KR102298754B1 - 홍삼오일을 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

홍삼오일을 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 홍삼오일을 유효성분으로 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명의 약학적 조성물은 초임계 유체 추출에 의해 수득된 홍삼에 함유된 지용성 성분인 홍삼오일을 포함함으로써 전립선염에 대해 예방 또는 치료 효과를 나타낸다.

Description

홍삼오일을 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical Composition For Preventing Or Treating Prostatitis Comprising Red Ginseng Oil}
본 발명은 홍삼오일을 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오갈피나무과(Araliaceae) 인삼속(Panax)에 속하는 다년생 초본으로 한방에서 사용되는 한약재 중의 하나로 달면서 쓴맛이 있고, 따뜻한 기운을 가지고 있으며, 원기를 보하고 비장을 보호하며, 폐를 튼튼하게 해주는 등 본초학적 효능을 가지고 있다.
인삼의 주요 생리활성 물질은 진세노사이드라고도 불리는 사포닌과 정유성분, 폴리아세틸렌, 페놀성분, 배당체 및 산성펩타이드 등이 있으며, 그 밖에도 비타민, 당류, 무기질과 같은 다양한 성분들이 함유되어 있다. 일반적인 인삼의 생리활성 효능은 중추신경계의 작용, 면역기능 강화 작용, 항암 작용 등이 보고되어 있다. 특히 진세노사이드는 지금까지 약 40여 종이 발견되고 있으며 중추신계를 비롯하여 내분비계, 면역계, 대사계 등에 광범위한 영향을 미쳐 신체기능 조절, 즉 생리기능 정상화에 탁월한 효과를 나타내는 것으로 확인되고 있다. 이들 진세노사이드는 서로 비슷한 작용을 하거나 또는 서로 반대되는 작용을 나타내기도 하는데, 특정 성분이 단독으로 또는 여러 종류가 상호작용을 통해서 다양한 효능을 발휘하는 것으로 알려지고 있다.
전립선은 오직 남성에게만 있는 조직으로 방광 아래 요도 부위를 둘러싸고 있다. 밤톨만한 크기로 전립선은 약 30%의 정액을 생성, 분비하는 기관이다. 전립선 기능에 문제가 있을 경우 생기는 질환은 크게 네 가지로 전립선 비대증, 전립선염, 전립선암 및 전립선 결석으로 구분된다.
상기 전립선염은 전립선에 생기는 여러 원인에 의한 염증성 증상을 통칭하는 것으로, 성인 남성의 50%가 한번 이상 겪게 되는 질병이며 비뇨기과 외래 환자의 25%를 차지하는 흔한 남성 질환이다.
전립선염은 미국 국립보건연구원(NIH) 기준에 따라 크게 세균성 및 비세균성으로 나뉘며, 세균성인 경우 1주 내지 2주간 항생제를 복용함으로써 쉽게 치료될 수 있다. 한편, 전립선염 환자의 90% 이상은 비세균성 전립선염인데 이는 각종 배양검사에서 원인균이 검출되지 않는 것이 특징이며, 재발율이 높기 때문에 예방차원의 접근이 중요하다.
이와 관련하여, 한국 등록공보 제1404150호는 검정콩으로부터 추출한 안토시아닌을 포함하는 비세균성 전립선염의 예방 및 치료용 조성물을 개시한다. 그러나, 만성 비세균성 전립선염으로 인해 고통 받는 환자들의 수와 재발율을 고려하였을 때, 비세균성 전립선염의 예방 또는 치료에 사용될 수 있는 약학적 조성물에 대한 지속적인 연구가 필요한 실정이다.
한국 등록공보 제1404150호(2014.05.29)
본 발명은 홍삼오일을 유효성분으로 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 홍삼오일을 유효성분으로 포함하는 전립선염의 개선용 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 홍삼오일을 유효성분으로 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 홍삼오일을 유효성분으로 포함하는 전립선염의 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 홍삼오일을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물 또는 식품 조성물은 전립선염을 예방, 치료, 또는 개선하는 효과가 있다.
구체적으로, 본 발명의 약학적 조성물 또는 식품 조성물은 초임계 유체 추출에 의해 수득된 홍삼에 함유된 지용성 성분인 홍삼오일을 포함함으로써 전립선염에 대해 예방, 치료, 또는 개선하는 효과를 나타낸다.
도 1은 음성대조군, CNP군, 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군의 평균체중을 나타낸다.
도 2는 혈액 내 GOT, GPT, BUN 및 크레아틴의 분석 결과를 나타낸다.
도 3은 전립선 상피세포 조직의 염색 사진을 나타낸다.
도 4는 전립선 상피세포 사이 조직의 염색 사진을 나타낸다.
도 5는 전립선 상피세포의 주름 정도와 조직내 염증소견 정도를 점수화한 결과(a)와 그 기준(b)을 나타낸다.
도 6은 인산화-ERK 및 인산화-p38의 웨스턴 블롯 분석 결과를 나타낸다.
도 7은 전립선 조직 내 인산화-ERK의 정량적 분석 결과이다.
도 8은 전립선 조직 내 인산화-p38의 정량적 분석 결과이다.
도 9는 혈액 내 산화질소를 측정하여 나타낸 것이다.
도 10은 염증 사이토카인 VEGFA, TNF-α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6의 웨스턴 블롯 분석 결과를 나타낸다.
도 11은 전립선 조직 내 VEGFA의 정량적 분석 결과이다.
도 12는 전립선 조직 내 인터루킨-1β의 정량적 분석 결과이다.
도 13은 전립선 조직 내 인터루킨-6의 정량적 분석 결과이다.
도 14는 전립선 조직 내 TNF-α의 정량적 분석 결과이다.
도 15는 VEGFA에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과이다.
도 16은 VEGFA에 의한 면역조직화학법의 정량적 분석 결과이다.
도 17은 인터루킨-1β에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과이다.
도 18은 인터루킨-1β에 의한 면역조직화학법의 정량적 분석 결과이다.
도 19는 인터루킨-6에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과이다.
도 20은 인터루킨-6에 의한 면역조직화학법의 정량적 분석 결과이다.
도 21은 TNF-α에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과이다.
도 22는 TNF-α에 의한 면역조직화학법의 정량적 분석 결과이다.
이하, 본 발명에 대한 이해를 돕기 위하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 명세서 및 청구범위에서 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
본 발명에서 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 전립선염을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말하며, "치료" 및 "개선"은 본 발명의 조성물에 의해 전립선염이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.
본 발명은 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 본 발명의 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 홍삼오일을 유효성분으로 포함한다.
상기 홍삼오일은 홍삼 또는 홍삼박에서 임의의 방법으로 추출된 오일이고, 상기 홍삼은 인삼을 증숙하여 얻어진다. 상기 인삼은 고려삼(Panax ginseng), 회기삼(P. quiquefolius), 전칠삼(P. notoginseng), 죽절삼(P. japonicus), 삼엽삼(P. trifolium), 히말라야삼(P. pseudoginseng), 베트남삼(P. vietnamensis), 또는 미국삼(P. quinquefolium) 등일 수 있다. 인삼은 일반적으로 가공 방법에 따라 백삼과 홍삼으로 구분되며, 백삼은 밭에서 채굴한 가공되지 아니한 인삼 즉, 수삼을 그대로 건조한 것을 지칭하며 홍삼은 수삼을 증숙하여 건조 가공한 것으로 제조 과정에서 사포닌 전환과 아미노산 변화 등 여러 화학적인 변화가 수반된다. 홍삼은 제조 과정에서 가해지는 열에 의해 인삼에 존재하지 않는 진세노사이드 성분이 생성되며, 홍삼 특유의 유효 성분은 암 예방 작용, 암세포 성장 억제 작용, 혈압 강하 작용, 뇌신경세포 보호, 학습 능력 개선 작용을 나타낸다. 본 발명에서 홍삼은 인삼의 잎, 어린 새싹, 줄기, 줄기 껍질, 뿌리, 뿌리 껍질, 종자, 열매, 미숙과, 완숙과, 과육, 과피, 꽃, 수술군(androecium), 암술군(gynoecium), 꽃받침, 수술, 꽃잎, 꽃받침 조각, 심피 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 증숙하여 수득할 수 있으며, 구체적인 공정은 통상적인 방식에 의할 수 있다.
상기 홍삼박은 인삼을 증숙 및/또는 건조시켜 얻어진 홍삼을 물, 유기용매 등으로 추출하여 이용 후 발생되는 부산물을 의미하는 것으로서, 홍삼박 분말 제형을 포함할 수 있다. 상기 홍삼박 분말은 홍삼박을 물로 세척한 다음 열풍건조하여 분말 제형으로 얻을 수 있다.
상기 홍삼오일은 홍삼 또는 홍삼박에 초임계 유체 추출(supercritical fluid extraction)로 홍삼에 함유되어 있는 지용성 성분을 분리 추출함으로써 수득될 수 있다. 초임계 유체 추출은 온도와 압력이 일정 임계점 이상이 되면 나타나는 초임계 유체를 활용한 추출법으로, 높은 용해력, 신속한 물질 이동과 열 이동, 저점도, 고확산계수로 인한 미세공으로의 빠른 침투성과 같이 액체와 기체의 장점이 복합적으로 적용되는 추출 방법이다. 일반적으로 초임계 유체는 온도와 압력의 변화에 따라 용해도와 밀도가 변하는 성질을 가지고 있으므로, 그에 따라 추출물의 활성도도 달라질 수 있다. 이와 같이, 초임계 유체를 이용한 추출 방법은 압력, 온도의 조작에 의해 고밀도 상태의 조건 설정이 가능하기 때문에 분획, 분리 등의 선택성이 뛰어나서 고순도의 천연 유효 성분을 얻을 수 있고, 비교적 저온에서 추출하기 때문에 열에 의한 천연 유효 성분의 손실을 막을 수 있다는 장점이 있다.
본 발명에서는 초임계 유체로 임계점이 상온에 가깝고, 무독성·불연성이면서 가격이 매우 저렴한 이산화탄소를 이용할 수 있다. 최종 산물인 홍삼오일의 전립선염의 예방 또는 치료 효과를 높이기 위해서 초임계 유체 추출 조건을 조절할 수 있다. 예를 들면, 초임계 추출시 온도, 시간, 압력을 조절할 수 있으며, 그 조건에 대해서는 아래에 상세히 설명한다.
초임계 유체로 추출시 온도는 40℃ 내지 100℃일 수 있고, 바람직하게는 50℃ 내지 90℃일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 60℃ 내지 80℃일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 추출시 온도가 적정범위를 벗어나면, 추출물의 수율이 감소하고, 생산비용의 증가하여 제품의 원가가 높아지는 단점이 있다.
초임계 유체로 추출시 추출 시간은 0.5시간 내지 10시간일 수 있고, 바람직하게는 1시간 내지 9시간일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 2시간 내지 8시간 또는 2시간 내지 5시간일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
또한 초임계 추출시 조건은 압력을 10Mpa 내지 50Mpa로 유지할 수 있고, 바람직하게는 15Mpa 내지 45Mpa로 유지할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 10Mpa 내지 40Mpa 또는 25Mpa 내지 35Mpa로 유지할 수 있으나, 이에 한정되지 아니한다.
또한, 홍삼에 상기 초임계 유체의 공급속도는 2kg/min 내지 20kg/min, 또는 5kg/min 내지 15kg/min, 또는 7kg/min 내지 12kg/min일 수 있으나, 이에 특별히 제한되지 않는다.
상기 홍삼오일은 추출 공정 중 포함될 수 있는 수분을 제거하기 위해 추가로 통상의 수분제거 공정을 수행하여 지용성분 함량을 높일 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 홍삼오일을 진공회전농축기를 활용하여 오일 내 포함된 수분을 제거할 수 있다. 농축 공정시 압력은 0 mmHg ~ -1000 mmHg로 유지할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 농축 공정시 온도는 50℃ 내지 100℃일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 홍삼오일은 전립선염의 예방 또는 치료 효과를 높이기 위해서 추가로 통상의 분획 공정을 수행하여 분획물을 수득한 것일 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 홍삼오일을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획물, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등으로 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획물도 본 발명의 홍삼오일에 포함된다. 여러 성분이 혼합되어 있는 홍삼오일을 농도 구배 컬럼 크로마토그래피 등을 통하여 활성 성분의 성질에 따라 분리하여서 보다 전립선염의 예방 또는 치료 효과가 높은 특정 활성 분획물을 제조할 수 있다. 컬럼 크로마토그래피는 필요에 따라 적절한 충진제를 선택하여 수차례 실시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 크로마토그래피를 사용함에 있어 용출 용매, 용출 속도 및 용출 시간은 본 기술 분야에서 일반적으로 사용하는 용매, 속도 또는 시간을 적용할 수 있다.
상기 홍삼오일은 불포화지방산이 포화지방산 보다 더 많은 함량으로 포함된 것일 수 있다. 구체적으로 상기 홍삼오일 내에 포화지방산 대 불포화지방산의 중량비는 20:80 내지 40:60, 또는 25:75 내지 35:65 또는 28:72 내지 32:68일 수 있다.
상기 포화지방산은 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 헵타데칸산, 스테아르산, 아라키드산 및 헨에이코실산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다. 예로서, 팔미트산을 포함할 수 있다.
상기 불포화지방산은 올레산, 리놀레산 및 감마-리놀레산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다. 예로서, 리놀레산을 포함할 수 있다.
상기 홍삼오일은 브라시카스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 베타-시토스테롤로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 식물성 스테롤을 포함할 수 있다.
상기 전립선염은 미국 국립보건연구원(NIH) 기준에 따라 분류되는 네 가지 카테고리로서 급성 세균성 전립선염(Acute bacterial prostatitis), 만성 세균성 전립선염(Chronic bacterial prostatitis), 만성 비세균성 전립선염(Chronic non-bacterial prostatitis) 및 무증상 염증성 전립선염(Asymptomatic inflammatory prostatitis)을 모두 포함할 수 있다. 다시 말해, 본 발명에서 전립선염은 급성 또는 만성인 경우를 모두 포함할 수 있고 세균성 또는 비세균성인 경우를 모두 포함할 수 있다.
구체적으로 본 발명에서 상기 전립선염은 비세균성 전립선염, 보다 구체적으로 만성 비세균성 전립선염을 의미할 수 있다.
상기 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 전립선 조직 내 VEGFA(Vascular Endothelial Growth Factor A), 인터루킨-1β, 인터루킨-6 및 TNF-α(Tumor Necrosis Factor-alpha)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 염증 사이토카인의 발현을 감소시킬 수 있다.
본 발명의 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 전립선 조직 내 MAPK 신호전달 경로에서 ERK(extracellular signal-regulated kinases) 및/또는 p38의 단백질의 인산화를 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 적용함으로써 전립선 조직 내 인산화된 ERK 및 인산화된 p38의 발현이 감소될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 홍삼오일 외에 본 발명이 목적으로 하는 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 상기 홍삼오일의 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 추가로 함유할 수 있다. 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 또는 담체를 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물의 투여 경로는 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함되고, 예컨대 도포에 의한 국부투여(topical application) 방식으로 적용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.
본 발명에서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 본 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 전립선염의 예방 또는 치료를 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용가능하다. 예를 들면, 본 발명의 약학적 조성물은 인간뿐만 아니라 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 인간이 아닌 동물, 인간, 조류 및 어류 등 어느 것에 사용가능하다.
상기 약학적 조성물은 상기 홍삼오일에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 상기 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질 캡슐제, 환 등이 포함된다.
경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성 용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제형화할 수 있다.
상기 약학적 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 투여 시간, 투여 경로, 배출률, 약물 배합 및 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. 또한 상기 약학적 조성물은 성인 기준으로 0.001 내지 200㎎/㎏ 범위 내의 투여량으로 투여될 수 있고, 상기 약학적 조성물이 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1.0 내지 3.0㎖의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 좋으나, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.
상기 약학적 조성물을 단위 용량 형태로 제형화하는 경우, 유효성분으로서 본 발명의 홍삼오일은 약 0.01 내지 1,500㎎의 단위 용량으로 함유되는 것이 바람직하고, 성인 치료에 필요한 투여량은 투여의 빈도와 강도에 따라 하루에 약 1 내지 500㎎ 범위가 보통이나 이에 한정되는 것은 아니며, 일부 환자의 경우 더 높은 1일 투여량이 바람직할 수 있다.
또한, 본 발명의 일 구현예는, 홍삼오일을 유효성분으로 포함하는 전립선염의 개선용 식품 조성물을 제공한다. 상기 홍삼오일에 대한 내용은 앞서 "약학적 조성물" 항목에서 검토한 바와 동일한 내용이 적용될 수 있다.
상기 홍삼오일은 상기 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.005 중량% 내지 20.0 중량%의 함량으로 함유되는 것이 바람직하고, 0.01 중량% 내지 10.0 중량%의 함량으로 함유되는 것이 보다 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 홍삼오일의 유효 함량이 0.005 중량% 미만일 경우에는 전립선염의 개선 효과가 미미하고, 20 중량%를 초과할 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효능 상승 효과가 떨어져 비경제적이다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 홍삼오일을 포함하는 것 이외에, 건강을 개선시키는 효과가 있다고 알려진 공지의 천연물 또는 화합물을 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물에는 홍삼오일 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 물질, 미네랄, 가공보조제 등이 포함될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연물이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우이고, 천연 감미제로는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프락토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있으며, 천연물과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연물을 사용하는 경우이다. 천연물을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알코올, 알데하이드, 테르펜 등의 형태의 것들이 이용될 수 있다.
생리활성 물질로는 카테킨, 에피카테킨, 갈로카테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.
미네랄로는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료 등을 포함할 수 있다.
이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.
사용될 수 있는 보존제로는 나트륨 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 유화제로는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 산미료로는 구연산, 말산(사과산), 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도가 되도록 첨가될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 홍삼오일의 준비
홍삼분말에 초임계 이산화탄소 추출을 진행하여 홍삼오일을 제조하였다. 임계점(온도 65±5℃, 압력 26±3 Mpa)을 넘어 초임계상태가 된 이산화탄소를 홍삼분말에 3시간 동안 10.8 kg/min으로 가하여 오일성분을 추출하였다. 상온 및 상압 상태에서 이산화탄소가 기화되며 분리된 홍삼오일을 농축하여 내부 수분을 제거하였다. 농축된 홍삼오일은 필터에서 여과 후 박막 증류장치를 통하여 정제하였다.
2. 실험군 및 처리
7주령의 수컷쥐를 7일간 동물순화 후, 자연적으로 생성되는 테스토스테론에 의한 변수를 제거하기 위해 고환을 절제하고, 실험동물을 하기와 같이 네 군으로 나누어 실험을 진행하였다.
(1) 음성대조군: 무처치 정상군
(2) CNP군: 4주간 17베타-에스트라디올(17β-estradiol)을 매일 피하주사하여 만성 비세균성 전립선염이 유도된 군
(3) 양성대조군: 4주간 에스트라디올 및 테스토스테론을 매일 피하주사한 군
(4) KRO 0.1군: 4주간 에스트라디올을 피하주사하고 동시에 홍삼오일을 매일 0.1ml 경구투여한 군
(5) KRO 0.2군: 4주간 에스트라디올을 피하주사하고 동시에 홍삼오일을 매일 0.2ml 경구투여한 군
실험예
1. 체중 변화
상기 4주간의 투여를 마친 후 수컷쥐의 무게를 측정하여 평균무게를 도 1에 나타낸다. 상기 CNP군은 음성대조군에 비해 통계적으로 유의미(p-값 0.05 이하인 경우를 의미하며 이하 모두 동일한 의미로 사용됨)한 정도로 체중이 감소하였는데, 이는 에스트라디올 투입으로 인한 영향이라고 예상된다. 한편, 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군의 경우 상기 CNP군 대비 체중이 줄어들지 않았다.
2. 간, 신장 독성 분석
상기 4주간의 투여를 마친 후 수컷쥐의 심장에서 혈액을 체혈하여 간, 신장독성 마커를 분석하였다. 간 독성 마커는 GOT, GPT이고, 신장 독성 마커는 BUN 및 크레아틴으로, 도 2에 나타낸 바와 같이 GOT, GPT 및 BUN 마커의 경우 통계적으로 유의미하지 않은 것을 확인하였다.
한편, 크레아틴의 경우, CNP군이 음성대조군에 비해 통계적으로 유의미한 차이가 있었다(p<0.05). 그러나, 상기 CNP군 대비 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군에서 통계적으로 유의미한 차이가 없었으며, 이러한 수치는 쥐의 정상범위에 해당되기 때문에 독성이 없는 것으로 판단된다.
3. 조직병리학적 평가
상기 4주간의 투여를 마친 후 조직병리학적 평가를 위해, 전립선을 적출하여 고정하고 파라핀 블록을 만든 후 5㎛ 두께로 잘라서 헤마톡실린-에오신 염색을 실시하였다. 전립선 상피세포 염색 사진을 도 3에 나타내며, 상피세포 사이 결합조직의 염색 사진을 도 4에 나타낸다.
또한, 병리학자의 검경 하에 전립선 상피세포의 주름 정도와 조직내 염증소견 정도를 도 5b에 나타낸 바에 따라 점수화하고, 그 결과를 도 5a에 나타낸다. CNP군의 점수(0.38±0.50)는 음성대조군에 비해 유의한 차이가 있었다(p<0.05). 또한, 양성대조군과 KRO 0.2군의 점수(0.89±0.32)는 CNP군에 비해 유의한 차이가 있었다(p<0.05). 다만, KRO 0.1군의 경우 CNP군에 비해 유의한 차이가 없었다.
도 5에서, * 표시는 음성대조군 대비 CNP군의 유의미한 차이를 나타내며, # 표시는 CNP군 대비 양성대조군, KRO 0.1군 및/또는 KRO 0.2군에서 유의미한 차이가 있는 경우를 나타낸다(이하 동일함).
4. MAPK 신호전달 경로 확인
염증 반응에 수반되는 세포내 신호전달 경로로서 MAPK(mitogen-activated protein kinases) pathway에서 ERK 및 p38의 단백질의 인산화 발현을 웨스턴 블롯을 통해 확인하였다.
실험군의 전립선 조직을 채취하여 단백질의 인산화 발현양을 확인하였다. 브래드포드 분석법에 따라 조직으로부터 단백질을 추출하고 정량하였으며, 추출된 단백질을 12% 폴리아크릴아미드 겔에서 100V 전기영동을 통해 분자량 사이즈별로 분리하였다. 겔 상의 단백질은 semi-dry transfer system을 이용하여 폴리비닐리덴 디플루오라이드(PVDF) 막으로 트랜스퍼(transfer)하였다. 5% 탈지유로 블로킹(blocking) 후 측정 단백질별 항체를 4℃에서 오버나이트 반응하였다. TBST를 이용해 3회 세척 후 2차 항체를 상온에서 1시간 반응하였으며, 추가 세척 후 ECLTM 웨스턴 블롯 시약(Santa cruz)을 사용해 발현양을 측정하였다.
도 6은 웨스턴 블롯의 분석 결과로, 대조군 단백질로 β-액틴이 사용되었으며, 도 7은 전립선 조직 내 인산화-ERK의 정량적 분석 결과이며, 도 8은 인산화-p38의 정량적 분석 결과이다. 이로부터, CNP군의 경우 인산화-ERK 및 인산화-p38의 단백질 발현이 유의하게 증가하였으며(p<0.05), 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군의 경우 상기 CNP군 대비 인산화-ERK 및 인산화-p38의 단백질 발현이 유의하게 감소한 것을 확인할 수 있다(p<0.05).
5. 산화적 스트레스 확인
각 그룹에 대하여 혈액 내 산화질소의 함유 정도를 측정하여 도 9에 나타냈다.
CNP군은 음성대조군에 비해 산화질소가 유의하게 증가하였으며(p<0.05), 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군은 상기 CNP군에 비해 산화질소가 유의하게 감소한 것을 확인할 수 있다(p<0.05).
6. 염증 지표 확인 - 웨스턴 블롯
전립선 조직 내에서 염증 사이토카인인 VEGFA, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, TNF-α의 발현을 확인하기 위해 웨스턴 블롯을 수행하여 그 결과를 도 10 내지 도 14에 나타낸다.
실험군의 전립선 조직을 채취하여 단백질의 인산화 발현양을 확인하였다. 브래드포드 분석법에 따라 조직으로부터 단백질을 추출하고 정량하였으며, 추출된 단백질을 12% 폴리아크릴아미드 겔에서 100V 전기영동을 통해 분자량 사이즈별로 분리하였다. 겔 상의 단백질은 semi-dry transfer system을 이용하여 폴리비닐리덴 디플루오라이드(PVDF) 막으로 트랜스퍼(transfer)하였다. 5% 탈지유로 블로킹(blocking) 후 측정 단백질별 항체를 4℃에서 오버나이트 반응하였다. TBST를 이용해 3회 세척 후 2차 항체를 상온에서 1시간 반응하였으며, 추가 세척 후 ECLTM 웨스턴 블롯 시약(Santa cruz)을 사용해 발현양을 측정하였다.
이로부터, CNP군의 경우 음성대조군에 비해 VEGFA, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, TNF-α의 발현이 유의적으로 증가하였으며(p<0.05), 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군은 상기 CNP군에 비해 VEGFA, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, TNF-α의 발현이 유의하게 감소한 것을 확인할 수 있다(p<0.05).
7. 염증 지표 확인 - 면역조직화학염색법
전립선 조직 내 염증 사이토카인인 VEGFA, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, TNF-α의 발현을 확인하기 위해 면역조직화학염색법을 수행하였다.
파라핀 블록에 10㎛ 두께로 보관된 전립선 조직을 이용하여 면역조직화학염색을 실시하였다. 절편 조직에서 파라핀을 제거 후, 염소 또는 토끼 혈청으로 1시간 동안 pre-restrained 하였다. 1차 항체를 4℃에서 오버나이트 반응 및 세척 후 2차 항체를 1시간 반응하였다. 염증지표의 정량적 분석을 위해 DAB 염색을 실시하였다.
도 15는 VEGFA에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과를 나타내며, 도 16은 이의 정량적 분석 결과이다. 여기서, CNP군의 경우 염증 사이토카인 VEGFA의 발현이 음성대조군에 비해 유의적으로 증가하고(p<0.05), 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군은 상기 CNP군에 비해 VEGFA의 발현이 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있다(p<0.05).
도 17은 인터루킨-1β에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과를 나타내며, 도 18은 이의 정량적 분석 결과이다. 여기서, CNP군의 경우 염증 사이토카인 인터루킨-1β의 발현이 음성대조군에 비해 유의적으로 증가하고(p<0.05), 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군은 상기 CNP군에 비해 인터루킨-1β의 발현이 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있다(p<0.05).
도 19는 인터루킨-6에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과를 나타내며, 도 20은 이의 정량적 분석 결과이다. 여기서, CNP군의 경우 염증 사이토카인 인터루킨-6의 발현이 음성대조군에 비해 유의적으로 증가하고(p<0.05), 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군은 상기 CNP군에 비해 인터루킨-6의 발현이 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있다(p<0.05).
도 21은 TNF-α에 의한 전립선 조직의 면역조직화학적 염색 결과를 나타내며, 도 22는 이의 정량적 분석 결과이다. 여기서, CNP군의 경우 염증 사이토카인 TNF-α의 발현이 음성대조군에 비해 유의적으로 증가하고(p<0.05), 양성대조군, KRO 0.1군, KRO 0.2군은 상기 CNP군에 비해 TNF-α의 발현이 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있다(p<0.05).
제조예 1. 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
본 발명의 홍삼오일 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1-2. 정제의 제조
본 발명의 홍삼오일 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1-3. 캡슐제의 제조
본 발명의 홍삼오일 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
1-4. 환의 제조
본 발명의 홍삼오일 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4g이 되도록 제조하였다.
1-5. 과립의 제조
본 발명의 홍삼오일 150 ㎎
대두추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
제조예 2. 건강식품의 제조
2-1. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 홍삼오일 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
2-2. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 홍삼오일 0.1 ~ 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
2-3. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 홍삼오일 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 그라운드 비프를 제조하였다.
2-4. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 홍삼오일 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
2-5. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 홍삼오일을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 홍삼오일을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부), 종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부), 본 발명의 홍삼오일(3 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부)
제조예 3. 음료의 제조
3-1. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 홍삼오일 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
3-2. 야채 주스의 제조
본 발명의 홍삼오일 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
3-3. 과일 주스의 제조
본 발명의 홍삼오일 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims (11)

  1. 홍삼박 유래의 홍삼오일을 유효성분으로 포함하고,
    상기 홍삼오일은 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 베타-시토스테롤로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 홍삼오일은 홍삼박의 초임계 유체 추출물인 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 청구항 2에 있어서,
    상기 초임계 유체는 이산화탄소인 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 홍삼오일은 포화지방산 대 불포화지방산의 중량비가 20:80 내지 40:60인 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 포화지방산은 미리스트산, 펜타데칸산, 팔미트산, 헵타데칸산, 스테아르산, 아라키드산 및 헨에이코실산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 청구항 4에 있어서,
    상기 불포화지방산은 올레산, 리놀레산 및 감마-리놀레산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 삭제
  8. 청구항 1에 있어서,
    상기 전립선염은 비세균성 전립선염인 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 청구항 1에 있어서,
    방부제, 안정화제, 수화제, 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및 완충제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는 전립선염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 홍삼박 유래의 홍삼오일을 유효성분으로 포함하고,
    상기 홍삼오일은 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 베타-시토스테롤로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 전립선염의 개선용 식품 조성물.
  11. 청구항 10에 있어서,
    감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 및 가공보조제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는 전립선염의 개선용 식품 조성물.
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