KR102290507B1 - 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 - Google Patents

세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR102290507B1
KR102290507B1 KR1020190114210A KR20190114210A KR102290507B1 KR 102290507 B1 KR102290507 B1 KR 102290507B1 KR 1020190114210 A KR1020190114210 A KR 1020190114210A KR 20190114210 A KR20190114210 A KR 20190114210A KR 102290507 B1 KR102290507 B1 KR 102290507B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
antibody
heavy chain
Prior art date
Application number
KR1020190114210A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20200032019A (ko
Inventor
김성훈
권남훈
Original Assignee
주식회사 자이메디
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 자이메디 filed Critical 주식회사 자이메디
Publication of KR20200032019A publication Critical patent/KR20200032019A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102290507B1 publication Critical patent/KR102290507B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/9015—Ligases (6)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 명세서에서 기재하는 특정 CDR(상보성 결정부위) 서열을 가지는 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편 및 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 조성물의 암, 암전이 또는 면역세포 이동 관련 질환의 예방, 치료 또는 진단의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 기존의 항체보다 KRS N-말단에 친화도가 높은 항체를 제조하는 데에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체{Antibody specifically binding to the N-terminal region of lysyl- tRNA synthetase exposed at cell outer membrane}
본 발명은 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 명세서에서 기재하는 특정 CDR(상보성 결정부위) 서열을 가지는 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단 영역에 특이적으로 결합하며, 친화도 및 안정성이 높은 항체 또는 그 단편 및 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 조성물의 암, 암전이 또는 면역세포 이동 관련 질환의 예방, 치료 또는 진단의 용도에 관한 것이다.
최근 연구를 통해 일반적으로 세포질(cytosol)에 존재하는 인간 KRS(라이실-tRNA 합성효소, lysyl-tRNA synthetase)가 원형질막(세포막)으로 이동(translocation)되어 원형질 막에 존재하는 67LR(67-kDa 라미닌 수용체)과 상호작용함으로써 종양(또는 암) 세포의 이동을 촉진하여 암의 전이(metastasis)에 영향을 미친다는 것이 규명되었다(Dae Gyu Kim et al., Chemical inhibition of prometastatic lysyl-tRNA synthetase-laminin receptor interaction, Nat Chem Biol. 2014 Jan; 10(1): 29-34, Dae Gye Kim et. al. Interaction of two translational components, lysyl-tRNA synthetase and p40/37LRP, in plasma membrane promotes laminin-dependent cell migration, FASEB J. (2012)26, 4142-4159). 인간 KRS(Genbank Accession No. NP_005539.1 등)는 N-말단 연장 (N-terminal extension, 1-72), 안티코돈 결합 도메인(anticodon-binding domain, 73-209) 및 촉매 도메인 (catalytic domain, 220-597)을 포함한다. 인간 KRS는 단백질 합성에 필수적인 효소이며 일반적으로 세포질에서 다중 tRNA 합성효소 복합체 (multi-tRNA synthetase complex, MSC) 내에 존재한다. 그러나 라미닌(laminin) 신호 후, p38 MAPK는 T52 잔기에서 KRS를 인산화시키고, KRS는 세포막으로 이동하여 유비퀴틴 매개 분해로부터 67LR을 보호한다. 또한 세포막으로 이동된 KRS 는 암전이와 관련된 67LR을 안정화시키고 이와 상호작용을 함으로서 암전이(cancer metastasis)를 촉진한다고 보고되었다.
이때, N-terminal extension(N-ext)의 말단 잔기 40개가 결실된 Myc-KRS41-597(ΔN)이 원형질막에 위치(localize)되지 않는다는 사실은 KRS N-ext 영역이 KRS가 세포막으로 이동(translocation) 하는데 있어서 필수적인 영역임을 나타낸다. 또한 암 전이와 관련하여, 67LR과의 상호작용에 있어서 구체적으로 KRS N-ext 영역이 이들의 결합에 관여함이 알려졌다. 이러한 사실을 치료 또는 진단 목적으로 이용하기 위해서는, KRS 단백질을 이루는 여러 도메인 영역의 특성에 따라서 단백질 내의 목적하는 특정 위치(특히 KRS N-ext)를 특이적으로 타겟팅(targeting)하는 것이 필요한 실정이다. 이에 본 발명자들은 ARS에도 결합하는 교차 반응을 보이지 않는 KRS N-말단에 특이적으로 결합하는 항체(대한민국 특허 출원번호: 10-2018-0035446)를 제작하였다.
그러나 기존의 KRS N-말단을 표적으로 하는 항체의 친화도가 완전한 IgG 형태의 다양한 항체들의 친화도에 비해 낮은 수준이다. 따라서, KRS N-말단에 더 높은 친화도를 갖는 항체를 제작할 필요가 있다.
이에 본 발명자들은 기존의 세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 보다 KRS N-말단 영역에 대한 결합친화력이 더 좋은 항체를 제작하기 위하여, 기존의 항체 경쇄가변영역과 중쇄가변영역을 변형하여 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은
(a) (ⅰ) 아미노산 서열 SYDMS를 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
(ⅱ) 아미노산 서열 X1IX2X3X4X5GX6X7YYADSVKG를 포함하고, 여기서 X1은 A 또는 V이고, X2은 S, D 또는 G이고, X3는 Y, P, S 또는 A이고, X4는 D, Q, L 또는 Y이고, X5는 N, M, S, 또는 G이고, X6는 N, R 또는 P이고, X7는 T, V, I 또는 S인 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
(ⅲ) 아미노산 서열 X8ALDFDY를 포함하고, 여기서 X8은 M 또는 L인 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 중쇄가변영역(VH) 및
(b) (ⅰ) 아미노산 서열 TGSSSNIGSNYVT를 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
(ⅱ) 아미노산 서열 X9NX10X11RPS를 포함하고, 여기서 X9는 D, S 또는 R이고, X10은 S 또는 N이고, X11은 N 또는 Q인 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
(ⅲ) 아미노산 서열 X12SFSDELGAYV를 포함하고, 여기서 X12은 A 또는 S인 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 경쇄가변영역(VL)
을 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 이를 포함하는 재조합 발현 벡터, 상기 벡터로 형질전환된 세포를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은
(a) 상기 재조합 발현 벡터로 숙주 세포를 형질전환하는 단계;
(b) 형질전환된 숙주 세포를 배양하여 항체 또는 그 단편을 생산하는 단계; 및
(c) 숙주 세포에서 생산된 항체 또는 그 단편을 수득하는 단계를 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암전이 예방 또는 억제용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
(a) (ⅰ) 아미노산 서열 SYDMS를 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
(ⅱ) 아미노산 서열 X1IX2X3X4X5GX6X7YYADSVKG를 포함하고, 여기서 X1은 A 또는 V이고, X2은 S, D 또는 G이고, X3는 Y, P, S 또는 A이고, X4는 D, Q, L 또는 Y이고, X5는 N, M, S, 또는 G이고, X6는 N, R 또는 P이고, X7는 T, V, I 또는 S인 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
(ⅲ) 아미노산 서열 X8ALDFDY를 포함하고, 여기서 X8은 M 또는 L인 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 중쇄가변영역(VH) 및
(b) (ⅰ) 아미노산 서열 TGSSSNIGSNYVT를 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
(ⅱ) 아미노산 서열 X9NX10X11RPS를 포함하고, 여기서 X9는 D, S 또는 R이고, X10은 S 또는 N이고, X11은 N 또는 Q인 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
(ⅲ) 아미노산 서열 X12SFSDELGAYV를 포함하고, 여기서 X12은 A 또는 S인 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 경쇄가변영역(VL)
을 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 이를 포함하는 재조합 발현 벡터, 상기 벡터로 형질전환된 세포를 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
(a) 상기 재조합 발현 벡터로 숙주 세포를 형질전환하는 단계;
(b) 형질전환된 숙주 세포를 배양하여 항체 또는 그 단편을 생산하는 단계; 및
(c) 숙주 세포에서 생산된 항체 또는 그 단편을 수득하는 단계를 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암전이 예방 또는 억제용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 진단용 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에서 '세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS) N-말단 영역' 은 세포 내에서 생성된 KRS가 이동하여 세포막(또는 원형질막)에 위치될 때 세포 외(extracellular) 영역으로 또는 세포막 표면에 노출되는 특정 서열을 의미하는 것으로서, 통상 KRS N-말단의 1 내지 72개의 아미노산 영역의 일부 또는 전장 서열을 의미하는 것일 수 있다. 또한 KRS N-말단 영역은 종간 서열유사성이 존재하며 특히 서열번호 117로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에서 'KRS'는 라이실 티알엔에이 합성효소로 알려져 있는 전장(全長) 폴리펩티드 또는 N-말단 영역(N-terminal extension)을 포함하는 임의의 KRS 단편서열을 의미한다. 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편들은 전술한 바와 같이 세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역을 특이적으로 검출하므로, 전술한 KRS 전장 폴리펩타이드 또는 N-말단 영역을 포함하는 임의의 KRS 단편 서열 또한 검출할 수 있다. 상기 KRS의 구체적 서열은, 서열번호 117로 표시되는 폴리펩타이드를 포함하는 것으로서 당업계에 라이실 티알엔에이 합성 효소로서 알려진 것이라면 특별히 제한되지 않으며, 일례로 본 발명의 KRS는 인간(homo sapiens) 유래의 것으로서 NCBI(Genbank) Accession No. NP_005539.1 등으로 공지된 것을 포함하고, 마우스(Mus musculus) 유래의 것으로서 NCBI(Genbank) Accession No. NP_444322.1 등으로 공지된 것을 포함하며, 랫(Rattus norvegicus) 유래의 것으로서 NCBI(Genbank) Accession No. XP_006255692.1 등으로 공지된 것을 포함하며, 이외에도 하기의 서열정보를 참조로 할 수 있으나 이에 제한되지 않는다: XP_005004655.1(guinea-pig: Cavia porcellus), XP_021503253.1(gerbil, Meriones unguiculatus), XP_002711778.1(rabbit, Oryctolagus cuniculus), XP_536777.2(dog, Canis lupus familiaris), XP_003126904.2(swine, Sus scrofa), XP_011755768.1(monkey, Macaca nemestrina), XP_008984479.1 (marmoset, Callithrix jacchus), XP_019834275.1 (cow, Bos indicus), XP_511115.2 (chimpanzee, Pan troglodytes). 가장 바람직하게는 NCBI(Genbank) Genbank Accession No. NP_005539.1로 공지된 것일 수 있다.
본 발명에서 '항체(antibody)'는 면역 글로불린(immunoglobulin, Ig)이라고도 불리며, 항원에 선택적으로 작용하여 생체 면역에 관여하는 단백질의 총칭이다. 자연에서 발견되는 전체 항체(whole antibody)는 일반적으로 여러 도메인으로 이루어진 폴리펩티드인 경쇄(light chain, LC) 및 중쇄(heavy chain, HC)의 2개 쌍으로 이루어지거나, 이들 HC/LC의 2개의 쌍으로 된 구조를 기본 단위로 한다. 포유류의 항체를 구성하는 중쇄의 종류는 그리스 문자 α, δ, ε, γ 및 μ로 표시되는 5가지 유형이 있으며, 중쇄의 종류에 따라 각각 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 등 다른 종류의 항체를 구성하게 된다. 포유류의 항체를 구성하는 경쇄의 종류는 λ 및 κ로 표시되는 2가지 종류가 존재한다.
항체의 중쇄와 경쇄는 구조적으로 아미노산 서열의 가변성에 따라 가변영역과 불변영역으로 구분된다. 중쇄의 불변영역은 항체의 종류에 따라 CH1, CH2 및 CH3(IgA, IgD 및 IgG 항체) 및 CH4(IgE 및 IgM 항체) 등 3 또는 4개의 중쇄불변영역으로 구성되어 있으며, 경쇄는 1개의 불변영역인 CL로 구성되어 있다. 중쇄와 경쇄의 가변영역은 각각 중쇄가변영역(VH) 또는 경쇄가변영역(VL)의 하나의 도메인으로 이루어져 있다. 경쇄와 중쇄는 각각의 가변영역과 불변영역이 나란히 정렬되어 1개의 공유 이황결합(disulfide bond)에 의해 연결되고, 경쇄와 결합한 두 분자의 중쇄는 2개의 공유 이황결합을 통해 연결되어 전체 항체의 형태를 형성한다. 전체 항체는 중쇄 및 경쇄의 가변영역을 통해 항원에 특이적으로 결합하며, 전체 항체는 2개의 중쇄 및 경쇄의 쌍(HC/LC)으로 구성되어 있으므로, 한 분자의 전체 항체는 두 개의 가변영역을 통해 동일한 두 개의 항원에 결합하는 2가의 단일특이성을 갖게 된다.
항체가 항원에 결합하는 부위를 포함하는 가변영역은 서열 가변성이 적은 골격 부위(framework region, FR)와 서열 가변성이 높은 과가변성 부위(hypervariable region)인 상보성 결정부위(complementary determining region, CDR)로 세분된다. VH와 VL은 각각 3개의 CDR 및 4개의 FR이 N-말단부터 C-말단의 방향으로 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 순서로 배열되어 있다. 항체의 가변영역 안에서도 서열 가변성이 가장 높은 CDR이 항원과 직접 결합하는 부위로, 항체의 항원 특이성에 가장 중요하다.
본 발명은
(a) (ⅰ) 아미노산 서열 SYDMS를 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
(ⅱ) 아미노산 서열 X1IX2X3X4X5GX6X7YYADSVKG를 포함하고, 여기서 X1은 A 또는 V이고, X2은 S, D 또는 G이고, X3는 Y, P, S 또는 A 이고, X4는 D, Q, L 또는 Y이고, X5는 N, M, S, 또는 G이고, X6는 N, R 또는 P이고, X7는 T, V, I 또는 S인 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
(ⅲ) 아미노산 서열 X8ALDFDY를 포함하고, 여기서 X8은 M 또는 L인 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 중쇄가변영역(VH) 및
(b) (ⅰ) 아미노산 서열 TGSSSNIGSNYVT를 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
(ⅱ) 아미노산 서열 X9NX10X11RPS를 포함하고, 여기서 X9는 D, S 또는 R이고, X10은 S 또는 N이고, X11은 N 또는 Q인 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
(ⅲ) 아미노산 서열 X12SFSDELGAYV를 포함하고, 여기서 X12은 A 또는 S인 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 경쇄가변영역(VL)
을 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 제공한다.
구체적으로는, 상기 (a) 중쇄가변영역(VH)은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1); 서열번호 3, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23 및 서열번호 118로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 서열번호 5 및 서열번호 25로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 것을 특징으로 하고,
(b) 경쇄가변영역(VL)은 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1); 서열번호 9, 서열번호 27 및 서열번호 29로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 서열번호 13 및 서열번호 15로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 CDR 서열로 구성된 항체들은 세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 능력이 뛰어나다. 이는 본 발명의 명세서 실시예에 잘 나타나 있다.
본 발명의 실시예에서는 세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하며, 친화도가 높은 항체를 제작하기 위하여 기존의 N3 항체(출원번호: 10-2018-0035446)의 중쇄가변영역과 경쇄가변영역을 개량한 뒤, 효모 발현을 통해 개량된 라이브러리를 선별하였다. 1차, 2차, 3차 FACS 스크리닝을 통해, KRS N-말단 영역에 고친화도 및 특이성을 갖는 N3-1, N3-3, N3-4 scFv를 선별하였으며, 이의 VH 및 VL을 서로 조합한 새로운 N3-5 scFv를 선별하였다.
그 다음 GST가 결합된 KRS N-말단에 특이적으로 결합하며, 친화도가 높은 개량 라이브러리를 선별하기 위하여, N3-3 scFv의 중쇄가변영역을 개량한 라이브러리를 선별하였다. 1차, 2차, 3차, 4차 FACS 스크리닝을 통해, KRS N-말단 영역에 고친화도 및 특이성을 갖는 N3-6, N3-7, N3-8, N3-9 scFv를 선별하였다.
이 중 가장 높은 친화도를 갖는 N3-8 IgG 항체의 생산성, 안정성 등을 개선하기 위하여 N3-8의 중쇄가변영역 및 경쇄 부위에 돌연변이를 도입하여 7종(N3-8-1, N3-8-2, N3-8-3, N3-8-4, N3-8-5, N3-8-6, N3-8-7)의 항체를 얻었다.
그 결과 N3-1 IgG, N3-3 IgG, N3-4 IgG, N3-5 IgG, N3-6 IgG, N3-7 IgG, N3-8 IgG, N3-9 IgG, N3-8-1 IgG, N3-8-2 IgG, N3-8-3 IgG, N3-8-4 IgG, N3-8-5 IgG, N3-8-6 IgG, N3-8-7 IgG의 항체를 제작하였으며, 상기 항체 또한 KRS N-말단에 높은 친화도를 보이는 것을 확인하였다.
본 발명에 따른 '세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편'은, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 아래와 같은 중쇄가변영역 및 경쇄가변영역의 CDR 구성을 포함하는 항체로서 하기 ⅰ, ⅱ, ⅲ, ⅳ, ⅴ, ⅵ, ⅶ, ⅷ, ⅸ, ⅹ, xi, xii 및 xiii은 각각 실시예의 N3-1, N3-3, N3-4, N3-5, N3-6, N3-7, N3-8, N3-9, N3-8-1, N3-8-2, N3-8-3, N3-8-4, N3-8-5, N3-8-6 및 N3-8-7 항체의 CDR 조합을 나타낸다:
i) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
ii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
iii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 118로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
iv) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 118로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
ⅴ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
ⅵ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
ⅶ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체; 및
ⅷ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
ⅸ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
ⅹ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
xi) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
xii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
xiii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
가장 바람직하게 본 발명에 따른 상기 항체 또는 그 단편은, 아래와 같은 중쇄가변영역(VH) 및 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 것을 특징으로 한다:
상기 항체 또는 그 단편에 있어서, 상기 중쇄가변영역은 서열번호 31, 서열번호 35, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 41, 서열번호 43, 서열번호 45 및 서열번호 47로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄가변영역은 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 및 서열번호 55로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 49로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 31로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 49로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 35로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 37로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 39로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 41으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 43로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 53으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 51로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 53으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 서열번호 47로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄가변영역 및 서열번호 55로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄가변영역; 을 포함하는 항체이다.
상기 중쇄가변영역(VH)과 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 IgG 형태의 항체는 구체적으로는 서열번호 89, 서열번호 93, 서열번호 95, 서열번호 97, 서열번호 99, 서열번호 101, 서열번호 103 및 서열번호 105로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 107, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 113 및 서열번호 115로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로 이루어진 것을 특징으로 하는 항체일 수 있다.
가장 바람직하게는 서열번호 89로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 107로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 89로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 93으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 107로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 93으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 95로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 97로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 99로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 101로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 103으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 103으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 103으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 115로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 115로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 서열번호 99로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;를 포함하는 항체이다.
본 발명에 따른 '세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체'는 상기한 CDR 조합이나, VH 및 VL 조합을 갖는 것이라면 그 종류가 제한되지 않는다. 구체적 일례로 상기 항체는 IgG, IgA, IgM, IgE 및 IgD로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 IgG 항체일 수 있다.
본 발명의 항체는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 상기한 CDR 조합이나, VH 및 VL 조합을 갖는 것이라면 단일클론(monoclonal) 항체일 수도 있고, 다클론(polyclonal) 항체일 수도 있지만, 항체의 중쇄와 경쇄의 아미노산 서열이 실질적으로 동일한 항체의 집단인 단일클론 항체인 것이 바람직하다.
본 발명의 항체는 인간을 포함하는 포유동물, 조류 등을 포함한 임의의 동물에서 유래한 것일 수 있으며, 바람직하게는 인간에서 유래한 것이거나, 인간에서 유래한 항체의 부분과 다른 종의 동물에서 유래한 항체의 부분을 포함하는 키메릭(chimeric) 항체일 수 있다. 즉, 본 발명은 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간항체를 모두 포함하며 바람직하게는 인간항체 일 수 있다.
또한 본 발명에서 항체의 단편은 전체 항체의 항원 특이적 결합력을 유지하고 있는 항체의 단편을 의미하며, 바람직하게 상기 단편은 모항체의 KRS N-말단 결합 친화도와 유사하거나, 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 또는 그 이상을 보유한다. 구체적으로는 Fab, F(ab)2, Fab', F(ab')2, Fv, 디아바디(diabody), scFv 등의 형태일 수 있다.
Fab(fragment antigen-binding)는 항체의 항원 결합 단편으로, 중쇄와 경쇄 각각의 하나의 가변 도메인과 불변 도메인으로 구성되어 있다. F(ab')2는 항체를 펩신으로 가수분해시켜서 생성되는 단편으로, 두 개의 Fab가 중쇄 경첩(hinge)에서 이황결합(disulfide bond)으로 연결된 형태를 하고 있다. F(ab')는 F(ab')2 단편의 이황결합을 환원하여 분리시킨 Fab에 중쇄 경첩이 부가된 형태의 단량체 항체 단편이다. Fv(variable fragment)는 중쇄와 경쇄 각각의 가변영역으로만 구성된 항체 단편이다. scFv(single chain variable fragment)는 중쇄가변영역(VH)과 경쇄가변영역(VL)이 유연한 펩티드 링커로 연결되어 있는 재조합 항체 단편이다. 디아바디(diabody)는 scFv의 VH와 VL이 매우 짧은 링커로 연결되어 서로 결합하지 못하고, 동일한 형태의 다른 scFv의 VL, VH와 각각 결합하여 이량체를 형성하고 있는 형태의 단편을 의미한다.
본 발명의 목적상 항체의 단편은 세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 대한 결합특이성을 유지하고 있는 것이라면 구조나 형태의 제한을 받지 않지만, 바람직하게 scFv일 수 있다. 본 발명에 따른 scFv는 상기한 KRS N-말단 영역에 특이적인 CDR 구성, 또는 VH와 VL의 구성을 갖는 것으로서 VH의 C-말단과 VL의 N-말단이 링커를 통해 연결된 것이라면 그 서열이 특별히 제한되지 않는다. 상기 링커는 당업계에 scFv에 적용되는 링커로서 알려진 것이라면 그 종류가 특별히 제한되지 않으나 바람직하게 서열번호 57로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드일 수 있다. 이에 따라 본 발명의 scFv는 구체적으로 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67, 서열번호 69, 서열번호 71, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 77, 서열번호 79, 서열번호 81, 서열번호 83, 서열번호 85 및 서열번호 87 로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 항체 또는 그 단편은 이의 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않는 보존적 아미노산 치환(항체의 보존적 변이체라고 함)을 포함할 수 있다.
또한 전술한 본 발명의 항체 또는 그 단편은 효소, 형광 물질, 방사선 물질 및 단백질 등과 접합된 것일 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 항체에 상기 물질을 접합하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
또한 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 암호화 하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 명세서에서 폴리뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드 또는 핵산으로 기재될 수도 있으며, DNA 분자들(예를 들어, cDNA 또는 유전체(genomic DNA), RNA 분자들(예를 들어, mRNA), 뉴클레오티드 유사체들을 사용하여 생성된 상기 DNA 또는 RNA의 유사체들(예를 들어, 펩티드 핵산들 및 비-자연적으로 발생하는 뉴클레오티드 유사체들) 및 이들의 하이브리드들이 포함된다. 상기 폴리뉴클레오티드는 단일-가닥(single-stranded) 또는 이중-가닥(double stranded)이 될 수 있다.
상기 폴리뉴클레오티드는 상기한 KRS N-말단 영역에 특이적인 CDR 구성, 또는 VH와 VL의 구성을 갖는 중쇄 및 경쇄로 이루어지는 항체를 암호화하는 염기서열을 의미한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 항체 또는 그 단편을 암호화하는 것이면 그 서열이 특별히 제한되지 아니하는 것으로서, 앞서 설명한 본 발명에 따른 항체에서 전술한 CDR 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 그 서열이 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 26, 서열번호 28, 서열번호 30 또는 서열번호 119로 표시되는 염기서열을 포함하는 것일 수 있다.
또한 본 발명에 따른 항체에서 전술한 VH와 VL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 그 서열이 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게 서열번호 32(VH), 서열번호 34(VL), 서열번호 36(VH), 서열번호 38(VH), 서열번호 40(VH), 서열번호 42(VH), 서열번호 44(VH), 서열번호 46(VH), 서열번호 48(VH), 서열번호 50(VL), 서열번호 52(VL), 서열번호 54(VL) 또는 서열번호 56(VL)로 표시되는 염기서열을 포함하는 것일 수 있다.
또한 상기 항체의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 바람직하게는 본 발명에 따른 scFv를 암호화하는 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70, 서열번호 72, 서열번호 74, 서열번호 76, 서열번호 78, 서열번호 80, 서열번호 82, 서열번호 84, 서열번호 86 및 서열번호 88로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 염기서열을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 당업계에 잘 알려진 방법에 의하여 얻어질 수 있다. 예를 들어, 상기 항체의 중쇄 및 경쇄의 일부분 또는 전부를 코딩하는 DNA 서열 또는 해당 아미노산 서열에 근거하여, 당분야에 잘 알려진 올리고뉴클레오타이드 합성기법, 예를 들어 중합효소 연쇄 반응 (PCR)법 등을 사용하여 합성할 수 있다.
또한 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다.
본 발명에서 '재조합(recombinant)'은 '유전자 조작(genetic manipulation)'과 호환하여 사용될 수 있으며, 유전자에 변형을 가하고 자르고 연결하는 등 분자적 클로닝(molecular cloning) 실험 기법을 이용하여 자연의 상태에는 존재하지 않는 형태의 유전자를 제조하는 것을 의미한다.
본 발명에서 '발현(expression)'은 세포에서 단백질 또는 핵산이 생성되는 것을 의미한다.
본 발명에서 '재조합 발현 벡터'란 적합한 숙주세포(host cell)에서 목적하는 단백질 또는 핵산(RNA)을 발현할 수 있는 벡터로서, 폴리뉴클레오티드(유전자) 삽입물이 발현될 수 있도록 작동가능하게 연결된 필수적인 조절 요소를 포함하는 유전자 작제물을 말한다. '작동가능하게 연결된(operably linked)'이란 일반적 기능을 수행하도록 핵산 발현조절서열과 목적하는 단백질 또는 RNA를 코딩하는 핵산 서열이 기능적으로 연결(functional linkage)되어 있는 것으로, 발현조절서열에 의해 유전자가 발현될 수 있도록 연결된 것을 의미한다. 상기 '발현조절서열(expression control sequence)'이란 특정한 숙주세포에서 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 DNA 서열을 의미한다. 그러한 조절 서열은 전사를 실시하기 위한 프로모터, 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합 부위를 코딩하는 서열, 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열, 개시 코돈, 종결 코돈, 폴리아데닐화 시그널 및 인핸서 등을 포함한다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 클로닝 분야에서 통상적으로 사용되는 벡터라면 그 종류가 특별히 제한되지 않으며, 그 예로는 mammalian expression vector, 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, 박테리오파아지 벡터 및 바이러스 벡터 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 상기 플라스미드에는 대장균 유래 플라스미드(pBR322, pBR325, pUC118 및 pUC119, pET-22b(+)), 바실러스 서브틸리스 유래 플라스미드(pUB110 및 pTP5) 및 효모 유래 플라스미드(YEp13, YEp24 및 YCp50) 등이 있으며, 상기 바이러스는 레트로바이러스, 아데노바이러스 또는 백시니아 바이러스와 같은 동물 바이러스, 배큘로 바이러스와 같은 곤충 바이러스 등이 사용될 수 있다.
따라서 본 발명에 따른 재조합 발현 벡터는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합할 수 있는 전술한 CDR, 또는 VH와 VL의 구성을 갖는 중쇄 및 경쇄로 이루어지는 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 적절한 숙주세포에서 발현될 수 있도록 작동가능하게 연결된 유전자 작제물을 의미한다.
본 발명에 따른 항체의 중쇄와 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 각각 별개의 재조합 발현 벡터에 포함되어 있을 수도 있고, 하나의 재조합 발현 벡터에 포함되어 있을 수도 있다.
본 발명은 상기 재조합 발현 벡터로 형질전환된 세포를 제공한다.
본 발명의 세포는 본 발명의 재조합 발현 벡터에 포함된 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 발현하는데 사용될 수 있는 세포라면 그 종류는 특별히 제한되지 아니한다. 본 발명에 따른 재조합 발현 벡터로 형질전환된 세포(숙주세포)는 원핵생물(예를 들어, 대장균), 진핵생물(예를 들어, 효모 또는 다른 균류), 식물 세포(예를 들어, 담배 또는 토마토 식물 세포), 동물 세포(예를 들어, 인간 세포, 원숭이 세포, 햄스터(hamster) 세포, 랫 세포(rat cell), 마우스 세포(mouse cell), 곤충 세포 또는 이들에서 유래한 하이브리도마일 수도 있다. 바람직하게는 인간을 포함하는 포유류에서 유래한 세포일 수 있다.
본 목적에 적합한 원핵생물은 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들어 엔테로박테리아새(Enterobacteriaceae), 예를 들어 에스케리치아 (Escherichia), 예를 들어 이. 콜라이 (E. coli), 엔테로박터(Enterobacter), 에르위니아 (Erwinia), 클렙시엘라 (Klebsiella), 프로테우스 (Proteus ), 살모넬라(Salmonella), 예를 들어, 살모넬라 티피무륨 (Salmonella typhimurium), 세라티아 (Serratia), 예를 들어, 세라티아 마르세스칸스 (Serratia marcescans) 및 시겔라 (Shigella), 및 바실리 (Bacilli), 예를 들어, 비. 섭틸리스 (B. subtilis) 및 비. 리케니포르미스 (B. licheniformis), 슈도모나스 (Pseudomonas), 예를들어 피.애루기노사 (P. aeruginosa) 및 스트렙토마이세스 (Streptomyces)를 포함한다. 본 발명의 세포는 본 발명의 벡터를 발현가능 한 것이면, 특별히 제한되지 아니하나, 바람직하게는 이. 콜라이일 수 있다.
본 발명의 세포로서 진핵생물은 사카로마이세스 세레비지아에 (Saccharomyces cerevisiae)가 가장 흔히 사용된다. 그러나 많은 다른 속, 종 및 균주, 이에 한정되지 아니하나, 예를 들어 쉬조사카로마이세스폼베(Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로마이세스 숙주, 예를 들어 케이. 락티스(K. lactis), 케이. 프라길리스 (K. fragilis) (ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스 (K. bulgaricus) (ATCC 16,045), 케이. 위커라미 (K. wickeramii) (ATCC 24,178), 케이. 왈티 (K. waltii) (ATCC 56,500), 케이. 드로소필라룸 (K. drosophilarum) (ATCC 36,906), 케이. 테르모톨레란스 (K. thermotolerans) 및 케이. 마르시아누스 (K. marxianus); 야로위아(yarrowia) (EP 402,226); 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris) (EP 183,070); 칸디다 (Candida); 트리코데르마 레에시아 (Trichoderma reesia (EP 244,234)); 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa); 쉬바니오마이세스 (Schwanniomyces), 예를 들어 쉬바니오마이세스 옥시덴탈리스(occidentalis); 및 필라멘트성 진균, 예를 들어 뉴로스포라, 페니실리움 (Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium) 및 아스퍼질러스 (Aspergillus) 숙주, 예를 들어 에이. 니둘란스 (A. nidulans) 및 에이. 니거 (A. niger)가 사용 가능하다.
상기 용어 '형질전환(transformation)'은 외래성 폴리뉴클레오티드가 도입됨에 의한 숙주 세포의 유전자형의 변형을 의미하며, 그 형질전환에 사용된 방법과 상관없이 외래성 폴리뉴클레오티드가 숙주 세포 내로 도입된 것을 의미한다. 숙주 세포 내로 도입된 외래성 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포의 게놈 내로 통합되어 유지되거나 통합되지 않고 유지될 수 있는데, 본 발명은 양자 모두 포함한다.
본 발명에 따른 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 발현할 수 있는 재조합 발현 벡터는 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 이에 한정되지는 않으나, 일시적 형질감염(transient transfection), 미세주사, 형질도입(transduction), 세포융합, 칼슘 포스페이트 침전법, 리포좀 매개된 형질감염(liposome-mediated transfection), DEAE 덱스트란-매개된 형질감염(DEAE dextran- mediated transfection), 폴리브렌-매개된 형질감염(polybrene-mediated transfection), 전기천공법(electroporation), 유전자 총(gene gun) 및 세포 내로 핵산을 유입시키기 위한 공지의 방법에 의해 항체 또는 그 단편을 생산하기 위한 세포 내부로 도입하여 형질전환할 수 있다.
본 발명은
(a) 상기 재조합 발현 벡터로 숙주 세포를 형질전환하는 단계;
(b) 형질전환된 숙주 세포를 배양하여 항체 또는 그 단편을 생산하는 단계; 및
(c) 숙주 세포에서 생산된 항체 또는 그 단편을 수득하는 단계를 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 제조하는 방법을 제공한다.
(a) 단계는 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 생산하기 위하여 숙주세포를 상기 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 작동가능하게 연결된 재조합 발현 벡터로 형질전환하는 단계이다.
통상의 기술자는 선택된 숙주세포와 재조합 발현 벡터에 따라 앞서 서술한 바와 같이 적절한 형질전환 방법을 선택하여 본 단계를 실시할 수 있다. 중쇄와 경쇄의 염기서열을 포함하는 재조합 발현 벡터는 동일한 숙주세포에 공동형질전환하여 중쇄와 경쇄가 하나의 세포에서 발현되도록 할 수도 있고, 중쇄와 경쇄의 염기서열을 포함하는 재조합 발현 벡터를 각각 별개의 숙주세포에 형질전환하여 중쇄와 경쇄가 따로 발현되도록 할 수도 있다.
(b) 단계는 상기 형질전환된 숙주세포를 배양하여 숙주세포에 도입된 재조합 발현 벡터로부터 본 발명에 따른 항체의 중쇄, 경쇄 또는 항체 단편의 폴리펩티드가 생산되도록 하는 단계이다.
상기 숙주세포를 배양하기 위한 배지 조성과 배양 조건, 배양 시간 등은 당업계에서 통상 사용되는 방법에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 숙주세포에서 생산되는 항체 분자는 세포의 세포질 내에 축적되거나, 적절한 신호 서열에 의하여 세포 외부 또는 배양 배지로 분비되거나, 페리플라즘 등으로 표적화(targeted)되도록 할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 항체가 KRS N-말단에 대한 결합특이성을 유지하도록 당업계에 공지되어 있는 방법을 이용하여 단백질 리폴딩(refolding)시키고 기능성 구조(conformation)를 갖도록 하는 것이 바람직하다. 또한 IgG 형태의 항체를 생산하는 경우, 중쇄와 경쇄는 별개의 세포에서 발현시키고 별도의 단계에서 중쇄와 경쇄를 접촉시켜 완전한 항체를 구성하도록 제조할 수도 있고, 중쇄와 경쇄를 동일한 세포에서 발현되도록 하여 세포 내부에서 완전한 항체를 형성하도록 할 수도 있다.
(c) 단계는 숙주세포에서 생산된 항체 또는 그 단편을 수득하는 단계이다. 숙주세포에서 생산된 항체 또는 그 단편 폴리펩타이드의 특성, 숙주세포의 특성, 발현 방식 또는 폴리펩티드의 표적화 여부 등을 고려하여 통상의 기술자는 수득 방법을 적절히 선택 및 조절할 수 있다. 예를 들어, 배양 배지로 분비된 항체 또는 그 단편은 숙주세포를 배양한 배지를 수득하고, 원심분리하여 불순물을 제거하는 등의 방법으로 항체를 회수할 수 있다. 필요에 따라 세포 내 특정 소기관이나 세포질에 존재하는 항체를 세포 외부로 방출하여 회수하기 위하여 항체 또는 그 단편의 기능적 구조에 영향을 미치지 않는 범위에서 세포를 용해시킬 수도 있다. 또한 수득한 항체는 크로마토그래피, 필터 등에 의한 여과, 투석 등의 방법을 통해 불순물을 더욱 제거하고 농축하는 과정을 추가로 거칠 수 있다.
본 발명 제조(생산) 방법의 폴리펩타이드는 본 발명의 항체 또는 그 단편 그 자체일 수 있으며, 본 발명의 항체 또는 그 단편 외 다른 아미노산 서열이 추가로 결합된 것일 수 있다. 이 경우 본 기술 분야의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 방법을 이용하여 본 발명의 항체 또는 그 단편으로부터 제거할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 그 단편은 KRS N-말단과 특이적으로 결합하므로 예를 들어, 특정 세포, 조직, 혈청, 또는 개체에서 KRS 단백질을 검출하고 정량하기 위한 진단 분석에 유용하다. 특히 세포를 용해시키지 않고도 세포 외막으로 노출된 KRS N-말단을 특이적으로 검출 가능하다.
본 발명의 상기 검출 방법은 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 시료와 접촉시키기 전에, 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 이용하여 KRS(또는 세포 외막으로 노출된 KRS N-말단 펩타이드)의 유무와 농도를 측정하기 위한 시료를 준비하는 단계((1) 단계)를 포함할 수 있다.
통상의 기술자는 항체를 이용하여 단백질을 검출하는 공지의 방법을 적절하게 선택하고, 선택된 방법에 적합하게 시료를 준비할 수 있다. 또한 시료는 암(특히 유방암 또는 폐암), 암전이의 여부 및 단계를 진단하고자 하는 피검체에서 채취된 생검 등으로 얻어진 세포나 조직, 혈액, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇌척수액 등일 수도 있다. 상기 항체를 이용하여 단백질을 검출하는 방법이란 여기 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 웨스턴 블랏, 면역 블랏, 닷 블랏, 면역조직화학염색(immunohistochemistry), 면역세포염색(Immunocytochemistry), 효소면역분석(ELISA), 방사능면역검정법(radioimmunoassay), 경쟁적 결합 분석, 면역침전 등이 있다. 예를 들어 웨스턴 블랏을 실시하기 위하여서는 시료 또는 세포의 용해물에 전기영동에 적합한 버퍼를 첨가하여 끓이는 등의 방법으로 준비할 수 있으며, 면역조직화학염색을 위해서는 세포나 조직의 절편을 고정하고 블락킹(blocking)하는 등의 전처리를 할 수 있다.
다음으로 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 전술한 단계에서 준비한 시료와 접촉시키는 단계((2) 단계)를 수행한다.
본 발명에 따른 항체는 앞서 서술한 CDR, 또는 VH와 VL의 구성을 가지며 KRS N-말단에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편으로서, 그 구체적 종류와 서열 구성에 대해서는 전술한 바와 같다.
상기 항체 또는 그 단편은 이의 '검출'을 위하여, 일반적으로 검출가능 모이어티(moiety)로 표지될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen 등, Ed. Wiley-Interscience, New York, N. Y., Pubs]에 기술된 기술을 이용하여, 방사성 동위원소 또는 형광표지로 표지될 수 있다. 또는 다양한 효소-기질 표지가 이용가능하며, 상기 효소적 표지의 예는 초파리 루시퍼라제 및 세균 루시퍼라제(미국 특허 제4,737,456호)와 같은 루시퍼라제, 루시페린 (luciferin), 2,3-다이하이드로프탈라진디오네스, 말레이트 디하이드로게나제, 유라제 (urase), 호스래디쉬 퍼옥시다제 (HRPO)와 같은 퍼옥시다제, 알칼라인 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다제 (예를 들어 글루코스옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 디하이드로게나제), 헤테로사이클릭 옥시다제 (예를 들어 유리카제 및 잔틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제, 마이크로퍼옥시다제 등을 포함한다. 항체에 효소를 접합시키는 기술은 예를 들어, 문헌 [O'Sullivan 등, 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-항체 Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N. Y., 73: 147-166]에 기술되어 있다. 표지는 다양한 공지된 기술을 이용하여 항체에 직접 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 예를 들어, 항체는 바이오틴(biotin)에 접합될 수 있고 상기에 언급된 3종의 광범위한 카테고리에 속하는 임의의 표지들이 아비딘과, 또는 그 반대로 접합될 수 있다. 바이오틴은 아비딘(avidin)에 선택적으로 결합하고, 따라서 이 표지는 이러한 간접적 방식으로 항체에 접합될 수 있다. 또는, 항체에 표지의 간접적 접합을 달성하기 위하여, 항체는 작은 합텐 (hapten) (예를 들어, 딕옥신 [digoxin])과 접합될 수 있고 상기에 언급된 서로 다른 유형의 표지들의 하나가 항-합텐 항체에 접합될 수 있다 (예컨대, 항-딕옥신 항체). 따라서, 항체에 대한 표지의 간접적 접합이 달성될 수 있다.
본 발명에서 '접촉(contacting)'이라 함은 이의 일반적인 의미로 사용되는 것으로서, 2개 이상의 물질을 혼합, 결합, 또는 서로 맞닿게 하는 것을 의미한다. 상기 접촉은 시험관 내(in vitro) 또는 다른 컨테이너(container) 상에서 수행될 수 있고, 또한 인 시투(in situ), 생체 내, 개체 내, 조직 내, 세포 내에서 수행 될 수 있다.
다음으로는 상기(2) 단계 수행 후의 시료에서 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 검출하는 단계((3) 단계)를 수행한다.
상기 '검출'은 시료 내에서 형성된 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편과 항원의 복합체를 대상으로 하는 것으로서, KRS N-말단 영역의 펩타이드(또는 이를 포함하는 단백질, 예를 들어 KRS)의 존재 유무의 감지 또는 상기 펩타이드의 수준을 측정(정성적 또는 정량적 측정을 모두 포함)하는 것을 의미한다. 따라서 상기 (2) 단계 수행 후 후술하는 검출 단계((3) 단계) 전에, KRS N-말단 영역과 복합체를 형성하지 않은 여분의 항체 또는 그 단편들을 제거하는 단계가 추가로 포함될 수 있다.
전술한 (2) 단계에서 사용된 항체 또는 그 단편이 형광, 방사성 동위원소, 효소 등으로 직접 표지되는 등의 검출가능한 모이어티를 포함하는 경우에는 해당 모이어티를 검출하는 당업계에 공지된 방법에 따라 검출을 수행할 수 있다. 일례로 방사능은, 예를 들어, 신틸레이션 계수(scintillation counting)에 의해 측정될 수 있으며, 형광은 형광계를 이용하여 정량될 수 있다.
또한 전술한 (2) 단계에서 사용된 항체 또는 그 단편이 자체로서 전술한 검출 모이어티를 포함하지 않는 경우에는, 당업계에 알려진 바와 같이 형광, 방사능, 효소 등으로 표지된 2차 항체를 이용하여 간접적으로 감지할 수 있다. 상기 2차 항체는 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편(1차 항체)에 결합한다.
본 발명은 상기 본 발명의 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 전이 예방 또는 억제용 약학적 조성물 및 암 진단용 조성물을 제공한다.
상기 암은 당업계에 악성 종양으로 알려진 것이라면 그 종류가 특별히 제한되지 않으나, 유방암, 대장암, 폐암, 소세포폐암, 위암, 간암, 혈액암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암, 질암, 음문암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, CNS 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어지는 군에서 선택되는 것일 수 있다. 바람직하게는 유방암 또는 폐암일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 항체 또는 그 단편을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 '약학적으로 허용되는' 이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 심각한 부작용을 일으키지 않는 조성물을 말한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 아릴 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들어, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들어 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 본 발명의 치료용 조성물을 임의의 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, l9th Edition, Alfonso, R., ed, Mack Publishing Co.(Easton, PA: 1995))와 바람직한 순도를 갖는 항체를 혼합하여 저장하기 위해 동결건조된 케이크 또는 수용액의 형태로 제조할 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충용액, 예를 들어 인산, 시트르산 및 다른 유기산; 아스코르브산을 비롯한 항산화제; 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당 알콜, 예를 들어 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예를 들어 나트륨; 및(또는) 비이온성 계면활성제, 예를 들어 트윈, 플루로닉스 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이 포함된다.
본 발명의 항체는 암으로 투병 중인 개체에 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 상기에서 '약학적으로 유효한 양'이란 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 암을 치료하기에 충분한 양 또는 암 전이를 예방 또는 억제하기에 충분한 양을 말한다. 본 발명의 항체 또는 그 단편의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 그 단편의 인체에 대한 투여량은 일반적으로 0.01 - 100 mg/kg/week이며, 바람직하게는 0.1 - 20 mg/kg/week이며, 더욱 바람직하게는 5 - 10 mg/kg/week일 수 있다. 그러나 상기 본 발명의 항체 또는 그 단편의 용량은 약학적 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 본 발명의 항체 또는 그 단편을 암 치료제 또는 암전이 예방 또는 억제제로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
본 발명의 조성물의 투여 경로는 공지된 항체 투여 방법, 예를 들어 정맥내, 복강내, 뇌내, 피하, 근육내, 안내, 동맥내, 뇌척수내, 또는 병변내 경로에 의한 주사 또는 주입, 또는 하기 기재된 서방성 (sustained release) 시스템에 의한 주사 또는 주입일 수 있으며 이에 제한되지 않는다. 일례로 본 발명의 항체는 전신으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 암 또는 암전이의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 암, 암전이의 진단 및 예후 평가는 생물학적 시료 중에서 또는 개체에서 KRS 단백질(특히, 세포 외막에 노출된 KRS N-말단 영역)을 검출함으로써 수행될 수 있다.
본 발명에서 용어 '진단'은, 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명에서 상기 진단은 암 또는 암전이의 발병 여부, 발병 가능성(위험성) 및 병의 진행단계를 확인하는 것이다.
'검출'에 대해서는 전술한 바와 같으며, 상기 생물학적 시료는 혈액 및 생물학적 기원의 기타 액상 시료, 생검 표본, 조직 배양과 같은 고형 조직 시료 또는 이로부터 유래된 세포가 포함된다. 보다 구체적으로 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 조직, 추출물, 세포 용해물, 전혈, 혈장, 혈청, 침, 안구액, 뇌척수액, 땀, 뇨, 젖, 복수액, 활액, 복막액 등일 수 있다. 상기 시료는 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간으로부터 수득될 수 있다. 상기 시료는 검출에 사용하기 전에 전처리할 수 있다. 예를 들어, 여과, 증류, 추출, 농축, 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등을 포함할 수 있다. 또한, 상기 시료로부터 핵산 및 단백질을 분리하여 검출에 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 항체 또는 그 단편은 진단 키트로서 제공될 수 있으며, 상기 키트는 당업계에 항체 또는 특정 결합 도메인을 갖는 펩타이드를 구성품으로 제공하는 분석 키트로서 알려진 것이라면 그 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 웨스턴 블랏, ELISA, 방사성면역분석법, 방사면역확산법, 오우크테로니 면역확산법, 로케이트 면역전기영동, 조직면역염색, 세포면역염색, 면역침전 분석법, 보체 고정 분석법, FACS 또는 단백질 칩용 키트 등을 포함한다.
본 발명의 항체 또는 그 단편은 상기 키트 즉, 진단 분석을 수행하기 위한 진단 키트에서 사용설명서와 함께 미리 지정된 양으로 시약들의 포장된 조합에 사용될 수 있다. 항체가 효소로 표지된 경우에, 키트는 기질 및 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체로서 효소에 의해 요구되는 보조인자 (cofactor)를 포함할 수 있다. 또한, 안정화제, 완충액 (예를 들어, 차단 완충액 또는 용해 완충액) 등과 같은 다른 첨가제들이 포함될 수 있다. 다양한 시약들의 상대적인 양은 분석의 민감도를 충분히 최적화시키는 시약의 용액 내 농도를 제공하기 위해 폭넓게 변화될 수 있다. 시약은 용해 시 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공하게 될 부형제를 포함하는, 일반적으로 동결건조된, 건조 분말로서 제공될 수 있다.
또한 본 발명은 상기 항체는 야생형 인간 IgG Fc 영역의 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩티드로서, 상기 Fc 변이체는 서열번호 126으로 표시되는 야생형 인간 IgG1 Fc 영역의 L117A, L118A, T182A, P212G 또는 서열번호 138로 표시되는 인간 IgG4 Fc 영역의 T179A인 하나 이상의 추가의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 폴리펩티드는 야생형 IgG Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드에 비해, ADCC/CDC 기능이 감소되는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 상기 Fc 영역은 불변 영역의 일부 이상을 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 의미하며, 야생형 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 본 발명에서 “Fc 변이체” 는 Fc 도메인에 수식을 포함하는 폴리펩티드를 언급한다. 본 발명의 Fc 변이체는 그것을 구성하는 아미노산 수식에 따라 정의된다. 구체적으로는, L118A는 부모 Fc 폴리펩티드와 비교시 위치 118에서 류신이 알라닌으로 치환된 Fc 변이체이며, T182A는 위치 182에서 트레오닌이 알라닌으로 치환된 Fc 변이체이이며, P212G 는 위치 212에서 프롤린이 글리신으로 치환된 Fc 변이체이다. 아미노산 수식은 아미노산 부가, 아미노산 결실 또는 아미노산 치환일 수 있다. 아미노산 치환은 자연 발생적 아미노산 및 비-자연 발생적 아미노산을 포함할 수 있다. 변이체는 비-자연적 아미노산을 포함할 수 있다.
상기 “아미노산 치환” 은 소정의 아미노산 서열 내에서 하나 이상의 기존 아미노산 잔기의 또다른 상이한 “대체” 아미노산 잔기에 의한 대체를 언급한다. 대체 잔기 또는 잔기들은 “자연 발생적 아미노산 잔기” 일 (즉 유전부호에 의해 인코딩될) 수 있고, 알라닌 (Ala); 아르기닌 (Arg); 아스파라긴 (Asn); 아스파르트산 (Asp); 시스테인 (Cys); 글루타민 (Gln); 글루탐산 (Glu); 글리신 (Gly); 히스티딘 (His); 이소류신 (Ile): 류신 (Leu); 라이신 (Lys); 메티오닌 (Met); 페닐알라닌 (Phe); 프롤린 (Pro); 세린 (Ser); 트레오닌 (Thr); 트립토판(Trp); 티로신 (Tyr); 및 발린 (Val) 으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다.
상기 “ADCC/CDC 기능”은 항체-의존성 세포-매개성 세포독성(Antibody-dependent cellular cytotoxicity, ADCC), 보체-의존성 세포독성(complement-dependent cytotoxicity, CDC) 기능을 의미한다. 상기 "보체-의존성 세포독성" (CDC)이란 보체가 존재하는 상태에서 본 발명의 항체에 의한 항원-발현 세포의 용해를 의미한다. "항체-의존성 세포-매개성 세포독성" (ADCC)이란 Fc 수용체(FcRs)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예: 자연 살해(NK) 세포, 호중구, 그리고 대식세포)가 표적 세포에서 결합된 항체를 인식하고 따라서 상기 표적 세포를 용해하게 되는 세포-매개성 반응을 의미한다. CDC 및 ADCC는 당업계에 잘 알려져 있고 사용 가능한분석법들을 사용하여 측정될 수 있다. (참고자료 예: U.S. 5,500,362 및 5,821,337, 그리고 Clynes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656). 항체의 불변 영역은 보체를 고정시키고 세포 의존 세포독성을 매개하는 항체의 능력에 있어서 중요하다. 따라서, 항체의 동형(isotype)은 항체가 세포독성을 매개하는 것이 바람직한지에 근거하여 선택될 수 있다.
구체적으로는, 본 발명의 상기 항체는 구체적으로는 서열번호 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 91로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 107로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 107로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194으로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 115로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 113로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 115로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208으로 표시되는 아미노산 서열 중 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 를 포함하는 항체이다.
본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환 예방 또는 치료용 조성물 및 면역세포 이동 관련 질환의 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어 ‘면역세포 이동 관련 질환’은, 당업계에 과도한 면역세포 이동(또는/및 침윤)이 주요한 발병 기전인 것으로 공지된 것이라면 그 구체적 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 심혈관 질환, 섬유화 질환, 염증성 질환 및 알포트 증후군(Alport syndrome) 으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
상기 심혈관 질환은 그 구체적 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 고혈압(고혈압에 의한 염증성 합병증 포함), 폐동맥 고혈압, 죽상동맥경화, 협심증, 심근경색증, 허혈성 뇌혈관질환, 세동맥 경화 및 중막 경화로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
상기 섬유화 질환은 그 구체적 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 경피증(scleroderma), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 크론 병(Crohn's disease), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 골수 섬유증 (myelofibrosis), 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 간 섬유증(hepathic fibrosis), 간경변증(liver cirrhosis), 신장 섬유증(kidney fibrosis), 사구체 경화증, 근섬유증(myofibrosis), 심장 섬유증, 간질성 섬유화증, 췌장 섬유화증, 비장 섬유화증, 종격막 섬유화증, 혈관 섬유화증, 피부 섬유화증, 눈 섬유화증, 황반 변성, 관절 섬유화증, 갑상선 섬유화증, 심내막심근 섬유화증, 복막 섬유화증, 복막후 섬유화증, 진행성 종괴성 섬유화증, 신원성 전신섬유화증, 전신성 홍반성 루푸스 (systemic lupus erythematosu), 유전성 섬유증, 감염성 섬유증, 자극성 섬유증, 만성 자가면역에 의한 섬유증, 장기이식 시 항원부적합에 의한 섬유증, 외과수술의 섬유성 합병증, 고지혈증에 의한 섬유증, 비만에 의한 섬유증, 당뇨성 섬유증, 고혈압에 의한 섬유증 및 스텐트 삽입 시 섬유화로 인한 폐색으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
본 발명에서 상기 염증성 질환은 그 종류가 특별히 제한되지는 않지만, 바람직하게는 자가 면역 질환, 염증성 장 질환, 피부염(예를 들어 아토피성 피부염, 습진, 건선증 등), 당뇨성 안질환(당뇨병성 망막증 등), 복막염, 골수염, 봉소염, 뇌막염, 뇌염, 췌장염, 외상 유발 쇼크, 기관지 천식, 비염, 부비동염, 중이염, 폐렴, 위염, 장염, 낭포성 섬유증, 졸중(卒中, 뇌졸중 등), 기관지염, 세기관지염, 간염(간경변, 무알콜성 지방간염 (non-alcoholic steatohepatitis) 등), 신장염(당뇨병성 신부전증 등), 단백뇨증, 관절염(건선성 관절염, 골관절염 등), 신경염(당뇨병성 신경병증, 다발성 경화증 등), 통풍, 척추염, 라이터 증후군, 결절성 다발동맥염, 혈관염, 루게릭병, 베게너 육아종증, 과사이토카인 혈증(hypercytokinemia), 류마티스성 다발성근육통, 관절 세포 동맥염, 칼슘 결정 침착 관절병증, 가성 통풍, 비-관절 류마티즘, 점액낭염, 건초염, 상과염(테니스 엘보), 신경병증성 관절 질환(Charcot's joint), 출혈성관절증(hemarthrosis), 헤노흐-쉔라인 자반병, 비후성 골관절병증, 다중심성 세망조직구종, 수르코일로시스(surcoilosis), 혈색소증, 겸상 적혈구증, 고지단백혈증, 저감마글로불린혈증, 부갑상선기능항진증, 말단거대증, 가족성 지중해열, 베하트 병, 전신성 홍반성 루푸스, 재귀열, 건선, 다발성 경화증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 급성 호흡곤란 증후군, 다발성 장기부전, 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease), 급성 폐손상(acute lung injury) 및 기관지 폐 형성장애(broncho-pulmonary dysplasia) 로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 또한 만성 염증질환을 포함한다.
본 발명에서 자가면역 질환은 류마티스성 관절염, 전신성 경피증, 전신 홍반성 낭창, 건선, 천식, 궤양성 대장염, 베체씨병, 크론씨병, 다발성 경화증, 피부근염, 교원병, 혈관염, 관절염, 육아종증, 장기 특이적 자가면역병변, 궤양성 대장염 및 GvHD (이식편대 숙주 반응 질환: graft-versus-host disease)으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
상기 만성 염증 질환은 전술한 염증성 질환의 종류를 참조로 하여 이들이 만성(chronic)화 된 상태를 포함하는 의미이며, 이들의 바람직한 일례로는 천식, 아토피성 피부염, 습진, 건선증, 골관절염, 통풍, 건선성 관절염, 간경변, 무알콜성 지방간염, 만성폐쇄성 폐질환, 비염, 당뇨병성 망막증, 당뇨병성 신부전증, 당뇨병성 신경병증 및 다발성 경화증 등이 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한 본 발명의 항체는 면역세포 이동 관련 질환으로 투병 중인 개체에 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 상기에서 '약학적으로 유효한 양'이란 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 면역세포 이동 관련 질환을 치료하기에 충분한 양을 말한다. 본 발명의 항체 또는 그 단편의 총 유효량, 상기 조성물의 제형, 투여 방법 및 투여 경로는 상기에 기재되어 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 면역세포 이동 관련 질환의 진단은 생물학적 시료 또는 개체 중에서 KRS 단백질(특히, 세포 외막에 노출된 KRS N-말단 영역)을 검출함으로써 수행될 수 있다.
따라서, 본 발명은 본 명세서에서 기재하는 특정 CDR(상보성 결정부위) 서열을 가지며 세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명의 방법은 기존의 항체보다 KRS N-말단에 친화도가 높은 항체를 제조하는 데에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 KRS N말단 표적 항체 N3의 KRS N 말단에 대한 친화도 향상을 위해 N3의 중쇄가변영역(VH)과 경쇄가변영역(VL) 각각을 기반으로 구축된 두 개의 라이브러리의 선별 및 구축 전략을 모식도로 나타낸 것이다.
도 2a는 FACS(Fluorescence Activated Cell Sorting)을 이용하여 선별된 각 단계별 라이브러리 발현 효모에 대해서 10 nM, 1 nM 또는 0.1 nM GST가 결합된 KRS (1-72) peptide와 분석한 결합능을 유세포 분석기 (FACS)로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 2b는 최종 선별된 라이브러리 중 각각 47개의 개별클론을 발현하는 효모에 대해서 0.1 nM GST가 결합된 KRS (1-72) peptide와 결합능을 유세포 분석기로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 3a 및 도 3b는 KRS (1-72) peptide에 고친화도 및 특이성을 갖는 것으로 선별된 N3-1 항체, N3-3 항체, N3-4 항체 및 N3-5 항체의 KRS의 N말단에 대한 친화도를 측정하기 위한 ELISA 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 N3 항체와 N3-1 항체의 세포 이동 저해 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 N3 항체와 N3-1 항체의 KRS 친화도를 SPR(surface plasmon resonance)방법으로 비교한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 MACS 및 FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting)를 이용하여 선별된 각 단계별 라이브러리 발현 효모에 대해서 10 nM, 1 nM 또는 0.1 nM GST가 결합된 KRS (1-72) peptide와 분석한 결합능을 유세포 분석기 (FACS)로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 N3-1 항체, N3-6 항체, N3-7 항체, N3-8 항체 및 N3-9 항체의 KRS의 N말단에 대한 친화도를 측정하기 위한 ELISA 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 N3-6 항체, N3-7 항체, N3-8 항체, N3-9 항체의 KRS 친화도를 SPR(surface plasmon resonance)방법으로 비교한 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 N3 항체, N3-1 항체, N3-6 항체, N3-7 항체, N3-8 항체, N3-9 항체 세포 이동 저해 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 N3 항체 및 N3-8 항체가 유방암 세포에서 엔도사이토시스(endocytosis)를 IHC(immunohistochemistry) 방법으로 확인한 결과를 나타낸다.
도 11은 N3 항체 투여에 의한 폐동맥 고혈압(PAH) 모델의 우심실 수축기말 압력(right ventricular end-systolic pressure; RVESP) 변화를 나타낸다(Mock IgG: 음성 대조군, Ab 1mpk: N3 항체 1mpk, Ab 10mpk : N3 항체 10mpk, sildenafil: 양성 대조군).
도 12는 폐동맥 고혈압(PAH) 모델에서 N3 항체 투여에 의해 면역세포 이동 및 침윤이 감소되었음을 IHC 염색으로 확인한 결과이다.
도 13은 급성 폐손상 마우스 모델의 BALF(Bronchoalveolar lavage fluid) 내에 증가된 총(total) 면역세포수가, N3 항체(KRS N-말단 결합 항체)의 처리 농도 의존적으로 감소됨을 확인한 결과를 나타낸다.
도 14는 급성 폐손상 마우스 모델의 BALF(Bronchoalveolar lavage fluid) 내에 특히 많이 증가되어있는 호중구(뉴트로필)이, N3 항체(KRS N-말단 결합 항체)의 처리 농도 의존적으로 감소됨을 확인한 결과를 나타낸다.
도 15는 급성 폐손상 마우스 모델의 폐 조직 내에 증가된 대식세포(IM, CD11b+/F4/80+) 이동 및 침윤이, N3 항체(KRS N-말단 결합 항체)의 처리 농도 의존적으로 감소됨을 FACS로 확인한 결과를 나타낸다.
도 16은 상기 도 15의 결과를 정량화하여 그래프로 나타낸 결과이다.
도 17은 급성 폐손상 마우스 모델의 폐 조직 내에 진행된 조직 섬유화가 N3 항체(KRS N-말단 결합 항체)의 처리에 의하여 억제됨을 보여주는 조직 이미지이다. 각 실험군 및 대조군의 조직은 Masson's trichrome 염색 처리된 후 현미경 관찰되었다.
도 18은 N3-8, N3-8-1 항체 및 ADCC/CDC 기능을 제거한 N3-8-1 항체 처리에 의하여 세포 이동(cell migration)이 억제됨을 확인한 결과를 나타낸다.
도 19는 N3-8, N3-8-1 항체 및 ADCC/CDC 기능을 제거한 N3-8-1 항체 처리에 의하여 암세포의 세포 이동(cell migration)이 억제되는 것을 확인한 결과를 나타낸다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 친화도 증가를 위한 효모 세포 표면 발현 라이브러리의 구축
기존 KRS의 N 말단을 표적하는 항체 N3(출원번호: 10-2018-0035446)의 N 말단에 대한 친화도는 약 150nM 수준으로, 완전한 IgG 형태의 다양한 항체들의 친화도에 비해 낮은 수준이다. 이에, 친화도를 증가시켜, 보다 더 좋은 효과를 갖는 항체를 제조하기 위해, N3 항체의 경새가변영역과 중쇄가변영역을 개량하였다.
Homology 모델을 이용하여 N3의 대략적인 구조를 예측하였고, 이를 통해 항원 결합에 중요한 역할을 할 것으로 예측되는 CDR 부위에 무작위적인 돌연변이를 도입하였다. 구체적으로는 중쇄가변영역을 기반으로 한 라이브러리에서는, CDR3의 잔기를 20개의 모든 아미노산 서열을 포함할 수 있는 디제너레이트 코돈(degenerated codon)인 NNK를 사용하였다. 경쇄가변영역을 기반으로 한 라이브러리에서는 CDR3의 잔기를 20개의 모든 아미노산 서열을 포함할 수 있는 디제너레이트 코돈(degenerated codon)인 NNK를 사용하였다.
구체적으로, 디자인된 라이브러리를 코딩하는 DNA는 PCR 기법을 이용하여 증폭 후 에탄올 침전법을 사용하여 농축하였다. 상동성 접합(Homologous recombination)을 위한 C-말단에 aga2 단백질이 발현되는 효모표면발현 벡터(C-aga2)는 NheI과 MluI 제한효소를 처리하여 아가로스 젤 추출법을 이용하여 정제 및 에탄올 침전법을 이용하여 농축하였다. 각각 라이브러리 코딩 DNA 12 μg에 대하여 제한효소 처리된 4 μg 벡터를 효모표면 발현용 효모 EBY100에 전기천공법으로 형질전환하였고, 계단식 희석(serial dilution)을 통해 선택배지 SD-CAA (20 g/L Glucose, 6.7 g/L Yeast nitrogen base without amino acids, 5.4 g/L Na2HPO4, 8.6 g/L NaH2PO4, 5 g/L casamino acids)에 자란 콜로니의 수를 측정하여 라이브러리 크기를 확인하였다.
이 과정을 도 1에 나타내었다.
실시예 2. GST가 결합된 KRS (1-72) peptide에 친화도가 개량된 경쇄가변영역 ( VL ) 및 중쇄가변영역 (VH) 선별
GST가 결합된 KRS (1-72) peptide를 항원으로 이용하여 상기 실시예 1에서 구축된 2가지 종류의 N3 기반 친화도 개량 라이브러리를 선별하였다.
구체적으로, 1차 FACS 스크리닝을 위해 10 nM 수준의 정제된 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide를 SG-CAA(20 g/L Galactose, 6.7 g/L Yeast nitrogen base without amino acids, 5.4 g/L Na2HPO4, 8.6 g/L NaH2PO4, 5 g/L casamino acids) 배지를 이용하여 세포 표면에 단일사슬 Fab(scFab) 형태의 경쇄가변영역 라이브러리 발현을 유도한 효모와 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 이후 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide와 라이브러리를 발현하는 효모를 PE가 접합된 스트렙타아비딘(Streptavidin-R-phycoerythrin conjugate, SA-PE)와 4℃에서 20분간 반응하여 FACS(Fluorescence activated cell sorting, FACS Caliber; BD biosciences)를 통해 부유화하였다. 이후 동일한 방법으로 1 nM의 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide로 2차 FACS 스크리닝을 하였으며, 0.5 nM의 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide로 3차 FACS 스크리닝을 진행하였다.
그 결과 도 2a 및 도 2b에 나타난 바와 같이, FACS를 이용한 선별과정을 통하여, N3 항체와 비교하여 중쇄가변영역(VH) 또는 경쇄가변영역(VL) 의존적으로 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide에 대한 높은 친화도를 갖는 클론들이 선별되는 것을 확인하였으며, 개별클론 결합능 분석을 통해 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide에 고친화도 및 특이성을 갖는 3개의 유니크한 클론(N3-1, N3-3, N3-4를 선별하였다. 또한 이들의 경쇄가변영역 및 중쇄가변영역을 서로 조합하여 또 다른 1개의 유니크한 클론(N3-5)를 구축하였다. 즉, 총 4개의 유니크한 클론(N3-1, N3-3, N3-4, N3-5)을 선별하였다.
GST가 결합된 KRS (1-72) peptide에 높은 결합능을 보이는 4개의 개별클론의 경쇄가변영역 및 중쇄가변영역의 CDR 서열을 표 1에 나타내었고, 중쇄가변영역 서열 및 경쇄가변영역 서열을 표 2에 나타내었다.
Heavy Light
CDR H1 CDR H2 CDR H3 CDR L1 CDR L2 CDR L3
N3 SYDMS
(서열번호 1)		 AISYDNGNTYYADSVKG
(서열번호 3)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 ASWDDSLSAYV
(서열번호 11)
N3-1 SYDMS
(서열번호 1)		 AISYDNGNTYYADSVKG
(서열번호 3)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 ASFSDELGAYV
(서열번호 13)
N3-3 SYDMS
(서열번호 1)		 AISYDNGNTYYADSVKG
(서열번호 3)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-4 SYDMS
(서열번호 1)		 VISSDGGNTYYADSVKG
(서열번호 118)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 ASFSDELGAYV
(서열번호 13)
N3-5 SYDMS
(서열번호 1)		 VISSDGGNTYYADSVKG
(서열번호 118)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
서열 서열번호
(서열명칭)
N3 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISYDNGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYSARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 31
(N3 VH)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCASWDDSLSAYVFGGGTKLTVL 서열번호 33
(N3 VL)
N3-1 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISYDNGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYSARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 31
(N3 VH)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCASFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 49
(N3 VL mutant 1)
N3-3 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISYDNGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYSARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 31
(N3 VH)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
N3-4 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSVISSDGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYSARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 35
(N3 VH mutant 1)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCASFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 49
(N3 VL mutant 1)
N3-5 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSVISSDGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYSARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 35
(N3 VH mutant 1)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
또한, KRS의 N말단에 대한 친화도가 증가되었는지 확인하기 위해 KRS의 N말단에 대한 친화도를 측정하기 위하여 ELISA를 실시하였다.
구체적으로는, KRS의 N말단 부분(1-72)을 96 웰 EIA/RIA 플레이트(COSTAR Corning)에 1시간 동안 25℃에서 결합시킨 후, PBS(pH 7.4, 137 mM NaCl, 12mM phosphate, 2.7 mM KCl)(SIGMA)로 10분간 3회 씻어낸다. 이후, 4% BSA PBS(4% Bovine Serum Albumin, pH7.4, 137 mM NaCl, 12mM phosphate, 2.7 mM KCl)(SIGMA)로 1시간 동안 결합시킨 다음, PBS로 10분간 3회 씻어낸다. 그 다음, IgG 형태의 KRS N말단 표적 항체인 N3, N3-1, N3-3, N3-4, N3-5를 결합시킨 후, 0.1 % PBST로 10분간 3회 씻어낸다. 표지항체로는 HRP가 접합된 항-인간 항체(Horseradish peroxidase-conjugated anti-human mAb)(SIGMA)를 사용하였다. 그 다음, TMB(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine)(Sigma)로 반응시켜 450nm 흡광도에서 측정하여 정량하였다.
그 결과 도 3a 및 도 3b에 나타난 바와 같이, 야생형인 N3 항체에 비해 돌연변이인 N3-1, N3-3, N3-4, N3-5 항체의 친화도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 음성 대조군으로 사용된 GST 또는 NRP1-b1b2에 대해서는 모든 클론이 결합하지 않은 것으로 나타났다. 돌연변이 항체인 N3-1, N3-3, N3-4, N3-5 간의 KRS 결합력에는 큰 차이가 없는 것으로 나타났다.
실시예 3: N3 항체와 N3-1 항체의 친화도 비교
3-1. 항체의 세포 이동 저해 효과
상기 실시예 2의 N3 돌연변이 항체들 중, N3-1 항체를 통상적인 방법을 이용하여, IgG 항체로 전환하였다. 전환한 IgG 항체를 이용하여 다음 실험을 실시하였다.
세포 이동은 통상적으로 사용되는 폴리카보네이트 막(8.0μm pore size, Costar)을 가진 24-웰 트랜스웰 챔버를 이용하여 측정하였다. 트렌스웰 챔버에서 lower well을 10μg 라미닌(Laminin)으로 코팅하였다. 그 다음, A549 세포를 무혈청(serum-free) RPMI 배지에 현탁하였고, 각 웰당 1 x 105세포의 농도로 상위 챔버에 넣어주었다. N3 및 N3-1 IgG, human mock IgG(대조군)를 각각 10 nM 또는 100 nM로 상기 챔버에 처리하여 24시간 동안 배양하였다. Membrane 위쪽에 존재하는 non-migrating 세포를 면봉으로 제거하였다. 그 다음, PBS로 2회 세척하고, 70% MeOH(in PBS)를 30분 동안 처리하였다. PBS로 2회 세척한 다음, Hematoxylin solution을 30분 동안 처리하였다. 그 다음 챔버를 DW로 3회 세척한 뒤, 챔버 내의 막(membrane)을 자르고 slide glass위에 마운팅하여 관찰하였다.
그 결과 도 4에 나타난 바와 같이, N3-1 항체가 N3 항체에 비해 A549세포의 이동을 현저하게 억제하는 것을 확인할 수 있었다.
3-2. 항체의 KRS 친화도 효과
KRS 조각(1-207aa) 정제 단백질을 항원으로 사용하여, Surface Plasmon Resonance(SPR)를 통해 N3 및 N3-1 항체와의 결합력을 분석하였다.
SPR 실험은 25℃에서 Series S 센서 칩 CM5(GE Healthcare)가 장착된 Biacore T200(GE Healthcare)을 사용하여 실시하였다. 아민 커플링 키트(GE Healthcare)를 이용하여 항체를 칩에 고정한 뒤, 항원을 4.8 nM-1250 nM 범위에서 PBS 용액에 4 배수 희석하여 60초간 흘려주었다. 이후 300초 동안 PBS를 흘려주었다. 얻어진 data는 Biacore T200 Evaluation 소프트웨어 v2.0(GE Healthcare)으로 분석하였다.
그 결과 도 5에 나타난 바와 같이, N3-1 항체의 KD 값이 31 nM 로 측정되어 N3 항체보다 KRS 단백질에 대한 결합력이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 4: 친화도 증가를 위한 효모 세포 표면 발현 라이브러리의 구축(N 3-1 항체)
상기 실시예 2에서 도출된 KRS의 N말단을 표적하는 N3-1, N3-3, N3-4, N3-5 항체들은 KRS에 대한 친화도가 유사하며, N3-1 항체의 결과에서 나타난 바와 같이, 약 31 nM 수준의 친화도를 가지는 것으로 판단된다. 이는 완전 IgG 형태의 다양한 항체들의 친화도와 비교했을 때 여전히 낮은 수준이다. 이를 증가시켜 더욱 효과적인 항체를 얻기 위해 항체의 중쇄가변영역을 집중적으로 개량하고자 하였다.
경쇄 가변영역 서열을 N3-3으로 고정하고 homology modeling을 이용하여 N3-3의 대략적인 modeling 구조를 예측하였으며, 이를 통해 항원 결합에 중요한 역할을 할 것이라 예측되는 CDR에 무작위적인 돌연변이를 도입하였다.
구체적으로, 중쇄가변영역의 CDR2와 CDR3 의 잔기를 20개의 모든 아미노산 서열을 포함할 수 있는 디제너레이트 코돈 (degenerated codon)인 NNK를 사용하였으며, 실시예 1과 동일한 방법으로 라이브러리를 구축하였다.
실시예 5. GST가 결합된 KRS (1-72) peptide에 친화도가 개량된 경쇄가변영역 ( VL ) 및 중쇄가변영역 (VH) 선별
GST가 결합된 KRS (1-72) peptide를 항원으로 이용하여 상기 실시예 4에서 구축된 2가지 종류의 N3-3 기반 친화도 개량 라이브러리를 선별하였다. N3-3과 N3-1의 친화도가 거의 동일한 것으로 판단되고 서열이 거의 유사하므로 항체 비교실험은 N3-1로 진행하였다.
구체적으로, GTP가 결합된 KRS (1-72) peptide와 결합된 라이브러리를 발현하는 효모를 스트렙타아비딘(Streptavidin) MicrobeadTM (Miltenyi Biotec)와 4℃에서 20분간 반응시킨 후 MACS (magnetic activated cell sorting)를 이용하여 GTP가 결합된 KRS (1-72) peptide에 고친화도를 가지는 중쇄가변영역을 발현하는 효모를 부유화하였다. 상기 선별된 라이브러리를 발현하는 효모를 SG-CAA(20 g/L Galactose, 6.7 g/L Yeast nitrogen base without amino acids, 5.4 g/L Na2HPO4, 8.6 g/L NaH2PO4, 5 g/L casamino acids) 배지에서 배양하여, 라이브러리 발현을 유도하였다. 그 다음. 실시예 2와 동일한 방법으로 FACS로 스크리닝 하였다.
10 nM의 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide로 1차 FACS 스크리닝 하였고, 1 nM의 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide로 2차 FACS 스크리닝을 하였고, 0.5 nM의 GST가 결합된 KRS(1-72) peptide로 3차 FACS 스크리닝을 하였으며, 0.1 nM의 GST가 결합된 KRS (1-72) peptide로 4차 FACS 스크리닝을 진행하였다.
그 결과 도 6에 나타난 바와 같이, MACS 및 FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting)를 이용한 선별과정을 통하여, N3-1 항체와 비교하여 GST가 결합된 KRS (1-72) peptide에 대해 중쇄가변영역(VH) 의존적으로 높은 친화도를 갖는 클론들이 선별되는 것을 확인하였으며, 개별클론 결합능 분석을 통해 GST가 결합된 KRS (1-72) peptide에 고친화도 및 특이성을 갖는 4개의 유니크한 클론(N3-6, N3-7, N3-8, N3-9)을 선별하였다.
GST가 결합된 KRS (1-72) peptide에 높은 결합능을 보이는 4개의 개별클론의 경쇄가변영역 및 중쇄가변영역의 CDR 서열을 표 3에 나타내었고, 중쇄가변영역 서열 및 경쇄가변영역 서열을 표 4에 나타내었다.
Heavy Light
CDR H1 CDR H2 CDR H3 CDR L1 CDR L2 CDR L3
N3-6 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPQMGRVYYADSVKG
(서열번호 17)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-7 SYDMS
(서열번호 1)		 AIDPLGGNIYYADSVKG
(서열번호 19)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-8 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-9 SYDMS
(서열번호 1)		 AIGADGGPSYYADSVKG
(서열번호 23)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
서열 서열번호
(서열명칭)
N3-6 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPQMGRVYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 37
(N3 VH mutant 2)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
N3-7 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAIDPLGGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 39
(N3 VH mutant 3)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
N3-8 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 45
(N3 VH mutant 6)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
N3-9 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAIGADGGPSYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 43
(N3 VH mutant 5)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
또한, KRS의 N말단에 대한 친화도가 증가되었는지 확인하기 위해 KRS의 N말단에 대한 친화도를 측정하기 위하여, 실시예 2와 동일한 방법으로 ELISA를 실시하였다.
구체적으로는, KRS의 N말단 부분(1-72)을 96 웰 EIA/RIA 플레이트(COSTAR Corning)에 1시간 동안 25℃에서 결합시킨 후, PBS로 10분간 3회 씻어낸다. 이후, 4% BSA PBS로 1시간 동안 결합시킨 다음, PBS로 10분간 3회 씻어낸다. 그 다음, IgG 형태의 KRS N말단 표적 항체인 N3-1, N3-6, N3-7, N3-8, N3-9를 결합시킨 후, 0.1 % PBST로 10분간 3회 씻어낸다. HRP가 접합된 항-인간 항체를 사용하였으며, TMB(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine)로 반응시켜 450nm 흡광도에서 측정하여 정량하였다.
그 결과 도 7에 나타난 바와 같이, N3-1 항체에 비해 돌연변이인 N3-6, N3-7, N3-8, N3-9 항체의 친화도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 음성 대조군으로 사용된 NRP1-b1b2에 대해서는 모든 클론이 결합하지 않은 것으로 나타났다.
실시예 6: N3-1 항체와 N3-6, N3-7, N3-8, N3-9 항체의 친화도 비교
6-1. 항체의 KRS 결합 비교
KRS epitope peptide F4(EPKLSKNELKRRLKAEKKVAEKEAKQKE: 서열번호 117) 를 항원 epitope로 사용하여, Surface Plasmon Resonance(SPR)를 통해 N3, N3-6, N3-7, N3-8, N3-9 항체와의 결합력을 분석하였다. SPR 실험은 상기 실시에 3-2와 동일한 방법으로 실시하였으며, epitope를 PBS 용액에 희석하여 15.7 nM-4000 nM 범위에서 2배수 희석하여 90초간 흘려주었다. 이후 2400초 동안 PBS를 흘려주었다. 얻어진 data는 Biacore T200 Evaluation 소프트웨어 v2.0 (GE Healthcare)으로 분석하였다.
그 결과 도 8에 나타난 바와 같이, N3-8 항체의 KD가 가장 우수한 것으로 나타났으며, N3-9, N3-6 항체가 유사한 KD 값을 나타냈고, N3-7 항체의 KD 값이 가장 크게 나타났다. N3-6 항체 해리(dissociation)가 N3-7, N3-9보다 길고 결합이 더 오래 유지되는 sensorgram을 나타내었다.
또한, KRS epitope peptide F4(서열번호 117)의 단일 아미노산을 각각 알라닌(alanine, A)으로 치환한 펩티드(peptide)를 이용하여, 항체 epitope 결합에 중요하게 작용하는 잔기를 확인하기 위해, ELISA를 실시하였다. 그 결과 KRS epitope peptide F4에서 각 항체와의 결합에 중요하게 작용하는 잔기를 확인할 수 있었다.
6-2. 항체의 세포이동 저해 효과
상기 실시예 3-1과 동일한 방법으로 실험을 실시하였다. 상기 실시예에서 제조한 N3-6. N3-7, N3-8, N3-9 항체들을 통상적인 방법으로, IgG로 전환하였다. 전환한 IgG 항체를 이용하여 다음 실험을 진행하였다 .
각 웰당 1 x 105세포의 농도로 상위 챔버에 넣어준 다음, N3 IgG를 100nM로 처리하였고, N3-1, N3-6, N3-7, N3-8 및 N3-9 IgG, human mock IgG(대조군)를 각각 10 nM로 상기 챔버에 처리하여 24시간 동안 배양하였다. Membrane 위쪽에 존재하는 non-migrating 세포를 면봉으로 제거하였다. 그 다음, PBS로 2회 세척하고, 70% MeOH(in PBS)를 30분 동안 처리하였다. PBS로 2회 세척한 다음, Hematoxylin solution을 30분 동안 처리하였다. 그 다음 챔버를 DW로 세척한 뒤, 챔버 내의 막(membrane)을 slide glass위에 마운팅하여 관찰하였다.
그 결과 도 9에 나타난 바와 같이, N3-6, N3-7, N3-8, N3-9 항체가 N3-1 항체에 비해 세포의 이동을 현저하게 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, N3-6, N3-7, N3-8, N3-9 항체에서 세포이동 저해 효과는 큰 차이가 보이지는 않았다.
실시예 7: N3-8 항체의 서열 정제(sequence refinement)
7-1. N3-8 항체 서열의 돌연변이 제작
상기 실시예에서 N3-8 항체가 친화도가 가장 우수한 것을 확인하였다. 이에, N3-8 항체의 생산성, 안정성 등 물성을 확인하기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다.
N3-8 항체서열에서 안정성에 영향을 미칠 것으로 예상되는 서열에 mutation을 유도하였다. 그 결과, N3-8 항체의 중쇄서열(HC)에 변이가 도입된 2종의 추가 중쇄서열을 얻을 수 있었다. 또한, mutation이 도입된 3종의 추가 경쇄 서열을 얻을 수 있었다. 이에, N3-8의 서열이 변화된 7종의 항체 서열 (N3-8 derivatives)을 하기 표 5 및 표 6에 나타내었다.
Heavy Light
CDR H1 CDR H2 CDR H3 CDR L1 CDR L2 CDR L3
N3-8-1 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-8-2 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 SNNQRPS
(서열번호 27)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-8-3 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 RNNQRPS
(서열번호 29)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-8-4 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 LALDFDY
(서열번호 25)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-8-5 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 LALDFDY
(서열번호 25)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 SNNQRPS
(서열번호 27)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-8-6 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 LALDFDY
(서열번호 25)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 RNNQRPS
(서열번호 29)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
N3-8-7 SYDMS
(서열번호 1)		 AISPYSGRIYYADSVKG
(서열번호 21)		 MALDFDY
(서열번호 5)		 TGSSSNIGSNYVT
(서열번호 7)		 DNSNRPS
(서열번호 9)		 SSFSDELGAYV
(서열번호 15)
서열 서열번호
(서열명칭)
N3-8-1 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 45
(N3 VH mutant 6)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
N3-8-2 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 45
(N3 VH mutant 6)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 53
(N3 VL mutant 3)
N3-8-3 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 45
(N3 VH mutant 6)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 55
(N3 VL mutant 4)
N3-8-4 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 47
(N3 VH mutant 7)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
N3-8-5 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 47
(N3 VH mutant 7)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 53
(N3 VL mutant 3)
N3-8-6 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 47
(N3 VH mutant 7)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 55
(N3 VL mutant 4)
N3-8-7 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSAISPYSGRIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYSARMALDFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 41
(N3 VH mutant 4)
VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVTWYQQLPGTAPKLLIYDNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCSSFSDELGAYVFGGGTKLTVL 서열번호 51
(N3 VL mutant 2)
7-2. N3-8 항체 유도체의 생산 및 Tm 측정
상기 실시예 7-1에서 수득한 N3-8 항체 유도체를 발현하는 벡터를 일시적 트랜스펙션(transient transfection)을 이용하여 단백질을 발현 및 정제하였다.
진탕 플라스크에서, 무혈청 FreeStyle 293 발현 배지 (Invitrogen)에서 부유 성장하는 HEK293-F 세포(Invitrogen)를 플라스미드 및 폴리에틸렌이민(Polyethylenimine, PEI) (Polyscience)의 혼합물로 트랜스펙션하였다. 진탕 플라스크(Corning)에 200mL 트랜스펙션 시, HEK293-F 세포를 2 X 106 세포/ml의 밀도로 배지 100ml에 파종하여, 150 rpm, 8 % CO2, 37℃에서 배양하였다.
각각의 단일클론항체 생산하기 위해 알맞은 중쇄와 경쇄 플라스미드를 10ml FreeStyle 293 발현 배지(Invitrogen)에 중쇄:경쇄 DNA 1:1, 혹은 1:2의 비율로 transfection 하였다. 1:1의 경우 중쇄 125μg, 경쇄 125μg 총 250μg(2.5 μg/ml)으로 희석하여, PEI 750μg (7.5 μg/ml)을 희석한 10ml의 배지와 혼합하여 실온에서 10분 동안 반응시켰다. 1:2의 경우 경쇄 DNA의 농도를 2배로 하였다. 그 후, 반응시킨 혼합배지를 앞서 100ml로 파종한 세포에 넣어 4시간 동안 150 rpm, 8% CO2, 37℃에서 배양 후, 나머지 100 ml의 FreeStyle 293 발현 배지를 추가하여 6일 동안 배양하였다.
그 다음, 세포배양액을 50ml tubes에 옮겨 3000rpm 에서 5 분간 원심분리를 실시하였다. 이후 채취한 세포 배양 상등액으로부터 단백질을 정제하였다. 단백질 A 세파로오스 컬럼(Protein A Sepharose column)에 항체를 적용하고 PBS(pH 7.4)로 세척하였다. 0.1 M 글라이신 완충액을 이용하여 pH 3.0에서 항체를 용리한 후, 1M Tris 완충액을 이용하여 샘플을 즉시 중화하였다. 용리한 항체 분획은 투석방법을 통해 PBS(pH 7.4)로 완충액을 교환하며 농축하였다. 정제된 단백질은 280nm 파장에서 흡광도와 흡광계수를 이용하여 정량하였다.
또한, 상기 정제한 항체 1 mg/ml 농도로 100 μl를 사용하여 항체의 thermal stability를 측정하였다. Protein thermal shift Dye kit(Thermofisher)를 이용하여 Quant Studio 3 Real-time PCR 장비(Thermofisher)로 4번 반복 수행하였다.
그 결과 하기 표 7에서 보이는 바와 같이 테스트한 모든 N3-8 항체 유도체들의 수율(yield)이 N3-8 항체보다 개선되었거나 유사한 수준으로 높은 수율을 나타냈다. 또한 표 7과 같이, Tm 값을 얻었다. 항체에 따라 thermal transition이 1-2로 다르게 관찰되었으나 모든 N3-8 항체 유도체에서 Tm 값이 증가하는 것으로 나타났다.
이를 통해 N3-8 항체 유도체들이 N3-8 항체에 비해 수율이 더 높으며, thermal stability가 개선된 것을 확인하였다.
항체 Yield (mg/L) Thermal stability
(1:1) (1:2) Tm1 Tm2
N3-8 69.9 104.61 67.37 -
N3-8-1 87.13 109.9 69.94 -
N3-8-2 96.76 109.68 72.41 -
N3-8-3 93.44 93.53 71.02 76.31
N3-8-4 86.14 89.23 70.31 -
N3-8-5 84.31 107.37 72.9 -
N3-8-6 105.95 92.9 71.0 76.97
상기 실시예들에서 사용된 IgG 전체 항체들의 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 서열구성을 하기 표 8에 나타낸다.
아미노산 서열 염기 서열
N3 HC 서열번호 89 서열번호 90
LC 서열번호 91 서열번호 92
N3-1 HC 서열번호 89 서열번호 90
LC 서열번호 107 서열번호 108
N3-3 HC 서열번호 89 서열번호 90
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-4 HC 서열번호 93 서열번호 94
LC 서열번호 107 서열번호 108
N3-5 HC 서열번호 93 서열번호 94
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-6 HC 서열번호 95 서열번호 96
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-7 HC 서열번호 97 서열번호 98
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-8 HC 서열번호 103 서열번호 104
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-9 HC 서열번호 101 서열번호 102
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-8-1 HC 서열번호 103 서열번호 104
LC 서열번호 111 서열번호 112
N3-8-2 HC 서열번호 103 서열번호 104
LC 서열번호 113 서열번호 114
N3-8-3 HC 서열번호 103 서열번호 104
LC 서열번호 115 서열번호 116
N3-8-4 HC 서열번호 105 서열번호 106
LC 서열번호 111 서열번호 112
N3-8-5 HC 서열번호 105 서열번호 106
LC 서열번호 113 서열번호 114
N3-8-6 HC 서열번호 105 서열번호 106
LC 서열번호 115 서열번호 116
N3-8-7 HC 서열번호 99 서열번호 100
LC 서열번호 111 서열번호 112
7-3. N3-8-1. N3-8-4 항체의 친화도 비교
상기 실시예 6에 기재된 바와 같이, KRS epitope peptide F4(EPKLSKNELKRRLKAEKKVAEKEAKQKE: 서열번호 117) 를 항원 epitope로 사용하여, Surface Plasmon Resonance(SPR)를 통해 N3-8-1, N3-8-4 항체와의 결합력을 분석하였다. SPR 실험은 상기 실시에 3-2와 동일한 방법으로 실시하였으며, epitope를 PBS 용액에 희석하여 15.7 nM-4000 nM 범위에서 2배수 희석하여 90초간 흘려주었다. 이후 2400초 동안 PBS를 흘려주었다. 얻어진 data는 Biacore T200 Evaluation 소프트웨어 v2.0 (GE Healthcare)으로 분석하였다.
그 결과 하기 표 9에 나타난 바와 같이, N3-8-1 항체의 KD가 가장 우수한 것으로 나타났다.
Peptide Ab Ka (1/Ms) Kd (1/s) KD (nM)
F4 N3-8-1 267900 0.000215 0.8025
N3-8-4 89480 0.00090 10.06
실시예 8: 항체의 기전 확인
항체 (Ab)에 형광 probe를 conjugation 하여 4T1 breast cancer cell에 처리 후 세포막의 Anti-KRS 항체 (N3, N3-8)가 엔도사이토시스(endocytosis)되는 것을 확인하였다.
Alexa fluor 488 (Thermofisher) 형광 probe로 표지된 anti-KRS 항체 (N3, N3-8)와 대조군인 Mock IgG(Thermofisher) 1 μM을 처리하였고, 4시간 후에 항체의 이동을 모니터링하였다. 이 때, 엔도사이토시스 여부를 확인하기 위하여 lysosome 마커로서 Lysotracker(Thermofisher)를 사용하였으며, DAPI는 세포 핵 염색을 나타낸다. Mock과는 달리 N3 및 N3-8 항체는 4시간째에 세포 내에 존재함을 확인할 수 있다.
그 결과 도 10에 나타난 바와 같이, anti-KRS 항체가 세포막 KRS를 인식하여 빠르게 엔도사이토시스되며, 이를 통해 세포막 KRS 수준을 낮추는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 9: ADCC / CDC 기능을 제거한 항체의 서열 정제
9-1. ADCC / CDC 기능을 제거한 항체 서열의 돌연변이 제작
상기 항체에서 ADCC/CDC 기능을 제거하기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 상기 각 항체 서열에서, 중쇄(heavy chain)의 constant region에 ADCC/CDC 기능을 하는 것으로 예상되는 부분에 돌연변이를 도입하였다. 각 항체의 ADCC/CDC 기능을 낮추기 위하여 IgG1을 사용하여 항체를 제작하였고, 상기 항체의 중쇄서열(HC)에 변이가 도입된 5종의 추가 중쇄 서열을 얻을 수 있었다. 또한, IgG4가 도입된 추가 중쇄 서열과 IgG4에 변이가 도입된 추가 중쇄 서열을 얻을 수 있었다. 이에, 각 항체에서 ADCC/CDC 기능이 제거된 돌연변이 항체 서열을 각각 하기 표 10에 나타내었다.
아미노산 서열 염기 서열
N3 HC IgG1 서열번호 89 서열번호 90
IgG1 mutant TA 서열번호 140 서열번호 141
IgG1 mutant LALA 서열번호 142 서열번호 143
IgG1 mutant LALATA 서열번호 144 서열번호 145
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 146 서열번호 147
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 148 서열번호 149
IgG4 서열번호 150 서열번호 151
IgG4 mutant TA 서열번호 152 서열번호 153
LC 서열번호 91 서열번호 92
N3-1 HC IgG1 서열번호 89 서열번호 90
IgG1 mutant TA 서열번호 140 서열번호 141
IgG1 mutant LALA 서열번호 142 서열번호 143
IgG1 mutant LALATA 서열번호 144 서열번호 145
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 146 서열번호 147
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 148 서열번호 149
IgG4 서열번호 150 서열번호 151
IgG4 mutant TA 서열번호 152 서열번호 153
LC 서열번호 107 서열번호 108
N3-3 HC IgG1 서열번호 89 서열번호 90
IgG1 mutant TA 서열번호 140 서열번호 141
IgG1 mutant LALA 서열번호 142 서열번호 143
IgG1 mutant LALATA 서열번호 144 서열번호 145
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 146 서열번호 147
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 148 서열번호 149
IgG4 서열번호 150 서열번호 151
IgG4 mutant TA 서열번호 152 서열번호 153
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-4 HC IgG1 서열번호 93 서열번호 94
IgG1 mutant TA 서열번호 154 서열번호 155
IgG1 mutant LALA 서열번호 156 서열번호 157
IgG1 mutant LALATA 서열번호 158 서열번호 159
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 160 서열번호 161
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 162 서열번호 163
IgG4 서열번호 164 서열번호 165
IgG4 mutant TA 서열번호 166 서열번호 167
LC 서열번호 107 서열번호 108
N3-5 HC IgG1 서열번호 93 서열번호 94
IgG1 mutant TA 서열번호 154 서열번호 155
IgG1 mutant LALA 서열번호 156 서열번호 157
IgG1 mutant LALATA 서열번호 158 서열번호 159
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 160 서열번호 161
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 162 서열번호 163
IgG4 서열번호 164 서열번호 165
IgG4 mutant TA 서열번호 166 서열번호 167
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-6 HC IgG1 서열번호 95 서열번호 96
IgG1 mutant TA 서열번호 168 서열번호 169
IgG1 mutant LALA 서열번호 170 서열번호 171
IgG1 mutant LALATA 서열번호 172 서열번호 173
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 174 서열번호 175
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 176 서열번호 177
IgG4 서열번호 178 서열번호 179
IgG4 mutant TA 서열번호 180 서열번호 181
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-7 HC IgG1 서열번호 97 서열번호 98
IgG1 mutant TA 서열번호 182 서열번호 183
IgG1 mutant LALA 서열번호 184 서열번호 185
IgG1 mutant LALATA 서열번호 186 서열번호 187
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 188 서열번호 189
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 190 서열번호 191
IgG4 서열번호 192 서열번호 193
IgG4 mutant TA 서열번호 194 서열번호 195
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-8 HC IgG1 서열번호 103 서열번호 104
IgG1 mutant TA 서열번호 224 서열번호 225
IgG1 mutant LALA 서열번호 226 서열번호 227
IgG1 mutant LALATA 서열번호 228 서열번호 229
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 230 서열번호 231
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 232 서열번호 233
IgG4 서열번호 234 서열번호 235
IgG4 mutant TA 서열번호 236 서열번호 237
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-9 HC IgG1 서열번호 101 서열번호 102
IgG1 mutant TA 서열번호 210 서열번호 211
IgG1 mutant LALA 서열번호 212 서열번호 213
IgG1 mutant LALATA 서열번호 214 서열번호 215
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 216 서열번호 217
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 218 서열번호 219
IgG4 서열번호 220 서열번호 221
IgG4 mutant TA 서열번호 222 서열번호 223
LC 서열번호 109 서열번호 110
N3-8-1 HC IgG1 서열번호 103 서열번호 104
IgG1 mutant TA 서열번호 224 서열번호 225
IgG1 mutant LALA 서열번호 226 서열번호 227
IgG1 mutant LALATA 서열번호 228 서열번호 229
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 230 서열번호 231
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 232 서열번호 233
IgG4 서열번호 234 서열번호 235
IgG4 mutant TA 서열번호 236 서열번호 237
LC 서열번호 111 서열번호 112
N3-8-2 HC IgG1 서열번호 103 서열번호 104
IgG1 mutant TA 서열번호 224 서열번호 225
IgG1 mutant LALA 서열번호 226 서열번호 227
IgG1 mutant LALATA 서열번호 228 서열번호 229
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 230 서열번호 231
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 232 서열번호 233
IgG4 서열번호 234 서열번호 235
IgG4 mutant TA 서열번호 236 서열번호 237
LC 서열번호 113 서열번호 114
N3-8-3 HC IgG1 서열번호 103 서열번호 104
IgG1 mutant TA 서열번호 224 서열번호 225
IgG1 mutant LALA 서열번호 226 서열번호 227
IgG1 mutant LALATA 서열번호 228 서열번호 229
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 230 서열번호 231
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 232 서열번호 233
IgG4 서열번호 234 서열번호 235
IgG4 mutant TA 서열번호 236 서열번호 237
LC 서열번호 115 서열번호 116
N3-8-4 HC IgG1 서열번호 105 서열번호 106
IgG1 mutant TA 서열번호 238 서열번호 239
IgG1 mutant LALA 서열번호 240 서열번호 241
IgG1 mutant LALATA 서열번호 242 서열번호 243
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 244 서열번호 245
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 246 서열번호 247
IgG4 서열번호 248 서열번호 249
IgG4 mutant TA 서열번호 250 서열번호 251
LC 서열번호 111 서열번호 112
N3-8-5 HC IgG1 서열번호 105 서열번호 106
IgG1 mutant TA 서열번호 238 서열번호 239
IgG1 mutant LALA 서열번호 240 서열번호 241
IgG1 mutant LALATA 서열번호 242 서열번호 243
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 244 서열번호 245
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 246 서열번호 247
IgG4 서열번호 248 서열번호 249
IgG4 mutant TA 서열번호 250 서열번호 251
LC 서열번호 113 서열번호 114
N3-8-6 HC IgG1 서열번호 105 서열번호 106
IgG1 mutant TA 서열번호 238 서열번호 239
IgG1 mutant LALA 서열번호 240 서열번호 241
IgG1 mutant LALATA 서열번호 242 서열번호 243
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 244 서열번호 245
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 246 서열번호 247
IgG4 서열번호 248 서열번호 249
IgG4 mutant TA 서열번호 250 서열번호 251
LC 서열번호 115 서열번호 116
N3-8-7 HC IgG1 서열번호 99 서열번호 100
IgG1 mutant TA 서열번호 196 서열번호 197
IgG1 mutant LALA 서열번호 198 서열번호 199
IgG1 mutant LALATA 서열번호 200 서열번호 201
IgG1 mutant LALAPG 서열번호 202 서열번호 203
IgG1 mutant LALAPGTA 서열번호 204 서열번호 205
IgG4 서열번호 206 서열번호 207
IgG4 mutant TA 서열번호 208 서열번호 209
LC 서열번호 111 서열번호 112
9-2. ADCC / CDC 기능을 제거한 돌연변이 항체의 정제
상기 실시예 9-1에서 수득한 ADCC/CDC 기능을 제거한 돌연변이 항체들 중 N3-8-1 항체의 ADCC/CDC 기능을 제거한 돌연변이 항체를 발현하는 벡터를 일시적 트랜스펙션(transient transfection)을 이용하여 단백질을 발현 및 정제하였다.
상기 실시예 7-2에 기재된 방법에 따라 진탕 플라스크에서, HEK293-F 세포(Invitrogen) 트랜스펙션하였다. 그 다음 HEK293-F 세포를 2 X 106 세포/ml의 밀도로 배지에 파종하여, 150 rpm, 8% CO2, 37℃에서 배양하였다.
각각의 단일클론항체를 생산하기 위해 알맞은 중쇄와 경쇄 플라스미드를 10ml FreeStyle 293 발현 배지(Invitrogen)에 중쇄:경쇄 DNA 1:1, 혹은 1:2의 비율로 transfection 하였다. 1:1의 경우 중쇄 125μg, 경쇄 125μg 총 250μg(2.5 μg/ml)으로 희석하여, PEI 750μg (7.5 μg/ml)을 희석한 10ml의 배지와 혼합하여 실온에서 10분 동안 반응시켰다. 1:2의 경우 경쇄 DNA의 농도를 2배로 하였다. 그 후, 반응시킨 혼합배지를 앞서 100 ml로 파종한 세포에 넣어 4시간 동안 150 rpm, 8% CO2, 37℃에서 배양 후, 나머지 100 ml의 FreeStyle 293 발현 배지를 추가하여 6일 동안 배양하였다.
그 다음, 세포배양액을 50ml tubes에 옮겨 3000rpm 에서 5 분간 원심분리를 실시하였다. 이후 채취한 세포 배양 상등액으로부터 단백질을 정제하였다. 단백질 A 세파로오스 컬럼(Protein A Sepharose column)에 항체를 적용하고 PBS(pH 7.4)로 세척하였다. 0.1 M 글라이신 완충액을 이용하여 pH 3.0에서 항체를 용리한 후, 1M Tris 완충액을 이용하여 샘플을 즉시 중화하였다. 용리한 항체 분획은 투석방법을 통해 PBS(pH 7.4)로 완충액을 교환하며 농축하였다. 정제된 단백질은 280nm 파장에서 흡광도와 흡광계수를 이용하여 정량하였다.
또한, 상기 정제한 항체의 Purity를 측정하였고, Protein thermal shift Dye kit(Thermofisher)를 이용하여 Quant Studio 3 Real-time PCR 장비(Thermofisher)로 4번 반복 수행하였다.
그 결과 하기 표 11에서 보이는 바와 같이, 테스트한 모든 N3-8-1 항체 돌연변이의 수율이 wild type과 유사하거나 높은 수율을 나타냈으며, 이 중 LALAPGTA 돌연변이의 수율(yield)이 가장 높은 것으로 나타났다. 또한 모든 N3-8-1 항체 돌연변이는 wild type 항체와 유사한 수준으로 높은 순도를 나타냈다.
이를 통해 N3-8-1의 ADCC/CDC 기능을 제거한 항체들이 N3-8-1 항체에 비해 수율이 유사하거나 더 높으며, 유사한 순도를 갖는 것을 확인하였다.
항체 Yield (mg/ml) Purity (%)
N3-8-1 wild type 78.72 99.47
mutant LALA 70.7 99.87
mutant LALAPG 73.78 99.86
mutant LALATA 77.7 99.91
mutant LALAPGTA 146.37 99.9
실시예 10: KRS -N term 특이적 결합 항체의 면역세포 이동 관련 질환 in vivo 모델에서 효능 확인_ in vivo 폐동맥 고혈압 모델
KRS-N 말단에 특이적으로 결합하는 항체를 처리하면 세포막 위치에서의 KRS 수준이 감소(엔도사이토시스 등을 통해)되는 것을 통해 면역세포 이동/침윤이 저해되어, 결과적으로 세포막 KRS 수준 감소 효과를 가지는 것으로 볼 수 있다. 따라서 본 발명의 KRS N-term 특이적 항체(대표적으로 N3 항체)는 면역세포 이동 관련 질환에 대하여 치료효과를 보일 것임은 자명한 것으로 사료되며, 이는 후술되는 실시예들을 통해 더욱 증명되었다.
실험방법
1) 폐동맥 고혈압(PAH) 모델 제작 및 시험물질 투여
7주령 SD rat(오리엔트바이오)에 PAH를 유도하기 위하여 MCT(monocrotaline) 60 mpk를 피하주사하였다. 이후 4개의 군으로 나누고(각 군당 5마리로 실험), 각각 Mock human IgG(Thermo Fisher Scientific, 음성 대조군) 1mpk, N3 IgG 항체 1mpk, N3 IgG 항체 10mpk, sildenafil(양성 대조군) 25 mpk를 3주간 투여하였다. 모든 항체는 주 2회 iv 주사하였고 sildenafil은 매일 경구투여하였다.
2) 혈류 및 혈압 측정
3주 후 rat를 isoflurane으로 마취하고, 동물용 초정밀공압측정시스템(MPVS Cardiovascular Pressure and Volume system, 모델명: MPVS Ultra, 제조사명: Millar Instruments)을 이용하여 혈류와 압력을 측정하였다. 우심실 수축기압 (RVESP) 및 이완기압, 좌심실 수축기압 및 이완기압은 전용 카테터(Mikro-Tip　rat pressure catheter,제조사명: Millar Instruments)를 이용하여 측정하였다. 심박출량은 혈관주위(perivascular) 혈류 탐침자(Transonic　Flowprobes,제조사명: Millar Instruments)를 이용하여 측정하였으며, 이에 대한 실험기법은 하기 문헌에 기재된 것과 동일한 방법으로 수행되었다:Pacher P, Nagayama T, Mukhopadhyay P, Batkai S, Kass DA. Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats. Nat Protoc 2008;3(9):1422-34.
3) 면역조직화학염색(immunohistochemistry, IHC)
채취한 폐를 통상적인 과정에 따라 PFA(paraformaldehyde)에 고정시킨 후 수세, 탈수, 투명 과정을 거쳐 파라핀 침투시켜 포매하였다. Rat의 폐조직 파라핀 블록을 3μm 두께로 박절하고 슬라이드를 제작하였다. 그 후 다음과 같이 염색을 수행하였다. 먼저 5분간 3회 xylene 처리 후, 100 % 에탄올, 95 % 에탄올, 90 % 에탄올, 70 % 에탄올, DW 순으로 2분 간 처리하고 PBS로 5분간 washing하였다. 0.3 % H2O2의 처리 후, 샘플을 PBS로 5분 동안 2회 washing하였다. 0.01M citrate buffer에 담가 가열 후, PBS-T(0.03 % tween 20)로 세척하였다. 이후 30분간 실온에서 blocking(2 % BSA & 2 % goat serum in PBS)하였다. 항-CD68 항체(1 : 200, ED1 clone, Abcam)로 4℃에서 overnight 염색하였다. PBS-T로 5분간 3회 세척한 후, polymer-HRP anti-mouse envision kit(DAKO)로 4℃에서 1 시간 처리하였다. PBS-T로 3회 세척한 후, DAB substrate buffer 및 DAB chromogen 20을 처리하여 발색시켰다. 염색된 조직을 1 분간 Mayer's hematoxylin(Sigma)으로 처리 한 다음, 70% 에탄올, 90% 에탄올, 95% 에탄올, 100% 에탄올 순서로 각각 2분간 2회 처리하였다. 마지막으로 5분간 3회 xylene 처리한 후 광학현미경으로 관찰하였다.
실험결과
10-1. 혈압 및 심박출량 변화 확인
면역세포의 침윤이 병리현상과 깊이 관계된 질환인 PAH 모델에, N3 단클론 항체를 1mpk 또는 10 mpk로 3주간 처리한 뒤(iv, 주 2회), 우심실 수축기말 압력 (right ventricular end-systolic pressure; RVESP), 우심실 이완기말 압력 (right ventricular end-diastolic pressure; RVEDP), 좌심실 수축기말 압력 (left ventricular end-systolic pressure; LVESP) 좌심실 이완기말 압력 압력 (left ventricular end-diastolic pressure; LVEDP) 및 심박출량 (cardiac output; CO)을 측정하였으며, 그 결과를 표 12에 나타낸다.
MCT + Mock IgG
(n = 4)		 MCT
+ N3 Ab 1mpk
(n = 5)		 MCT
+ N3 Ab 10mpk
(n = 5)		 MCT + Sildenafil
(n = 5)
RVESP (mmHg) 62.5 ± 5.7 45.0 ± 8.1 41.2 ± 7.7 48.4 ± 9.6
RVEDP (mmHg) 2.8 ± 1.5 1.4 ± 2.2 3.8 ± 1.3 2.6 ± 1.3
LVESP (mmHg) 81.5 ± 11.4 95.8 ± 4.8 93.4 ± 11.3 83.2 ± 4.7
LVEDP (mmHg) 1.0 ± 0.8 2.6 ± 1.9 4.6 ± 3.9 3.6 ± 2.3
CO (ml/min) 58 ± 4.7
(n = 4)		 74.0 ± 10.9
(n = 5)		 59.8 ± 12.9
(n = 5)		 49.6 ± 17.7
(n = 4)
(MCT +mock IgG 처리군 1마리는 마취사. Sildenafil 처리군 1마리는 수술 중 사망하여 CO 측정하지 못함).
폐동맥 고혈압은 폐동맥이 좁아짐으로 인하여 우심실 압력이 상승하며, 결과적으로 우심실 부전을 초래한다. 또한 지속적인 고혈압으로 그 보상 기전이 파괴되면 우심실 비대에 이어 우심실 확장이 일어나게 된다. 이는 심실중격의 이동으로 인한 좌심실의 압박을 가져오게 되고 좌심실의 확장기말 용적 및 심박출량의 감소를 가져오게 된다(이우석 et al., 중증 폐동맥 고혈압 환자의 임상적 특징과 예후 예측 인자, Korean Circulation J 2007;37 :265-270). 결과적으로 폐동맥 고혈압은 주로 우심실과 관계되지만 좌심실의 기능과도 연관된다.
PAH 환자에서는 RVESP가 증가되며 이는 본 실험의 PAH 동물 모델에서도 확인되었다. 이에 대하여 도 11에서 보는 바와 같이, N3 항체(KRS-N term 특이적 결합 항체)는 두 농도 모두에서 유의적으로 RVESP를 감소시켰으며, 특히 양성대조군 약물인 Sildenafil 보다 우수하게 RVESP를 감소시켰다.
또한 N3 항체(KRS-N term 특이적 결합 항체) 투여에 따른 좌심실 수축기말 압력(LVESP) 감소는 관찰되지 않았으며, 오히려 본 발명의 항체를 투여한 군에서는 도 13에서 보는 바와 같이 LVESP가 유의하게 증가되는 결과를 보였다. 이는 기존 폐동맥 고혈압의 치료제로 사용되고 있는 Sildenafil의 경우 폐동맥의 확장뿐만 아니라, 전신동맥의 확장도 유발하여 전신 혈압(systemic blood pressure)을 저하시킬 위험이 있는 것과 대비되는 것이다. 즉, 본 발명의 N3 항체는 Sildenafil과 비교하여 전신 동맥압(systemic artery pressure)에 미치는 영향이 낮은 경향성을 보이는 것을 확인하였으며, 이러한 효과는 임상현장에서 Sildenafil 투여 시 저혈압 발생 위험을 염려하는 상황이 있음을 고려하였을 때, 치료약제의 유리한 특성이 될 것으로 사료되었다. 뿐만아니라, 폐동맥고혈압이 심한 경우 수축기 우심실 부전(systolic RV failure)이 발생함에 따라, 낮은 심박출량(cardiac output) 및 전신 저혈압(systemic hypotension)이 동반될 수 있다. 이에 대하여 본 발명의 N3 항체에 의한 폐동맥고혈압을 호전시키는 치료에 의해 심박출량(cardiac output)과 전신 혈압(systemic blood pressure)이 상승되어 혈압이 정상화되는 효과가 예상된다.
종합하여, 이로서 본 발명의 KRS N-term 결합 항체(특히, N3 항체)의 투여는 기존 치료 약물의 부작용 가능성을 개선하며, PAH 증상완화 및 치료 효과를 보임을 확인하였다.
10-2. 심초음파 검사(Echocardiography)
우심실의 압력 과부하를 시사하는 D-shaped left ventricle 소견은 MCT 단독 투여 군(즉, 실험물질 비투여 PAH 모델)에서 3마리, MCT + Sildenafil 투여한 군의 3마리에서 각각 관찰되었으며, 치료항체(N3 항체)를 투여한 군에서는 관찰되지 않았다.
뿐만 아니라 하기 표 13에서 보는 바와 같이, 각 군의 체중은 비슷한 정도로 증가하였으며 유의적 차이가 없었다. 즉, 치료항체 투여를 통한 비정상적 몸무게 감소를 비롯한 이상 징후를 시사하는 소견은 관찰되지 않았다.
MCT + Mock IgG
(n = 4)		 MCT + Ab 1 mpk
(n = 5)		 MCT + Ab 10 mpk
(n = 5)		 MCT + Sildenafil
(n = 5)
Absolute change (g) 101.4 ± 14.2 113.5 ± 14.6 104.1 ± 12.3 104.1 ± 26.4
Relative change (%) 48.8 ± 7.8 43.6 ± 5.2 40.7 ± 5.0 49.8 ± 10.5
10-3. 단핵구/대식세포 이동 및 침윤 정도 확인
각 실험군의 폐 조직을 이용하여 단핵구/대식세포 마커인 CD68에 대한 IHC 염색을 수행하였다. 실험 결과 도 12에서 보는 바와 같이, 본 발명의 N3 항체(KRS N-term 결합 항체) 처리군은 단핵구/대식세포의 폐 조직 침윤을 명확하게 감소시켰음을 확인하였으며, 이러한 효과는 sildenafil 보다 현저히 우수함을 확인하였다.
실시예 11: KRS -N term 특이적 결합 항체의 면역세포 이동 관련 질환 in vivo 모델에서 효능 확인_급성 폐손상 모델
실험방법
1) LPS 유도 급성 폐손상 모델 제작 및 시험물질 투여
급성 폐손상 모델은 7주령 수컷 C57BL/6 마우스(두열바이오)에 LPS(Sigma) 2.5 mg/kg을 기관 내 주입하는 방식으로 제작되었다.
KRS 저해제의 급성 폐손상에 대한 효과를 알아보기 위하여, 먼저 C57BL/6 마우스에 N3 IgG 항체를 각각 1mg/kg 또는 10 mg/kg씩 IV 주입하고, 24시간 후 LPS 2.5 mg/kg을 기관내 주입하였다. 상기 LPS 주입 후 24시간 째에, 각 마우스들을 희생시켜 폐조직 및 BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)를 수집하고 분석하였다.
2) BALF(Bronchoalveolar lavage fluid) 내 면역세포 수 측정
PBS로 폐를 세척하여 얻어진 BALF를 모아 800 x g에서 10 분간 4℃에서 원심하여 pellet을 수거하였다. 세포를 부유시킨 후 RBC lysis buffer(eBioscience cat.no.00-4333-57)를 이용해 red blood cell 제거하였다. 이후 PBS로 반응을 멈추고 2번 washing 한 뒤, 400 μl PBS에 부유시켜 hemocytometer로 세포수를 측정하고 Hema3 염색을 통해 neutrophil 수를 측정하였다.
3) 폐조직 내 면역세포에 대한 FACS
폐 조직을 수거하여 gentleMACS Octo Dissociator(MACS Miltenyi Biotec, Order no.130-095-937) 장비를 이용해 37℃에서 45 분간 rotation하여 조직을 으깼다. Cell strainer(40μm)를 이용해 filter한 뒤 1500 rpm에서 5분간 실온에서 원심분리를 수행하였다. Pellet을 수거하여 RBC lysis buffer(eBioscience cat.no.00-4333-57)를 이용해 red blood cell 제거하였다. 세포를 수거하여 FACS buffer (NaN3 1% 및 FBS 3%가 포함된 PBS)에 부유한 뒤 50μl를 tube에 담고, 동량의 항체 mxiture와 잘 혼합하여 4℃에서 1시간 동안 빛을 차단하여 염색하였다. 폐로 이동하는 IM (interstitial macrophage) 분석을 위해, FITC Rat Anti-CD11b (BD Pharmingen) 과 PE Rat Anti-Mouse F4/80 (BD Pharmingen) 항체를 사용하였다. FACS buffer를 이용하여 400 x g에서 5분간 2번 washing 한 뒤, Navios Flow Cytometer(Beckman) 장비로 분석하였다.
4) 폐 조직에 대한 masson's trichrome 염색
폐 조직을 통상적인 방법으로 파라핀 포매한 후, 박절하였다. 그 후 xylene을 이용하여 파라핀을 제거한 조직 슬라이드를 DW로 washing한 뒤, 56-60℃의 Bouin Fluid에 1시간 처리하였다. Weigert’s iron hematoxylin solution으로 10분 염색하였고, 그 후 washing하고, 다시 Biebrich scarlet-acid fuchsin solution으로 10-15분 염색한 뒤 washing하였다. Phosphomolybdic-phosphotungstic acid solution을 10-15 분간 처리하고, aniline blue solution으로 옮겨 5-10 분간 염색하였다. Washing 후 1% acetic acid solution에 2-5 분간 처리하였다. Washing 및 dehydration 이후 xylene 처리하여 mounting 하였다.
실험결과
11-1. BALF(Bronchoalveolar lavage fluid) 내 면역세포 이동 억제 효과 확인
도 13에서 보는 바와 같이 LPS 처리에 의하여 급성 폐손상을 유발한 마우스에서는 BALF 내 총(total) 면역세포수가 증가된 것을 확인하였으며, 이는 N3 항체(KRS N-term 결합 항체) 처리에 의하여 농도의존적으로 감소하였다.
특히, 도 14에서 보는 바와 같이, LPS 처리로 급성 폐손상을 유발한 마우스에서 호중구(neutrophil)가 많이 증가된 것이 확인되었고, N3 항체(KRS N-term 결합 항체) 처리는 이러한 호중구 수치를 감소시켰다. 이로서 KRS N-term에 특이적으로 결합하는 항체 처리에 의해 BALF 내 면역세포, 특히 neutrophil의 폐로의 침윤이 현저히 억제됨을 확인하였다.
11-2. 폐 조직 내 면역세포 이동 억제 효과 확인
도 15 및 도 16은 급성 폐손상에 의하여 폐 조직으로 이동해온 대식세포를 FACS로 분석한 결과를 나타낸다. IM(interstitial macrophage)은 CD11b+/F4/80+ 세포로서, 폐에 상주하지는 않고 특정 상황에서 폐로 이동해 오는 대식세포(migrating macrophages)이다. LPS 처리에 의해 IM의 폐로의 침윤이 증가하였으나, N3 항체 처리는 농도 의존적으로 IM의 폐로의 이동을 감소시켰다. 이를 통해 KRS N-term에 특이적으로 결합하는 항체(대표적으로, N3 항체) 처리에 의해 대식세포/단핵구 등 면역세포의 폐 조직으로의 이동 및 침윤이 억제되는 것을 확인하였다.
상기 대식세포/단핵구 등 면역세포의 과도한 폐 조직으로의 이동 및 침윤은 조직 섬유화 질환에 있어서 중요한 병리 현상이다. 상기 급성 폐손상 모델에 대하여 폐조직을 Masson's trichrome 염색하여 관찰한 결과(도 17) 폐 조직 내의 섬유화가 상당히 진행된 것을 확인하였으며, 이에 대하여 N3 항체(KRS N-term에 특이적으로 결합하는 항체)의 처리는 이러한 섬유화를 억제한 것을 확인하였다.
실시예 12: ADCC/CDC 기능을 제거한 돌연변이 항체의 면역세포 이동 분석
상기의 ADCC/CDC 기능을 제거한 돌연변이 항체가 면역세포 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 선행 문헌(Park, S. G. et al. Human lysyl-tRNA synthetase is secreted to trigger pro-inflammatory response, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 102, 6356-6361 (2005))에 기재된 방법에 따라 세포 이동 분석(migration assay)을 실시하였다.
폴리카보네이트 막(5.0μm 공극 사이즈, Costar)을 가진 트랜스웰 챔버로 측정하였다. 상기 트랜스 웰 챔버에 LN421을 2.5μg/ml의 농도로 하위 챔버에 넣어 주었다. 그 후 RAW264.7 세포를 각 웰당 5 x 104cells의 농도로 상위 챔버에 넣었다. 그 다음 각 항체를 10M 농도로 상기 챔버에 넣어준 다음 24시간 동안 배양하였다. 그 후, PBS로 2회 세척하고 70% MeOH(in PBS)를 처리하였다. 다시 PBS로 2회 세척하고 이동된 세포를 crystal violet(Sigma)으로 염색하여 건조시켰다. 그 다음 33% acetic acid(Merck)에 상위 챔버를 넣고 10분 동안 교반하였다. Crystal violet이 녹은 acetic acid solution을 96 웰 플레이트 옮겨 담고 microplate reader(Tecan)에서 흡광도 590 nm으로 측정하였다.
그 결과 도 18에서 나타난 바와 같이, N3-8, N3-8-1, N3-8-1 mutant LALA, N3-8-1 mutant LALATA, N3-8-1 mutant LALAPG, N3-8-1 mutant LALAPGTA 항체가 모두 아무것도 처리하지 않은 대조군(Control, C)과 유사한 수준으로 LN421에 의한 세포 이동을 저해하는 것으로 나타났다.
실시예 13. ADCC/CDC 기능을 제거한 돌연변이 항체의 암세포 이동 분석
상기의 ADCC/CDC 기능을 제거한 돌연변이 항체가 면역세포 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 실시예 12에 기재된 방법에 따라 세포 이동 분석(migration assay)를 실시하였다.
폴리카보네이트 막(8.0μm 공극 사이즈, Costar)를 가진 24-웰 트랜스웰 챔버로 측정하였다. 라미닌(laminin)을 하위 챔버에 1mg/ml 농도로 넣어주고, 인산화 KRS인 T52D KRS를 과발현하는 안정적인 MDA-MB-231 세포를 사용하여 세포 이동 분석(migration assay)을 수행하였다. T52D KRS 발현을 유도하기 위해 doxycycline (0.1μg/ml)을 하루 동안 처리한 T52D KRS-MDA-MB-231 안정적 세포를 무혈청(serum-free) RPMI 배지에 현탁한 다음 각 웰당 4×104 세포의 농도로 상위 챔버에 넣었다. 그 다음 N3-8, N3-8-1, N3-8-1 mutant LALA, N3-8-1 mutant LALATA, N3-8-1 mutant LALAPG, N3-8-1 mutant LALAPGTA 항체를 각각 10nM로 상기 챔버에 처리하여 7 시간 동안 배양하였다. 멤브레인(membrane) 위쪽에 존재하는 non-migrating 세포를 면봉으로 제거한 다음 PBS로 2회 세척하고, 70% MeOH(in PBS)를 30분 동안 처리하였다. 다시 PBS로 2회 세척하고, crystal violet(SIgma)을 이용하여 염색하고, 건조시켰다. 그 다음 33% 아세트산(acetic acid, Merck)에 상위 챔버를 넣고 교반하였다. Crystal violet이 녹은 acetic acid solution을 96 웰 플레이트 옮겨 담고 microplate reader(Tecan)에서 흡광도 590 nm으로 측정하였다.
그 결과 도 19에서 나타난 바와 같이, N3-8, N3-8-1, N3-8-1 mutant LALA, N3-8-1 mutant LALATA, N3-8-1 mutant LALAPG, N3-8-1 mutant LALAPGTA 항체가 모두 라미닌에 의한 암세포 이동을 저해하는 것으로 나타났다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 항체 또는 그 단편들은 본 명세서에 기재된 특정 CDR(상보성 결정부위) 서열을 가지며, 세포 외막에 노출되는 KRS N-말단 영역에 특이적 결합능력 및 친화도가 매우 우수하기 때문에, 암 또는 면역세포 이동 관련 질환과 같은 KRS의 특이적 행태를 수반하는 질병의 진단에 이용가능하며, 생산성 및 안정성이 우수하고, 암 전이 억제 효과가 뛰어나기 때문에 암 치료제, 암전이 예방 또는 억제제로서 유용하게 이용될 수 있으며, 면역세포 이동과 관련한 질환의 예방, 개선 및 치료 등에 있어서 매우 유용하게 사용될 수 있다.
<110> Medicinal Bioconvergence Research Center <120> Antibody specifically binding to the N-terminal region of lysyl- tRNA synthetase exposed at cell outer membrane <130> NP18-0060P <150> KR 10-2018-0111046 <151> 2018-09-17 <160> 251 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 amino acid <400> 1 Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 DNA <400> 2 agttatgata tgagc 15 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 amino acid <400> 3 Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 4 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 DNA <400> 4 gcgatctctt atgataatgg taatacatat tacgctgatt ctgtaaaagg t 51 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 amino acid <400> 5 Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr 1 5 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 DNA <400> 6 atggcgcttg atttcgacta c 21 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 amino acid <400> 7 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Thr 1 5 10 <210> 8 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 DNA <400> 8 actggctctt catctaatat tggcagtaat tatgtcacc 39 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 amino acid <400> 9 Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 DNA <400> 10 gataatagta atcggccaag c 21 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 amino acid <400> 11 Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 12 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 DNA <400> 12 gcttcttggg atgatagcct gagtgcttat gtc 33 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 mutant 1 amino acid <400> 13 Ala Ser Phe Ser Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 14 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 mutant 1 DNA <400> 14 gcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtc 33 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 mutant 2 amino acid <400> 15 Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 16 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 mutant 2 DNA <400> 16 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtc 33 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 1 amino acid <400> 17 Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 18 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 1 DNA <400> 18 gcgatctcgc cgcagatggg tcgggtgtat tacgctgatt ctgtaaaagg t 51 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 2 amino acid <400> 19 Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 20 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 2 DNA <400> 20 gcgatcgatc cgttgggggg taatatttat tacgctgatt ctgtaaaagg t 51 <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 3 amino acid <400> 21 Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 22 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 3 DNA <400> 22 gcgatctctc cgtattcggg taggatttat tacgctgatt ctgtaaaagg t 51 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 4 amino acid <400> 23 Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 4 DNA <400> 24 gcgatcgggg ctgatggggg tccgtcttat tacgctgatt ctgtaaaagg t 51 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 mutant 1 amino acid <400> 25 Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr 1 5 <210> 26 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 mutant 1 DNA <400> 26 ctggcgcttg atttcgacta c 21 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 mutant 1 amino acid <400> 27 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 28 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 mutant 1 DNA <400> 28 agtaataatc agcggccaag c 21 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 mutant 2 amino acid <400> 29 Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 30 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 mutant 2 DNA <400> 30 cggaataatc agcggccaag c 21 <210> 31 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH <400> 31 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 32 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH <400> 32 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 33 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL <400> 33 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 34 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL <400> 34 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gataatagta atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtgct tcttgggatg atagcctgag tgcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta 330 <210> 35 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 1 <400> 35 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 36 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 1 <400> 36 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 37 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 2 <400> 37 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 2 <400> 38 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 39 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 3 <400> 39 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 3 <400> 40 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 41 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 4 <400> 41 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 42 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 4 <400> 42 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 43 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 5 <400> 43 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 44 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 5 <400> 44 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 45 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 6 <400> 45 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 46 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 6 <400> 46 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 47 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 7 <400> 47 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 48 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VH mutant 7 <400> 48 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctca 348 <210> 49 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 1 <400> 49 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 50 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 1 <400> 50 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gataatagta atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtgct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta 330 <210> 51 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 2 <400> 51 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 52 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 2 <400> 52 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gataatagta atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgttct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta 330 <210> 53 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 3 <400> 53 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 54 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 3 <400> 54 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgttct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta 330 <210> 55 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 4 <400> 55 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 56 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 VL mutant 4 <400> 56 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat cggaataatc agcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgttct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta 330 <210> 57 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker for scFv <400> 57 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 58 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker for scFv <400> 58 ggtggaggcg gttcaggcgg aggtggatcc ggcggtggcg gatcg 45 <210> 59 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 scFv (VH+linker+VL) <400> 59 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp 210 215 220 Asp Ser Leu Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 60 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 scFv (VH+linker+VL) <400> 60 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cggtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 gcttcttggg atgatagcct gagtgcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 61 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-1 scFv (VH+linker+VL) <400> 61 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 62 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-1 scFv (VH+linker+VL) <400> 62 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 gcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 63 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-3 scFv (VH+linker+VL) <400> 63 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 64 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-3 scFv (VH+linker+VL) <400> 64 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 65 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-4 scFv (VH+linker+VL) <400> 65 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 66 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-4 scFv (VH+linker+VL) <400> 66 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 gcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 67 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-5 scFv (VH+linker+VL) <400> 67 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 68 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-5 scFv (VH+linker+VL) <400> 68 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 69 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-6 scFv (VH+linker+VL) <400> 69 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 70 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-6 scFv (VH+linker+VL) <400> 70 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 71 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-7 scFv (VH+linker+VL) <400> 71 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 72 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-7 scFv (VH+linker+VL) <400> 72 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 73 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-7 scFv (VH+linker+VL) <400> 73 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 74 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-7 scFv (VH+linker+VL) <400> 74 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 75 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-9 scFv (VH+linker+VL) <400> 75 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 76 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-9 scFv (VH+linker+VL) <400> 76 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 77 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8 scFv, N3-8-1 scFv (VH+linker+VL) <400> 77 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 78 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8 scFv, N3-8-1 scFv (VH+linker+VL) <400> 78 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 79 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-2 scFv (VH+linker+VL) <400> 79 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 80 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-2 scFv (VH+linker+VL) <400> 80 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatagtaata atcagcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 81 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-3 scFv (VH+linker+VL) <400> 81 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 82 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-3 scFv (VH+linker+VL) <400> 82 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatcggaata atcagcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 83 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-4 scFv (VH+linker+VL) <400> 83 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 84 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-4 scFv (VH+linker+VL) <400> 84 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatgataata gtaatcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 85 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-5 scFv (VH+linker+VL) <400> 85 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 86 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-5 scFv (VH+linker+VL) <400> 86 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatagtaata atcagcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 87 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-6 scFv (VH+linker+VL) <400> 87 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr 130 135 140 Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile 145 150 155 160 Gly Ser Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro 165 170 175 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp 180 185 190 Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser 195 200 205 Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser 210 215 220 Asp Glu Leu Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 225 230 235 240 Leu <210> 88 <211> 723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3-8-6 scFv (VH+linker+VL) <400> 88 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagg tggaggcggt 360 tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgga tcgcagtctg tgctgactca gccaccctca 420 gcgtctggga cccccgggca gagggtcacc atctcttgta ctggctcttc atctaatatt 480 ggcagtaatt atgtcacctg gtaccagcag ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc 540 tatcggaata atcagcggcc aagcggggtc cctgaccgat tctctggctc caagtctggc 600 acctcagcct ccctggccat cagtgggctc cagtccgagg atgaggctga ttattactgt 660 tcttctttta gtgatgagtt gggggcttat gtcttcggcg gaggcaccaa gctgacggtc 720 cta 723 <210> 89 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 IgG heavy chain <400> 89 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 90 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 IgG heavy chain <400> 90 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 91 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 IgG light chain <400> 91 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Thr 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 92 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> N3 IgG light chain <400> 92 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gataatagta atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtgct tcttgggatg atagcctgag tgcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 360 ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420 aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480 aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540 accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600 catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651 <210> 93 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1 <400> 93 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 94 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1 <400> 94 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 95 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2 <400> 95 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 96 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2 <400> 96 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 97 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3 <400> 97 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 98 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3 <400> 98 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 99 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4 <400> 99 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 100 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4 <400> 100 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 101 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5 <400> 101 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 102 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5 <400> 102 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 103 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6 <400> 103 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 104 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6 <400> 104 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 105 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7 <400> 105 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 106 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7 <400> 106 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 107 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 1 <400> 107 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Thr 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 108 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 1 <400> 108 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gataatagta atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgtgct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 360 ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420 aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480 aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540 accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600 catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651 <210> 109 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 2 <400> 109 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Thr 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 110 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 2 <400> 110 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gataatagta atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgttct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 360 ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 420 aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 480 aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 540 accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 600 catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 651 <210> 111 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 3 <400> 111 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 112 <211> 648 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 3 <400> 112 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat gataatagta atcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgttct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcacg 360 ctcttcccac cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420 agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480 gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540 tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600 catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgctct 648 <210> 113 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 4 <400> 113 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 114 <211> 648 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 4 <400> 114 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgttct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta agtcagccca aggctgcccc ctcggtcacg 360 ctcttcccac cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420 agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480 gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540 tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600 catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgctct 648 <210> 115 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 5 <400> 115 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Ser Asp Glu Leu 85 90 95 Gly Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 116 <211> 648 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG light chain 5 <400> 116 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgtactg gctcttcatc taatattggc agtaattatg tcacctggta ccagcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat cggaataatc agcggccaag cggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tccgaggatg aggctgatta ttactgttct tcttttagtg atgagttggg ggcttatgtc 300 ttcggcggag gcaccaagct gacggtccta ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcacg 360 ctcttcccac cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420 agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480 gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540 tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600 catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgctct 648 <210> 117 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KRS epitope F4 <400> 117 Glu Pro Lys Leu Ser Lys Asn Glu Leu Lys Arg Arg Leu Lys Ala Glu 1 5 10 15 Lys Lys Val Ala Glu Lys Glu Ala Lys Gln Lys Glu 20 25 <210> 118 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 5 amino acid <400> 118 Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 119 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 mutant 5 DNA <400> 119 gtgatctctt ctgatggtgg taatacatat tacgctgatt ctgtaaaagg t 51 <210> 120 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain constant region ver.1_amino acid <400> 120 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 121 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain constant region ver.1_DNA <400> 121 cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg t 321 <210> 122 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain constant region ver.2_amino acid <400> 122 Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 20 25 30 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 35 40 45 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 65 70 75 80 Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 123 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain constant region ver.2_DNA <400> 123 ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcacg ctcttcccac cctcctctga ggagcttcaa 60 gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg 120 gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa 180 caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag 240 tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg 300 gcccctacag aatgctct 318 <210> 124 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 wild type_amino acid <400> 124 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 125 <211> 990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 wild type_DNA <400> 125 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtataccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990 <210> 126 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 126 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 127 <211> 990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant TA_DNA <400> 127 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcgcctacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtataccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990 <210> 128 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 128 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 129 <211> 990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 129 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgccggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtataccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990 <210> 130 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 130 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 131 <211> 990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 131 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgccggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcgcctacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtataccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990 <210> 132 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 132 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 133 <211> 990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 133 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgccggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcggcgccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtataccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990 <210> 134 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 134 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 135 <211> 990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 135 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgccggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcgcctacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcggcgccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtataccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990 <210> 136 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG4 wild type_amino acid <400> 136 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 137 <211> 981 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG4 wild type_DNA <400> 137 gccagcacca agggcccttc cgtgtttccc ctggcccctt gctcccggtc cacatctgag 60 agcaccgccg ccctgggctg tctggtgaag gactacttcc cagagcccgt gaccgtgagc 120 tggaacagcg gcgccctgac aagcggcgtg cacacatttc ccgccgtgct gcagagctcc 180 ggcctgtact ccctgtctag cgtggtgaca gtgccttcct ctagcctggg caccaagaca 240 tatacctgta acgtggacca caagccaagc aataccaagg tggataagcg ggtggagtct 300 aagtacggcc ctccttgccc tagctgtcct gctccagagt ttctgggcgg cccttccgtg 360 ttcctgtttc cacccaaacc aaaggacaca ctgatgatct ctagaacacc agaggtgacc 420 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaggat cccgaggtgc agttcaactg gtacgtggat 480 ggcgtggagg tgcacaatgc caagaccaag ccaagagagg agcagtttaa ctctacatac 540 agggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tcaacggcaa ggagtataag 600 tgcaaggtgt ccaataaggg cctgccctcc tctatcgaga agacaatctc taaggctaag 660 ggccagccaa gagagcctca ggtgtacacc ctgcctccaa gccaggagga gatgacaaag 720 aaccaggtgt ccctgacatg tctggtgaag ggcttctatc cctccgacat cgccgtggag 780 tgggagtcta atggccagcc tgagaacaat tacaagacca caccccctgt gctggactct 840 gatggcagct tctttctgta ttccaggctg accgtggata agtctcggtg gcaggagggc 900 aacgtgttca gctgctctgt gatgcacgaa gccctgcata atcactatac tcagaaaagt 960 ctgtcactgt cactgggaaa g 981 <210> 138 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 138 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 139 <211> 981 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region(CH1, CH2, CH3)_IgG4 mutant TA_DNA <400> 139 gccagcacca agggcccttc cgtgtttccc ctggcccctt gctcccggtc cacatctgag 60 agcaccgccg ccctgggctg tctggtgaag gactacttcc cagagcccgt gaccgtgagc 120 tggaacagcg gcgccctgac aagcggcgtg cacacatttc ccgccgtgct gcagagctcc 180 ggcctgtact ccctgtctag cgtggtgaca gtgccttcct ctagcctggg caccaagaca 240 tatacctgta acgtggacca caagccaagc aataccaagg tggataagcg ggtggagtct 300 aagtacggcc ctccttgccc tagctgtcct gctccagagt ttctgggcgg cccttccgtg 360 ttcctgtttc cacccaaacc aaaggacaca ctgatgatct ctagaacacc agaggtgacc 420 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaggat cccgaggtgc agttcaactg gtacgtggat 480 ggcgtggagg tgcacaatgc caagaccaag ccaagagagg agcagtttaa ctctgcctac 540 agggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tcaacggcaa ggagtataag 600 tgcaaggtgt ccaataaggg cctgccctcc tctatcgaga agacaatctc taaggctaag 660 ggccagccaa gagagcctca ggtgtacacc ctgcctccaa gccaggagga gatgacaaag 720 aaccaggtgt ccctgacatg tctggtgaag ggcttctatc cctccgacat cgccgtggag 780 tgggagtcta atggccagcc tgagaacaat tacaagacca caccccctgt gctggactct 840 gatggcagct tctttctgta ttccaggctg accgtggata agtctcggtg gcaggagggc 900 aacgtgttca gctgctctgt gatgcacgaa gccctgcata atcactatac tcagaaaagt 960 ctgtcactgt cactgggaaa g 981 <210> 140 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 140 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 141 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant TA_DNA <400> 141 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 142 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 142 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 143 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 143 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 144 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 144 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 145 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 145 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 146 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 146 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 147 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 147 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 148 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 148 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 149 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 149 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 150 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG4 wild type_amino acid <400> 150 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 151 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG4 wild type_DNA <400> 151 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 152 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 152 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 153 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain_IgG4 mutant TA_DNA <400> 153 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttatg ataatggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 154 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 154 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 155 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant TA_DNA <400> 155 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 156 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 156 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 157 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 157 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 158 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 158 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 159 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 159 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 160 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 160 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 161 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 161 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 162 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 162 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 163 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 163 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 164 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG4 wild type_amino acid <400> 164 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 165 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG4 wild type_DNA <400> 165 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 166 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 166 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 167 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 1_IgG4 mutant TA_DNA <400> 167 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtg atctcttctg atggtggtaa tacatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 168 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 168 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 169 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant TA_DNA <400> 169 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 170 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 170 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 171 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 171 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 172 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 172 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 173 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 173 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 174 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 174 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 175 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 175 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 176 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 176 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 177 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 177 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 178 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG4 wild type_amino acid <400> 178 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 179 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG4 wild type_DNA <400> 179 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 180 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 180 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gln Met Gly Arg Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 181 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 2_IgG4 mutant TA_DNA <400> 181 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcgccgc agatgggtcg ggtgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 182 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 182 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 183 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant TA_DNA <400> 183 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 184 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 184 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 185 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 185 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 186 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 186 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 187 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 187 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 188 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 188 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 189 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 189 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 190 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 190 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 191 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 191 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 192 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG4 wild type_amino acid <400> 192 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 193 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG4 wild type_DNA <400> 193 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 194 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 194 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Pro Leu Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 195 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 3_IgG4 mutant TA_DNA <400> 195 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcgatccgt tggggggtaa tatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 196 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 196 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 197 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant TA_DNA <400> 197 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 198 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 198 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 199 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 199 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 200 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 200 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 201 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 201 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 202 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 202 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 203 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 203 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 204 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 204 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 205 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 205 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 206 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG4 wild type_amino acid <400> 206 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 207 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG4 wild type_DNA <400> 207 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 208 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 208 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 209 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 4_IgG4 mutant TA_DNA <400> 209 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactctgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 210 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 210 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 211 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant TA_DNA <400> 211 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 212 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 212 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 213 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 213 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 214 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 214 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 215 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 215 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 216 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 216 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 217 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 217 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 218 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 218 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 219 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 219 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 220 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG4 wild type_amino acid <400> 220 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 221 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG4 wild type_DNA <400> 221 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 222 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 222 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Asp Gly Gly Pro Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 223 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 5_IgG4 mutant TA_DNA <400> 223 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atcggggctg atgggggtcc gtcttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 224 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 224 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 225 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant TA_DNA <400> 225 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 226 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 226 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 227 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 227 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 228 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 228 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 229 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 229 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 230 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 230 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 231 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 231 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 232 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 232 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 233 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 233 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 234 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG4 wild type_amino acid <400> 234 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 235 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG4 wild type_DNA <400> 235 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 236 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 236 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Met Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 237 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 6_IgG4 mutant TA_DNA <400> 237 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaatggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 238 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant TA_amino acid <400> 238 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 239 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant TA_DNA <400> 239 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 240 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALA_amino acid <400> 240 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 241 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALA_DNA <400> 241 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 242 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALATA_amino acid <400> 242 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 243 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALATA_DNA <400> 243 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 244 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALAPG_amino acid <400> 244 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 245 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALAPG_DNA <400> 245 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 246 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALAPGTA_amino acid <400> 246 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 247 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG1 mutant LALAPGTA_DNA <400> 247 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cgcctaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cggcgccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 248 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG4 wild type_amino acid <400> 248 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 249 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG4 wild type_DNA <400> 249 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctacatacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329 <210> 250 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG4 mutant TA_amino acid <400> 250 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Leu Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Ala Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 251 <211> 1329 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG heavy chain 7_IgG4 mutant TA_DNA <400> 251 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctctccgt attcgggtag gatttattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagactggcg 300 cttgatttcg actactgggg ccagggtaca ctggtcaccg tgagctcagc cagcaccaag 360 ggcccttccg tgtttcccct ggccccttgc tcccggtcca catctgagag caccgccgcc 420 ctgggctgtc tggtgaagga ctacttccca gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc 480 gccctgacaa gcggcgtgca cacatttccc gccgtgctgc agagctccgg cctgtactcc 540 ctgtctagcg tggtgacagt gccttcctct agcctgggca ccaagacata tacctgtaac 600 gtggaccaca agccaagcaa taccaaggtg gataagcggg tggagtctaa gtacggccct 660 ccttgcccta gctgtcctgc tccagagttt ctgggcggcc cttccgtgtt cctgtttcca 720 cccaaaccaa aggacacact gatgatctct agaacaccag aggtgacctg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc aggaggatcc cgaggtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg 840 cacaatgcca agaccaagcc aagagaggag cagtttaact ctgcctacag ggtggtgagc 900 gtgctgaccg tgctgcacca ggattggctc aacggcaagg agtataagtg caaggtgtcc 960 aataagggcc tgccctcctc tatcgagaag acaatctcta aggctaaggg ccagccaaga 1020 gagcctcagg tgtacaccct gcctccaagc caggaggaga tgacaaagaa ccaggtgtcc 1080 ctgacatgtc tggtgaaggg cttctatccc tccgacatcg ccgtggagtg ggagtctaat 1140 ggccagcctg agaacaatta caagaccaca ccccctgtgc tggactctga tggcagcttc 1200 tttctgtatt ccaggctgac cgtggataag tctcggtggc aggagggcaa cgtgttcagc 1260 tgctctgtga tgcacgaagc cctgcataat cactatactc agaaaagtct gtcactgtca 1320 ctgggaaag 1329

Claims (21)

  1. (a) (ⅰ) 아미노산 서열 SYDMS를 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
    (ⅱ) 아미노산 서열 X1IX2X3X4X5GX6X7YYADSVKG를 포함하고, 여기서 X1은 A 또는 V이고, X2은 S, D 또는 G이고, X3는 Y, P, S 또는 A 이고, X4는 D, Q, L 또는 Y이고, X5는 N, M, S, 또는 G이고, X6는 N, R 또는 P이고, X7는 T, V, I 또는 S인 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
    (ⅲ) 아미노산 서열 X8ALDFDY를 포함하고, 여기서 X8은 M 또는 L인 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 중쇄가변영역(VH) 및
    (b) (ⅰ) 아미노산 서열 TGSSSNIGSNYVT를 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1);
    (ⅱ) 아미노산 서열 X9NX10X11RPS를 포함하고, 여기서 X9는 D, S 또는 R이고, X10은 S 또는 N이고, X11은 N 또는 Q인 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 및
    (ⅲ) 아미노산 서열 X12SFSDELGAYV를 포함하고, 여기서 X12은 A 또는 S인 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)를 포함하는 경쇄가변영역(VL)
    을 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편.
  2. 제1항에 있어서, (a) 중쇄가변영역(VH)은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1); 서열번호 3, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23 및 서열번호 118로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 서열번호 5 및 서열번호 25로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  3. 제1항에 있어서, (b) 경쇄가변영역(VL)은 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1); 서열번호 9, 서열번호 27 및 서열번호 29로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2); 서열번호 13 및 서열번호 15로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편은
    i) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    ii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    iii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 118로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 13으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    iv) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 118로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    ⅴ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    ⅵ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    ⅶ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    ⅷ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 23으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    ⅸ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    ⅹ) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    xi) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    xii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 27로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체; 또는
    xiii) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 21로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 25로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH) 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 1(CDR1), 서열번호 29로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 2(CDR2), 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정부위 3(CDR3)을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL)을 포함하는 항체;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  5. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편은
    서열번호 89, 서열번호 93, 서열번호 95, 서열번호 97, 서열번호 99, 서열번호 101, 서열번호 103 및 서열번호 105 로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC); 및
    서열번호 107, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 113 및 서열번호 115로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC);
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편은
    서열번호 89로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 107로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 89로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 93으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 107로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 93으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 95로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 97로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 99로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 101로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 103으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 103으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 103으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 115로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 113으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 105로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 115로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    서열번호 99로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 111로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    서열번호 103으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 109로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  7. 제1항에 있어서, 상기 항체는 IgG, IgA, IgM, IgE 및 IgD로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 단편은 디아바디, Fab, Fab', F(ab)2, F(ab')2, Fv 및 scFv로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  8. 제1항에 있어서, 상기 단편은 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67, 서열번호 69, 서열번호 71, 서열번호 73, 서열번호 75, 서열번호 77, 서열번호 79, 서열번호 81, 서열번호 83, 서열번호 85, 및 서열번호 87로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 항체 또는 그 단편을 암호화 하는 폴리뉴클레오티드.
  10. 제9항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 발현 벡터.
  11. 제10항의 재조합 발현 벡터로 형질전환된 세포.
  12. (a) 제11항의 재조합 발현 벡터로 숙주 세포를 형질전환하는 단계;
    (b) 형질전환된 숙주 세포를 배양하여 항체 또는 그 단편을 생산하는 단계; 및
    (c) 숙주 세포에서 생산된 항체 또는 그 단편을 수득하는 단계를 포함하는, 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소(KRS, Lysyl-tRNA synthetase) N-말단에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 단편을 제조하는 방법.
  13. 제1항의 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 및 암전이 예방 또는 억제용 약학적 조성물.
  14. 제1항의 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 또는 암전이 진단용 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 항체는 야생형 인간 IgG Fc 영역의 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩티드로서, 상기 Fc 변이체는 서열번호 126으로 표시되는 야생형 인간 IgG1 Fc 영역의 L117A, L118A, T182A, P212G 또는 서열번호 138로 표시되는 인간 IgG4 Fc 영역의 T179A인 하나 이상의 추가의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 폴리펩티드는 야생형 IgG Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드에 비해, ADCC/CDC 기능이 감소되는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
  16. 삭제
  17. 제1항의 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는, 심혈관 질환, 섬유화 질환, 염증성 질환 및 알포트 증후군(Alport syndrome) 으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 면역세포 이동 관련 질환의 진단용 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 심혈관 질환은 고혈압, 폐동맥 고혈압, 죽상동맥경화, 협심증, 심근경색증, 허혈성 뇌혈관질환, 세동맥 경화 및 중막 경화로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  19. 제17항에 있어서, 상기 섬유화 질환은 경피증 (scleroderma), 류마티스 관절염 (rheumatoid arthritis), 크론 병 (Crohn's disease), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 골수 섬유증 (myelofibrosis), 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 간 섬유증(hepathic fibrosis), 간경변증(liver cirrhosis), 신장 섬유증(kidney fibrosis), 사구체 경화증, 근섬유증(myofibrosis), 심장 섬유증, 간질성 섬유화증, 췌장 섬유화증, 비장 섬유화증, 종격막 섬유화증, 혈관 섬유화증, 피부 섬유화증, 눈 섬유화증, 황반 변성, 관절 섬유화증, 갑상선 섬유화증, 심내막심근 섬유화증, 복막 섬유화증, 복막후 섬유화증, 진행성 종괴성 섬유화증, 신원성 전신섬유화증, 전신성 홍반성 루푸스 (systemic lupus erythematosu), 유전성 섬유증, 감염성 섬유증, 자극성 섬유증, 만성 자가면역에 의한 섬유증, 장기이식시 항원부적합에 의한 섬유증, 외과수술의 섬유성 합병증, 고지혈증에 의한 섬유증, 비만에 의한 섬유증, 당뇨성 섬유증, 고혈압에 의한 섬유증 및 스텐트삽입시 섬유화로 인한 폐색으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  20. 제17항에 있어서, 상기 염증성 질환은 자가 면역 질환, 염증성 장 질환, 피부염, 아토피성 피부염, 습진, 건선증, 당뇨성 안질환, 당뇨병성 망막증, 복막염, 골수염, 봉소염, 뇌막염, 뇌염, 췌장염, 외상 유발 쇼크, 기관지 천식, 비염, 부비동염, 중이염, 폐렴, 위염, 장염, 낭포성 섬유증, 졸중, 기관지염, 세기관지염, 간염, 간경변, 무알콜성 지방간염 (non-alcoholic steatohepatitis), 신장염, 단백뇨증, 당뇨병성 신부전증, 관절염, 건선성 관절염, 신경염, 당뇨병성 신경병증, 다발성 경화증, 통풍, 척추염, 라이터 증후군, 결절성 다발동맥염, 혈관염, 루게릭병, 베게너 육아종증, 과사이토카인 혈증(hypercytokinemia), 류마티스성 다발성근육통, 관절 세포 동맥염, 칼슘 결정 침착 관절병증, 가성 통풍, 비-관절 류마티즘, 점액낭염, 건초염, 상과염, 신경병증성 관절 질환(Charcot's joint), 출혈성관절증(hemarthrosis), 헤노흐-쉔라인 자반병, 비후성 골관절병증, 다중심성 세망조직구종, 수르코일로시스(surcoilosis), 혈색소증, 겸상 적혈구증, 고지단백혈증, 저감마글로불린혈증, 부갑상선기능항진증, 말단거대증, 가족성 지중해열, 베하트 병, 전신성 홍반성 루푸스, 재귀열, 건선, 다발성 경화증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 급성 호흡곤란 증후군, 다발성 장기부전, 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease), 급성 폐손상(acute lung injury) 및 기관지 폐 형성장애(broncho-pulmonary dysplasia)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 상기 자가면역질환은 류마티스성 관절염, 전신성 경피증, 전신 홍반성 낭창, 건선, 천식, 궤양성 대장염, 베체씨병, 크론씨병, 다발성 경화증, 피부근염, 교원병, 혈관염, 관절염, 육아종증, 장기 특이적 자가면역병변, 궤양성 대장염 및 이식편대 숙주 질환으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
KR1020190114210A 2018-09-17 2019-09-17 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체 KR102290507B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180111046 2018-09-17
KR20180111046 2018-09-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200032019A KR20200032019A (ko) 2020-03-25
KR102290507B1 true KR102290507B1 (ko) 2021-08-17

Family

ID=69887585

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190114210A KR102290507B1 (ko) 2018-09-17 2019-09-17 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20220049016A1 (ko)
EP (1) EP3882272A4 (ko)
JP (1) JP7453694B2 (ko)
KR (1) KR102290507B1 (ko)
CN (1) CN113195543A (ko)
AU (1) AU2019341266A1 (ko)
BR (1) BR112021004982A2 (ko)
CA (1) CA3117001C (ko)
WO (1) WO2020060156A1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102163465B1 (ko) 2017-09-15 2020-10-07 주식회사 바이오콘택 라이실 tRNA 합성효소 N-말단에 특이적으로 결합하는 항체를 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
CA2103059C (en) 1991-06-14 2005-03-22 Paul J. Carter Method for making humanized antibodies
GB9928136D0 (en) * 1999-11-29 2000-01-26 Rose Marlene L Organ rejection and associated conditions
CN102124104A (zh) * 2008-08-18 2011-07-13 财团法人首尔大学校产学协力财团 通过调节赖氨酰tRNA合成酶的细胞水平控制癌症转移或癌细胞移动的方法
KR101009501B1 (ko) * 2008-10-10 2011-01-18 서울대학교산학협력단 항-라이실 티알엔에이 합성효소 항체 및 항-라미닌 수용체 항체를 유효성분으로 포함하는 암 진단용 조성물
CA2800281C (en) * 2010-06-01 2021-01-12 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of lysyl-trna synthetases
CN106062005A (zh) * 2013-12-30 2016-10-26 医药生命融合研究团 抗krs单克隆抗体及其用途
KR101851003B1 (ko) * 2016-02-25 2018-04-20 재단법인 의약바이오컨버젼스연구단 대장암 진단용 조성물과 진단 마커 검출 방법
KR102542472B1 (ko) 2016-09-29 2023-06-12 엘지디스플레이 주식회사 유기발광 표시장치
KR20180109645A (ko) * 2017-03-27 2018-10-08 재단법인 의약바이오컨버젼스연구단 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체
KR20180111046A (ko) 2017-03-31 2018-10-11 가톨릭관동대학교산학협력단 Co2와 rf를 이용한 봉합사 장치

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102163465B1 (ko) 2017-09-15 2020-10-07 주식회사 바이오콘택 라이실 tRNA 합성효소 N-말단에 특이적으로 결합하는 항체를 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JP2020534273A (ja) 2017-09-15 2020-11-26 メディシナル バイオコンバージェンス リサーチ センター リシル−ｔＲＮＡ合成酵素Ｎ末端に特異的に結合する抗体を有効成分として含む免疫細胞の遊走関連疾患の予防又は治療用薬学的組成物

Also Published As

Publication number Publication date
BR112021004982A2 (pt) 2021-06-08
AU2019341266A1 (en) 2021-05-20
CA3117001A1 (en) 2020-03-26
CA3117001C (en) 2023-09-19
EP3882272A4 (en) 2022-10-12
CN113195543A (zh) 2021-07-30
KR20200032019A (ko) 2020-03-25
EP3882272A1 (en) 2021-09-22
JP7453694B2 (ja) 2024-03-21
US20220049016A1 (en) 2022-02-17
JP2022500051A (ja) 2022-01-04
WO2020060156A1 (ko) 2020-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102167550B1 (ko) Dll3 결합 시약을 포함하는 암에 대한 치료적 및 진단적 타겟
KR20170120607A (ko) 항-트랜스타이레틴 항체
KR20170120608A (ko) 항-트랜스타이레틴 항체
KR102405278B1 (ko) Alk7 결합 단백질 및 이들의 용도
KR20170082495A (ko) 암 치료용 항-ck8 항체
JP2024023278A (ja) Ａｌｋ７結合タンパク質およびその使用
EP4031572A1 (en) Single-domain antibodies directed against lilrb2
KR102163465B1 (ko) 라이실 tRNA 합성효소 N-말단에 특이적으로 결합하는 항체를 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
US20030194405A1 (en) Antibody inhibiting stem cell factor activity and use for treatment of asthma
KR102290507B1 (ko) 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체
KR20220016802A (ko) 항-nme 항체 및 암 또는 암 전이의 치료 방법
RU2781304C1 (ru) Антитело для специфического связывания с n-концевым доменом лизил-трнк-синтетазы, экспонированным на внеклеточной мембране
KR102114191B1 (ko) 세포 외막에 노출되는 라이실-tRNA 합성효소 N-말단 영역에 특이적으로 결합하는 항체
AU2018244677B2 (en) Antibody binding specifically to N-terminal region of lysyl-tRNA synthetase exposed on cell membrane
TW202235437A (zh) 含抗tslp抗體的藥物組合物
KR20230021699A (ko) 항-nme 항체 및 암 또는 암 전이의 치료 방법
CN114245805A (zh) Alk7结合蛋白及其用途
KR20160093502A (ko) 항 eprs 모노클로날 항체 및 이의 용도
KR20230028796A (ko) 항-nme 항체 및 암 또는 암 전이의 치료 방법
US20150210770A1 (en) Therapeutic and diagnostic target

Legal Events

Date Code Title Description
N231 Notification of change of applicant
E902 Notification of reason for refusal
N231 Notification of change of applicant
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant