KR102253137B1 - 진세노사이드 Re를 포함하는 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 대식세포에서 NO 생성 억제 활성이 우수한 진세노사이드 Re를 포함하는 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.

Description

진세노사이드 Re를 포함하는 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물{Composition for anti-inflammation comprising extract of mealworm containing ginsenoside Re}
본 발명은 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 대식세포에서 NO 생성 억제 활성이 우수한 진세노사이드 Re를 포함하는 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.
염증은 물리적인 외상, 유해한 화학물질, 박테리아, 곰팡이, 바이러스에 의한 감염이나 생체 내 대사산물 중의 자극성 물질에 의하여 야기되는 병리적 상태에 대응하여 나타나는 국소적인 생체의 방어 반응이다. 염증은 손상된 조직과 이동하는 세포(migrating cells)로부터 생산되는 다양한 염증 매개 인자에 의하여 촉발된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다. 정상적인 경우에 생체는 염증 반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키지만, 그렇지 못한 경우에는 만성 염증과 같은 질병 상태로 진행되기도 한다.
염증 반응에는 다양한 생화학적 현상이 관여하지만, 특히 대식세포(Macrophage)는 화학적 자극 등에 의하여 산화질소(NO)와 여러 염증성 사이토카인을 생성하여 염증반응에서 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 산화질소는 산화질소의 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)의 작용에 의하여 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 합성되는데, NOS는 몇 가지 이소 형태가 존재한다. 뇌에 존재하는 bNOS(brain NOS), 신경계에 존재하는 nNOS(neuronal NOS), 혈관 내피계에 존재하는 eNOS(endothelial NOS) 등은 체내에서 항상 일정수준으로 발현되고 있으며, 이들에 의해 소량 생성되는 일산화질소(NO)는 혈압 조절 작용, 신경 전달 작용, 학습, 기억 등과 관련된 다양한 생리 반응을 수행함으로써 인체의 항상성 유지에 중요한 역할을 수행한다. 이에 반하여 어떤 자극에 의하여 그 발현이 유도되는 iNOS(induced NOS)는 NO를 과다 생성하며, iNOS에 의해 과다 생성된 산화질소는 수퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite)를 형성하고 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입힘으로써 염증과 암을 포함한 다양한 병리적 과정에 관여한다.
한편, 밀웜이라고도 불리는 갈색거저리(Tenebrio molitor) 유충은 딱정벌레목 거저리과의 곤충으로, 다른 거저리 종류(외미거저리, lesser mealworm) 등과 달리 식용, 사료용 및 산업용으로 활용할 수 있으므로, 산업곤충으로 인식되고 있다. 또한, 슈퍼밀웜이라고도 불리는 아메리카 왕거저리(Zophobas morio) 유충은 딱정벌레목 거저리과에 속하는 유충으로서 밀웜에 비해 월등히 큰 편이며, 먹이로 주로 이용되는 유충 단계만 4개월 이상 지속된다.
10-2014-0065051
본 발명은 LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 대식세포에서 NO 생성 억제 활성이 우수한 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공하는데 목적이 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항염증용 조성물을 포함하는 항염증용 의약품 및 건강기능식품을 제공하는데 또 다른 목적이 있다.
본 발명은 인삼을 포함하는 사료를 공급하여 사육된 거저리 유충으로부터 추출된 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 거저리 유충은 갈색거저리 유충 및 아메리카 왕거저리 유충 중에서 선택된 적어도 어느 하나일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 인삼은 인삼 잎 및 인삼 화뢰 중에서 선택된 적어도 어느 하나일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 인삼은 상기 사료의 중량을 기준으로 0.5 ~ 5.5 중량%로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 거저리 유충 추출물은 인삼 화뢰를 포함하는 사료를 공급하여 사육된 갈색거저리 유충으로부터 추출될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 거저리 유충 추출물은 인삼 잎 또는 인삼 화뢰를 포함하는 사료를 공급하여 사육된 아메리카 왕거저리 유충으로부터 추출될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 거저리 유충 추출물은 10 내지 50부피%의 주정으로 추출된 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 거저리 유충 추출물은 10 ~ 300μg/ml의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 거저리 유충 추출물은 진세노사이드 Re를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항염증용 조성물을 포함하는 항염증용 의약품을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항염증용 조성물을 포함하는 항염증용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에 따른 항염증용 조성물은 LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 대식세포에서 NO 생성 억제 활성이 우수한 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 항염증용 의약품 또는 건강기능식품으로 널리 활용될 수 있다.
도 1a는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 거저리 유충 추출물의 LC 분석 결과를 도시한 그래프이다.
도 1b는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 거저리 유충 추출물의 LC 분석 결과를 도시한 그래프이다.
도 2a는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 거저리 유충 추출물에 대한 세포 독성 측정 결과를 도시한 그래프이다.
도 2b는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 거저리 유충 추출물에 대한 세포 독성 측정 결과를 도시한 그래프이다.
도 3a는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 거저리 유충 추출물에 대한 NO 억제 활성 측정 결과를 도시한 그래프이다.
도 3b는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 거저리 유충 추출물에 대한 NO 억제 활성 측정 결과를 도시한 그래프이다.
도 4a는 사육예에 따른 사용된 사료(사료 1 ~ 9)에 따라 사육된 갈색거저리 유충의 용화율 측정 결과를 도시한 그래프이다.
도 4b는 사육예에 따른 사용된 사료(사료 1 ~ 9)에 따라 사육된 갈색거저리 유충에서 탈피한 번데기에 체중을 도시한 그래프이다.
도 4c는 사육예에 따른 사용된 사료(사료 1 ~ 9)에 따라 사육된 갈색거저리 유충 기간을 도시한 그래프이다.
본 발명은 LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 대식세포에서 NO 생성 억제 활성이 우수한 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공하는데 목적이 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항염증용 조성물을 포함하는 항염증용 의약품 및 건강기능식품을 제공하는데 또 다른 목적이 있다.
용어 “조성물(composition)”은 본 발명의 거저리 유충 추출물에 희석제 또는 담체와 같은 다른 화학 성분들을 혼합한 혼합물을 의미한다.
용어 “담체(carrier)”는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.
용어 “희석제(diluent)”는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상적으로 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 용액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.
이하, 첨부한 도면을 참고로 하여 본 발명의 실시예에 대하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 항염증용 조성물은 인삼을 포함하는 사료를 공급하여 사육된 거저리 유충으로부터 추출된 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함한다.
본 발명에 따른 항염증용 조성물 내 유효성분으로 포함되는 거저리 유충 추출물의 추출 대상인 거저리 유충은 알에서 부화한 뒤 성충이 되기 전까지 단계를 의미한다.
또한 상기 거저리 유충은 인삼을 포함하는 사료를 공급하여 사육되기 때문에 진세노사이드 Re를 포함하는 인삼의 유효성분이 거저리 유충 내 안전하게 포함, 즉 진세노사이드 Re의 구조가 변하지 않고 거저리 유충 내 유지될 수 있고, 상기 유효성분이 추출 공정을 거쳐 거저리 유충 추출물 내에도 포함됨으로써 LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 대식세포에서 NO 생성 억제 활성이 현저히 우수할 수 있다.
상기 거저리 유충은 갈색거저리 유충 및 아메리카 왕거저리 유충 중에서 선택된 적어도 어느 하나일 수 있으며, 상기 사료를 공급한 지 8 ~ 13주 경과한 거저리 유충일 수 있다.
만일, 사료를 공급한지 8주 미만의 거저리 유충을 사용할 경우, 거저리 유충 내 진세노사이드 Re를 포함하는 유효성분이 현저히 적게 포함될 우려가 있으며, 사료를 공급한지 13주가 초과된 거저리 유충을 사용할 경우, 거저리 유충이 번데기 또는 성충으로 변태하거나 거저리 유충의 무게 당 유효성분의 함량이 현저히 적게 포함될 수 있다.
상기 인삼은 인삼을 분쇄하여 수득한 분말 형태로 사료 내에 포함될 수 있다.
상기 인삼은 인삼의 부위 중에서 인삼 잎 및 인삼 화뢰 중에서 선택된 적어도 어느 하나일 수 있다. 바람직하게는 상기 거저리 유충이 갈색거저리 유충일 경우 상기 인삼은 인삼 화뢰일 수 있으며, 인삼 화뢰를 포함하는 사료를 공급하여 사육된 갈색거저리 유충으로부터 추출된 거저리 유충 추출물은 항염증 효과가 현저히 우수할 수 있다.
또한 상기 거저리 유충이 아메리카 왕거저리 유충일 경우 상기 인삼은 인삼 잎 또는 인삼 화뢰일 수 있으며, 인삼 잎 또는 인삼 화뢰를 포함하는 사료를 공급하여 사육된 아메리카 왕거저리 유충으로부터 추출된 거저리 유충 추출물은 항염증 효과가 현저히 우수할 수 있다. 더욱 바람직하게는 인삼 잎을 포함하는 사료를 공급하여 사육된 아메리카 왕거저리 유충으로부터 추출된 거저리 유충 추출물이 항염증 효과가 더욱 더 우수할 수 있다.
상기 인삼은 상기 사료의 중량을 기준으로 0.5 ~ 5.5 중량%로 포함될 수 있으며, 상기 사료는 인삼 외에 밀기울, 수분 공급을 위한 배추 등을 더 포함할 수 있다.
상기 인삼이 상기 사료의 중량을 기준으로 0.5중량% 미만으로 포함될 경우, 거저리 유충 추출물 내 진세노사이드 Re를 포함하는 유효성분의 함량이 목적하는 수준으로 포함되지 않아 항염증 효과가 미비할 수 있고, 5.5중량%를 초과하여 포함될 경우, 거저리 유충의 사육에 사용되는 사료 내 주식이 적게 포함되어 거저리 유충의 성장 속도가 저하될 수 있으며, 이에 따라 거저리 유충의 수득율이 낮아지거나 거저리 유충 무게 당 유효성분의 함량이 저하될 수 있다.
거저리 유충을 추출하기 전 거저리 유충을 건조할 수 있으며, 건조 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 벌레의 건조 방법을 사용할 수 있으며, 일예로 열풍 건조 또는 동결 건조일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한, 거저리 유충을 추출하기 전 거저리 유충 또는 건조된 거저리 유충을 분쇄한 후 추출 공정을 진행할 수 있으며, 분쇄 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 약재 또는 식품의 분쇄방법을 이용할 수 있다.
또한, 상기 거저리 유충 추출물은 물 및 탄소수 1 내지 탄소수 4의 저급 알코올 중에서 선택된 적어도 어느 하나, 바람직하게는 10 내지 50부피%의 주정, 더욱 바람직하게는 20 내지 40부피%의 주정으로 추출되어 거저리 유충 추출물 내 진세노사이드 Re의 함량을 증가시킬 수 있다.
거저리 유충 추출물의 추출 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 추출 방법을 사용할 수 있으며, 일예로 가열 추출법일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 거저리 유충 추출물의 추출 방법으로 가열 추출법을 사용할 경우 30 ~ 40℃에서 4 ~ 6시간 동안 수행될 수 있다.
추출 공정이 수행된 후, 당업계에서 통상적으로 사용되는 용매 제거 방법을 이용하여 추출 용액 내 용매를 제거하여 거저리 유충 추출물을 분말의 형태로 수득할 수 있으며, 용매 제거 방법의 일예로 감압 여과법을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 거저리 유충 추출물은 항염증용 조성물 내 10 ~ 300μg/ml, 바람직하게는 80 ~ 300μg/ml, 더욱 바람직하게는 120 ~ 300μg/ml의 농도로 포함될 수 있으며, 10 μg/ml 미만의 농도로 포함될 경우 NO 억제 활성이 현저히 낮아 목적하는 수준으로 항염증 효과를 발현하기 어려울 수 있고, 300 μg/ml를 초과하는 농도로 포함될 경우, 세포 독성이 증가할 수 있다.
상기 거저리 유충 추출물이 항염증용 조성물 내 80 ~ 300μg/ml의 농도로 포함될 경우 항염증효과가 더욱 향상될 수 있으며, 120 ~ 300μg/ml의 농도로 포함될 경우 항염증효과가 더욱 더 향상될 수 있다.
한편 본 발명에 따른 항염증용 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
또한, 상기 항염증용 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화하여 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
본 발명의 항염증용 조성물은 의약품에 포함되어 활용될 수 있으며, 상기 의약품에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 항염증용 조성물이 의약품에 포함되어 사용될 경우, 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
상기 의약품은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장 내 투여 등으로 투여할 수 있다. 경구 투여시, 단백질 또는 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
상기 의약품의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
상기 의약품은 개별 예방제 또는 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다.
이하, 본 발명의 항염증용 조성물을 유효성분으로 포함하는 산제의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제조예 1>
거저리 유충 추출물 100 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항염증용 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.
상기 건강기능식품 조성물의 종류에는 통상적으로 제조 및/또는 판매되는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있고 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
상기 건강 음료 조성물은 본 발명에 따른 항염증용 조성물을 함유하는 것 외에는 액체성분에는 특별한 제한은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
통상적으로, 건강기능식품에 포함되는 거저리 유충 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 ~ 20 중량%, 바람직하게는 0.01 ~ 10 중량%로 포함될 수 있다. 또한, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수도 있다.
이하, 본 발명의 항염증용 조성물을 함유하는 건강기능식품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제조예 2>
항염증용 조성물 200 ㎎
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B 1 0.13 ㎎
비타민 B 2 0.15 ㎎
비타민 B 6 0.5㎎
비타민 B 12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
한편, 본 발명은 거저리 유충 사육방법을 제공할 수 있으며, 본 발명의 거저리 유충 사육방법은 인삼을 포함하는 사료를 준비하는 제1단계 및 상기 준비한 사료를 공급하여 거저리 유충을 사육하는 제2단계를 포함하여 사육하기 때문에, 거저리의 제조 수율이 우수하다.
이 때, 인삼은 사료의 중량을 기준으로 0.5 ~ 5.5 중량%가 포함될 때, 거저리 유충을 번데기로 탈피하는 비율인 용화율이 높을 뿐만 아니라, 거저리 유충으로부터 탈피한 번데기의 체중이 증가하고, 유충기간이 짧을 수 있다.
또한, 인삼은 인삼 잎 및 인삼 화뢰 중에서 선택된 적어도 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 인삼 잎일 때, 용화율이 높을 뿐만 아니라, 거저리 유충으로부터 탈피한 번데기의 체중이 증가하고, 유충기간이 짧을 수 있다.
또한, 거머리 유충은 갈색거저리 유충 및 아메리카 왕거저리 유충 중에서 선택된 적어도 어느 하나일 수 있으며, 바람직하게는 갈색거저리 유충일 수 있다.
나아가, 본 발명의 거저리 유충 사육방법은 용화율이 80%이상, 바람직하게는 90%이상 일 수 있다. 이 때, 용화율은 유충에서 번데기로 탈피하는 비율을 나타내며, 거저리 유충 사육 16 주를 기준으로 하기 관계식 1로 계산할 수 있다.
[관계식 1]
용화율(%) = (용화개체수/생존개체수) × 100
또한, 본 발명의 거저리 유충 사육방법은 거저리 유충 사육 16 주를 기준으로, 거저리 유충에서 탈피한 번데기의 체중이 129.5 ~ 186 mg일 수 있으며, 유충 기간은 78 ~ 102일일 수 있다.
이하 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 기술적 사상의 내용과 범위를 쉽게 설명하기 위한 예시일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되거나 변경되는 것은 아니다. 또한 이러한 예시에 기초하여 본 발명의 기술적 사상의 범위 안에서 다양한 변형과 변경이 가능함은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
(실시예 1)
인삼잎을 분쇄하여 제조한 인삼잎 파우더(1중량%) 및 밀기울(99중량%)로 이루어진 사료를 수분 공급용 배추와 함께 10주 동안 공급하여 갈색거저리 유충을 사육하였다. 사육된 갈색거저리 유충을 건조시킨 후 분쇄하고, 이를 30부피% 주정으로 가열 추출한 후 용매를 제거하여 갈색거저리 유충 추출물을 수득하였다.
(실시예 2)
인삼 화뢰를 분쇄하여 제조한 인삼 화뢰 파우더(1중량%) 및 밀기울(99중량%)로 이루어진 사료를 수분 공급용 배추와 함께 10주 동안 공급하여 갈색거저리 유충을 사육하였다. 사육된 갈색거저리 유충을 건조시킨 후 분쇄하고, 이를 30부피% 주정으로 가열 추출한 후 용매를 제거하여 갈색거저리 유충 추출물을 수득하였다.
(실시예 3)
실시예 2와 동일하게 실시하되, 인삼 화뢰 파우더(5중량%) 및 밀기울(95중량%)로 이루어진 사료를 공급하여 갈색거저리 유충을 사육하였다.
(실시예 4)
실시예 2와 동일하게 실시하되, 인삼 화뢰 파우더(10중량%) 및 밀기울(90중량%)로 이루어진 사료를 공급하여 갈색거저리 유충을 사육하였다.
(실시예 5)
실시예 2와 동일하게 실시하되, 인삼 화뢰 파우더(20중량%) 및 밀기울(80중량%)로 이루어진 사료를 공급하여 갈색거저리 유충을 사육하였다.
(실시예 6)
인삼잎을 분쇄하여 제조한 인삼잎 파우더(1중량%) 및 밀기울(99중량%)로 이루어진 사료를 수분 공급용 배추와 함께 10주 동안 공급하여 아메리카 왕거저리 유충을 사육하였다. 사육된 아메리카 왕거저리 유충을 건조시킨 후 분쇄하고, 이를 30부피% 주정으로 가열 추출한 후 용매를 제거하여 아메리카왕거저리 유충 추출물을 수득하였다.
(실시예 7)
인삼 화뢰를 분쇄하여 제조한 인삼 화뢰 파우더(1중량%) 및 밀기울(99중량%)로 이루어진 사료를 수분 공급용 배추와 함께 10주 동안 공급하여 아메리카 왕거저리 유충을 사육하였다. 사육된 아메리카 왕거저리 유충을 건조시킨 후 분쇄하고, 이를 30부피% 주정으로 가열 추출한 후 용매를 제거하여 아메리카 왕거저리 유충 추출물을 수득하였다.
(비교예 1)
밀기울(100중량%)로 이루어진 사료를 수분 공급용 배추와 함께 10주 동안 공급하여 갈색거저리 유충을 사육하였다. 사육된 갈색거저리 유충을 건조시킨 후 분쇄하고, 이를 30부피% 주정으로 가열 추출한 후 용매를 제거하여 갈색거저리 유충 추출물을 수득하였다.
(비교예 2)
비교예 1과 갈색거저리 유충 대신 아메리카 왕거저리 유충을 사육한 후 이로부터 아메리카 왕거저리 유충 추출물을 수득하였다.
(실험예 1) 생존율
실시예 1 내지 실시예 5 및 비교예 1에서 사육된 갈색거저리 유충의 생존율을 평가하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 기재하였다.
Figure 112018119064015-pat00001
상기 표 1을 참조하면, 인삼잎 또는 인삼 화뢰를 포함하는 사료를 공급하여 사육한 거저리 유충들은 용화, 즉 번데기로 변태하지 않았으며 생존율 또한 사료만을 공급하여 사육한 거저리 유충과 유사한 수준으로 확인되었다.
(실험예 2) 진세노사이드 Re 함유 여부 분석
UPLC TOF/MS를 이용하여 실시예 1, 실시예 2 및 비교예 1에서 제조된 거저리 유충 추출물 내 진세노사이드 Re 함유 여부를 분석하였으며, 분석 결과를 도 1a 및 도 1b에 도시하였다.
도 1a 및 도 1b를 참조하면, 인삼 화뢰 또는 인삼 잎을 포함하는 사료를 공급한 갈색거저리 유충 및 아메리카 왕거저리 유충으로부터 추출된 거저리 유충 추출물 내에 진세노사이드 Re가 존재함을 확인할 수 있다.
(실험예 3) 세포 독성 평가
대식세포-Raw 264.7를 5000 cells/㎖ 비율로 96 well plate에 분주한 다음 24시간 배양한 후, 실시예 1, 2, 6, 7 및 비교예 1, 2에서 제조된 거저리 유충 추출물을 100 및 200 μg/ml의 농도로 포함하는 항염증용 조성물을 처리하고 24시간 배양하고 MTS를 처리한 후 490 nm 파장에서 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
세포 독성 측정 결과는 도 2a 및 도 2b에 도시하였다.
도 2a 및 도 2b를 참조하면, 실시예1, 2의 갈색거저리 유충 추출물 및 실시예6, 7의 아메리카 왕거저리 유충 추출물은 100, 200 μg/ml 농도에서 세포 독성이 없는 것으로 판단되며, 오히려 세포 증식이 증가하는 것을 확인할 수 있다.
(실험예 4) NO 억제 활성 평가
염증 매개물질 (LPS)에 의해 대식세포가 활성화되면 산화질소 (NO)와 같은 염증성 분자의 생성량이 증가하는 점을 이용하여 세포 외 NO 농도 변화를 측정하였으며, 그 결과를 도 3a 및 도 3b에 도시하였다. 정상군과 비교하여 LPS를 처리한 군의 NO 농도는 약 5.5배 증가하였으며, 갈색거저리 유충 추출물을 종류별로 처리한 결과 비교예 1(무처리군), 실시예 2(갈색거저리 + 인삼 화뢰), 실시예 1(갈색거저리 + 인삼 잎)의 추출물 처리시 LPS만 처리한 군과 비교하여 NO 농도를 각각 약 4.4%, 32.8%, 11.6% 감소시켰다. 실시예 2(갈색거저리 + 인삼 화뢰)에서 제조된 추출물이 LPS 처리에 의한 NO 생성량을 감소시켜 항염증 효과가 현저히 우수한 것을 확인하였다.
또한, 실시예 6, 7에 따른 아메리카 왕거저리 유충 추출물은 비교예 2에 따른 추출물 보다 NO 억제활성이 현저히 우수하였으며, 특히 실시예 6(아메리카 왕거저리 + 인삼 잎)의 추출물의 NO 억제활성이 가장 우수한 것을 확인하였다.
사육예 : 거저리 유충 사육방법
사료를 수분 공급용 배추와 함께 16주 동안 공급하여 갈색거저리 유충을 사육하였다. 이 때, 구성하는 인삼잎을 분쇄하여 제조한 인삼 잎 파우더, 인삼 화뢰를 분쇄하여 제조한 인삼 화뢰 파우더 및 밀기울로 이루어 졌으며, 하기 표 2에 기재된 바와 같이, 구성 비율이 상이한 사료 1 ~ 9를 각각 사용하여, 갈색거저리 유충을 사육하였다.
Figure 112018119064015-pat00002
상기 표 2에 기재된 사료를 각각 사용하여 사육된 갈색거저리 유충의 용화율, 번데기 체중 및 유충기간을 각각 측정하였으며, 이에 대한 결과를 하기 도4a ~ 도 4c 및 표 3에 나타내었다.
용화율은 하기 관계식 1로 계산하였다.
[관계식 1]
용화율(%) = (용화개체수/생존개체수) × 100
Figure 112018119064015-pat00003
상기 표 3에서 확인할 수 있듯이, 사료 2(밀기울 99중량%, 인삼 잎 1중량%) 를 사용하여 갈색거저리 유충을 사육할 때, 용화율이 100.0%로 가장 높게 나타남을 확인할 수 있었다.
또한, 번데기 체중은 사료 3(밀기울 95중량%, 인삼 잎 5중량%)를 사용하여 갈색거저리 유충을 사육할 때, 가장 높게 나타남을 확인할 수 있었다.
또한, 유충기간은 사료 1(밀기울 100중량%)를 사용하여 갈색거저리 유충을 사육할 때, 가장 짧음을 확인할 수 있었다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만, 본 발명은 상술한 특정의 실시예에 한정되지 아니하며, 청구범위에서 청구하는 본 발명의 요지를 벗어남이 없이 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 변형 및 개량 실시가 가능한 것은 물론이고, 이러한 변형 및 개량 실시들은 본 발명의 기술적 사상이나 전망으로부터 개별적으로 이해되어져서는 안될 것이다.

Claims (11)

  1. 인삼을 포함하는 사료를 공급하여 사육된 거저리 유충으로부터 추출된 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물로서 상기 거저리 유충은 갈색거저리 유충 및 아메리카 왕거저리 유충 중에서 선택된 적어도 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서,
    상기 인삼은 인삼 잎 및 인삼 화뢰 중에서 선택된 적어도 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 인삼은 상기 사료의 중량을 기준으로 0.5~5.5 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 거저리 유충 추출물은 인삼 화뢰를 포함하는 사료를 공급하여 사육된 갈색거저리 유충으로부터 추출된 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 거저리 유충 추출물은 인삼 잎 또는 인삼 화뢰를 포함하는 사료를 공급하여 사육된 아메리카 왕거저리 유충으로부터 추출된 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 거저리 유충 추출물은 10 내지 50부피%의 주정으로 추출된 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 거저리 유충 추출물은 100 ~ 200μg/ml의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 거저리 유충 추출물은 진세노사이드 Re를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
  10. 제1항에 따른 조성물을 포함하는 항염증용 의약품.
  11. 제1항에 따른 조성물을 포함하는 항염증용 건강기능식품.
KR1020180149906A 2018-11-28 2018-11-28 진세노사이드 Re를 포함하는 거저리 유충 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물 KR102253137B1 (ko)

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