KR102340558B1 - 사이토메갈로바이러스의 치료를 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 사이토메갈로바이러스의 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것으로서, 본 발명의 조성물 및 방법은 하나 이상의 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MMLV) 코어 단백질을 포함하여 구성되는 바이러스유사입자들(VLPs)을 포함하고, HCMV 외피 당단백질 gB 및/또는 gH 및/또는 피막 단백질 pp65로부터 유래된 것과 같은 하나 이상의 HCMV 에피토프를 포함하는 면역원성 조성물들의 개발에 기초한 것이다. 그 중에서, 본 발명은 항원들(예: 외피 당단백질들 및 구조 단백질들)의 조합이 이득적인 면역반응들[예를 들어, 체액성 반응(예: 중화 항체의 생산) 및 세포성 반응(예: T-세포 활성화) 양자를 포함]을 유도할 수 있다는 인식들을 포함한다.

Description

사이토메갈로바이러스의 치료를 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATMENT OF CYTOMEGALOVIRUS}

본 출원은, 본 명세서의 참고 문헌을 이루는, 2011년 11월 11일자로 출원된 미국가출원 제 61/558,800호와 2012년 6월 1일자로 출원된 미국가출원 제 61/654,157호에 대한 우선권 및 이의 이득을 주장한다. 이들 출원의 전체 내용은 본원에 참조문헌으로 통합된다.

인간 사이토메갈로바이러스(HCMV)는 베타허피바이러스군의 1종으로서 보편적으로 발생하는 병원균이다. 면역능력이 있는 사람에게, 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV) 감염은 매우 경미하고 특별한 증상이 없어 보통 인지되지 않는다. 대조적으로, 특정 위험 집단, 예를 들어 AIDS환자, 장기이식 받은 자들, 그리고 출산 전 태내 감염된 자들과 같은 면역이 억제된 환자들에 있어 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV) 감염은 심각한 증상을 보인다. (Staras SA et al., 2006 Clin Infect Dis 43(9): 1143-51; Hebart H et al, 2004 Hum Immunol 65(5):432-6; Rowshani AT et al, 2005 Transplantation 79(4) :381-6). 현존하는 치료법들은 면역글로불린항체와 간사이클로비르(ganciclovir)와 그의 유도체들과 같은 항바이러스제의 사용을 포함하며, 감염된 집단에 굉장히 이른 시기에 사용되거나 예방의 목적으로 사용될 경우가장 효과적이다. 그러나, 현존하는 치료법들은 특히 고령에 발생하는 질병에 대한 제한적인 효능과 실질적인 독성이 있다는 특징이 있으며, (Boeckh M., 2004 Pediatr Transplant 8(Suppl. 5): 19-27; Limaye AP., 2004 Transplantation 78(9): 1390-6), 선천적인 인간 사이토메갈로바이러스 질병에는 효능이 없다. 사이토메갈로바이러스 질병에 대한 효과적인 백신의 개발은 중요한 공중 위생의 우선 순위로 여겨진다. (Arvin AM et al, 2004 Clin Infect Dis 39(2):233-9).

하나의 측면에서, 본 발명은 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 감염의 예방, 치료, 및/또는 연구에 유용한 사용방법 및 조성물을 제공한다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 외피 당단백질 gB 및/또는 gH 및/또는 피막 단백질 pp65로부터 유래된 하나 이상의 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 에피토프들을 포함하고, 하나 이상의 몰로니 설치류 백혈병 바이러스 코어 단백질 (MMLV)을 포함하여 구성되는 바이러스유사입자들 (VLPs) 제공한다. 또한 하나의 측면에서, 본 발명은 항원들의 조합물 (예를 들어, 외피 당단백질들과 구조 단백질들)은 체액성 반응 (예를 들어, 중화 항체들의 생성) 및 세포성 반응 (예를 들어, T-세포의 활성화) 모두를 포함하는 것과 같은 이로운 면역 반응들의 개선된 유도에 이르게 할 수 있다는 인식을 포함한다. 본 발명에서 제공되는 바이러스유사입자들 (VLPs)은 바이러스 DNA를 포함하지 않고 비전염성이라는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 몇몇 구체예에서, 제공되는 바이러스유사입자들 (VLPs)은 지질막으로 둘러싸여 있으며, 선택적으로는 바이러스를 중화하는 항체들의 유도 역할을 하는 항원들의 바이러스성 외피 당단백질 (예를 들어, gB 및/또는 gH)로부터 유래되는 하나 이상의 에피토프들을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 제공되는 바이러스유사입자들 (VLPs)은 세포 면역 반응들 (예를 들어, T-세포 반응)의 유도에서 역할을 하는 항원들인 바이러스성 구조 단백질들 (예를 들어, pp65)로부터 유래된 하나 이상의 에피토프들을 포함한다. 또한 몇몇 구체예에서, 이용되는 바이러스성 구조 단백질들 (예를 들어, pp65)은 보조 T 세포의 생성을 촉진할 뿐만 아니라, 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 에 대한 세포독성 T 세포를 유도한다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 바이러스성 외피 당단백질들 (예를 들어 gB 및/또는 gH)의 변이체들을 제공한다. 또한, 몇몇 구체예에서, 바이러스성 외피 당단백질들의 변이체들은 융합 단백질이거나 이를 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예에서, 바이러스성 당단백질들의 변이체들은 비상동 단백질 도메인 (예를 들어, 다른 단백질들로부터 유래되는 트렌스멤브레인 및/또는 세포질 도메인)을 포함하여 구성된다. 본 발명의 몇몇 구체예에서, 바이러스성 구조단백질들의 변이체는 비상동 항원 또는 에피토프를 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예에서, 본 발명은 바이러스성 구조 단백질들의 변이체들을 포함하여 구성된다. 본 발명의 몇몇 구체예에서, 바이러스성 구조 단백질들의 변이체는 융합 단백질이거나 융합 단백질을 포함하여 구성된다.

본 출원에서 사용되는 것으로, 용어 "약"과 "대략"은 같은 의미로 사용된다. 본 발명에서 "약/대략"과 함께 또는 "약/대략"이 없이 사용된 어떠한 숫자라도 당 분야 통상의 기술자에 의해 인식되는 통상적인 오르내림들을 포함하는 것으로 의도된 것이다.

본 발명의 여러가지 다른 특성들, 목적들, 및 장점들이 다음의 상세한 설명을 참조하여 더욱 명백하게 될 것이다. 그러나, 본 발명의 구체적인 예시들은 발명을 제한하기 위한 것이 아니라 설명을 돕기 위한 것이다. 본 발명의 범위 내에서의 다양한 변형들 내지 변경들은 상세한 설명으로부터 당 분야 통상의 기술자에 의해 명백하다.

첨부 도면들은 본 발명을 예시할 목적으로만 제시되는 것이지, 제한하기 위한 것이 아니다.
도 1은, DNA 발현 플라스미드 지도(DNA expression plasmid map) (A)와 예시적인 재조합 플라스미드들의 구성 (B)을 나타낸 것이다.
도 2는, HEK 293 포장 세포들 상에서 예시적인 비상동성 표면 항원들의 FACS 분석 (A)와 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물에서 비상동성 항원의 웨스턴 블럿(western blot) 분석 (B)을 나타낸 것이다.
도 3(A)과 3(B)는 두 개의 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물에 있어서 실용적인 입자 크기 및 다분산 지수(polydispersity index)를 나타낸 것이다.
도 4는 쥐들이 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) gB/pp65 로 처리된 것 (A)과 gH- G/pp65 로 처리된 것 (B) 또는 gB/gH-G/pp65 로 처리된 것 (C)의 ELISA 역가(ELISA titer)를 나타낸 것이다.
도 5는 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 쥐들에서의 항체 중화 활동을 나타낸 것이다 (인간 섬유아세포들에서 측정).
도 6은 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 쥐들에서의 항체 중화 활동을 나타낸 것이다 (인간 상피세포들에서 측정).
도 7은 재조합 gB 단백질과 대비하여 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 쥐들에서의 항체 중화 활동을 나타낸 것이다(인간 섬유아세포들에서 측정).
도 8은 HEK 293 세포들에서 발현된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 쥐들에서의 항원-특이적인 세포독성 T 림프구 (CTL)의 반응을 나타낸 것으로, 이는 CD3+ CD8+ T 세포상의 CFSE 감쇠(decay), 게이팅(gating)에 기초한 세포독성 T 림프구 (CTL)의 빈도(frequency)로 나타내어 지고(A), 또는 증식하는 pp65-특이 CTLs의 빈도로 나타내어 진다(B).
도 9는 HEK 293 세포들에서 발현된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 토끼들에서의 항-gB 항체와 중화항체의 역가를 나타낸 것이다 (인간 섬유아세포들에서 측정).
도 10은 HEK 293 세포들에서 발현된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 토끼들에서의 중화항체의 역가를 나타낸 것이다(인간 상피세포들에서 측정).
도 11은 CHO 세포들에서 발현되고 십자형 여과 (접선유동여과(TFF)) 크로마토그래피 (A) 또는 음이온 교환 (AEX) 크로마토그래피 (B) 로 정제된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물의 음성 염색 (negative-staining)의 전자 현미경 검사 (EM) 영상을 나타낸 것이다.
도 12는 CHO 세포들에서 발현되고 십자형 여과 (접선유동여과(TFF)) 크로마토그래피 (A) 또는 음이온 교환 (AEX) 크로마토그래피 (B) 로 정제된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 토끼들에서의 중화항체의 역가를 나타낸 것이다 (인간 섬유아세포들에서 측정).
도 13은 CHO 세포들에서 발현되고 십자형 여과 (접선유동여과(TFF)) 크로마토그래피 (A) 또는 음이온 교환 (AEX) 크로마토그래피 (B) 로 정제된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물으로 처리된 토끼들에서의 중화항체의 역가를 나타낸 것이다 (인간 상피세포들에서 측정).
도 14는 CHO 세포들에서 발현되고 십자형 여과 (접선유동여과(TFF)) 크로마토그래피 (A) 또는 음이온 교환 (AEX) 크로마토그래피 (B) 로 정제된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물으로 처리된 토끼들에서 보여지는 항체들의 결합 활성(avidity) 지수를 나타낸 것이다.

정의

우선, 본 발명을 보다 용이하게 이해되도록 하기 위해, 특정 용어들이 아래와 같이 정의된다. 다음 용어들 및 다른 용어들에 대한 추가적인 정의는 본 명세서를 통해 제시된다.

아미노산: 본 명세서에서 사용되는 용어 "아미노산"은 가장 넓은 의미로 폴리펩타이드 사슬 내에 포함되어 있는 임의의 화합물 및/또는 물질을 지칭한다. 몇몇 구체예에서, 아미노산은 H₂N-C(H)(R)-COOH의 일반 구조를 갖는다. 몇몇 구체예에서, 아미노산은 자연발생 아미노산이다. 몇몇 구체예에서, 아미노산은 합성 아미노산이고; 몇몇 구체예에서, 아미노산은 d-아미노산이고; 몇몇 구체예에서, 아미노산은 1-아미노산이다. "표준 아미노산(Standard amino acid)"은 자연발생 펩타이드들에서 보편적으로 발견되는 20개의 표준 l-아미노산들 중 임의의 것을 의미한다. "비표준 아미노산(Nonstandard amino acid)"은 합성으로 제조된 것 또는 자연에서 얻어진 것과 관계없이, 표준 아미노산이 아닌 아미노산들 중 임의의 것을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는, "합성 아미노산"은 화학적으로 변형된(chemically modified) 아미노산들을 망라하는 것으로, 그 비한정적인 예로 염, 아미노산 유도체(예를 들어, 아마이드), 및/또는 치환물을 포함한다. 펩타이드내 카르복시- 및/또는 아미노-말단의 아미노산을 포함하는, 아미노산은 메틸화에 의해, 아마이드화에 의해, 아세틸화에 의해, 기를 보호하는 것(protecting)에 의해, 및/또는 활성에 악영향을 미침이 없이 펩타이드의 순환 반감기(circulating half-life)를 변화시킬 수 있는 다른 화학 기로 치환하는 것에 의해, 변형될 수 있다. 아미노산들은 이황화 결합에 참여할 수 있다. 아미노산들은 예를 들어 하나 이상의 화학 물질들 (chemical entities) (예를 들어, 메틸기들, 아세테이트기들, 아세틸기들, 인산기들, 포르밀 모이어티들, 이소프레노이드 기들, 설페이트 기들, 폴리에틸렌 글라이콜 모이어티들, 지질 모이어티들, 탄수화물 모이어티들, 비오틴 모이어티들 등)과의 연합(association)과 같은, 하나 이상의 번역후 변형들(posttranslational modifications)을 포함하여 구성될 수 있다. 용어 "아미노산"은 "아미노산 잔기"와 호환하여 사용될 수 있고, 유리 아미노산 및/또는 펩타이드의 아미노산 잔기를 지칭할 수 있다. 상기한 문맥으로부터 명백한 것은, 상기 용어는 유리 아미노산 이든 펩타이드의 잔기이든 간에 사용될 수 있다는 것이다.

항원: 본 명세서에서 사용되는, 용어 "항원"은 하나 이상의 에피토프 (선형이든, 입체형이든, 또는 양자이든)를 포함하는, 항체들에 의해 인식되는 물질을 의미한다. 특정 구체예들에 있어서, 항원은 바이러스 또는 바이러스성 폴리펩타이드 이거나 바이러스 또는 바이러스성 폴리펩타이드를 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 용어 "항원"은 서브유닛(subunit) 항원[즉, 자연에서 연합된 항원을 갖는 전체 바이러스에서 분리되고 분비되는 항원, 예를 들어 바이러스-유사(virus-like) 입자에 결합된 항원]을 지칭한다. 대신에 또는 추가적으로, 몇몇 구체예들에 있어서, 용어 "항원"은 사멸된(killed), 약화된(attenuated) 또는 불활성화된(inactivated) 바이러스들을 지칭한다. 특정 구체예들에 있어서, 항원은 "면역원(immunogen)" 이다.

대략 또는 약: 본 명세서에서, 하나 이상 대상의 값에 적용된 용어 "대략" 또는 "약"은 언급된 참조 값들과 대등한 값들을 지칭한다. 특정 구체예들에 있어서, 달리 언급하지 않는 한, 또는 문맥상 달리 명시하지 않는 한, 용어 "대략" 또는 "약"은 언급된 참조 값의 어느 한 방향(작은 방향 또는 큰 방향)에서 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 그 미만에 속하는 값들의 범위를 지칭한다.

아멜리오레이션(Amelioration): 본 명세서에서 사용되는, 용어 "아멜리오레이션"은 상태(condition)의 예방, 감소 또는 경감(palliation), 또는 대상 현상의 호전(improvement)을 의미한다. 아멜리오레이션은 질병, 이상(disorder) 또는 상태 (예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 감염)의 완전한 회복 또는 완전한 예방을 포함하지만, 반드시 완전한 것을 요하는 것은 아니다. 용어 "예방"은 질병, 이상 또는 상태의 발병의 지연을 지칭한다. 예방은 질병, 이상 또는 상태의 발병이 미리정해진(predefined) 기간 동안 지연되는 경우 완전한 것으로 간주될 수 있다.

특징부(characteristic portion): 본 명세서에서 사용되는, 물질의 "특징부"라는 용어는, 가장 광의의 의미로서, 온전한(intact) 물질과 지정된(designated) 정도의 구조적 아이덴티티(identity)를 공유하는 부분이다. 특정 구체예들에 있어서, 특징부는 적어도 하나의 기능 특징을 그 온전한 물질과 공유한다. 예를 들어, 단백질 또는 폴리펩타이드의 "특징부"는 아미노산들의 연속적인 스트레치들(stretches), 또는 아미노산들의 연속적인 스트레치들의 집합(collection) 이며, 그것들은 동시에 단백질 또는 폴리펩타이드의 특징이다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기한 연속적인 스트레치 각각은 일반적으로 적어도 2, 5, 10, 15, 20, 50, 또는 그 이상의 아미노산들을 포함한다. 일반적으로, 물질(예를 들어, 단백질, 항체 등)의 특징부는, 위에 명시된 서열 및/또는 구조적 아이덴티티에 더하여, 관련(relevant) 온전 물질과 적어도 하나의 기능적 특성을 공유하는 것이다. 몇몇 구체예들에 있어서, 특징부는 생물학적 활성일 수도 있다.

특징적 서열: "특징적 서열"은 폴리펩타이드들 또는 핵산들의 집단(family)의 구성원들(members) 모두에서 발견되는 서열이고, 따라서 당 분야 통상의 기술자에 의해 상기 집단의 구성원들을 정의하는데 사용되어질 수 있다.

세포질 도메인(cytoplasmic domain): 당 분야에 알려져 있듯이, 폴리펩타이드들은 종종 트렌스멤브레인(transmembrane), 세포질, 및/또는 세포외 도메인들을 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용되는 "세포질 도메인"은 세포질에 존재하는 속성을 갖는 도메인을 지칭한다. 이해하여야 할 것은 세포질 도메인에 있는 모든 아미노산이 세포질에 존재할 필요는 없다는 것이다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 세포질 도메인은 단백질의 지정된(designated) 스트레치(stretch) 혹은 부분이 실질적으로 세포질에 위치한다는 것으로 특징지어진다. 당 분야에 알려져 있듯이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 단백질의 세포-이하 정위((subcellular localization) (예를 들어, 세포질에서의 정위)를 예측하기 위하여 다양한 알고리즘들의 사용으로 분석되어질 수 있다. 이러한 프로그램들의 대표적인 예는 피소트(psort) (PSORT.org), 프로사이트(Prosite) (prosite.expasy.org)를 포함한다.

투여형태(Dosage form): 본 명세서에서 사용되는, 용어 "투여형태(Dosage form)" 및 "단위 투여형태(unit dosage form)" 은 치료되어질 환자에 대한 치료제의 물리적인 개별 단위(discrete unit)를 의미한다. 각각의 단위(unit)는 희망하는 치료 효과를 발생시키기 위해 측정되는 활성 물질(active material)의 미리 결정된 분량을 함유한다. 그러나, 조성물의 총 투여량(total dosage)은 철저한(sound) 의학적 판단의 범위 내에서 의사에 의해 결정될 것으로 생각된다.

투여법(Dosing regimen): "투여법" (또는 "치료법")은 대상에게 개별적으로 투여되고, 그리고 전형적으로 시간의 기간으로 분할되는 단위 투여량의 세트(보통 1회 이상)이다. 몇몇 구체예들에 있어서, 주어진 치료제는 1회 이상의 투여를 포함할 수 있는 권장투여법으로 이루어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 투여법은 동일한 시간 간격으로 나누어지는 복수 회의 투여로 이루어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 투여법은 적어도 두 번의 시간 간격으로 나누어지는 복수의 투여로 이루어진다.

발현(Expression): 본 명세서에서 사용되는, 핵산 서열의 "발현"은 다음과 같은 현상들(events)의 하나 이상을 지칭한다: (1) DNA 서열로부터 RNA 주형의 생성 [예를 들어, 전사(transcription)에 의해서]; (2) RNA 전사물(transcript)의 프로세싱 [예를 들어, 이어맞추기(splicing), 편집(editing), 5' 캡 형성, 및/또는 3' 말단 형성에 의해서); (3) 폴리펩타이드 또는 단백질로 RNA의 번역(translation) ; 및/또는 (4) 폴리펩타이드 또는 단백질의 번역후 변형(post-translational).

세포외 도메인(extracellular domain): 당 분야에 알려져 있듯이, 폴리펩타이드들은 종종 트렌스멤브레인(transmembrane), 세포질, 및/또는 세포밖(extracellular) 도메인들에 위치해 있다. 일반적으로 본 명세서에서 사용되는 "세포외 도메인"은 세포 밖에 존재하는 속성을 갖는 도메인을 의미한다. 세포외 도메인의 모든 아미노산이 세포밖에 존재하여야만 하는 것이 아님을 이해하여야 한다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 세포외 도메인은 단백질의 지정된(designated) 스트레치(stretch) 또는 부분이 실질적으로 세포 밖에 위치한다는 것으로 특징지어진다. 당 분야에 알려져 있듯이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 단백질의 세포 이하(subcellular) 정위 (예를 들어, 세포질에서의 정위)를 예측하기 위하여 다양한 알고리즘들의 사용으로 분석되어질 수 있다. 이러한 프로그램들 중의 대표적인 예로 피소트(psort) (PSORT.org), 프로사이트(Prosite) (prosite.expasy.org)가 있다.

융합 단백질: 본 명세서에서 사용되는, 용어 "융합 단백질"은 (1) 자연에서 발생하는, 그리고/또는 (2) 폴리펩타이드의 기능 도메인(functional domain)을 나타내는, 펩타이드 모이어티에 대하여 고도의 아미노산 아이덴티티를 보이는, 일반적으로 적어도 두 개의 세그먼트들을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 전형적으로, 이러한 세그먼트들을 적어도 두 개 포함하는 폴리펩타이드는 그 두 개의 세그먼트들이 (1) 동일한 펩타이드(peptide)에 자연에서 포함되지 않은, 그리고/또는 (2) 단일 폴리펩타이드 내에서 서로 연결된 적이 없는, 그리고/또는 (3) 인위적으로 서로 연결된, 모이어티들이라면 융합 단백질이라 간주된다,

유전자: 본 명세서에서 사용되는, 용어 "유전자"는 당 분야에서 이해되어지는 것과 같은 의미를 갖는다. 당 분야 통상의 기술자들에게 용어 "유전자"는 유전자 조절 서열들(regulatory sequences) [예를 들어, 프로모터들, 증폭자들(enhancers), 등] 및/또는 인트론(intron) 서열들을 포함할 수 있다고 이해되어진다. 나아가, 유전자의 정의는 단백질들을 인코딩하는 것이 아니라 예를 들어 tRNA들, RNAi-유도제들(inducing agents), 등의 기능적 RNA 분자들을 인코딩 하는 핵산들을 언급한 것을 포함하는 것으로 이해되어진다. 명확히 하기 위하여, 본 출원에 사용되어지는 것과 같이 용어 "유전자"는 일반적으로 단백질을 인코딩 하는 핵산의 부분을 의미함을 주의해야 한다 ; 용어 "유전자"는 당 분야 통상의 기술자에게 명확하듯이 선택적으로 조절 서열들을 포함할 수 있다. 상기 정의는 용어 "유전자"의 적용에서 비단백질-인코딩하는 발현 단위들을 배제하기 위함이 아니라, 대부분의 경우에 있어 본 출원에서 사용되는 상기 용어가 단백질-인코딩 핵산을 지칭하는 것을 명확하게 하기 위함이다.

유전자 산물(gene product) 또는 발현 산물(expression product) : 본 명세서에서 사용되는, 용어 "유전자 산물(gene product)" 또는 "발현 산물(expression product)"은 일반적으로 유전자(사전- 및/또는 사후-프로세싱)로부터의 RNA 전사물 또는 유전자로부터의 RNA 전사물이 인코딩된 (사전- 및/또는 사후-변형) 폴리펩타이드를 의미한다.

비상동성(heterologous): 본 명세서에서 사용되는, 단백질 또는 폴리펩타이드와 관련된 용어 "비상동성"은 특정 유기체, 예를 들어 레트로바이러스 또는 바이러스유사입자(VLP)에서 인공적으로(non-naturally) 발생하는 단백질 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 단백질 또는 폴리펩타이드는 특정 레트로바이러스 비리온(retrovirus virion)에서 비자연적으로 발생한다. 본 명세서에서 사용되는, 단백질 도메인과 관련된 용어 "비상동성"은 일반적으로 특정 단백질에서 인공적으로 발생하는 단백질 도메인을 지칭한다.

면역원성(immunogenic): 본 명세서에서 사용되는 용어 "면역원성"은 숙주(host) 동물에서 비-숙주 엔터티(non-host entity) (예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 항원) 에 대항하여 면역 반응을 할 수 있음을 의미한다. 특정 구체예들에 있어서, 이러한 면역 반응은 특정 전염성 유기체(예를 들어, HCMV)에 대항하여 백신에 의해 이끌어내지는 방어면역의 기초를 형성한다.

면역 반응: 본 명세서에서 사용되는 용어 "면역 반응"은 동물에서 야기되는 반응을 의미한다. 면역 반응은 세포성 면역, 체액성 면역을 의미하거나 둘 다를 포함할 수 있다. 면역 반응은 또한 면역 시스템의 일부분으로 제한될 수도 있다. 예를 들어, 특정 구체예들에 있어서, 면역원성 조성물은 증가된 IFNy 반응을 유발할 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 면역원성 조성물은 점막(mucosal) IgA 반응[예를 들어, 비강 및/또는 직장 세척액(washes)에서 계측된]을 유발할 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 면역원성 조성물은 전신의(systemic) IgG 반응 (예를 들어, 혈청(serum)에서 계측된)을 유발할 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 면역원성 조성물은 바이러스-중화 항체들 또는 중화 항체 반응을 유발할 수 있다.

개선하다(Improve), 증가하다(increase), 또는 감소하다(reduce): 본 명세서에서 사용되는 용어 "개선하다", "증가하다", 또는 "감소하다", 또는 그 문법적 등가 표현은, 기준선 측정치(baseline measurement)에 대한 상대적인 값들을 표시한다, 예를 들어 여기에서 설명되는 치료가 행해지기에 앞선 동일한 개체(same individual)에서의 측정치, 또는 여기에서 설명되는 치료가 행하여 지지 않는 대조 개체(control individual) (또는 다수의 대조 개체들)에서의 측정치에 대한 상대적인 값들을 표시한다,

개체(individual), 대상, 환자: 본 명세서에서 사용되는, 용어 "대상", "개체" 또는 "환자"는 인간의 또는 비인간의 포유동물 대상을 의미한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 치료가 행하여지는 개체("환자" 또는 "대상"이라 칭하기도 함)는 질병, 예를 들어서 인간 사이토메갈로바이러스 감염을 앓는 개체 (태아, 유아, 아동, 청소년, 또는 성인)을 의미한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 대상은 인간 사이토메갈로바이러스 감염의 위험에 처해질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 대상은 면역억제된(immunosuppressed) 대상이다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 면역억제된 대상은 HIV-감염된 대상, AIDS 환자, 장기이식 받는 사람, 소아, 그리고 임산부로 구성되는 집단에서 선택된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 대상은 인간 사이토메갈로바이러스 감염에 노출되어있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 대상은 사람이다.

분리된(isolated): 본 명세서에서 사용되는 용어 "분리된"은 (1) 처음에 (자연에서 및/또는 실험 세팅에서) 생산되었을 때 연합되어 있던 성분들의 적어도 일부로부터 분리된; 및/또는 (2) 인위적으로 생산된, 조제된, 및/또는 제조된; 물질 및/또는 엔터티를 의미한다. 분리된 물질들 및/또는 엔터티들은 그들이 처음에 연합되어있었던 다른 성분들의 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 이상으로 분리될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 분리된 작용제들(agents)은 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99%보다 높은 순도의 것이다. 본 명세서에서 사용되는, 물질에 실질적으로 다른 조성물들이 없는 경우 물질이 "순수하다(pure)" 라고 한다. 본 명세서에서 사용되는, 분리된 물질들 및/또는 엔터티들의 순도 퍼센트(percent purity) 계산은 부형제 (예를 들어, 버퍼, 용매, 물, 등)을 포함해서는 안된다.

연결자(Linker): 본 명세서에서 사용되는, 용어 "연결자"는 예를 들어, 융합 단백질에서, 적절한 길이의 아미노산 서열을 지칭하고, 그것 외에는 자연 단백질의 특정 위치(position)에서 나타나고 신축성있게 및/또는 예를 들어 a-나선(helix)과 같은 구조를 두 단백질 모이어티들 사이에 넣기 위하여 일반적으로 디자인된다, 일반적으로, 연결자는 융합 단백질의 두 또는 그보다 많은 도메인들이 각 도메인들의 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상의 생물학적 활성을 유지하도록 하는 것을 가능하게 한다. 연결자는 또한 스페이서를 지칭하기도 한다.

핵산: 본 명세서에서 사용되는 용어 "핵산"은 가장 넓은 의미로 올리고뉴클레오타이드 사슬 내에 포함되어 있는 임의의 화합물(compound) 및/또는 물질을 지칭한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 핵산은 인산디에스테르 결합(phosphodiester linkage)을 통해 올리고뉴클레오타이드 사슬내에 포함되거나 포함되어 질 수 있는 화합물(compound) 및/또는 물질이다. 몇몇 구체예들에 있어서, "핵산"은 개별의(individual) 핵산 잔기들(residues) (예를 들어, 뉴클레오타이드들(nucleotides) 및/또는 뉴클레오사이드들(nucleosides))을 지칭한다. 몇몇 구체예들에 있어서, "핵산"은 개별 핵산 잔기들을 포함하여 구성되는 올리고뉴클레오타이드 사슬을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는, 용어 "올리고뉴클레오타이드"와 "폴리뉴클레오타이드"는 동일한 의미이다. 몇몇 구체예들에 있어서, "핵산"은 RNA 뿐만 아니라 단일 및/또는 이중-가닥의 DNA 및/또는 cDNA를 망라한다. 게다가, "핵산," "DNA," "RNA"라는 용어들 및/또는 비슷한 용어들은 핵산 유사물들(analogs)을 포함하며, 다시 말해 인산디에스테르(phosphodiester) 골격(backbone) 이외의 것을 갖는 유사물들(analogs)을 포함한다. 예를 들어, 골격에서 인산디에스테르 결합들 대신에 펩타이드 결합들을 갖고 당 분야에서 알려진 소위 "펩타이드 핵산들,"은 본 발명의 범위 내에서 생각되어진다. "아미노산 서열을 인코딩 하는 뉴클레오타이드 서열" 이라는 말은 서로 축중한 형태(degeneracy version)의 것 및/또는 동일 아미노산 서열을 인코딩하는 모든 뉴클레오타이드 서열들을 포함한다. 단백질들 및/또는 RNA를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열들 인트론들(introns)을 포함할 수 있다. 핵산들은 천연물유래로부터 정제되어지고, 재조합(recombinant) 발현 시스템들과 선택적으로 정제(purifed) 되어질 수 있고 화학적으로 합성, 등을 이용하여 생산될 수 있다. 적절한 경우, 예를 들어 화학적으로 변형된 분자들(molecules)의 경우에 있어서 핵산들은 예를 들어 화학적으로 변형된 염기들 또는 당들, 골격변형들, 등의 뉴클레오사이드(nucleoside) 유사물들을 포함하여 구성될 수 있다. 핵산 서열은 그 외에 다르게 지시되지 않는 한, 5'에서 3'로의 방향으로 존재한다. 용어 "핵산 세그먼트"은 본 명세서에서 더 긴 핵산 서열의 부분인 핵산 서열을 지칭하기 위하여 사용되어 진다. 다수의 구체예들에 있어서, 핵산 세그먼트 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 그 이상의 잔기들을 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 핵산은 천연의 뉴클레오사이드들 (예를 들어, 아데노신(adenosine), 티미딘(thymidine), 구아노신(guanosine), 시티딘(cytidine), 우리딘(uridine), 디옥시아데노신(deoxyadenosine), 디옥시티미딘(deoxythymidine), 디옥시구아노신(deoxyguanosine), 그리고 디옥시시티딘(deoxycytidine)); 뉴클로오사이드(nucleoside) 유사물들 (예를 들어, 2-아미노아데노신(aminoadenosine), 2-싸이오티미딘(thiothymidine), 이노신(inosine), 파이롤피리미딘(pyrrolo-pyrimidine), 3-메틸아데노신(methyladenosine), 5-메틸시티딘(methylcytidine), C-5 프로피닐시티딘(propynyl-cytidine), C-5 프로피닐우리딘(propynyl-uridine), 2-아미노아데노신(aminoadenosine), C5-브로모우리딘(bromouridine), C5-플루오로우리딘(fluorouridine), C5-아이오도우리딘(iodouridine), C5-프로피닐우리딘(propynyl-uridine), C5-프로피닐시티딘(propynyl-cytidine), C5-메틸시티딘(methyl-cytidine), 2-아미노아데노신(aminoadenosine), 7-데아자아데노신(deazaadenosine), 7-데아자구아노신(deazaguanosine), 8-옥소아데노신(oxoadenosine), 8-옥소구아노신(oxoguanosine), 0(6)-메틸구아닌(methylguanine), 그리고 2-싸이오시티딘(thiocytidine); 화학적으로 변형된 염기들; 생물학적으로 변형된 염기들 {예를 들어, 메틸화된 염기들); 인터켈레이티드(intercalated) 염기들; 변형된 당들 (예를 들어, 2'-플루오로리보오스(fluororibose), 리보오스(ribose), 2'-디옥시리보오스(deoxyribose), 아라비노오스(arabinose), 그리고 헥소오스(hexose)); 및/또는 변형된 인산기 그룹들 {예를 들어, 포스포로티오에이트들(phosphorothioates) 그리고 5'-N-포스포아미다이트(phosphoramidite) 연결들) 이거나 또는 상기의 것들을 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명은 구체적으로 "변형되지 않은(unmodified) 핵산들," 에 관련되어지며, 이는 공급을 하거나 이를 원활히 하기 위하여 화학적으로 변형되지 않은 핵산들 (예를 들어, 뉴클레오타이드들 및/또는 뉴클레오사이드들을 포함하는 폴리뉴클레오타이드들과 잔기들)을 의미한다.

약학적 허용가능(pharmaceutically acceptable): 본 명세서에서 사용되는 용어 "약학적 허용가능"은 철저한 의학적 판단의 범위 내에서,과도한 독성, 자극 알러지 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증, 상응하는 합리적인 이익/위험 비율(benefit/risk ratio) 없이 인간과 동물들 세포들과의 접촉에 있어 사용에 적합한 물질들을 지칭한다.

폴리펩타이드: 본 명세서에서 사용되는 "폴리펩타이드"는 일반적으로 적어도 두 개의 아미노산들이 상호 펩타이드 융합 결합된 일련의 스트링 이다. 몇몇 구체예들에 있어서, 폴리펩타이드는 적어도 3-5 개의 아미노산들을 포함할 수 있으며, 그 각각은 적어도 하나의 펩타이드 결합의 방식으로 상호 결합되어 있다. 당 분야 통상의 기술자들은 폴리펩타이드들이 때때로 폴리펩타이드 사슬로 통합되어질 수 있는 "인공(non-natural)" 아미노산들 또는 다른 엔터티들을 선택적으로 포함한다고 이해할 수 있다.

다단백질(polyprotein): 본 명세서에서 사용되는 용어 "다단백질"은 일반적으로 합성 후에 클리브드 되어 몇몇 기능적으로 별개인 폴리펩타이드들을 생산하는 단백질을 지칭한다. 다단백질은 보통 단일의 아미노산 서열에 의해 인코딩 된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 클리브드 되지 않은 다단백질은 그것의 구성 요소 부분들의 생물학적 활성을 보유한다. 몇몇 바이러스들은 그러한 다단백질들, 예를 들어 기능적인 다단백질로서 얻어지거나 다수의 기능적으로 별개체 폴리펩타이드들로 처리되어 질 수 있는 Gag 다단백질을 생산한다. 기능적으로, 상기 Gag 다단백질은 세 도메인으로 나누어진다: 세포성 막에 Gag 다단백질을 표적으로 하는 막 결합 도메인 ; Gag 중합을 촉진시키는 상호작용 도메인 ; 그리고 숙주세포로부터 발생초기의 비리온들(virions)의 방출을 촉진시키는 레이트(late) 도메인. 일반적으로, 바이러스성 입자 합체를 가능케 하는 상기 Gag 단백질의 형태는 다단백질이다.

자가조립(Self-assembling) 부분: 일반적으로, 본 명세서에서 사용되는, "자가조립 부분은 외부 소스로부터의 지도 또는 관리 없이 정해진 어레인지먼트를 취하는 엔터티의 관련있는 스트레치를 지칭한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 엔터티는 단백질이다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 엔터티는 다단백질 이다. 몇몇 그러한 구체예들에 있어서, 관련있는 스트레치는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500 또는 그보다 많은 잔기들이다. 예를 들어, 세포 내에서(예를 들어 in vivo) 자가조립이 일어날 수 있다, 대신에 또는 추가적으로, 자가조립은 세포의 밖에서 보여질 수 있다. (예를 들어, in vitro). 자가조립은 분자내 (예를 들어, 접힘) 및/또는 분자간 일어날 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 자가조립은 고분자의 단위이고 이에 의하여 엔터티들은 복합체 및/또는 크기가 커진 고분자 구조로 자가-조립될 수 있다. 자가 조립 엔터티들은 넓은 범위의 구조적 모티프들을 나타낼 수 있고, 입자들, 섬유들, 시트들, 그리고 리본들(ribbons)을 포함하지만 이에 의해 한정되지는 않는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 엔터티의 자가조립은 상기 엔터티의 생물학적 기능에 있어 중요하다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 지질의 자가 조립은 세포막 구조의 형성을 가져온다. 몇몇 구체예들에 있어서, 세포내에서의 단백질의 자가 조립은 (예를 들어, 바이러스성 구조 단백질) 입자 구조의 형성 (예를 들어, 바이러스성 입자 구조) 을 가져온다. 예를 들어, 바이러스성 구조 다단백질은 그것의 숙주 세포의 세포성 막에 (예를 들어, 원형질막, 엔도솜 등) 그것의 정위 지시를 가능케 하는 타겟팅 서열을 포함할 수 있고, 바이러스성 구조 다단백질은 당해 세포성 막으로부터 나와서 상기 바이러스성 구조 다단백질을 둘러싸는 숙주 세포의 막성 물질을 포함하는 바이러스유사입자를 형성할 수 있다.

실질적인 상동성(substantial homology): 어구 "실질적인 상동성"은 본 명세서에서 아미노산 또는 핵산 서열들 간의 대조를 지칭하기 위해 사용된다. 당 분야 통상의 기술자에 의해 이해되겠지만, 두 개의 서열들은 만일, 그들이 대응되는 위치들에 상동성 있는 잔기들을 포함하는 경우, 일반적으로는 "실질적으로 상동성 있는" 것으로 여겨진다. 상동성 있는 잔기들은 동일한 잔기들 일 수도 있다. 대신에, 상동성 있는 잔기들은 대략적으로 유사한 구조적 및/또는 기능적 특성들을 갖는 완전히 동일하지는 않은 잔기들일 수도 있다. 예를 들어, 당 분야 통상의 기술자들에 잘 알려져 있듯이, 특정 아미노산들은 보통 "소수성" 또는 "친수성" 아미노산들로 분류되어질 수 있고, 및/또는 "극성의" 또는 "비극성의" 곁사슬들을 함유할 수 있다. 한 개 아미노산의 같은 종류의 다른 아미노산으로의 치환은 "상동성 있는" 치환으로 여겨질 수 있다.

당 분야에서 잘 알려져 있듯이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 상업적 컴퓨터 프로그램들에서 사용가능한 예를 들어 뉴클레오타이드 서열들에 사용되는 BLASTN, 그리고 아미노산 서열들에 사용되는 BLASTP, gapped BLAST, 및 PSI-BLAST 등을 포함하여 다양한 알고리즘들을 사용하여 대조되어 질 수 있다. 예시적인 그러한 프로그램들은 다음에 설명된다. Altschul, et al, Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol, 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al, Methods in Enzymology 266:460-480 (1996); Altschul, et al, "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", nucleic acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the analysis of genes and proteins, Wiley, 1998; and Misener, et al, (eds.), Bioinformatics Methods and protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999. 상동성 있는 서열들을 확인하는 것에 더불어, 상기 언급된 그러한 프로그램들은 보통 상동성 정도의 인디케이션을 제공한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 두 개의 서열들은 만일 적어도 그들의 대응되는 잔기들의 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상이 관련있는 스트레치(stretch)에서 상동성이 있다면 실질적인 상동성이 있다고 여겨진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 관련있는 스트레치는 완전한 서열이다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 관련있는 스트레치는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500 또는 그 이상의 잔기들 이다.

실질적인 아이덴티티(substantial identity): 어구 "실질적인 아이덴티티" 는 본 명세서에서 아미노산 또는 핵산 서열들 간의 대조를 지칭하기 위해 사용된다. 당 분야 통상의 기술자에 의해 이해되겠지만, 아미노산 또는 핵산 서열들은 상업적 컴퓨터 프로그램들에서 사용가능한 예를 들어 뉴클레오타이드 서열들에 사용되는 BLASTN, 그리고 아미노산 서열들에 사용되는 BLASTP, 갭드 BLAST, and PSI-BLAST.등을 포함하여 다양한 알고리즘들을 사용하여 대조되어 질 수 있다. 예시적인 그러한 프로그램들은 다음에 설명되어져 있다. Altschul, et al, Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol, 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al, Methods in Enzymology 266:460-480 (1996); Altschul, et al, "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", nucleic acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the 분석 of genes and proteins, Wiley, 1998; and Misener, et al, (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999. 동일한 서열들을 확인할 뿐만 아니라, 상기 언급된 프로그램들은 아이덴티티 정도의 지표(indication)를 제공한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 두 개의 서열들은 만일 적어도 그들의 대응되는(corresponding) 잔기들의 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상이 관련있는(relevant) 스트레치(stretch)에서 동일하다면 실질적으로 동일(identical) 하다고 여겨진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 관련있는(relevant) 스트레치(stretch)은 완전한 서열이다. 몇몇 구체예들에 있어서, 상기 관련있는(relevant) 스트레치(stretch)은 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500 또는 그 이상의 잔기들 이다.

앓는(Suffering from): 질병, 이상, 또는 상태(예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 감염)를 "앓는" 개체는 상기 질병, 이상, 또는 상태 중 하나 이상의 증상이 나타나거나 또는 진단된다.

걸리기 쉬운(Susceptible to): 질병, 이상, 또는 상태 (예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 감염) 에 "걸리기 쉬운" 개체는 상기 질병, 이상, 또는 상태가 생길 위험이 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 질병, 이상, 또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 질병, 이상, 또는 상태의 어떠한 증상도 나타내지 않는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 질병, 이상, 또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 상기 질병, 이상, 및/또는 상태로 진단받은 적이 없다, 몇몇 구체예들에 있어서, 질병, 이상, 또는 상태에 걸리기 쉬운 개체는 상기 질병, 이상, 또는 상태의 디벨로핑에 관련된 상태들에 노출된 적이 있는 개체를 의미한다. (예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스에 노출된 적이 있는 개체).

줄어들다(reduced): 본원 발명에 따를 때, 하나 이상의 특정 질병, 이상 또는 상태의 증상들이 규모 (예를 들어, 강도, 극렬함 등) 또는 빈도가 감소될 때, "줄어든다" 고 말한다. 명확히 하기 위하여, 특정 증상의 발병 지체는 당해 증상의 빈도 감소의 한 형태로 여겨진다. 상기 증상들이 없어지는 경우들로만 본원 발명이 한정되어지는 것으로 의도하는 것은 아니다. 본원 발명은 비록 완전하게 없어지지 않을지라도, 구체적으로 하나 이상의 증상이 줄어드는 경우 (그리고 대상의 상태가 그로 인해 "개선되는") 치료를 고려한다,

치료상 유효한(Therapeutically effective): 본 명세서에서 사용되는 용어 "치료상 유효한"은 치료되어지는 대상에 치료 효과를 부여하기 위한 의학적인 치료방법에 적용되는 합리적인 이익/위험 비율의 충분한 양을 지칭한다, 상기 치료 효과는 객관적이거나 (즉, 몇몇 테스트 또는 마커에 의해 측정되어 질 수 있는) 또는 주관적일 수 있다. (즉, 대상은 효과를 느끼거나 효과에 대한 조짐을 나타낼 수 있다). 특히, "치료상 유효한"은 치료하거나, 아멜리오레이션되거나, 또는 바라는 질병 또는 상태를 예방하는, 또는 감지할 수 있는 약학적 또는 예방적 효과, 예를 들어 상기 질병과 관련된 증상들을 개선하면서, 상기 질병의 발병을 예방하면서 또는 늦추면서, 및/또는 또한 상기 질병의 극렬함 또는 빈도를 줄이면서, 를 나타내기에 효과적인 약학적 단백질 또는 조성물을 지칭한다, 치료상 유효한은 흔히 복수의 단위 투여들을 포함하여 구성되는 투여법으로 투여된다. 특정 면역원성 조성물은에 있어서, 치료상 유효한 (및/또는 효과적인 투여법을 갖는 적절한 투여 단위)는, 예를 들어 투여의 경로 또는 다른 약학적 물질들과의 조합에 따라서 다양할 수 있다, 또한, 개별적인 환자에 대한 특이적 치료상 유효한 (및/또는) 단위 투여는 치료되어지는 당해 이상과 당해 이상의 극렬함을 포함하는 다양한 요인들에 따른다 ; 이용된 구체적인 약학적 물질의 활성 ; 이용된 구체적인 조성물은; 환자의 나이, 체중, 일반건강, 성별 그리고 식생활 ; 투여시간, 투여경로, 및/또는 이용된 상기 구체적인 면역원성 조성물의 분비 또는 대사작용 비율; 상기 치료의 지속성; 의학 분야에서 잘 알려진 것과 같은 요인들.

트렌스멤브레인 도메인(Transmembrane domain): 당 분야에 알려져 있듯이, 폴리펩타이드들은 때때로 트렌스멤브레인(transmembrane), 세포질의(Cytoplasmic), 및/또는 세포외 도메인들(extracellular domains)로 이루어져 있다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용되는 "트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain)"은 막에 존재하는 속성을 갖는 도메인 (예를 들어, 세포성 막의 부분 또는 전체에 걸쳐 있는)을 의미한다. 이해되어지는 것과 같이, 트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain)의 모든 아미노산이 상기 막에 존재할 필요는 없다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain)은 단백질의 지정된(designated) 스트레치(stretch) 또는 부분이 실질적으로 막에 위치한다는 것으로 특징 지어진다. 당 분야에 알려져 있듯이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 단백질의 세포 이하(subcellular) 정위를 예측하기 위하여(예를 들어, 트렌스멤브레인(transmembrane) 정위) 다양한 알고리즘들을 사용하여 분석되어진다. 그러한 예시적인 프로그램들은, 그 중에서도. psort (PSORT.org), Prosite (prosite.expasy.org)를 포함한다.

치료(treatment): 본 명세서에서 사용되는, 용어 "치료(treatment)" (또한 "치료하다" 또는 "치료하는")는 면역성 조성물은의 투여가 상기 질병에 대한 소인(predisposition)의 하나 이상의 증상 또는 특징의 발생 정도(incidence)를 부분적으로 또는 완전하게 완화하거나, 아멜리오레이션되거나, 덜어주거나, 막거나, 발병을 지연시키거나, 극렬함(severity)을 감소시키거나(reduces) 그리고/또는 특정 질병, 이상, 및/또는 상태 (예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV) 감염) 또는 상기 질병에 대한 소인(predisposition)의 하나 이상의 증상 또는 특징의 발생 정도(incidence)를 감소시키는(reduces) 것이라면 어떠한 것이든 이를의미한다. 그러한 치료(treatment)의 대상은 관련있는(relevant) 질병, 이상의 신호들(signs) 및/또는 상태를 나타내지 않는 대상들일 수 있고 그리고/또는 오로지 상기 질병, 이상, 및/또는 상태의 이른 신호들(signs)을 나타내는 대상일 수 있다. 대신에 또는 추가적으로, 그러한 치료(treatment)는 관련있는(relevant) 질병, 이상 및/또는 상태의 하나 이상의 규명된(established) 신호(sign)를 나타내는 대상일 수 있다, 특정 구체예들에 있어서, 용어 "치료하는"은 환자의 백신접종(vaccination)을 의미한다.

백신접종: 본 명세서에서 사용되는, 용어 "백신접종"은 예를 들어서 질병-유발 물질 (예를 들어, 인간사이토메갈로 바이러스(HCMV)) 에 대한 면역 반응을 발생시키기 위해의도된 조성물의 투여를 의미한다, 본원 발명의 목적으로서, 백신접종은 질병-유발 물질에 노출되기 전, 그리고/또는 노출되는 동안, 그리고/또는 노출된 후에 투여될 수 있고, 특정 구체예들에 있어서, 상기 물질에 노출되기 전, 노출되는 동안 그리고/또는 상기 물질에 노출된 후에 투여될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 백신접종은 예방접종하는 조성물이 적절하게(appropriately) 시간적 간격을 두어진 복수의 투여들을 포함한다.

벡터(Vector): 본 명세서에서 사용되는, "벡터(vector)"는 핵산 분자인데, 다른 핵산을 그것이 결합되어 있는 곳으로 수송(transporting)을가능케 한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 벡터들(vectors)은 예를 들어 진핵의 그리고/또는 원핵의 세포와 같은 숙주 세포내에서 그들이 연결되는 핵산들의 염색체 외의(extra-chromosomal) 복제(replication) 및/또는 발현을 할 수 있다. 효과를 나타내도록(operatively) 연결된 유전자들(genes)의 발현 지시를 가능케 하는 벡터들(vectors)은 본원 명세서에서 "발현 벡터들(expression vectors)." 이라 나타내어 진다.

하나의 측면에서, 본 발명은 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 감염의 예방, 치료, 및/또는 연구에 유용한 사용방법 및 조성물을 제공한다. 몇몇 구체예에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 막 당단백질 gB 및/또는 gH 및/또는 피막 단백질 pp65로부터 유래된 하나 이상의 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 에피토프를 포함하고, 하나 이상의 몰로니 설치류 백혈병 바이러스 코어 단백질 (MMLV)을 포함하여 구성되는 바이러스유사입자들 (VLPs) 제공한다. 또한 하나의 측면에서, 본 발명은 항원들의 조합물 (예를 들어, 막 당단백질들과 구조 단백질들) 이 예를 들어 체액성 반응 (예를 들어, 중화 항체들)과 세포성 반응 (예를 들어, T-세포의 활성화) 모두를 포함하는 것과 같은 이로운 면역 반응들의 개선된 유도에 이르게 할 수 있다는 인식을 포함한다. 제공되는 바이러스유사입자들 (VLPs)은 바이러스 RNA 또는 DNA를 포함하지 않고 비전염성이라는 것으로 특징지어 진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 바이러스유사입자들(VLPs)은 바이러스성 RNA 또는 DNA를 포함하고, 전염성이다. 몇몇 그러한 구체예들에 있어서, 제공되는 바이러스유사입자들(VLPs)은 백신으로서 유용하다.

몇몇 구체예들에 있어서, 대상에서의 체액성 면역 반응은 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 13 개월, 적어도 약 14 개월, 적어도 약 15 개월, 적어도 약 16 개월, 적어도 약 17 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 19 개월, 적어도 약 20 개월, 적어도 약 21 개월, 적어도 약 22 개월, 적어도 약 23 개월, 적어도 약 24 개월, 적어도 약 28 개월, 적어도 약 32 개월, 적어도 약 36 개월, 적어도 약 40 개월, 적어도 약 44 개월, 적어도 약 48 개월, 또는 그보다 길게 지속된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 대상에서의 세포성 면역 반응은 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 또는 적어도 12 개월 간 지속된다.

몇몇 구체예에서, 제공되는 바이러스유사입자들 (VLPs)은 지질막으로 둘러싸여 있으며, 선택적으로는 바이러스를 중화시키는 항체들의 유도에서 역할을 하는 항원들인 바이러스성 막 당단백질 (예를 들어, gB 및/또는 gH)로부터 유래되는 하나 이상의 에피토프를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 제공되는 바이러스유사입자들 (VLPs)은 세포 면역 반응들 (예를 들어, T-세포 반응)의 유도에서 역할을 하는 항원들인 바이러스성 구조 단백질들 (예를 들어, pp65)로부터 유래된 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 또한 몇몇 구체예에서, 이용되는 바이러스성 구조 단백질들 (예를 들어, pp65)은 보조 T 세포의 생성을 촉진할 뿐만 아니라, 인간 사이토메갈로바이러스 (HCMV) 에 대한 세포독성 T 세포를 유도한다.

몇몇 구체예에서, 본 발명은 바이러스성 막 당단백질들 (예를 들어 gB 및/또는 gH)의 변이체들을 제공한다. 또한, 몇몇 구체예에서, 바이러스성 막 당단백질들의 변이체들은 융합 단백질이거나 이를 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예에서, 바이러스성 당단백질들의 변이체들은 비상동 단백질 도메인 (예를 들어, 다른 단백질들로부터 유래되는 트렌스멤브레인 및/또는 세포질 도메인)을 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예에서, 바이러스성 구조단백질들의 변이체는 비상동 항원 또는 에피토프를 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예에서, 본 발명은 바이러스성 구조 단백질들의 변이체들을 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예에서, 바이러스성 구조 단백질들의 변이체는 융합 단백질이거나 융합 단백질을 포함하여 구성된다.

I. 바이러스유자입자들 (VLPs)

레트로바이러스는 레트로바이러스과에 속하는 외피보유(enveloped) RNA바이러스이다.

숙주 세포가 레트로바이러스에 의해 감염되면, RNA는 역 전사효소를 통하여 DNA 로 전사되어진다. 상기 DNA는 그 다음에 인테그레이즈(integrase) 효소에 의해 숙주 세포의 유전체(genome) 로 포함되어지고 그 후에 숙주 세포의 DNA 일부로 자기 복제된다. 레트로바이러스과는 다음과 같은 속을 포함한다, Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gammearetrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus, Lentiretrovirus and Spumaretrovirus. 이러한 레트로바이러스들의 숙주세포들은 일반적으로 척추동물들이다. 레트로바이러스들은 숙주 세포 막에서 유래된 지질 이중층으로 둘러 싸여진 구형의 핵단백질체(nucleocapsid) (바이러스성 구조 단백질들과 복합물을 이루는 바이러스성 유전체(genome))를 함유하는 감염성의 비리온(virion)을 생산한다.

레트로바이러스성 벡터들(vectors)은 복제-가능(replication-competent) 또는 복제-불능(replication-defective)인 외피보유(enveloped) 감염성 비리온들(virions)을 발생시키는 데에 사용되어질 수 있다. 복제-가능(replication-competent) 감염성의 레트로바이러스성 벡터들(vectors)은 비리온(virion) 합성에 필요한 모든 유전자들(genes) 함유하고, 일단 숙주 세포에의 감염이 일어나면 계속해서 그들 자신을 전파(propagate)한다. 복제-불능(replication-defective) 감염성 레트로바이러스성 벡터들(vectors)은 처음의 감염 이후 전파되어 지지는 않는다. 이과정은 벡터(vector)가 추가적인 복제(replication) 활동들에 필요한 단백질들을 만들지 못하도록 하기 위하여. 레트로바이러스의 대부분의 인코딩 부위들을 전달될 유전자들(genes) 또는 뉴클레오타이드 서열들로 대체(replacement) 하는 것으로 수행된다;

대신에 또는 추가적으로, 레트로바이러스성 벡터들(vectors)은 레트로바이러스로부터-유래된 유전체(genome)가 없고 비감염성이고 비복제의 바이러스유자입자들(VLPs)을 발생시키는데 사용되어 질 수 있다. 바이러스유사입자들(VLPs)의 유리한 특성들로 인하여, 바이러스유사입자들(VLPs)은 항원 전달 시스템으로 이용되어질 수 있다. 나아가, 바이러스유사입자들(VLPs)은 비감염성이기에, 면역성 조성물 (예를 들어, 백신) 로서 안전하게 투여될 수 있다. 바이러스유사입자들(VLPs)은 일반적으로 상기 설명된 외피보유(enveloped) 비리온들(virions)과 구조적으로 유사하나 레트로바이러스-유래된 유전체(genome)가 없으며, 이는 바이러스성 복제(replication)가 발생하지 않게 한다. 몇몇 바이러스들 (예를 들어, 설치류 백혈병 바이러스들, 예를 들어 몰로니 설치류 백혈병 바이러스(MMLV) 캡시드(capsid) 단백질들 (예를 들어, Gag)의 발현은 상응하는 천연 바이러스에 유사한 입자들로의 자가조립(self-assembly) 으로 이어지며, 상기 입자들은 바이러스성 유전 물질(genetic material) 이 없다.

다양한 바이러스유사입자들(VLPs)은 제조되어진다. 예를 들어, 막 단백질들 및/또는 표면 당단백질들이 있거나 없는, 한 개 또는 복수 개의 캡시드(capsid) 단백질들을 포함하는 바이러스유사입자들(VLPs) 이 제조되어진다. 몇몇 경우에 있어서, hepadnaviruses (예를 들어, Engerix™, GSK and Recombivax HB™, Merck) papillomaviruses (예를 들어, Cervarix™ , GSK and Gardasil™, Merck), paroviruses, 또는 polyomaviruses 로 부터 제조된 바이러스유사입자들(VLPs)에서 보여지는 것과 같이, 바이러스유사입자들(VLPs)은 외피보유(enveloped) 이고 오로지 하나의 주요한 캡시드(capsid) 단백질 발현에 의해 만들어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자들(VLPs)은 외피보유(enveloped) 이고 상응하는(corresponding) 천연 바이러스에서 발견되는 복수의 항원 단백질들을 포함하여 구성될 수 있다. 바이러스유사입자들(VLPs)은 보통 그들의 상응하는(corresponding) 천연 바이러스와 유사하고 다가의(multivalent) 미립자(particulate) 구조들일 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 항원 단백질들은 바이러스유사입자(VLP) 안에 내부적으로 바이러스유사입자(VLP) 구조의 구성요소로서 그리고/또는 바이러스유사입자(VLS)의 포면에 존재할 수 있다. 바이러스유사입자(VLP) 내 다른 형태, 예를 들어 바이러스유사입자(VLP)와 결합되지 않은 수용성의 항원들, 로 항원의 존재는 본원 발명이 항원에 대응한 중화 항체들의 유도에 유리하다는 인식을 포함한다. 중화 항체들은 보통 3차의 또는 4차의 구조들을 인식한다 ; 이는 종종 막 당단백질들과 같은 항원 단백질들이 그들의 천연 바이러스 구조에 존재할 것을 요구한다. 대신에 또는 추가적으로, 바이러스유사입자들(VLPs)은 세포성 면역 (예를 들어, T 세포 반응)을 유도하는 존재하는 항원들에 유용할 수 있다. 본원 발명은 나아가 바이러스유사입자(VLP) 시스템들에서 항원들을 조합하여 사용하는 것이 개선된 면역 반응을 발생시킬 수 있다.

A. 구조 단백질들

몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명은 하나 이상의 레트로바이러스성 구조 단백질들 (예를 들어, Gag)을 포함하여 구성되는 바이러스유사입자들(VLPs)을 활용한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따라 사용되는 구조 단백질은 Alpharetrovirus (예를 들어, Avian Leukosis virus), Betaretrovirus (Mouse Mammary Tumor virus), Gammearetrovirus (Murine Leukemia virus), Deltaretrovirus (Bovine Leukemia virus), Epsilonretrovirus (Walley Dermal Sarcoma virus), Lentivirus (Human Immunodeficiency virus 1) 또는 Spumavirus (Chimpanzee Foamy virus) 구조 단백질 이다. 특정 구체예들에 있어서, 구조 다단백질(polyprotein)은 쥐의 백혈병 Virus (MLV) 구조 단백질이다. 이 레트로바이러스들의 유전체들(genomes)은 데이터베이스에서 손쉽게 이용가능합니다. 이 모든 레트로바이러스들의 Gag 유전자들(genes)은 전체적으로 구조적 유사성을 갖고, 레트로바이러스들 그룹의 각각은 아미노산 수준으로 보존된다. 레트로바이러스성 Gag 단백질들은 바이러스성 복합체(assembly)내에서 주로 기능한다. 다단백질(polyprotein) 형태의 Gag 유전자는 바이러스유사입자(VLP)의 핵심 구조 단백질들 발생시킨다. 상기 MLV Gag 유전자는 4 개의 구조 단백질들 (Matrix (MA); pi 2; 캡시드(capsid) (CA); 및 핵단백질체(nucleocapsid) (NC))로 쪼개어지는 65kDa 다단백질(polyprotein) 전구체를 성숙한 비리온(virion)에서 MLV 단백질가수분해효소에 의해 인코딩 한다. 레트로바이러스들은 폴리펩타이드로부터 형성되고, Gag를 갖는 바이러스성 단백질가수분해효소와 같이 다른 바이러스성 요소들이 없는 Gag 다단백질(polyprotein) 로 이루어진 덜 성숙한 캡시드(capsid)를 덜 성숙한 바이러스입자의 구조 단백질로서 만든다. 기능적으로, 상기 Gag 다단백질(polyprotein)은 세 도메인으로 나누어 진다: 세포성 막(membrane)에 Gag 다단백질(polyprotein)을 표적으로 하는 막 결합(membrane binding) 도메인 ; Gag 중합(polymerization)을 촉진시키는(promote) 상호작용(interaction) 도메인 ; 그리고 숙주세포로부터 발생초기의(nascent) 비리온들(virions)의 방출(release)을 촉진시키는 레이트(late) 도메인. 바이러스성 입자(particle) 합체(assembly)를가능케 하는(mediate) 상기 Gag 단백질의 형태는 다단백질(polyprotein)이다.

몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따라 사용되는 레트로바이러스성 구조 단백질은 Gag 폴리펩타이드이다. 본 명세서에서 사용되는, 용어 "Gag 폴리펩타이드"는 구조 폴리펩타이드에서 유래되고, 본원 명세서에서 설명된 바이러스유사입자들 (VLPs)의 형성(formation)에 책임이 있는 레트로바이러스이고, 아미노산 서열이 적어도 한 개의 Gag의 특징적 서열을 포함하는 폴리펩타이드 서열을 의미한다. 다양한 레트로바이러스들로부터 유래된 다양한 Gag 서열들은 당 분야와 당 분야 통상의 기술자에 잘 알려져 있으며, 일반적으로 손쉽게 Gag 단백질들 및/또는 특정 Gag 폴리펩타이드들의의 특성을 나타내는 서열들을 확인할 수 있는 서열들을 의미한다,

본원 발명에 따라 사용되는 예시적인 Gag 폴리펩타이드는 아래의 SEQ ID NO: l에서 보여지는 것과 같다. 몇몇 구체예들에 있어서, 적절한 Gag 폴리펩타이드는 알려진 레트로바이러스성 Gag 폴리펩타이드에 대해 실질적으로 상동성이 있다. 예를 들어, Gag 폴리펩타이드는 표준형(wild-type) 또는 자연발생의(naturally-occuring) Gag 폴리펩타이드 (예를 들어, SEQ ID NO: l)와 비교시 상당한(substantial) 자가조립(self-assembly) 활성을 유지하면서 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 포함하는 레트로바이러스성 Gag 폴리펩타이드로 변형되어질 수 있다. 따라서, 몇몇 구체예들에 있어서 본원 발명에 적합한 Gag 폴리펩타이드는 실질적으로 MMLV Gag 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: l) 에 대해 상동성이 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 Gag 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: 1와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 상동성 있는 아미노산 서열을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 Gag 폴리펩타이드는 MMLV Gag 폴리펩타이드 (SEQ ID NO:l) 에 상당히(substantially) 동일하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 Gag 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: l와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 상동성 있는 아미노산 서열을 갖는다.

MMLV Gag 아미노산 서열 (SEQ ID NO:l)

MGQTVTTPLSLTLGHWKDVERIAHNQSVDVKKRRWVTFCSAEWPTFNVGWPRDGTFN

RDLITQVKIKVFSPGPHGHPDQVPYIVTWEALAFDPPPWVKPFVHPKPPPPLPPSAPSLPL

EPPRSTPPRSSLYPALTPSLGAKPKPQVLSDSGGPLIDLLTEDPPPYRDPRPPPSDRDGNGG

EATPAGEAPDPSPMASRLRGRREPPVADSTTSQAFPLRAGGNGQLQYWPFSSSDLYNW

KNNNPSFSEDPGKLTALIESVLITHQPTWDDCQQLLGTLLTGEEKQRVLLEARKAVRGD

DGRPTQLPNEVDAAFPLERPDWDYTTQAGRNHLVHYRQLLLAGLQNAGRSPTNLAKV

KGITQGPNESPSAFLERLKEAYRRYTPYDPEDPGQETNVSMSFIWQSAPDIGRKLERLED

LKKTLGDLVREAEKIFNKRETPEEREERIRRETEEKEERRRTEDEQKEKERDRRRHREM SKLLATVVSGQKQDRQGGERRRSQLDRDQCAYCKEKGHWAKDCPKKPRGPRGPRPQT

SLLTLDD (SEQ ID NO:l)

MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:2)

ATGGGCCAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTTGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTC

GAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACCTT

CTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAA

CCGAGACCTCATCACCCAGGTTAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACA

CCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTTTTGACCCCCCTCC

CTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCG

TCTCTCCCCCTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCC

TCACTCCTTCTCTAGGCGCCAAACCTAAACCTCAAGTTCTTTCTGACAGTGGGGGGC

CGCTCATCGACCTACTTACAGAAGACCCCCCGCCTTATAGGGACCCAAGACCACCCC

CTTCCGACAGGGACGGAAATGGTGGAGAAGCGACCCCTGCGGGAGAGGCACCGGA

CCCCTCCCCAATGGCATCTCGCCTACGTGGGAGACGGGAGCCCCCTGTGGCCGACTC

CACTACCTCGCAGGCATTCCCCCTCCGCGCAGGAGGAAACGGACAGCTTCAATACT

GGCCGTTCTCCTCTTCTGACCTTTACAACTGGAAAAATAATAACCCTTCTTTTTCTGA

AGATCCAGGTAAACTGACAGCTCTGATCGAGTCTGTTCTCATCACCCATCAGCCCAC

CTGGGACGACTGTCAGCAGCTGTTGGGGACTCTGCTGACCGGAGAAGAAAAACAAC

GGGTGCTCTTAGAGGCTAGAAAGGCGGTGCGGGGCGATGATGGGCGCCCCACTCAA

CTGCCCAATGAAGTCGATGCCGCTTTTCCCCTCGAGCGCCCAGACTGGGATTACACC

ACCCAGGCAGGTAGGAACCACCTAGTCCACTATCGCCAGTTGCTCCTAGCGGGTCTC

CAAAACGCGGGCAGAAGCCCCACCAATTTGGCCAAGGTAAAAGGAATAACACAAG

GGCCCAATGAGTCTCCCTCGGCCTTCCTAGAGAGACTTAAGGAAGCCTATCGCAGGT

ACACTCCTTATGACCCTGAGGACCCAGGGCAAGAAACTAATGTGTCTATGTCTTTCA

TTTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGAGAAAGTTAGAGAGGTTAGAAGATTTAAAA

AACAAGACGCTTGGAGATTTGGTTAGAGAGGCAGAAAAGATCTTTAATAAACGAGA

AACCCCGGAAGAAAGAGAGGAACGTATCAGGAGAGAAACAGAGGAAAAAGAAGA

ACGCCGTAGGACAGAGGATGAGCAGAAAGAGAAAGAAAGAGATCGTAGGAGACAT

AGAGAGATGAGCAAGCTATTGGCCACTGTCGTTAGTGGACAGAAACAGGATAGACA

GGGAGGAGAACGAAGGAGGTCCCAACTCGATCGCGACCAGTGTGCCTACTGCAAAG

AAAAGGGGCACTGGGCTAAAGATTGTCCCAAGAAACCACGAGGACCTCGGGGACC

AAGACCCCAGACCTCCCTCCTGACCCTAGATGAC (SEQ ID NO:2)

코돈 최적화된 MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:3)

ATGGGACAGACAGTCACTACACCCCTGAGCCTGACACTGGGACATTGGAAAGACGT

GGAGAGGATTGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGGGTCACCT

TTTGCTCCGCCGAGTGGCCAACATTCAATGTGGGATGGCCCCGAGATGGCACCTTCA

ACCGGGACCTGATCACTCAGGTGAAGATCAAGGTCTTCTCTCCAGGACCCCACGGCC

ATCCAGATCAGGTGCCCTACATCGTCACCTGGGAGGCTCTGGCATTTGACCCCCCTC

CATGGGTGAAGCCTTTCGTCCACCCAAAACCACCTCCACCACTGCCTCCATCTGCCC

CTAGTCTGCCACTGGAACCCCCTCGGTCAACCCCACCCAGAAGCTCCCTGTATCCCG

CACTGACACCTAGCCTGGGGGCCAAGCCTAAACCACAGGTGCTGTCTGATAGTGGC

GGGCCTCTGATCGATCTGCTGACCGAGGACCCTCCACCATACCGCGACCCACGACCT

CCACCAAGCGACCGGGACGGAAACGGAGGAGAGGCTACACCCGCAGGCGAAGCCC

CCGATCCTAGTCCAATGGCATCAAGGCTGCGCGGGAGGCGCGAACCTCCAGTGGCC

GACTCAACCACAAGCCAGGCATTTCCACTGAGGGCCGGGGGAAATGGACAGCTCCA

GTATTGGCCCTTCTCTAGTTCAGATCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCTAGCTT

CAGCGAGGACCCAGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCACC

AGCCCACATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGAA

AAGCAGAGAGTGCTGCTGGAGGCTAGGAAAGCAGTCCGCGGGGACGATGGAAGGC

CAACACAGCTCCCCAATGAGGTGGATGCCGCTTTCCCTCTGGAACGGCCAGATTGGG

ACTATACTACCCAGGCTGGACGCAACCACCTGGTGCATTACCGGCAGCTCCTGCTGG

CTGGACTGCAGAATGCAGGGCGCAGCCCCACTAACCTGGCCAAGGTGAAAGGAATC

ACCCAGGGCCCCAATGAGTCCCCTTCTGCATTCCTGGAGCGGCTGAAGGAAGCCTAC

CGACGGTATACTCCCTACGATCCTGAGGACCCAGGCCAGGAAACCAACGTGAGTAT

GAGCTTCATCTGGCAGTCCGCTCCTGACATTGGCCGAAAACTGGAGCGGCTGGAAG

ATCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTGCGGGAGGCAGAAAAGATCTTCAAC

AAAAGGGAGACTCCAGAGGAACGGGAGGAAAGAATTAGAAGGGAAACAGAGGAA

AAGGAGGAACGCCGACGGACTGAGGATGAACAGAAGGAGAAAGAAAGAGACCGGC

GGCGGCACCGGGAGATGTCTAAGCTGCTGGCCACCGTGGTCAGTGGCCAGAAACAG

GATCGACAGGGAGGAGAGCGACGGAGAAGCCAGCTCGATCGGGACCAGTGCGCCT

ATTGTAAGGAAAAAGGGCATTGGGCTAAGGACTGCCCCAAGAAACCCAGAGGCCCA

CGCGGGCCCCGACCTCAGACTTCCCTGCTGACCCTGGACGAT (SEQ ID NO:3)

코돈 최적화된 MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:21)

ATGGGACAGACCGTCACAACACCCCTGAGCCTGACCCTGGGACATTGGAAAGACGT

GGAGAGGATCGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGGGTCACA

TTCTGCAGTGCTGAGTGGCCAACTTTTAATGTGGGATGGCCCCGAGACGGCACTTTC

AACAGGGATCTGATCACCCAGGTGAAGATCAAGGTCTTTAGCCCAGGACCTCACGG

ACATCCAGACCAGGTGCCTTATATCGTCACCTGGGAGGCACTGGCCTTCGATCCCCC

TCCATGGGTGAAGCCATTTGTCCACCCAAAACCACCTCCACCACTGCCTCCAAGTGC

CCCTTCACTGCCACTGGAACCACCCCGGAGCACACCACCCCGCAGCTCCCTGTATCC

TGCTCTGACTCCATCTCTGGGCGCAAAGCCAAAACCACAGGTGCTGAGCGACTCCG

GAGGACCACTGATTGACCTGCTGACAGAGGACCCCCCACCATACCGAGATCCTCGG

CCTCCACCAAGCGACCGCGATGGAAATGGAGGAGAGGCTACTCCTGCCGGCGAAGC

CCCTGACCCATCTCCAATGGCTAGTAGGCTGCGCGGCAGGCGCGAGCCTCCAGTGG

CAGATAGCACCACATCCCAGGCCTTCCCTCTGAGGGCTGGGGGAAATGGGCAGCTC

CAGTATTGGCCATTTTCTAGTTCAGACCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCCTCT

TTCAGTGAGGACCCCGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCAT

CAGCCCACATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGA

AAAGCAGCGCGTGCTGCTGGAGGCTCGCAAAGCAGTCCGAGGGGACGATGGACGG

CCCACACAGCTCCCTAATGAGGTGGACGCCGCTTTTCCACTGGAAAGACCCGACTGG

GATTATACTACCCAGGCAGGGAGAAACCACCTGGTCCATTACAGGCAGCTCCTGCT

GGCAGGCCTGCAGAATGCCGGGAGATCCCCCACCAACCTGGCCAAGGTGAAAGGCA

TCACACAGGGGCCTAATGAGTCACCAAGCGCCTTTCTGGAGAGGCTGAAGGAAGCT

TACCGACGGTATACCCCATACGACCCTGAGGACCCCGGACAGGAAACAAACGTCTC

CATGTCTTTCATCTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGCGGAAGCTGGAGAGACTGGA

AGACCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTGCGGGAGGCTGAAAAGATCTTCA

ACAAACGGGAGACCCCCGAGGAAAGAGAGGAAAGGATTAGAAGGGAAACTGAGGA

AAAGGAGGAACGCCGACGGACCGAGGACGAACAGAAGGAGAAAGAACGAGATCG

GCGGCGGCACCGGGAGATGTCAAAGCTGCTGGCCACCGTGGTCAGCGGACAGAAAC

AGGACAGACAGGGAGGAGAGCGACGGAGAAGCCAGCTCGACAGGGATCAGTGCGC

ATACTGTAAGGAAAAAGGCCATTGGGCCAAGGATTGCCCCAAAAAGCCAAGAGGAC

CAAGAGGACCAAGACCACAGACATCACTGCTGACCCTGGACGAC (SEQ ID NO:21)

보통 자연적으로는(in nature), Gag 단백질은 레트로바이러스성 단백질가수분해효소, 역 전사효소, 및 인테그레이즈(integrase) 효소의 활성을 함유할 수 있는 거대한 C-말단 신장 영역을 포함한다. 그러나 바이러스유사입자들(VLPs)의 복합체(Aseembly)는 일반적으로 그러한 성분들의 존재를 필요로 하지는 않는다. 몇몇 경우에 있어서, 레트로바이러스성 Gag 단백질은 단독으로 (예를 들어, C-말단 신장 영역이 없고, 유전체의(genomic) RNA, 역전사효소, 바이러스성 단백질가수분해효소, 또는 막 단백질 중 하나 또는 두 개 이상이 없는) in vitro와 in vivo 모두에서 자가 조립(self-assemble)하여 바이러스유사입자들(VLPs)을 형성할 수 있다. (Sharma S et al., 1997 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 10803-8). 레트로바이러스성 Gag 다단백질(polyprotein)은 단독으로 올리고머화하여 바이러스유사입자들(VLPs)로 조립될 수 있다.

몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따라 사용되는 Gag 폴리펩타이드는 C-말단 신장 영역이 없고 그리고/또는 변형된 C-말단 신장 영역을 포함한다. Gag 폴리펩타이드 선택적으로 하나 이상의 추가적인 폴리펩타이드 (예를 들어, 비상동성(heterologous) 항원)을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, Gag 폴리펩타이드는 비상동성(heterologous) 항원 (예를 들어, 따로 떨어진 촉진유전자들(promoters) 하에서 및/또는 따로 떨어진 단백질들로서)과 함께 발현된다. 몇몇 구체예들에 있어서, Gag 폴리펩타이드는 비상동성(heterologous) 항원이 있는 융합 단백질로 발현된다. Gag 폴리펩타이드는 Gag 기능의 변화없이 비상동성(heterologous) 항원에 연결되어 융합 단백질을 형성할 수 있다. 예를 들어, 비상동성(heterologous) 항원을 코딩하는 서열은 상기 Gag 폴리펩타이드를 코딩하는 서열 로 예를 들어, 상기 Gag 폴리펩타이드 코딩하는 서열의 3' 말단에서 이어 맞추어 질 수 있다(spliced). 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성(heterologous) 항원을 코딩하는 서열은 프레임(frame)에서 상기 Gag 폴리펩타이드를 코딩하는 서열로 이어 맞추어질 수 있다(spliced). 몇몇 구체예들에 있어서, Gag 폴리펩타이드-코딩하는 서열과 비상동성(heterologous) 항원은 단일의 프로모터에 의해 발현될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성(heterologous) 항원은 Gag 폴리펩타이드의 C-말단에 삽입 (예를 들어, 결합) 되어진다. 어떠한 이론에 의해서도 제한됨 없이, 자가조립(Self-assembling) Gag 폴리펩타이드의 비상동성(heterologous) 항원에의 결합은 변형되지 않은 Gag로서 기능하는 융합 단백질을 생산하는 것으로 여겨지고, 그 결과 상기 항원이 바이러스유사입자(VLP) 결과물의 구조적 구성요소들로 포함되는 것을 허락한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자(VLP) 구조의 구성요소들은 효과적인 면역원들(immunogens)로서 (예를 들어, 세포성 면역 반응의 유도를 위한) 역할을 한다. 예를 들어, 제공되는 바이러스유사입자들(VLPs)은 레트로바이러스성 Gag 폴리펩타이드 (예를 들어, MMLV Gag)와 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV) (예를 들어, pp65) 구조의 구성요소를 포함하여 구성될 수 있다. 몇몇 그러한 구체예들에 있어서, pp65는 바이러스유사입자(VLP)에 포함되고 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV)에 대항한 면역 반응을 이끌어 내기 위한 항원으로 작용할 수 있다.

본원 발명에 따라 사용되는 예시적인 Gag-pp65 융합 폴리펩타이드는 아래의 SEQ ID NO:4에서 보여진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 적절한 Gag 폴리펩타이드 융합 단백질은 알려진 레트로바이러스성 Gag 폴리펩타이드에 대해 실질적으로 상동성 있는(homologous) Gag 폴리펩타이드의 전부 또는 일부분과 알려진 pp65 폴리펩타이드에 대해 실질적으로 상동성 있는 pp65 폴리펩타이드의 전부 또는 일부분을 포함한다. 예를 들어, Gag-pp65 폴리펩타이드 융합 단백질은 상당한 자가조립(self-assembly) 활성을 유지하면서 표준형(wild-type) 또는 자연발생의(naturally-occuring) Gag 폴리펩타이드 및/또는 pp65 폴리펩타이드와 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 포함할 수 있다. 따라서 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 Gag-pp65 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO:4에 대하여 실질적으로 상동성이 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 Gag-pp65 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO:4 에 대하여 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 상동성이 있는 아미노산 서열을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 Gag-pp65 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO:4와 실질적으로 동일하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 Gag-pp65 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO:4 에 대해 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상이 동일한 아미노산 서열을 갖는다 .

MMLV Gag - CMV pp65 아미노산 서열 (SEQ ID NO:4)

MGQTVTTPLSLTLGHWKDVERIAHNQSVDVKKRRWVTFCSAEWPTFNVGWPRDG

TFNRDLITQVKIKVFSPGPHGHPDQVPYIVTWEALAFDPPPWVKPFVHPKPPPPLPP

SAPSLPLEPPRSTPPRSSLYPALTPSLGAKPKPQVLSDSGGPLIDLLTEDPPPYRDPRP

PPSDRDGNGGEATPAGEAPDPSPMASRLRGRREPPVADSTTSQAFPLRAGGNGQLQ

YWPFSSSDLYNWKNNNPSFSEDPGKLTALIESVLITHQPTWDDCQQLLGTLLTGEE

KQRVLLEARKAVRGDDGRPTQLPNEVDAAFPLERPDWDYTTQAGRNHLVHYRQL

LLAGLQNAGRSPTNLAKVKGITQGPNESPSAFLERLKEAYRRYTPYDPEDPGQETN

VSMSFIWQSAPDIGRKLERLEDLKNKTLGDLVREAEKIFNKRETPEEREERIRRETE

EKEERRRTEDEQKEKERDRRRHREMSKLLATWSGQKQDRQGGERRRSQLDRDQ

CAYCKEKGHWAKDCPKKPRGPRGPRPQTSLLTLDDCESRGRRCPEMISVLGPISGHV

LKAVFSRGDTPVLPHETRLLQTGIHVRVSQPSLILVSQYTPDSTPCHRGDNQLQVQHTYF

TGSEVENVSVNVHNPTGRSICPSQEPMSIYVYALPLKMLNIPSINVHHYPSAAERKHRHL

PVADAVIHASGKQMWQARLTVSGLAWTRQQNQWKEPDVYYTSAFVFPTKDVALRHV

VCAHELVCSMENTRATKMQVIGDQYVKVYLESFCEDVPSGKLFMHVTLGSDVEEDLT

MTRNPQPFMRPHERNGFTVLCPKNMIIKPGKISHIMLDVAFTSHEHFGLLCPKSIPGLSIS

GNLLMNGQQIFLEVQAIRETVELRQYDPVAALFFFDIDLLLQRGPQYSEHPTFTSQYRIQ

GKLEYRHTWDRHDEGAAQGDDDVWTSGSDSDEELVTTERKTPRVTGGGAMAGASTSA GRKRKSASSATACTAGVMTRGRLKAESTVAPEEDTDEDSDNEIHNPAVFTWPPWQAGI LARNLVPMVATVQGQNLKYQEFFWDANDIYRIFAELEGVWQPAAQPKRRRHRQDALP

GPCIASTPKKHRG* (SEQ ID NO:4) (MMLV Gag 아미노산 서열은 굵은 글씨체임)

MMLV Gag - CMV pp65 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:5)

ATGGGCCAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTTGACCTTAGGTCACTGGAAAGAT

GTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGT

TACCTTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACG

GCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGTTAAGATCAAGGTCTTTTCACCTG

GCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTG

GCTTTTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCT

CCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCCCTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCG

CCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCAAACCTAAA

CCTCAAGTTCTTTCTGACAGTGGGGGGCCGCTCATCGACCTACTTACAGAAGA

CCCCCCGCCTTATAGGGACCCAAGACCACCCCCTTCCGACAGGGACGGAAATG

GTGGAGAAGCGACCCCTGCGGGAGAGGCACCGGACCCCTCCCCAATGGCATCT

CGCCTACGTGGGAGACGGGAGCCCCCTGTGGCCGACTCCACTACCTCGCAGGC

ATTCCCCCTCCGCGCAGGAGGAAACGGACAGCTTCAATACTGGCCGTTCTCCT

CTTCTGACCTTTACAACTGGAAAAATAATAACCCTTCTTTTTCTGAAGATCCAG

GTAAACTGACAGCTCTGATCGAGTCTGTTCTCATCACCCATCAGCCCACCTGGG

ACGACTGTCAGCAGCTGTTGGGGACTCTGCTGACCGGAGAAGAAAAACAACGG

GTGCTCTTAGAGGCTAGAAAGGCGGTGCGGGGCGATGATGGGCGCCCCACTCA

ACTGCCCAATGAAGTCGATGCCGCTTTTCCCCTCGAGCGCCCAGACTGGGATT

ACACCACCCAGGCAGGTAGGAACCACCTAGTCCACTATCGCCAGTTGCTCCTA

GCGGGTCTCCAAAACGCGGGCAGAAGCCCCACCAATTTGGCCAAGGTAAAAGG

AATAACACAAGGGCCCAATGAGTCTCCCTCGGCCTTCCTAGAGAGACTTAAGG

AAGCCTATCGCAGGTACACTCCTTATGACCCTGAGGACCCAGGGCAAGAAACT

AATGTGTCTATGTCTTTCATTTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGAGAAAGTTA

GAGAGGTTAGAAGATTTAAAAAACAAGACGCTTGGAGATTTGGTTAGAGAGGC

AGAAAAGATCTTTAATAAACGAGAAACCCCGGAAGAAAGAGAGGAACGTATCA

GGAGAGAAACAGAGGAAAAAGAAGAACGCCGTAGGACAGAGGATGAGCAGAA

AGAGAAAGAAAGAGATCGTAGGAGACATAGAGAGATGAGCAAGCTATTGGCCA

CTGTCGTTAGTGGACAGAAACAGGATAGACAGGGAGGAGAACGAAGGAGGTC

CCAACTCGATCGCGACCAGTGTGCCTACTGCAAAGAAAAGGGGCACTGGGCTA

AAGATTGTCCCAAGAAACCACGAGGACCTCGGGGACCAAGACCCCAGACCTCC

CTCCTGACCCTAGATGACTGTGAGTCGCGCGGTCGCCGTTGTCCCGAAATGATATC

CGTACTGGGTCCCATTTCGGGGCACGTGCTGAAAGCCGTGTTTAGTCGCGGCGACAC

GCCGGTGCTGCCGCACGAGACGCGACTCCTGCAGACGGGTATCCACGTGCGCGTGA

GCCAGCCCTCGCTGATCCTGGTGTCGCAGTACACGCCCGACTCGACGCCATGCCACC

GCGGCGACAATCAGCTGCAGGTGCAGCACACGTACTTTACGGGCAGCGAGGTGGAG

AACGTGTCGGTCAACGTGCACAACCCCACGGGCCGGAGCATCTGCCCCAGCCAAGA

GCCCATGTCGATCTATGTGTACGCGCTGCCGCTCAAGATGCTGAACATCCCCAGCAT

CAACGTGCACCACTACCCGTCGGCGGCCGAGCGCAAACACCGACACCTGCCCGTAG

CTGACGCTGTGATTCACGCGTCGGGCAAGCAGATGTGGCAGGCGCGTCTCACGGTCT

CGGGACTGGCCTGGACGCGTCAGCAGAACCAGTGGAAAGAGCCCGACGTCTACTAC

ACGTCAGCGTTCGTGTTTCCCACCAAGGACGTGGCACTGCGGCACGTGGTGTGCGCG

CACGAGCTGGTTTGCTCCATGGAGAACACGCGCGCAACCAAGATGCAGGTGATAGG

TGACCAGTACGTCAAGGTGTACCTGGAGTCCTTCTGCGAGGACGTGCCCTCCGGCAA

GCTCTTTATGCACGTCACGCTGGGCTCTGACGTGGAAGAGGACCTGACGATGACCCG

CAACCCGCAACCCTTCATGCGCCCCCACGAGCGCAACGGCTTTACGGTGTTGTGTCC

CAAAAATATGATAATCAAACCGGGCAAGATCTCGCACATCATGCTGGATGTGGCTTT

TACCTCACACGAGCATTTTGGGCTGCTGTGTCCCAAGAGCATCCCGGGCCTGAGCAT

CTCAGGTAACCTATTGATGAACGGGCAGCAGATCTTCCTGGAGGTGCAAGCGATAC

GCGAGACCGTGGAACTGCGTCAGTACGATCCCGTGGCTGCGCTCTTCTTTTTCGATA

TCGACTTGCTGCTGCAGCGCGGGCCTCAGTACAGCGAACACCCCACCTTCACCAGCC

AGTATCGCATCCAGGGCAAGCTTGAGTACCGACACACCTGGGACCGGCACGACGAG

GGTGCCGCCCAGGGCGACGACGACGTCTGGACCAGCGGATCGGACTCCGACGAGGA

ACTCGTAACCACCGAGCGCAAGACGCCCCGCGTTACCGGCGGCGGCGCCATGGCGG

GCGCCTCCACTTCCGCGGGCCGCAAACGCAAATCAGCATCCTCGGCGACGGCGTGC

ACGGCGGGCGTTATGACACGCGGCCGCCTTAAGGCCGAGTCCACCGTCGCGCCCGA

AGAGGACACCGACGAGGATTCCGACAACGAAATCCACAATCCGGCCGTGTTCACCT

GGCCGCCCTGGCAGGCCGGCATCCTGGCCCGCAACCTGGTGCCCATGGTGGCTACG

GTTCAGGGTCAGAATCTGAAGTACCAGGAGTTCTTCTGGGACGCCAACGACATCTAC

CGCATCTTCGCCGAATTGGAAGGCGTATGGCAGCCCGCTGCGCAACCCAAACGTCG

CCGCCACCGGCAAGACGCCTTGCCCGGGCCATGCATCGCCTCGACGCCCAAAAAGC

ACCGAGGTTAG(SEQ ID NO:5) (MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열은 굵게 표시됨)

코돈 최적화된 MMLV Gag - CMV pp65 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:6)

ATGGGACAGACAGTCACTACACCCCTGAGCCTGACACTGGGACATTGGAAAGA

CGTGGAGAGGATTGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGG

GTCACCTTTTGCTCCGCCGAGTGGCCAACATTCAATGTGGGATGGCCCCGAGA

TGGCACCTTCAACCGGGACCTGATCACTCAGGTGAAGATCAAGGTCTTCTCTCC

AGGACCCCACGGCCATCCAGATCAGGTGCCCTACATCGTCACCTGGGAGGCTC

TGGCATTTGACCCCCCTCCATGGGTGAAGCCTTTCGTCCACCCAAAACCACCTC

CACCACTGCCTCCATCTGCCCCTAGTCTGCCACTGGAACCCCCTCGGTCAACCC

CACCCAGAAGCTCCCTGTATCCCGCACTGACACCTAGCCTGGGGGCCAAGCCT

AAACCACAGGTGCTGTCTGATAGTGGCGGGCCTCTGATCGATCTGCTGACCGA

GGACCCTCCACCATACCGCGACCCACGACCTCCACCAAGCGACCGGGACGGAA

ACGGAGGAGAGGCTACACCCGCAGGCGAAGCCCCCGATCCTAGTCCAATGGCA

TCAAGGCTGCGCGGGAGGCGCGAACCTCCAGTGGCCGACTCAACCACAAGCCA

GGCATTTCCACTGAGGGCCGGGGGAAATGGACAGCTCCAGTATTGGCCCTTCT

CTAGTTCAGATCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCTAGCTTCAGCGAGGAC

CCAGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCACCAGCCCAC

ATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGAAAAGC

AGAGAGTGCTGCTGGAGGCTAGGAAAGCAGTCCGCGGGGACGATGGAAGGCC

AACACAGCTCCCCAATGAGGTGGATGCCGCTTTCCCTCTGGAACGGCCAGATT

GGGACTATACTACCCAGGCTGGACGCAACCACCTGGTGCATTACCGGCAGCTC

CTGCTGGCTGGACTGCAGAATGCAGGGCGCAGCCCCACTAACCTGGCCAAGGT

GAAAGGAATCACCCAGGGCCCCAATGAGTCCCCTTCTGCATTCCTGGAGCGGC

TGAAGGAAGCCTACCGACGGTATACTCCCTACGATCCTGAGGACCCAGGCCAG

GAAACCAACGTGAGTATGAGCTTCATCTGGCAGTCCGCTCCTGACATTGGCCG

AAAACTGGAGCGGCTGGAAGATCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTGC

GGGAGGCAGAAAAGATCTTCAACAAAAGGGAGACTCCAGAGGAACGGGAGGA

AAGAATTAGAAGGGAAACAGAGGAAAAGGAGGAACGCCGACGGACTGAGGAT

GAACAGAAGGAGAAAGAAAGAGACCGGCGGCGGCACCGGGAGATGTCTAAGC

TGCTGGCCACCGTGGTCAGTGGCCAGAAACAGGATCGACAGGGAGGAGAGCG

ACGGAGAAGCCAGCTCGATCGGGACCAGTGCGCCTATTGTAAGGAAAAAGGGC

ATTGGGCTAAGGACTGCCCCAAGAAACCCAGAGGCCCACGCGGGCCCCGACCT

CAGACTTCCCTGCTGACCCTGGACGATTGCGAGAGCCGGGGCCGGCGGTGCCCA

GAAATGATCTCTGTGCTGGGGCCCATTAGTGGACATGTGCTGAAGGCCGTCTTCTCC

AGGGGAGACACCCCCGTGCTGCCTCACGAGACTCGACTGCTGCAGACCGGCATCCA

TGTGCGGGTCTCCCAGCCCTCTCTGATTCTGGTGTCACAGTATACACCAGATAGCAC

TCCCTGCCACAGAGGAGACAATCAGCTCCAGGTGCAGCATACCTACTTTACAGGCTC

CGAGGTCGAAAACGTGTCTGTCAATGTGCACAACCCTACCGGCAGGAGCATCTGTC

CTAGCCAGGAGCCAATGAGCATCTACGTGTACGCCCTGCCTCTGAAGATGCTGAATA

TCCCATCAATTAACGTCCACCATTACCCTAGCGCAGCCGAACGGAAGCACAGACAT

CTGCCAGTGGCCGACGCTGTCATCCATGCCAGCGGCAAACAGATGTGGCAGGCAAG

ACTGACCGTGTCCGGGCTGGCCTGGACAAGGCAGCAGAATCAGTGGAAGGAGCCCG

ACGTGTACTATACCAGCGCCTTCGTGTTCCCTACCAAAGACGTGGCCCTGAGACATG

TGGTGTGCGCACATGAGCTGGTGTGCAGCATGGAAAACACTAGGGCCACCAAGATG

CAGGTCATCGGCGATCAGTATGTCAAAGTGTACCTGGAGAGTTTTTGCGAAGACGTG

CCATCAGGGAAGCTGTTCATGCATGTGACCCTGGGCAGCGATGTCGAGGAAGACCT

GACCATGACAAGAAATCCACAGCCCTTTATGAGACCCCACGAGAGGAATGGGTTCA

CTGTGCTGTGCCCCAAGAACATGATCATTAAGCCTGGAAAAATCAGTCATATTATGC

TGGATGTGGCCTTTACATCACACGAGCATTTCGGACTGCTGTGCCCCAAATCCATCC

CTGGACTGAGCATTTCCGGCAATCTGCTGATGAACGGCCAGCAGATCTTCCTGGAAG

TGCAGGCCATCCGGGAGACCGTCGAACTGCGACAGTATGACCCAGTGGCTGCACTG

TTCTTTTTCGACATCGACCTGCTGCTGCAGCGAGGACCACAGTACAGCGAGCACCCT

ACTTTTACCTCCCAGTATCGGATTCAGGGGAAGCTGGAGTACAGGCACACCTGGGAT

CGCCATGACGAAGGAGCCGCTCAGGGGGACGATGACGTGTGGACATCTGGCAGTGA

TTCAGACGAGGAACTGGTGACAACTGAGCGAAAAACCCCCCGGGTGACAGGAGGA

GGGGCAATGGCAGGGGCCAGCACCAGCGCAGGGCGGAAGCGAAAAAGCGCCAGCA

GCGCCACAGCATGTACCGCCGGCGTGATGACTAGAGGAAGGCTGAAGGCCGAGTCT

ACAGTCGCTCCCGAGGAAGATACTGACGAGGATAGTGACAATGAAATCCACAACCC

CGCCGTGTTCACCTGGCCACCTTGGCAGGCAGGGATTCTGGCTCGCAACCTGGTCCC

CATGGTGGCAACCGTCCAGGGACAGAATCTGAAGTATCAGGAGTTTTTCTGGGATGC

TAACGACATCTACCGGATTTTTGCAGAGCTGGAAGGCGTGTGGCAGCCAGCAGCCC

AGCCCAAACGACGGAGACATCGACAGGACGCTCTGCCAGGACCTTGTATCGCCAGC

ACACCAAAGAAGCACAGGGGCTAA (SEQ ID NO: 6) (MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열은 굵게 표시됨)

코돈 최적화된 MMLV Gag - CMV pp65 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:22)

ATGGGACAGACCGTCACAACACCCCTGAGCCTGACCCTGGGACATTGGAAAGA

CGTGGAGAGGATCGCACATAACCAGAGCGTGGACGTGAAGAAACGGAGATGG GTCACATTCTGCAGTGCTGAGTGGCCAACTTTTAATGTGGGATGGCCCCGAGA CGGCACTTTCAACAGGGATCTGATCACCCAGGTGAAGATCAAGGTCTTTAGCC

CAGGACCTCACGGACATCCAGACCAGGTGCCTTATATCGTCACCTGGGAGGCA

CTGGCCTTCGATCCCCCTCCATGGGTGAAGCCATTTGTCCACCCAAAACCACCT

CCACCACTGCCTCCAAGTGCCCCTTCACTGCCACTGGAACCACCCCGGAGCAC

ACCACCCCGCAGCTCCCTGTATCCTGCTCTGACTCCATCTCTGGGCGCAAAGCC

AAAACCACAGGTGCTGAGCGACTCCGGAGGACCACTGATTGACCTGCTGACAG

AGGACCCCCCACCATACCGAGATCCTCGGCCTCCACCAAGCGACCGCGATGGA

AATGGAGGAGAGGCTACTCCTGCCGGCGAAGCCCCTGACCCATCTCCAATGGC

TAGTAGGCTGCGCGGCAGGCGCGAGCCTCCAGTGGCAGATAGCACCACATCCC

AGGCCTTCCCTCTGAGGGCTGGGGGAAATGGGCAGCTCCAGTATTGGCCATTT

TCTAGTTCAGACCTGTACAACTGGAAGAACAATAACCCCTCTTTCAGTGAGGAC

CCCGGCAAACTGACCGCCCTGATCGAATCCGTGCTGATTACCCATCAGCCCAC

ATGGGACGATTGTCAGCAGCTCCTGGGCACCCTGCTGACCGGAGAGGAAAAGC

AGCGCGTGCTGCTGGAGGCTCGCAAAGCAGTCCGAGGGGACGATGGACGGCC

CACACAGCTCCCTAATGAGGTGGACGCCGCTTTTCCACTGGAAAGACCCGACT

GGGATTATACTACCCAGGCAGGGAGAAACCACCTGGTCCATTACAGGCAGCTC

CTGCTGGCAGGCCTGCAGAATGCCGGGAGATCCCCCACCAACCTGGCCAAGGT

GAAAGGCATCACACAGGGGCCTAATGAGTCACCAAGCGCCTTTCTGGAGAGGC

TGAAGGAAGCTTACCGACGGTATACCCCATACGACCCTGAGGACCCCGGACAG

GAAACAAACGTCTCCATGTCTTTCATCTGGCAGTCTGCCCCAGACATTGGGCG

GAAGCTGGAGAGACTGGAAGACCTGAAGAACAAGACCCTGGGCGACCTGGTG

CGGGAGGCTGAAAAGATCTTCAACAAACGGGAGACCCCCGAGGAAAGAGAGG

AAAGGATTAGAAGGGAAACTGAGGAAAAGGAGGAACGCCGACGGACCGAGGA

CGAACAGAAGGAGAAAGAACGAGATCGGCGGCGGCACCGGGAGATGTCAAAG

CTGCTGGCCACCGTGGTCAGCGGACAGAAACAGGACAGACAGGGAGGAGAGC

GACGGAGAAGCCAGCTCGACAGGGATCAGTGCGCATACTGTAAGGAAAAAGGC

CATTGGGCCAAGGATTGCCCCAAAAAGCCAAGAGGACCAAGAGGACCAAGACC

ACAGACATCACTGCTGACCCTGGACGACTGCGAGAGCCGGGGCCGGCGGTGCCC

AGAAATGATCTCTGTGCTGGGGCCCATTAGTGGACATGTGCTGAAGGCCGTCTTCTC

CAGGGGAGACACCCCCGTGCTGCCTCACGAGACTCGACTGCTGCAGACCGGCATCC

ATGTGCGGGTCTCCCAGCCCTCTCTGATTCTGGTGTCACAGTATACACCAGATAGCA

CTCCCTGCCACAGAGGAGACAATCAGCTCCAGGTGCAGCATACCTACTTTACAGGCT

CCGAGGTCGAAAACGTGTCTGTCAATGTGCACAACCCTACCGGCAGGAGCATCTGT

CCTAGCCAGGAGCCAATGAGCATCTACGTGTACGCCCTGCCTCTGAAGATGCTGAAT

ATCCCATCAATTAACGTCCACCATTACCCTAGCGCAGCCGAACGGAAGCACAGACA

TCTGCCAGTGGCCGACGCTGTCATCCATGCCAGCGGCAAACAGATGTGGCAGGCAA

GACTGACCGTGTCCGGGCTGGCCTGGACAAGGCAGCAGAATCAGTGGAAGGAGCCC

GACGTGTACTATACCAGCGCCTTCGTGTTCCCTACCAAAGACGTGGCCCTGAGACAT

GTGGTGTGCGCACATGAGCTGGTGTGCAGCATGGAAAACACTAGGGCCACCAAGAT

*GCAGGTCATCGGCGATCAGTATGTCAAAGTGTACCTGGAGAGTTTTTGCGAAGACGT

GCCATCAGGGAAGCTGTTCATGCATGTGACCCTGGGCAGCGATGTCGAGGAAGACC

TGACCATGACAAGAAATCCACAGCCCTTTATGAGACCCCACGAGAGGAATGGGTTC

ACTGTGCTGTGCCCCAAGAACATGATCATTAAGCCTGGAAAAATCAGTCATATTATG

CTGGATGTGGCCTTTACATCACACGAGCATTTCGGACTGCTGTGCCCCAAATCCATC

CCTGGACTGAGCATTTCCGGCAATCTGCTGATGAACGGCCAGCAGATCTTCCTGGAA

GTGCAGGCCATCCGGGAGACCGTCGAACTGCGACAGTATGACCCAGTGGCTGCACT

GTTCTTTTTCGACATCGACCTGCTGCTGCAGCGAGGACCACAGTACAGCGAGCACCC

TACTTTTACCTCCCAGTATCGGATTCAGGGGAAGCTGGAGTACAGGCACACCTGGGA

TCGCCATGACGAAGGAGCCGCTCAGGGGGACGATGACGTGTGGACATCTGGCAGTG

ATTCAGACGAGGAACTGGTGACAACTGAGCGAAAAACCCCCCGGGTGACAGGAGG

AGGGGCAATGGCAGGGGCCAGCACCAGCGCAGGGCGGAAGCGAAAAAGCGCCAGC

AGCGCCACAGCATGTACCGCCGGCGTGATGACTAGAGGAAGGCTGAAGGCCGAGTC

TACAGTCGCTCCCGAGGAAGATACTGACGAGGATAGTGACAATGAAATCCACAACC

CCGCCGTGTTCACCTGGCCACCTTGGCAGGCAGGGATTCTGGCTCGCAACCTGGTCC

CCATGGTGGCAACCGTCCAGGGACAGAATCTGAAGTATCAGGAGTTTTTCTGGGATG

CTAACGACATCTACCGGATTTTTGCAGAGCTGGAAGGCGTGTGGCAGCCAGCAGCC

CAGCCCAAACGACGGAGACATCGACAGGACGCTCTGCCAGGACCTTGTATCGCCAG

CACACCAAAGAAGCACAGGGGCTAA (SEQ ID NO:22) (MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열은 굵게 표시됨)

몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명은 Gag 폴리펩타이드 또는 Gag 폴리펩타이드의 특징부를 인코딩 하는 핵산들을 제공한다. 특정 구체예들에 있어서, 핵산들은 DNA 또는 RNA 일 수 있으며, 단일-가닥 또는 이중-가닥 일 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본 발명의 핵산들은 하나 이상의 인공적인(non-natural) 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 다른 구체예들에 있어서, 본 발명의 핵산들은 오로지 천연 뉴클레오타이드들을 포함한다.

B. 막 단백질들

몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명은 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV) (예를 들어, gB 및/또는 gH)로부터 유래된 하나 이상의 막 폴리펩타이드를 포함하여 구성되는 바이러스유자입자들(VLPs) 활용한다. 본 명세서에서 사용되는, 용어 "막 폴리펩타이드"는 아미노산 서열이 적어도 하나의 막 당단백질의 특징적 서열을 포함하는 폴리펩타이드 서열을 의미한다. 당 분야와 당 분야 통상의 기술자에 알려져 있듯이 다양한 바이러스들로부터의 다양한 막 당단백질 서열들은 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV)를 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않고, 이는 그러한 서열들이 손쉽게 보통의 막 당단백질들 및/또는 특정 막 당단백질들의 특성을 보여주는 서열들을 확인하는 것을 의미한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 막 폴리펩타이드는 세포질, 트렌스멤브레인(transmembrane) 및/또는 세포밖(extracellular)의 부분 또는 도메인을 포함하여 구성된다.

몇몇 구체예들에 있어서, 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV)에서 유래된 막 폴리펩타이드는, 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV) 단백질에서 자연에서는 발견되어지지 않는 트렌스멤브레인(transmembrane) 및 세포질 도메인을 포함한다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV)로부터 유래된 막 폴리펩타이드는 다른 인간사이토메갈로바리어스(HCMV) 단백질 (예를 들어, gB 또는 gH)로부터 유래된 트렌스멤브레인(transmembrane) 및 세포질 도메인을 포함한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV)로부터 유래된 막 폴리펩타이드는 수포성 구내염 바이러스 (VSV)에서 자연에서 발견되는(found in nature) 트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain) 및 세포질 도메인을 포함한다. 당 분야에 알려져 있듯이, 폴리펩타이드들은 때때로 트렌스멤브레인(transmembrane), 세포질, 및/또는 세포외 도메인들(extracellular domains)에 분포한다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용되는 "트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain)"은 막에 존재하는 속성을 갖는 도메인 (예를 들어, 세포성 막의 부분 또는 전부에 걸쳐져 있는)을 의미한다. 이해되어지는 것과 같이, 트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain)의 모든 아미노산이 막에 존재해야 한다고 요구되어 지지는 않는다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain)은 단백질의 지정된(designated) 스트레치(stretch) 또는 부분이 실질적으로 막에 위치한다고 특징지어진다. 당 분야에 알려져 있듯이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 단백질 세포 이하(subcellular)의 정위 (예를 들어, 트렌스멤브레인(transmembrane) 정위)를 예측하기 위하여 다양한 알고리즘들을 사용하여 분석되어진다. 그러한 프로그램들의 예시는 그 중에서도 psort (PSORT.org), Prosite (prosite.expasy.org)를 포함한다, 일반적으로, 본 명세서에서 사용되는 “세포질 도메인"은 도메인이 세포질 내에 존재하는 속성을 의미한다. 이해되어지는 것과 같이, 세포질 도메인내의 모든 아미노산이 세포질 내에 존재하여야만 하는 것은 아니다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 세포질 도메인은 단백질의 지정된(designated) 스트레치(stretch) 또는 부분이 실질적으로 세포질 내에 위치한다고 특징지어진다. 당 분야에 알려져 있듯이, 아미노산 또는 핵산 서열들은 단백질 세포 이하(subcellular)의 정위 (예를 들어, 트렌스멤브레인(transmembrane) 정위)를 예측하기 위하여 다양한 알고리즘들을 사용하여 분석되어진다. 그러한 프로그램들의 예시는 그 중에서도 psort (PSORT.org), Prosite (prosite.expasy.org)를 포함한다,

VSV-G의 트렌스멤브레인 도메인(transmembrane domain)은 바이러스성 당단백질로 하여금 세포 막에 표적이 되는 것을 기능케 한다 (Compton T et al, 1989 Proc Natl Acad Sci USA 86:4112-4116). VSV-G의 트렌스멤브레인(transmembrane) 및 세포질 도메인들을 다른 단백질의 트렌스멤브레인(transmembrane) 및 세포질 도메인들로 바꾸는 것은, 천연 단백질이 이러한 교환을 자연적으로 할 수 없는 경우 또는 부수적으로 발현되는(co-expressed) 단백질들이 이러한 교환을 수행하도록 필요할 때, 단백질로 하여금 세포막에 표적이 되도록 하기 위하여 사용되어진다. (Garrone P et al., 2011 Sci Transl Med 94:).

하나의 측면에서, 본원 발명은 바이러스 (예를 들어, MLV)의 구조적 구성요소 및 하나 이상의 비상동성(heterologous) 표면 항원 (예를 들어, 막 단백질)을 포함하는 바이러스유사입자들(VLPs)은 항원 전달 및 비상동성(heterologous) 항원에 대한 면역 반응의 유도에 특히(especially) 효과적이라는 인식을 포함한다.

C. 비상동성 항원들

일반적으로 중화 항체들이 감염을 예방할 수 있기에, 인간 사이토메갈로바이러스의 막 단백질들, 예를 들어 당단백질들 gB 및 gH,,은 인간 사이토메갈로바이러스에 대해 중화 항체들의 생산에 중요한 타겟들이다, 인간 사이토메갈로바이러스 감염에 대한 치료법들, 예를 들어 gB 서브유닛 백신,은 개발되어졌고 실험동물들과 치료연구에서 실험되어졌다. 그러나 그러한 연구들의 결과에 의해, 인간에게 상기 항체 반응이 모든 경우에 있어서 인간 사이토메갈로바이러스의 치료가 오래 지속되지 않았고 충분히 효과적이지 않았다고 입증되었다. 오로지 인간 사이토메갈로바이러스의 gB에 기반한 서브유닛 백신들의 제한된 효능에 관하여 제안된 원인들은 결과적으로 면역 반응들에서의 균주특이적 베리에이션들이다. 세포성 면역 반응의 부적절한 유도, 사용된 항원 - 형태-의존적인이라 생각되는 에피토프들 - 에는 구조적 제한들이 있다. 현재의 발명자들은 바이러스유사입자의 표면에 그들의 자연적 형태로서 존재하는 하나 이상의 막 폴리펩타이드 항원을 포함하여 구성되는 인간 사이토메갈로바이러스 백신의 발생은 중화 항체들 (예를 들어, 체액성 면역 반응을 통해)의 유도를 야기하고, 하나 이상의 구조 단백질 항원 (예를 들어, 외피 단백질 pp65)을 포함하여 구성되는 인간 사이토메갈로바이러스 백신은 도움 T 세포들 및 세포독성 T 세포들의 유도 (예를 들어, 세포매개 면역 반응을 통하여)를 야기한다고 인식되어진다. 중화 항체들은 일반적으로 바이러스성 막 단백질들, 특히 인간 사이토메갈로바이러스 당단백질들 gB 및 gH 에 대항하여 형성된다. TH 세포들은 예를 들어, 인간사이토메갈로바이러스 pp65 (ppUL83) 와 같은 바이러스의 외피 구조 단백질들에 의해 활성화된다, 게다가, pp65는 인간 사이토메갈로바이러스에 대항한 CTL 반응의 유도에 있어서 중요한 역할을 한다.

제공되는 바이러스유사입자들은 인간 사이토메갈로바이러스로부터 유래된 비상동성 항원들을 포함하여, 비상동성 항원이라면 어떠한 것이라도 포함하여 구성되어질 수 있다고 인식되어진다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따른 바이러스유사입자는 하나 이상의 인간 사이토메갈로바이러스 막 폴리펩타이드을 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따른 바이러스유사입자는 하나 이상의 인간 사이토메갈로바이러스 구조 폴리펩타이드를 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따른 바이러스유사입자는 하나 이상의 인간 사이토메갈로바이러스 막 폴리펩타이드 및 하나 이상의 인간 사이토메갈로바이러스 구조 폴리펩타이드를 포함하여 구성된다. 예시적이면 제한적이지 않은 HCMV 항원들의 목록은 아래에 규정된다.

gB - 당단백질 복합체 (gC) I

인간 사이토메갈로바이러스의 당단백질 복합체의 특성이 가장 잘 나타나는 것은 gB(gB;UL55) 이다. CMV-혈청반응양성의 개체들로부터의 혈청은 gB에 대한 항체들을 포함하고 회복기혈청(convalescent serum)에서의 중화 항체 반응의 70% 까지는 gB-특이적이라고 설명되어진다. (Marshall GS et al, 1994 J Med Virol 43:77-83).

예시적인 인간 사이토메갈로바이러스 gB 폴리펩타이드 아미노산 및 핵산 서열은 각각 하기의 SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:8 로 나타내어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 적절한 gB 폴리펩타이드는 알려진 인간 사이토메갈로바이러스 gB 폴리펩타이드와 상당히 상동적이다. 예를 들어, gB 폴리펩타이드는 표준형(wild-type) 또는 자연발생 gB 폴리펩타이드 (예를 들어, SEQ ID NO:7) 와 비교시 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 포함하는 변형된 인간 사이토메갈로바이러스 gB 폴리펩타이드일 수 있다. 따라서, 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gB 폴리펩타이드는 실질적으로 인간 사이토메갈로바이러스 gB 폴리펩타이드 (SEQ ID NO:7) 에 상동성이 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 인간 사이토메갈로바이러스 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:7에 대하여 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 상동성이 있는 아미노산 서열을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gB 폴리펩타이드는 인간 사이토메갈로바이러스 gB 폴리펩타이드는 (SEQ ID NO:7)에 실질적으로 상동성이 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gB 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:7에 대하여 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상이 동일한 아미노산 서열을 갖는다.

HCMV gB 아미노산 서열 (SEQ ID NO:7)

MESRIWCLVVCVNLCIVCLGAAVSSSSTRGTSATHSHHSSHTTSAAHSRSGSVSQRVTSS

QTVSHGVNETIYNTTLKYGDVVGVNTTKYPYRVCSMAQGTDLIRFERNIVCTSMKPINE

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RGSTWLYRETCNLNCMVTITTARSKYPYHFFATSTGDVVDISPFYNGTNRNASYFGENA

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YGQLGEDNEILLGNHRTEECQLPSLKIFIAGNSAYEYVDYLFKRMIDLSSISTVDSMIALD

IDPLENTDFRVLELYSQKELRSINVFDLEEIMREFNSYKQRVKYVEDKVVDPLPPYLKGL

DDLMSGLGAAGKAVGVAIGAVGGAVASVVEGVATFLKNPFGAFTIILVAIAVVIIIYLIY

TRQRRLCMQPLQNLFPYLVSADGTTVTSGNTKDTSLQAPPSYEESVYNSGRKGPGPPSS

DASTAAPPYTNEQAYQMLLALVRLDAEQRAQQNGTDSLDGQTGTQDKGQKPNLLDRL

RHRKNGYRHLKDSDEEENV* (SEQ ID NO:7) (TM 및 CD 는 밑줄되어있음)

HCMV gB 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:8)

ATGGAATCCAGGATCTGGTGCCTGGTAGTCTGCGTTAACTTGTGTATCGTCTGTCTG

GGTGCTGCGGTTTCCTCATCTTCTACTCGTGGAACTTCTGCTACTCACAGTCACCATT

CCTCTCATACGACGTCTGCTGCTCATTCTCGATCCGGTTCAGTCTCTCAACGCGTAAC

TTCTTCCCAAACGGTCAGCCATGGTGTTAACGAGACCATCTACAACACTACCCTCAA

GTACGGAGATGTGGTGGGGGTCAACACCACCAAGTACCCCTATCGCGTGTGTTCTAT

GGCACAGGGTACGGATCTTATTCGCTTTGAACGTAATATCGTCTGCACCTCGATGAA

GCCCATCAATGAAGACCTGGACGAGGGCATCATGGTGGTCTACAAACGCAACATCG

TCGCGCACACCTTTAAGGTACGAGTCTACCAGAAGGTTTTGACGTTTCGTCGTAGCT

ACGCTTACATCCACACCACTTATCTGCTGGGCAGCAACACGGAATACGTGGCGCCTC

CTATGTGGGAGATTCATCATATCAACAGTCACAGTCAGTGCTACAGTTCCTACAGCC

GCGTTATAGCAGGCACGGTTTTCGTGGCTTATCATAGGGACAGCTATGAAAACAAA

ACCATGCAATTAATGCCCGACGATTATTCCAACACCCACAGTACCCGTTACGTGACG

GTCAAGGATCAATGGCACAGCCGCGGCAGCACCTGGCTCTATCGTGAGACCTGTAA

TCTGAATTGTATGGTGACCATCACTACTGCGCGCTCCAAGTATCCCTATCATTTTTTC

GCAACTTCCACGGGTGATGTGGTTGACATTTCTCCTTTCTACAACGGAACTAATCGC

AATGCCAGCTATTTTGGAGAAAACGCCGACAAGTTTTTCATTTTTCCGAACTACACT

ATCGTCTCCGACTTTGGAAGACCGAATTCTGCGTTAGAGACCCACAGGTTGGTGGCT

TTTCTTGAACGTGCGGACTCAGTGATCTCCTGGGATATACAGGACGAGAAGAATGTT

ACTTGTCAACTCACTTTCTGGGAAGCCTCGGAACGCACCATTCGTTCCGAAGCCGAG

GACTCGTATCACTTTTCTTCTGCCAAAATGACCGCCACTTTCTTATCTAAGAAGCAAG

AGGTGAACATGTCCGACTCTGCGCTGGACTGTGTACGTGATGAGGCCATAAATAAGT

TACAGCAGATTTTCAATACTTCATACAATCAAACATATGAAAAATATGGAAACGTGT

CCGTCTTTGAAACCACTGGTGGTTTGGTGGTGTTCTGGCAAGGTATCAAGCAAAAAT

CTCTGGTGGAACTCGAACGTTTGGCCAACCGCTCCAGTCTGAATCTTACTCATAATA

GAACCAAAAGAAGTACAGATGGCAACAATGCAACTCATTTATCCAACATGGAGTCG

GTGCACAATCTGGTCTACGCCCAGCTGCAGTTCACCTATGACACGTTGCGCGGTTAC

ATCAACCGGGCGCTGGCGCAAATCGCAGAAGCCTGGTGTGTGGATCAACGGCGCAC

CCTAGAGGTCTTCAAGGAACTTAGCAAGATCAACCCGTCAGCTATTCTCTCGGCCAT

CTACAACAAACCGATTGCCGCGCGTTTCATGGGTGATGTCCTGGGTCTGGCCAGCTG

CGTGACCATTAACCAAACCAGCGTCAAGGTGCTGCGTGATATGAATGTGAAGGAAT

CGCCAGGACGCTGCTACTCACGACCAGTGGTCATCTTTAATTTCGCCAACAGCTCGT

ACGTGCAGTACGGTCAACTGGGCGAGGATAACGAAATCCTGTTGGGCAACCACCGC

ACTGAGGAATGTCAGCTTCCCAGCCTCAAGATCTTCATCGCCGGCAACTCGGCCTAC

GAGTACGTGGACTACCTCTTCAAACGCATGATTGACCTCAGCAGCATCTCCACCGTC

GACAGCATGATCGCCCTAGACATCGACCCGCTGGAAAACACCGACTTCAGGGTACT

GGAACTTTACTCGCAGAAAGAATTGCGTTCCATCAACGTTTTTGATCTCGAGGAGAT

CATGCGCGAGTTCAATTCGTATAAGCAGCGGGTAAAGTACGTGGAGGACAAGGTAG

TCGACCCGCTGCCGCCCTACCTCAAGGGTCTGGACGACCTCATGAGCGGCCTGGGCG

CCGCGGGAAAGGCCGTTGGCGTAGCCATTGGGGCCGTGGGTGGCGCGGTGGCCTCC

GTGGTCGAAGGCGTTGCCACCTTCCTCAAAAACCCCTTCGGAGCCTTCACCATCATC

CTCGTGGCCATAGCCGTCGTCATTATCATTTATTTGATCTATACTCGACAGCGGCGTC

TCTGCATGCAGCCGCTGCAGAACCTCTTTCCCTATCTGGTGTCCGCCGACGGGACCA

CCGTGACGTCGGGCAACACCAAAGACACGTCGTTACAGGCTCCGCCTTCCTACGAG

GAAAGTGTTTATAATTCTGGTCGCAAAGGACCGGGACCACCGTCGTCTGATGCATCC

ACGGCGGCTCCGCCTTACACCAACGAGCAGGCTTACCAGATGCTTCTGGCCCTGGTC

CGTCTGGACGCAGAGCAGCGAGCGCAGCAGAACGGTACAGATTCTTTGGACGGACA

GACTGGCACGCAGGACAAGGGACAGAAGCCCAACCTGCTAGACCGACTGCGACACC

GCAAAAACGGCTACCGACACTTGAAAGACTCCGACGAAGAAGAGAACGTCTGA

(SEQ ID NO: 8) (TM 및 CD 는 밑줄되어 있음)

코돈 최적화된 HCMV gB 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:9)

ATGGAGTCAAGGATTTGGTGCCTGGTCGTGTGCGTCAATCTGTGCATCGTCTGTCTG

GGGGCTGCCGTGTCATCAAGTTCTACAAGAGGCACCAGCGCCACCCACTCACACCA

TAGCTCCCATACCACATCCGCCGCTCACTCCCGGTCTGGCAGCGTGAGCCAGAGAGT

CACATCTAGTCAGACCGTGAGCCACGGGGTCAACGAGACCATCTACAATACTACCC

TGAAGTATGGCGACGTGGTCGGGGTGAACACAACTAAATACCCATATAGGGTCTGC

AGTATGGCCCAGGGCACTGATCTGATTAGATTCGAAAGGAACATCGTGTGCACCAG

CATGAAGCCCATTAATGAGGACCTGGATGAAGGGATCATGGTGGTCTACAAACGCA

ATATTGTGGCCCATACCTTCAAGGTGCGAGTCTATCAGAAAGTGCTGACATTTCGGA

GATCTTACGCATATATCCACACCACATACCTGCTGGGGAGTAACACCGAGTATGTGG

CTCCCCCTATGTGGGAAATTCACCATATCAATAGCCATTCCCAGTGCTACTCAAGCT

ACAGCAGAGTGATCGCTGGAACAGTGTTCGTCGCATACCACAGAGACTCTTATGAG

AACAAGACTATGCAGCTCATGCCCGACGATTACAGCAATACACATTCCACTAGATAT

GTGACAGTCAAAGATCAGTGGCACTCAAGGGGCAGCACCTGGCTGTACCGCGAGAC

ATGCAACCTGAATTGTATGGTGACTATCACTACCGCTAGATCCAAGTACCCCTATCA

CTTCTTTGCAACTTCCACCGGGGACGTGGTCGATATTTCTCCTTTCTACAACGGCACA

AACCGGAATGCATCTTATTTTGGGGAGAACGCCGACAAGTTCTTTATTTTCCCAAAT

TACACCATCGTGTCTGATTTTGGCAGACCCAACAGTGCCCTGGAGACACATCGACTG

GTGGCATTCCTGGAACGGGCCGACTCCGTCATTTCTTGGGACATCCAGGATGAGAAG

AATGTGACCTGCCAGCTCACCTTCTGGGAGGCCAGCGAACGCACCATCCGATCCGA

GGCTGAAGATTCTTACCACTTCTCCTCTGCCAAAATGACAGCTACTTTTCTGAGCAA

GAAACAGGAGGTGAACATGTCTGACAGTGCTCTGGATTGCGTGCGGGACGAAGCAA

TTAATAAGCTGCAGCAGATCTTCAACACATCATACAACCAGACTTACGAGAAGTAC

GGAAACGTGAGCGTCTTCGAAACAACTGGCGGGCTGGTGGTCTTTTGGCAGGGCAT

CAAGCAGAAATCCCTGGTGGAGCTGGAAAGGCTGGCCAATCGCAGTTCACTGAACC

TGACTCATAATCGGACCAAGAGATCTACAGACGGAAACAATGCCACACATCTGTCT

AACATGGAGAGTGTGCACAATCTGGTCTACGCTCAGCTCCAGTTTACCTACGACACA

CTGAGAGGCTATATTAACAGGGCACTGGCCCAGATCGCTGAAGCATGGTGCGTGGA

TCAGAGGCGCACCCTGGAGGTCTTCAAGGAACTGTCCAAAATCAACCCTTCAGCAA

TTCTGAGCGCCATCTACAATAAGCCAATTGCAGCCAGGTTTATGGGAGACGTGCTGG

GCCTGGCCAGTTGCGTCACTATCAACCAGACCTCAGTGAAGGTCCTGCGCGATATGA

ATGTGAAAGAGAGTCCCGGCAGATGCTATTCACGGCCTGTGGTCATCTTCAACTTTG

CTAATAGCTCCTACGTGCAGTATGGACAGCTCGGCGAGGACAACGAAATTCTGCTG

GGGAATCACAGGACCGAGGAATGTCAGCTCCCTAGCCTGAAGATTTTCATCGCTGG

AAACTCCGCATACGAGTATGTGGATTACCTGTTCAAGCGGATGATTGACCTGTCTAG

TATCTCCACTGTGGATTCTATGATTGCCCTGGACATCGATCCACTGGAAAATACCGA

CTTCAGGGTGCTGGAGCTGTATAGCCAGAAGGAACTGCGCTCCATCAACGTGTTCGA

TCTGGAGGAAATTATGAGAGAGTTTAATAGCTACAAGCAGAGGGTGAAATATGTCG

AAGATAAGGTGGTCGACCCCCTGCCACCCTACCTGAAAGGCCTGGACGATCTGATG

AGCGGGCTGGGAGCTGCAGGGAAGGCAGTGGGAGTCGCTATCGGCGCAGTGGGAG

GAGCCGTGGCCAGCGTGGTCGAGGGAGTGGCAACATTCCTGAAAAACCCCTTCGGG

GCCTTCACCATCATTCTGGTGGCAATCGCCGTGGTCATCATTATCTACCTGATCTACA

CAAGGCAGCGGCGGCTGTGCATGCAGCCTCTGCAGAACCTGTTTCCATACCTGGTGA

GCGCCGACGGGACCACAGTCACCTCAGGAAATACTAAGGATACCTCTCTGCAGGCC

CCCCCAAGTTACGAGGAATCAGTGTATAACAGCGGCAGAAAAGGACCAGGACCACC

TTCAAGCGACGCCAGCACTGCCGCTCCACCCTACACCAATGAGCAGGCCTATCAGAT

GCTGCTGGCTCTGGTGCGCCTGGATGCCGAACAGCGAGCTCAGCAGAACGGGACCG

ACTCCCTGGATGGACAGACCGGAACACAGGACAAGGGACAGAAACCTAATCTGCTG

GATCGGCTGCGGCACAGAAAAAACGGGTATAGGCACCTGAAGGACTCCGACGAAG

AAGAAAATGTCTAA (SEQ ID NO:9)(TM 및 CD 부분은 밑줄되어 있다)

몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따라 사용되는 gB 폴리펩타이드는 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인이 없고 및/또는 변형된 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인을 포함한다. gB 폴리펩타이드는 하나 이상의 추가적인 폴리펩타이드들 (예를 들어, 비상동성 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인 폴리펩타이드)을 선택적으로 포함한다. 몇몇 구체예들에 있어서, gB 폴리펩타이드는 비상동성 폴리펩타이드가 결합된 융합 단백질로서 발현된다. 상기 gB 폴리펩타이드는 gB 기능 및/또는 항원성의 변화없이 비상동성 폴리펩타이드에 연결되어서 융합 단백질을 형성할 수 있다. 예를 들어, 비상동성 폴리펩타이드를 코딩하는 서열은 예를 들어 gB 폴리펩타이드를 코딩하는 서열의 3' 말단에서 gB 폴리펩타이드를 코딩하는 서열로 이어 맞추어질 수 있다, 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 폴리펩타이드에 상기되는 코딩 서열은 gB 폴리펩타이드를 코딩하는 서열로 프레임에서 이어 맞추어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, gB 폴리펩타이드를 코딩하는 서열 및 비상동성 폴리펩타이드는 단일의 프로모터에 의해 발현될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 폴리펩타이드는 gB 폴리펩타이드의 C-말단에에 삽입(예를 들어, 융합) 될 수 있다.

몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 폴리펩타이드는 수포성 구내염 바이러스 (VSV)에서 발견되는 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인에 있거나 이들을 포함하여 구성될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인이 없는 gB는 VSV로부터 유래한 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인에 결합되어진다. 본원 발명에 따라 사용되는 예시적인 gB-VSV 융합 폴리펩타이드는 아래의 SEQ ID NO: 10 로 나타내어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 적절한 gB-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 알려진 gB 폴리펩타이드에 실질적으로 상동성이 있는 gB 폴리펩타이드의 전부 또는 일부분과 알려진 VSV 폴리펩타이드에 실질적으로 상동성이 있는 VSV 폴리펩타이드의 전부 또는 일부분을 포함한다. 예를 들어, gB-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 표준형 또는 자연발생 gB 및/또는 VSV 폴리펩타이드에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 포함할 수 있다. 따라서, 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gB-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO: 10과 실질적으로 상동성이 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gB-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO: 10과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 상동성 있는 아미노산을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gB-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO: 10과 실질적으로 동일하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gB-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO: 10과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 상동성 있는 아미노산 서열을 갖는다. 본 명세서에서 사용되는, "gB-G"는 HMCV gB - VSV TM/CTD 융합 단백질을 지칭한다.

HCMV gB-G 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 10)

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RGSTWLYRETCNLNCMVTITTARSKYPYHFFATSTGDVVDISPFYNGTNRNASYFGENA

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DDLMSGLGAAGKAVGVAIGAVGGAVASVVEGVATFLKNPFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHL

CIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK* (SEQ ID NO: 10) (TM 및 CTD 는 밑줄되어 있음)

HCMV gB - G 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO: 11)

ATGGAATCCAGGATCTGGTGCCTGGTAGTCTGCGTTAACTTGTGTATCGTCTGTCTG

GGTGCTGCGGTTTCCTCATCTTCTACTCGTGGAACTTCTGCTACTCACAGTCACCATT

CCTCTCATACGACGTCTGCTGCTCATTCTCGATCCGGTTCAGTCTCTCAACGCGTAAC

TTCTTCCCAAACGGTCAGCCATGGTGTTAACGAGACCATCTACAACACTACCCTCAA

GTACGGAGATGTGGTGGGGGTCAACACCACCAAGTACCCCTATCGCGTGTGTTCTAT

GGCACAGGGTACGGATCTTATTCGCTTTGAACGTAATATCGTCTGCACCTCGATGAA

GCCCATCAATGAAGACCTGGACGAGGGCATCATGGTGGTCTACAAACGCAACATCG

TCGCGCACACCTTTAAGGTACGAGTCTACCAGAAGGTTTTGACGTTTCGTCGTAGCT

ACGCTTACATCCACACCACTTATCTGCTGGGCAGCAACACGGAATACGTGGCGCCTC

CTATGTGGGAGATTCATCATATCAACAGTCACAGTCAGTGCTACAGTTCCTACAGCC

GCGTTATAGCAGGCACGGTTTTCGTGGCTTATCATAGGGACAGCTATGAAAACAAA

ACCATGCAATTAATGCCCGACGATTATTCCAACACCCACAGTACCCGTTACGTGACG

GTCAAGGATCAATGGCACAGCCGCGGCAGCACCTGGCTCTATCGTGAGACCTGTAA

TCTGAATTGTATGGTGACCATCACTACTGCGCGCTCCAAGTATCCCTATCATTTTTTC

GCAACTTCCACGGGTGATGTGGTTGACATTTCTCCTTTCTACAACGGAACTAATCGC

AATGCCAGCTATTTTGGAGAAAACGCCGACAAGTTTTTCATTTTTCCGAACTACACT

ATCGTCTCCGACTTTGGAAGACCGAATTCTGCGTTAGAGACCCACAGGTTGGTGGCT

TTTCTTGAACGTGCGGACTCAGTGATCTCCTGGGATATACAGGACGAGAAGAATGTT

ACTTGTCAACTCACTTTCTGGGAAGCCTCGGAACGCACCATTCGTTCCGAAGCCGAG

GACTCGTATCACTTTTCTTCTGCCAAAATGACCGCCACTTTCTTATCTAAGAAGCAAG

AGGTGAACATGTCCGACTCTGCGCTGGACTGTGTACGTGATGAGGCCATAAATAAGT

TACAGCAGATTTTCAATACTTCATACAATCAAACATATGAAAAATATGGAAACGTGT

CCGTCTTTGAAACCACTGGTGGTTTGGTGGTGTTCTGGCAAGGTATCAAGCAAAAAT

CTCTGGTGGAACTCGAACGTTTGGCCAACCGCTCCAGTCTGAATCTTACTCATAATA

GAACCAAAAGAAGTACAGATGGCAACAATGCAACTCATTTATCCAACATGGAGTCG

GTGCACAATCTGGTCTACGCCCAGCTGCAGTTCACCTATGACACGTTGCGCGGTTAC

ATCAACCGGGCGCTGGCGCAAATCGCAGAAGCCTGGTGTGTGGATCAACGGCGCAC

CCTAGAGGTCTTCAAGGAACTTAGCAAGATCAACCCGTCAGCTATTCTCTCGGCCAT

CTACAACAAACCGATTGCCGCGCGTTTCATGGGTGATGTCCTGGGTCTGGCCAGCTG

CGTGACCATTAACCAAACCAGCGTCAAGGTGCTGCGTGATATGAATGTGAAGGAAT

CGCCAGGACGCTGCTACTCACGACCAGTGGTCATCTTTAATTTCGCCAACAGCTCGT

ACGTGCAGTACGGTCAACTGGGCGAGGATAACGAAATCCTGTTGGGCAACCACCGC

ACTGAGGAATGTCAGCTTCCCAGCCTCAAGATCTTCATCGCCGGCAACTCGGCCTAC

GAGTACGTGGACTACCTCTTCAAACGCATGATTGACCTCAGCAGCATCTCCACCGTC

GACAGCATGATCGCCCTAGACATCGACCCGCTGGAAAACACCGACTTCAGGGTACT

GGAACTTTACTCGCAGAAAGAATTGCGTTCCATCAACGTTTTTGATCTCGAGGAGAT

CATGCGCGAGTTCAATTCGTATAAGCAGCGGGTAAAGTACGTGGAGGACAAGGTAG

TCGACCCGCTGCCGCCCTACCTCAAGGGTCTGGACGACCTCATGAGCGGCCTGGGCG

CCGCGGGAAAGGCCGTTGGCGTAGCCATTGGGGCCGTGGGTGGCGCGGTGGCCTCC

GTGGTCGAAGGCGTTGCCACCTTCCTCAAAAACCCCTTTTTCTTTATCATAGGGTTAA

TCATTGGACTATTCTTGGTTCTCCGAGTTGGTATCCATCTTTGCATTAAATTAAAGCA

CACCAAGAAAAGACAGATTTATACAGACATAGAGATGAACCGACTTGGAAAGTAA

(SEQ ID NO: 11) (TM 및 CTD 는 밑줄되어있음)

코돈 최적화된 HCMV gB - G 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO: 12)

ATGGAGTCAAGGATTTGGTGTCTGGTCGTCTGCGTCAACCTGTGCATTGTCTGCCTG

GGAGCCGCCGTCTCATCATCATCTACCCGAGGCACATCCGCCACTCACTCTCACCAT

AGCTCCCATACCACATCCGCCGCTCACTCAAGAAGCGGGTCCGTGTCTCAGAGGGTC

ACATCTAGTCAGACCGTGAGCCATGGAGTCAACGAGACAATCTACAATACTACCCT

GAAGTATGGAGACGTGGTCGGCGTGAACACAACTAAATACCCCTATAGGGTCTGCT

CTATGGCCCAGGGGACAGATCTGATCCGATTTGAACGGAACATCGTGTGCACTAGC

ATGAAGCCTATCAATGAGGACCTGGATGAAGGAATTATGGTGGTCTACAAACGAAA

TATCGTGGCCCATACTTTTAAGGTGAGAGTCTATCAGAAAGTGCTGACCTTCCGGAG

AAGCTACGCTTATATTCACACCACATACCTGCTGGGGTCCAACACCGAGTATGTGGC

ACCCCCTATGTGGGAAATCCACCATATTAATAGTCATTCACAGTGCTACTCAAGCTA

CAGCAGAGTGATCGCTGGAACCGTGTTCGTCGCATACCACAGAGACAGTTATGAGA

ACAAGACAATGCAGCTCATGCCCGACGATTACAGTAATACCCATTCAACAAGATAT

GTGACCGTCAAAGATCAGTGGCACTCTCGCGGCAGTACCTGGCTGTACCGAGAGAC

ATGCAACCTGAATTGTATGGTGACAATTACTACCGCCAGAAGCAAGTACCCTTATCA

CTTCTTTGCTACCTCAACAGGGGACGTGGTCGACATCAGCCCCTTCTACAACGGAAC

AAACCGGAATGCCTCCTATTTCGGCGAGAACGCTGACAAATTCTTTATCTTCCCCAA

CTACACTATCGTGAGCGATTTCGGCAGACCTAACAGTGCCCTGGAGACCCATCGGCT

GGTGGCATTTCTGGAAAGAGCCGACAGCGTGATCTCCTGGGACATTCAGGATGAGA

AGAATGTGACCTGCCAGCTCACCTTCTGGGAGGCCAGCGAAAGAACCATCAGGTCC

GAGGCAGAAGATTCTTACCACTTTTCCTCTGCAAAAATGACTGCCACCTTCCTGTCC

AAGAAACAGGAGGTGAACATGAGCGACTCCGCACTGGATTGCGTGCGGGACGAAGC

CATCAATAAGCTGCAGCAGATCTTCAACACATCTTACAACCAGACTTACGAGAAGTA

CGGCAACGTGAGTGTCTTTGAAACAACTGGCGGGCTGGTGGTCTTCTGGCAGGGGAT

CAAGCAGAAATCTCTGGTGGAGCTGGAACGGCTGGCCAATAGAAGTTCACTGAACC

TGACTCATAATCGCACCAAGCGATCCACAGACGGAAACAATGCAACTCATCTGAGC

AACATGGAGTCCGTGCACAATCTGGTCTACGCCCAGCTCCAGTTCACTTACGACACC

CTGCGAGGCTATATCAACCGGGCCCTGGCTCAGATTGCAGAAGCCTGGTGCGTGGAT

CAGAGGCGCACCCTGGAGGTCTTTAAGGAACTGAGCAAAATTAACCCATCTGCTATC

CTGAGTGCAATCTACAATAAGCCCATCGCAGCCAGGTTCATGGGGGACGTGCTGGG

ACTGGCCTCCTGCGTCACTATCAACCAGACCTCTGTGAAGGTCCTGCGCGATATGAA

TGTGAAAGAGAGTCCTGGCAGGTGTTATTCACGCCCAGTGGTCATCTTCAACTTCGC

TAATAGCTCCTACGTGCAGTATGGCCAGCTCGGGGAGGACAACGAAATCCTGCTGG

GAAATCACAGGACCGAGGAATGTCAGCTCCCAAGTCTGAAGATCTTTATTGCCGGC

AACTCAGCTTACGAGTATGTGGATTACCTGTTCAAACGCATGATCGACCTGTCTAGT

ATTTCAACAGTGGATAGCATGATCGCCCTGGACATTGATCCCCTGGAAAATACTGAC

TTCAGGGTGCTGGAGCTGTATAGCCAGAAGGAACTGCGCTCCATTAACGTGTTTGAT

CTGGAGGAAATCATGAGGGAGTTCAATTCCTACAAGCAGCGCGTGAAATATGTCGA

AGATAAGGTGGTCGACCCTCTGCCACCCTACCTGAAAGGCCTGGACGATCTGATGA

GCGGGCTGGGAGCTGCAGGCAAGGCAGTGGGAGTCGCCATCGGAGCTGTGGGAGGC

GCTGTCGCATCCGTGGTCGAGGGAGTGGCTACCTTTCTGAAGAACCCATTCTTTTTC

ATCATCGGCCTGATCATTGGGCTGTTCCTGGTGCTGAGAGTCGGCATCCACCTGTGC

ATTAAGCTGAAGCACACCAAGAAGAGGCAGATCTACACCGATATTGAAATGAACAG

ACTGGGCAAGTGA (SEQ ID NO: 12) (TM 및 CTD 밑줄되어있음)

gH - 당단백질 복합체 (gC) III

gc III 복합체는 당단백질들 gH (UL75), gL (UL115)과 gO (UL74)를 포함한다. (Urban M et al, 1996 J Gen Virol 77: 1537 - 47). gB와 같이, gH는 인간 병원성 헤르페스바이러스들에서 보존되고 인간 사이토메갈로바이러스의 복제 동안 다수의 중요한 역할을 한다. 인간 사이토메갈로바이러스는 두개의 gH/gL 복합체들을 인코딩 한다: gH/gL/gO과 gH/gL/UL128/UL130/UL131 복합체 (Wang D and Shenk T 2005 Proc Natl Acad USA 102: 18153-8). 인간 사이토메갈로바이러스가 내피세포들 및 상피세포들을 감염시키기 위해UL128/UL130/UL131를 포함하는 복합체가 필요한 반면, 일반적으로 인간 사이토메갈로바이러스가 섬유아세포(fibroblast)를 감염시키기 위해서는 gO를 포함하는 복합체로 충분하다, (Wang D and Shenk T 2005 J Virol 79 10330-8). 인간 사이토메갈로바이러스의 자연 감염은 보통 상피세포 진입에 특이한 중화 항체들의 높은 역가를 이끌어 내고, gH/gL/UL128/UL130/UL131 에피토프들에 대항한 항체들은 이러한 활성에 중요한 구성요소들을 포함하여 구성될 수 있다. (Macagno A et al., 2010 J Virol 84: 1005-13). gH에 대한 면역학 연구는 포유동물 세포에서 상기 단백질은 (gL과 같은) 정정 프로세싱 및 세포막으로의 수송을 위해 추가적인 폴리펩타이드들이 요구된다고 설명한다. (Urban M et al, 1996 J Gen Virol 77: 1537-1547). 단독으로 발현되면, gH는 오로지 세포질 내 및/또는 핵막에서 발견된다. (Cranage MP et al., 1988 J Virol 62: 1416-1422).

예시적인 인간 사이토메갈로바이러스 gH 폴리펩타이드 아미노산 및 핵산 서열은 아래의 SEQ ID NO: 13 및 SEQ ID NO: 14 로 각각 나타내어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 적절한 gH 폴리펩타이드는 실질적으로 알려진 인간 사이토메갈로바이러스 gH 폴리펩타이드와 상동성이 있다. 예를 들어, gH 폴리펩타이드는 표준형 또는 자연발생 gH 폴리펩타이드 (예를 들어, SEQ ID NO: 13)와 비교했을 때, 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 포함하는 인간 사이토메갈로바이러스 gH 폴리펩타이드일 수 있다. 따라서, 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gH 폴리펩타이드는 인간 사이토메갈로바이러스 gH 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 13)에 대해 실질적으로 상동성이 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 인간 사이토메갈로바이러스 gH 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: 13와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 상동성이 있는 아미노산 서열을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gH 폴리펩타이드는 인간 사이토메갈로바이러스 gH 폴리펩타이드 (SEQ ID NO: 13)와 실질적으로 동일하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gH 폴리펩타이드는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 동일하다 .

인간 사이토메갈로바이러스 gH 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 13)

MRPGLPSYLIVLAVCLLSHLLSSRYGAEAISEQLDKAFHLLLNTYGRPIRFLRENTTQCT YNSSLRNSTVVRENAISFNFFQSYNQYYVFHMPRCLFAGPLAEQFLNQVDLTETLERYQ QRLNTYALVSKDLASYRSFSQQLKAQDSLGEQPTTVPPPIDLSIPHVWMPPQTTPHGWT ESHTTSGLHRPHFNQTCILFDGHDLLFSTVTPCLHQGFYLIDELRYVKITLTEDFFVVTVSI

DDDTPMLLIFGHLPRVLFKAPYQRDNFILRQTEKHELLVLVKKDQLNRHSYLKDPDFLD

AALDFNYLDLSALLRNSFHRYAVDVLKSGRCQMLDRRTVEMAFAYALALFAAARQEE

AGAQVSVPRALDRQAALLQIQEFMITCLSQTPPRTTLLLYPTAVDLAKRALWTPNQITDI

TSLVRLVYILSKQNQQHLIPQWALRQIADFALKLHKTHLASFLSAFARQELYLMGSLVH

SMLVHTTERREIFIVETGLCSLAELSHFTQLLAHPHHEYLSDLYTPCSSSGRRDHSLERLT

RLFPDATVPTTVPAALSILSTMQPSTLETFPDLFCLPLGESFSALTVSEHVSYVVTNQYLI

KGISYPVSTTVVGQSLIITQTDSQTKCELTRNMHTTHSITAALNISLENCAFCQSALLEYD

DTQGVINIMYMHDSDDVLFALDPYNEVVVSSPRTHYLMLLKNGTVLEVTDVVVDATDS

RLLMMSVYALSAIIGIYLLYRMLKTC* (SEQ ID NO: 13) (TM 및 CTD는 밑줄되어있음)

인간 사이토메갈로바이러스 gH 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO: 14)

ATGCGGCCAGGCCTCCCCTCCTACCTCATCGTCCTCGCCGTCTGTCTCCTCAGCCACC

TACTTTCGTCACGATATGGCGCAGAAGCCATATCCGAACCGCTGGACAAAGCGTTTC

ACCTACTGCTCAACACCTACGGGAGACCCATCCGCTTCCTGCGTGAAAACACCACCC

AGTGTACCTACAATAGCAGCCTCCGTAACAGCACGGTCGTCAGGGAAAACGCCATC

AGTTTCAACTTTTTCCAAAGCTATAATCAATACTATGTATTCCATATGCCTCGATGTC

TTTTTGCGGGTCCTCTGGCGGAGCAGTTTCTGAACCAGGTAGATCTGACCGAAACCC

TGGAAAGATACCAACAGAGACTTAACACTTACGCGCTGGTATCCAAAGACCTGGCC

AGCTACCGATCTTTTTCGCAGCAGCTAAAGGCACAGGACAGCCTAGGTGAACAGCC

CACCACTGTGCCACCACCCATTGACCTGTCAATACCTCACGTTTGGATGCCACCGCA

AACCACTCCACACGGCTGGACAGAATCACATACCACCTCAGGACTACACCGACCAC

ACTTTAACCAGACCTGTATCCTCTTTGATGGACACGATCTACTATTCAGCACCGTCAC

ACCTTGTTTGCACCAAGGCTTTTACCTCATCGACGAACTACGTTACGTTAAAATAAC

ACTGACCGAGGACTTCTTCGTAGTTACGGTGTCCATAGACGACGACACACCCATGCT

GCTTATCTTCGGCCATCTTCCACGCGTACTCTTTAAAGCGCCCTATCAACGCGACAA

CTTTATACTACGACAAACTGAAAAACACGAGCTCCTGGTGCTAGTTAAGAAAGATC

AACTGAACCGTCACTCTTATCTCAAAGACCCGGACTTTCTTGACGCCGCACTTGACT

TCAACTACCTGGACCTCAGCGCACTACTACGTAACAGCTTTCACCGTTACGCCGTGG

ATGTACTCAAAAGCGGTCGATGTCAGATGCTGGACCGCCGCACGGTAGAAATGGCC

TTCGCCTACGCATTAGCACTGTTCGCAGCAGCCCGACAAGAAGAGGCCGGCGCCCA

AGTCTCCGTCCCACGGGCCCTAGACCGCCAGGCCGCACTCTTACAAATACAAGAATT

TATGATCACCTGCCTCTCACAAACACCACCACGCACCACGTTGCTGCTGTATCCCAC

GGCCGTGGACCTGGCCAAACGAGCCCTTTGGACACCGAATCAGATCACCGACATCA

CCAGCCTCGTACGCCTGGTCTACATACTCTCTAAACAGAATCAGCAACATCTCATCC

CCCAGTGGGCACTACGACAGATCGCCGACTTTGCCCTAAAACTACACAAAACGCAC

CTGGCCTCTTTTCTTTCAGCCTTCGCGCGTCAAGAACTCTACCTCATGGGCAGCCTCG

TCCACTCCATGCTAGTACATACGACGGAGAGACGCGAAATCTTCATCGTAGAAACG

GGCCTCTGTTCATTAGCCGAGCTATCACACTTTACGCAGTTGCTAGCTCATCCGCAC

CACGAATACCTCAGCGACCTGTACACACCCTGTTCCAGTAGCGGGCGACGCGATCA

CTCGCTCGAACGCCTCACACGTCTCTTCCCCGATGCCACCGTCCCCACTACCGTTCCC

GCCGCCCTCTCCATCCTATCTACCATGCAACCAAGCACGCTAGAAACCTTCCCCGAC

CTGTTTTGTCTGCCGCTCGGCGAATCCTTCTCCGCGCTGACCGTCTCCGAACACGTCA

GTTATGTCGTAACAAACCAGTACCTGATCAAAGGTATCTCCTACCCTGTCTCCACCA

CCGTCGTAGGCCAGAGCCTCATCATCACCCAGACGGACAGTCAAACTAAATGCGAA

CTGACGCGCAACATGCATACCACACACAGCATCACAGCGGCGCTCAACATTTCCCTA

GAAAACTGCGCCTTTTGCCAAAGCGCCCTACTAGAATACGACGACACGCAAGGCGT

CATCAACATCATGTACATGCACGACTCGGACGACGTCCTTTTCGCCCTGGATCCCTA CAACGAAGTGGTGGTCTCATCTCCGCGAACTCACTACCTCATGCTTTTGAAAAACGG TACGGTCCTAGAAGTAACTGACGTCGTCGTGGACGCTACCGACAGTCGTCTCCTCAT GATGTCCGTCTACGCGCTATCGGCCATCATCGGCATCTATCTGCTCTACCGCATGCTC

AAGACATGCTGA (SEQ ID NO: 14) (TM 및 CTD 는 밑줄되어있음)

코돈 최적화된 인간 사이토메갈로바이러스 gH 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO: 15)

ATGAGACCTGGACTGCCTTCTTATCTGATTGTGCTGGCCGTCTGCCTGCTGTCACATC

TGCTGAGTTCACGCTATGGGGCTGAGGCTATCTCCGAGCCACTGGACAAGGCTTTTC

ACCTGCTGCTGAACACCTACGGGAGACCCATTAGGTTCCTGCGCGAGAATACCACA

CAGTGCACATATAACAGCTCCCTGCGGAACAGCACTGTGGTCCGCGAAAACGCCAT

CTCTTTTAATTTCTTTCAGAGTTACAACCAGTACTACGTGTTCCATATGCCACGCTGT

CTGTTTGCAGGACCCCTGGCCGAGCAGTTCCTGAACCAGGTGGACCTGACCGAGAC

ACTGGAAAGATACCAGCAGAGGCTGAATACCTATGCCCTGGTGAGTAAGGATCTGG

CTTCATATCGGTCTTTCAGTCAGCAGCTCAAGGCCCAGGACTCACTGGGCGAGCAGC

CTACTACCGTGCCCCCTCCAATCGATCTGAGCATTCCACACGTCTGGATGCCCCCTC

AGACAACTCCCCACGGCTGGACCGAAAGCCATACCACATCCGGGCTGCACAGACCC

CATTTCAACCAGACATGCATCCTGTTTGATGGGCACGACCTGCTGTTCAGCACTGTG

ACCCCTTGTCTGCATCAGGGATTCTACCTGATCGATGAGCTGAGATATGTGAAAATT

ACACTGACTGAAGACTTCTTTGTGGTCACCGTGAGCATCGACGATGACACACCAATG

CTGCTGATTTTTGGACACCTGCCCCGGGTGCTGTTCAAGGCCCCCTACCAGCGAGAC

AACTTTATTCTGCGGCAGACCGAGAAACACGAACTGCTGGTGCTGGTCAAGAAAGA

TCAGCTCAACAGGCATAGCTATCTGAAGGACCCCGACTTTCTGGATGCCGCTCTGGA

CTTCAACTACCTGGACCTGTCAGCACTGCTGCGGAATAGCTTCCACAGATATGCCGT

GGATGTCCTGAAATCCGGAAGATGCCAGATGCTGGACCGGAGAACCGTGGAGATG

GCATTTGCCTACGCTCTGGCACTGTTCGCAGCCGCTAGGCAGGAGGAAGCAGGCGC

TCAGGTGTCCGTCCCTCGCGCACTGGATCGACAGGCAGCCCTGCTGCAGATCCAGGA

GTTCATGATTACCTGTCTGTCTCAGACACCACCCAGAACTACCCTGCTGCTGTACCC

CACTGCCGTGGACCTGGCTAAGAGGGCACTGTGGACCCCTAACCAGATCACTGATA

TTACCTCTCTGGTGCGCCTGGTCTATATCCTGAGTAAACAGAATCAGCAGCACCTGA

TCCCACAGTGGGCCCTGCGACAGATTGCCGACTTCGCTCTGAAGCTGCACAAAACCC

ATCTGGCTTCCTTCCTGTCTGCATTTGCCCGCCAGGAGCTGTACCTGATGGGCTCTCT

GGTGCACAGTATGCTGGTCCATACAACTGAGAGGCGCGAAATCTTTATTGTGGAGAC

AGGGCTGTGCAGCCTGGCTGAACTGTCCCACTTCACTCAGCTCCTGGCCCATCCTCA

CCATGAGTACCTGTCCGATCTGTATACCCCATGTTCTAGTTCAGGCCGACGGGACCA

CTCTCTGGAACGACTGACTCGGCTGTTTCCTGATGCAACCGTGCCTACCACCGTGCC

CGCCGCCCTGAGTATCCTGTCAACAATGCAGCCAAGCACACTGGAGACTTTCCCCGA

CCTGTTTTGCCTGCCTCTGGGGGAGTCATTCAGCGCCCTGACCGTGTCAGAACATGT

CAGCTACGTGGTCACAAACCAGTATCTGATCAAGGGAATTTCCTACCCCGTGTCTAC

TACCGTGGTCGGCCAGAGTCTGATCATTACCCAGACAGATTCACAGACTAAATGTGA

GCTGACCCGGAATATGCACACAACTCATAGCATCACCGCCGCTCTGAACATTTCCCT

GGAGAATTGCGCTTTTTGTCAGAGTGCACTGCTGGAATACGATGACACACAGGGCGT

GATCAACATTATGTATATGCACGATAGCGATGACGTGCTGTTCGCTCTGGACCCCTA

CAACGAGGTGGTCGTGAGCTCCCCTCGCACTCATTATCTGATGCTGCTGAAGAATGG

AACAGTGCTGGAAGTCACTGATGTCGTGGTCGATGCCACAGACTCCCGGCTGCTGAT

GATGTCTGTGTACGCACTGTCCGCCATCATCGGCATCTATCTGCTGTATCGAATGCTG

AAAACCTGTTGA (SEQ ID NO: 15) (TM 및 CTD 는 밑줄침)

몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 따라 사용되는 gH 폴리펩타이드는 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인이 없고 및/또는 변형된 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인을 포함한다. gH 폴리펩타이드는 하나 이상의 추가적인 폴리펩타이드들 (예를 들어, 비상동성 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인 폴리펩타이드)을 선택적으로 포함한다. 몇몇 구체예들에 있어서, gH 폴리펩타이드는 비상동성 폴리펩타이드가 있는 융합 단백질로 발현된다. 상기 gH 폴리펩타이드는 비상동성 폴리펩타이드에 연결되어 gH 기능성 및/또는 항원성의 변형 없이 융합 단백질을 생성할 수 있다. 예를 들어, 비상동성 폴리펩타이드를 코딩하는 서열은 예를 들어, gH 폴리펩타이드 코딩하는 서열의 3' 말단에서 gH 폴리펩타이드를 코딩하는 서열로 이어 맞추어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 폴리펩타이드를 코딩하는 서열은 프레임에서 gH 폴리펩타이드를 코딩하는 서열로 이어 맞추어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, gH 폴리펩타이드를-코딩하는 서열 및 비상동성 폴리펩타이드는 단일의 프로모터에 의해 발현될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 폴리펩타이드는 gH 폴리펩타이드의 C-말단에 삽입(예를 들어, 융합) 되어질 수 있다.

몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 폴리펩타이드는 수포성 구내염 바이러스 (VSV)에서 발견되는 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인에 있거나 이를 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인 없는 gH는 VSV의 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인에 융합된다. 본원 발명에 따라 사용되는 예시적인 gH-VSV 융합 폴리펩타이드는 아래의 SEQ ID NO: 16로 나타내어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 적절한 gH-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 알려진 인간 사이토메갈로바이러스 gH에 실질적으로 상동성이 있는 gH 폴리펩타이드의 전부 또는 일부분을 포함한다. VSV 폴리펩타이드의 폴리펩타이드 및 전부 또는 일부분은 실질적으로 알려진 VSV 폴리펩타이드와 상동성이 있다. 예를 들어, gH - VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 표준형 또는 자연발생 gH 및/또는 VSV 폴리펩타이드와 비교했을 때, 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 포함할 수 있다. 따라서, 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gH-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO: 16에 대해 실질적으로 상동성을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gH-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 16와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 상동성을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gH-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 실질적으로 SEQ ID NO: 16와 동일하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 gH-VSV 폴리펩타이드 융합 단백질은 SEQ ID NO: 16와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 상동성이 있는 아미노산 서열을 갖는다. 본 명세서에서 사용되는, "gH-G"는 인간 사이토메갈로바이러스 gH -VSV TM/CTD 융합 단백질을 의미한다.

인간 사이토메갈로바이러스 gH - G 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 16)

MRPGLPSYLIVLAVCLLSHLLSSRYGAEAISEQLDKAFHLLLNTYGRPIRFLRENTTQCT

YNSSLRNSTVVRENAISFNFFQSYNQYYVFHMPRCLFAGPLAEQFLNQVDLTETLERYQ

QRLNTYALVSKDLASYRSFSQQLKAQDSLGEQPTTVPPPIDLSIPHVWMPPQTTPHGWT

ESHTTSGLHRPHFNQTCILFDGHDLLFSTVTPCLHQGFYLIDELRYVKITLTEDFFVVTVSI

DDDTPMLLIFGHLPRVLFKAPYQRDNFILRQTEKHELLVLVKKDQLNRHSYLKDPDFLD

AALDFNYLDLSALLRNSFHRYAVDVLKSGRCQMLDRRTVEMAFAYALALFAAARQEE

AGAQVSVPRALDRQAALLQIQEFMITCLSQTPPRTTLLLYPTAVDLAKRALWTPNQITDI

TSLVRLVYILSKQNQQHLIPQWALRQIADFALKLHKTHLASFLSAFARQELYLMGSLVH

SMLVHTTERREIFIVETGLCSLAELSHFTQLLAHPHHEYLSDLYTPCSSSGRRDHSLERLT

RLFPDATVPTTVPAALSILSTMQPSTLETFPDLFCLPLGESFSALTVSEHVSYVVTNQYLI

KGISYPVSTTVVGQSLIITQTDSQTKCELTRNMHTTHSITAALNISLENCAFCQSALLEYD

DTQGVINIMYMHDSDDVLFALDPYNEVVVSSPRTHYLMLLKNGTVLEVTDVVVDATDS

RFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK* (SEQ ID NO: 16) (TM 및

CTD 는 밑줄되어있음)

인간 사이토메갈로바이러스 gH - G 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO: 17)

ATGCGGCCAGGCCTCCCCTCCTACCTCATCGTCCTCGCCGTCTGTCTCCTCAGCCACC

TACTTTCGTCACGATATGGCGCAGAAGCCATATCCGAACCGCTGGACAAAGCGTTTC

ACCTACTGCTCAACACCTACGGGAGACCCATCCGCTTCCTGCGTGAAAACACCACCC

AGTGTACCTACAATAGCAGCCTCCGTAACAGCACGGTCGTCAGGGAAAACGCCATC

AGTTTCAACTTTTTCCAAAGCTATAATCAATACTATGTATTCCATATGCCTCGATGTC

TTTTTGCGGGTCCTCTGGCGGAGCAGTTTCTGAACCAGGTAGATCTGACCGAAACCC

TGGAAAGATACCAACAGAGACTTAACACTTACGCGCTGGTATCCAAAGACCTGGCC

AGCTACCGATCTTTTTCGCAGCAGCTAAAGGCACAGGACAGCCTAGGTGAACAGCC

CACCACTGTGCCACCACCCATTGACCTGTCAATACCTCACGTTTGGATGCCACCGCA

AACCACTCCACACGGCTGGACAGAATCACATACCACCTCAGGACTACACCGACCAC

ACTTTAACCAGACCTGTATCCTCTTTGATGGACACGATCTACTATTCAGCACCGTCAC

ACCTTGTTTGCACCAAGGCTTTTACCTCATCGACGAACTACGTTACGTTAAAATAAC

ACTGACCGAGGACTTCTTCGTAGTTACGGTGTCCATAGACGACGACACACCCATGCT

GCTTATCTTCGGCCATCTTCCACGCGTACTCTTTAAAGCGCCCTATCAACGCGACAA

CTTTATACTACGACAAACTGAAAAACACGAGCTCCTGGTGCTAGTTAAGAAAGATC

AACTGAACCGTCACTCTTATCTCAAAGACCCGGACTTTCTTGACGCCGCACTTGACT

TCAACTACCTGGACCTCAGCGCACTACTACGTAACAGCTTTCACCGTTACGCCGTGG

ATGTACTCAAAAGCGGTCGATGTCAGATGCTGGACCGCCGCACGGTAGAAATGGCC

TTCGCCTACGCATTAGCACTGTTCGCAGCAGCCCGACAAGAAGAGGCCGGCGCCCA

AGTCTCCGTCCCACGGGCCCTAGACCGCCAGGCCGCACTCTTACAAATACAAGAATT

TATGATCACCTGCCTCTCACAAACACCACCACGCACCACGTTGCTGCTGTATCCCAC

GGCCGTGGACCTGGCCAAACGAGCCCTTTGGACACCGAATCAGATCACCGACATCA

CCAGCCTCGTACGCCTGGTCTACATACTCTCTAAACAGAATCAGCAACATCTCATCC

CCCAGTGGGCACTACGACAGATCGCCGACTTTGCCCTAAAACTACACAAAACGCAC

CTGGCCTCTTTTCTTTCAGCCTTCGCGCGTCAAGAACTCTACCTCATGGGCAGCCTCG

TCCACTCCATGCTAGTACATACGACGGAGAGACGCGAAATCTTCATCGTAGAAACG

GGCCTCTGTTCATTAGCCGAGCTATCACACTTTACGCAGTTGCTAGCTCATCCGCAC

CACGAATACCTCAGCGACCTGTACACACCCTGTTCCAGTAGCGGGCGACGCGATCA

CTCGCTCGAACGCCTCACACGTCTCTTCCCCGATGCCACCGTCCCCACTACCGTTCCC

GCCGCCCTCTCCATCCTATCTACCATGCAACCAAGCACGCTAGAAACCTTCCCCGAC

CTGTTTTGTCTGCCGCTCGGCGAATCCTTCTCCGCGCTGACCGTCTCCGAACACGTCA

GTTATGTCGTAACAAACCAGTACCTGATCAAAGGTATCTCCTACCCTGTCTCCACCA

CCGTCGTAGGCCAGAGCCTCATCATCACCCAGACGGACAGTCAAACTAAATGCGAA

CTGACGCGCAACATGCATACCACACACAGCATCACAGCGGCGCTCAACATTTCCCTA

GAAAACTGCGCCTTTTGCCAAAGCGCCCTACTAGAATACGACGACACGCAAGGCGT

CATCAACATCATGTACATGCACGACTCGGACGACGTCCTTTTCGCCCTGGATCCCTA

CAACGAAGTGGTGGTCTCATCTCCGCGAACTCACTACCTCATGCTTTTGAAAAACGG

TACGGTCCTAGAAGTAACTGACGTCGTCGTGGACGCTACCGACAGTCGTTTTTTCTTT

ATCATAGGGTTAATCATTGGACTATTCTTGGTTCTCCGAGTTGGTATCCATCTTTGCA

TTAAATTAAAGCACACCAAGAAAAGACAGATTTATACAGACATAGAGATGAACCGA

CTTGGAAAGTAA (SEQ ID NO: 17) (TM 및 CTD 는 밑줄침)

코돈 최적화된 인간 사이토메갈로바이러스 gH - G 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO: 18)

ATGCGACCCGGACTGCCAAGCTACCTGATTGTCCTGGCTGTCTGTCTGCTGTCACAC

CTGCTGAGTTCAAGATATGGGGCCGAAGCCATCAGCGAGCCACTGGACAAGGCTTT

CCACCTGCTGCTGAACACCTACGGCAGACCCATTAGGTTTCTGCGCGAGAATACCAC

ACAGTGCACATATAACAGCTCCCTGAGGAATAGCACTGTGGTCCGCGAAAACGCCA

TCTCTTTCAATTTCTTTCAGAGTTACAACCAGTACTACGTGTTCCATATGCCACGCTG

TCTGTTCGCAGGACCCCTGGCCGAGCAGTTTCTGAACCAGGTGGACCTGACCGAGAC

ACTGGAAAGATACCAGCAGAGGCTGAATACCTATGCCCTGGTGAGTAAGGATCTGG

CTTCATATCGGTCTTTCAGTCAGCAGCTCAAGGCCCAGGACTCTCTGGGAGAGCAGC

CTACTACCGTGCCCCCTCCAATCGATCTGAGTATTCCACACGTCTGGATGCCCCCTC

AGACAACTCCCCACGGATGGACCGAAAGCCATACCACATCCGGCCTGCACAGACCC

CACTTCAACCAGACATGCATCCTGTTCGATGGCCACGACCTGCTGTTTTCCACTGTG

ACCCCTTGTCTGCATCAGGGGTTCTACCTGATCGATGAGCTGAGATATGTGAAGATT

ACACTGACTGAAGACTTCTTTGTGGTCACCGTGTCTATCGACGATGACACACCAATG

CTGCTGATTTTCGGACACCTGCCCCGGGTGCTGTTCAAGGCCCCCTACCAGCGAGAC

AACTTCATCCTGCGGCAGACCGAGAAACACGAACTGCTGGTGCTGGTCAAGAAAGA

TCAGCTCAACCGGCATTCCTATCTGAAGGACCCCGACTTCCTGGATGCCGCTCTGGA

CTTTAACTACCTGGACCTGTCAGCACTGCTGCGGAATAGCTTTCACAGATATGCCGT

GGATGTCCTGAAATCTGGGCGCTGCCAGATGCTGGACCGGAGAACCGTGGAGATGG

CATTCGCCTACGCTCTGGCACTGTTTGCAGCCGCTCGGCAGGAGGAAGCAGGAGCTC

AGGTGAGTGTCCCTCGCGCACTGGATCGACAGGCAGCCCTGCTGCAGATCCAGGAG

TTCATGATTACCTGTCTGAGCCAGACACCACCCAGAACTACCCTGCTGCTGTACCCC

ACTGCCGTGGACCTGGCTAAGAGGGCACTGTGGACCCCTAACCAGATCACTGATATT

ACCAGCCTGGTGAGACTGGTCTATATCCTGTCCAAACAGAATCAGCAGCACCTGATC

CCACAGTGGGCCCTGAGGCAGATTGCCGACTTTGCTCTGAAGCTGCACAAAACCCAT

CTGGCTTCCTTTCTGTCTGCATTCGCCAGACAGGAGCTGTACCTGATGGGATCTCTGG

TGCACAGTATGCTGGTCCATACAACTGAGAGGCGCGAAATCTTCATTGTGGAGACA

GGCCTGTGCAGCCTGGCTGAACTGTCCCACTTTACTCAGCTCCTGGCCCATCCTCAC

CATGAGTACCTGTCAGATCTGTATACCCCATGTTCTAGTTCAGGACGACGGGACCAC

AGCCTGGAACGACTGACTCGGCTGTTCCCTGATGCAACCGTGCCTACCACCGTGCCC

GCCGCCCTGAGTATCCTGTCAACAATGCAGCCAAGCACACTGGAGACTTTTCCCGAC

CTGTTCTGCCTGCCTCTGGGCGAGAGCTTCAGCGCCCTGACCGTGAGCGAACATGTC

AGCTACGTGGTCACAAACCAGTATCTGATCAAGGGGATTTCCTACCCCGTGTCTACT

ACCGTGGTCGGACAGTCCCTGATCATTACCCAGACAGATTCTCAGACTAAATGTGAG

CTGACCAGAAATATGCACACAACTCATAGTATCACCGCCGCTCTGAACATTTCACTG

GAGAATTGCGCTTTCTGTCAGTCCGCACTGCTGGAATACGATGACACACAGGGCGTG

ATCAACATTATGTATATGCACGATTCTGATGACGTGCTGTTTGCTCTGGACCCCTACA

ACGAGGTGGTCGTGAGCTCCCCCAGAACTCATTATCTGATGCTGCTGAAGAATGGCA

CAGTGCTGGAAGTCACTGATGTCGTGGTCGATGCCACAGACTCCCGCTTCTTTTTCAT

CATTGGCCTGATCATTGGGCTGTTCCTGGTGCTGCGAGTCGGCATCCACCTGTGCAT

CAAGCTGAAGCATACAAAGAAGAGACAGATCTACACCGATATTGAAATGAACAGGC

TGGGCAAATGA (SEQ ID NO: 18) (TM 및 CTD 는 밑줄침)

몇몇 구체예들에 있어서, gH 폴리펩타이드는 gB에서 발견되는 트렌스멤브레인 도메인 및/또는 세포질 도메인을 포함한다. 본원 발명에 따라 사용되는 인간 사이토메갈로바이러스 gH - HCMV gB TM/CTD 융합 폴리펩타이드를 인코딩하는 예시적인 뉴클레오타이드는 아래의 SEQ ID NO:20로 나타내어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 인간 사이토메갈로바이러스 gH - HCMV gB TM/CTD 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:20에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드에 대해 실질적으로 상동성을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 인간 사이토메갈로바이러스 gH - HCMV gB TM/CTD 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:20에 의해 인코딩된 폴리펩타이드와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 상동성이 있는 아미노산 서열을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 인간 사이토메갈로바이러스 gH - HCMV gB TM/CTD 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:20에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드와 실질적으로 동일하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명에 적합한 인간 사이토메갈로바이러스 gH - HCMV gB TM/CTD 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:20에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로 상동성이 있는 아미노산 서열을 갖는다.

인간 사이토메갈로바이러스 gH - HCMV gB TM/CTD 뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO:20)

ATGCGGCCAGGCCTCCCCTCCTACCTCATCGTCCTCGCCGTCTGTCTCCTCAGCCACC

TACTTTCGTCACGATATGGCGCAGAAGCCATATCCGAACCGCTGGACAAAGCGTTTC

ACCTACTGCTCAACACCTACGGGAGACCCATCCGCTTCCTGCGTGAAAACACCACCC

AGTGTACCTACAATAGCAGCCTCCGTAACAGCACGGTCGTCAGGGAAAACGCCATC

AGTTTCAACTTTTTCCAAAGCTATAATCAATACTATGTATTCCATATGCCTCGATGTC

TTTTTGCGGGTCCTCTGGCGGAGCAGTTTCTGAACCAGGTAGATCTGACCGAAACCC

TGGAAAGATACCAACAGAGACTTAACACTTACGCGCTGGTATCCAAAGACCTGGCC

AGCTACCGATCTTTTTCGCAGCAGCTAAAGGCACAGGACAGCCTAGGTGAACAGCC

CACCACTGTGCCACCACCCATTGACCTGTCAATACCTCACGTTTGGATGCCACCGCA

AACCACTCCACACGGCTGGACAGAATCACATACCACCTCAGGACTACACCGACCAC

ACTTTAACCAGACCTGTATCCTCTTTGATGGACACGATCTACTATTCAGCACCGTCAC

ACCTTGTTTGCACCAAGGCTTTTACCTCATCGACGAACTACGTTACGTTAAAATAAC

ACTGACCGAGGACTTCTTCGTAGTTACGGTGTCCATAGACGACGACACACCCATGCT

GCTTATCTTCGGCCATCTTCCACGCGTACTCTTTAAAGCGCCCTATCAACGCGACAA

CTTTATACTACGACAAACTGAAAAACACGAGCTCCTGGTGCTAGTTAAGAAAGATC

AACTGAACCGTCACTCTTATCTCAAAGACCCGGACTTTCTTGACGCCGCACTTGACT

TCAACTACCTGGACCTCAGCGCACTACTACGTAACAGCTTTCACCGTTACGCCGTGG

ATGTACTCAAAAGCGGTCGATGTCAGATGCTGGACCGCCGCACGGTAGAAATGGCC

TTCGCCTACGCATTAGCACTGTTCGCAGCAGCCCGACAAGAAGAGGCCGGCGCCCA

AGTCTCCGTCCCACGGGCCCTAGACCGCCAGGCCGCACTCTTACAAATACAAGAATT

TATGATCACCTGCCTCTCACAAACACCACCACGCACCACGTTGCTGCTGTATCCCAC

GGCCGTGGACCTGGCCAAACGAGCCCTTTGGACACCGAATCAGATCACCGACATCA

CCAGCCTCGTACGCCTGGTCTACATACTCTCTAAACAGAATCAGCAACATCTCATCC

CCCAGTGGGCACTACGACAGATCGCCGACTTTGCCCTAAAACTACACAAAACGCAC

CTGGCCTCTTTTCTTTCAGCCTTCGCGCGTCAAGAACTCTACCTCATGGGCAGCCTCG

TCCACTCCATGCTAGTACATACGACGGAGAGACGCGAAATCTTCATCGTAGAAACG

GGCCTCTGTTCATTAGCCGAGCTATCACACTTTACGCAGTTGCTAGCTCATCCGCAC

CACGAATACCTCAGCGACCTGTACACACCCTGTTCCAGTAGCGGGCGACGCGATCA

CTCGCTCGAACGCCTCACACGTCTCTTCCCCGATGCCACCGTCCCCACTACCGTTCCC

GCCGCCCTCTCCATCCTATCTACCATGCAACCAAGCACGCTAGAAACCTTCCCCGAC

CTGTTTTGTCTGCCGCTCGGCGAATCCTTCTCCGCGCTGACCGTCTCCGAACACGTCA

GTTATGTCGTAACAAACCAGTACCTGATCAAAGGTATCTCCTACCCTGTCTCCACCA

CCGTCGTAGGCCAGAGCCTCATCATCACCCAGACGGACAGTCAAACTAAATGCGAA

CTGACGCGCAACATGCATACCACACACAGCATCACAGCGGCGCTCAACATTTCCCTA

GAAAACTGCGCCTTTTGCCAAAGCGCCCTACTAGAATACGACGACACGCAAGGCGT

CATCAACATCATGTACATGCACGACTCGGACGACGTCCTTTTCGCCCTGGATCCCTA

CAACGAAGTGGTGGTCTCATCTCCGCGAACTCACTACCTCATGCTTTTGAAAAACGG

TACGGTCCTAGAAGTAACTGACGTCGTCGTGGACGCTACCGACAGTCGTTTCGGAG

CCTTCACCATCATCCTCGTGGCCATAGCCGTCGTCATTATCATTTATTTGATCT

ATACTCGACAGCGGCGTCTCTGCATGCAGCCGCTGCAGAACCTCTTTCCCTATC

TGGTGTCCGCCGACGGGACCACCGTGACGTCGGGCAACACCAAAGACACGTCG

TTACAGGCTCCGCCTTCCTACGAGGAAAGTGTTTATAATTCTGGTCGCAAAGGA

CCGGGACCACCGTCGTCTGATGCATCCACGGCGGCTCCGCCTTACACCAACGA

GCAGGCTTACCAGATGCTTCTGGCCCTGGTCCGTCTGGACGCAGAGCAGCGAG

CGCAGCAGAACGGTACAGATTCTTTGGACGGACAGACTGGCACGCAGGACAAG

GGACAGAAGCCCAACCTGCTAGACCGACTGCGACACCGCAAAAACGGCTACCG

ACACTTGAAAGACTCCGACGAAGAAGAGAACGTCTGA (SEQ ID NO:20)

(gH 펩타이드 시그널은 밑줄침; gB TM-CTD 는 굵게 표시함)

기타 [gN 및 gM-당단백질 복합체(gC) II을 포함]

gB 및 gH에 추가적으로, 다른 외피 당단백질들은 백신 생산에 유용할 수 있다. 예를 들어, gN (UL73) 및 gM (UL100)를 포함하는 gcll 복합체가 특히 흥미롭다. HCMV 비리온들의 단백체 분석은 gcll가 바이러스 입자들에서가장 많이 발현되는 당단백질 설명하며, 방어면역에 있어서 그것의 잠재적 중요성을 강조한다. (Varnum SM et al., 2005 Human gene Ther 16: 1143-50). 인간 사이토메갈로바이러스 감염은 혈청반응양성의 개체들 대다수에서의 gcll-특이적인 항체 반응을 이끌어 내고 (Shimamura M et al., 2006 J Virol 80:4591-600), gcll 항원들 gM 및 gN을 포함하는 DNA 백신들은 토끼들과 쥐들에서 중화 항체 반응들을 이끌어 낸다고 보여진다. (Shen S et al., 2007 Vaccine 25:3319-27).

pp65

인간 사이토메갈로바이러스에 대한 세포성 면역 반응은 대다수가 막과 핵단백질체캡시드(nucleocapsid) 사이에 있는 바이러스성 외피에서 발견되는 여러 바이러스성 항원들에 대해, MHC class II 로 제한된 CD4+ 및 MHC class I 로 제한된, 세포독성의 CD8+ T 세포 반응들을 포함한다. 예를 들어, 인간사이토메갈로(HCMV) pp65 단백질 (UL83)은 인간 사이토메갈로바이러스 감염에 뒤따르는 실질적인 CD8+ T 세포 반응을 이끌어 내는 것으로 보여진다. (McLaughlin-Taylor E 1994 J Med Virol 43: 103-10). 이 65 kD바이러스성 단백질은 가장 많이 발현되는 인간 사이토메갈로바이러스 구조 단백질들 중 하나이다. 예시적인 pp65 서열들은 본원 명세서에서 설명되어진다.

기타 (IE1, ppl50을 포함)

T 세포 반응들을 이끌어 내는 다른 단백질들은 (IE1) 단백질 (UL123) 및 ppl50 (UL32)를 포함한다. (Gibson L et al, 2004 J Immunol 172:2256-64; La Rosa C et al., 2005 Human Immunol 66:116-26).

상기 설명된 바와 같이, Gag 폴리펩타이드는 하나 이상의 추가적인 폴리펩타이드들 (예를 들어, 비상동성 항원)을 선택적으로 포함할 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, Gag 폴리펩타이드는 비상동성 항원 (예를 들어, 떨어진 프로모터 하에서 및/또는 떨어진 단백질들로서)과 동시에 발현된다. Gag 폴리펩타이드는 Gag 기능의 변형 없이 비상동성 항원과 동시에 발현될 수 있다. 어떠한 이론에도 제한됨이 없이, 자가조립 Gag 폴리펩타이드의 비상동성 막 항원과의 동시 발현은 항원이 상기 막 또는 지질 이중층 바이러스유사입자 결과물에 포함될 수 있게 한다고 생각되어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자 막 구성요소들은 효과적인 면역원들로서 (예를 들어, 체액성 면역 반응의 유도) 기능한다. 몇몇 구체예들에 있어서, Gag 폴리펩타이드는 비상동성 항원이 있는 융합 단백질로 발현된다. 예를 들어, 비상동성 항원을 코딩하는 서열은 Gag 폴리펩타이드를 코딩하는 서열로 이어 맞추어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 예를 들어 Gag 폴리펩타이드를 코딩하는 서열의 3' 말단 프레임에서, 비상동성 항원을 코딩하는 서열은 Gag 폴리펩타이드를 코딩하는 서열로 이어 맞추어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, Gag 폴리펩타이드를-코딩하는 서열 및 비상동성 항원은 단일의 프로모터에 의하여 발현되어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 비상동성 항원은 Gag 폴리펩타이드의 C-말단에 삽입(예를 들어, 융합) 되어질 수 있다. 어떠한 이론에도 제한됨이 없이, 자가조립 Gag 폴리펩타이드의 비상동성 항원으로의 융합은 상기 항원이 바이러스유사입자 결과물에 포함될 수 있게 한다고 생각되어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자의 구조적 구성요소들은 효과적인 면역원으로 기능한다 (예를 들어, 세포성 면역 반응의 유도). 예를 들어, 제공되는 바이러스유사입자들 레트로바이러스성 gag 폴리펩타이드 (예를 들어, MLV gag) 및 인간 사이토메갈로바이러스의 구조적 구성요소 (예를 들어, pp65)를 포함하여 구성할 수 있다. 그러한 몇몇 구체예들에 있어서, pp65는 바이러스유사입자에 포함되어지고 인간 사이토메갈로바이러스 에 대항하는 면역 반응을 이끌어 내는 항원으로서 작용한다.

제공되는 바이러스유사입자들은, 자가 조립하여 바이러스유사입자를 형성하고 바이러스유사입자 내부에 위치할 수 있도록 배열되고 형성되어지는 구조 레트로바이러스성 단백질 (예를 들어, Gag 폴리펩타이드)을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 바이러스유사입자들은, 막 단백질 (예를 들어, gB 및/또는 gH)의 하나 이상의 에피토프들이 바이러스유사입자 표면에 위치할 수 있도록, 배열되고 형성되는 막 단백질 (예를 들어, gB 및/또는 gH)을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 바이러스유사입자들은, 구조 단백질 (예를 들어, pp65)의 하나 이상의 에피토프들이 바이러스유사입자 내부에 위치하도록, 배열되고 형성되어지는 융합 구조 단백질 (예를 들어, Gag/pp65)을 포함한다.

II. 바이러스유사입자들의 생산

바이러스유사입자들을 포함하여 구성되는 조성물은 보통 다양한 크기의 바이러스유사입자들의 혼합물을 포함할 것이라고 인식되어진다. 아래에 기재된 직경값들은 혼합물 내에서의 가장 빈번한 직경에 대응된다고 이해될 것이다. 몇몇 구체예들에 있어서 조성물 내 소포들(vesicles)의 90% 이상은 가장 빈번한 값의 50% 범위 내에 놓여 있는 직경값을 갖는다 (예를 들어, 1000 ± 500 nm). 몇몇 구체예들에 있어서 상기 분포는 더 좁을 수도 있다, 예를 들어, 조성물 내 소포들의 90% 이상은 가장 빈번한 값의 40, 30, 20, 10 또는 5% 범위 내에 놓여 있는 직경값을 갖는다. 몇몇 구체예들에 있어서, 음파처리 또는 초음파처리는 바이러스유사입자 형성의 촉진 및/또는 바이러스유사입자 크기의 변형에 사용되어질 수 있다 . 몇몇 구체예들에 있어서, 여과, 투석 및/또는 원심분리법은 바이러스유사입자 크기 분포를 다루는 데에 쓰일 수 있다.

일반적으로, 현존하는 생산 방법은 어떠한 크기의 바이러스유사입자들이라도 개시할 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 조성물은 직경이 약 20 nm에서 약 300 nm의 범위에 있는 바이러스유사입자들을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자는 최소 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 nm에서 최대 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 또는 170 nm의 범위의 직경을 갖는 것으로 특징지어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 개체군 내에서의 바이러스유사입자들은 최소 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 nm에서 최대 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 또는 170 nm의 평균적인 직경의 범위를 갖는 것으로 보여진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 개체군 내에서의 바이러스유사입자들은 0.5 보다 작은 다분산성의 값을 갖는다. (예를 들어, 0.45 보다 작은, 0.4 보다 작은 또는 0.3 보다 작은). 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자의 직경은 나노 사이즈의 단위에서 결정된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자의 직경은 전자현미경에 의해 결정된다.

A. In vitro / Ex vivo 바이러스유사입자 생산

본원 발명에 따라 제공되는 바이러스유사입자들은 당 분야 통상의 기술자에 알려진 일반적인 방법론에 따라 준비되어진다. 예를 들어, 다양한 핵산 분자들, 유전체들 또는 재조합된 벡터들 또는 플라스미드들은 알려진 바이러스들의 서열들을 이용하여 준비되어질 수 있다. 그러한 서열들은 은행들(banks)로부터 이용가능하고, 물질들은 다양한 콜렉션들, 공지된 플라스미드들, 등을 통하여 얻어질 수 있다. 이러한 구성요소들은 당 분야 통상의 기술자에 잘 알려진 기법들을 사용하여 분리되고 처리될 수 있거나, 상기분야에서 이용가능한 플라스미드들로부터 분리될 수 있다. 다양한 합성의 또는 인공의 서열들은 컴퓨터 분석 또는 (high throughput) 모음들(libraries)의 선별을 통하여 제조될 수 있다. 바이러스유사입자들 폴리펩타이드들의 재조합 발현은 하나 이상의 폴리펩타이드들을 인코딩 하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터의 구성을 요구한다. 하나 이상의 폴리펩타이드들을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 얻어진다면, 상기 폴리펩타이드의 제조에 필요한 벡터는 알려진 당 분야에서 알려진 기법들을 사용하는 재조합 DNA 기법을 이용하여 생산되어진다. 본원 발명에 따라 활용되어지는 발현 벡터들은, 그 중에서도 포유동물의 발현 벡터들, baculovirus 발현 벡터들, 식물 발현 벡터들 (예를 들어, Cauliflower Mosaic virus (CaMV), Tobacco Mosaic virus (TMV)), plasmid 발현 벡터들 (예를 들어, Ti plasmid)을 포함하지만, 이에 의해 한정되지는 않는다.

본원 발명에 따라 사용되는 예시적인 바이러스유사입자 발현 플라스미드 아래에 SEQ ID NO: 19: 로 나타내어진다.

Propol II 발현 플라스미드 (SEQ ID NO: 19)

CTAGAGAGCTTGGCCCATTGCATACGTTGTATCCATATCATAATATGTACATTTATAT

TGGCTCATGTCCAACATTACCGCCATGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAG

TAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAA

CTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCA

ATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGG

GTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCA

AGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAG

TACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTA

TTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACT

CACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACC

AAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATG

GGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCG

TCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGA

CCGATCCAGCCTCCGGTCGACCGATCCTGAGAACTTCAGGGTGAGTTTGGGGACCCT

TGATTGTTCTTTCTTTTTCGCTATTGTAAAATTCATGTTATATGGAGGGGGCAAAGTT

TTCAGGGTGTTGTTTAGAATGGGAAGATGTCCCTTGTATCACCATGGACCCTCATGA

TAATTTTGTTTCTTTCACTTTCTACTCTGTTGACAACCATTGTCTCCTCTTATTTTCTTT

TCATTTTCTTGTAACTTTTTCGTTAAACTTTAGCTTGCATTTGTAACGAATTTTTAAAT

TCACTTTTGTTTATTTGTCAGATTGTAAGTACTTTCTCTAATCACTTTTTTTTCAAGGC

AATCAGGGTATATTATATTGTACTTCAGCACAGTTTTAGAGAACAATTGTTATAATT

AAATGATAAGGTAGAATATTTCTGCATATAAATTCTGGCTGGCGTGGAAATATTCTT

ATTGGTAGAAACAACTACATCCTGGTCATCATCCTGCCTTTCTCTTTATGGTTACAAT

GATATACACTGTTTGAGATGAGGATAAAATACTCTGAGTCCAAACCGGGCCCCTCTG

CTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTAT

TGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCCTCGAGCGTACGCCTAGGGGATCCAG

CGCTATTTAAATGCTAGCATGCATGTTAACCCTGCAGGGGTACCGCGGCCGCAAGCT

TAGATCCGTCGAGGAATTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGC

TGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAA

AAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAA

ATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACA

TATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCA

ACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCA

GTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTG

AGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAAT

TTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATA

GCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCGACGGATCGGCCGCAATTCGTAATCATG

TCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGA

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TACGACTCACTATAGGGCGAATTGGAGCTCCACCGCGGTGGCGGCCGCT (SEQ ID

NO: 19)

본 발명에서 제공되는 바이러스유사입자들은 당 분야에서 알려진 기법들에 의해 생산되어질 수 있다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 바이러스유사입자들은 이용가능한 단백질 발현 시스템이라면 어떠한 것이라도 이를 이용하여 생산되어질 수 있다. 보통, 발현 벡터는 종래의 기법들을 사용하여 숙주 세포로 운반되고, 상기 형질이입된 세포들은 바이러스유사입자들을 생산하기 위해 종래의 기법들을 이용하여 배양된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자들은 세포들의 일시적인 형질이입을 이용하여 제조된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자들은 안전하게 형질이입된 세포들을 사용하여 제조된다. 바이러스유사입자 제조에 활용되는 전형적인 세포주는 포유류 세포주 예를 들어 인간 태아 신장(human embryonic kidney: HEK) 293, WI 38, 중국 햄스터 난소(Chinese hamster ovary:CHO), 원숭이 신장(monkey kidney) (COS), HT1080, CIO, HeLa, 아기 햄스터 신장(baby hamster kidney: BHK), 3T3, CI 27, CV-1, HaK, NS/O, 및 L-929 세포들을 포함하며, 이에 의해 한정되지는 않는다, 특정하지만 한정적이지 않은 실시예들은 BALB/c 쥐 골수종 라인(mouse myeloma line) (NSO/1, ECACC No: 85110503); 인간 망막아세포(human retinoblasts) (PER.C6 (CruCell, Leiden,Netherlands)); SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 라인 ; 인간 태아 신장 라인 (293 or 293 cells subcloned for growth in suspension culture, Graham et al, J. Gen Virol, 36:59 (1977)); 아기 햄스터 신장 세포들 (BHK, ATCC CCL 10); 중국 햄스터 난소 세포들 +/-DHFR (CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)); 쥐 세르토리 세포들(mouse Sertoli cells) (TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); 원숭이 신장 세포들 (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 그린 원숭이 신장 세포들(African green monkey kidney cells) (VERO-76, ATCC CRL-1 587); 인간 자궁암종 세포들(human cervical carcinoma cells) (HeLa, ATCC CCL 2); 개 신장 세포들(canine kidney cells) (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 쥐 간 세포들(buffalo rat liver cells) (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포들(human lung cells) (W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포들(human liver cells) (Hep G2, HB 8065); 쥐 유방 종양(mouse mammary tumor) (MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포들 (Mather et al, Annals N. Y. Acad. Sci., 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포들; FS4 세포들; 및 인간 간종양 라인 (Hep G2)을 포함하지만, 이에 의해 한정되지는 않는다, 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자 생성을 위해 활용되는 세포주는 곤충 (예를 들어, Sf-9, Sf-21, Tn-368, Hi5) 또는 식물 (예를 들어, Leguminosa, cereal, 또는 tobacco) 세포들을 포함한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 특별히 글리코실화 반응이 단백질 기능에 있어 중요하다고 인식되어지는 경우, 포유류 세포들은 단백질 발현 및/또는 바이러스유사입자 생성에 있어 선호되어질 수 있다 (예를 들어, Roldao A et al, 2010 Expt Rev Vaccines 9: 1149-76).

세포주는 삽입된 서열들의 발현을 조절하고, 또는 특정한 방식으로. 유전자 산물을 변형하고 수정할 수 있게 선택되어진다고 인식된다. 단백질 산물의 그러한 변형 (예를 들어, 글리코실화 반응) 및 프로세싱 (예를 들어, 절단 또는 막으로의 수송)은 바이러스유사입자 또는 바이러스유사입자 폴리펩타이드 또는 추가적인 폴리펩타이드 (예를 들어, 보조의 또는 추가적인 항원) 기능의 발생에 중요할 수 있다. 다른 세포들은 단백질들 및 유전자 산물들의 번역후 프로세싱 및 변형 에 대한 특이의 특징적인 메커니즘들을 갖는다. 발현된 외부 단백질 정정 수정 및 프로세싱을 보장하기 위하여 적절한 세포주들 또는 숙주 시스템들은 선택되어질 수 있다. 일반적으로, 본원 발명에 따라 전사된 1차 전사물의 적절한 프로세싱, 상기 유전자 산물의 글리코실화 반응 및 인산화반응을 위한 적절한 세포성 기관을 갖는 진핵생물 숙주 세포들 (또한 패키지 세포라 지칭되는 (예를 들어, 293T 인간 배아 신장 세포들))은 본원 발명에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

바이러스유사입자들은 알려진 기법들에 따라 그 중에서도, 예를 들어 원심분리법, 기울기들, 설탕-기울기 초원심분리법, 접선 유동 여과장치 및 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환(음이온 및 양이온), 흡착력 및 크기 상 크로마토그래피), 또는 용해도의 차이, 에 따라 정제되어질 수 있다. 대신에 또는 추가적으로, 세포 상층액(supernatant)은 정제과정을 거치지 않고, 직접 사용될 수 있다. 추가적인 엔터티들, 예를 들어 추가적인 항원들 또는 보조제들이 정제된 바이러스유사입자들 에 첨가될 수 있다.

몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 폴리뉴클레오타이드 서열들은 최적화된 코돈이다.

코돈 최적화는 당 분야에서 잘 알려져 있으며 높은 수준의 단백질이 제조될 수 있도록 코돈 사용의 변형을 포함한다.

B. In vivo 바이러스유사입자 생산

본원 발명에 따라 제공되는 바이러스유사입자들은 당 분야에서 잘 알려진 방법들에 따라 DNA 백신들로 제조되어질 수 있다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 수용 세포들이 벡터 또는 플라스미드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드들을 발현할 수 있도록 하나 이상의 상기 설명되어 있는 것과 같은 벡터들 또는 플라스미드들은 대상에게 투여된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 그러한 폴리펩타이드들을 발현하는 수용 세포들은 폴리펩타이드들을 포함하여 구성하는 바이러스유사입자들을 생산한다.

C. 1가, 2가, 3가 eVLPs

여기서 설명되어지는 것과 같이. 본원 발명에 따라 세포들은 단일의 발현 벡터를 통하여 형질이입될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 단일의 발현 벡터는 바이러스유사입자의 둘 이상의 구성요소 (예를 들어, 구조 다단백질, CMV 외피 폴리펩타이드, CMV 당단백질, 등에서의 둘 이상)를 인코딩한다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 단일의 발현 벡터는 바이러스유사입자의 둘 또는 그 이상의 성분들을 인코딩한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 단일의 발현 벡터는 바이러스유사입자의 셋 또는 그 이상의 성분들을 인코딩한다.

몇몇 구체예들에 있어서, 세포들은 둘 또는 그 이상의 발현 벡터들을 이용하여 형질이입된다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 세포들은 Gag 폴리펩타이드를 인코딩하는 첫번째 벡터와 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)을 인코딩하는 두번째 벡터를 이용하여 형질이입된다. 몇몇 그러한 구체예들에 있어서, 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)을 포함하여 구성되는 "1가의" 바이러스유사입자들은 제조된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 세포들은 Gag 폴리펩타이드를 인코딩하는 첫번째 벡터, 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)을 인코딩하는 두번째 벡터, 및 다른 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)을 인코딩하는 세번째 벡터를 이용하여 형질이입된다. 몇몇 그러한 구체예들에 있어서, 2개의 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질들 (예를 들어, gB 및 gH-G 또는 gB-G 및 gH-G)을 포함하여 구성되는 "2가의" 바이러스유사입자들은 제조된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 세포들은 Gag-pp65 융합 폴리펩타이드를 인코딩하는 첫번째 벡터 및 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)을 인코딩하는 두번째 벡터를 이용하여 형질이입된다. 몇몇 그러한 구체예들에 있어서, 인간 사이토메갈로바이러스 구조 단백질 및 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)를 포함하여 구성되는 "2가의" 바이러스유사입자들은 제조된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 세포들은 Gag-pp65 융합 폴리펩타이드를 인코딩하는 첫번째 벡터 및 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)을 인코딩하는 두번째 벡터, 및 또 다른 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질 (예를 들어, gB 또는 gB-G 또는 gH-G)을 인코딩하는 세번째 벡터를 이용하여 형질이입된다. 몇몇 그러한 구체예들에 있어서, 인간 사이토메갈로바이러스 구조 단백질 및 2 인간 사이토메갈로바이러스 외피 당단백질들 (예를 들어, gB 및 gH-G 또는 gB-G 및 gH-G)을 포함하여 구성되는 "3가의" 바이러스유사입사들은 제조된다.

몇몇 구체예들에 있어서, 1가의, 2가의, 또는 3가의 바이러스유사입자들은 혼합된다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 1가의 그리고 2가의 바이러스유사입자들은 혼합되어 3가의 VLP 혼합물을 형성한다. 몇몇 구체예들에 있어서 두 개의 2가의 바이러스유사입자들은 혼합되어 3가의 바이러스유사입자 혼합물을 형성한다.

III. 인간 사이토메갈로바이러스 감염 및 치료(treatment)

인간 사이토메갈로바이러스 β-헤르페스바이러스,는 만연히 발생하는 병원균이다. 일반적으로, 헤르페스바이러스들의 세포로의 침투는 흡착 및 수용기 부착에 의해 유발되고 바이러스 막과 세포 막의 융합이 뒤따르는 복합적인과정이다. 융합은 일반적으로 원형질막 또는 엔도솜의 막에서 발생한다. 인간 사이토메갈로바이러스는 in vivo에서 외피 세포들, 내피 세포들 및 섬유아세포들을 포함한 여러 종류들의 세포를 감염시킨다. (Plachter B et al., 1996 Adv 바이러스 Res 46: 195-261). 인간 사이토메갈로바이러스는 섬유아세포의 원형질막들과 융합되나 (Compton T et al., 1992 Virology 191 :387-395), 내포작용(endocytosis)을 통하여 망막 색소 상피 세포들 및 제정맥 내피 세포들에 침투한다. (Bodaghi B et al., 1999 J Immunol 162:957-964; Ryckman BJ et al, 2006 J Virol 80:710-722). 헤르페스바이러스들이 침투하는 메커니즘은 아직 명백하지 않다. 일반적으로 침투 경로들은 주로 숙주 세포에 의해 결정된다고 추정되나, 비리온 당단백질들이 그 역할들을 한다는 증거가 있다. (Wang X et al, 1998 J Virol 72:5552-5558). 전에 언급된 바와 같이, 인간사이토메갈로 바이러스는 두 개의 gH/gL 복합체들: gH/gL/gO 및 gH/gL/UL128/UL130/UL131을 인코딩한다. 섬유아세포 감염에는 gO를-포함하는 복합체로 충분한 반면에, 내피 및 외피 세포들의 인간 사이토메갈로바이러스 감염에는 pUL128/UL130/UL131을-포함하는 복합체가 중요하다.

인간 사이토메갈로바이러스는 40 살 성인의 50-85%를 감염시킨다. (Gershon AA et al, 1997 in viral infrections of people, 4th edition, New YORk; Plenum Press:229-251). 출생 후 인간 사이토메갈로바이러스에 감염된 대부분의 건강한 개체들은, 만약 일으킨다면 많지 않은 증상을 일으킨다. 그러나, 인간사이토메갈로(HCMV) 질병은 예를 들어, 조열줄기세포이식자들(HCT) 및 장기이식받은자들(SOT)와 같이 면역력이 약화된 개체들에 있어서 사망률 및 이환율의 중요한 원인이다. (Pass RF 2001 Cytomegalovirus. In Fields Virology. 4th edition, Philadelphia; Lippincott Williams & Wilkens:2675-2705). SOT 또는 HCT 개체군들에 있어서, 인간 사이토메갈로바이러스 질병은 기증자의 장기 또는 조혈모세포로부터 전염된 새로운 감염에 의해 발생할 수 있으며, 이식자들에 잠재된 바이러스의 재활성화에 의해 재발할 수도 있다. HIV-감염된 개체들에 있어, 인간 사이토메갈로바이러스 감염은 항레트로바이러스성 치료법의 이용에도 불구하고, AIDS 및 죽음의 진행을 촉진시킨다, (Deayton JR et al, 2004 Lancet 363:2116-2121). 게다가 미국에서는, 인간 사이토메갈로 바이러스는 가장 흔한 자궁내 감염원이고, 매년, 대략 8000 명의 유아들의 죽음 또는 귀먹음 및 정신 지체를 포함한 심각한 선천적 결손증을 초래하는 선천성의 기형의 중요 원인이다, (Stagon S et al, 1986 JAMA 256:1904-1908).

인간 사이토메갈로바이러스를 제어하는 면역 반응들은 완전하게 이해되어지지 않는다. 다른 인간 헤르페스바이러스들에 유추해 볼 때, 세포성 및 체액성 면역 반응들은 모두 중요한 역할을 한다고 추정될 수 있다. (Kohl S 1992 Current topics in Microbiology and Immunology 179:75-88). 쥐의 CMV에서, 세포독성T세포 반응 또는 중화 항체들의 수동 전달은 치명적인 공격에 대항하여 보호하는 데에 충분하다고 보여진다. (Rapp M et al, 1993 Multidisciplinary Approach to Understanding Cytomegalovirus Disease:327-332; Reddehase MJ et al, 198 J Virology 61 :3102-3108).

면역력이 약화된 개체들에서의 CMV 통제는 주로 세포성 면역 반응들과 연관된다 ; CD8+ 및 CD4+ T 세포들은 CMV 질병에 대항한 보호에 중요하다고 보여진다. (Gamadia LE et al, 2003 Blood 101 :2686-2692; Cobbold M et al, 2005 J Exp Med 202:379-386). CMV에 대항한 세포성 면역 반응은 다수 항원들에 대한 CD4+ helper T 세포 및 CD8+ 세포독성의 T 세포 반응들을 포함하고, 그러한 반응들은 막과 핵단백질체캡시드 사이에 있는 바이러스성 외피에서 관찰되어진다, 건강한 기증자들로부터의 CMV-특이의 CD4+ 및 CD8+ T 세포들에 대한 최근의 연구는 CMV 감염이후에 인식된 항원들을 인지하는데 있어, 일련의 CMV 오픈 리딩 프레임들로부터의 중복 펩타이드들을 사용한다 (Sylwester AW et al, 2005 J Exp Med 202:673-685). CMV 외피 인단백질 65 (pp65) 및 표면 당단백질 gB는 CD4+ T 세포들에 의해가장 흔하게 인식되는 항원들이고, 또한 pp65는 CD8+ T 세포들에 의해가장 흔하게 인식되는 항원들 중 하나이다.

이식 세팅(transplant setting)과는 대조적으로, 바이러스에 대항하는 모체의 체액성 면역 반응은 갓 태어난 아기들에게 인간 사이토메갈로바이러스 질병을 예방하는데 있어서 중요하다고 보여진다. 표면 당단백질들에 대한 항체들 특히 gB는, CMV의 모체-태아간 전염에 대항한 보호에 중요하다고 보여진다. (Fowler KB et al, 2003 JAMA 289: 1008-1011). 게다가, 초기의 백신접종 연구에서는 재감염으로부터의 보호가 중화 항체들과 연관되어지는 것으로 보여진다. (Adler SP et al., 1995 J Infectious Diseases 171 :26-32). CMV에 대한 체액성 면역 반응은 바이러스 입자의 외막에 존재하는 바이러스성 외피 당단백질들에 대한 반응들을 보이는 데에 특징이 있다 (예를 들어, gB 및 gH).

인간 사이토메갈로바이러스의 경우에, 바이러스가 엄밀히 종-특이적이고 어떠한 동물 모델 시스템도 가능하지 않기 때문에 면역 효과기 기능들의 직접적인 측정은 어렵다. 그러나, 쥐의 CMV 및 기니 피그의 CMV는 이러한 숙주세포 종들에서의 백신 전략을 측정하기 위해서 사용되어져 왔다.

방어적인 T 세포 및 중화 항체 반응들을 일으키는 CMV 백신은 선천성의 감염 또는 장기이식으로 인한 감염의 예방 또는 CMV 질병을 아멜리오레이션할 수 있는 잠재성을 갖는다.

사람들에서 실험되어지는 첫번째 인간 사이토메갈로바이러스 생백신 후보는 실험실에-맞추어진(laboratory-adapted) AD 169 균주에 기초한다. 다른 실험실에-맞추어진 임상적 고립, 즉 Towne 균주를 이용한 차후의 실험들은 생백신들이 중화 항체들뿐만 아니라 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응들을 이끌어 낼 수 있다고 입증하였다. Towne 백신의 효능은 일련의 연구들에서 신장 장기이식 받은 자들을 통해 평가되었다. Towne 백신이 인간 사이토메갈로바이러스 질병에 방어적인 영향을 제공하지만, 장기이식 후의 인간 사이토메갈로바이러스 감염을 예방하는 데에는 실패하였다 (Plotkin SA et al., 1984 Lancet 1 :528-530). Towne 백신은 또한 인간 사이토메갈로바이러스-감염된 자신들의 아동들로부터 감염되는 것을 예방하지 못하는, 탁아소에 맡겨지는 아이들을 자녀로 두는 혈청 검사 음성 어머니들의 위약대조군 연구에서 평가되어진다. (Adler SP et al, 1995 J 감염성의 Diseases 171 :26-32). 이러한 연구들에서는 Towne 백신이 과다약화되었다고 해석된다. 이러한가능성을 분석하기 위하여, CMV의 약화되지 않은 "Toledo" 균주 부분이 Towne 유전체의 상응하는 부분으로 치환된 일련의 유전적으로 재조합 물질들이 제조되어지고, 그 결과 Towne 백신 약화에 기여하는 변이체들의 전부는 아니지만 몇몇을 포함하는 Towne/Toledo "키메라"의 제조가 가능하다. (Heineman TC et al. 2006 J Infect Disease 193: 1350-1360). 네 개 Towne/Toledo "키메라"의 안정성 및 내약성은 임상실험 1 단계에서 실험되어진다. 장기간 안정성은 잠재하는 인간 사이토메갈로바이러스 감염이 생백신들의 추가적인 발생을 저해하는 잠재적인 위험에 관한 것이다.

자연 감염(natural infection) 동안의 바이러스-중화 항체 반응들 및 높은-역가를 이끌어 낼 수 있는 당해 단백질의 능력 덕택에, 선도 서브유닛 CMV 백신 후보는 외피 당단백질, gB, (정제된 재조합 gB 백신은 Sanofi-Pasteur 백신들에 의해 제조되어진다) 에 기초한다. 재조합 gB 백신은 중화 항체 반응들을 이끌어 내고 탁월한 안정성을 갖는다. 그러나, 당해 백신 후보는 중화 항체 반응의 다른 당단백질 타겟들 및 그 이상으로 중요한 T 세포 타겟들을 배제한다. 백신은 면역원성을 최적화하기 위하여 MF59 보조인자를 요한다.가장 최근의 임상실험에서, 2 단계 임상실험에서는, 젊은 여성들에게 있어 상기 백신은 CMV 감염의 예방에 전반적으로 50%의 효능이 있다. (Pass RF et al, 2009 N Engl J Med 360: 1191-1199). 서브유닛 백신 후보로 평가되는 다른 바이러스성 단백질들은 T-cell 반응들을 이끌어 내는 pp65 및 IE1 포함한다.

DNA 백신들은 동물들에서 활발한 세포성 및 체액성 면역 반응들을 이끌어 내고 백신 디자인에 있어서 특정성 및 정확성에 상당히 적합하다. DNA 백신들은 CMV에 대항해 개발되고 있으며 gB, IE1 및 pp65 단백질들을 타겟 면역원의 후보로 주목하고 있다. pp65 및 gB를 인코딩하는 플라스미드 DNA를 사용하는 2가의 CMV DNA 백신 후보 (Wloch MK 2008 J Infectious Diseases 297: 1634-1642) 및/또한 IE1 유전자 산물을 인코딩하는 세번째 플라스미드를 포함하는 3가의 백신 후보 (Jacobson MA 2009 Vaccine 27:1540-1548)는 Vical 백신들 (patent US 7,410,795) 에 의해 개발되어져 왔다. 3가의 DNA 백신은 투여 경로에 관계없이 단독으로 최소의 면역원성을 갖는다. CMV DNA 백신은 생의-약독화된 CMV (Towne)의 투여 이후에 관찰된 CMV 항원들에 대한 기억 반응의 틀림없는 주된 요소라 보여진다.

벡터화된(vectored) 백신 접근법에서, 관심 있는 유전자 산물은 비복제의 (보통은 바이러스성) 캐리어를 통하여 발현된다. 이들 중 하나의 실시예는 ALVAC 라 불리는, Virogenetics 및 Sanofi-Pasteur 백신들에 의해 개발된 canarypox 벡터이고, 이것은 포유류 세포들에서 불임적으로(abortively) 복제되는 약독화된 폭스바이러스이다. CMV gB를 발현하는 ALVAC 및 pp65 (US 6,267,965)를 발현하는 ALVAC는 임상 실험들에서 실험되어진다. 차후의 gB 서브유닛(subunit)/MF59 백신으로의 면역 후에, 중화 항체 역가들을 신장시키는 것으로 보여지지 않을지라도 (Bernstein DI et al. 2002 J Infectious Diseases 185:686-690), ALVAC-CMV(gB)는 Towne 균주 CMV의 차후 감염 이후, 중화 항체들을 유도하지 않고 중화 항체의 높은 역가들에 중요한 역할을 한다. (Adler SP et al. 1999 J Infectious Diseases 180:843-846), pp65, ALVAC-CMV(pp64)를 발현하는 canarypox 벡터는 자연적으로 혈청반응양성인 개체들에 비하여, 본래 혈청 검사 음성의 지원자들 모두에서 장기간-지속되는 CTL 반응들을 유도한다. (Berencsi K et al. 2001 J Infectious Diseases 183: 1171-1179). gB를 벡터화된 백신으로서 발현하기 위해 사용되는 다른 접근법은 AlphaVax Inc (US 7,419,674) 에 의한 알파바이러스 리플리콘(replicon) 시스템을 사용하는 것이다. 상기 접근법은 pp65, IE1 또는 gB 단백질을 발현하는 바이러스-유사 리플리콘입자들(VRPs)을 생산하기 위해서, 알파바이러스, 즉 베네주엘라 말류(equine) Encephalitis (VEE) 바이러스의 약독화된 균주로부터 유래된 전파결여의 단일-주기의 R A 리플리콘 벡터 시스템을 포함한다. (Berstein et al., 2010 백신 28:484-493). CMV gB (Towne 균주) 및 pp65/IEl 융합 단백질의 수용성형태가 안전하고, 높은 수준의 중화 항체 및 다기능성의 CD4+ 및 CD8+ 항원-특이의 T 세포 반응들 유도한다고 알려졌기에, 두 구성요소 알파바이러스 리플리콘 백신은 세 CMV 단백질들을 발현하기 위해 사용되어졌다. (Reap EA et al. 2007 백신 25:7441-7449). 실험결과에서 높은 투여량 그룹의 Geometric Mean Titre (GMT)는 자연적으로 감염된 CMV 혈청반응양성의 12명 개체들의 GMT의 약 절반이었다.

현재 전임상(preclinical) 디벨롭먼트에서의, 인간 사이토메갈로바이러스 에 대항한 백신접종의 신규한 후보는 "조밀체(dense body)" 백신이다. 조밀체들(DBs)은 외피를 보유하고, 세포 배양시, CMVs의 복제 동안 형성되는 복제-불능인 입자들이다. 조밀체들은 외피 당단백질들 및 다량의 pp65 단백질을 함유한다. 조밀체들은 비감염성이고, 면역원성이지만, 백신 접종자들에게 잠재하는 인간 사이토메갈로바이러스 감염을 시킬 수 없다. 조밀체들은 쥐들에서 바이러스성 유전자 발현이 없는 경우에 바이러스 중화 항체들 및 T-세포 반응들 유도할 수 있다고 보여진다 (Pepperl S et al., 2000 J Virol 74:6132-6146 - WO 00/53729 및 US 6,713,070).

IV. 약학적 조성물

본원 발명은 제공되는 바이러스유사입자들 및/또는 제공되는 당단백질 변이체들을 포함하여 구성되는 약학적 조성물을 제공한다. 몇몇 구체예들에 있어서, 본원 발명은 바이러스유사입자 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 첨가제를 제공한다. 그러한 약학적 조성물은 하나 이상의 추가적인 치료학적으로 활성인 물질들의 조합을 선택적으로 포함하여 구성하거나 그리고/또는 당해 조합으로 투여될 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 약학적 조성물은의약에서 유용하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 약학적 조성물은 인간 사이토메갈로바이러스 또는 인간 사이토메갈로바이러스 감염과 연관되어지는 부정적인 영향 내지 효과의 치료 또는 예방에서, 예방제로서 (즉, 백신들) 유용하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 약학적 조성물은 치료적 용도에 있어서 유용하다, 예를 들어서 인간 사이토메갈로바이러스 감염을 앓는 또는 걸리기 쉬운 개체들에 있어서 유용하다. 몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은 사람들에 투여를 위해 만들어진다.

예를 들어, 본 발명에서 제공되는 약학적 조성물은 살균한 주사제 조성물의 형태로 제공될 수 있다. (예를 들어, 피하 주사 또는 수액 주입기의 형태에 적절한) 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은은 주사에 적절한 액체의 투여형태로 제공된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은은 파우더로 제공되고 (예를 들어서 동결건조된 및/또는 멸균된), 선택적으로는 주사에 앞서 진공상태 하에서, 수용성 희석액과 재조합된다 (예를 들어, 물, 완충용액, 염 용액, 등). 몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은은 물, NaCl 용액, Na acetate 용액, benzyl alcohol 용액, 인산 완충 식염수, 등과 희석되거나 그리고/또는 재조합된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 파우더는 수용성 희석액과 조심스럽게 섞여져야 한다. (예를 들어, 마구 흔들면 안된다).

몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 약학적 조성물은은 하나 이상의 약학적 허용가능 첨가물들을 포함하여 구성된다. (예를 들어, 보존액, 불활성의 희석액, 분산제, 계면 활성제 및/또는 유화제, 버퍼, 등). 적절한 부형제는 포함한다. 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 설탕, 트레할로스, 글리세롤, 에탄올, 또는 그들과 유사한, 그리고 그들의 조합들이다. 게다가, 필요하다면 백신은 백신들의 효과를 증강시키는 보조 물질들, 예를 들어 습윤제 또는 유화제, pH 완충용액, 또는 보조제들을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은 하나 이상의 보존액들을 포함하여 구성된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은 어떠한 보존액도 포함하지 않고 구성된다 .

몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은 냉장보관 및/또는 냉동보관될 수 있는 형태로 제공된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 재조합된 용액들 및/또는 액체의 투여형태는 재조합 이후의 특정 기간동안 (예를 들어, 2 시간, 12 시간, 24 시간, 2 일, 5 일, 7 일, 10 일, 2 주, 한 달, 두 달, 또는 그보다 길게) 저장되어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자들을 상기 특정된 시간들 보다 길게 저장하면 바이러스유사입자 분해를 야기한다.

액체의 투여형태 및/또는 재조합된 용액들은 투여에 앞서, 미립자 물질 및/또는 내변색화를 포함하여 구성할 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 용액은 변색되거나 또는 탁현상(cloudy)이 일어나거나 그리고/또는 여과 후 미립자가 남는 경우에는 사용하지 말아야 한다.

본원 명세서에서 설명되어지는 약학적 조성물의 형성은 약학업의 당 분야에서 알려지거나 그 이후에 발전되어 알려진 방법들에 의하여 제조되어질 수 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 그러한 제조방법은 활성 성분에 하나 이상의 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 부수적인 성분들과의 조합, 그리고 후에, 필요하거나 그리고/또는 요구된다면, 단일의- 또는 복수의-투여 단위에 필요한 상기 물품의 성형 및/또는 포장의 단계를 포함한다.

본원 발명에 따른 약학적 조성물은 단일의 투여-단위, 및/또는 복수의 투여-단위로서, 대량으로 제조되고 포장되어질 수 있다. 본 명세서에서 사용되는, "투여 단위"는 활성 성분의 미리 결정된 양을 포함하여 구성할 수 있는 약학적 조성물의 독립된 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로 대상에 투여되는 투여량 및/또는 그러한 투여량의 간편한 일부, 예를 들어 그러한 투여량의 2분의 1 또는 3분의 1 이다.

본원 발명에 따른 조성물에서의 활성 성분의 상대적인 양, 약학적으로 허용가능한 첨가제, 및/또는 추가적인 성분들은 어떠한 것이라도 실험되는 대상의 아이덴티티, 크기, 및/또는 상태에 따라 및/또는 조성물이 투여되는 경로에 따라 달라질 수 있다, 실시예의 형태는, 조성물은 활성 성분 비율이 0.1%와 100% 사이의 질량 백분율을 갖는 것을(w/w) 포함하여 구성할 수 있다.

본원 발명의 약학적 조성물은 본 명세서에서 사용되는, 특정 투여형태에 따라 요구되는 적합한 용액, 분산매, 희석액, 또는 다른 액체의 수단들, 분산 또는 완충제, 계면 활성제들, 등장성 용액, 끈적끈적하게 하는 것들 또는 유화제, 보존액, 고체 바인더들, 윤활유들 및 그와 같은 것들이거나 이들을 포함하여 구성할 수 있는 약학적으로 허용가능한 첨가제를 추가적으로 포함하여 구성할 수 있다. Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, (Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006)는 약학적 조성물을 형성하는데 사용되는 다양한 부형제를 개시하고, 그것들의 준비과정에 알려진 기법들을 개시한다. 예를 들어 바람직하지 않은 생물학적 효과를 발생시키거나 또는 그 외에 약학적 조성물의 어떠한 다른 구성요소들과도 유해한 방법으로 상호작용하는 것과 같이, 종래의 첨가제가 어떠한 물질 또는 그것의 유도체들과 불혼화 하는 것을 제외하고는, 부형제의 용도는 본원 발명의 범위 내에서 고려되어질 수 있다.

몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물은 백신으로서 충분히 면역성이 있다.(예를 들어, 보조제 없이도). 몇몇 구체예들에 있어서, 약학적 조성물의 면역원성은 보조제를 함유함으로써 증강되어진다. 어떠한 보조제라도 본원 발명에 따라 사용될 수 있다. 다수의 보조제들은 알려져 있다; 그러한 많은 화합물(compounds)의 유용한 개요서는 the National Institutes of Health 에 의해 제공되며, (www.niaid.nih.gov/daids/백신/pdf/개요서.pdf)에서 찾을 수 있다. 또한 Allison (1998, Dev. Biol. Stand., 92:3-11;), Unkeless et al. (1998, Annu. Rev. Immunol., 6:251-281; ), 및 Phillips et al. (1992, Vaccine, 10: 151-158; )에서도 볼 수 있다. 서로 다른 수많은 보조제들은 알려진 당 분야에서 알려져 있고 본원 발명에서 이용될 수 있다. 본원 발명에 따라 활용되는 예시적인 보조제들은 사이토카인, 겔-타입 보조제들 (예를 들어, 수산화 알루미늄, 알루미늄 인산, 칼슘 인산, 등.); 미생물의 보조제들 (예를 들어, 면역조절제의 DNA 서열들 포함하는 CpG 모티프: 엔도톡신 예를 들어 모노포스포릴 지질 A; 엑소톡신 예를 들어 콜레라 톡신, E. coli heat labile toxin, and pertussis toxin; muramyl dipeptide, 등.); 오일 에멀젼 및 유화제-기초한 보조제들 (예를 들어, Freund's Adjuvant, MF59 [Novartis], SAF, 등.); 미립자(particulate) 보조제들 (예를 들어, liposomes, biodegradable microspheres, saponins, 등.); 합성의 보조제들 (예를 들어, nonionic block copolymers, muramyl peptide analogues, polyphosphazene, 합성의 폴리뉴클레오타이드들, 등); 및/또는 그들의 조합들을 포함하지만, 이에 의해 한정되지는 않는다. 다른 예시적인 보조제들은 몇몇 폴리머들 (예를 들어, polyphosphazenes; 본원 명세서에 인용문헌으로 포함되어 있는 U.S. Patent 5,500,161에 설명되어져 있다 ), Q57, QS21, squalene, tetrachlorodecaoxide, 등을 포함한다. 약학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable) 부형제는 이전에 "약학적 조성물" 이라는 상기 부분에서 더욱 상세히 설명되어졌다 .

V. 투여

제공되는 조성물 및 방법은 성인(adults) 및 아동들을 포함하는 대상에 있어 인간 사이토메갈로바이러스 감염의 예방(prophylaxis) 및/또는 치료(treatment)에 유용하다. 그러나, 일반적으로 그들은 동물(animal) 에 사용된다. 특정 구체예들에 있어서, 본원 명세서의 상기 방법들은 예를 들어, 개 및 고양이에 의 적용과 같이 수의학적 적용에 이용될 수 있다. 필요하다면, 본원 명세서의 상기 방법들은 또한 예를 들어 양류, 조류(avian), 소류(bovine), 돼지류(porcine) 및 말류(equine) 사육과 같이,가축용 동물들에 이용될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는, 용어들 "대상," "개체" 또는 "환자"는 인간 또는 비인간의 포유류 대상을 지칭한다. 임상실험되어지는 개체 (또한 "환자" 또는 "대상"를 지칭하는)은 예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 감염과 같은 질병을 앓는 개체 (태아, 유아, 아동, 청소년, 또는 성인) 이다, 몇몇 구체예들에 있어서, 대상은 인간 사이토메갈로바이러스 감염의 위험에 놓여져 있다. 몇몇 구체예들에 있어서, 대상은 면역이 억제된 대상이다. 예를 들어, 몇몇 구체예들에 있어서, 면역이 억제된 대상은 HIV-감염된 대상, AIDS 환자, 장기이식 받은자들, 소아 대상, 그리고 임신한 대상로 이루어지는 그룹에서 선택되어진다. 몇몇 구체예들에 있어서, 대상은 인간 사이토메갈로바이러스 감염에 노출되어져 왔다. 몇몇 구체예들에 있어서, 대상은 인간이다.

본원 명세서에서 설명되어지는 조성물은 일반적으로 면역 반응을 유도하기에 필요한 또는 충분한 양과 시간으로 투여된다. 투여량은 단일의 투여 또는 기간에 걸친 복수의 투여들로 이루어질 수 있다. 투여되어질 면역원성 조성물의 (예를 들어, 바이러스유사입자) 정확한 양은 대상에 따라 달라질 수 있고 다수의 요인들에 의존할 수 있다. 따라서, 일반적으로 사용되어질 정확한 투여량은 처방하는 내과의사에 의해 결정될 수 있고 대상의 몸무게와 투여경로 및 대상의 나이와 증상들의 극렬함 및/또는 감염의 위험에 의해 결정될 수 있다고 인식되어진다. 특정 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자 조성물의 특정 양은 단일의 투여로. 투여된다. 특정 구체예들에 있어서, 바이러스유사입자 조성물의 특정 양은 두 번 이상의 투여로 투여된다 (예를 들어, 1-12 개월로 간격 지어지는 1-3 번의 투여들). 특정 구체예들에 있어서 바이러스유사입자 조성물의 특정 양은 단일 투여로 여러 번 투여된다. (예를 들어, 1-12 개월로 간격 지어지는 1-3 번의 투여들).

몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 초기 투여과 적어도 한 번의 추가 투여로 투여된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 초기 투여과 두 번의 추가 투여들로 투여된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 초기 투여과 세 번의 추가 투여들로 투여된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 초기 투여과 네 번의 추가 투여들로 투여된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 초기 투여과 초기 투여의 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 이후의 적어도 한 번의 추가 투여로 투여된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 초기 투여의 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 또는 약 1 년 이후의 두번째 추가 투여로 투여된다. 몇몇 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 매 1 년, 2 년, 3 년, 4 년, 5 년, 6 년, 7 년, 8 년, 9 년, 또는 10 년 마다의 추가 투여로 투여된다.

특정 구체예들에 있어서, 제공되는 조성물은 예를 들어 주사와 같은 비경구 투약을 위해 가공되어질 수 있다, 그러한 구체예들에 있어서, 투여는 예를 들어, 수액, 근육내, 진피내, 또는 피하일 수 있거나, 주입기 또는 바늘 없는 주사 기법들에 의하는 것이다. 특정 구체예들에 있어서, 조성물은 경구 투여, 구강(oral) 투여, 비강내 투여, 부칼(buccal) 투여, 혀밑 투여, 경피형(transdermal) 투여, 경피성(transcutaneous) 투여, 복강내 투여, 질내 투여, 직장 투여 또는 두개(intracranial) 투여를 위해 가공되어질 수 있다.

실시예들

하기의 실시예는 본원 명세서에 기재된 특정 조성물 및 방법을 구성하고 실시하는 몇몇 예시적인 양태를 기재한다. 당해 실시예들은 단지 설명을 목적으로 하는 것이지 본원 명세서에 기재된 조성물 및 방법의 범위를 제한하려는 것이 아니다.

실시예 1: DNA 발현 플라스미드들의 조성물

본 실시예는 발현 플라스미드들의 디벨롭먼트 및 재조합 HCMV 유전자 서열(예를 들어, gB, gB-G, gH-G, 및 Gag/pp65 융합 유전자 서열)의 발현을 위한 구축물들을 설명한다. 표준의 발현 플라스미드는 일반적으로 포유류에서 기원한 프로모터 서열, 인트론 서열, 폴리아데닐화 시그널 서열 , pUC 복제개시점서열 (pUC - pBR322는 colEl 복제 개시점이고, 예를 들어 E Coli (DH5)와 같은 박테리아에서 플라스미드를 복제하는 데에 사용된다), 그리고 플라스미드 플라그(plaque) 선택을 위한 선택가능한 마커로서의 항생제 내성 유전자로 구성된다. 그 다음으로 플라스미드 내에서 인트론 다음으로 언급되는 것은, 목표하는 유전자 또는 부분적인 유전자 서열 내에서 이어맞추어지는 데에 사용되어질 수 있는 다양한 제한 효소 부위이다.

Propol II 발현 플라스미드는 pHCMV (인간 사이토메갈로바이러스를 위한 프로모터), a Beta-Globin 인트론 (BGL 인트론), 토끼 글로빈 폴리아데닐화 서열, pUC 복제개시점 서열 (pUC - pBR322는 colEl 복제 개시점이고, 예를 들어 E Coli (DH5)와 같은 박테리아에서 플라스미드를 복제하는 데에 사용된다), 및 엠피실린 내성의 유전자 β-lactamase (Amp R - 플라스미드가 엠피실린 내성을 갖도록 부여하는 선택가능한 마커) (100 μg/ml)를 포함한다 (도 1A).

도 IB는 예시적인 재조합 발현 플라스미드들을 나타낸다. 예를 들어, pHCMV-Gag MMLV 발현 구축물("MLV-Gag")을 제조하기 위해서, MMLV (C 말단 Pol 서열에 Gag가 없는)의 Gag 다단백질을 인코딩하는 CDNA 서열은 Propol II (pHCMV) 발현 벡터에 복제되어졌다. gB 발현구축물("gB")을 제조하기 위하여, gB의 전체 길이 서열은 인간 발현 진스크립트에 코돈-최적화되어 있고, gB의 세포외 부분, 트렌스멤브레인 도메인 및 세포질 도메인을 포함하는 Propol II 발현 벡터에 복제되어진다.

gH-G 발현 구축물 ("gH-G")을 제조하기 위하여, 오로지 세포외 도메인을 인코딩하는 gH의 절단된 서열은 VSV-G의 TM 및 Cyto 부분들과 융합되어지고, 인간 발현 진스크립트에 코돈-최적화되어 있고, Propol II 발현 벡터에 복제되어진다. 유사하게, gB-G 발현 구축물 ("gB-G")을 제조하기 위해, 오로지 세포외 부분을 인코딩하는 gB의 절단된 서열은 VSV-G의 TM 및 Cyto 부분들과 융합되어지고, 인간 발현 진스크립트 에 코돈-최적화되어 있고, Propol II 발현 벡터에 복제되어진다. Gag/pp65 발현 구축물 ("Gag/pp65")을 제조하기 위하여, MMLV (C 말단 Pol 서열에 Gag가 없는)의 Gag 다단백질 인코딩하는 서열은 pp65의 전체길이 서열과 융합되어지고, 인간 발현 진스크립트에 코돈-최적화되어 있고, Propol II 발현 벡터에 복제되어진다.

DNA 플라스미드들은 형질이입된 E. coli (DH5a)에서 증폭되어지고, 표준의 프로토콜에 따라 엔도톡신-없는 준비 키트를 이용하여 정제되어질 수 있다.

실시예 2: 바이러스유자입자들의 제조

본 실시예는, 실시예 1에서 설명되어진 다양한 재조합 인간 사이토메갈로바이러스 항원들을 포함하는 바이러스유자입자들의 생산방법을 설명한다.

HEK 293T 세포들 (ATCC, CRL-11268)은 칼슘 인산 방법을 이용하여, 일시적으로 MMLV-Gag DNA 발현 플라스미드로 형질이입되고, gB 또는 gB-G (데이터에서 보여지지 않는) 또는 gH-G DNA 발현 플라스미드로 동시형질이입된다. 대신에 세포들은 Gag/pp65 DNA 발현 플라스미드로 형질이입되고, gB gB-G (데이터에서 보여지지 않는) 또는 gH-G DNA 발현 플라스미드로 동시형질이입된다. 세포들은 MMLV-Gag DNA 발현 플라스미드로 형질이입되고, gB 및 gH-G 또는 gB-G 및 gH-G DNA 발현 플라스미드로 동시형질이입된다고 인식되어진다. HEK 293 세포들에 의한 다양한 인간 사이토메갈로바이러스 항원들의 발현은 유세포 분석기에 의해 확인되어진다 (도 2A). 형질이입된 지 48에서 72 시간 후, 바이러스유사입자(VLPs)를 포함하는 세포배양액(supematant)은 채취되어지고 0.45 μιη 구멍 크기 막들을 통해 여과되어지고 나아가 SW32 Beckman 로테이터에서 20% 설탕 쿠션을 이용한 초원심분리법 에 의해 농축되고 정제되어질 수 있다 (25,000 rpm, 2 시간, 4°C). 펠릿들은 살균한 엔도톡신 없는 PBS (GIBCO)에서 재부유되어 500 배 농축된 바이러스유사입자 주들을 얻을 수 있다. 총 단백질은 Bradford 정량 검정 키트(Biorad)를 이용한 앨리쿼트(aliquot)의 분석에 의해 결정된다. 정제된 바이러스유사입자은 사용되어질 때까지 -80°C에서 저장된다. 정제된 각 바이러스유사입자는 MMLV-Gag, gB, gH-G 및/또는 MMLV-Gag/pp65 융합 단백질의 발현은, 항체들 gB (gB에 대한 CH 28 쥐 단일클론 항체 ; virusys Corporation; Pereira, L et al. 1984 Virology 139:73-86), gH-G (항-VSV-G tag 항체 P5D4 에 대한 쥐 단일클론 항체 ; Abeam pic) 및 pp65 (UL83/pp65 에 대한 CHI 2 쥐 단일클론 항체; virusys Corportaion; Pereira, L. et al. 1982 Infect Immun 36: 924-932) (도 2B) 에 대한 특정 항체를 이용하여 SDS-Page 및 Western Blot 에 의해 분석되어진다. 항체들은 증강된 chemilluminescence (ECL)을 사용하여 탐지되어진다.

실시예 3: 바이러스유자입자들 (VLPs)의 물리-화학적 특성

바이러스유사입자의 물리-화학적 분석은 Malvern Instrument Zeta-sizer Nano series (ZEN3600)를 사용하는 입자 크기 결정 및 다분산지수 평가를 포함한다. 나노수준의 분석으로부터 얻어진 예시적인 결과들은 도3A 및 도3B에서 보여진다. 예시적인 바이러스유사입자 조성물 (gH-G/pp65 2가의 바이러스유사입자 조성물)은 동일한 재조합 발현 벡터들을 사용하는 두 개의 다른 실험실에서 제조되며, 두 바이러스유사입자 준비들은 직경이 150-180 nm 인 평균 입자 크기를 제공한다. 직경이 150-200 nm 인 입자 크기를 갖는다고 알려진 CMV 비리온 의 크기와 일치한다. (1997 J Pathol 182: 273-281). 0.214-0.240의 낮은 다분산지수 (Pdl)는 물질의 균질성 또는 크기의 좁은 분산을 나타낸다.

실시예 4: 쥐들에서 바이러스유사입자들의 면역원성 및 중화 활성

실시예 2에서 설명되어지는 준비된 바이러스유사입자 조성물은 6-8 주된 암컷 BALB/C 쥐들 (각 실험군마다 최소 6 마리의 동물들)에서 실험되어진다. 쥐들은 200 μ of 바이러스유사입자 조성물로 56일(8주)의 시간 간격으로 두 번 복강내로 접종되어진다. 쥐들은 2가의 gB/Gag/pp65, 2가의 gH-G/Gag/pp65 또는 3가의 gB/gH-G/Gag/pp65 바이러스유사입자 조성물의 10 μg, 25 μg 또는 50 μg 총 단백질로 임상실험되어진다. 쥐들에서의 체액성 면역 반응들을 평가하기 위해, 표 1에서 계획된 연구에서 혈액은 실험군의 모든 쥐들로부터 면역-전 그리고 첫번째 접종-후 및 두번째 접종-후에 0, 2, 3, 4, 6, 8, 9, 10, 12 그리고 14 주 에 각각 채취되어진다.

시편번호	투여량	시편상세	면역화 스케줄(주)
1	50 ㎍	pp65/gB 2가 바이러스유사입자들	0. 8
2	25 ㎍	pp65/gB 2가 바이러스유사입자들	0. 8
3	10 ㎍	pp65/gB 2가 바이러스유사입자들	0. 8
4	50 ㎍	pp65/gH-G 2가 바이러스유사입자들	0. 8
5	25 ㎍	pp65/gH-G 2가 바이러스유사입자들	0. 8
6	10 ㎍	pp65/gH-G 2가 바이러스유사입자들	0. 8
7	50 ㎍	3가 pp65/gB/gH-G 바이러스유사입자들	0. 8
8	25 ㎍	3가 pp65/gB/gH-G 바이러스유사입자들	0. 8
9	10 ㎍	3가 pp65/gB/gH-G 바이러스유사입자들	0. 8

ELISA는 HCMV 균주 AD 169 로 감염된 MRC-5 세포들로부터 유래된 용해물로 코팅되고, 상업적으로 이용가능한 ELISA 플레이트들을 (IBL International) 사용하여 행하여진다. 모든 CMV 관련된 항원들을 함유하고, IgG 면역 반응들을 탐지하는 데에 유용한 Crude 상업 HCMV 용해물은 ELISA에 의한 쥐 혈청 HCMV IgG 내용물을 결정하기 위해 양성조절로서 사용되어진다. 쥐 혈청 (TBS-T/BSA/DMEM 10% FCS 로 희석된)의 연속적인 희석물들은 상기 코팅된 플레이트들과 함께 상온에서 2 시간 동안 배양되어졌다. 상기 플레이트들이 세척된 후, 항-쥐 Horse Radish Peroxidase (HRP)가 결합된 두번째의 항체가 1/10,000의 비율로 첨가된 후, 1 시간 동안 배양되어졌고, 후에 Tetramethylbenzidine (TMB) 기질 용액이 첨가되었다. 상기 반응은 HCL IN의 첨가에 의해 중단되었고, 흡광도는 ELISA microwell 플레이트 판독기에서 450 nm 로 측정되었다. 도 4는 지속되는 항체들과 2가의 및 3가의 바이러스유사입자 조성물 각각의 8 주차의 2번째 접종이후 쥐들의 강한 부스팅에 대한 증거를 보여준다.인간 사이토메갈로바이러스 에 대한 중화 항체 반응들은 미세중화법 검정을 사용하여 결정된다. 인간사이토메갈로바이러스 균주 VR1814 (endothelial cell-tropic CMV 균주 - Revello MG et al. J Gen Virol 82: 1429-1438)의 표준양은 감염 배지 (1% 열처리한 FBS, 1% 아미노산 혼합물, 1 % Penicillin-Streptomycin, Ca+2 및 Mg+2 없는 PBS를 포함하는 DME)와 함께 희석되고, 동일한 부피의 열처리한 혈청의 연속적인 희석물들이 첨가되어지고, 로테이터에서 37°C 로 1시간동안 배양되어진다. 혈청/인간 사이토메갈로바이러스 혼합물들은 24 배양 플레이트들에서 자란 인간 표피 섬유아세포(fibroblasts) (HFF) 또는 망막 색소 상피 세포들 (ARPE-19 세포들) 에 첨가되어지고, 37°C, 5% 이산화탄소(C02) 로 2 시간 동안 배양되어진다. 플레이트들은 PBS로 두 번 세척되고, 37°C, 5% 이산화탄소(C02) 로 48 시간동안 배양된다. 세포들은 4% 파라포름알데하이드로 고정되고, 항-IEl 단일클론 항체 (IE 1/2에 대한 CHI 60 쥐 단일클론 항체 또는 IE1에 대한 CH443 단일클론 항체; virusys Corportaion)와 상온에서 1 시간 동안 반응이 이루어지고, 후에 상온에서 45 분 동안 FITC-labelled 염소 항-쥐 항체와 반응이 이루어진다. IE1를 발현하는 다수의 세포들은 형광 현미경에 의해 결정된다. 모여진 쥐 혈청 (1 :6 희석)은 활성을 중화 데에 0, 3, 6, 8 및 9 주차에 피를 뽑아 두 번씩 실험되어졌다. 도 5는 8 주차에 2가의 및 3가의 바이러스유사입자 조성물로 각각 두 번째로 면역된 후, 쥐들에서의 (섬유아세포에서 검정되어졌다) 중화 항체들의 유도를 나타낸다. 도 6는 8 주차에 각각의 2가의 바이러스유사입자 조성물 로 두 번째로 면역된 후, 쥐들에서의 (외피 세포들에서 검정되어졌다) 중화 항체들의 유도를 나타낸다

다른 연구에서, 실시예 2에서 설명되어지는 것과 같이 준비되어지는 1가의(monovalent) gB-G 바이러스유사입자 조성물은 6-8 주된 암컷 BALB/C 쥐들에서 실험되어진다 (각 실험군당 최소 8마리의 동물들). 쥐들은 200 μ의 바이러스유사입자 조성물로 56일(8주)의 시간 간격으로 두 번 복강내로 접종되어졌다. 쥐들은 한 주사당 20 μg 에 상당하는 양의 gB 내용물로 (ELISA에 의해 측정) 임상실험되어졌다. 쥐들에서의 체액성 면역 반응들을 평가하기 위하여, 표 2에서 계획된 연구에서 혈액은 실험군들의 모든 쥐들에서 연구시작으로부터 면역-전 그리고 첫 번째 접종-후 3주 및 6주차에 그리고 두 번째 면역-전 8 주차에 두 번째 면역-후 9 주차에 각각 채취되어졌다.

시편번호	투여량	시편상세	면역화 스케줄(주)
1	20 ㎍	gB-G 1가 바이러스유사입자들	0, 8
2	20 ㎍	재조합 gB	0, 8

HCMV에 대한 중화 항체 반응들은 섬유아세포에서의 초록 형광 단백질을 발현하는 HCMV 바이러스 (TB40) 및 감염된 (GFP+) HFF 세포들의 유동혈구(flowcytometric) 분석에 기초한 미세중화법 검정을 사용하여 결정된다. 혈청 샘플들에서 중화 항체들의 존재를 평가하기 위하여, 중화 항체들이 HCMV의 감염성을 감소하다시키기에 충분한 시간동안, 혈청은 GFP-발현하는 HCMV와 함께 먼저-배양되어진다. 먼저-배양되어진 혈청과 인간 사이토메갈로바이러스 혼합물의 연속적인 희석들은 HCMV에 의한 감염에 걸리기 쉬운 숙주 세포 (섬유아세포 또는 상피세포) 에 접촉하기 위해 사용된다. 리포터 유전자 구축물를 발현하는 다수의 세포들은 유세포 분석기에 의해 바이러스 제조물의 감염의 역가를 측정하여 결정된다. 도 7은 재조합 gB와 비교하여, 0 주차 및 8 주차에 1가의 gB-G VLPs로 접종이 된 쥐들에 대한 중화 항체 역가들을 나타낸다. 설명되어진 것과 같이 접종전 또는 후의 채취되어진 혈청은 10% 기니 피그 보체의 존재하에서, CMV hyperglobulin, Cytogam™의 양성조절에 관하여 모여지고 실험되어진다. 도 7에서 보여지는 것과 같이, 1가의 gB-G 바이러스유사입자 조성물은 재조합 gB 단백질에 의해 이끌어내어진 것에 비해, 섬유아세포 감염의 빠르고 강력한 중화를 이끌어내었다 .보여지는 것과 같이 (또는 본원 명세서를 읽는 당 분야 통상의 기술자에 의해 이해되어지는 것과 같이), 실험 데이타는 하나의 측면에서, 바이러스유사입자들의 놀랍게도 좋은 활성을 설명한다, 예시적인 것은 재조합 gB와 비교하여 gB-G를 포함하는 바이러스유사입자들가 있다.

다른 연구에서, 실시예 2에서 설명되어지는 것과 같이 제조되어진 2가의 gB/Gag/pp65 바이러스유사입자 조성물은 6-8 주차의 암컷 BALB/C 쥐들에서 실험되어진다 (각 실험군에 최소 4마리 동물들이 있다). 쥐들은 200 μ의 바이러스유사입자 조성물로 56일(8주)의 시간 간격으로 두 번 복강내로 접종되어진다. 쥐들은 2가의 gB/Gag/pp65 바이러스유사입자들로 임상실험되어지고, 비장세포들은 14 일 후에 채취되어졌다. p65 또는 Gag 에 대항한 CTLs의 빈도수를 결정하기 위하여, 농축된(Enriched) CD8+ T 세포들은 (1 :5 비율로) Gag/pp65 또는 Gag를 인코딩하는 플라스미드로 24 시간동안 형질이입되어진 비장세포들에 의해 자극되어진다. 도 8은 HEK 293 세포들에서 발현된 예시적인 바이러스유사입자 (VLP) 조성물로 처리된 쥐들에서의 항원-특이적인 세포독성 T 림프구 (CTL)의 반응을 나타낸 것으로, 이는 CD3+ CD8+ T 세포상의 CFSE 감쇠(decay), 게이팅(gating)에 기초한 세포독성 T 림프구 (CTL)의 빈도(frequency)로 나타내어 지고(A), 또는 증식하는 pp65-특이 CTLs의 빈도로 나타내어 진다(B). 도 8에서 나타내어지는 것과 같이, 2가의 gB/Gag/pp65 바이러스유사입자들은 접종되어진 쥐들에서 pp65 -특이의 CTLs을 이끌어 낸다. .

실시예 5: 토끼들에서 바이러스유사입자들의 면역원성 및 중화 활성

실시예 2에서 설명되어지는 것과 같이 제조되어진 2가의 gB/Gag/pp65 및 gH-G/Gag/pp65 바이러스유사입자 조성물은 6-8 주차의 뉴질랜드 흰 토끼들에서 실험되어진다 (각 실험군에 최소 6마리 동물들이 있다). 토끼들은 0.5 ml의 바이러스유사입자 조성물로 0일차 및 56일차(8주) 및 168일차(24주)에 총 세 번 근육내로 접종되었다. 토끼들은 25 μg 또는 50 μg 또는 100 μg 총 단백질 로 2가의 gB/Gag/pp65, 2가의 gH-G/Gag/pp65 또는 3가의 gB/gH-G/Gag/pp65 (2가의 gB/Gag/pp65과 gH-G/Gag/pp65 이 1 : 1 비율로 섞인) 바이러스유사입자 조성물로 임상실험되어졌다. 토끼들에서의 체액성 면역 반응들을 평가하기 위해, 표 3에서 계획된 연구에서 혈액은 상기 연구 그룹들의 모든 토끼들로부터 면역-전 그리고 실험 시작일로부터 첫번째 접종-후 2, 4, 6 및 8 주차에 그리고 두 번째 접종-후 10, 13, 16, 20 및 24 주차에 그리고 세번째 접종-후 26 및 28 주차에 채취되어졌다.

시편번호	투여량	시편상세	면역화스케줄(주)
1	100 ㎍	gB/pp65 2가 바이러스유사입자들	0, 8, 24
2	50 ㎍	gB/pp65 2가 바이러스유사입자들	0, 8, 24
3	25 ㎍	gB/pp65 2가 바이러스유사입자들	0, 8, 24
4	100 ㎍	gH-G/pp65 2가 바이러스유사입자들	0, 8, 24
5	25 ㎍	gH-G/pp65 2가 바이러스유사입자들	0, 8, 24
6	각 100 ㎍	gB/pp65 2가 바이러스유사입자들 + gH-G/pp65 바이러스유사입자들 (1:1 비율)	0, 8, 24
7	각 25 ㎍	gB/pp65 2가 바이러스유사입자들 + gH-G/pp65 바이러스유사입자들 (1:1 비율)	0, 8, 24

개체 토끼 혈청은 재조합 gB 항원에 대항한 활성을 위해 ELISA (도 9A 의 좌측에 표시되어진다)를 사용해 실험되어진다. HCMV에 대한 중화 항체 반응들은 실시예 4 (도 9B의 우측에 표시되어진다)에서 설명되어지는 것과 같이 섬유아세포에서의 초록 형광 단백질을 발현하는 HCMV 바이러스 (TB40) 및 감염된 (GFP+) HFF 세포들의 유동혈구(flowcytometric) 분석에 기초한 미세중화법 검정을 사용하여 결정된다. 설명되어지는 것과 같이 중화 활성을 위해, 접종 전 및 접종 후에 채취되어진 토끼 혈청은 GFP를 발현하는 HCMV 대항한 보체의 존재 하에 HFF 섬유아세포에서 CMV hyperglobulin, Cytogam™ 양성조절에 관하여 모여지고 실험되어진다. 정지점 역가들은 표시되어지고, CMV-감염된 세포들에서 대응하는(matched) 접종 전 혈청과 비교하여 50%의 감소를 나타낸다 (도 9A의 좌측에 표시되어진다). 감염된 (GFP+) 세포들의 유동혈구 분석 동안 50,000 세포들은 채취되어졌다 (도 9B 의 우측에 표시되어진다). 도 9에서 보여지는 것과 같이, 2가의 gB/Gag/pp65 바이러스유사입자 조성물은 토끼들에서 섬유아세포 감염에 대항하여, 바인딩의 높은 역가 및 (A) 중화 항체의 높은 역가 (B) 반응들을 나타내었다.모여진 토끼 혈청은 또한 HCMV에 대해 외피 세포들에서 gFP-발현 HCMV 바이러스 (Towne TS15-rR) 및 감염된 (GFP+) ARPE-19 세포들의 유동혈구(흐름cytometric) 분석에 기초한 미세중화법 검정을 사용하여 중화 항체 반응들에 대해 실험되어진다. 설명되어진 것과 같이, 토끼의 접종전- 또는 후의 채취되어진 혈청은 발현하는 HCMV에 대항하는 보체의 존재 하에서 CMV hyperglobulin, Cytogam™의 양성조절에 관하여 중화 활성을 위해 모여지고 GFP 실험되어진다. 도 10에서 보여지는 것과 같이, 놀랍게도, 2가의 gB/Gag/pp65 및 2가의 gH-G/Gag/pp65 바이러스유사입자 조성물의 조합은 gB/Gag/pp65 또는 gH/Gag/pp65과 비교하여, 토끼들에서 외피 세포 감염에 대항하여 상승적(synergistic) 이고 그 이상의 빠른 중화 항체 반응을 이끌어 냈다.

보여지는 것과 같이 (또는 본원 명세서를 읽는 당 분야 통상의 기술자에 의해 이해되어지는 것과 같이), 실험 데이타는 하나의 측면에서, 바이러스유사입자들의 놀랍게도 좋은 활성을 설명한다, 예시적인 것은 gB/Gag/pp65를 포함하는 바이러스유사입자들 또는 gH-G/Gag/pp65를 포함한는 바이러스유사입자들과 비교하여, gB/Gag/pp65를 포함하는 바이러스유사입자들 및 gH-G/Gag/pp65를 포함하는 바이러스유사입자들의 조합을 나타낸다.

실시예 6: 바이러스유자입자들의 대량 생산 및 정제

바이러스유사입자들은 다음과 같이 제조되고 정제되어질 수 있다. CHO 세포들은 미리 결정된 농도들 및 비율들에서 선택되어지는 플라스미드들을 이용해 1.5E06과 2.0E06 cells/mL 사이의 세포 밀도에서 형질이입된다 (실시예 1에서 설명되어지는 것과 같이 제조되어진다). 스터퍼(Stuffer) DNA는 총 DNA 밀도가 1 μg/mL 셀 컬쳐까지 되기 위하여 첨가되어진다. 형질이입에 사용되어지는 플라스미드들은 먼저 MaxiPrep 또는 GigaPrep 플라스미드 정제 키트 (Qiagen)를 이용하여 정제되어질 수 있다. DNA를 세포들에 전달하기 위하여 형질이입에 사용되는 PEIMAX는 6: 1 (PEL DNA wt/wt)의 비율로 제공되어졌다. 세포들은 72 시간동안 배양되어 졌고, 상기 배양들은 1 L 들이 병에서 Beckman Coulter의 JS-4.2A 로테이터를 사용하여, 4000 rpm에서 20 분 동안 원심분리되어 졌다. 상층액은 0.8/0.45 μιη 필터 (AcroPak 500 Capsule, Pall)를 통하여 여과되어졌다. 여과되어진 상층액은 접선 유동 여과장치 (접선유동여과(TFF)) 에 의해 농축되어졌고, 히스티딘-포함하는 완충용액에 대항하여 철저여과되어진다. 철저여과되어진 물질은 음이온 교환 크로마토그래피 상 (AEX) 에 적재되고, 통과액은 채취되어졌다. 당해 통과액은 후에 0.45 μιη를 통해 살균, 여과되어져서 다른 부피들로 표본되어졌다.

접선유동여과(TFF)과정은 스테인리스-스틸의 덮개로 덮은 상태에서, 두 접선유동여과(TFF) 막들 (Pellicon 2 Mini 500 kDa cutoff, 0.1 m2 표면 영역)을 0.5 M NaOH에서 병렬로 고정한 후, 하룻 밤의 위생처리를 포함한다. 투과부 뿐만 아니라 농축액에도 중성의 pH에 물을 부은 이후, 인산 완충용액 (PBS)은 당해 막을 평형시키기 위하여 사용되어진다. 여과되어진 상층액은 접선유동여과(TFF) 농축액 재순환 루프에 적재되어?병?. 시작되는 입구의 압력은 10.5 psi 이고, 400 mL/min의 침투 흐름 비율 인데, 마지막의 밀도에서 약 200 mL/min로 감소한다. 약 10배에서 20 배의 밀도가 된 이후, 150 mM NaCl 이 첨가되고, pH가 5.5 인, 다섯 부피의 20 mM 히스티딘을 사용하는 투석여과가 행하여진다. 침투 흐름이 닫혀진 상태에서 다른 5 분 동안 동일한 부피의 히스티딘-완충용액이 재순환된 후, 철저여과되어진 물질은 채취되어졌고 동일한 부피의 긔의 완충용액으로 씻겨졌다. 그리하여, 농축액은 이전에 채취되어졌던 농축액과 함께 채취되어졌고 모여졌다. 막들의 기능을 유지시키기 위하여, 막들은 PBS로 10 분 동안; 0.5 M NaOH로 40 분 동안 (침투 및 농축을 통해 200 mL를 버린 후); 그리고 마지막으로 농축액 및 침투액을 중성의 pH로 하기 위하여 물로 씻겨졌다. 막들은 냉장고에 0.1 M NaOH 용액으로 저장된다.

AEX 상 크로마토그래피는 DNA 내용물을 감소하다 하기 위하여 이용되며, 평형을 위해서 평형 완충용액 (20 mM 히스티딘 +150 mM NaCl , pH 5.5)과 함께 20 mL HiLoad 16/10 Sepharose HP 상을 사용하여 1.6 mL/min의 흐름 비율로 이용된다. 그리고 3.2 mL/min의 흐름 비율로 적재하고, 헹구고, 박리의 단계를 거친다. 청소 절차들은 0.8 mL/min 로 행하여진다. 도표 기록기는 280 nm에서의 UV 흡광도를 관찰하기 위하여 사용되어진다. 그래디프랙 크로마토그래피 시스템은 (GE Healthcare) 소독되어진 후 사용되어진다. 첫번째 에탄올 (20% v/v 저장 완충용액으로서 상에서)은 Super Q Water의 (낮은 엔도톡신) 5 상 부피들을 사용하는 상으로부터 제거되어진다. 평형 완충용액은 5 상 부피들을 위해 전달되며, 상을 맞추기 위한 박리 완충용액 (20 mM 히스티딘+1000 mM NaCl , pH 5.5)의 5 상 부피들이 뒤따른다. 5 상 부피의 평형 완충용액은 다시 적재를 위한 상을 준비하기 위해 전달된다. 적재는 3.2 mL/min로 행하여졌으며 이후에 상기 상은 평형 완충용액의 5 상 부피로 세척되어졌다. 통과액은 UV 피크의 발생으로부터 UV 피크가 UV 흡광도 최대치의 약 10%가 떨어질 때까지 물질이 적재되는 동안 채취되어졌다. 상은 박리 완충용액 (20 mM 히스티딘+1000 mM NaCl , pH 5.5)의 5 상 부피에 의해 박리되어졌고 피크는 측정되어졌다. 이후에 강하게 부착된 단백질들 및 핵산들 제거하기 위해 5 상 부피의 다른 박리 완충용액 (20 mM 히스티딘 +2000 mM NaCl , pH 5.5) 으로 다시 박리되어졌으며 피크는 측정되어졌다. 상은 이후에 침전된 단백질들을 제거하기 위하여 4 상 부피들의 1M NaOH 로 0.8 mL/min 속도로 세척되어졌다. 상은 이후에 물로 0.8 ml/min 속도로 씻겨져 중성 pH (보통은 4-5 상의 부피)가 되었다. 상은 이후에 지방단백질들 또는 지방을 (2 상 부피) 제거하기 위하여 20% 에탄올 (4 상 부피로 0.8 mL/min 속도로) 에 의해 통과되어졌다. 두번째 주기를 다시 시작하기 위하여, 상기 단계에서 당해 상은 저장되거나 물 (4 상 부피) 로 씻겨졌다.

도 11은 정제된 CHO 세포들로부터 제조되고 접선유동여과(TFF) (도 11 A) 및 AEX (도 1 IB) 정제 방법들이 처리된 후, 전자 현미경 분석법에 의해 음성염색된gB-G 1가의 바이러스유사입자의 이미지들을 나타낸다. 도 11에서 보여지는 것과 같이, 온전한 gB-G 1가의 바이러스유사입자들은 접선유동여과(TFF) (도 11 A) 및 AEX 정제 (도 11B) 이후에 존재하게 된다.

실시예 7: 토끼들에서의 정제된 바이러스유사입자들의 면역원성 및 중화 활성

실시예 6에서 설명되어지는 것과 같이 제조되어진 1가의 gB-G 바이러스유사입자 조성물은 6-8 주된 뉴질랜드 흰 토끼들 (각 실험군마다 최소 6 마리의 동물들)에서 실험되어진다. 토끼들은 0.5 ml (50 μg gB 내용물)의 바이러스유사입자 조성물로 0일차 및 56일차(8주) 및 168일차(24주)에 총 세 번 근육내로 접종되었다. 토끼들에서의 체액성 면역 반응들을 평가하기 위하여, 표 4에서 계획된 연구에서 혈액은 상기 연구 그룹들의 모든 토끼들로부터 면역-전 그리고 실험 시작일로부터 첫번째 접종-후 2, 4, 6 및 8 주차에 그리고 두 번째 접종-후 10, 13, 16, 20 및 24 주차에 그리고 세번째 접종-후 26 및 28 주차에 채취되어졌다.

시편번호	투여량	시편상세	면역화스케쥴(주)
1	50㎍ gB content	gB-G 1가 바이러스유사입자들 (TFF ＆ AEX purified)	0, 8, 24

도 12는 섬유아세포 감염에 대해, 접선유동여과(TFF)/ AEX 로 정제되어진 CHO 세포에서 제조된 gB-G 1가의 바이러스유사입자들로 접종된 토끼들의 혈청 에 의해 이끌어 내어진 강력한 중화를 나타낸다 ("gB eVLPs" in 도 12). 이러한 중화는 양성조절 CMV hyperglobulin, Cytogam™ 으로 달성된 것과 비교하여 더 뛰어나다. 도 12는 또한 for Towne 백신 및 보조의 gB 서브유닛 백신 (gB+MF59™)의 공지된 중화 역가 데이터를 포함한다. (Cui X et al. 2008 vaccine 26:5760-5766).도 13은 외피 세포 감염에 대해, 접선유동여과(TFF)/ AEX 로 정제되어진 CHO 세포에서 제조된 gB-G 1가의 바이러스유사입자들로 접종된 토끼들의 혈청 에 의해 이끌어 내어진 강력한 중화를 나타낸다 ("gB eVLPs" in 도 13). 상기 중화는 양성조절 CMV hyperglobulin, Cytogam™ 에 의해 성취된 것과는 차별화된다. 도 13 또한 Towne 백신 및 보조의 gB 서브유닛(subunit) 백신 (gB+MF59™)의 공지된 중화 역가 데이터를 포함한다. (Cui X et al. 2008 vaccine 26:5760-5766).

도 14는 접선유동여과(TFF)/ AEX 로 정제되어진 CHO 세포에서 제조된 gB-G 1가의 바이러스유사입자들로 접종된 토끼들에서 이끌어 내어진 항체들의 결합활성지수를 나타낸다. 모여진 토끼 혈청 및 양성조절 CMV hyperglobulin, Cytogam™은 1 :600,000의 비율로 희석되어 졌고, 전체 길이 재조합 gB 항원에 대항하여 5M 요소가 있거나 또는 없는 상태에서 ELISA 방법으로 실험되어졌다. 항체의 결합 활성 정도는 이전에 설명되어진 것과 같이 결정되어 졌다 (Marshall BC and Adler S 2003 Viral Immunol 16:491-500). 도 14에서 보여지는 것과 같이, 접선유동여과(TFF)/ AEX 로 정제되어진 CHO 세포에서 제조된 gB-G 1가의 바이러스유사입자들로 접종된 토끼들에서 높은 결합 활성을 갖는 중화 항체들의 빠른 유도가 야기 되었다. 최대의 항체 결합 활성은 두 gB-G 바이러스유사입자 면역들 후에 달성되어 졌다.

다른 구체예들에 있어서

개시된 것들의 다른 구체예들은, 본원 명세서로부터 또는 본원 명세서에서 개시된 것들의 관습 등에 의해서 당 분야 통상의 기술자에 의해 자명할 것이다. 본원 명세서의 상세한 설명 및 실시예들은 뒤따르는 청구항들에 의해 나타내어 지는 발명의 진실된 범위 내에서 예시적인 것에 불과하다. 본원에서 언급된 임의의 참조문헌의 내용은 이의 전반적인 내용이 본원에 참조로서 인용된다.

SEQ ID NO: l는 MMLV Gag 아미노산 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:2는 MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:3 코돈 최적화된 MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:4 나타낸다 MMLV Gag - CMV pp65 아미노산 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:5 나타낸다 an MMLV Gag - CMV pp65 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:6는 코돈 최적화된 MMLV Gag - CMV pp65 뉴클레오타이드 서열.
SEQ ID NO:7은 HCMV gB 아미노산 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 8는 HCMV gB 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:9는 코돈 최적화된 HCMV gB 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 10는 HCMV gB-G 아미노산 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 11는 HCMV gB - G 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 12는 코돈 최적화된 HCMV gB - G 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 13는 인간 사이토메갈로바이러스 gH 아미노산 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 14는 인간 사이토메갈로바이러스 gH 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 15는 코돈 최적화된 인간 사이토메갈로바이러스 gH 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 16는 인간 사이토메갈로바이러스 gH - G 아미노산 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 17는 인간 사이토메갈로바이러스 gH - G 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 18는 코돈 최적화된 인간 사이토메갈로바이러스 gH - G 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO: 19는 Propol II 발현 플라스미드는 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:20는 인간 사이토메갈로바이러스 gH - HCMV gB TM/CTD 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:21는 코돈 최적화된 MMLV Gag 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.
SEQ ID NO:22는 코돈 최적화된 MMLV Gag - CMV pp65 뉴클레오타이드 서열을 나타낸다.

<110> VARIATION BIOTECHNOLOGIES INC. <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATMENT OF CYTOMEGALOVIRUS <130> 40650 <150> US 61/558800 <151> 2011-11-11 <150> US 61/654157 <151> 2012-06-01 <160> 22 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 537 <212> PRT <213> MMLV Gag Amino Acid Sequence <400> 1 Met Gly Gln Thr Val Thr Thr Pro Leu Ser Leu Thr Leu Gly His Trp 1 5 10 15 Lys Asp Val Glu Arg Ile Ala His Asn Gln Ser Val Asp Val Lys Lys 20 25 30 Arg Arg Trp Val Thr Phe Cys Ser Ala Glu Trp Pro Thr Phe Asn Val 35 40 45 Gly Trp Pro Arg Asp Gly Thr Phe Asn Arg Asp Leu Ile Thr Gln Val 50 55 60 Lys Ile Lys Val Phe Ser Pro Gly Pro His Gly His Pro Asp Gln Val 65 70 75 80 Pro Tyr Ile Val Thr Trp Glu Ala Leu Ala Phe Asp Pro Pro Pro Trp 85 90 95 Val Lys Pro Phe Val His Pro Lys Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Ser 100 105 110 Ala Pro Ser Leu Pro Leu Glu Pro Pro Arg Ser Thr Pro Pro Arg Ser 115 120 125 Ser Leu Tyr Pro Ala Leu Thr Pro Ser Leu Gly Ala Lys Pro Lys Pro 130 135 140 Gln Val Leu Ser Asp Ser Gly Gly Pro Leu Ile Asp Leu Leu Thr Glu 145 150 155 160 Asp Pro Pro Pro Tyr Arg Asp Pro Arg Pro Pro Pro Ser Asp Arg Asp 165 170 175 Gly Asn Gly Gly Glu Ala Thr Pro Ala Gly Glu Ala Pro Asp Pro Ser 180 185 190 Pro Met Ala Ser Arg Leu Arg Gly Arg Arg Glu Pro Pro Val Ala Asp 195 200 205 Ser Thr Thr Ser Gln Ala Phe Pro Leu Arg Ala Gly Gly Asn Gly Gln 210 215 220 Leu Gln Tyr Trp Pro Phe Ser Ser Ser Asp Leu Tyr Asn Trp Lys Asn 225 230 235 240 Asn Asn Pro Ser Phe Ser Glu Asp Pro Gly Lys Leu Thr Ala Leu Ile 245 250 255 Glu Ser Val Leu Ile Thr His Gln Pro Thr Trp Asp Asp Cys Gln Gln 260 265 270 Leu Leu Gly Thr Leu Leu Thr Gly Glu Glu Lys Gln Arg Val Leu Leu 275 280 285 Glu Ala Arg Lys Ala Val Arg Gly Asp Asp Gly Arg Pro Thr Gln Leu 290 295 300 Pro Asn Glu Val Asp Ala Ala Phe Pro Leu Glu Arg Pro Asp Trp Asp 305 310 315 320 Tyr Thr Thr Gln Ala Gly Arg Asn His Leu Val His Tyr Arg Gln Leu 325 330 335 Leu Leu Ala Gly Leu Gln Asn Ala Gly Arg Ser Pro Thr Asn Leu Ala 340 345 350 Lys Val Lys Gly Ile Thr Gln Gly Pro Asn Glu Ser Pro Ser Ala Phe 355 360 365 Leu Glu Arg Leu Lys Glu Ala Tyr Arg Arg Tyr Thr Pro Tyr Asp Pro 370 375 380 Glu Asp Pro Gly Gln Glu Thr Asn Val Ser Met Ser Phe Ile Trp Gln 385 390 395 400 Ser Ala Pro Asp Ile Gly Arg Lys Leu Glu Arg Leu Glu Asp Leu Lys 405 410 415 Lys Thr Leu Gly Asp Leu Val Arg Glu Ala Glu Lys Ile Phe Asn Lys 420 425 430 Arg Glu Thr Pro Glu Glu Arg Glu Glu Arg Ile Arg Arg Glu Thr Glu 435 440 445 Glu Lys Glu Glu Arg Arg Arg Thr Glu Asp Glu Gln Lys Glu Lys Glu 450 455 460 Arg Asp Arg Arg Arg His Arg Glu Met Ser Lys Leu Leu Ala Thr Val 465 470 475 480 Val Ser Gly Gln Lys Gln Asp Arg Gln Gly Gly Glu Arg Arg Arg Ser 485 490 495 Gln Leu Asp Arg Asp Gln Cys Ala Tyr Cys Lys Glu Lys Gly His Trp 500 505 510 Ala Lys Asp Cys Pro Lys Lys Pro Arg Gly Pro Arg Gly Pro Arg Pro 515 520 525 Gln Thr Ser Leu Leu Thr Leu Asp Asp 530 535 <210> 2 <211> 1614 <212> DNA <213> MMLV Gag Nucleotide Sequence <400> 2 atgggccaga ctgttaccac tcccttaagt ttgaccttag gtcactggaa agatgtcgag 60 cggatcgctc acaaccagtc ggtagatgtc aagaagagac gttgggttac cttctgctct 120 gcagaatggc caacctttaa cgtcggatgg ccgcgagacg gcacctttaa ccgagacctc 180 atcacccagg ttaagatcaa ggtcttttca cctggcccgc atggacaccc agaccaggtc 240 ccctacatcg tgacctggga agccttggct tttgaccccc ctccctgggt caagcccttt 300 gtacacccta agcctccgcc tcctcttcct ccatccgccc cgtctctccc ccttgaacct 360 cctcgttcga ccccgcctcg atcctccctt tatccagccc tcactccttc tctaggcgcc 420 aaacctaaac ctcaagttct ttctgacagt ggggggccgc tcatcgacct acttacagaa 480 gaccccccgc cttataggga cccaagacca cccccttccg acagggacgg aaatggtgga 540 gaagcgaccc ctgcgggaga ggcaccggac ccctccccaa tggcatctcg cctacgtggg 600 agacgggagc cccctgtggc cgactccact acctcgcagg cattccccct ccgcgcagga 660 ggaaacggac agcttcaata ctggccgttc tcctcttctg acctttacaa ctggaaaaat 720 aataaccctt ctttttctga agatccaggt aaactgacag ctctgatcga gtctgttctc 780 atcacccatc agcccacctg ggacgactgt cagcagctgt tggggactct gctgaccgga 840 gaagaaaaac aacgggtgct cttagaggct agaaaggcgg tgcggggcga tgatgggcgc 900 cccactcaac tgcccaatga agtcgatgcc gcttttcccc tcgagcgccc agactgggat 960 tacaccaccc aggcaggtag gaaccaccta gtccactatc gccagttgct cctagcgggt 1020 ctccaaaacg cgggcagaag ccccaccaat ttggccaagg taaaaggaat aacacaaggg 1080 cccaatgagt ctccctcggc cttcctagag agacttaagg aagcctatcg caggtacact 1140 ccttatgacc ctgaggaccc agggcaagaa actaatgtgt ctatgtcttt catttggcag 1200 tctgccccag acattgggag aaagttagag aggttagaag atttaaaaaa caagacgctt 1260 ggagatttgg ttagagaggc agaaaagatc tttaataaac gagaaacccc ggaagaaaga 1320 gaggaacgta tcaggagaga aacagaggaa aaagaagaac gccgtaggac agaggatgag 1380 cagaaagaga aagaaagaga tcgtaggaga catagagaga tgagcaagct attggccact 1440 gtcgttagtg gacagaaaca ggatagacag ggaggagaac gaaggaggtc ccaactcgat 1500 cgcgaccagt gtgcctactg caaagaaaag gggcactggg ctaaagattg tcccaagaaa 1560 ccacgaggac ctcggggacc aagaccccag acctccctcc tgaccctaga tgac 1614 <210> 3 <211> 1614 <212> DNA <213> Codon Optimized MMLV Gag Nucleotide Sequence <400> 3 atgggacaga cagtcactac acccctgagc ctgacactgg gacattggaa agacgtggag 60 aggattgcac ataaccagag cgtggacgtg aagaaacgga gatgggtcac cttttgctcc 120 gccgagtggc caacattcaa tgtgggatgg ccccgagatg gcaccttcaa ccgggacctg 180 atcactcagg tgaagatcaa ggtcttctct ccaggacccc acggccatcc agatcaggtg 240 ccctacatcg tcacctggga ggctctggca tttgaccccc ctccatgggt gaagcctttc 300 gtccacccaa aaccacctcc accactgcct ccatctgccc ctagtctgcc actggaaccc 360 cctcggtcaa ccccacccag aagctccctg tatcccgcac tgacacctag cctgggggcc 420 aagcctaaac cacaggtgct gtctgatagt ggcgggcctc tgatcgatct gctgaccgag 480 gaccctccac cataccgcga cccacgacct ccaccaagcg accgggacgg aaacggagga 540 gaggctacac ccgcaggcga agcccccgat cctagtccaa tggcatcaag gctgcgcggg 600 aggcgcgaac ctccagtggc cgactcaacc acaagccagg catttccact gagggccggg 660 ggaaatggac agctccagta ttggcccttc tctagttcag atctgtacaa ctggaagaac 720 aataacccta gcttcagcga ggacccaggc aaactgaccg ccctgatcga atccgtgctg 780 attacccacc agcccacatg ggacgattgt cagcagctcc tgggcaccct gctgaccgga 840 gaggaaaagc agagagtgct gctggaggct aggaaagcag tccgcgggga cgatggaagg 900 ccaacacagc tccccaatga ggtggatgcc gctttccctc tggaacggcc agattgggac 960 tatactaccc aggctggacg caaccacctg gtgcattacc ggcagctcct gctggctgga 1020 ctgcagaatg cagggcgcag ccccactaac ctggccaagg tgaaaggaat cacccagggc 1080 cccaatgagt ccccttctgc attcctggag cggctgaagg aagcctaccg acggtatact 1140 ccctacgatc ctgaggaccc aggccaggaa accaacgtga gtatgagctt catctggcag 1200 tccgctcctg acattggccg aaaactggag cggctggaag atctgaagaa caagaccctg 1260 ggcgacctgg tgcgggaggc agaaaagatc ttcaacaaaa gggagactcc agaggaacgg 1320 gaggaaagaa ttagaaggga aacagaggaa aaggaggaac gccgacggac tgaggatgaa 1380 cagaaggaga aagaaagaga ccggcggcgg caccgggaga tgtctaagct gctggccacc 1440 gtggtcagtg gccagaaaca ggatcgacag ggaggagagc gacggagaag ccagctcgat 1500 cgggaccagt gcgcctattg taaggaaaaa gggcattggg ctaaggactg ccccaagaaa 1560 cccagaggcc cacgcgggcc ccgacctcag acttccctgc tgaccctgga cgat 1614 <210> 4 <211> 1098 <212> PRT <213> MMLV Gag - CMV pp65 Amino Acid Sequence <400> 4 Met Gly Gln Thr Val Thr Thr Pro Leu Ser Leu Thr Leu Gly His Trp 1 5 10 15 Lys Asp Val Glu Arg 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Arg Ile Arg Arg Glu Thr 435 440 445 Glu Glu Lys Glu Glu Arg Arg Arg Thr Glu Asp Glu Gln Lys Glu Lys 450 455 460 Glu Arg Asp Arg Arg Arg His Arg Glu Met Ser Lys Leu Leu Ala Thr 465 470 475 480 Trp Ser Gly Gln Lys Gln Asp Arg Gln Gly Gly Glu Arg Arg Arg Ser 485 490 495 Gln Leu Asp Arg Asp Gln Cys Ala Tyr Cys Lys Glu Lys Gly His Trp 500 505 510 Ala Lys Asp Cys Pro Lys Lys Pro Arg Gly Pro Arg Gly Pro Arg Pro 515 520 525 Gln Thr Ser Leu Leu Thr Leu Asp Asp Cys Glu Ser Arg Gly Arg Arg 530 535 540 Cys Pro Glu Met Ile Ser Val Leu Gly Pro Ile Ser Gly His Val Leu 545 550 555 560 Lys Ala Val Phe Ser Arg Gly Asp Thr Pro Val Leu Pro His Glu Thr 565 570 575 Arg Leu Leu Gln Thr Gly Ile His Val Arg Val Ser Gln Pro Ser Leu 580 585 590 Ile Leu Val Ser Gln Tyr Thr Pro Asp Ser Thr Pro Cys His Arg Gly 595 600 605 Asp Asn Gln Leu Gln Val Gln His Thr Tyr Phe Thr Gly Ser Glu Val 610 615 620 Glu Asn Val Ser Val Asn Val His Asn Pro Thr Gly Arg Ser Ile Cys 625 630 635 640 Pro Ser Gln Glu Pro Met Ser Ile Tyr Val 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Gly Gln Gln Ile Phe 850 855 860 Leu Glu Val Gln Ala Ile Arg Glu Thr Val Glu Leu Arg Gln Tyr Asp 865 870 875 880 Pro Val Ala Ala Leu Phe Phe Phe Asp Ile Asp Leu Leu Leu Gln Arg 885 890 895 Gly Pro Gln Tyr Ser Glu His Pro Thr Phe Thr Ser Gln Tyr Arg Ile 900 905 910 Gln Gly Lys Leu Glu Tyr Arg His Thr Trp Asp Arg His Asp Glu Gly 915 920 925 Ala Ala Gln Gly Asp Asp Asp Val Trp Thr Ser Gly Ser Asp Ser Asp 930 935 940 Glu Glu Leu Val Thr Thr Glu Arg Lys Thr Pro Arg Val Thr Gly Gly 945 950 955 960 Gly Ala Met Ala Gly Ala Ser Thr Ser Ala Gly Arg Lys Arg Lys Ser 965 970 975 Ala Ser Ser Ala Thr Ala Cys Thr Ala Gly Val Met Thr Arg Gly Arg 980 985 990 Leu Lys Ala Glu Ser Thr Val Ala Pro Glu Glu Asp Thr Asp Glu Asp 995 1000 1005 Ser Asp Asn Glu Ile His Asn Pro Ala Val Phe Thr Trp Pro Pro Trp 1010 1015 1020 Gln Ala Gly Ile Leu Ala Arg Asn Leu Val Pro Met Val Ala Thr Val 1025 1030 1035 1040 Gln Gly Gln Asn Leu Lys Tyr Gln Glu Phe Phe Trp Asp Ala Asn Asp 1045 1050 1055 Ile Tyr Arg Ile Phe Ala Glu Leu 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acctcgcagg cattccccct ccgcgcagga 660 ggaaacggac agcttcaata ctggccgttc tcctcttctg acctttacaa ctggaaaaat 720 aataaccctt ctttttctga agatccaggt aaactgacag ctctgatcga gtctgttctc 780 atcacccatc agcccacctg ggacgactgt cagcagctgt tggggactct gctgaccgga 840 gaagaaaaac aacgggtgct cttagaggct agaaaggcgg tgcggggcga tgatgggcgc 900 cccactcaac tgcccaatga agtcgatgcc gcttttcccc tcgagcgccc agactgggat 960 tacaccaccc aggcaggtag gaaccaccta gtccactatc gccagttgct cctagcgggt 1020 ctccaaaacg cgggcagaag ccccaccaat ttggccaagg taaaaggaat aacacaaggg 1080 cccaatgagt ctccctcggc cttcctagag agacttaagg aagcctatcg caggtacact 1140 ccttatgacc ctgaggaccc agggcaagaa actaatgtgt ctatgtcttt catttggcag 1200 tctgccccag acattgggag aaagttagag aggttagaag atttaaaaaa caagacgctt 1260 ggagatttgg ttagagaggc agaaaagatc tttaataaac gagaaacccc ggaagaaaga 1320 gaggaacgta tcaggagaga aacagaggaa aaagaagaac gccgtaggac agaggatgag 1380 cagaaagaga aagaaagaga tcgtaggaga catagagaga tgagcaagct attggccact 1440 gtcgttagtg gacagaaaca ggatagacag ggaggagaac gaaggaggtc ccaactcgat 1500 cgcgaccagt gtgcctactg caaagaaaag gggcactggg ctaaagattg tcccaagaaa 1560 ccacgaggac ctcggggacc aagaccccag acctccctcc tgaccctaga tgactgtgag 1620 tcgcgcggtc gccgttgtcc cgaaatgata tccgtactgg gtcccatttc ggggcacgtg 1680 ctgaaagccg tgtttagtcg cggcgacacg ccggtgctgc cgcacgagac gcgactcctg 1740 cagacgggta tccacgtgcg cgtgagccag ccctcgctga tcctggtgtc gcagtacacg 1800 cccgactcga cgccatgcca ccgcggcgac aatcagctgc aggtgcagca cacgtacttt 1860 acgggcagcg aggtggagaa cgtgtcggtc aacgtgcaca accccacggg ccggagcatc 1920 tgccccagcc aagagcccat gtcgatctat gtgtacgcgc tgccgctcaa gatgctgaac 1980 atccccagca tcaacgtgca ccactacccg tcggcggccg agcgcaaaca ccgacacctg 2040 cccgtagctg acgctgtgat tcacgcgtcg ggcaagcaga tgtggcaggc gcgtctcacg 2100 gtctcgggac tggcctggac gcgtcagcag aaccagtgga aagagcccga cgtctactac 2160 acgtcagcgt tcgtgtttcc caccaaggac gtggcactgc ggcacgtggt gtgcgcgcac 2220 gagctggttt gctccatgga gaacacgcgc gcaaccaaga tgcaggtgat aggtgaccag 2280 tacgtcaagg tgtacctgga gtccttctgc gaggacgtgc 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tgcacccaac tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt 4020 gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt 4080 gaatactcat actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca 4140 tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat 4200 ttccccgaaa agtgccacct aaattgtaag cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa 4260 tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa 4320 atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact 4380 attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc 4440 actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa 4500 tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc 4560 gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt 4620 cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtccca 4680 ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt 4740 acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt 4800 ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgagcgc gcgtaatacg actcactata 4860 gggcgaattg gagctccacc gcggtggcgg ccgct 4895 <210> 20 <211> 2622 <212> DNA <213> HCMV gH - HCMV gB TM/CTD Nucleotide Sequence <400> 20 atgcggccag gcctcccctc ctacctcatc gtcctcgccg tctgtctcct cagccaccta 60 ctttcgtcac gatatggcgc agaagccata tccgaaccgc tggacaaagc gtttcaccta 120 ctgctcaaca cctacgggag acccatccgc ttcctgcgtg aaaacaccac ccagtgtacc 180 tacaatagca gcctccgtaa cagcacggtc gtcagggaaa acgccatcag tttcaacttt 240 ttccaaagct ataatcaata ctatgtattc catatgcctc gatgtctttt tgcgggtcct 300 ctggcggagc agtttctgaa ccaggtagat ctgaccgaaa ccctggaaag ataccaacag 360 agacttaaca cttacgcgct ggtatccaaa gacctggcca gctaccgatc tttttcgcag 420 cagctaaagg cacaggacag cctaggtgaa cagcccacca ctgtgccacc acccattgac 480 ctgtcaatac ctcacgtttg gatgccaccg caaaccactc cacacggctg gacagaatca 540 cataccacct caggactaca ccgaccacac tttaaccaga cctgtatcct ctttgatgga 600 cacgatctac tattcagcac cgtcacacct tgtttgcacc aaggctttta cctcatcgac 660 gaactacgtt acgttaaaat aacactgacc gaggacttct tcgtagttac ggtgtccata 720 gacgacgaca cacccatgct gcttatcttc ggccatcttc cacgcgtact ctttaaagcg 780 ccctatcaac gcgacaactt tatactacga caaactgaaa aacacgagct cctggtgcta 840 gttaagaaag atcaactgaa ccgtcactct tatctcaaag acccggactt tcttgacgcc 900 gcacttgact tcaactacct ggacctcagc gcactactac gtaacagctt tcaccgttac 960 gccgtggatg tactcaaaag cggtcgatgt cagatgctgg accgccgcac ggtagaaatg 1020 gccttcgcct acgcattagc actgttcgca gcagcccgac aagaagaggc cggcgcccaa 1080 gtctccgtcc cacgggccct agaccgccag gccgcactct tacaaataca agaatttatg 1140 atcacctgcc tctcacaaac accaccacgc accacgttgc tgctgtatcc cacggccgtg 1200 gacctggcca aacgagccct ttggacaccg aatcagatca ccgacatcac cagcctcgta 1260 cgcctggtct acatactctc taaacagaat cagcaacatc tcatccccca gtgggcacta 1320 cgacagatcg ccgactttgc cctaaaacta cacaaaacgc acctggcctc ttttctttca 1380 gccttcgcgc gtcaagaact ctacctcatg ggcagcctcg tccactccat gctagtacat 1440 acgacggaga gacgcgaaat cttcatcgta gaaacgggcc tctgttcatt agccgagcta 1500 tcacacttta cgcagttgct agctcatccg caccacgaat acctcagcga cctgtacaca 1560 ccctgttcca gtagcgggcg acgcgatcac tcgctcgaac gcctcacacg tctcttcccc 1620 gatgccaccg tccccactac cgttcccgcc gccctctcca tcctatctac catgcaacca 1680 agcacgctag aaaccttccc cgacctgttt tgtctgccgc tcggcgaatc cttctccgcg 1740 ctgaccgtct ccgaacacgt cagttatgtc gtaacaaacc agtacctgat caaaggtatc 1800 tcctaccctg tctccaccac cgtcgtaggc cagagcctca tcatcaccca gacggacagt 1860 caaactaaat gcgaactgac gcgcaacatg cataccacac acagcatcac agcggcgctc 1920 aacatttccc tagaaaactg cgccttttgc caaagcgccc tactagaata cgacgacacg 1980 caaggcgtca tcaacatcat gtacatgcac gactcggacg acgtcctttt cgccctggat 2040 ccctacaacg aagtggtggt ctcatctccg cgaactcact acctcatgct tttgaaaaac 2100 ggtacggtcc tagaagtaac tgacgtcgtc gtggacgcta ccgacagtcg tttcggagcc 2160 ttcaccatca tcctcgtggc catagccgtc gtcattatca tttatttgat ctatactcga 2220 cagcggcgtc tctgcatgca gccgctgcag aacctctttc cctatctggt gtccgccgac 2280 gggaccaccg tgacgtcggg caacaccaaa gacacgtcgt tacaggctcc gccttcctac 2340 gaggaaagtg tttataattc tggtcgcaaa ggaccgggac caccgtcgtc tgatgcatcc 2400 acggcggctc cgccttacac caacgagcag gcttaccaga tgcttctggc cctggtccgt 2460 ctggacgcag agcagcgagc gcagcagaac ggtacagatt ctttggacgg acagactggc 2520 acgcaggaca agggacagaa gcccaacctg ctagaccgac tgcgacaccg caaaaacggc 2580 taccgacact tgaaagactc cgacgaagaa gagaacgtct ga 2622 <210> 21 <211> 1614 <212> DNA <213> Codon Optimized MMLV Gag Nucleotide Sequence <400> 21 atgggacaga ccgtcacaac acccctgagc ctgaccctgg gacattggaa agacgtggag 60 aggatcgcac ataaccagag cgtggacgtg aagaaacgga gatgggtcac attctgcagt 120 gctgagtggc caacttttaa tgtgggatgg ccccgagacg gcactttcaa cagggatctg 180 atcacccagg tgaagatcaa ggtctttagc ccaggacctc acggacatcc agaccaggtg 240 ccttatatcg tcacctggga ggcactggcc ttcgatcccc ctccatgggt gaagccattt 300 gtccacccaa aaccacctcc accactgcct ccaagtgccc cttcactgcc actggaacca 360 ccccggagca caccaccccg cagctccctg tatcctgctc tgactccatc tctgggcgca 420 aagccaaaac cacaggtgct gagcgactcc ggaggaccac tgattgacct gctgacagag 480 gaccccccac cataccgaga tcctcggcct ccaccaagcg accgcgatgg aaatggagga 540 gaggctactc ctgccggcga agcccctgac ccatctccaa tggctagtag gctgcgcggc 600 aggcgcgagc ctccagtggc agatagcacc acatcccagg ccttccctct gagggctggg 660 ggaaatgggc agctccagta ttggccattt tctagttcag acctgtacaa ctggaagaac 720 aataacccct ctttcagtga ggaccccggc aaactgaccg ccctgatcga atccgtgctg 780 attacccatc agcccacatg ggacgattgt cagcagctcc tgggcaccct gctgaccgga 840 gaggaaaagc agcgcgtgct gctggaggct cgcaaagcag tccgagggga cgatggacgg 900 cccacacagc tccctaatga ggtggacgcc gcttttccac tggaaagacc cgactgggat 960 tatactaccc aggcagggag aaaccacctg gtccattaca ggcagctcct gctggcaggc 1020 ctgcagaatg ccgggagatc ccccaccaac ctggccaagg tgaaaggcat cacacagggg 1080 cctaatgagt caccaagcgc ctttctggag aggctgaagg aagcttaccg acggtatacc 1140 ccatacgacc ctgaggaccc cggacaggaa acaaacgtct ccatgtcttt catctggcag 1200 tctgccccag acattgggcg gaagctggag agactggaag acctgaagaa caagaccctg 1260 ggcgacctgg tgcgggaggc tgaaaagatc ttcaacaaac gggagacccc cgaggaaaga 1320 gaggaaagga ttagaaggga aactgaggaa aaggaggaac gccgacggac cgaggacgaa 1380 cagaaggaga aagaacgaga tcggcggcgg caccgggaga tgtcaaagct gctggccacc 1440 gtggtcagcg gacagaaaca ggacagacag ggaggagagc gacggagaag ccagctcgac 1500 agggatcagt gcgcatactg taaggaaaaa ggccattggg ccaaggattg ccccaaaaag 1560 ccaagaggac caagaggacc aagaccacag acatcactgc tgaccctgga cgac 1614 <210> 22 <211> 3300 <212> DNA <213> Codon Optimized MMLV Gag - CMV pp65 Nucleotide Sequence <400> 22 atgggacaga ccgtcacaac acccctgagc ctgaccctgg gacattggaa agacgtggag 60 aggatcgcac ataaccagag cgtggacgtg aagaaacgga gatgggtcac attctgcagt 120 gctgagtggc caacttttaa tgtgggatgg ccccgagacg gcactttcaa cagggatctg 180 atcacccagg tgaagatcaa ggtctttagc ccaggacctc acggacatcc agaccaggtg 240 ccttatatcg tcacctggga ggcactggcc ttcgatcccc ctccatgggt gaagccattt 300 gtccacccaa aaccacctcc accactgcct ccaagtgccc cttcactgcc actggaacca 360 ccccggagca caccaccccg cagctccctg tatcctgctc tgactccatc tctgggcgca 420 aagccaaaac cacaggtgct gagcgactcc ggaggaccac tgattgacct gctgacagag 480 gaccccccac cataccgaga tcctcggcct ccaccaagcg accgcgatgg aaatggagga 540 gaggctactc ctgccggcga agcccctgac ccatctccaa tggctagtag gctgcgcggc 600 aggcgcgagc ctccagtggc agatagcacc acatcccagg ccttccctct gagggctggg 660 ggaaatgggc agctccagta ttggccattt tctagttcag acctgtacaa ctggaagaac 720 aataacccct ctttcagtga ggaccccggc aaactgaccg ccctgatcga atccgtgctg 780 attacccatc agcccacatg ggacgattgt cagcagctcc tgggcaccct gctgaccgga 840 gaggaaaagc agcgcgtgct gctggaggct cgcaaagcag tccgagggga cgatggacgg 900 cccacacagc tccctaatga ggtggacgcc gcttttccac tggaaagacc cgactgggat 960 tatactaccc aggcagggag aaaccacctg gtccattaca ggcagctcct gctggcaggc 1020 ctgcagaatg ccgggagatc ccccaccaac ctggccaagg tgaaaggcat cacacagggg 1080 cctaatgagt caccaagcgc ctttctggag aggctgaagg aagcttaccg acggtatacc 1140 ccatacgacc ctgaggaccc cggacaggaa acaaacgtct ccatgtcttt catctggcag 1200 tctgccccag acattgggcg gaagctggag agactggaag acctgaagaa caagaccctg 1260 ggcgacctgg tgcgggaggc tgaaaagatc ttcaacaaac gggagacccc cgaggaaaga 1320 gaggaaagga ttagaaggga aactgaggaa aaggaggaac gccgacggac cgaggacgaa 1380 cagaaggaga aagaacgaga tcggcggcgg caccgggaga tgtcaaagct gctggccacc 1440 gtggtcagcg gacagaaaca ggacagacag ggaggagagc gacggagaag ccagctcgac 1500 agggatcagt gcgcatactg taaggaaaaa ggccattggg ccaaggattg ccccaaaaag 1560 ccaagaggac caagaggacc aagaccacag acatcactgc tgaccctgga cgactgcgag 1620 agccggggcc ggcggtgccc agaaatgatc tctgtgctgg ggcccattag tggacatgtg 1680 ctgaaggccg tcttctccag gggagacacc cccgtgctgc ctcacgagac tcgactgctg 1740 cagaccggca tccatgtgcg ggtctcccag ccctctctga ttctggtgtc acagtataca 1800 ccagatagca ctccctgcca cagaggagac aatcagctcc aggtgcagca tacctacttt 1860 acaggctccg aggtcgaaaa cgtgtctgtc aatgtgcaca accctaccgg caggagcatc 1920 tgtcctagcc aggagccaat gagcatctac gtgtacgccc tgcctctgaa gatgctgaat 1980 atcccatcaa ttaacgtcca ccattaccct agcgcagccg aacggaagca cagacatctg 2040 ccagtggccg acgctgtcat ccatgccagc ggcaaacaga tgtggcaggc aagactgacc 2100 gtgtccgggc tggcctggac aaggcagcag aatcagtgga aggagcccga cgtgtactat 2160 accagcgcct tcgtgttccc taccaaagac gtggccctga gacatgtggt gtgcgcacat 2220 gagctggtgt gcagcatgga aaacactagg gccaccaaga tgcaggtcat cggcgatcag 2280 tatgtcaaag tgtacctgga gagtttttgc gaagacgtgc catcagggaa gctgttcatg 2340 catgtgaccc tgggcagcga tgtcgaggaa gacctgacca tgacaagaaa tccacagccc 2400 tttatgagac cccacgagag gaatgggttc actgtgctgt gccccaagaa catgatcatt 2460 aagcctggaa aaatcagtca tattatgctg gatgtggcct ttacatcaca cgagcatttc 2520 ggactgctgt gccccaaatc catccctgga ctgagcattt ccggcaatct gctgatgaac 2580 ggccagcaga tcttcctgga agtgcaggcc atccgggaga ccgtcgaact gcgacagtat 2640 gacccagtgg ctgcactgtt ctttttcgac atcgacctgc tgctgcagcg aggaccacag 2700 tacagcgagc accctacttt tacctcccag tatcggattc aggggaagct ggagtacagg 2760 cacacctggg atcgccatga cgaaggagcc gctcaggggg acgatgacgt gtggacatct 2820 ggcagtgatt cagacgagga actggtgaca actgagcgaa aaaccccccg ggtgacagga 2880 ggaggggcaa tggcaggggc cagcaccagc gcagggcgga agcgaaaaag cgccagcagc 2940 gccacagcat gtaccgccgg cgtgatgact agaggaaggc tgaaggccga gtctacagtc 3000 gctcccgagg aagatactga cgaggatagt gacaatgaaa tccacaaccc cgccgtgttc 3060 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Claims (16)

1. SEQ ID NO: l의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 뮤린 백혈병 바이러스(murine leukemia virus: MLV) gag 폴리펩타이드를 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및
   SEQ ID NO: l0의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 가지는 인간 사이토메갈로바이러스(Human cytomegalovirus: HCMV) 글라이코프로틴 B(gB) 단백질을 포함하는 제2 폴리펩타이드;
   를 포함하여 구성되는, 바이러스유사 입자(VLP).
2. 삭제
3. 삭제
4. 제1항에 있어서, 상기 제2 폴리펩타이드가 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하여 구성되는, 바이러스유사 입자.
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제
9. 삭제
10. 제1항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드가 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는, 바이러스유사 입자.
11. 제1항, 제4항 및 제10항 중 어느 한 항의 VLP, 및 약학적으로 허용가능한 캐리어를 포함하여 구성되는, HCMV 감염 증상의 빈도 또는 심도를 줄이거나 발병을 방지 또는 늦추기 위한 약학적 조성물.
12. 제11항에 있어서, 사이토카인, 겔-타입 보조제, 미생물 보조제, 오일 에멀젼 보조제, 유화제-기반 보조제, 미립자 보조제, 합성 보조제, 폴리머 보조제, 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택되는 보조제를 더 포함하여 구성되는, HCMV 감염 증상의 빈도 또는 심도를 줄이거나 발병을 방지 또는 늦추기 위한 약학적 조성물.
13. SEQ ID NO: l의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터 및 SEQ ID NO: l0의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터로 숙주 세포를 동시형질이입하는 단계(co-transfecting); 및
    상기 벡터들에 의해 인코딩된 단백질들의 발현을 허용하는 조건하에 적합한 배지에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계;
    를 포함하여 구성되는, 바이러스유사 입자(VLP)의 생산 방법.
14. 제13항에 있어서, 상기 제2 폴리펩타이드가 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는, 바이러스유사 입자(VLP)의 생산 방법.
15. 제13항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드가 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는, 바이러스유사 입자(VLP)의 생산 방법.
16. 삭제

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