조하기 위하여, 에탄올 및 벤질 알코올을 각각 휘발성 비히클과 가용화제로 사용하였다. 용액 중에서 이트라코나졸의 용해도와 안정성을 높이기 위해 염산을 양성자화제(protonating agent)로 사용하고, 수산화나트륨을 사용하여 용액 pH를 피부의 생리학적 범위(pH 4.5∼5.5) 내로 유지하였다. 또한 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르(Transcutol® P, Gattefosse, France) 및 시클로메티콘(cyclomethicone)을 각각 투과 촉진제 및 살포제(spreading agent)(확산을 촉진하는 습윤제(wetting agent))로 사용하였다. 인공막, 인간 피부 및 인간 조갑에 대한 신규의 이트라코나졸 제제의 투과도를 시험하였으며, 그 결과를 바탕으로, 최적의 제제에 대한 생체 내 항진균 효능 비교 시험을, 시판되는 경구용 이트라코나졸 제제와 동일한 용량으로, 진피 칸디다 알비칸스 감염의 BALB/c 마우스 모델을 사용하여 수행하였다.
본 발명은 (i) 이트라코나졸; (ii) 휘발성 비히클로서 에탄올; (iii) 가용화제로서 벤질 알코올; (iv) 양성자화제로서 염산; (v) pH 조절제; 및 (vi) 투과촉진제로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르를 포함하는, pH 4.5∼5.5를 갖는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물에 있어서, 이트라코나졸은 치료학적으로 유효한 양(therapeutically effective amount)로 사용될 수 있다. 예를 들어, 이트라코나졸은 조성물 총 중량에 대하여 0.5∼10 중량%의 범위, 바람직하게는 약 1 중량%로 존재할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 이트라코나졸을 휘발성 성분(휘발성 비히클) 및 비휘발성 성분으로 구성된 2상 시스템에 통합시켜 제제화된다. 2상 시스템에서 휘발성 비히클로 사용되는 에탄올은 조성물 총 중량에 대하여 30∼80 중량%의 범위, 바람직하게는 40∼70 중량%의 범위, 더욱 바람직하게는 약 40 중량%로 존재할 수 있다. 비휘발성 성분으로서 사용되는 벤질 알코올은 가용화제로서 작용한다. 벤질 알코올이 조성물 총 중량에 대하여 10∼40 중량%의 범위, 바람직하게는 10∼30 중량%의 범위, 더욱 바람직하게는 약 30 중량%로 존재할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 이트라코나졸의 양성자화(protonation)를 통하여 용해도와 안정성을 향상시킬 수 있는 양성자화제를 포함한다. 양성자화제로 사용되는 염산은 조성물 총 중량에 대하여 0.1∼1.0 중량%의 범위, 바람직하게는 0.1∼0.7 중량%의 범위, 더욱 바람직하게는 약 0.5 중량%로 존재할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 피부의 생리학적 범위, 즉 pH 4.5∼5.5의 범위로 pH를 조절하는데 적합한 pH 조절제를 포함한다. 상기 pH 조절제의 예는 수산화나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 탄산수소나트륨, 트리에탄올아민 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 pH 조절제는 조성물 총 중량에 대하여 0.01∼0.5 중량%의 범위, 바람직하게는 0.04∼0.4 중량%의 범위, 더욱 바람직하게는 약 0.2 중량%로 존재할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 피부 및 조갑 투과도 및 피부 및 조갑으로의 약물 침적을 향상시키기 위한 투과촉진제로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르를 포함하며, 선택적으로 습윤제(혹은 살포제)로서 시클로메티콘을 추가로 포함할 수 있다. 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르는 조성물 총 중량에 대하여 1∼30 중량%의 범위, 바람직하게는 5∼20 중량%의 범위, 더욱 바람직하게는 약 15 중량%로 존재할 수 있다. 또한, 시클로메티콘은 조성물 총 중량에 대하여 1∼30 중량%의 범위, 바람직하게는 5∼20 중량%의 범위, 더욱 바람직하게는 약 10 중량%로 존재할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 필요에 따라 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물에 통상적으로 사용되는 첨가제, 예를 들어 항산화제, 킬레이트화제, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함할 수 있다. 상기 항산화제는 부틸화 히드록시아니솔 또는 부틸화 히드록시톨루엔일 수 있다. 상기 킬레이트화제는 에틸렌디아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA), 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민(tetrahydroxypropyl ethylenediamine, THPE), 디에틸렌트리아민펜타아세트산(diethylenetriaminepentaacetic acid, DTPA), 및 이들의 염(예를 들어, EDTA, THPE, 또는 DTPA의 나트륨염)으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택될 수 있다. 상기 항산화제 및 킬레이트화제는 국소 투여용 약학 조성물에서 통상적으로 사용되는 양으로 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 이트라코나졸 0.5∼10 중량%; 에탄올 30∼80 중량%; 벤질 알코올 10∼40 중량%; 염산 0.1∼1 중량%; 수산화나트륨 0.01∼0.5 중량%; 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 1∼30 중량%; 및 시클로메티콘 1∼30 중량%를 포함하는 국소 투여용 약학 조성물을 제공한다.
다른 구현예에서, 이트라코나졸 1 중량%; 에탄올 39.516 중량%; 벤질 알코올 30 중량%; 염산 0.484 중량%; pH 4.5∼5.5로 조절하는데 적합한 양의 수산화나트륨 또는 수산화나트륨 수용액(예를 들어, 1M 수산화나트륨 수용액); 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 15 중량%; 시클로메티콘 8.22 중량%; 부틸화 히드록시아니솔 0.1 중량%; 및 에틸렌디아민테트라아세트산 0.0025 중량%를 포함하는 국소 투여용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 상기한 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물의 제조방법을 제공한다. 본 발명에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물은 상기한 성분들을 사용하여 다양한 방법으로 제조될 수 있다.
예를 들어, 본 발명에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물의 제조방법은 하기 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:
(a) 이트라코나졸을 벤질 알코올에 용해하는 단계;
(b) 단계(a)에서 얻어진 용액에 염산을 첨가하여 이트라코나졸을 양성자화하는 단계;
(c) 단계(b)에서 얻어진 용액에 에탄올을 첨가하고 혼합하는 단계;
(d) 단계(c)에서 얻어진 용액에 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르을 첨가하고 혼합하거나 혹은 단계(c)에서 얻어진 용액에 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 및 시클로메티콘을 첨가하고 혼합하는 단계; 및
(e) 단계(d)에서 얻어진 용액에 pH 조절제를 가하여 pH를 pH 4.5∼5.5로 조절하는 단계.
상기 단계(a) 내지 단계(e)에서, 이트라코나졸, 휘발성 비히클, 가용화제, 양성자화제, pH 조절제, 투과촉진제, 및 습윤제(혹은 살포제)는 본 발명에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물과 관련지어 설명한 바와 같다.
상기한 본 발명의 제조방법은 단계(b)를 수행하기 전에, 단계(a)에서 얻어진 용액에 항산화제, 킬레이트화제, 또는 이들의 혼합물을 용해하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 항산화제 및/또는 킬레이트화제 또한 본 발명에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물과 관련지어 설명한 바와 같다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것이며, 본 발명이 이들에 한정되는 것은 아니다.
1. 재료 및 시험방법
(1) 국소 제제에 있어서 이트라코나졸의 용해도
이트라코나졸의 피부 투과에 대한 주요 장애는 낮은 수용해도이다. 따라서 다양한 용매(예를 들어, 에탄올, 벤질 알코올, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르(Transcutol® P, Gattefosse, France), 폴리옥실 35 피마자유(Cremephor® EL, Sigma-Aldrich Inc.) 등)을 선택하여 이트라코나졸의 용해도 향상능을 검색하였다. 과량의 이트라코나졸을 각각의 용매에 첨가하고, 실온에서 볼텍스 믹서를 사용하여 혼합하였다. 48시간 후 샘플을 10,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하고, 상등액을 아세토니트릴과 물로 구성된 이동상(80:20, v/v)으로 희석하였다(인산으로 pH를 4.0으로 조정). 각각의 희석된 샘플 중 이트라코나졸 농도는 263 nm에서 HPLC로 측정하였다. Luna C18 컬럼(250 mm × 4.6 mm, 5 μm 입자 크기, 20 μL 주입 부피)을 0.7 mL/min의 유속으로 이동상과 함께 사용하였다.
(2) 이트라코나졸 국소 제제의 제조 및 시험관 내 인공 투과도(in vitiro artificial permeability)
1% 이트라코나졸 국소 제제(5 g 이트라코나졸 / 100 mL 용액)을 제조하기 위하여, 벤질 알코올과 에탄올을 각각 가용화제와 전달 비히클로 선택하였다. 부틸화 히드록시아니솔(BHA)을 항산화제로서 첨가하였으며, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 킬레이트화제로서 첨가하였다(표 1). 구체적으로, 0.05 g의 이트라코나졸을 각각 0.5 g, 1.0 g, 1.5 g의 벤질 알코올을 사용하여 용해하였다. 이후, 0.005 g의 BHA 및 0.05 g의 EDTA 수용액(0.025 mg/mL)을 첨가하고 볼텍스 혼합을 수행하였다. 이후, 이트라코나졸의 양성자화(protonation)를 위하여 염산을 0.121%, 0.242% 및 0.484%의 농도로 국소 제제에 첨가하여 용해도와 안정성을 향상시켰다. 이후, 에탄올 1.5 g을 첨가하고, 1분간 혼합하였다. 피부와 조갑에 대한 이트라코나졸의 투과도를 개선하기 위하여, 다양한 양의 Transcutol® P(10%, 15% 및 20%)와 시클로메티콘(5.00% 및 8.22%)을 제제에 첨가하였다. 수산화나트륨을 첨가하여 pH를 4.5∼5.5 범위로 조정하였다. 마지막으로 에탄올을 첨가하여 제제의 중량을 100%로 유지하였다. 이트라코나졸의 용해도 및 혼화성 및 이트라코나졸 국소 제제 시스템의 다른 성분에 대한 다양한 첨가제(다양한 농도)의 영향을 평가하였다. 또한, 약물 농도 및 물리화학적 특성(예를 들어, 색상, 침전 및 상분리)의 변화를 3개월 이상 매주 조사하였다.
인공막(Strat-M®; EMD Millipore, Temecula, CA, USA)을 사용하여 프란즈 확산셀 시스템(Labfine, 한국)을 사용하여 이트라코나졸 국소 제제의 시험관 내 인공 투과도를 조사하였다. 이 분석에서 각각의 막을, 0.785 cm2 확산 영역을 갖는, 도너(donor)와 리셉터(receptor) 컴파트먼트 사이에 삽입하였다. 싱크 상태(sink condition)를 유지하는 리셉터-상(receptor-phase) 용액으로서, 15% 아세토니트릴을 함유하는 5 mL의 인산완충식염수(PBS; pH 7.4)로 리셉터를 채웠다. 리셉터셀 중의 용액은 가열 시스템 내에서 마그네틱 교반기를 사용하여 600 rpm으로 교반하여 실험 내내 막 표면 온도를 32℃로 유지하였다. 이후, 50 μL의 각 제제를 도너 컴파트먼트에 로딩하였다. 이후, 소정의 시간 간격(0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6시간)에 샘플링 포트로부터 리셉터 상의 샘플 500 μL를 취하고, 동등한 부피의 신선한 리셉터 용액으로 교체하였다. 채취한 샘플을 멤브레인 필터(포어 사이즈 0.45 μm의 폴리비닐리덴 플루오라이드[PVDF])를 통하여 여과하고 상기한 바와 같이 263 nm에서 HPLC로 분석하였다.
제제 (%, w/w) |
ITZ* | BHA | EDTA | 물 | 벤질 알코올 |
염산 | 1M NaOH | Transcutol P | 시클로메티콘 | 에탄올 |
ITZ* 에탄올 분산액 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 97.900 | |||||
ITZ-TF** #1 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 10 | 87.900 | ||||
ITZ-TF** #2 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 20 | 77.900 | ||||
ITZ-TF** #3 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 67.900 | ||||
ITZ-TF** #4 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.121 | 1.12 | 66.659 | ||
ITZ-TF** #5 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.242 | 2.13 | 65.528 | ||
ITZ-TF** #6 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.484 | 4.12 | 63.296 | ||
ITZ-TF** #7 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.484 | 3.64 | 10 | 53.776 | |
ITZ-TF** #8 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.484 | 3.48 | 15 | 48.936 | |
ITZ-TF** #9 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.484 | 3.46 | 20 | 43.956 | |
ITZ-TF** #10 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.484 | 4.64 | 15 | 5.00 | 42.776 |
ITZ-TF** #11 | 1 | 0.1 | 0.0025 | 0.9975 | 30 | 0.484 | 4.68 | 15 | 8.22 | 39.516 |
* ITZ: 이트라코나졸
** ITZ-TF: 이트라코나졸 국소 제제
(3) 전-두께 인간 피부에서 이트라코나졸의 시험관 내 투과 및 침적
각 비히클 시스템에 대한 이트라코나졸의 인간 피부 투과도를 비교하기 위하여, 전-두께(full-thickness) 인간 피부(한스바이오메드(주), 대전)의 절제 섹션(excised section)을, 5 mL의 PBS(pH 7.4) : 아세토니트릴, 85:15(v/v)로 채워진 프란츠 확산셀 시스템의 리셉터 컴파트먼트 상에, 각질층이 위로 향하도록 장착하였다. 리셉터 컴파트먼트는 600 rpm에서 교반하여 실험 내내 피부 표면 온도를 32℃로 유지하였다. 도너셀에 시험 샘플을 가하기 전에, 리셉터셀을 적어도 1시간 동안 평형시켜 표피 막 완전성(epidermal membrane integrity)을 확보하였다. 이후, 각각의 제제 50 μL를 24시간 간격으로 도너 컴파트먼트에 로딩하였다. 이후, 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 24, 48 및 72시간에 각각의 확산 셀로부터 리셉터 상의 샘플 500 μL를 취하고, 동등한 부피의 신선한 리셉터 용액으로 교체하였다. 채취한 모든 샘플을 PVDF 멤브레인 필터(0.45 μm 포어 사이즈)를 통과시킨 후, 상기한 바와 같이 HPLC로 분석하였다.
전-두께 인간 피부 투과도 측정 완료 후 이트라코나졸의 피부 침적을 평가하기 위하여, 피부 섹션을 증류수로 5회 세척하고, 티슈 페이퍼로 부드럽게 닦아 잔류 제제를 제거하였다. 이후, 피부의 초기 무게를 측정하였다. 각질층을 분리하기 위하여, 점착테이프로 피부를 6회 스트리핑하였다. 각질층의 무게는 피부의 초기 무게에서 스트리핑 후 최종 무게를 빼서 계산하였다. 다음으로, 열처리를 통해 표피와 진피를 분리하고, 인간 피부 샘플을 60℃로 유지시킨 증류수에 1분간 담갔다. 이후, 포셉(forcep)을 사용하여 표피를 진피로부터 조심스럽게 분리하였다. 각질층, 표피 및 진피를 포함하는 스트립 테이프(stripped tape)를 작은 조각으로 자르고, 5 mL의 메탄올에 담근 다음, 24시간 동안 볼텍스 혼합에 의해 추출하였다. 얻어진 현탁액을 멤브레인 필터(0.45 μm 포어 사이즈)를 사용하여 여과하고 유리 바이알로 옮겼다. 내부표준물질(5 μg/mL EFN(에피나코나졸) 100 μL)을 첨가하고 혼합물을 회전 증발기를 사용하여 건조하였다. 이후, 건조된 잔류물을 메탄올과 이동상(아세토니트릴: 0.1% 포름산 수용액 포름산, 60:40 [v/v])의 1:1 (v/v) 혼합물 200 μL에서 재구성하고 LC/MS 분석을 수행하였다. 마지막으로, 재구성된 샘플 중 이트라코나졸 농도는 고정상으로서 Luna C18 컬럼(250 x 4.6 mm, 5 μm)이 장착된 Agilent 6120 quadruple LC/MS 시스템을 사용하여 결정하였다. 각 샘플(20 μL)은 1 mL/min의 유속으로 이동상에서 용리시켰다. 이트라코나졸과 EFN(에피나코나졸)은 하기 조건에서 양이온 모드로 전기분무 이온화 소스(electrospray ionization source)를 사용하여 이온화시켰다: 모세관 전압 4 kV, 건조 가스 유속 10.0 L/min, 건조 온도 100℃. 양성자화된 분자 이온의 정량 분석은 이트라코나졸 및 EFN(에피나코나졸)에 대해 각각 ([M + H]+ = 706.8) 및 ([M + H]+ = 349.4)에서 수행하였다.
(4) 시험관 내 인간 조갑 투과도 및 이트라코나졸 침적
인간 조갑을 통한 이트라코나졸의 침투를 조사하기 위하여, 프란즈 확산셀 시스템을 사용하여 시험관 내 조갑 투과 및 침적 분석을 수행하였다. Science Care, Inc. (Phoenix, AZ, USA)로부터 얻은 인간 조갑은 사용할 때까지 -80℃에서 보관하였다. 실험 하루 전에 조갑을 실온 보관 조건으로 옮겼다. 실험 당일, 조갑 플레이트를 생리 식염수에 보관하여 충분한 수화를 확보하였다. 이후, 도너와 리셉터 컴파트먼트 사이에 장착된 두 개의 테플론 조갑-홀더 개스킷 사이에 조갑 플레이트를 고정하였다. 리셉터 용액(5 mL; PBS [pH 7.4] : 아세토니트릴, 85:15, [v/v])을 사용하여 리셉터 컴파트먼트를 채웠다. 리셉터 컴파트먼트의 용액을 600 rpm에서 교반하여 실험 내내 조갑 표면 온도를 32℃로 유지하였다. 1일 1회 용량(once-a-day dose)(용량 당 20 μL)의 각각의 1% 이트라코나졸 국소 제제를 7일 동안 도너 컴파트먼트에 로딩하였다. 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7일 간격으로 리셉터 상의 샘플(500 μL)을 취하고, 동등한 부피의 신선한 리셉터 용액으로 교체하였다. 채취한 샘플은 멤브레인 필터(0.45 μm PVDF)로 여과하였다. 이후, 여과액 샘플 100 μL을 메탄올에서 EFN 약물 용액 100 μL(5 μg/mL, 내부표준물질)과 혼합하고 상기한 바와 같이 LC/MS를 통해 분석하였다.
조갑내 이트라코나졸 침적을 모니터링하기 위하여 확산셀을 분해하고 조갑 플레이트를 분리하였다. 모든 조갑 플레이트는 5 mL의 물로 2회 세척하였다. 이후, 약물 제제에 효과적으로 노출된 부위를 작은 조각으로 자르고, 1M 수산화나트륨 : 메탄올 (1:1, v/v) 용액에 용해하였다. 조갑 현탁액을 60℃에서 4시간 동안 인큐베이션한 다음, 1 mL의 메탄올 및 1 mL의 에탄올과 연속적인 볼텍스 혼합과 함께 혼합하였다. 인큐베이션이 완료된 후, 조갑 현탁액을 4,000 rpm으로 10분 동안 원심분리하여 맑은 상등액을 얻은 다음, 유리 바이알에서 100 μL의 내부표준물질(5 μg/mL EFN)과 혼합하였다. 회전 증발기(Genevac Ltd., Ipswich, UK)를 사용하여 상등액과 내부표준물질의 혼합물을 증발시켰다. 마지막으로, 건조된 잔류물을 메탄올과 이동상(아세토니트릴 : 0.1% 포름산 수용액, 60:40, [v/v])의 1:1 (v/v) 혼합물 200 μL에서 재구성하고, 상기한 바와 같이 LC/MS를 통해 분석하였다.
(5) 시험관 내 항진균 효능
다양한 이트라코나졸 샘플에 대한 칸디다 알비칸스(C. albicans)의 감수성을 한천-디스크(agar-disc) 확산법을 통해 평가하였다. 먼저, 감자 덱스트로스 한천 배지 중의 칸디다 알비칸스(C. albicans)의 현탁액(107 CFU/mL)의 샘플 100 μL를 페트리 접시 위에 균일하게 펼쳤다. 다음으로, 멸균 여과지를 펀칭하여 직경 1cm의 종이 디스크를 준비한 다음, 100 μg/mL 이트라코나졸 샘플 40 μL에 담갔다. 다양한 이트라코나졸 샘플에 담근 종이 디스크를, 디스크 사이에 충분한 간격을 두고, 칸디다 알비칸스(C. albicans)를 함유하는 페트리 접시에 배열한 다음 28℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 마지막으로, 각각의 이트라코나졸 종이 디스크 주변의 성장이 억제된 영역의 평균 직경을 측정하여 억제 영역을 계산하였다.
최소 억제 농도(MIC) 및 최소 살진균 농도(MFC)를 결정하기 위하여, 감자 덱스트로스 브로스 방법을 사용하였다. 먼저, 칸디다 알비칸스(C. albicans)를 감자 덱스트로스에서 107 CFU/mL로 제조하였다. 별도로, 감자 덱스트로스 배지를 사용하여 다양한 농도의 이트라코나졸 샘플(0, 3.125, 6.25, 12.5, 100 및 200 ㎍/mL)을 제조하였다. 감자 덱스트로스(40 μL; 107 CFU/mL) 중의 칸디다 알비칸스(C. albicans) 분취물을 96웰 플레이트에서 각각의 이트라코나졸 샘플의 동등한 부피와 혼합하고, 28℃에서 24시간 동안 배양하였다. 마지막으로, 660 nm에서 흡광도를 측정하고 다음 식을 사용하여 진균 성장 억제를 결정하였다:
성장 억제(%)=(AC-At)/AC × 100
Ac는 음성 대조군의 평균 흡광도를 나타내고, At는 처리 웰의 평균 흡광도를 나타낸다. MIC는 대조군에 비하여 진균 생존능(viability)이 10% 감소한 것으로 정의되며, MFC는 100% 성장 억제로 정의된다.
(6) 이트라코나졸 국소 제제의 생체 내 피부 자극 및 항진균 효능
BALB/c 마우스(6주령, OrientBio, 한국)를 사용하여 이트라코나졸 국소 제제의 생체 내 피부 자극 및 항진균력을 평가하였다. 마우스는 표 2에 나타낸 바와 같이 6개의 그룹으로 무작위로 나누었다(그룹 1-6, 그룹당 n = 15 마리 마우스). 면역력이 약한 숙주에서 칸디다 알비칸스(C. albicans)의 기회주의적 특성(opportunistic nature)으로 인하여, 그룹 3, 4, 5 및 6의 마우스는 3일 동안 복강 경로를 통해, 5 mg/kg/day의 용량으로, 덱사메타손 인산나트륨 수용액을 사용하여 면역억제시켰다. 두 번째 면역억제일에, 전기 클리퍼를 사용하여 모든 마우스에서 약 2 x 2 cm2의 등털을 면도하여 제거하였다. 이후, 멸균 미세-그릿 사포(sterile fine-grit sandpaper)(120 메쉬)를 사용하여 그룹 3, 4, 5 및 6의 마우스의 면도 부위에 약 1.75 × 1.75 cm2의 스크래치를 만들었다. 진균 감염을 유도하기 위하여, 107 CFU/mL의 칸디다 알비칸스(C. albicans) 현탁액 100 μL(각각 4회, 25 μL 분취물)을 그룹 4, 5, 및 6 마우스의 면도되고 가볍게 스크래치된 피부에 3일 동안 연속적으로 도포하였다. 그룹 4, 5, 및 6의 진균 감염 유도는 임상 스코어(감염된 부위에 걸쳐 삼출물, 홍반 및 백색 물질의 존재 여부 기준)와 그룹 3의 소견을 비교하여 확인하였다. 증상은 개별적으로 다음과 같이 점수화하였다: 0 (완전히 없음), 1 (약간 보임), 2 (명확하게 보임), 3 (작은 영역에서 실질적으로 보임) 및 4 (큰 영역에서 보임). 각 증상의 평균 중증도 스코어는 각 그룹에 대해 별도로 계산하였다. 또한 항진균 효능을 평가하기 위하여, 디지털 카메라와 ImageJ 소프트웨어(LOCI)를 사용하여 병변 영역을 측정하였다. 치유율(healing rate)은 남아있는 상처 부위의 비율로 표현하였다. 추가로, 무작위로 선택된 16 마리의 마우스(그룹당 n = 4 마리 마우스; 그룹 3, 4, 5 및 6)의 감염된 부위에서 약 2 × 2 cm2 섹션의 피부를 균학적 평가(mycological evaluation)를 위해 채취하였다. 각각의 분리된 피부 섹션을 서로 다른 영역에서 균일하게 펀칭하고, 37℃ ± 1℃에서 사부로오드(Sabouraud) 덱스트로스 한천 배지에서 배양하였다. 48시간의 인큐베이션 후, CFU를 계수하고 평균값을 계산하였다. 마지막으로, 그룹 4, 5, 및 6의 마우스와 그룹 3의 마우스의 중증도 스코어 및 균학적 상태를 비교하여 진균 감염을 확인하였다. 이후, 모든 그룹의 마우스에서 이트라코나졸 샘플을 사용하여 10일 동안의 처리를 시작하였다. 40 mg/kg/day에 해당하는 용량의 이트라코나졸 샘플을 사용한 마우스의 처리는 다음과 같이 수행하였다: 그룹 1, 3 및 4 [이트라코나졸 제제 #11 (비히클)], 그룹 2 및 3 [이트라코나졸 제제 #11] 및 그룹 5 [이트라코나졸 (경구)].
각각의 이트라코나졸 샘플의 피부 자극 및 항진균 효능 특성을 조사하기 위하여, 처리 과정에서 지속적인 중증도 평가(severity evaluation)을 수행하였다. 처리 11일째에 모든 마우스를 희생시키고, 추가 분석을 위해 피부를 분리하였다. 이트라코나졸 샘플의 항진균 활성에 직접적으로 접근하기 위하여 상기한 바와 같이 균학적 평가(mycological evaluation)를 수행하였다. 감염 부위의 항진균 효능은 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 및 과요오드산-쉬프(PAS) 염색을 통한 조직병리학적 분석으로 평가하였다. H&E 염색을 위하여, 피부를 파라핀으로 블록킹하고, H&E 염료로 염색하여, 염증 패턴, 혈관 및 삼출물을 현미경으로 검사하고 특성화하였다. PAS 염색을 위하여, 피부 표본을 PBS로 3회 세척하고, Carnoy 용액에 밤새 고정하였다. 이후, 피부 표본을 멸균 PBS에 담그고, 세척하고, 에탄올로 탈수처리하고, 자일렌으로 유리화하고, 파라핀에 담그고 포매하였다. 피부의 현미경 검사를 수행하여 진균 세포벽 또는 세포 캡슐에 존재하는 탄수화물 유사체를 나타내는 밝은 적분홍색을 시각화하였다.
그룹 | 면역 억제 | 스크래칭 | 진균 감염 | 처리 | 투여 경로 |
1 | ITZ-TF* #11 (비히클) | 국소 | |||
2 | ITZ-TF #11 | 국소 | |||
3 | 면역 억제시킴 | 스크래칭 수행 | ITZ-TF* #11 (비히클) | 국소 | |
4 | 면역 억제시킴 | 스크래칭 수행 | 감염시킴 | ITZ-TF* #11 (비히클) | 국소 |
5 | 면역 억제시킴 | 스크래칭 수행 | 감염시킴 | 이트라코나졸 | 경구 |
6 | 면역 억제시킴 | 스크래칭 수행 | 감염시킴 | ITZ-TF* #11 | 국소 |
* ITZ-TF: 이트라코나졸 국소 제제
(7) 통계 분석
모든 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표현한다. 짝을 이루지 않은 데이터는 두 평균값 간의 비교를 위해 Student's t-test를 사용하여 평가하였으며, 두 개 이상의 평균값 간의 비교를 위해 일원 분산 분석 및 Tukey의 다중 비교 테스트를 수행하였다. 모든 분석에서 p<0.05를 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다.
2. 시험결과 및 논의
(1) 약물 용해도 및 이트라코나졸 국소 제제의 시험관 내 인공막 투과도
용해도 및 투과도가 향상된 국소 이트라코나졸 제제(이트라코나졸 국소 제제)를 개발하기 위하여, 휘발성 및 비휘발성 성분으로 구성된 2상 시스템을 설계하였다. 첫째, 안전성 프로파일을 기반으로 에탄올을 전달 비히클로서 선택하였다. 추가적인 안정성을 위해 BHA, EDTA 및 1M 수산화나트륨을 각각 항산화제, 킬레이트화제 및 pH 조절제로 사용하였다. 다음으로, 이트라코나졸의 용해도에 근거하여 벤질 알코올을 공용매로 사용하였다. 이트라코나졸 국소 제제 #1, #2 및 #3에 벤질 알코올을 각각 10%, 20% 및 30% 농도로 첨가한 후, 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액(대조 용액)보다 가용화된 형태로 약 29배 더 많은 약물 농도가 0일에 달성되었다. 또한, 이트라코나졸 국소 제제 #3의 인공막 투과도는 대조군에 비해 13.5배 향상되었다. 그러나, 30일째에 이트라코나졸 국소 제제 #3은 58.41%의 약물 함량을 나타내었으며, 이는 극성 용매(예를 들어, 에탄올 및 물)의 존재로 인한 반-용매 결정화 현상을 통한 약물 침전을 시사하였다. 따라서, 약물 침전을 방지하기 위하여, 염산을 0.121%, 0.242% 및 0.484% 농도로 이트라코나졸 국소 제제 #4, #5 및 #6에 각각 첨가하였다. 극성 시스템을 갖는 비히클에서의 용해도와 안정성이 약물 양성자화(drug protonation) 및 이트라코나졸과 염산 간의 안정적인 복합체 형성으로 달성되었다. 그 결과, 이트라코나졸 국소 제제 #6은 30일까지 99.5% 약물 함량을 나타내었다. 그러나 이트라코나졸 국소 제제 #6의 약물 투과도는 이트라코나졸 국소 제제 #3에 비해 향상되지 않았다.
투과도를 높이기 위해 본 발명자들은 이트라코나졸 국소 제제 #7, #8 및 #9에 Transcutol® P를 각각 10%, 15% 및 20% 농도로 첨가하였다. 이트라코나졸 국소 제제 #7, #8 및 #9의 인공막 약물 투과도는 이트라코나졸 국소 제제 #6에 비해 각각 2.89배, 4.08배 및 4.11배 향상되었다. 이들 제제의 약물 함량은 30일까지 약 99%로 유지되었다. 그러나, 이트라코나졸 국소 제제 #8 및 #9의 거의 동일한 약물 침투 특성은 15% Transcutol® P가 최대로 향상된 약물 투과도를 제공함을 시사한다. 또한 습윤제로서 시클로메티콘을 5% 및 8.22% 농도로 이트라코나졸 국소 제제 #10 및 #11에 각각 첨가하였다. 이트라코나졸 국소 제제 #11은 이트라코나졸 국소 제제 #8에 비해 2.07배 더 높은 약물 투과도를 나타내었다. 또한 이트라코나졸 국소 제제 #11은 90일 이상 95.0-105.0% 범위의 약물 함량을 유지할 수 있었으며, 물리적 외관의 변화(예를 들어, 침전, 상분리 또는 변색)는 관찰되지 않았다.
제제 | 초기 약물 농도(mg/mL) | 1개월 후 약물 함량(%) | 누적 투과 약물 (㎍/mL) |
ITZ* 에탄올 분산액 | 0.315 ± 0.01 | 12.74 ± 0.69 | 0.244 ± 0.033 |
ITZ-TF** #1 | 9.246 ± 0.01 | 38.86 ± 0.88 | 1.244 ± 0.120 |
ITZ-TF** #2 | 9.326 ± 0.07 | 51.09 ± 0.30 | 2.560 ± 0.170 |
ITZ-TF** #3 | 9.321 ± 0.95 | 58.41 ± 0.46 | 3.156 ± 0.012 |
ITZ-TF** #4 | 9.246 ± 0.47 | 69.69 ± 0.70 | 3.250 ± 0.150 |
ITZ-TF** #5 | 9.253 ± 0.20 | 80.04 ± 0.46 | 3.420 ± 0.105 |
ITZ-TF** #6 | 9.376 ± 1.65 | 99.46 ± 0.54 | 3.814 ± 0.003 |
ITZ-TF** #7 | 9.412 ± 0.21 | 99.75 ± 1.80 | 11.027 ± 1.465 |
ITZ-TF** #8 | 9.361 ± 0.90 | 99.57 ± 0.15 | 15.589 ± 0.250 |
ITZ-TF** #9 | 9.415 ± 0.11 | 99.83 ± 0.23 | 15.676 ± 0.941 |
ITZ-TF** #10 | 9.402 ± 0.27 | 99.81 ± 1.21 | 24.746 ± 1.384 |
ITZ-TF** #11 | 9.391 ± 0.21 | 99.86 ± 0.60 | 36.645 ± 1.045 |
* ITZ: 이트라코나졸
** ITZ-TF: 이트라코나졸 국소 제제
1개월 후 약물 함량은 초기 약물 농도를 100%로 정의하여 계산하였다. 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액 및 이트라코나졸 국소 제제의 누적 투과 약물 농도는 인공 피부막을 사용하여 6시간의 투과 후 측정하였다. 각각의 값은 평균 ± 표준 편차를 나타낸다(n=6).
(2) 전-두께 인간 피부에서 이트라코나졸의 시험관 내 투과 및 침적
1% 이트라코나졸 에탄올 분산액, 이트라코나졸 국소 제제 #6, #8 및 #11로부터 피부 투과 및 이트라코나졸 침적을 프란즈 확산 시스템을 사용하여 결정하였다. 이트라코나졸 국소 제제 #6, #8 및 #11의 이트라코나졸은 0.5시간의 투과 후 리셉터 상에서 검출되었다. 그러나 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액으로부터 이트라코나졸의 피부 투과는 1.5시간에 관찰되었다(도 1A). 이트라코나졸 국소 제제 #6의 이트라코나졸 누적 투과 농도는 24시간에 0.228 ± 0.008 μg/mL이었으며, 이는 24시간에 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액의 누적 투과 농도보다 67% 더 높았다. 이러한 투과도 향상은 0일에 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액보다 이트라코나졸 국소 제제 #6의 약물 농도가 29.8 배 더 높았기 때문일 수 있다. 또한, 이트라코나졸 국소 제제 #8에 존재하는 약물의 피부 투과는 이트라코나졸 국소 제제 #6에 존재하는 약물의 투과보다 더 신속하였으며, 24시간에 이트라코나졸 국소 제제 #8의 누적 투과 약물 농도는 이트라코나졸 국소 제제 #6의 누적 침투 약물 농도보다 29.3% 더 높았다. 이트라코나졸 국소 제제 #8의 향상된 투과도는 Transcutol® P의 존재와 관련이 있다. 더욱이, 이트라코나졸 국소 제제 #11의 투과 약물 농도는 각각 24시간과 72시간에 이트라코나졸 국소 제제 #8의 해당 농도보다 7.00% 및 28.0% 더 높았다(도 1B). 이러한 차이는 이트라코나졸 국소 제제 #8에 비하여 이트라코나졸 국소 제제 #11에서 시클로메티콘의 추가 존재와 관련이 있다.
1% 이트라코나졸 에탄올 분산액, 이트라코나졸 국소 제제 #6, #8 및 #11을 3일 동안 적용한 후 다양한 피부층에서의 이트라코나졸의 침적을 도 1C에 나타내었다. 이트라코나졸의 침적은 각질층에서 더 높았으며, 표피와 진피가 다음이었고, 이는 각질층에 존재하는 지질 성분에 대하여 더 큰 친화력을 부여하는 이트라코나졸의 친유성 특성으로 인한 것으로 추정된다. 이트라코나졸 국소 제제 #6은 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액에 비해 진피에서의 약물의 피부 침적이 257% 더 높았다. 또한, 이트라코나졸 국소 제제 #8의 각질층, 표피 및 진피에서의 약물 침적 농도는 이트라코나졸 국소 제제 #6에 비하여 157%, 474%, 1714% 향상되었다. 이트라코나졸 국소 제제 #8에 비하여 이트라코나졸 국소 제제 #11이 진피에서 약물이 23.7% 더 많이 침적된 것은 이트라코나졸 국소 제제 #11로부터 인간 피부로의 약물 분배가 증가했기 때문일 수 있다.
(3) 시험관 내 인간 조갑 투과도 및 침적
1% 이트라코나졸 에탄올 분산액, 이트라코나졸 국소 제제 #8 및 #11에서 이트라코나졸의 조갑 플레이트의 투과력은 도 1D에 나타낸 바와 같이 평가되었다. 약물 로딩 24시간 후 이트라코나졸 국소 제제 #8의 이트라코나졸 투과도는 0.101 ± 0.005 μg/mL이었으며, 이는 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액의 이트라코나졸 투과도보다 203% 더 높았다(도 1D). 또한 이트라코나졸 국소 제제 #8은 7일째에 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액에 비해 126% 더 높은 누적 투과 약물 농도를 나타내었다. 더욱이, 7일째에 이트라코나졸 국소 제제 #11은 이트라코나졸 국소 제제 #8에 비하여 조갑 전체에 걸쳐 약물 투과력이 36.0% 향상되었다. 또한, 7일 연속 도포 후, 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액, 이트라코나졸 국소 제제 #8 및 #11은 각각 31.4 ± 5.68, 42.9 ± 4.23 및 72.2 ± 14.9 μg/mL의 조갑 플레이트에서의 약물 침적을 나타내었다. 따라서, 향상된 조갑 침투 및 조갑 플레이트 중의 약물의 침적에 기초하여, 이트라코나졸 국소 제제 #11은, 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액 및 이트라코나졸 국소 제제 #8에 비하여, 최적의 제제로 확인되었다.
(4) 시험관 내 항진균 활성
진균 세포의 성장을 효과적으로 억제하는 제제의 능력은 살진균 활성으로 알려져 있다. 이러한 살진균 효과는 용해도와 진균 세포막을 투과하는 투과도에 의해 매개된다. 이트라코나졸은 높은 항진균능을 가지고 있으나, 이트라코나졸의 낮은 용해도와 안정성은 진균 세포막을 투과하는 투과도를 제한하고 시험관 내 항진균 효과를 상당히 감소시키는 중요한 장애물이다. 용해도, 안정성 및 인체 피부와 조갑에 대한 시험관 내 투과도 향상을 기초로, 칸디다 알비칸스(C. albicans)에 대한 시험관 내 항진균 효과를 평가하기 위하여, 이트라코나졸 국소 제제 #11을 선택하였다. 비교를 위하여, 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)과 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액을 사용하였다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 이트라코나졸 국소 제제 #11의 평균 억제 영역은 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) 및 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액의 평균 억제 영역보다 각각 244% 및 163% 더 높았다. 또한, 이트라코나졸 국소 제제 #11 및 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액의 MFC는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)의 MFC보다 4배 더 낮았다. 이트라코나졸 국소 제제 #11의 MIC는, 1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액 및 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)의 MIC보다, 각각 4배 및 10.6배 낮았다(표 4). 칸디다 알비칸스(C. albicans)에 대한 이트라코나졸 국소 제제 #11의 증가된 살진균 활성은 진균 세포질로의 증가된 약물 분배를 통한 수동 확산을 촉진하는 효과적인 투과 증진제의 존재와 관련된다.
샘플 | MIC (㎍/mL) | MFC (㎍/mL) |
이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) | 50.0 | 100 |
1% 이트라코나졸의 벤질 알코올 용액 | 12.5 | 25 |
이트라코나졸 국소 제제 #11 | 4.68 | 25 |
(5) 이트라코나졸 국소 제제의 생체 내 항진균 활성
(5.1) 진피 진균 감염과 관련된 증상의 평가
생체 내 피부 자극 및 항진균 연구 과정에서의 반응은 병변 크기, 삼출물, 피부 발적(홍반) 및 건성 피부(dry scaly skin)의 유무를 기준으로 평가하였다(도 3). 그룹 1[이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)로 처리된 정상 피부] 및 그룹 2[이트라코나졸 국소 제제 #11로 처리된 정상 피부]의 마우스는 피부 자극과 관련된 명백한 증상을 나타내지 않았으며, 이는 일반 마우스 피부에서 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) 및 이트라코나졸 국소 제제 #11의 적합한 안전성 프로파일을 나타낸다. 또한, 0일에 그룹 4[이트라코나졸-TF #11 (비히클)로 처리한 진균 감염 피부], 그룹 5[이트라코나졸(경구)로 처리한 진균 감염 피부] 및 그룹 6[이트라코나졸 국소 제제 #11로 처리된 진균 감염 피부]의 마우스에 대한 삼출물 중증도 스코어는, 그룹 3[이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)로 처리된 스크래치된 피부]의 마우스의 삼출물 중증도 스코어보다 컸다. 이러한 소견은 그룹 4, 5 및 6의 마우스의 피부에서 성공적인 진균 감염을 나타낸다(도 3b의 A). 0일에 그룹 4, 5 및 6에서의 삼출물 및 홍반의 유사한 중증도 스코어는 유사한 정도의 진균 감염을 나타낸다(도 3b의 A, B). 10일 연속 처리 후, 그룹 4의 마우스는 감염 부위에서 뚜렷한 개선을 보이지 않았다. 대조적으로, 그룹 5 및 6의 마우스는 감염된 영역에서 병변 크기가 77.5% 및 93.1% 감소한 것으로 나타났다 (도 3b의 C, D). 그룹 6의 마우스에서 처리 7일 후에 삼출물 증상은 없었다(도 3b의 A). 또한, 그룹 6의 마우스는 그룹 5의 마우스에 비해 평균 홍반 중증도 스코어가 165% 더 낮았다(도 3b의 B). 감염된 부위의 표재성 진균증 및 병변 회복과 관련된 증상과 관련하여, 이트라코나졸 국소 제제 #11의 향상된 치료 효능은 강력한 국소 작용을 허용하는 즉각적인 약물 이용가능성 때문일 수 있다.
(5.2) 균학적 분석
다음으로, 진균 감염 동안 및 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) (그룹 4), 이트라코나졸 (경구) (그룹 5) 및 이트라코나졸 국소 제제 #11(그룹 6)로 처리한 후에 있어서, 마우스 피부의 진균 생존능을 조사하기 위하여 균학적 분석을 수행하였다. 그룹 4, 5 및 6은 0일에 유사한 평균 생균수(log CFU/피부 섹션)를 나타내었으며, 이는 모든 마우스가 비슷한 수의 진균에 감염되었음을 의미한다(도 4A). 또한 항진균 효능을 직접 평가하기 위하여, 10일 연속 치료 후 그룹 4, 5, 6의 CFU 수를 측정하였다. 그룹 4의 마우스에서 콜로니의 수는 유의하게 감소하지 않았다. 또한, 그룹 5 및 6은 0일에 측정한 것과 비교하여 log CFU/피부 섹션에 있어서 225% 및 499% 감소를 나타내었다(도 4). 따라서, 항진균 반응과 균학적 분석 결과를 기초로, 이트라코나졸 국소 제제 #11은 표재성 진균증 치료를 위한 효과적인 제제로 확인되었다.
(5.3) 피부의 조직학적 평가
그룹 1[이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)로 처리된 정상 피부], 그룹 2[이트라코나졸 국소 제제 #11로 처리된 정상 피부], 그룹 3[이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)로 처리된 스크래치된 피부], 그룹 4[이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클)로 처리된 진균 감염 피부], 그룹 5[이트라코나졸 (경구)로 처리된 진균 감염 피부], 그룹 6[이트라코나졸 국소 제제 #11로 처리된 진균 감염 피부]의 마우스에서 10일의 처리 후 피부의 구조적 변화 및 염증을 확인하기 위하여, H&E으로 염색하여 조직학적 검사를 수행하였다. 그룹 1, 2 및 3은 피부 구조의 변화를 나타내지 않았으며, 이는 이트라코나졸 국소 제제 #11 (비히클) 및 이트라코나졸 국소 제제 #11의 안전성 프로파일을 뒷받침한다. 그러나, 그룹 4는 표피 및 진피에서 섬유아세포의 표피 파열 및 불규칙한 과립화를 나타내었다. 그룹 4 및 5와 비교하여, 그룹 6의 마우스 피부는, 더 얇은 과립 조직 및 더 높은 밀도의 성숙한 콜라겐 섬유 다발과 함께, 잘 조직된 표피 및 진피를 나타내었다. 다음으로, 피부층 간의 세포 생존능을 확인하기 위하여, 각 그룹의 마우스 피부 섹션을 PAS 염색으로 조사하였다. 그룹 1, 2 및 3의 마우스 피부는 진균와 관련된 명백한 PAS 마커를 나타내지 않았다(도 5B). 그러나 그룹 4의 마우스 피부는 피부의 여러 층에서 붉은색으로 염색된 생존 가능한 진균 세포(흑색 화살표로 표시)를 나타내었다. 반대로, 그룹 6의 마우스의 피부는 그룹 4 및 5의 마우스의 피부에 비하여 생존 가능한 진균 세포가 거의 없음을 나타내었다. 전반적으로 이트라코나졸 국소 제제 #11의 향상된 효능은 최대의 진균 용해(lysis)를 달성한 적용 부위에서 즉각적인 약물의 이용 가용성 때문일 것이다.
3. 결론
본 발명에 의해, 이트라코나졸을 휘발성 및 비휘발성 성분으로 구성된 2상 시스템에 통합하여 제조한 국소 이트라코나졸 제제가 장기 저장 동안 약물 용해도와 안정성을 실질적으로 촉진한다는 것이 입증되었다. 최적의 제제(이트라코나졸 국소 제제 #11)는 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액에 비해 24시간에 피부 투과성이 132% 더 높았고, 7일째 조갑 침투가 209% 더 높았다. 또한 투과도 분석은 이트라코나졸 국소 제제 #11의 피부와 조갑에 있어서의 약물 침적 농도는 1% 이트라코나졸 에탄올 분산액에서 얻어진 약물 침적 농도보다 각각 623% 및 230% 더 높았다. 더욱이, 이트라코나졸 국소 제제 #11은, 동일 용량의 경구 이트라코나졸로 처리된 피부에 비하여, 진균-감염된 피부 병변의 회복율이 323% 더 높았고, 평균 홍반 중증도 스코어는 165% 낮았으며, 처리 부위의 피부에서 생존 가능한 진균 세포의 평균 로그값이 37% 낮았다. 따라서, 이트라코나졸 국소 제제 #11은, 장기 안정성과 향상된 투과도로 인하여, 효과적으로 국소 투여될 수 있다. 그러므로, 본 발명에 따른 이트라코나졸 국소 제제는 국소 진균 감염에 대한 효과적인 대체 제제로 사용될 수 있다.
Claims (17)
- (i) 이트라코나졸;
(ii) 휘발성 비히클로서 에탄올;
(iii) 가용화제로서 벤질 알코올;
(iv) 양성자화제로서 염산;
(v) 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 탄산수소나트륨, 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 pH 조절제;
(vi) 투과촉진제로서 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르;
(vii) 습윤제 혹은 살포제로서 시클로메티콘;
(viii) 항산화제, 킬레이트화제, 또는 이들의 혼합물; 및
(ix) 물
로 구성된, pH 4.5∼5.5를 갖는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서, 이트라코나졸이 조성물 총 중량에 대하여 0.5∼10 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 에탄올이 조성물 총 중량에 대하여 30∼80 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 벤질 알코올이 조성물 총 중량에 대하여 10∼40 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 염산이 조성물 총 중량에 대하여 0.1∼1.0 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 pH 조절제가 조성물 총 중량에 대하여 0.01∼0.5 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르가 조성물 총 중량에 대하여 1∼30 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 시클로메티콘이 조성물 총 중량에 대하여 1∼30 중량%의 범위로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 항산화제가 부틸화 히드록시아니솔 또는 부틸화 히드록시톨루엔인 것을 특징으로 하는 국소 투여용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 킬레이트화제가 에틸렌디아민테트라아세트산, 테트라히드록시프로필 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민펜타아세트산, 및 이들의 염으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택되는 것을 특징으로 하는 국소 투여용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 이트라코나졸 0.5∼10 중량%; 에탄올 30∼80 중량%; 벤질 알코올 10∼40 중량%; 염산 0.1∼1 중량%; 수산화나트륨 0.01∼0.5 중량%; 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 1∼30 중량%; 및 시클로메티콘 1∼30 중량%를 포함하는 국소 투여용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 이트라코나졸 1 중량%; 에탄올 39.516 중량%; 벤질 알코올 30 중량%; 염산 0.484 중량%; pH 4.5∼5.5로 조절하는데 적합한 양의 수산화나트륨 또는 수산화나트륨 수용액; 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 15 중량%; 시클로메티콘 8.22 중량%; 부틸화 히드록시아니솔 0.1 중량%; 및 에틸렌디아민테트라아세트산 0.0025 중량%를 포함하는 국소 투여용 약학 조성물.
- (a) 이트라코나졸을 벤질 알코올에 용해한 후, 항산화제, 킬레이트화제, 또는 이들의 혼합물을 용해하는 단계;
(b) 단계(a)에서 얻어진 용액에 염산을 첨가하여 이트라코나졸을 양성자화하는 단계;
(c) 단계(b)에서 얻어진 용액에 에탄올을 첨가하고 혼합하는 단계;
(d) 단계(c)에서 얻어진 용액에 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 및 시클로메티콘을 첨가하고 혼합하는 단계; 및
(e) 단계(d)에서 얻어진 용액에 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 탄산수소나트륨, 및 트리에탄올아민으로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 pH 조절제를 가하여 pH를 pH 4.5∼5.5로 조절하는 단계
를 포함하는, 제1항, 제3항 내지 제6항, 제8항 내지 제10항, 및 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물의 제조방법. - 삭제
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020210046729A KR102376314B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-04-09 | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 |
KR1020210165311A KR102610357B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-11-26 | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020210046729A KR102376314B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-04-09 | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020210165311A Division KR102610357B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-11-26 | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR102376314B1 true KR102376314B1 (ko) | 2022-03-18 |
Family
ID=80936724
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020210046729A KR102376314B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-04-09 | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 |
KR1020210165311A KR102610357B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-11-26 | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020210165311A KR102610357B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-11-26 | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (2) | KR102376314B1 (ko) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20010111762A (ko) * | 2000-06-13 | 2001-12-20 | 배영호 | 용해도 및 용해속도가 향상된 이트라코나졸의 액상 조성물및 이를 이용한 이트라코나졸의 약제학적 제제와 그제조방법 |
KR20100051923A (ko) * | 2008-11-09 | 2010-05-19 | 박은석 | 이트라코나졸을 함유하는 국소 적용제 |
WO2013036830A1 (en) * | 2011-09-09 | 2013-03-14 | The Board Of Trustees Of The Leland Standford Junior University | Topical itraconazole formulations and uses thereof |
US20190247300A1 (en) * | 2015-08-05 | 2019-08-15 | Cmpd Licensing, Llc | Compositions and methods for treating an infections |
US20200147009A1 (en) * | 2015-06-19 | 2020-05-14 | Global Health Solutions Llc | Petrolatum-based compositions and methods of treatment for onychomycosis |
KR20200140681A (ko) * | 2019-06-07 | 2020-12-16 | 주식회사 바이오빌리프 | 에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090175810A1 (en) * | 2008-01-03 | 2009-07-09 | Gareth Winckle | Compositions and methods for treating diseases of the nail |
-
2021
- 2021-04-09 KR KR1020210046729A patent/KR102376314B1/ko active IP Right Grant
- 2021-11-26 KR KR1020210165311A patent/KR102610357B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20010111762A (ko) * | 2000-06-13 | 2001-12-20 | 배영호 | 용해도 및 용해속도가 향상된 이트라코나졸의 액상 조성물및 이를 이용한 이트라코나졸의 약제학적 제제와 그제조방법 |
KR20100051923A (ko) * | 2008-11-09 | 2010-05-19 | 박은석 | 이트라코나졸을 함유하는 국소 적용제 |
WO2013036830A1 (en) * | 2011-09-09 | 2013-03-14 | The Board Of Trustees Of The Leland Standford Junior University | Topical itraconazole formulations and uses thereof |
US20200147009A1 (en) * | 2015-06-19 | 2020-05-14 | Global Health Solutions Llc | Petrolatum-based compositions and methods of treatment for onychomycosis |
US20190247300A1 (en) * | 2015-08-05 | 2019-08-15 | Cmpd Licensing, Llc | Compositions and methods for treating an infections |
KR20200140681A (ko) * | 2019-06-07 | 2020-12-16 | 주식회사 바이오빌리프 | 에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102610357B1 (ko) | 2023-12-06 |
KR20220140399A (ko) | 2022-10-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10864274B2 (en) | Stabilized efinaconazole formulations | |
Bohn et al. | Dermatopharmacology of ciclopirox nail lacquer topical solution 8% in the treatment of onychomycosis | |
US20060120977A1 (en) | Controlled delivery system of antifungal and keratolytic agents for local treatment of fungal infections of the nail and surrounding tissues | |
KR20170134514A (ko) | 피부과 사용을 위한 약학 테트라사이클린 조성물 | |
CN116585257A (zh) | 用于治疗感染的组合物、系统、试剂盒和方法 | |
Michel et al. | Effect of liposomes on percutaneous penetration of lipophilic materials | |
KR102060546B1 (ko) | 에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 | |
KR102376314B1 (ko) | 이트라코나졸을 포함하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 | |
RU2385711C2 (ru) | Многослойная везикулярная композиция | |
KR102352960B1 (ko) | 에피나코나졸을 함유하는 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 | |
EP1446093B1 (en) | Potentiated topical composition | |
US11612607B2 (en) | Fenoldopam topical formulations for treating skin disorders | |
JP2022113148A (ja) | エフィナコナゾール外用組成物 | |
JP7314421B2 (ja) | 局所用モンテルカスト製剤 | |
El Mahrab Robert et al. | New developments in topical antifungal therapy | |
KR102356831B1 (ko) | 용액 형태의 국소 투여용 약학 조성물 및 이의 제조방법 | |
CN114344245A (zh) | 伏立康唑外用制剂及其制备方法 | |
KR101986177B1 (ko) | 여드름 치료용 약물의 생체이용률을 증진시키는 약학적 조성물 | |
WO2024051687A1 (zh) | 一种含有吡非尼酮的局部外用制剂及其用途 | |
CN118176002A (zh) | 局部使用akt抑制剂来预防、治疗和改善皮肤疾病、病况和病症的组合物和制剂 | |
WO2016159532A2 (ko) | 시크로피록스 함유 네일락카 조성물 | |
KR20160121538A (ko) | 손발톱 진균증을 치료하기 위한 국소 항진균 조성물 | |
WO2023044351A1 (en) | Compositions and formulations for topical use of an akt inhibitor for the prevention, treatment, and improvement of skin diseases, conditions, and disorders | |
CN115414320A (zh) | 一种具有抗真菌作用的1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |