CN1864662A - 一种关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，它包括：浓度为1×10^－4mg/ml～5×10^－2mg/ml雷公藤内酯醇和凝胶液体，它们以1∶(1～9)的容积比混合。试验证明：该复方制剂对药物有缓释作用，以延长药物作用时间，减少雷公藤内酯醇的用量，降低药物的毒副作用。它不仅能够阻止中、早期骨关节炎的进一步发展，还能够改善关节的内环境，促进关节软骨再生修复，达到更好地治疗骨关节炎的目的。

Description

一种关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂

技术领域：

本发明涉及治疗骨关节炎的注射制剂，具体是一种关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂。

技术背景：

骨关节炎(Osteoarthritis，骨关节炎)是以关节的软骨退变和继发性骨质增生为特点的最常见慢性骨关节病，分为原发性和继发性。在超过50岁以上人群中，骨关节炎在导致长期残疾的疾病中仅次于心血管疾病而排名第二。疾病调查显示，我国骨关节炎的人群患病率为10％左右，60岁以上的老年人患病率高达50％，且随着年龄的增加其患病率直线上升；在农村的发生率为9.6％，在城市退休人群中为49％。近年来有关骨关节炎药物治疗的研究很多，新的药物及治疗手段不断出现，但尚不能阻断其病理性破坏过程的进一步发展，更难以使病变的组织结构得到修复。目前临床治疗仍只能以控制疼痛、减少残疾、改善关节功能和提高生活质量、避免药物不良反应为目的。

透明质酸(hyaluronic acid，透明质酸)是一种天然的线性粘多糖，在人体内主要分布于眼睛、皮肤、软骨、关节滑液等组织。透明质酸是由葡萄糖醛酸和N-乙酞氨基葡萄糖的二糖单位反复交替连接而成的直链均聚糖，为阴离子型聚合物，具有高度的亲水性和粘弹性。

目前临床上通过关节腔内注射的给药方式，常规应用透明质酸治疗骨关节炎。它的药理作用主要在于补充关节腔内富有粘弹性的关节液，促进关节自身透明质酸合成，抑制滑膜及滑膜下的痛觉感受器与感觉纤维的兴奋性，达到显著改善骨关节炎患者的运动障碍、关节疼痛、关节积液及晨僵等症状。

关节腔内注入作为注射制剂的透明质酸治疗骨关节炎，尚存在不能完全缓解关节内的炎症反应，难以促使关节软骨损伤的修复等不足。所以只能减轻局部症状，长期疗效不佳，难以阻断病理性破坏过程的进一步发展和病变组织的再生修复。

雷公藤内酯醇(triptolide，雷公藤内酯醇)是雷公藤的主要有效成分之一。近期研究发现，它可以抑制导致骨关节炎软骨破坏的细胞因子(IL-1α，IL-1β，TNF-α、IL-6)的表达与合成；抑制炎症因子诱导的金属蛋白酶、蛋白聚糖酶的表达；提高促进软骨修复的生物因子(IL-10等)的表达与合成；选择性抑制COX-2表达和合成，以抑制IL-1α诱导的PEG2的生成，而对COX-1无影响。因而针对骨关节炎具有免疫抑制、抗炎止痛、软骨保护、促进软骨再生修复等多重治疗作用。

早期药理和临床试验表明，雷公藤内酯醇具有免疫抑制、抗炎、抗生育及抗肿瘤等生物活性，故临床曾将其用于类风湿性关节炎、肾炎等自身免疫性疾病及恶性肿瘤的治疗。然而，由于其给药方法主要是全身用药，疗效剂量较大，毒副作用明显，因此其临床应用受到了较大限制。雷公藤内酯醇制剂急性毒性实验证明，小鼠静脉注射的LD₅₀＝0.8mg/kg，腹腔注射的LD₅₀＝0.9mg/kg；亚急性毒性试验表明，犬，20μg/kg，每日静注一次，连续7天，无毒性反应发生；40μg/kg、80μg/kg，分别每日静注一次，连续7天，则出现心脏、造血系统及胃肠道的可逆性毒性反应。

应用现代技术制备的复方雷公藤涂抹剂，旨在通过病变局部透皮吸收而达到治疗目的。但由于其分子量较大，且不溶于水，因而药物的组织渗透性差，局部吸收率低，并对皮肤有一定的刺激作用，故治疗效果较差。

发明的内容

本发明可提供一种关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，该复方制剂以凝胶液体，包括透明质酸和壳聚糖或其衍生物溶液，与雷公藤内酯醇的协同作用，通过关节腔内注射的给药方式，减少雷公藤内酯醇的给药剂量，降低其毒副作用，并获得显著治疗效果。

本发明采用的技术方案，即一种关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，包括：浓度为1×10^-4mg/ml～5×10^-2mg/ml雷公藤内酯醇溶液和凝胶液体，它们以1∶(1～9)的容积比混合，其中，所述凝胶液体为透明质酸、壳聚糖或其衍生物溶液。

本发明上述复方制剂所选择的配比关系的说明：

1、影响雷公藤内酯醇临床应用的主要原因为毒副作用较大，其急性毒性实验证明，小鼠静脉注射的LD₅₀＝0.8mg/kg，腹腔注射的LD₅₀＝0.9mg/kg；亚急性毒性试验表明，犬，20μg/kg，每日静注一次，连续7天，无毒性反应发生；40μg/kg、80μg/kg，分别每日静注一次，连续7天，则出现心脏、造血系统及胃肠道的可逆性毒性反应。

2、体外实验表明，雷公藤内酯醇在100～600nM的浓度，甚至小于100nM的浓度时，均有明显的抑制炎症因子、金属蛋白酶表达的作用，而且它们之间呈剂量相关性。

3、动物实验表明，雷公藤内酯醇在本发明所选浓度范围内，其复方制剂治疗均有效，并且优于单独用透明质酸或壳聚糖溶液及单用同剂量的雷公藤内酯醇制剂。经检测证实，雷公藤内酯醇复方制剂治疗后关节液中IL-1β、TNF-α、MMP-3的含量低于不治疗、单用透明质酸及单用同剂量雷公藤内酯醇治疗后的关节液中上述细胞因子和酶的含量；关节软骨中II型胶原、粘多糖含量均高于不治疗、单用透明质酸及单用同剂量雷公藤内酯醇治疗的关节软骨中II型胶原、粘多糖的含量，与正常关节软骨中II型胶原、粘多糖的含量接近；关节软骨退变的mankin评分也低于单用两者治疗的上述评分，并与正常关节软骨的上述评分接近。

4、临床研究表明，用于关节腔内注射治疗骨关节炎的透明质酸或壳聚糖溶液的浓度较大，治疗效果一般较好。因此，它们与雷公藤内酯醇溶液的容积比＞1∶1。透明质酸具有缓释、靶向作用，并可增强药物的渗透性。因此已在临床用作某些药物的载体，比如润舒滴眼液。雷公藤内酯醇浓度较大可增强其治疗作用，但毒副作用亦随之明显。而在本发明的雷公藤内酯醇浓度范围内，无毒副作用显现，并且可以从多个环节上达到治疗骨关节炎的作用。

上述复方制剂的制备方法：

在室温下，将每毫克雷公藤内酯醇先溶于0.5～1ml无水乙醇，再溶于0.5～1ml二甲基亚砜中，用生理盐水稀释至药物治疗浓度范围；超滤除菌后，与无菌透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液按需要比例均匀混合即得本发明复方注射制剂。

发明的优点及积极效果

1、具有更好的免疫抑制、抗炎止痛作用，能够有效的抑制关节内炎症因子IL-1、TNF-α、COX-2等的表达，同时阻断炎症因子诱导软骨细胞及滑膜细胞产生MMPs、蛋白聚糖酶的途径，并能够吸附和减少关节液中炎症因子，减轻骨关节炎早期症状。

2、通过透明质酸对位于滑膜及滑膜下的痛觉感受器与感觉纤维的兴奋性的抑制作用，达到早期缓解症状的目的。

3、补充外源性透明质酸可促进滑膜自身透明质酸的合成，有利于关节软骨修复，恢复关节液的粘弹性，增加机械保护作用，避免软骨老化和磨损。

4、上调促进软骨修复的因子(IL-10等)的表达，促进关节软骨再生修复。

5、由于关节内炎症因子浓度的降低，使其对关节软骨细胞合成I、III型胶原的促进作用减弱，从而恢复关节软骨细胞合成II型胶原、蛋白聚糖的功能，使关节软骨逐渐再生修复。

6、透明质酸、壳聚糖或其衍生物凝胶溶液能够与雷公藤内酯醇等药物结合，并当其凝胶溶液浓度增大时可形成网状结构。因此制备两者复合制剂，可使其中的雷公藤内酯醇有效缓释，达到延长药物作用时间，降低药物的毒副作用。

本发明提供的关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，能够阻断中、早期骨关节炎的病理性破坏过程，并且改善关节内环境，促进关节软骨的再生修复，达到有效治疗骨关节炎的目的。

上述复方制剂还可用于肩周炎、类风湿性关节炎等其它关节炎的局部治疗。

具体实施方式

本发明技术效果通过以下的实验进一步说明：

实施例1：复方制剂配比的选择：

试验证明，雷公藤内酯醇的浓度在1×10^-4mg/ml～5×10^-2mg/ml范围内存在治疗效果，并且浓度越高效果越好，但其上限浓度可能开始出现毒副作用；透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液的加入可以降低毒副作用。试验证明，浓度为5×10^-2mg/ml的雷公藤内酯醇溶液与透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液的最佳容积比为1∶7～9；浓度为1×10^-4mg/ml的雷公藤内酯醇溶液与透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液的最佳容积比为1∶1～2。

另外需根据骨关节炎病变程度、炎症反应情况、关节液中透明质酸的含量，决定雷公藤内酯醇与透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液的浓度和最佳容积比。

实施例2  制备方法1：

在常温下，将每毫克雷公藤内酯醇先溶于1ml无水乙醇中，再溶于0.5ml二甲基亚砜中，用生理盐水稀释至相应浓度5×10^-3mg/ml，用0.22μm的双层滤膜过滤后，与羧甲基壳聚糖溶液按1∶9容积比例均匀混合，其中羧甲基壳聚糖溶液的配制过程是：将每10g羧甲基壳聚糖溶于1升蒸馏水中，高温高压消毒(115℃)。壳聚糖还可以是低聚壳聚糖、羟基壳聚糖等。

制备方法2：

在常温下，将每毫克雷公藤内酯醇先溶于1ml无水乙醇中，再溶于0.5ml二甲基亚砜中，用生理盐水稀释至相应浓度5×10^-3mg/ml，用0.22μm的双层滤膜过滤后，与透明质酸按1∶8容积比例均匀混合。

实施例3  有关疗效的动物试验

采用实施例2中制备方法1所得的复方制剂，在日本大耳白兔上进行疗效观察。采用膝关节腔内注射II型胶原酶法制作兔骨关节炎模型，采用实施例2中制备方法1所得的复方制剂进行治疗，每个膝关节0.4ml/次，1次/周，共4次。观察结果如下：

1)治疗4周后动物休息时体位基本恢复正常，体重增长趋势大于生理盐水注射组、单用透明质酸及单用同等剂量的雷公藤内酯醇治疗组。

2)大体观察和组织形态学上关节软骨的退变程度均较生理盐水组、单用透明质酸及单用同等剂量的雷公藤内酯醇治疗组轻。

3)治疗组关节软骨中粘多糖含量均高于同期生理盐水注射组、单用透明质酸及单用同等剂量的雷公藤内酯醇治疗组，与正常组接近。

4)治疗组关节软骨中胶原总量及II型胶原含量均较正常关节软骨为低，但高于生理盐水注射组、单用透明质酸及单用同等剂量的雷公藤内酯醇治疗组。

5)治疗组关节液中的IL-1β、TNF-α、MMP-3含量低于生理盐水注射组、单用透明质酸及单用同等剂量的雷公藤内酯醇治疗组。

6)治疗组关节软骨退变的组织病理学评分(mankin评分)均低于同期单生理盐水注射组、单用透明质酸及单用同等剂量的雷公藤内酯醇治疗组，而且治疗后4周的上述评分接近正常关节软骨。

上述结果表明，较单用透明质酸及单用同等剂量的雷公藤内酯醇治疗组，雷公藤内酯醇与透明质酸复合制剂在治疗骨关节炎后4周内，能更有效的抑制关节内炎症反应，保护关节软骨，促进软骨再生修复。

本发明制剂产生协同作用的机理为：(1)抑制关节内炎症反应；(2)抑制金属蛋白酶和蛋白聚糖酶的表达，防止软骨破坏；(3)增加软骨中II型胶原及蛋白聚糖的含量；(4)补充外源性透明质酸、壳聚糖或其衍生物，恢复关节液粘弹性；(5)透明质酸、壳聚糖或其衍生物作为载体，具有缓释、控释的作用，从而减少雷公藤内酯醇的毒副作用，并延长了药物作用时间。

文献报道，关节腔注射壳聚糖或其衍生物溶液治疗骨关节炎的疗效，与应用透明质酸溶液的疗效相当。因此，雷公藤内酯醇和透明质酸复合制剂关节腔注射治疗骨关节炎的疗效应优于单用壳聚糖或其衍生物溶液的疗效。

Claims (6)

1、一种关节腔内注射治疗骨关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，包括：浓度为1×10^-4mg/ml～5×10^-2mg/ml雷公藤内酯醇和凝胶液体，它们以1∶(1～9)的容积比混合。

2、根据权利要求1所述的关节腔内注射治疗关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，其特征是：所述凝胶液体为透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液。

3、根据权利要求1所述的关节腔内注射治疗关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，其特征是：浓度为5×10^-2mg/ml雷公藤内酯醇和凝胶液体以1∶(7～9)的容积比混合。

4、根据权利要求1所述的关节腔内注射治疗关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，其特征是：浓度为1×10^-4mg/ml的雷公藤内酯醇与透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液的容积比为1∶1～2。

5、根据权利要求1所述的关节腔内注射治疗关节炎的雷公藤内酯醇复方制剂，其特征是：浓度为5×10^-3mg/ml的雷公藤内酯醇与透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液的容积比为1∶7～9。

6、一种制备如权利要求1所述雷公藤内酯醇复方制剂的方法，方法步骤为：在室温下，将每毫克雷公藤内酯醇先溶于0.5～1ml无水乙醇，再溶于0.5～1ml二甲基亚砜中，用生理盐水稀释至相应浓度；灭菌处理后与无菌透明质酸或壳聚糖或其衍生物溶液按需要的容积比例均匀混合即得复方注射制剂。