KR102312631B1 - 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물{Pharmaceutical Composition for Preventing, Improving and Treating Arthritis}

본 발명은 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

관절(articulation)은 뼈와 뼈가 연결되는 부위로, 관절을 구성하는 두 뼈가 마주하는 면에는 관절 연골이라고 불리는 유리 연골의 얇은 층이 있다. 관절 주위는 골막의 연속인 결합조직성 막으로 둘러싸여져 있고 이것을 관절낭이라고 하며, 그 내강을 관절강(articular cavity)이라고 한다. 관절낭의 내면에는 활막이라는 얇은 막이 있으며 끊임없이 소량의 활액을 관절강 내에 분비하여 관절 운동을 부드럽게 한다.

퇴행성 관절염(degenerative arthritis)은 인구 노령화 추세에 따라 임상에서 흔히 볼 수 있는 질환이며 관절연골의 퇴행성 변화를 기반으로 병변이 시작되어 운동 시 통증과 부종, 관절 강직감 및 점진적인 운동장애를 일으키는 만성적인 질환이다.

퇴행성 관절염, 즉 골관절염은 관절을 구성하는 연골 세포(chondrocytes)에 노화 등의 퇴행이 발생하여, 연골 세포에서 관절의 세포외기질(extracellular matrix, ECM)을 구성하는 물질인 타입 II 콜라겐(type II collagen), 프로테오글리칸(proteoglycan) 등의 합성이 저해됨과 동시에, 인터루킨-1β(interleukin-1β) 및 종양괴사인자-α(tumor necrosis factor-α) 등의 염증성 사이토카인이 생성됨에 따라, 관절의 세포외기질을 분해하는 기질 금속단백질 분해효소(matrix metalloproteinases; MMPs)의 합성(발현) 및 활성이 관절에서 증가됨으로 인해 관절조직이 파괴됨으로써 유발되는 질병이다.

현재 퇴행성 관절염의 치료 방법으로는 식이요법을 통한 체중감량, 근육강화운동, 약물 치료제(진통제, 스테로이드제, 비스테로이드 소염제[non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID] 등) 투여, 연골보호제(히알루론산, 글루코사민, 콘드로이틴 등) 투여, 수술적 처치(관절경 수술, 경골 근위부 절골술, 관절 부분 치환술, 슬관절 전치환술 등) 등이 있다.

퇴행성 관절염의 치료는 관절염의 진행 단계에 따라 다르다. 퇴행성 관절염은 관절염의 정도, 관절 연골의 상태, 관절강의 상태 및 관절 통증 정도에 따라 초기/중기/말기 단계로 나눌 수 있으며, 초기 단계의 퇴행성 관절염인 경우 히알루론산을 관절강 내에 직접 투여하여 기능적 보존에 중점을 둔 시술을 하는 반면, 중기 단계의 퇴행성 관절염으로 진행할 경우 스테로이드제를 관절강 내 직접 투여하거나 비스테로이드 소염제를 경구 투여하여 염증을 억제시키는 치료 방법을 주로 사용하고, 말기 단계의 퇴행성 관절염인 경우 관절의 염증부위를 제거하고 인공 관절을 삽입하는 수술을 진행한다.

비스테로이드 소염제는 위장관 장애 등의 합병증을 일으킬 수 있고, 그 외에 스테로이드제의 관절 내 주사요법은 전신 부작용 및 스테로이드의 반복주사에 따른 연골의 파괴 및 감염의 위험성이 따르게 되므로 적극적인 치료방법이 될 수는 없다.

리프리놀(lyprinol)은 푸른홍합으로부터 유래되며, 류코트리엔(leukotriene)의 합성을 억제하여 염증 완화 효과가 있는 물질로 알려져 있기는 하나, 퇴행성 관절염에 대한 완화 효능은 명확하게 밝혀져 있지는 않다(Doggrell SA et al., Evid Based Complement Alternat Med ., 2011:307121, 2011).

사포닌(saponin)은 식물에 존재하는 배당체(glycoside)이며, 항암, 항균 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다(Thimmappa R. et al., Annu . Rev. Plant Biol., 65:225-57, 2014).

코세디핀(cordyceptin)은 Cordyceps militaris 또는 Ophiocordyceps sinensis로부터 유래되며, 항암 효능이 있는 것으로 알려져 있다(SY Yoon et al., Int. J. Mol . Sci ., 19(10):3027, 2018).

히알루론산(hyaluronic acid, HA)은 관절연골에서 세포외기질을 구성하는 성분으로서 프로테오글리칸을 만드는 데 관여하는 점액성 다당류의 일종으로 β1-4 glycosidic 결합에 의해 연결된 N-acetyl-D-glucosamine과 D-glucuronic acid의 당단백 복합체이다. 여러 임상보고를 통해 히알루론산의 관절강 내 주사가 관절연골의 치유와 재생을 증진시키고, 프로테오글리칸의 응집과 합성을 유도하며, 골관절염에 부족한 무정형의 표면물질을 회복시켜 관절연골을 보호하고, 백혈구의 수와 활액 삼출액의 양을 감소시키며, 부동(immobilization) 후의 관절 경직감을 감소시키고, 진통 작용과 함께 윤활 작용의 개선을 나타낸다고 알려져 있다. 특히 퇴행성 슬관절염 등의 관절질환에서 관절활액 내 히알루론산의 농도가 낮은데 관절 내로 주사를 통해 히알루론산을 보충해 줌으로써 관절염 증상이 개선되었다는 임상 연구가 보고된 바 있다.

한편, 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물과 히알루론산의 조합, 특히 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물을 통해 발휘되는 관절염의 개선 효과를 밝힌 연구는 전무한 실정이다.

이러한 기술적 배경하에서, 본 발명자들은 장기간 사용하더라도 부작용을 유발하지 않는 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물을 개발하고자 예의 노력한 결과, 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물은 관절염의 원인이 되는 관절 내 연골조직의 프로테오글리칸의 분해에 관여하는 MMPs의 활성을 감소시켜 관절염의 완화 효과가 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 주된 목적은 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물; 히알루론산; 및 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물의 제조에 있어서, 유효성분으로서 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물; 히알루론산; 및 알코올로 이루어진 혼합물의 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물은 관절염의 예방/완화/치료 효과로 인해 관절 통증의 경감 및 관절 기능성(운동성) 장애를 회복하는데 유용하게 사용될 수 있다.

도 1 및 도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 연골조직의 프로테오글리칸의 분해에 관여하는 MMPs의 활성 감소에 따른 관절염 완화 효과를 나타내는 그래프이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

이하, 본 발명에 대하여 보다 구체적으로 설명한다.

본 명세서에서 길이, 면적, 부피, 시간(기간), 농도, 함량, 온도, 개수, 퍼센트(%), 배수 등을 표현하는데 사용된 용어 "약"은 해당 수치 또는 수치 범위에서 최대 10%의 허용오차가 존재한다는 것을 의미한다.

본 발명은 일 관점에서, 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물; 히알루론산; 및 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 다른 관점에서, 상기 약학 조성물에 포함되는 상기 유효성분의 관절염의 예방, 완화 또는 치료 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또 다른 관점에서 상기 유효성분을 포함하는 약학 조성물을 피검체(인간 등의 포유류)에게 (국소적으로) 적용 또는 투여하는 단계를 포함하는 관절염의 예방, 완화 또는 치료 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또 다른 관점에서, 관절염의 예방, 완화 또는 치료 효능을 갖는 의약 제제를 생산하기 위한, 상기 유효성분의 용도(사용)에 관한 것이다.

본 발명은 또 다른 관점에서, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물의 제조에 있어서, 상기 유효성분의 용도(사용)에 관한 것이다.

상기 관절염은 퇴행성 관절염, 급성/만성 류마티스성 관절염, 위축성 관절염, 만성 염증성 관절염, 콜라겐 유도성 관절염, 변형성 관절염, 감염성 관절염, 폐경기 관절염, 단절성 관절염, 비대증 관절염, 화농성 관절염 및 결핵성 관절염으로부터 선택되는 하나 이상의 질환, 바람직하게는 퇴행성 관절염, 급성/만성 류마티스성 관절염, 콜라겐 유도성 관절염 및 만성 염증성 관절염일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "예방(prevent)"이란 용어는 상기 조성물의 투여로 관절염의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 "개선(improve)" 및 "완화(alleviate)"란 용어는 상기 조성물의 투여로 관절염의 증세를 호전, 감소 또는 제거하는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 "치료(treat)"란 용어는 상기 조성물의 투여로 관절염의 증세를 호전, 역전 또는 완치하는 모든 행위를 의미한다.

상기 복합물은 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀을 7.00~8.00 : 0.04~0.06 : 4.00~5.00, 바람직하게는 7.50 : 0.05 : 4.45의 중량비로 혼합한 것임을 특징으로 할 수 있다. 상기 중량비를 벗어나는 범위로 조성된 복합물을 히알루론산 및 알코올과 혼합하여 관절강 내에 적용 시 관절염 완화/치료 효능이 낮을 수 있다.

상기 혼합물은 상기 복합물, 히알루론산 및 알코올을 4~11 : 4~11 : 9~11, 더 바람직하게는 4~6 : 9~11 : 9~11, 가장 바람직하게는 5 : 10 : 10의 중량비로 혼합한 것임을 특징으로 할 수 있다. 상기 중량비를 벗어나는 범위로 조성된 혼합물을 관절강 내에 적용 시 관절염 완화/치료 효능이 낮을 수 있다.

상기 혼합물의 함량은 조성물의 총 중량을 기준으로 0.001~30중량%, 바람직하게는 1~25중량%일 수 있다. 상기 혼합물의 함량이 조성물의 총 중량을 기준으로 0.001중량% 미만일 경우 관절염의 완화/치료 효능을 나타낼 수 없고, 상기 혼합물의 함량이 조성물의 총 중량을 기준으로 30중량%를 초과할 경우 제형 중에 충분히 용해될 수 없어 약물(의약) 제형의 다른 성분들과 안정적으로 배합될 수 없고, 또 관절강 내에 적용시 과도한 자극반응 등 안정성에서 문제가 있을 수 있다.

상기 히알루론산은 선형 히알루론산 수화겔 또는 가교된 히알루론산 수화겔, 바람직하게는 가교된 히알루론산 수화겔일 수 있으며, 상기 히알루론산의 분자량은 20~10,000kDa, 바람직하게는 500~3,000kDa, 가장 바람직하게는 900~1,100kDa일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 알코올은 탄소수 1(C₁) 내지 탄소수 4(C₄)의 저급 알코올, 바람직하게는 에탄올, 프로판올 및 이소프로판올, 더 바람직하게는 에탄올일 수 있다.

상기 조성물은 연골조직의 프로테오글리칸의 분해에 관여하는 MMPs(matrix metalloproteinases)의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

상기 조성물은 관절강 내의 세포외기질 성분(프로테오글리칸 등)의 분해를 억제시키고, 관절/관절강의 통증을 완화시킬 수 있으며, 관절염을 감소시킬 수 있고, 연골 재생을 유도할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 약학 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질(담체(기재), 부형제, 희석제 등)을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다.

용어 "담체(carrier)"는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(Dimethyl sulfoxide, DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.

용어 "부형제(excipient)"는 주약(主藥)의 양이 적은 경우에 어떤 빛깔과 형태를 갖추게 하려고 더 넣는 물질로, 락토오스나 전분을 주로 사용한다.

용어 "희석제(diluent)"는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 조직액(tissue fluid) 등의 체액(body fluid)의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.

상기 약학 조성물은 인간 환자에게 그 자체로서, 또는 결합 요법에서와 같이 다른 활성 성분들과 함께 또는 적당한 담체나 부형제와 함께 혼합된 의약 조성물로서, 투여될 수 있다.

상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

상기 약학 조성물은 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 제제화 할 수 있으며, 상기 약학 조성물의 제형은 바람직하게는 필러일 수 있다.

또한, 상기 비경구 투여제는 예를 들어, 국소 투여 제제, 주사제 등의 제형, 바람직하게는 주사 투여되는 필러 제형일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 명세서에서 "비경구"란 용어는 피하, 피부 내, 정맥 내, 근육 내, 관절강 내, 동맥 내, 활액낭 내(intrasynovial), 흉골 내, 수강 내(intrathecal), 병변 내 및 두개 내(intracranial) 주사 혹은 주입 수법을 포함한다.

본 발명의 일 실시예에 따른 약학 조성물은 비경구 투여될 수 있으며, 관절강 내 주사 혹은 주입이 바람직하다.

또한, 상기 활성성분의 약제학적으로 허용 가능한 용량, 즉 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 투여량은, 예컨대, 하루에 체중 1kg당 0.01~5,000mg, 바람직하게는 0.1~2,000mg, 더욱 바람직하게는 0.5~500mg, 가장 바람직하게는 1~100mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

본 발명에서 사용에 적합한 약학 조성물에는, 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물을 포함하는 활성 성분들이 그것의 의도된 목적을 달성하기에 유효한 양으로 함유되어 있는 조성물이 포함된다. 더욱 구체적으로, 치료적 유효량은 치료될 객체의 생존을 연장하거나, 질환의 증상을 방지, 경감 또는 완화시키는데 유효한 화합물의 양을 의미한다. 치료적 유효량의 결정은, 특히, 여기에 제공된 상세한 개시 내용 측면에서, 당업자의 능력 범위 내에 있다.

본 발명의 방법들에서 사용되는 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물, 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물(화합물들)에 대한 치료적 유효량은 세포 배양 분석으로부터 초기에 측정될 수 있다. 예를 들어, 용량(dose)은 세포 배양에서 결정된 IC₅₀(half maximal inhibitory concentration) 또는 EC₅₀(half maximal effective concentration)를 포함하는 순환 농도 범위를 얻기 위하여 동물 모델에서 계산될 수 있다. 그러한 정보는 인간에서의 유용한 용량을 더욱 정확히 결정하는데 사용될 수 있다.

여기에 기재되어 있는 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 히알루론산과 알코올로 이루어진 혼합물, 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물(화합물들)의 독성과 치료 효율성은, 예를 들어, LD₅₀(군집의 50%에 대한 치사량), ED₅₀(군집의 50%에 대해 치료 효과를 갖는 용량), IC₅₀(군집의 50%에 대해 치료 억제 효과를 갖는 용량)을 결정하기 위하여, 세포 배양 또는 실험동물에서의 표준 독성, 약동학 및/또는 약력학 분석과정들에 의해 산정될 수 있다. 독성과 치료 효과 간의 용량 비가 치료 지수이고 이것은 LD₅₀과 ED₅₀(또는, IC₅₀) 간의 비율로서 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 보이는 화합물들이 바람직하다. 이들 세포 배양 분석에서 얻어진 데이터는 인간에 사용하는 용량의 범위를 산정하는데 사용될 수 있다. 그러한 화합물들의 투여량(dosage)은 바람직하게는 독성이 없거나 거의 없는 상태에서 ED₅₀(또는, IC₅₀)을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

[ 참고예 1] 리프리놀 , 사포닌 및 코디세핀의 복합물의 제조

참고예 1에서 주원료로 사용한 리프리놀(Pharmalink International Limited, 홍콩), 사포닌(Merck, 미국) 및 코디세핀(Merck, 미국)은 상업적으로 입수한 것이다.

아래 표 1과 같은 조성으로, 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물(이하, 'BF502'이라 함)을 제조하였다(단위: 중량%).

구체적으로, 멸균 조건하에서, 리프리놀 분말을 정제수에 용해시킨 후 코세디핀 분말과 혼합한 다음, 사포닌 분말을 첨가한 후 2~3시간 동안 진탕하여 용해시킨 뒤 여과하였고, 50~60℃의 온도로 감압 가열하여 농축시키고 동결 건조시켜 분말 형태로 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물을 제조하였다.

성분	BF502
리프리놀	7.50
사포닌	0.05
코디세핀	4.45
정제수	88.00
총 함량	100

[ 참고예 2] 가교된 히알루론산 수화겔의 제조

참고예 2에서 주원료로 사용한 히알루론산은 시세이도사(일본)로부터 입수한 것이다.

가교된 히알루론산 수화겔의 제조방법을 간략히 설명하면 아래와 같다.

먼저, 히알루론산(분자량: 1,000kDa)에 가교제로 디비닐술폰을 첨가하여 압축공기와 히알루론산 수용액 유입속도에 의해 조절되는 가교된 히알루론산 미세구슬을 제작하였다.

그다음, 가교된 히알루론산 미세구슬의 표면에 잔류하거나 미반응된 가교제를 제거하기 위해 에탄올 원액에 침지시켜 세척한 뒤, 세척이 완료된 가교된 히알루론산 미세구슬을 진공건조기에서 진공처리하여 건조시켰다.

상기 건조된 히알루론산 미세구슬을 인산완충용액에 넣어 재수화하여 최종적으로 가교된 히알루론산 수화겔을 얻었다.

상기 가교된 히알루론산 수화겔은 체내 투여/주입 시 분해속도를 지연시키는 효과가 있는 것으로 알려져 있다(Kim et. al., Biomaterials Research, 14(1):25-9, 2010 참조).

[ 참고예 3] 필러 제형의 약학 조성물의 제조

참고예 3에서 사용한 정제수, 생리식염수와 주원료인 에탄올은 Merck사(미국)로부터 입수한 것이다.

참고예 1에서 제조한 BF502 및 참고예 2에서 제조한 가교된 히알루론산 수화겔을 사용하여 실시예 1~2에 따른 필러 제형의 약학 조성물을 제조하였고, 비교예 1~2에 따른 필러 제형의 약학 조성물을 제조하였다(표 2의 단위: 중량%).

구체적으로, 실시예 1~2에 따른 필러 제형의 약학 조성물은 멸균 조건하에서, 정제수와 에탄올을 혼합한 다음, BF502 및 가교된 히알루론산 수화겔을 첨가한 후 10분간 50~60℃의 온도로 가열한 뒤 냉각시켜 제조한 것이다. 비교예 1에 따른 조성물은 생리식염수를 정제수와 혼합한 후 10분간 50~60℃의 온도로 가열한 뒤 냉각시켜 제조한 것이고, 비교예 2에 따른 조성물은 가교된 히알루론산 수화겔을 정제수와 혼합한 후 10분간 50~60℃의 온도로 가열한 뒤 냉각시켜 제조한 것이다.

성분	실시예 1	실시예 2	비교예 1	비교예 2
BF502	5	10	-	-
가교된 히알루론산 수화겔	10	5	-	10
에탄올	10	10	-	-
생리식염수	-	-	10	-
정제수	75	75	90	90
총 함량	100	100	100	100

[ 시험예 1]: 관절염 완화 효과 확인

MMPs(matrix metalloproteinases)는 연골 및 관절의 세포외기질의 파괴를 유도하고, 관절염 등의 질환을 진행시키는 인자로 알려져 있으므로, 본 시험예에서는 MMPs의 활성 정도로 관절염 완화 효과를 확인하였다.

구체적으로, 참고예 3에서 제조한 실시예 1~2에 따른 약학 조성물과 비교예 1~2에 따른 약학 조성물을 관절염이 유발된 쥐의 관절강 내에 투여하여 관절염 완화 효과를 MMPs의 활성 정도로 확인하였다(MMPs의 활성이 감소되면 관절염 완화 효과가 증가되는 것을 의미함).

<관절염이 유발된 쥐의 준비>

M.I.A(monosodium iodoacetate)는 MMPs의 활성을 증가시키는 화합물로, 관절염이 유발된 쥐 모델 제조에 사용되며, M.I.A를 쥐의 관절강 내에 투여 시 MMPs의 활성 증가로 인해 연골의 프로테오글리칸의 합성을 억제시키고, 연골 세포의 괴사를 일으켜 퇴행성 관절염 유사 증상을 나타내는 것으로 알려져 있다.

본 시험예에서 사용된 관절염이 유발된 쥐는 31G 주사기를 사용하여 염증 유발 물질인 M.I.A 0.5mg을 영바이오(성남시, 대한민국)로부터 입수한 7주령의 Sprague-Dawley계 수컷 쥐(Rat; 마리 당 체중 = 200~250g)의 우측 무릎 관절강 내에 투여하여 관절염을 인위적으로 발생시켜 준비한 것이다.

시험기간 동안 상기 수컷 쥐는 급이기에 실험동물용 고형사료(Harlan laboratories, Inc, USA)를 넣어 자유섭취시켰고, 음수는 자동급수장치로 자유섭취시켰다. 상기 시험은 실험동물 사육실의 환경을 온도 23±3℃, 상대습도 55±15%, 조명시간 12시간(오전 8시 점등~오후 8시 소등) 및 조도 150~300Lux로 유지하는 조건하에서 진행되었다.

<시험 방법 및 결과>

먼저, 관절염이 유발된 7주령의 쥐를 대상으로 3군(제1군~제3군)으로 나누어, 제1군(3마리)에는 실시예 1에 따른 조성물(BF502, 가교된 히알루론산 수화겔 및 에탄올 함유)을 쥐의 우측 무릎 관절강 내에 투여하였고, 제2군(3마리)에는 비교예 1에 따른 조성물(생리식염수 함유)을 쥐의 우측 무릎 관절강 내에 투여하였으며, 제3군(3마리)에는 비교예 2에 따른 조성물(가교된 히알루론산 수화겔 함유)을 쥐의 우측 무릎 관절강 내에 투여하였다. 그다음, 투여 시점으로부터 10, 20, 30일이 경과된 시점에서 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2 각각의 조성물이 투여된 쥐의 우측 무릎 관절강으로부터 수집한 활액의 MMPs 활성 정도로 관절염 완화 효과를 확인하였다. MMPs 활성 정도는 abcam사의 MMP Activity Assay Kit(ab112146, UK)를 사용하여 확인하였다.

그 결과, 도 1의 (A) 및 (B)에 나타낸 바와 같이, 비교예 1에 따른 조성물은 관절염이 유발된 쥐에서 관절염 완화 효과가 거의 없었고, 비교예 2에 따른 조성물은 관절염이 유발된 쥐에서 관절염 완화 효과가 있기는 하였으나 실시예 1에 따른 조성물 비교하여 관절염 완화 효과가 매우 낮은 것으로 확인되었다.

다음으로, 관절염이 유발된 7주령의 쥐를 대상으로 2군(제1군~제2군)으로 나누어, 제1군(3마리)에는 실시예 1에 따른 조성물(BF502, 가교된 히알루론산 수화겔 및 에탄올 함유)을 쥐의 우측 무릎 관절강 내에 투여하였고, 제2군(3마리)에는 실시예 2에 따른 조성물(BF502, 가교된 히알루론산 수화겔 및 에탄올 함유)을 쥐의 우측 무릎 관절강 내에 투여하였다. 그다음, 투여 시점으로부터 10, 20, 30일이 경과된 시점에서 실시예 1 및 실시예 2 각각의 조성물이 투여된 쥐의 우측 무릎 관절강으로부터 수집한 활액의 MMPs의 활성 정도로 관절염 완화 효과를 확인하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 도 1에서와 같이 실시예 1에 따른 조성물은 관절염이 유발된 쥐에 투여 후 10~30일의 기간 동안 매우 우수한 관절염 완화 효과를 나타내었다.

한편, 관절염이 유발된 쥐에서 실시예 2에 따른 조성물은 비교예 1 및 비교예 2 각각의 조성물보다 높은 관절염 완화 효과를 나타내었으나(도 1 참조), 실시예 1에 따른 조성물보다 관절염 완화 효과가 낮은 것으로 나타나, 조성물에 유효성분으로 함유되는 BF502, 가교된 히알루론산 수화겔 및 에탄올 간의 혼합 조건이 중요한 것으로 확인되었다.

종합하면, 본 발명에 따른 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 복합물, 가교된 히알루론산 수화겔과 에탄올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 관절염이 유발된 쥐의 관절강 내 투여 후 장기간(~30일) 동안 관절염의 완화 효과가 매우 우수하게 나타나, 관절강 내 활액 부족으로 인해 발생되는 초기 단계의 퇴행성 관절염뿐만 아니라 관절강 내 활액 부족 현상이 장기화되었을 때 나타나는 중기 단계의 퇴행성 관절염에 대한 완화/치료 효과를 증진시키는 데 유용하게 사용될 수 있는 것으로 확인되었다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (9)

1. 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀으로 구성된 복합물; 히알루론산; 및 알코올로 이루어진 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물로서,
   상기 복합물을 구성하는 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 중량비는 7.00~8.00 : 0.04~0.06 : 4.00~5.00이고,
   상기 혼합물은 상기 복합물, 히알루론산 및 알코올을 4~6 : 9~11 : 9~11의 중량비로 혼합한 것임을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 복합물을 구성하는 리프리놀, 사포닌 및 코디세핀의 중량비는 7.50 : 0.05 : 4.45인 것을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 혼합물은 상기 복합물, 히알루론산 및 알코올을 5 : 10 : 10의 중량비로 혼합한 것임을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혼합물의 함량은 조성물의 총 중량을 기준으로 0.001~30중량%인 것을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알코올은 탄소수 1 내지 탄수소 4의 저급 알코올인 것을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히알루론산은 선형 히알루론산 수화겔 또는 가교된 히알루론산 수화겔인 것을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히알루론산의 분자량은 20kDa 내지 10,000kDa인 것을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 연골조직의 프로테오글리칸의 분해에 관여하는 MMPs(matrix metalloproteinases)의 활성을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.
9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 비경구 투여제로 제조되는 것을 특징으로 하는, 관절염의 예방, 완화 또는 치료용 약학 조성물.

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