KR102309986B1 - 사이클린 의존성 키나아제 cdk9의 신규 인히비터 - Google Patents

사이클린 의존성 키나아제 cdk9의 신규 인히비터 Download PDF

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Abstract

본 발명은 화학식 (I)의 구조를 갖는 사이클린 의존성 키나아제 CDK9의 인히비터에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 인히비터로 CDK9 활성과 관련된 암 또는 전암 컨디션을 치료하는 방법 및 이의 용도를 제공한다.

Description

사이클린 의존성 키나아제 CDK9의 신규 인히비터
본 출원은 사이클린 의존성 키나아제 CDK9 인히비터로서 작용하는 화합물, 이들 화합물을 포함하는 약학 조성물, 및 이들 화합물 또는 조성물을 사용하여 세린 키나아제 활성을 억제하는 방법 및 용도에 관한 것이다.
진핵 세포의 증식 및 분열은 정확하고 복잡한 조절 프로세스이다. 증식 프로세스는 세포 주기를 통해 달성되며, 세포 주기의 질서 있는 진행은 이의 엄격한 분자 조절 메커니즘을 통해 이루어진다. 세포 주기 조절에 관여하는 3가지 주요 부류의 분자가 존재하는 것으로 발견되었다: 사이클린 의존성 키나아제(CDK), 사이클린 및 사이클린 의존성 키나제 인히비터(CKI). 그중에서도 CDK가 중심에 있다. CDK 패밀리의 13멤버(CDK1-CDK13)가 발견되었으며, 이는 세포 내 기능에 따라 2가지 카테고리로 분류된다: 세포주기를 제어하는 CDK 및 세포 전사를 제어하는 CDK. CDK9는 세린 키나아제에 속하며, 상응하는 사이클린으로 형성된 그의 복합체는 양성 전사 연장 인자 b(P-TEFb)라 불린다. 복합체는 RNA 폴리머라아제 II 및 일부 음성 전사 연장 인자(NELF 및 N-TEF)를 인산화할 수 있어, 개시 부위로 부터 전사가 연장될 수 있으며 전사 연장의 핵심 분자이다(Sims RJ 3rd et al., Genes Dev, 2004, 18: 2437-68; Yamaguchi Y et al., Mol Cell Biol, 2002, 22: 2918-27). 연구 결과, CDK9의 비정상적인 발현 수준 또는 (및) 비정상적인 키나아제 활성이 다양한 단백질의 비정상적인 발현 또는 (및) 세포에서 이의 비정상적인 mRNA 수준을 유발하는 것이 발견되었다. 이들 중에서, Bcl-2와 같은 항-아폽토틱 단백질, 사이클린 D1과 같은 세포 주기 관련 조절 단백질, p53 경로 관련 단백질, NF-κB 경로의 특정 단백질 및 VEGF 등과 같은 종양 미세환경과 관련된 단백질은 종양과 밀접한 관련이 있는 것으로 확인되었다. CDK9는 종양 발생에서 가장 중요한 분자 중 하나라고 말할 수 있다(Shapiro GI. J Clin Oncol, 2006, 24: 1770-83).
본 발명은 사이클린 의존성 키나아제의 인히비터에 관한 것이다. 특히, 본 발명에서 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 대사물 또는 프로드럭이 제공된다:
Figure 112019117879142-pct00001
상기 식에서, Y는 p-플루오로벤조일, N이 R3으로 임의로 치환된 트랜스-4-아미노시클로헥실, 및 N이 R3으로 임의로 치환된 트랜스-4-아미노시클로헥실메틸로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
Z는 NH, S 및 O로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R2는 수소, C1-C3 알킬, C3-C6 시클로알킬, R4로 임의로 치환된 C3-C6 헤테로시클로알킬, 및 R4로 임의로 치환된 페닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R3은 C2-C6 알카노일 및 C1-C3 알콕시 (C1-C3)알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R4는 시아노 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명에서, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 대사물 또는 프로드럭, 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제 및 임의로 다른 치료제를 포함하는 약학 조성물이 또한 제공된다.
본 발명은 또한 세린 키나아제 활성에 의해 조절되거나 영향을 받거나 또는 사이클린 의존성 키나아제 활성과 관련된 질병, 질환 또는 컨디션의 치료, 예방 또는 개선을 위한 약물의 제조에 있어서의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 대사물 또는 프로드럭의 용도에 관한 것이다. 그 중에서도 질병, 질환 또는 컨디션은 바람직하게 암이다.
도 1a-1d는 MV4-11(도 1a), OCI-AML-3(도 1b), HL-60(도 1c) 및 NB4(도 1d) 세포주에서 세포 신호 경로에 대한 화합물 1의 효과를 보여준다;
도 2a-2d는 MV4-11(도 2a), OCI-AML-3(도 2b), HL-60(도 2c) 및 NB4(도 2d) 세포주에서 아폽토시스 관련 단백질에 대한 화합물 1의 효과를 보여준다;
도 3a-3c는 MV4-11(도 3a), HL-60(도 3b) 및 NB4(도 3c) 세포주에서 세포주기에 대한 화합물 1의 효과를 보여준다.
도 4a 내지 4c는 화합물 1이 종양 마우스 모델에서 종양 성장을 억제하는 실험 결과를 보여주며, 여기서 도 4a는 백혈병 세포를 피하 주사한 마우스의 상대적 체중의 변화를 시간 경과에 따라 나타낸 것이며(투여 첫날의 체중에 기초하여 계산됨); 도 4b는 시간 경과에 따른 마우스 로딩 종양 크기의 변화를 보여주며; 도 4c는 각 그룹에 대해 최종적으로 계산된 종양 억제율(TGI)을 나타내고, 도면에 도시된 각 데이터 포인트의 값은 각 실험 그룹의 평균을 반영한다.
용어
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 청구된 주제가 속하는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
달리 언급되지 않는 한, 질량 분석법, NMR, HPLC, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약학과 같은 통상적인 방법이 당해 기술분야 내에서 본 발명에 사용된다. 특정 정의가 제공되지 않는 한, 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의학적 및 제약 화학과 화학적으로 관련된 명명법 및 실험실 작업 및 기술은 당업자에게 공지되어 있다. 일반적으로, 전술한 기술 및 절차는 당해 기술분야에서 잘 알려진 통상의 방법에 의해 수행될 수 있으며, 본 명세서에서 인용되고 논의된 다양한 일반적이고 보다 구체적인 문헌에 기술되어 있다.
"알킬"은 분지형 또는 선형 알킬일 수 있는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 구조에 따라, 알킬기는 1가 기 또는 2가 기(즉, 알킬렌기)일 수 있다. 본 발명에 있어서, 알킬기는 바람직하게는 탄소수 1 내지 6을 갖는 "저급 알킬기(lower alkyl group)", 더욱 바람직하게는 탄소수 1 내지 3을 갖는 "저급 알킬기"이다. 전형적인 알킬기는 이에 한정하는 것은 아니나, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실 등을 포함한다.
"알콕시"는 알킬이 본원에 정의된 바와 같은 -O-알킬기를 지칭한다. 전형적인 알콕시기는 이에 한정하는 것은 아니나, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 펜틸옥시, 헥실옥시 등을 포함한다.
용어 "아릴"은 평면 링이 비국재화된(delocalized) π-전자 시스템을 가지며 4n+2π 전자를 함유하고, 여기서 n은 정수임을 의미한다. 아릴 고리는 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 9개 초과의 원자로 구성될 수 있다. 아릴기는 임의로 치환될 수 있다. 용어 "아릴"은 카보시클릭 아릴기(페닐과 같은) 및 헤테로시클릭 아릴(또는 "헤테로 아릴" 또는 "헤테로 방향족")기(피리딘과 같은)를 포함한다. 상기 용어는 모노시클릭 또는 융합된 폴리시클릭(즉, 인접한 탄소 원자 쌍을 공유하는 고리)기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은 아릴 고리에서 고리를 구성하는 각각의 원자가 탄소 원자임을 의미한다. 아릴 고리는 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 9개 초과의 원자로 구성될 수 있다. 아릴기는 임의로 치환될 수 있다. 아릴기의 예는 이에 한정하는 것은 아니나, 페닐, 나프틸, 페난트릴, 안트릴, 플루오레닐 및 인데닐(indenyl)을 포함한다. 구조에 따라, 아릴기는 1가 기 또는 2가 기(즉, 아릴렌기)일 수 있다.
"알킬(아릴)"은 본원에 정의된 바와 같이 아릴기로 치환된 본원에 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다. 비제한적인 알킬(아릴)기는 벤질, 펜에틸 등을 포함한다.
용어 "시클로 알킬"은 탄소 및 수소만을 함유하는 모노시클릭 또는 폴리시클릭기를 지칭한다. 시클로알킬기는 3 내지 10개의 고리 원자를 갖는 기를 포함한다. 구조에 따라, 시클로알킬기는 1가 기 또는 2가 기(즉, 시클로알킬렌기)일 수 있다. 본 발명에서, 시클로알킬기는 바람직하게 3 내지 8개의 탄소원자를 갖는 시클로알킬기, 더욱더 바람직하게는 3 내지 6개의 탄소원자를 갖는 "저급 시클로알킬기"이다.
"알킬(시클로알킬)"은 본원에 정의된 바와 같이 시클로알킬기로 치환된 본원에 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다. 비제한적 알킬(시클로알킬)기는 시클로프로필메틸, 시클로부틸메틸, 시클로펜틸메틸, 시클로헥실메틸 등을 포함한다.
용어 "할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 지칭한다.
용어 "할로알킬" 및 "할로알콕시"는 알킬 또는 알콕시의 구조를 포함하고, 이들 중 적어도 하나의 수소는 할로겐 원자로 치환된다. 특정 구현으로, 둘 이상의 수소 원자가 할로겐 원자로 치환되는 경우, 할로겐 원자는 서로 동일하거나 상이하다.
본원에 사용된 용어 "시아노"는 화학식 -CN의 라디칼을 지칭한다.
용어 "카르보닐"은 이중 결합을 통해 탄소와 산소의 두 원자의 결합에 의해 형성된 유기 작용기(C=O)이다.
용어 "알카노일" 또는 "알킬카르보닐"은 알킬기로 추가로 치환된 카르보닐기를 지칭한다. 전형적인 알카노일기는 이에 한정하는 것은 아니나, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 펜타노일, 헥사노일 등을 포함한다.
용어 "아미노"는 -NH2 기를 지칭한다. 용어 "알킬아미노"는 1개 또는 2개의 알킬기, 특히 -NRR' 기로 추가로 치환된 아미노 치환기를 지칭하며, 여기서 -NRR'이 -NH2가 아닌 경우, R 및 R'는 각각 독립적으로 수소 또는 저급 알킬로부터 선택된다. 용어 "아미노알킬"은 하나 이상의 아미노기로 추가로 치환된 알킬 치환기를 지칭한다. 용어 "시아노알킬"은 하나 이상의 시아노기로 추가로 치환된 알킬 치환기를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "헤테로알킬"은 본원에 정의된 알킬기의 골격 사슬의 하나 이상의 원자가 산소, 질소, 황, 규소, 인 또는 이들의 조합과 같은 헤테로원자인 것을 의미한다. 헤테로원자(들)는 헤테로알킬기 내의 어느 곳에 위치하거나 또는 헤테로알킬기가 분자의 나머지 부분에 부착된 위치에 위치할 수 있다.
용어 "헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 고리 헤테로원자를 포함하는 아릴기를 지칭한다. N-함유 "헤테로아릴"부(moiety)는 아릴기의 고리에서 적어도 하나의 골격 원자가 질소임을 의미한다. 구조에 따라, 헤테로아릴기는 1가 기 또는 2가 기(즉, 헤테로아릴렌기)일 수 있다. 헤테로아릴기의 예는 이에 한정하는 것은 아니나, 피리딜, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸릴, 벤조푸릴, 벤조티에닐, 벤조티아졸릴, 벤조옥사졸릴, 퀴나졸리닐, 나프티리딜 및 푸로피리디닐 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클로알킬"은 비-아릴 고리에서 고리를 구성하는 하나 이상의 원자가 질소, 산소 및 황으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 헤테로 원자임을 의미한다. 헤테로시클로알킬 고리는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 9개 초과의 원자로 구성될 수 있다. 헤테로시클로알킬기는 임의로 치환될 수 있다. 헤테로시클로 알킬기의 예는 이에 한정하는 것은 아니나, 락탐, 락톤, 시클릭 이민, 시클릭 티오민, 시클릭 카바메이트, 테트라히드로티오피란, 4H-피란, 테트라히드로피란, 피페리딘, 1,3-다이옥신, 1,3-다이옥산, 1,4-다이옥신, 1,4-다이옥산, 피페라진, 1,3-옥사티안, 1,4-옥세탄, 1,4-옥사티안, 테트라히드로-1,4-티아진, 2H-1,2-옥사진, 말레이미드, 숙신이미드, 바르비투릭산, 티오바르비투릭산, 디옥소피페라진, 히단토인, 디하이로우라실, 모르폴린, 트리옥산, 헥사히드로 -1,3,5-트리아진, 테트라히드로티오펜, 테트라히드로푸란, 피롤린, 피롤리딘, 이미다졸리딘, 피롤리돈, 피라졸린, 피라졸리딘, 이미다졸린, 이미다졸리딘, 1,3-디옥솔, 1,3-디옥솔란, 1,3-디티올렐렌, 1,3-디티올란, 이속사졸린, 이속사졸리딘, 옥사졸린, 옥사졸리딘, 옥사졸리디논, 티아졸린, 티아졸리딘 및 1,3-옥사티올란을 포함한다. 구조에 따라, 헤테로시클로알킬기는 1가 기 또는 2가 기(즉, 헤테로시클로알킬렌기)일 수 있다.
용어 "알킬(헤테로아릴)"은 본원에 정의된 바와 같이 헤테로아릴기로 치환된, 본원에 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다.
용어 "알킬(헤테로시클로알킬)"은 본원에 정의된 바와 같이 헤테로시클로알킬기로 치환된, 본원에 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다.
용어 "임의로 치환된" 또는 "치환된"은 언급된 기가 하나 이상의 추가적인 기로 치환될 수 있으며, 이들 각각은 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릭기, 히드록시, 알콕시, 시아노, 할로겐, 아미드, 니트로, 할로알킬, 아미노, 메틸술포닐 등으로부터 개별적으로 그리고 독립적으로 선택됨을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, GI50은 세포 성장의 50%를 억제하는데 필요한 약물의 농도, 즉 세포(예를 들어, 암 세포)의 50%의 성장이 억제되거나 제어될 때의 약물의 농도를 지칭한다.
본원에 사용된 IC50은 효과를 측정하는 어세이에서 최대 효과의 50% 억제가 수득되는 특정 시험 화합물의 양, 농도 또는 용량을 지칭한다.
본 발명의 CDK9 키나아제 인히비터
본 발명은 사이클린 의존성 키나아제 CDK9의 인히비터에 관한 것이다. 특히, 본 발명에서 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 대사물 또는 프로드럭이 제공된다:
Figure 112019117879142-pct00002
상기 식에서, Y는 p-플루오로벤조일, N이 R3으로 임의로 치환된 트랜스-4-아미노시클로헥실, 및 N이 R3으로 임의로 치환된 트랜스-4-아미노시클로헥실메틸로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
Z는 NH, S 및 O로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R2는 수소, C1-C3 알킬, C3-C6 시클로알킬, R4로 임의로 치환된 C3-C6 헤테로시클로알킬, 및 R4로 임의로 치환된 페닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R3은 C2-C6 알카노일 및 C1-C3 알콕시 (C1-C3)알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R4는 시아노 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 바람직한 구현으로, Y는 하기 구조로부터 선택된다:
Figure 112019117879142-pct00003
바람직한 구현으로, R1은 염소이다.
다른 바람직한 구현으로, R2는 수소, 메틸, 시클로프로필, 시클로헥실, 시아노로 임의로 치환된 4-테트라히드로피라닐, 및 불소로 임의로 치환된 페닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
다른 바람직한 구현으로, R3는 아세틸, 2-메톡시에틸, (R)-1-메틸-2-메톡시에틸 및 (S)-1-메틸-2-메톡시에틸로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명에서, 특히 바람직한 화합물은 하기를 포함한다:
4-(((4-(5-클로로-2-(((1R,4r)-4-(((R)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카르보니트릴;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민;
N-((1r,4r)-4-((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)아세트아미드;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥실-1,4-디아민;
(1S,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((S)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥실-1,4-디아민;
(1R,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((R)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민;
4-(2-((((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)메틸)아미노)-5-클로로피리딘-4-일)-N-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)티아졸-2-아민;
N-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-4-플루오로벤즈아미드;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(메틸아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((시클로헥실메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
(1r,4r)-N1-(4-(2-(벤질아미노)티아졸-4-일)-5-클로로피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((4-플루오로벤질)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((시클로프로필메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
4-((4-(5-클로로-2-(((1r,4r)-4-((2-메톡시에틸)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카르보니트릴;
4-(((4-(5-클로로-2-(((1S,4r)-4-(((S)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카르보니트릴;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)메르캅토)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
(1r,4r)-N1-(2-메톡시에틸)-N4-(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민.
본 발명의 바람직한 화합물들의 구조가 하기에 열거된다.
Figure 112019117879142-pct00004
Figure 112019117879142-pct00005
상기 표에는 본 발명의 바람직한 화합물들의 구조가 기재되어 있지만, 시클로헥실기 상의 파라-아미노기에 각각 부착된 2개의 탄소 원자는 키랄 중심이 아니며,
Figure 112019117879142-pct00006
또는
Figure 112019117879142-pct00007
의 화학 결합 표시는 파라-아미노기에 대한 2개의 화학 결합의 부착이 시클로헥실기에 대해 트랜스-구조화되는 것을 나타내고, 이에 따라 이들 2개의 화학 결합
Figure 112019117879142-pct00008
및
Figure 112019117879142-pct00009
의 교환으로 나타내어지는 화합물들은 또한 본 발명의 범위 내에 있는 것이 이해되어야 한다.
본원에 신규한 키나아제 인히비터가 기재된다. 이 화합물의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 약학적으로 활성적인 대사물 및 프로드럭이 또한 본원에 기재된다.
다른 또는 추가의 구현으로, 본원에 기술된 화합물은 체내에서 대사될 필요가 있는 이를 필요로 하는 대상자에게 투여되어 대사물을 생성하고, 이는 그 다음 원하는 치료 효과를 포함하여 원하는 효과를 생성하는데 사용된다.
본원에 기재된 화합물은 약학적으로 허용되는 염으로 제조 및/또는 사용될 수 있다. 약학적으로 허용되는 염의 유형은 이에 한정하는 것은 아니나, (1) 화합물의 유리 염기 형태를 염산, 히드로브롬산, 황산, 질산, 인산, 메타인산 등과 같은 약학적으로 허용되는 무기산과 반응시킴으로써; 또는 아세트산, 프로피온산, 카프로산, 시클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 말산, 시트르산, 숙신산, 말레산, 타르타르산, 푸마르산, 트리플루오로아세트산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 1,2-에탄디설폰산, 2-히드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산, 4-메틸비시클로-[2.2.2]옥트-2-엔-1-카르복실산, 2-나프탈렌설폰산, tert-부틸아세트산, 글루코헵톤산, 4,4'-메틸렌 비스-(3-히드록시-2-엔-1-카르복실산), 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, 도데실 설페이트, 글루콘산, 글루탐산, 살리실산, 히드록시나프토산, 스테아르산, 뮤콘산 등과 같은 유기산과 반응시킴으로써 형성되는 산 부가염; (2) 모 화합물의 산성 양성자가 알칼리 금속 이온(예를 들어, 리튬, 소듐, 포타슘), 알칼리 토금속 이온(예를 들어, 마그네슘 또는 칼슘), 또는 알루미늄 이온과 같은 금속 이온으로 대체되거나; 또는 유기 염기와 배위될 때 형성되는 염기 부가염을 포함한다. 허용되는 유기 염기는 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트리메틸아민, N-메틸글루카민 등을 포함한다. 허용되는 무기 염기는 알루미늄 히드록시드, 칼슘 히드록시드, 포타슘 히드록시드, 소듐 카보네이트, 소듐 히드록시드 등을 포함한다.
약학적으로 허용되는 염의 상응하는 반대이온은 이에 한정하는 것은 아니나, 이온 교환 크로마토그래피, 이온 크로마토그래피, 모세관 전기영동, 유도 결합 플라즈마, 원자 흡수 분광법, 질량 분석법 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 다양한 방법을 사용하여 분석 및 특성화될 수 있다.
염은 다음과 같은 기술 중 적어도 하나를 사용하여 회수된다: 여과, 비-용매에 의한 침전 후 여과, 용매의 증발, 또는 수용액의 경우에 동결 건조.
약학적으로 허용되는 염, 다형체(polymorphs) 및/또는 용매화물의 스크리닝 및 특성화는 이에 한정하는 것은 아니나, 열 분석, X-선 회절, 분광법, 현미경 및 원소 분석을 포함하는 다양한 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 사용되는 다양한 스펙트럼 기술은 이에 한정하는 것은 아니나, 라만, FTIR, UVIS 및 NMR(액체 및 고체 상태)을 포함한다. 다양한 현미경 기술은 이에 한정하는 것은 아니나, IR 현미경 및 라만 현미경을 포함한다.
본 발명의 약학 조성물
본 발명에서, 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 약학적 활성 대사물 또는 프로드럭, 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제, 및 임의로 다른 치료제를 포함하는 약학 조성물이 또한 제공된다.
치료 동안, 이는 단독으로 또는 적절하게 하나 이상의 다른 치료제와 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 포함하는 약물은 주사, 경구, 흡입, 직장 및 경피 투여 중 적어도 하나에 의해 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구현으로, 본 발명에 따라 환자를 치료할 때, 주어진 약물의 양은 특정 투여 요법, 질병 또는 장애의 유형 및 그의 심각성, 및 치료를 필요로 하는 대상자 또는 호스트의 독특성(예, 체중)과 같은 같은 다수의 인자에 따라 달라지나, 예를 들어, 채용된 특정 약물, 투여 경로, 치료되는 조건, 및 치료되는 대상자 또는 호스트, 투여받는 용량을 포함하는 특정 환경은 당업계에 통상적으로 알려진 방법에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 성인을 위한 치료에 사용하기 위해, 투여되는 용량은 전형적으로 0.02 내지 5000mg/일, 예를 들어 약 1 내지 1500mg/일의 범위일 것이다. 원하는 투여량은 단일 투여량으로, 또는 동시에 (또는 단기간에) 또는 적절한 간격으로, 예를 들어 하루에 2, 3, 4 또는 그 이상의 분할 투여량과 같은 분할 투여량으로 알맞게 제공될 수 있다. 당업자는 상기 투여량 범위가 주어지지만, 특정 유효량은 환자의 컨디션 및 의사의 진단과 관련하여 적절하게 조정될 수 있음을 이해할 것이다.
본 발명의 약물의 용도
화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 대사물 또는 프로드럭, 또는 이들을 포함하는 약학 조성물은 사이클린-의존성 키나아제(CDK) 및 사이클린의 활성, 특히 CDK9의 활성을 억제하는데 사용될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 대사물 또는 프로드럭은 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 폐 선암종, 편평세포 폐 암종, 췌장암, 전립선암, 방광암, 간암, 피부암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 악성 신경교종, 횡문근육종, 난소암, 성상세포종, 유잉 육종, 망막모세포종, 상피세포 암종, 결장암, 신장암, 위장관 간질 종양, 백혈병, 조직구 림프종 및 비인두 암종으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 질병의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
더욱 바람직하게, 본원에 기재된 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 에스테르, 산, 대사물 또는 프로드럭, 또는 이들을 포함하는 약학 조성물은 CDK9의 인히비터로서 사용될 수 있으며, 이는 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 폐 선암종, 편평세포 폐 암종, 췌장암, 전립선암, 방광암, 간암, 피부암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 악성 신경교종, 횡문근육종, 난소암, 성상세포종, 유잉 육종, 망막모세포종, 상피세포 암종, 결장암, 신장암, 위장관 간질 종양, 백혈병, 조직구 림프종 및 비인두 암종의 치료를 위해 이를 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 사용하여 사용될 수 있다.
화합물의 제조
화학식 (I)의 화합물은 당업자에게 공지된 표준 합성 기술을 사용하거나 또는 본원에 기재된 방법과 조합하여 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 합성될 수 있다. 또한, 본원에 제시된 용매, 온도 및 다른 반응 조건은 당업자의 기술에 따라 달라질 수 있다. 추가의 가이드로서, 다음의 합성 방법이 또한 이용될 수 있다.
반응은 본원에 기재된 화합물을 제공하기 위해 순차적으로 사용되거나; 또는 이들은 본원에 기재된 방법 및/또는 당업계에 공지된 방법에 의해 후속적으로 첨가되는 단편을 합성하는데 사용될 수 있다.
특정 구현으로, 본원에 기재된 세린 키나아제 인히비터 화합물의 제조방법 및 이의 사용 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현으로, 본원에 기재된 화합물은 하기 합성 스킴을 사용하여 합성될 수 있다. 화합물은 적절한 출발 물질을 사용하여 하기 기재된 것과 유사한 방법으로 합성될 수 있다.
본원에 기재된 화합물의 합성을 위한 출발 물질은 합성되거나 상업적 공급원으로부터 얻을 수 있다. 본원에 기술된 화합물 및 상이한 치환기를 갖는 다른 관련 화합물은 당업자에게 공지된 기술 및 출발 물질을 사용하여 합성될 수 있다. 본원에 개시된 화합물을 제조하는 일반적인 방법은 본 기술분야에 공지된 반응으로부터 유도될 수 있고, 반응은 당업자에 의해 적절한 것으로 간주되는 시약 및 조건에 의해 본원에 제공된 분자에 다양한 부들(moieties)을 도입하도록 변형될 수 있다.
필요에 따라, 이에 한정하는 것은 아니나, 여과, 증류, 결정화, 크로마토그래피 등을 포함하는 통상적인 기술을 사용하여 반응 생성물을 분리 및 정제할 수 있다. 이러한 제품은 물리적 상수 및 스펙트럼 데이터를 포함한 통상적인 방법을 사용하여 특성화될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물의 제조를 위한 합성 스킴의 비제한적인 실시예가 하기에 기재된다.
실시예
하기 특정 비제한적 예는 단지 예시적인 것으로 해석되어야 하며, 어떠한 방식으로도 본 개시를 제한하지 않는다. 추가적인 세부 사항은 설명되지 않지만, 당업자는 본 명세서의 설명에 기초하여 본 개시를 완전히 이용할 수 있는 것으로 여겨진다.
실시예 1: 4-(((4-(5-클로로-2-(((1R,4r)-4-(((R)-1-메톡시 프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴
Figure 112019117879142-pct00010
단계 1: 5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘
5-클로로-2-플루오로피리딘-4-보론산(0.7g, 4.46mmol) 및 피나콜(0.63g, 5.35mmol)을 톨루엔 50mL에 첨가하고, 혼합물을 120℃로 가온하고 밤새 환류시켰으며, TLC는 소량의 재료가 남은 것으로 나타났다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 농축시키고, 오일 펌프로 건조시켜 0.92g의 5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘을 백색 고체로서 얻었다. 수율 80%, MS(ESI): m/z 258.1 (M + H)+.
단계 2: (S)-1-메톡시프로판-2-일 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
60% 소듐 히드리드 NaH(6.52g, 283mmol)를 건조 테트라히드로푸란 THF(200mL)에 첨가하고, 이를 아이스 배스에 의해 0℃로 냉각시키고, 질소 하에 보호한 다음, (S)-(+)-1-메톡시-2-프로판올(21g, 233mmol)을 적가하였다. 적가 종료 후, 혼합물을 실온에서 1.5시간 교반했다. 반응 용액을 다시 0℃로 냉각시키고, 테트라히드로푸란 THF(200mL) 중 p-톨루엔설포닐 클로라이드(45.3g, 283mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(500mL)로 희석하고, 아이스-냉각 하에서 물(500mL)을 적가하여 급냉시키고 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(200mL)로 1회 추출하였다. 유기상을 합하고, 물(200mL) 및 포화 염수(200mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 연한 황색 유성 조 생성물 43g을 수득하고, 이를 컬럼으로 분리하였다(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)을 사용하여 연한 황색 오일로서 37g의 (S)-1-메톡시프로판-2-일 4-메틸벤젠설포네이트를 수득하였다. 수율 65.1%, MS(ESI): m/z 245.1(M + H)+.
단계 3: (1r, 4R)-N1-((R)-1-메톡시프로판-2-일) 시클로헥산-1,4-디아민의 합성
(S)-1-메톡시프로판-2-일 4-메틸벤젠설포네이트(5g, 20.5mmol) 및 트랜스-1,4-시클로헥산디아민(5.84g, 51.2mmol)을 50mL의 아세토니트릴에 첨가하고, 이를 90℃로 가열하고, 밤새 반응시켰다. 반응이 완료될 때까지 TLC로 반응을 수행하였다. 반응 용액을 냉각 후 여과하고, 여과물을 농축했다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 실리카겔과 혼합하고, 컬럼(디클로로메탄/메탄올 = 10/1)에 의해 분리하여 연한 황색 액체로서 2.5g의 (1r, 4R)-N1-((R)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 화합물을 수득하였다. 수율 65%, MS(ESI): m/z 187.3(M + H)+.
단계 4: tert-부틸 5-브로모티아졸-2-일카바메이트의 합성
5-브로모티아졸-2-아민 히드로브로마이드(105g, 403mmol)를 500 mL의 테트라히드로푸란에 현탁시키고, 디메틸아미노피리딘(2.41g, 20mmol)을 첨가하여 백색 탁도를 형성하였다. 테트라히드로푸란 중 디-tert-부틸 디카보네이트의 용액(105.6g, 484.6mmol)을 서서히 적가하였다. 혼합물을 2일 동안 반응시켰다. 이어서, 반응 용액을 농축시키고, 디클로로메탄(300mL)에 용해시키고, 실리카겔과 혼합하고, 컬럼에 의해 분리하여(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1-6/1 구배로 용리) 회백색 고체로서 45g의 tert-부틸 5-브로모티아졸-2-일카바메이트를 수득하였다. 수율 40%, MS(ESI): m/z 278.98(M + H)+.
단계 5: tert-부틸 4-브로모티아졸-2-일카바메이트의 합성
200ml의 테트라히드로푸란 중 디이소프로필아민(64ml, 446mmol)의 용액을 건조 3구 병에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호하고, 0℃로 냉각시킨 다음, n-부틸리튬(2.5M, 173ml, 431.7mmol)을 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 1시간 동안 반응을 수행하였다. 400mL의 테트라히드로푸란 중 tert-부틸 5-브로모티아졸-2-일카바메이트의 용액을 0℃에서 적가하고, 첨가가 완료된 후, 2시간 동안 반응을 수행하였다. TLC는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 0℃에서, 얼음물(5mL)을 서서히 첨가하여 반응을 켄칭하고, 30분 동안 교반한 다음, 포화 암모늄 클로라이드(500mL) 수용액을 첨가하고 분리하였다. 수성 층을 디클로로메탄(2 x 300 mL)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 30:1로 재결정화하여 백색 고체로서 31g의 tert-부틸 4-브로모티아졸-2-일카바메이트를 수득하였다. 수율 77.5 %, MS(ESI): m/z 278.98(M + H)+.
단계 6: 4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-메틸 카보네이트의 합성
메틸 시아노아세테이트(39.1g, 395.3mmol) 및 2,2-디브로모에틸 에테르(100g, 434.8mmol)를 600mL의 디메틸포름아미드에 첨가하고, DBU(90g, 593mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 가열하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 혼합물을 여과하여 고체를 제거하고, 이를 에틸 아세테이트(2 x 300mL)로 세척하였다. 여액을 농축시켜 갈색 오일을 수득하고, 이를 감압 하에 증류시켰다. 내부 온도가 65-70℃ 일때 분획을 받았으며, 이는 무색 액체이었고, 결정화하여 백색 고체로서 42g의 4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-메틸 카보네이트를 수득하였다. 수율 62.8%, MS(ESI): m/z178.2(M + H)+.
단계 7: 4-(히드록시메틸)-테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴의 합성
4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-메틸 카보네이트(42g, 248.4mmol)를 400ml의 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 및 40ml의 메탄올에 용해시키고, 이를 아이스 배스에서 0℃로 냉각시키고, 소듐 보로히드라이드(11.1g, 149mmol)를 조금씩 첨가하였다. 첨가 완료 후, 혼합물을 자연적으로 실온으로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. TLC는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 이어서, 반응 용액을 농축한 다음, 메탄올을 첨가한 후 다시 농축시켜 과량의 소듐 보로히드라이드를 켄칭한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)으로 분리하여 연한 황색 오일로서 28g의 4-(히드록시메틸)-테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴을 수득하였다. 수율 79.5%, MS(ESI): m/z 142.1(M + H)+.
단계 8: tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)((4-시아노테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트의 합성
4-(히드록시메틸)-테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴, tert-부틸 4-브로모 티아졸-2-일카바메이트 및 트리페닐포스핀을 무수 테트라히드로푸란 THF에 첨가하고, 이를 0℃로 냉각시킨 다음, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 DIAD를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 40℃로 가온하고 밤새 교반하였다. 이어서, 반응 용액을 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 실리카겔과 혼합하고, 컬럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1, 30/1, 20/1)에 의해 분리하여 백색 고체로서 365mg의 tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)(4-시아노테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 50%, MS(ESI): m/z 402.1(M + H)+.
단계 9: tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트의 합성
5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 및 소듐 카보네이트를 디메틸 에테르/H2O/디옥산의 혼합물에 첨가하고, 이를 질소로 2회 대체한 후, tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)((4-시아노테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트 및 테트라트리페닐포스핀 팔라듐 Pd(pph3)4를 첨가하였다. 시스템(systerm)을 질소로 3회 대체한 다음, 70℃로 가온하고, 6시간 동안 반응시켰다. TLC가 출발 물질의 절반 만이 남아있음을 나타내면, 가열을 중단하고 반응물을 처리하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 후, 에틸 아세테이트 및 메탄올을 첨가했다. 혼합물을 여과하고, 케이크를 에틸 아세테이트로 세척하고, 여액을 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 포화 염수로 세척하고, 분리하였다. 유기상을 무수 소듐 설페이트로 건조하고 여과하였다. 여액을 실리카겔과 혼합하고 컬럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1)으로 분리하여 백색 발포성 고체로서 3.2g의 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4일)메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 55%, MS(ESI): m/z 453.1(M + H)+.
단계 10: 4-(((4-(5-클로로-2-(((1R,4r)-4-(((R)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트(3.2g, 7.1mmol), (1r, 4R)-N1-((R)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민(3.9g, 21.2mmol) 및 디이소프로필에틸아민 DIPEA를 30mL의 디메틸 설폭시드에 첨가하였고, 이를 질소 하에 보호한 다음, 100-110℃까지 가온하고, 이틀 동안 반응시켰다. 반응은 TLC 및 LCMS에 의해 모니터링되었다. tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트의 출발 물질이 완전히 소모되고, BOC를 제거하면서 일부 중간체가 남았을 때, 반응이 중단되었다. 반응 혼합물을 냉각시킨 후, 에틸 아세테이트(60mL)로 희석하고, 물(150mL)을 아이스-냉각 하에 첨가하고 분리하였다. 이어서, 수성상을 에틸 아세테이트(2 x 50mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(100mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 여액을 농축시켜, 조 생성물을 황갈색 오일로서 수득하였다. 조 생성물을 컬럼(아세토니트릴/물/트리플루오로아세트산 = 80/20/0.001)에 의해 분리하여 연한 황색 고체로서 700mg의 4-(((4-(5-클로로-2-(((1R, 4r)-4-(((R)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴을 수득하였다. 수율 19.1%. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 5.92 (brs, 1H), 4.45 (d, J=8.0Hz, 1H), 4.02 (dd, J1=2.8Hz, J2=12Hz, 2H), 3.71-3.74 (m, 4H), 3.54-3.56 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 3.21-3.25 (m, 2H), 3.00-3.05 (m, 1H), 2.50-2.60 (m, 1H), 2.15 (d, J=9.6Hz, 2H), 2.04-2.07 (m, 1H), 1.95 (d, J=12.8Hz, 3H), 1.74-1.82 (m, 3H), 1.10-1.30 (m, 4H), 1.00 (d, J=8.4Hz, 3H), MS(ESI): m/z 519.3 (M + H)+.
실시예 2: (1r,4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00011
단계 1: tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트이 합성
tert-부틸 4-브로모티아졸-2-카바메이트(12.53g, 107.91mmol), (테트라히드로-2H-피란-4-일)메탄올(20g, 71.94mmol) 및 트리페닐포스핀을 360mL의 무수 THF(재증류됨)에 첨가하고, 이를 -10℃로 냉각시킨 후, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 DIAD(21.82g, 107.91mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 50℃로 가온하고 3시간 동안 반응시켰다. TLC는 출발 물질의 소멸을 보여주었다. 이어서, 반응 용액을 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 실리카겔과 혼합하고, 컬럼(석유 에테르/에틸 아세테이트=30/1, 20/1)에 의해 분리하여 백색 고체로서 21g의 tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 87.5%, MS(ESI): m/z 519.3(M + H) +.
단계 2: tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸) 카바메이트 (21g, 1.51mmol), 5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5- 테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘(30g, 3.0mmol), Pd(dppf)Cl2(2.04g, 0.151) 및 Na2CO3(15g, 3.78mmol)을 첨가하였다. 500mL의 디옥산 및 100mL의 물을 질소로 보호 한 다음 90 ℃까지 가온하고 밤새 반응시켰다. 반응은 TLC 및 LCMS에 의해 모니터링되었다. tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트가 완전히 소비되었을 때, 반응이 정지되었다. 반응 용액을 냉각시킨 후 물(100mL)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 100mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 조 생성물을 황갈색 오일로서 수득 하였다. 잔류물을 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30:1, 25:1)로 분리하여 백색 고체로서 19.4g의 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로 피리딘-4-일)티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 81.5%, MS(ESI): m/z 428.1(M + H)+.
단계 3: tert-부틸 ((1r,4r)-4-((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)카바메이트의 합성
tert-부틸 (4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트 및 tert-부틸(1r,4r)-(4-아미노시클로헥실)카바메이트를 DMSO에 첨가하고, 디이소프로필에틸아민 DIEA를 첨가했다. 혼합물을 100℃까지 가온하고, 2일 동안 반응시켰다. TLC가 출발 물질이 사라짐을 나타내었을 때, 가열을 중단하고 반응물을 처리하였다. 반응 용액을 실온까지 냉각하고, 아이스 워터에 부었다. 혼합물을 디클로로메탄(3 x 200mL)으로 추출하였다. 유기상을 포화 염수로 세정하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고 여과했다. 여액을 실리카겔과 혼합하고, 컬럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1, 2:1, 1:1)으로 분리하여 연한 황색 고체로서 3.6 g의 tert-부틸((1r,4r)-4-((5)-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)카바메이트를 수득하였다. 수율 40%, MS(ESI):m/z 522.2(M + H)+.
단계 4: (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸 ((1r,4r)-4-((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)카바메이트(2.9g, 5.56mmol)를 테트라히드로푸란/디클로로메탄(20mL/20mL)에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호하고 0℃로 냉각시킨 후, 20mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응을 TLC로 모니터링 하였다. 반응액을 농축한 후, 아이스 워터에 서서히 부었다. 혼합물을 디클로로메탄(3 x 30mL)으로 추출하였다. 유기상을 포화 염수로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 조 생설물을 수득하였다. 조 생성물을 디클로로메탄:에틸 아세테이트 = 2:1로 베팅하고(beated), 여과하고, 건조시켜 백색 고체로서 1.6g의 (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 68%, 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 5.21-5.30 (m, 1H), 4.32 (d, J=8.0Hz, 1H)), 3.99-4.03 (m, 2H), 3.53-3.61 (m, 1H), 3.38-3.44 (m, 2H), 3.23(t, J=6.4Hz, 2H), 2.68-2.74 (m, 1H), 2.11-2.13 (m, 2H), 1.85-2.13 (m, 3H), 1.70-1.73 (m, 2H), 1.10-1.45 (m, 7H). MS(ESI): m/z 422.2 (M + H)+.
실시예 3: N-(1r,4r)-4-((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)아세트아미드의 합성
Figure 112019117879142-pct00012
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민(0.422g, 1mmol)을 10mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 이를 질소 하에 보호하고, 아세틸 클로라이드를 첨가하였다. 다량의 고체가 침전되었고, TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 여과하고, 메틸 tert-부틸 에테르로 베팅하고(beated), 건조시켜 백색 고체로서 187mg의 N-((1r,4r)-4-((5-클로로-4-(2-((((테트라히드로-2H-피란)))-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)아세트아미드를 수득하였다. 수율 41%, 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 5.30-5.34 (m, 1H), 5.20-5.30 (m, 1H), 4.32 (d, J=8.0Hz, 1H), 3.99-4.03 (m, 2H), 3.78-3.83 (m, 1H), 3.62-3.64 (m, 1H), 3.41 (t, J=12Hz, 2H), 3.24 (t, J=6.4Hz, 1H), 2.13-2.15 (m, 2H), 2.00-2.09 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.70-1.73 (m, 2H), 1.20-1.49 (m, 7H). MS(ESI): m/z 464.1 (M + H)+.
실시예 4: (1r,4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2일)-N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00013
(1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민(0.357g, 0.846mmol), 2-브로모에틸 메틸 에테르(0.118g, 0.846mmol) 및 포타슘 카보네이트(0.116g, 0.846mmol)을 10mL DMF에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호한 다음, 최대 100℃로 가온시키고, 2일 동안 반응시켰다. 반응을 TLC 및 LCMS로 모니터링하고, 반응이 정지된 후 처리하였다. 반응 용액을 냉각시킨 후, 얼음물(20 mL)에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 20mL)로 추출하였다. 유기상을 포화 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 황갈색 오일로서 조 생성물을 얻었다. 잔류물을 컬럼 크로마토 그래피(디클로로메탄/메탄올 = 20:1, 15:1, 10:1)로 분리하여 연한 황색 고체로서 0.070g의 (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 17%, 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 5.65 (brs, 1H), 4.40 (d, J=8.0Hz, 1H), 3.95-4.06 (m, 2H), 3.49-3.70 (m, 3H), 3.28-3.45 (m, 5H), 3.18 (t, J=6.4Hz, 1H), 2.96-3.05 (m, 2H), 2.76-2081 (m, 1H), 2.14-2.28 (m, 6H), 1.85-1.95 (m, 3H), 1.70-1.73 (m, 2H), 1.41-1.60 (m, 2H), 1.13-1.40 (m, 5H). MS(ESI): m/z 480.3 (M + H)+.
실시예 5: (1S,4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N 4 -((S)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00014
단계 1: (R)-1-메톡시프로판-2-올 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
소듐 히드리드 NaH(1.46g, 0.037mmol)를 건조 테트라히드로푸란 THF(1L)에 첨가하고, 이를 아이스-냉각 하에서 0℃로 냉각시키고, 질소 하에 보호한 다음, (R)-(-)-1-메톡시프로판-2-올(3g, 0.033mmol)을 적가하였다. 적가 완료 후, 혼합물을 실온으로 가온하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 다시 0℃로 냉각시키고, 테트라히드로푸란 THF(80mL) 중 p-톨루엔설포닐 클로라이드 TosCl(6.47g, 0.034mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가하는 동안 온도는 10℃ 미만이었다. 첨가한 후, 혼합물을 실온(32℃)에서 밤새 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 아이스-냉각 하에 포화 수성 암모늄 클로라이드(20mL)를 적가하여 반응을 켄칭하고 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(30mL)로 2회 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(50mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 연한 황색 오일로서 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)으로 분리하여 연한 황색 오일로서 4.2g의 (R)-1-메톡시 프로판-2-올 4-메틸벤젠설포네이트를 수득하였다. 수율 52%, MS(ESI): m/z 245.1 (M + H)+.
단계 2: (1S, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((S)-1-메톡시프로판-2-일)-시클로헥산-1,4-디아민의 합성
(1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민(600mg, 1.2mmol), (R)-1-메톡시 프로판-2-올 4-메틸벤젠설포네이트(293mg, 1.42mmol) 및 포타슘 카보네이트(327mg, 2.4mmol)를 20mL의 아세토니트릴에 첨가하였으며, 이를 질소 하에 보호하고 90℃까지 가온하고 밤새 교반하였다. LC-MS에 의해 반응을 모니터링하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 농축하여 연한 황색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 진한 제조 플레이트(디클로로메탄/메탄올 = 8/1)로 분리하여 백색 고체로서 30mg의 (1S, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((S)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 4.3%, 1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 5.59 (brs, 1H), 4.36 (d, J=8.0Hz, 1H), 3.95-4.06 (m, 2H), 3.49-3.65 (m, 2H), 3.40-3.49 (m, 1H), 3.22-3.39 (m, 6H), 3.11-3.20 (m, 2H), 2.95-3.10 (m, 1H), 2.08-2.30 (m, 4H), 1.79-1.96 (m, 2H), 1.62-1.71 (m, 2H), 1.09-1.40 (m, 12H), 0.72-0.98 (m, 2H). MS(ESI): m/z 494.3 (M + H)+.
실시예 6: (1R,4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N 4 -((R)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00015
단계 1: (S)-1-메톡시프로판-2-올 4-메틸벤젠설포네이트의 합성
소듐 히드리드 NaH(60%, 1.46g, 0.037mol)를 건조 테트라히드로푸란 THF(1L)에 첨가하고, 이를 아이스-냉각 하에서 0℃로 냉각시키고, 질소 하에 보호한 다음, (S)-(+)-1-메톡시프로판-2-올(3g, 0.033mol)을 적가하였다. 적가 완료 후, 혼합물을 실온으로 가온하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 다시 0℃로 냉각시키고, 테트라히드로푸란 THF 중 p-톨루엔설포닐 클로라이드 TosCl의 용액을 적가하였다. 첨가하는 동안 온도는 10℃ 미만이었다. 첨가 후, 혼합물을 실온(32℃)에서 밤새 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 아이스-냉각 하에 포화 수성 암모늄 클로라이드(20mL)를 적가하여 반응을 켄칭하고 분리하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(30mL)로 2회 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 연한 황색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)으로 분리하여 연한 황색 오일로서 4.5g의 (S)-1-메톡시프로판-2-올 4-메틸벤젠설포네이트를 수득하였다. 수율 55%, MS(ESI): m/z 245.1 (M + H)+.
단계 2: (1R, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((R)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
(1r,4r)N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민(422mg, 1mmol), (S)-1-메톡시프로판-2-올 4-메틸벤젠설포네이트(122mg, 0.5mmol) 및 포타슘 카보네이트(276mg, 2mmol)를 15mL의 아세토니트릴에 첨가하고, 이를 질소 하에 보고하고, 90℃로 가온하고 밤새 교반하였다. 반응이 25% 완료될 때까지 LC-MS에 의해 반응을 모니터링하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 농축하여 황색 오일로서 조 생성물 수득하였다. 조 생성물을 진한 제조 플레이트(디클로로 메탄/메탄올 = 8/1)로 분리하여 백색 고체로서 83mg의 (1R, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((R)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 17%, 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.06 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 5.30 (brs, 1H), 4.37 (d, J=8.0Hz, 1H), 3.99-4.03 (m, 2H), 3.52-3.59 (m, 1H), 3.25-3.49 (m, 4H), 3.36 (s, 3H), 3.16-3.25 (m, 2H), 3.06-3.10 (m, 1H), 2.60-2.65 (m, 1H), 2.16 (d, J=10.8Hz, 2H), 2.00-2.08 (m, 2H), 1.89-1.95 (m, 2H), 1.33-1.45 (m, 4H), 1.12-1.29 (m, 4H), 1.07 (d, J=6.4Hz, 3H). MS(ESI): m/z 494.2 (M + H)+.
실시예 7: 4-(2-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)메틸)아미노)-5-클로로피리딘-4-일)-N-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)티아졸-2-아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00016
단계 1: tert-부틸((1r,4r)-4-(((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)메틸)시클로헥실)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트(0.7g, 1.6mmol), tert-부틸(1r, 4r)-4-(아미노메틸)시클로헥실카바메이트(0.748g, 3.2mmol) 및 트리에틸아민(0.458 g, 4.8 mmol)을 10mL의 디메틸 설폭시드에 첨가하였다. 혼합물을 110℃로 가열하고, 48시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 용액을 얼음물에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 20mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1, 2:1)로 분리하여 황색 고체로서 tert-부틸((1r, 4r)-4-(((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)메틸)시클로헥실)카바메이트를 수득하였다. 수율 26%, MS(ESI): m/z 536.2 (M + H)+.
단계 2: 4-(2-(((1r, 4r)-4-아미노시클로헥실)메틸)아미노-5-클로로피리딘-4-일)-N-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)티아졸-2-아민의 합성
tert-부틸((1r, 4r)-4-(((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)메틸)시클로헥실)카바메이트(230mg, 0.43mmol)를 디클로로메탄(10mL)에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호하고, 0℃로 냉각시킨 다음, 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응을 TLC로 모니터링하였다. 반응 용액을 농축한 후, 아이스 워터에 서서히 부었다. 혼합물을 디클로로메탄(3 x 30 mL)으로 추출하였다. 유기상을 포화 염수로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 진한 제조 플레이트(디클로로메탄/메탄올 = 5/1)에 의해 분리하여 연한 황색 오일로서 0.065g의 4-(2-(((((1r, 4r)-4-아미노시클로헥실)메틸)아미노)-5-클로로피리딘-4-일)-N-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)티아졸-2-아민을 수득하였다. 수율 34.8%, 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.82 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 3.84-3.88 (m, 2H), 3.32 (t, J=11.2Hz, 2H), 3.16-3.17 (m, 2H), 3.16 (d, J=6.8Hz, 2H), 3.04 (d, J=6.8Hz, 2H), 2.75-2.80 (m, 1H), 1.81-1.92 (m, 5H), 1.61-1.64 (m, 2H), 1.49-1.51 (m, 1H), 1.12-1.29 (m, 5H), 0.92-1.05 (m, 2H). MS(ESI): m/z 436.3 (M + H)+.
실시예 8: N-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-4-플루오로벤즈아미드의 합성
Figure 112019117879142-pct00017
4-플루오로벤즈아미드(0.65g, 4.68mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 DMF(15mL)에 용해시키고, NaH(0.19g, 4.68mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 10분 동안 교반한 다음 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트(1g, 2.34mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 55℃C까지 가온하고, 4시간 동안 반응시킨 후, TLC로 반응을 모니터링하고, 반응을 정지시킨 후, 반응 용액을 물에 붓고, EA(3x20mL)로 추출하였다. 유기상을 포화 염수로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 두꺼운 제조 플레이트(PE:EA = 1:1)로 분리하여 백색 고체로서 0.032g의 N-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-4-플루오로벤즈아미드를 수득하였다. 수율 3.1%, 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.96 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.93-7.96 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.19 (t, J=8.4Hz, 2H), 5.35-5.38 (m, 1H), 4.00-4.04 (m, 2H), 3.40-3.50 (m, 2H), 3.24 (t, J=6.4Hz, 2H), 1.95-2.01 (m, 1H), 1.72-1.76 (m, 2H), 1.36-1.45 (m, 2H). (ESI+): m/z 447.1 [M+H]+.
실시예 9: (1r, 4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-(메틸아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00018
단계 1: tert-부틸((1r, 4r)-4-((2-메톡시에틸)아미노)시클로헥실)카바메이트의 합성
tert-부틸(1r, 4r)-(4-아미노시클로헥실)카바메이트(10.0g, 46.7mmol), 2-브로모에틸메틸에테르(5.2g, 37.4mmol) 및 포타슘 카보네이트(12.9g, 93.4mmol)를 아세토니트릴(150mL)에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC로 모니터링하였다. 출발 물질이 거의 남지 않으면 반응이 정지되었다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 여액을 회전 증발로 건조시키고, 실리카겔과 혼합하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 20:1)로 분리하여 황색을 띤 백색 고체로서 6.3g의 tert-부틸((1r, 4r)-4-((2-메톡시에틸)아미노)시클로헥실)카바메이트를 수득하였다. 수율 50%, MS(ESI): m/z 273.2 (M + H)+.
단계 2: (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸((1r, 4r)-4-((2-메톡시에틸)아미노)시클로헥실)카바메이트(6g, 22.0mmol)를 묽은 염산-테트라히드로푸란(80mL)에 용해시켰다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 다량의 고체가 침전되었다. 반응 용액을 여과했다. 케이크를 건조시켜 백색 고체로서 5.1g의 (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(디히드로클로라이드)을 수득하였다. 수율 94.8%, MS(ESI): m/z 173.2 (M + H)+.
단계 3: tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트의 합성
tert-부틸 4-브로모티아졸-2-일 카바메이트(20.0g, 71.7mmol), 5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-피리딘(37.0g, 143.4mmol), Pd(dppf)Cl2(2.6g, 0.151) 및 Na2CO3(22.8g, 245mmol)을 1,4-디옥산/H2O(350mL/40mL)에 용해시키고, 이를 질소로 3회 대체한 다음, 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 출발 물질은 약간 남았고, 5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘(18.5g, 71.7 mmol)을 추가로 첨가하였다. 반응물을 질소로 3회 대체하고 추가 18시간 동안 85℃에서 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 출발 물질의 약 95%가 생성물로 전환되었다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 여액을 회전 증발로 건조시키고, 실리카겔과 혼합하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1)로 분리하여 백색 고체로서 수율 47%로 11.0g의 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트 및 또 다른 10g의 조 생성물을 수득하였다. MS(ESI): m/z 330.0 (M + H)+.
단계 4: tert-부틸(4-5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)메틸)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트(200mg, 0.61mmol) 및 트리페닐포스핀(239mg, 0.91mmol)을 THF(4mL)에 용해시키고, 이를 질소로 3회 대체하고, 메탄올 MeOH(78mg, 2.43mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1분 동안 교반한 다음, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 DIAD(184mg, 0.91mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 반응 용액을 분리하여 백색 고체로서 205mg의 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 98%, MS(ESI): m/z 344.1 (M + H)+.
단계 5: (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(메틸아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(메틸)카바메이트(200mg, 0.58mmol), (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(150mg, 0.64mmol), 디이소프로필에틸아민 DIEA(375mg, 2.9mol) 및 세슘 플루오라이드(265mg, 1.74 mmol)를 디메틸 설폭시드(3 mL)에 용해시켰다. 반응물을 120℃에서 2일 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 생성물이 생성될 때, 물(40mL)을 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 30mL)로 추출하였다. 추출물을 무수 소듐 설페이트로 건조시키고, 회전 증발로 농축한 다음, 디클로로메탄/메탄올 = 6:1의 현상 용매로 TLC 크로마토 그래피를 제조하여 분리하여 연한 황색 고체로서 80mg의 (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(메틸아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 35%, 1H NMR (400MHz, DMSO) δ 7.97 (s, 1H), 7.61-7.62 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.70 (d, J=7.6Hz, 1H), 3.59-3.61 (m, 2H), 3.37-3.42 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.87 (d, J=4.8Hz, 2H), 2.74-2.77 (m, 2H), 1.90-1.96 (m, 4H), 1.12-1.23 (m, 4H). (ESI+): m/z 396.2 [M+H]+.
실시예 10: (1r, 4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-((시클로헥실메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00019
단계 1: tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(시클로헥실메틸)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트(200mg, 0.61mmol) 및 트리페닐포스핀(239mg, 0.91mmol)을 THF(5mL)에 용해시키고, 이를 질소로 3회 대체하고, 시클로헥실메탄올(207mg, 1.82mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 DIAD(184mg, 0.91mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 반응 용액을 분리하여 백색 고체로서 255mg의 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(시클로헥실메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 99%, (ESI+): m/z 426.1 [M+H]+.
단계 2: (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((시클로헥실메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(시클로헥실메틸)카바메이트(250mg, 0.59mmol), (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(288mg, 1.17mmol), 디이소프로필에틸아민 DIEA(379mg, 2.93mol) 및 세슘 플루오라이드(268mg, 1.76mmol)를 디메틸 설폭시드(8mL)에 용해시켰다. 반응물을 120℃에서 2일 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 생성물이 생성될 때, 물(30mL)을 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄/이소프로판올 = 3:1(2 x 30mL)로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 회전 증발로 농축한 다음, 실리카겔과 혼합하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 50:1 → 20:1)에 의해 분리하여 황색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 = 8:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 조 생성물을 분리하여 연한 황색 고체로서 100mg의 (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(시클로헥실메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 30%, 1H NMR (400MHz, DMSO) δ 7.97 (s, 1H), 7.67-7.69 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.71 (d, J=7.6Hz, 1H), 3.50-3.53 (m, 1H), 3.36-3.47 (m, 2H), 3.13 (t, J=6.0Hz, 2H), 2.94-2.97 (m, 2H), 2.72-2.81 (m, 1H), 1.99-2.02 (m, 4H), 1.61-1.77 (m, 5H), 1.19-1.33 (m, 7H), 0.91-1.01 (m, 2H). (ESI+): m/z 478.3 [M+H]+.
실시예 11: (1r, 4r)-N 1 -(4-(2-(벤질아미노)티아졸-4-일)-5-클로로피리딘-2일)-N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00020
단계 1: tert-부틸 벤질(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트(200mg, 0.61mmol) 및 트리페닐포스핀(239mg, 0.91mmol)을 THF(5mL)에 용해시키고, 이를 질소로 3회 대체한 다음, 벤질 알코올(131mg, 1.21mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, 디이소프로필에틸아민 DIEA(184mg, 0.91mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 8:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 반응 용액을 분리하여 백색 고체로서 246mg의 tert-부틸 벤질(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트를 수득하였다. 수율 97%, (ESI+): m/z 420.1 [M+H]+.
단계 2: (1r, 4r)-N1-(4-(2-(벤질아미노)티아졸-4-일)-5-클로로피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸 벤질(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트(240mg, 0.57mmol), (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(280mg, 1.14mmol), 디이소프로필에틸아민 DIEA(369mg, 2.86mol) 및 세슘 플루오라이드(268mg, 1.71mmol)를 디메틸 설폭시드(8 mL)에 용해시켰다. 반응물을 120℃에서 3일 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 생성물이 생성될 때, 물(30mL)을 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄/이소프로판올 = 3:1(2 x 35mL)로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 회전 증발로 농축한 다음, 실리카겔과 혼합하고 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 20:1)에 의해 분리하여 황색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 = 6:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 조 생성물을 분리하여 연한 황색 고체로서 100mg의 (1r, 4r)-N1-(4-(2-(벤질아미노)티아졸-4-일)-5-클로로피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 30%, 1H NMR (400MHz, DMSO) δ 8.21 (t, J=6.0Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.26-7.40 (m, 6H), 7.05 (s, 1H), 6.72 (d, J=7.6Hz, 1H), 4.52 (d, J=5.6Hz, 2H), 3.46-3.53 (m, 4H), 2.97 (brs, 2H), 2.81 (brs, 1H), 1.99-2.01 (m, 4H), 1.18-1.34 (m, 4H). (ESI+): m/z 472.1 [M+H]+.
실시예 12: (1r, 4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-((4-플루오로벤질)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2일)-N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00021
단계 1: tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)4-플루오로벤질)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트(200mg, 0.61mmol) 및 트리페닐포스핀(239mg, 0.91mmol)을 THF(5mL)에 용해시키고, 이를 질소로 3회 대체한 다음, 4-플루오로벤질 알코올(153mg, 1.21mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, DIAD(184mg, 0.91mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. PE/EA = 10:1의 현상 용액으로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 반응 용액을 분리하여 연한 황색 고체로서 248mg의 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일(4-플루오로벤질)카바메이트를 수득하였다. 수율 93%, (ESI+): m/z 438.1 [M+H]+.
단계 2: (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((4-플루오로벤질)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(4-플루오로벤질)카바메이트(240mg, 0.55mmol), (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(268mg, 1.10mmol), 디이소프로필에틸아민 DIEA(353mg, 2.74mol) 및 세슘 플루오라이드(251mg, 1.65mmol)를 디메틸 설폭시드/N,N-디메틸아세트아미드(3mL/3mL)에 용해시켰다. 반응물을 120℃에서 3일 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 생성물이 생성될 때, 물(35 mL)을 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄/이소프로판올 = 3:1(2 x 30mL)로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 회전 증발로 농축한 다음, 실리카겔과 혼합하고 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 20:1)에 의해 분리하여 황색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 = 8:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 조 생성물을 분리하여 연한 황색 고체로서 100mg의 (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((4-플루오로벤질))아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 30%, 1H NMR (400MHz, DMSO) δ 8.22-8.24 (m, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.41-7.44 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.18 (t, J=8.8Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 6.73 (d, J=7.6Hz, 1H), 4.50 (d, J=5.6Hz, 2H), 3.52-3.55 (m, 3H), 3.29 (s, 3H), 2.96 (brs, 2H), 2.97 (brs, 1H), 1.98-2.01 (m, 4H), 1.21-1.23 (m, 4H). (ESI+): m/z 490.2 [M+H]+.
실시예 13: (1r, 4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-((시클로프로필메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00022
단계 1: tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(시클로프로필메틸)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)카바메이트(200mg, 0.61mmol) 및 트리페닐포스핀(239mg, 0.91mmol)을 테트라히드로푸란(5mL)에 용해시키고, 이를 질소로 3회 대체한 다음, 시클로프로필메탄올(131mg, 1.82mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 DIAD(184mg, 0.91mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 반응 용액을 분리하여 황백색 고체로서 230mg의 tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(시클로프로필메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 98%, (ESI+): m/z 384.1 [M+H]+.
단계 2: (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((시클로프로필메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)(시클로프로필메틸)카바메이트(220mg, 0.57mmol), (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(280mg, 1.15mmol), 디이소프로필에틸아민 DIEA(370mg, 2.86mol) 및 세슘 플루오라이드(262mg, 1.72mmol)를 디메틸 설폭시드/N,N-디메틸아세트아미드(3mL/3mL)에 용해시켰다. 반응물을 120℃에서 2일 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 생성물이 생성될 때, 물(35 mL)을 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄/이소프로판올 = 3:1(2 x 30mL)로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 회전 증발로 농축한 다음, 실리카겔과 혼합하고 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 20:1)에 의해 분리하여 황색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 = 7:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 조 생성물을 분리하여 연한 황색 고체로서 100mg의 (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((시클로프로필메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민)을 수득 하였다. 수율 35%, 1H NMR (400MHz, DMSO) δ 7.97 (s, 1H), 7.84 (t, J=5.6Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 7.74 (d, J=8.0Hz, 2H), 3.52-3.55 (m, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.17 (t, J=6.4Hz, 2H), 2.94 (brs, 1H), 2.70-2.85 (m, 1H), 1.97-2.01 (m, 4H), 1.18-1.23 (m, 5H), 0.46-0.49 (m, 2H), 0.23-0.24 (m, 2H). (ESI+): m/z 436.3 [M+H]+.
실시예 14: 4-((4-(5-클로로-2-(((1r, 4r)-4-((2-메톡시에틸)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴의 합성
Figure 112019117879142-pct00023
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트(250mg, 0.55mmol), (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(270mg, 1.10mmol), 디이소프로필에틸아민 DIEA(355mg, 2.75mol) 및 세슘 플루오라이드(251mg, 1.65mmol)를 디메틸설폭시드/N,N-디메틸아세트아미드(3mL/3mL)에 용해시켰다. 반응물을 120℃에서 3일 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 생성물이 생성될 때, 물(30mL)을 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄/이소프로판올 = 3:1(3 x 30mL)로 추출하였다. 추출물을 무수 소듐 설페이트로 건조시키고, 회전 증발로 농축한 다음, 실리카겔과 혼합하고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 10:1)에 의해 분리하여 황색 고체로서 조 생성물을 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 = 5:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 조 생성물을 분리하여 연한 황색 고체로서 80mg의 4-((4-(5-클로로-2-(((1r, 4r)-4-((2-메톡시에틸)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴을 수득하였다. 수율 28%, 1H NMR (400MHz, DMSO) δ 8.13 (t, J=6.0Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.71 (d, J=7.6Hz, 1H), 3.91-3.95 (m, 2H), 3.67 (d, J=6.4Hz, 2H), 3.45-3.54 (m, 6H), 3.30 (s, 3H), 2.98 (brs, 2H), 2.81 (brs, 1H), 2.00-2.02 (m, 4H), 1.86-1.89 (m, 2H), 1.69-1.72 (m, 2H), 1.19-1.32 (m, 5H). (ESI+): m/z 505.3 [M+H]+.
실시예 15: 4-(((4-(5-클로로-2-(((1S, 4r)-4-(((S)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2-H-피란-4-카보니트릴의 합성
Figure 112019117879142-pct00024
단계 1: (1r, 4S)-N1-((S)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
(R)-1-메톡시프로판-2-올 4-메틸벤젠설포네이트(2.0g, 8.2mmol)를 아세토니트릴(20mL)에 용해시키고, 트랜스-1,4-시클로헥산디아민(2.34g, 20.5mmol)을 첨가하였다. 반응물을 교반하고, 85℃에서 16시간 동안 환류시켰다. TLC는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고 여과하였다. 여액을 회전 증발에 의해 건조시킨 후, 실리카겔과 혼합하고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올(28% 수성 암모니아 용액 0.1% 함유) = 10:1)에 의해 분리하여 황색 오일로서 600mg의 (1r, 4S)-N1-((S)-1-메톡시 프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 40%, (ESI+): m/z 187.2 [M+H]+.
단계 2: 4-(((4-(5-클로로-2-(((1S, 4r)-4-(((S)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴의 합성
tert-부틸(4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((4-시아노-테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트(200mg, 0.44mmol), (1r, 4S)-N1-((S)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민(200mg, 1.08mmol) 및 디이소프로필에틸아민 DIPEA(284mg, 2.9mol)를 디메틸 설폭시드(2mL)에 용해시켰다. 반응물을 130℃에서 2.5일 동안 교반하였다. LCMS로 반응을 모니터링하였다. 생성물이 생성될 때, 물(30mL)을 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄/이소프로판올 = 3:1(3 x 30mL)로 추출하였다. 추출물을 무수 소듐 설페이트로 건조시키고, 회전 증발에 의해 농축시킨 다음, 실리카겔과 혼합하고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 10:1)에 의해 분리하여 갈색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 = 8:1의 현상 용매로 TLC 크로마토그래피를 제조하여 조 생성물을 분리하여 연한 황색 고체로서 50mg의 4-(((4-(5-클로로-2-(((1S, 4r)-4-(((S)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카보니트릴을 수득하였다. 수율 22%,1H NMR (400MHz, DMSO) δ 8.12 (t, J=6.0Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.69 (d, J=8.0Hz, 1H), 3.91-3.95 (m, 2H), 3.66 (d, J=6.4Hz, 2H), 3.55-3.65 (m, 1H), 3.47-3.51 (m, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.17 (d, J=4.8Hz, 1H), 1.86-1.99 (m, 6H), 1.66-1.74 (m, 2H), 0.99-1.26 (m, 8H). (ESI+): m/z 519.3 [M+H]+.
실시예 16: (1r, 4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00025
단계 1: 4-브로모-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸의 합성
(테트라히드로-2H-피란-4-일)메탄올(5.0g, 20.8mmol)을 50mL의 테트라히드로푸란에 용해시킨 다음, NaH(996mg, 24.9mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 2,4-디브로모티아졸(5.0g, 20.8mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 그 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 100ml의 포화 암모늄 클로라이드 용액을 반응 용액에 첨가한 후, 그 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회, 각 회마다 50ml을 이용하여 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 회전 증발에 의해 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:1)로 분리하여 백색 고체로서 4.2g의 4-브로모-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸을 수득하였다. 수율 73%. m/z 278.0 [M+H]+.
단계 2: 4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸의 합성
4-브로모-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸(2.0g, 7.22mmol) 및 5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘(3.71g, 14.44mmol)을 20ml의 디옥산 및 4ml의 물의 혼합 용매에 첨가하고, Pd(dppf)Cl2(161mg, 0.22mmol) 및 Na2CO3(2.3g, 21.66mmol)을 추가로 첨가하였다. 질소 하에 보호된 혼합물을 80℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 물 50ml를 반응 용액에 첨가한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회, 각 회마다 50ml을 이용하여 추출하였다. 이어서, 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조한 다음, 회전 증발에 의해 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 30:1)로 분리하여 백색 고체로서 1.45g의 4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸을 수득하였다. 수율 61.2%. (ESI+): m/z 329.1 [M+H]+.
단계 3: (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸(300mg, 0.915mmol), (1r, 4r-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(245mg, 1.006mmol) 및 K2CO3(104mg, 2.745mmol)을 5mL의 DMSO에 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 교반하면서 100℃로 승온하여 48시간 동안 반응시켰다. LCMS로 반응을 모니터링하고, 대부분의 출발 물질을 완전히 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각한 다음, 50mL의 물을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회, 각 회마다 10ml을 이용하여 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조한 다음, 회전 증발에 의해 농축하였다. 획득된 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1)로 분리하였다. 최종적으로, 연한 갈색 고체로서 111.0mg의 (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클ㄹ헥산-1,4-디아민을 획득하였다. 수율 25.3%. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.07 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.39 (d, J=8.0Hz, 1H), 4.31 (d, J=6.4Hz, 2H), 4.03 (dd, J1=3.2Hz, J2=11.2Hz, 2H), 3.59-3.61 (m, 1H), 3.54 (t, J=4.8Hz, 2H), 3.44-3.47 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.85 (t, J=5.2Hz, 2H), 2.53-2.54 (m, 1H), 2.15-2.18 (m, 3H), 2.00-2.03 (m, 2H), 1.73-1.76 (m, 2H), 1.46-1.52 (m, 2H), 1.15-1.37 (m, 5H). (ESI+): m/z 481.2 [M+H]+.
실시예 17: (1r, 4r)-N 1 -(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)메르캅토)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N 4 -(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00026
단계 1: 4-(브로모메틸)-테트라히드로-2H-피란의 합성
디클로로 메탄 400mL에 (테트라히드로-2H-피란-4-일)메탄올(8.12g, 10mmol) 및 N-브로모석신이미드 NBS(13.71g, 2448mmol)를 첨가하고, 이를 0℃로 냉각한 다음, 트리페닐포스포러스를 서서히 부분적으로 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1-2 시간 동안 교반하였고, TLC는 출발 물질의 소멸을 나타냈다. 반응 용액을 물(100mL)에 부었다. 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기상을 포화 염수로 세척하고, 소듐 설페이트로 건조하고, 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1)로 분리하여 무색 액체로서 6.2g의 4-(브로모메틸)-테트라히드로-2H-피란을 수득하였다. 수율 49%, (ESI+): m/z 179.0 [M+H]+.
단계 2: 메틸 S-(테트라히드로-2H-피란-4-일)티오아세테이트의 합성
4-(브로모메틸)-테트라히드로-2H-피란 및 포타슘 티오아세테이트를 60 mL의 DMF에 첨가하였다. 혼합물을 90℃로 가온하고, 2시간 동안 반응시켰다. TLC가 출발 물질이 사라짐을 나타내었을 때, 가열을 중단하고, 반응을 처리하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각하고, 아이스 워터에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 30mL)로 추출하였다. 유기상을 포화 염수로 세정하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고 여과했다. 여액을 실리카겔과 혼합하고 컬럼으로 분리하여(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1, 20:1, 10:1) 황색 오일로서 1.8 g의 메틸 S-(테트라히드로-2H-피란-4-일)티오아세테이트를 수득하였다. 수율 69%. (ESI+): m/z 175.1 [M+H]+.
단계 3: (테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸 메르캅탄의 합성
메틸 S-(테트라히드로-2H-피란-4-일)티오아세테이트를 THF에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호하고, 0℃로 냉각시키고, 리튬 알루미늄 히드라이드를 배치로 서서히 첨가하고, 밤새 반응시켰다. 반응을 TLC로 모니터링하였다. 반응 용액을 테트라 히드로푸란(50mL)으로 희석하고, 적당량의 소듐 설페이트 데카히드레이트를 배치로 서서히 첨가했다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 여과하고, 농축하여 황색 오일로서 0.68g의 조 생성물(테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸 메르캅탄을 수득하였다. 수율 100%. (ESI+): m/z 133.1 [M+H]+.
단계 4: 4-브로모-2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸의 합성
(테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸메르캅탄(0.632g, 4.8mmol)을 테트라히드로푸란 THF에 용해시키고, 이를 질소 하에 보호하고, 0℃로 냉각시킨 다음, 소듐 히드라이드 NaH(0.2g, 4.8mmol)를 서서히 배치로 첨가하고, 실온에서 10분 동안 반응시켰다. 30mL의 테트라히드로푸란 THF 중 2,4-디브로모티아졸 용액을 적가하고, 밤새 반응시켰다. TLC가 반응이 거의 완료되었음을 나타내었을 때, 반응이 정지되었다. 반응 용액을 포화 암모늄 클로라이드에 붓고 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 30mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 황갈색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 25:1, 20:1)에 의해 분리하여 회백색 고체로서 0.7g의 4-브로모-2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸을 수득하였다. 수율 60%. (ESI+): m/z 294.0 [M+H]+.
단계 5: 4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)-2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸의 합성
4-브로모-2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸(0.45g, 1.512mmol), 5-클로로-2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘(0.788g, 3.0mmol), 테트라키스트리페닐포스핀 팔라듐 Pd(PPh3)4(0.18g, 0.151mmol) 및 소듐 카보네이트(0.405g, 3.78mmol)을 20mL의 디옥산 및 4mL의 물에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호한 다음, 90℃까지 가온하고, 밤새 반응시켰다. 반응은 TLC 및 LCMS에 의해 모니터링되었다. 출발 물질이 완전히 사라졌을 때, 반응이 정지되었다. 반응 용액을 냉각시킨 후, 물(80mL)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 30mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 황갈색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30:1, 25:1)로 분리하여 황색 오일로서 0.27g의 4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)-2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸을 수득하였다. 수율 42%. (ESI+): m/z 345.0 [M+H]+.
단계 6: (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)메르캅토)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)-2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸(0.27g, 0.756mmol), (1r, 4r-N1-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민(0.203g, 0.831mmol) 및 K2CO3(0.313g, 2.268mmol)을 DMSO에 첨가하고, 이를 질소 하에서 보호한 다음, 100℃까지 가온하고 반응시켰다. TLC 및 LCMS에 의해 반응을 모니터링하였다. 4-(5-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)-2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸의 출발 물질이 잔류하였으며, 반응이 정지되었다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 에틸 아세테이트(20mL)로 희석하고, 물(800mL)을 아이스 배스 하에 첨가한 후, 분리하였다. 그 다음, 수성상을 에틸 아세테이트(2 x 20mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 황갈색 오일로서 조 생성물 수득하였다. 조 생성물을 크로마토그래피(디클로로 메탄/메탄올 = 15:1)에 의해 분리하여 황색 오일로서 0.135g의 (1r, 4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)설피드릴)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 34.5%. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.07 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 4.42 (brs, 1H), 3.91-4.10 (m, 2H), 3.55-3.71 (m, 3H), 2.83-3.52 (m, 12H), 2.13-2.17 (m, 4H), 1.95-2.05 (m, 1H), 1.69-1.87 (m, 2H), 1.31-1.56 (m, 5H), 1.02-1.35 (m, 4H), 0.79-0.95 (m, 1H). (ESI+): m/z 497.2 [M+H]+.
실시예 18: (1r, 4r)-N 1 -(2메톡시에틸)-N 4 -(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
Figure 112019117879142-pct00027
단계 1: tert-부틸(4-(2-클로로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트의 합성
tert-부틸(4-브로모티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트(1g, 1.512mmol), 2-클로로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘(0.95g, 3.0mmol), Pd(dppf)Cl2(0.22g, 0.151mmol) 및 Na2CO3(0.703g, 3.78mmol)을 15mL의 디옥산 및 30mL의 물에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호한 다음, 80℃까지 가온하고 밤새 반응시켰다. 반응은 TLC 및 LCMS에 의해 모니터링되었다. 출발 물질이 완전히 사라졌을 때, 반응이 정지되었다. 반응 용액을 냉각시킨 다음, 물(50mL)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 30mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 황갈색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30:1)에 의해 분리하여 황색 오일로서 0.27g의 tert-부틸(4-(2-클로로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트를 수득하였다. 수율 42%. (ESI+): m/z 410.1 [M+H]+.
단계 2: ((1r, 4r)-4-((4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)카바메이트의 합성
tert-부틸 (4-(2-클로로피리딘-4-일)티아졸-2-일)((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)카바메이트(0.388g, 0.95mmol), tert-부틸((1r, 4r)-4-아미노시클로헥실)카바메이트(0.244g, 1.14mmol), Pd2(dba)3(0.026g, 3.8mmol), 소듐 tert- 부톡시드, (±)-2,2'-비스-(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸 BINAP(0.035g, 0.0285mmol)를 톨루엔에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호한 다음, 120℃로 가온하고 밤새 반응시켰다. 반응을 TLC로 모니터링하였다. 출발 물질이 완전히 사라졌을 때, 반응이 정지되었다. 반응 용액을 냉각시키고, 암모늄 클로라이드의 포화 수용액(20mL)에 붓고, 분리하였다. 이어서, 수성상을 에틸 아세테이트(2 X 20mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 황갈색 오일로서 600mg의 ((1r, 4r)-4-((4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)카바메이트를 수득하였다. 조 생성물을 다음 단계에서 직접 사용하였으며, 수율은 다음 단계에서 계산하였다. (ESI+): m/z 488.3 [M+H]+.
단계 3: (1r, 4r)-N1-(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
tert-부틸((1r, 4r)-4-((4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)카바메이트(0.6g, 0.95mmol)를 메탄올에 첨가하고, 5mL의 염산(6N)을 첨가하고, 밤새 반응시켰다. 이어서, 반응 용액을 농축시키고, 포화 소듐 비카보네이트 용액을 첨가하여 pH=7로 조정하였다. 이어서, 수성상을 에틸 아세테이트(2 X 20mL)로 추출하고 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄:메탄올 = 10:1로 밤새 담그고 여과하였다. 여액을 농축시켜 연한 황색 오일로서 0.12g의 (1r, 4r)-N1-(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율: 31%(2단계). (ESI+): m/z 388.2 [M+H]+.
단계 4: (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)-N4-(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)시클로헥산-1,4-디아민의 합성
(1r, 4r)-N1-(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민(0.66g, 1.7mmol), 2-브로모에틸 메틸 에테르(0.240g, 1.7mmol) 및 포타슘 카보네이트(0.235g, 1.7mmol)를 N,N-디메틸포름아미드에 첨가하고, 이를 질소 하에 보호한 다음, 100℃까지 가온하고, 2일 동안 반응시켰다. 반응은 TLC 및 LCMS에 의해 모니터링되었다. 출발 물질이 약간 잔류하였지만, 반응이 중단되었다. 반응 용액을 냉각시킨 다음, 물(30mL)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 20mL)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 농축하여 황갈색 오일로서 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 두꺼운 제조 플레이트(디클로로 메탄/메탄올 = 8:1)로 분리하여 황색 오일로서 0.057g의 (1r, 4r)-N1-(2-메톡시에틸)-N4-(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민을 수득하였다. 수율 15%. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.95-8.02 (m, 1H), 6.79-6.89 (m, 3H), 5.48 (brs, 1H), 4.65-4.85 (m, 1H), 3.98-4.01 (m, 2H), 3.57-3.61 (m, 3H), 3.35-3.42 (m, 5H), 3.18-3.20 (m, 2H), 2.89-2.92 (m, 2H), 2.61-2.68 (m, 1H), 2.17-2.27 (m, 3H), 2.04-2.08 (m, 3H), 1.87-1.96 (m, 1H), 1.69-1.73 (m, 2H), 1.20-1.50 (m, 10H), 0.79-0.95 (m, 2H). (ESI+): m/z 446.3 [M+H]+.
실시예 19: 암세포 성장에 대한 CDK9 인히비터의 효과
암세포 성장에 대한 CDK9 인히비터의 효과를 시험함으로써, 본 발명자들은 암세포 증식을 억제하기 위한 화합물의 선택성을 평가하였다.
실시예에서, 본 발명자들은 급성 골수구성 백혈병(AML) OCI-AML-3, 급성 전골수구성 백혈병 세포주 NB-4, MDS-RAEB(골수이형성 증후군-과다 블라스트 타입) 세포주 SKM-1, 인간 백혈병 세포 Nomo-1, 급성 골수성 백혈병 세포주 MOLM14, 급성 골수성 백혈병 세포주 MOLM13, 급성 골수성 백혈병 세포주 MV4-11, 급성 골수성 백혈병 세포주 HL-60, 급성 골수성 백혈병 세포주 OCI-AML-2, 조직구 림프종 U-937, 급성 B세포 백혈병 세포주 MEC-1, 급성 B 세포 백혈병 세포주 MEC-2, 급성 거핵아구성 백혈병 CMK, 햄스터 폐 세포 CHL, 햄스터 난소 세포 CHO, 인간 비-소세포 폐암 세포 H1975, 인간 비-소세포 폐암 세포 H358, 인간 소세포 폐암 세포 H209, 인간 폐 선암 세포 H1395, 인간 비-소세포 폐암 세포 PC-9, 인간 폐암 세포 H3122, 인간 비-소세포 폐암 세포 H2122, 인간 비-소세포 폐암 세포 H1915, 인간 폐 선암 세포 H1355, 인간 비-소세포 폐암 세포 HCC827, 인간 유방암 세포 MDA-MB-231, 인간 유방암 세포 MDA-MB-468, 인간 유방암 세포 MCF-7, 인간 유방암 세포 T47D, 인간 유방암 세포 SK-Br-3를 사용하였으며, 상기 세포들은 ATCC로부터 구입하였다. 또한, Palbociclib(Shanghai Haoyuan Chemical에서 구입한 CDK4/6 선택적 인히비터), HY-16462(Shanghai Haoyuan에서 구입한 CDK9-IN-2) 및 Dinaciclib(Shanghai Haoyuan에서 구입한 CDK1/2/5/9 인히비터)를 대조 화합물로 사용하였다.
실시예에서, 상이한 농도(0.000508μM, 0.00152μM, 0.00457μM, 0.0137μM, 0.0411μM, 0.123μM, 0.370μM, 1.11μM, 3.33μM, 10μM)를 갖는 본 발명의 화합물 및 대조 화합물은 개별적으로 상기 세포에 첨가하고, 72시간 동안 배양하였다. Cell Titer-Glo®(Promega, USA) 화학적 자가-발광 세포 생존력 분석 키트를 사용하여 GI50 및 IC50을 계산하기 위해 살아있는 세포에서 ATP를 정량적으로 측정함으로써 생존 세포의 수를 검출하였다. 결과를 표 1-3에 나타내었다: 표 1 및 2는 시험된 혈액계 질환 세포주에 대한 본 발명의 화합물의 GI50을 나타내고; 표 3은 혈액암 이외의 암 유형의 세포에 대한 화합물 1의 IC50을 나타낸다.
표 1 및 2의 결과에 기초하여, 시험된 본 발명의 화합물은 백혈병 세포 및 림프종 세포와 같은 시험된 암세포에 대한 강력한 억제 효과를 갖는 것으로 밝혀졌으며, 화합물 1 및 14는 또한 우수한 선택성을 나타냈다: 이는 정상 세포 CHL 및 CHO 세포에 대한 억제 효과는 갖지 않았으나, 한편 레퍼런스 약물 Dinaciclib 및 HY-16462는 CHL 및 CHO 세포에 대한 확실한 억제 효과를 가졌다. 표 3의 결과는 또한 본 발명의 화합물 1이 인간 비-소세포 폐암 세포, 인간 소세포 폐암 세포, 폐 선암종 세포 및 유방암 세포에 대한 현저한 억제 효과를 나타내는 반면, Palbociclib은 시험된 암세포에 대한 분명한 억제를 갖지 않았음을 보여주었다. 이들 결과는 이들 암의 치료를 위해 덜 독성적인 선택적 CDK9 키나아제 인히비터로서 화합물 1을 사용하기 위한 중요한 이론적 기초를 제공하였다.
Figure 112019117879142-pct00028
Figure 112019117879142-pct00029
Figure 112019117879142-pct00030
실시예 20: 시험관 내 CDK 단백질 억제를 위한 효소 분석
DMSO에 희석된 화합물 1 및 14를 각각 검출된 CDK 단백질(Invitrogen, USA)과 혼합하고, 실온에서 30분 동안 배양한 다음; 이어서 Kinase/Z'-LYTETM Peptide Substrate Mixture(Invitrogen, USA) 및 4 Х ATP와 혼합하였다. 혼합 시스템을 384-웰 화이트 불투명 플레이트로 옮기고, 실온에서 1시간 동안 반응시키고; 5μL의 Development Solution(Invitrogen, USA)을 첨가하여 실온에서 1시간 동안 반응시키고, 마지막으로 Stop Reagent(Invitrogen, USA)를 첨가하여 반응을 종결시키고, MD SpectraMax I3X 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, USA)를 사용하여 형광값을 읽었다. 시험된 CDK 단백질에 대한 화합물 1 및 14의 IC50 값은 Prism 5.0(GraphPad Software, San Diego, CA)을 사용하여 판독된 형광값을 기초로 하여 계산하고, 아래 표 4에 나타내었다.
Figure 112019117879142-pct00031
실시예 21: 신호 전달 경로에 대한 CDK9 인히비터의 효과
4개의 세포, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) OCI-AML-3, 급성 전골수구성 백혈병 세포주 NB-4, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) HL-60 및 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) MV4-11(모두 ATCC로부터 구입)에 대해, 다중 세포의 생화학적 엔드포인트 및 기능적 엔드포인트를 측정함으로써, 화합물 1의 효과를 세포들에서 CDK9에 대해 평가하고, RNAPII, XIAP, MCL-1, MCL-1, c-MYC, BCL-2 등과 같은 이의 신호 전달 경로와 관련된 다른 단백질 키나아제에 대해 평가하였다. 0μM, 0.03μM, 0.1μM, 0.3μM, 1μM 및 3μM의 상이한 농도의 화합물 1(DMSO 내) 및 1μM의 (DMSO 내) 레퍼런스 약물 Dinaciclib 및 HY-16462(CDK9-IN-2)(Shanghai Haoyuan에서 구매)을 사용하여 이들 세포주를 2 시간 동안 처리한 다음, 시료를 수집하였다. 이들 세포주에서 CDK9, RNAPII, XIAP, MCL-1, c-MYC, BCL-2의 인산화에 대한 화합물 1의 효과를 측정하였다(도 1a-d).
4개의 세포주, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) OCI-AML-3, 급성 골수구성 백혈병 세포주 NB-4, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) HL-60 및 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) MV4-11에서, 화합물 1은 CDK9 단백질의 바로 하류에서 RNAPII, MCL-1 및 c-MYC의 인산화에 유의한 억제 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다.
실시예 22: 아폽토시스에 대한 신규 키나아제 인히비터의 효과
세포 사멸이 아폽토시스 또는 네크로시스를 통한 것인지를 증명하기 위해, 4 개의 세포주, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) OCI-AML-3, 급성 골수구성 백혈병 세포주 NB-4, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) HL-60 및 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) MV4-11(모두 ATCC에서 구입)에서, 아폽토시스 및 시스테인-함유 아스파르테이트 프로테올리틱 효소 Caspase 3의 단백질 전단과 밀접하게 관련된 DNA 복구 효소 폴리아데노신 디포스페이트-리보스 폴리머라아제 PARP에 대한 화합물 1의 효과를 세포에서 검출하였다. 0μM, 0.01μM, 0.03μM 및 0.1μM의 상이한 농도의 화합물 1(DMSO 내), 0.01μM의 Dinaciclib(DMSO 네) 및 0.1μM의 HY-16462(DMSO 내)를 사용하여 상기 상이한 세포들을 처리한 다음, 세포들을 24시간 후에 수집하였다. 웨스턴 블롯을 사용하여 상이한 시간 간격으로 DNA 복구 효소 폴리아데닐화 디포스페이트-리보스 폴리머라아제 PARP 및 시스테인-함유 아스파르테이트 프로테올리틱 효소 Caspase 3의 단백질 전단에 대해 상이한 농도에서의 약물의 효과를 검출하였다.
실험 결과는 도 2a-d에 도시되어 있다: 4개의 세포주, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) OCI-AML-3, 급성 골수구성 백혈병 세포주 NB-4, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) HL-60 및 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) MV4-11에서, 부분적으로 DNA 복구 효소 폴리아데닐화 디포스페이트-리보스 폴리머라아제 PARP 또는 PARP의 다운스트림 Caspase 3의 전단이 존재한다는 것이 명백히 발견되었다. 이는 화합물 1이 상기 4개의 세포, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) OCI-AML-3, 급성 골수구성 백혈병 세포주 NB-4, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) HL-60 및 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) MV4-11에서 아폽토시스를 유발할 수 있음을 입증하였다.
실시예 23: 세포 주기에 대한 신규 키나아제 인히비터의 효과
투여 후 어느 주기에서 세포들이 억제되는지 조사하기 위해, 3가지 세포주, 급성 골수구성 백혈병 세포주 NB-4, 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) HL-60 및 급성 골수구성 백혈병 세포주(AML) MV4-11에서, 이들 세포주의 세포 주기 분포에 대한 화합물 1의 효과를 시험하였다. 0μM, 0.01μM, 0.03μM 및 0.1μM(DMSO 내)의 상이한 농도의 화합물 1, 0.01μM(DMSO 내)의 CDK9 키나아제 인히비터 Dinaciclib(DMSO 내) 및 0.1μM(DMSO 내)의 HY-16462를 사용하여 HL-60, MV4-11 또는 NB-4 세포주를 12시간, 24시간 또는 48시간 동안 처리한 다음, 세포들을 수집하고, 그 다음 1 x PBS 버퍼로 2회 세정하고, -20℃에서 24시간 동안 75% 에탄올에 의해 고정한 다음, 1 x PBS 버포로 2회 세정하였다. 0.5mL의 1 x PBS 버퍼 및 0.5mL의 PI 염색 용액(미국 BD Bioscience에서 구입)을 세포에 첨가하고, 세포를 염색을 위해 15분 동안 37℃에서 어두운 곳에 두었다. 세포 주기 분포를 유세포 분석(BD FACS Calibur)에 의해 측정하였다. 결과를 도 3a-c에 나타내었다.
실시예 24: 인간 급성 과립구 백혈병 MV4-11 마우스 모델에서 화합물 1의 실험 결과
4-6주령, 24 Bal b/c 암컷 마우스를 Shanghai Slack Laboratory Animals Co., Ltd.에서 구입하여 SPF 실험실에 보관하였다. 식수 및 패딩은 오토클래이빙에 의해 무균 처리되었다. 모든 작업은 무균 조건에서 수행되었다. 0일에, 5 x 106 MV4-11 급성 과립구 백혈병 세포(ATCC로부터 구입)를 모든 마우스의 등의 좌측에 피하주사하였다. 15일에 시작하여, 모든 마우스를 4개의 그룹(그룹당 6마리의 마우스)으로 나누고, 메틸 셀룰로오스(HKI) 용매를 하루에 제1그룹의 마우스에 경구 투여하고; 10㎎/㎏ 마우스 체중의 투여량으로 화합물 1을 하루에 제2그룹의 마우스에 경구 투여하고; 20mg/kg 마우스 체중의 투여량으로 화합물 1을 하루에 제3그룹의 마우스에 경구 투여하고; 30mg/kg 마우스 체중의 투여량으로 화합물 1을 하루에 제4그룹의 마우스에 경구 투여하였다. 투여 시작으로부터, 매일 버니어 캘리퍼로 피하 종양의 길이/폭을 측정하고, 매일 마우스의 체중을 기록하고, 마우스의 체중에 대한 화합물 1의 효과를 관찰하였다. 43일에, 마우스를 희생시키고, 피하 종양을 취하고, 종양을 칭량하고, 비교한 다음, 단백질 용해물의 시료를 사용하기 위해 종양 시료 조직으로부터 제조하였다. 피하 종양 성장의 경향을 16일 내지 43일 내에 카운트하였으며, 종양 부피는 길이 × 폭 × 폭/2mm3으로 계산하였다.
실험 결과를 도면에 나타내었다. 결과는 본 발명에 개시된 인히비터 화합물 1에 대해, 고투여량 그룹(20, 30mg/kg)이 Bal b/c 마우스의 체중에 영향을 미치지만, 저투여량 그룹(10mg/kg)에서 피하 종양의 무게가 현저히 감소하였고, 마우스의 체중에는 유의한 영향이 없었으며; 고투여량 그룹(20, 30mg/kg)의 종양 성장 억제(TGI)는 98.7%에 도달할 수 있었음을 보여주었다. 이는 화합물 1이 피하 종양의 성장을 억제하는 데 효과적이었음을 나타내었다(도 4a-c).
산업상 이용가능성
본 발명은 세린 키나아제 활성에 의해 조절되거나 영향을 받거나, 사이클린-의존성 키나아제 활성과 관련된 질병, 질환 또는 컨디션의 치료, 예방 또는 개선에 사용될 수 있는 사이클린-의존성 키나아제 CDK9의 인히비터를 제공한다. 따라서, 이는 산업적 적용에 적합한 해당 약물로 만들어질 수 있다.
본 발명은 본 명세서에서 상세하게 설명되었지만, 본 발명은 이에 제한되지 않으며, 당업자는 본 발명의 원리에 따라 변형할 수 있다. 따라서, 본 발명의 원리에 따른 다양한 변형은 본 발명의 범주 내에 속하는 것으로 이해되어야 한다.

Claims (14)

  1. 화학식 (I)의 화합물
    Figure 112021044581425-pct00032

    또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물:
    상기 식에서, Y는 p-플루오로벤조일, N이 R3으로 임의로 치환된 트랜스-4-아미노시클로헥실, 및 N이 R3으로 임의로 치환된 트랜스-4-아미노시클로헥실메틸로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    Z는 NH, S 및 O로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R1은 수소 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R2는 수소, C1-C3 알킬, C3-C6 시클로알킬, R4로 임의로 치환된 C3-C6 헤테로시클로알킬, 및 R4로 임의로 치환된 페닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R3은 C2-C6 알카노일 및 C1-C3 알콕시 (C1-C3)알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R4는 시아노 및 할로겐으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서,
    R1은 염소인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  3. 제1항에 있어서,
    R2는 수소, 메틸, 시클로프로필, 시클로헥실, 시아노로 임의로 치환된 4-테트라히드로피라닐, 및 불소로 임의로 치환된 페닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  4. 제1항에 있어서,
    R3는 아세틸, 2-메톡시에틸, (R)-1-메틸-2-메톡시에틸 및 (S)-1-메틸-2-메톡시에틸로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 화합물은
    4-(((4-(5-클로로-2-(((1R,4r)-4-(((R)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카르보니트릴;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민;
    N-((1r,4r)-4-((5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)시클로헥실)아세트아미드;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥실-1,4-디아민;
    (1S,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((S)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥실-1,4-디아민;
    (1R,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-((R)-1-메톡시프로판-2-일)시클로헥산-1,4-디아민;
    4-(2-((((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)메틸)아미노)-5-클로로피리딘-4-일)-N-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)티아졸-2-아민;
    N-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-4-플루오로벤즈아미드;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(메틸아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((시클로헥실메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
    (1r,4r)-N1-(4-(2-(벤질아미노)티아졸-4-일)-5-클로로피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((4-플루오로벤질)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((시클로프로필메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
    4-((4-(5-클로로-2-(((1r,4r)-4-((2-메톡시에틸)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카르보니트릴;
    4-(((4-(5-클로로-2-(((1S,4r)-4-(((S)-1-메톡시프로필-2-일)아미노)시클로헥실)아미노)피리딘-4-일)티아졸-2-일)아미노)메틸)테트라히드로-2H-피란-4-카르보니트릴;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메톡시)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민;
    (1r,4r)-N1-(5-클로로-4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)메르캅토)티아졸-4-일)피리딘-2-일)-N4-(2-메톡시에틸)시클로헥산-1,4-디아민; 및
    (1r,4r)-N1-(2-메톡시에틸)-N4-(4-(2-(((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)아미노)티아졸-4-일)피리딘-2-일)시클로헥산-1,4-디아민
    으로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제, 및 임의로 다른 치료제를 포함하는, 암, MDS-RAEB(골수이형성 증후군-과다 블라스트 타입), 조직구 림프종, 급성 B세포 백혈병, 급성 거핵아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 및 급성 전골수구성 백혈병으로 구성된 그룹에서 선택되는 질병, 질환 또는 컨디션의 치료, 예방 또는 개선을 위한 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    암은 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 폐 선암종, 편평세포 폐 암종, 췌장암, 전립선암, 방광암, 간암, 피부암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 악성 신경교종, 횡문근육종, 난소암, 성상세포종, 유잉 육종, 망막모세포종, 상피세포 암종, 결장암, 신장암, 위장관 간질 종양, 백혈병, 조직구 림프종 및 비인두 암종으로 구성된 그룹에서 선택되는, 약학 조성물.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
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  13. 삭제
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