KR102224781B1 - 유기용매를 사용하지 않는 동결건조 시클로포스파미드의 제조방법 - Google Patents

유기용매를 사용하지 않는 동결건조 시클로포스파미드의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해(reconstitution)되도록, 선택된 온도의 반응용기에서, 물 용매에 시클로포스파미드, 및 동결건조 보호제로서 D-만니톨 또는 락토오스를 용해시키는 단계를 포함하는, 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법 및 이에 따라 제조된 주사제용 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 관한 것이다.

Description

유기용매를 사용하지 않는 동결건조 시클로포스파미드의 제조방법{A method for preparation of organic solvent-free lyophilized cyclophosphamide}
본 발명은 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해(reconstitution)되도록, 선택된 온도의 반응용기에서, 물 용매에 시클로포스파미드, 및 동결건조 보호제로서 D-만니톨 또는 락토오스를 용해시키는 단계를 포함하는, 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법 및 이에 따라 제조된 주사제용 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 관한 것이다.
시클로포스파미드(cyclophosphamide)는 하기 화학 구조식으로 표시되는, 화학적으로 질소 머스타드와 관련된, 합성 항암제이다:
Figure 112018037101274-pat00001
.
시클로포스파미드는 1962년 1월 23일 등록된 미국특허 3,018,302호에 개시된 고리형 인산 에스테르 아미드의 하나의 예로서, 이의 화학식명은 2-[비스(2-클로로에틸)아미노]테트라하이드로-2H-1,3,2-옥사자포스포린-2-옥사이드(2-[bis(2-chloroethyl)amino]tetrahydro-2H-1,3,2-oxazaphosphorin-2-oxide)이며, 일수화물 또는 무수물의 형태로 존재한다. 통상 일수화물의 형태로 사용되나, 상대습도 20% 이하의 건조한 조건이나 공정상의 과정에서 물분자를 잃고 무수물이 될 수 있다.
초기 시클로포스파미드는 일수화물로서 유통되었으며, 약물과 염화나트륨의 멸균, 포장된 건조분말 혼합물로 구성된, 비경구 용량의 사전 혼합물(pre-mix)로 제공되었으며, 투여에 앞서 상기 사전 혼합물을 물에 용해시켜 비경구는 물론 경구투여할 수 있도록 하였다. 그러나, 이의 수용액은 유통기한이 제조 직후로부터 수시간에 불과하여 즉시 투여할 필요가 있었다. 한편, 건조분말 상태의 사전 혼합물 제형은 제조공정 및/또는 저장기간 동안, 사전 혼합물 조성물은 유리질화하거나 끈적해질 수 있고, 용해도가 낮아지고 효과가 감소하는 등 좋지 않은 물성을 갖게되기도 하였다. 이런 변질은 저장기간이 길어지거나, 저장온도가 권장 상한을 초과하였을 때 발현되었다.
최근에는 시클로포스파미드가 동결건조물(lyophilizate)의 형태로 유통되기 시작하였다. 동결건조는 수용액에 난용성인 약물의 주사제에 사용되기는 하였으나, 1982년 경까지는 시클로포스파미드에 적용되지 않았다. 이후, 다양한 첨가제를 이용하여 시클로포스파미드를 유효성분으로 포함하는 동결건조 조성물 및 이의 제조방법을 연구하였으나, 이들 방법은 대부분 부탄올 등의 유기용매를 사용하는 것이었다. 이들 유기용매는 미량이라도 잔류할 경우 인체에 자극을 주거나 유해한 부작용을 나타낼 수 있어 허용되는 잔류 기준 이하로 제거해야하는 번거로움이 있다.
이에, 본 발명자들은 유기용매를 사용하지 않고 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 제조하는 방법을 발굴하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 유기용매를 포함하지 않는 수용액을 이용하되 유효성분인 시클로포스파미드를 용해시키는 온도를 조절함으로써, 안정성 및 용해도가 향상된 동결건조 조성물을 제조할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해(reconstitution)되도록, 40 내지 70℃의 반응용기에서 물 용매에 시클로포스파미드 및 동결건조 보호제로서 D-만니톨 또는 락토오스를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을, 멸균하여 준비한 바이알에 충진하는 제2단계; 및 상기 바이알에 충진한 시클로포스파미드 용액을 동결건조하는 제3단계를 포함하는, 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해되도록, 40 내지 70℃의 반응용기에서, 제약용수에 무수 시클로포스파미드의 중량을 기준으로 1 mL의 물 용매에 대해 0.01 내지 0.1 g의 시클로포스파미드, 및 상기 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 5 내지 250중량부의 D-만니톨 또는 락토오스를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을 0.2 μm 이하의 막 여과로 멸균하여 주사제용 용기에 분주하는 제2단계; 이전 단계로부터 용기에 분주한 용액을 동결건조하여 동결건조 케이크를 형성하는 제3단계; 및 밀봉하는 제4단계를 포함하는, 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 무수 시클로포스파미드 100중량부를 기준으로 6 내지 8중량부의 물, 및 5 내지 250중량부의 D-만니톨 또는 락토오스를 포함하는, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해되는, 주사제용 동결건조 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 40 내지 70℃의 반응용기에서 물 용매에 시클로포스파미드 및 D-만니톨 또는 락토오스를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을 동결건조하여 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 제조하는 제2단계; 및 이전 단계로부터 수득한 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수를 첨가하여 용해시키는 제3단계를 포함하는, 시클로포스파미드 주사용제의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한, 본 발명의 제1양태는 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해(reconstitution)되도록, 40 내지 70℃의 반응용기에서 물 용매에 시클로포스파미드 및 동결건조 보호제로서 D-만니톨 또는 락토오스를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을, 멸균하여 준비한 바이알에 충진하는 제2단계; 및 상기 바이알에 충진한 시클로포스파미드 용액을 동결건조하는 제3단계를 포함하는, 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제2양태는 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해되도록, 40 내지 70℃의 반응용기에서, 제약용수에 무수 시클로포스파미드의 중량을 기준으로 1 mL의 물 용매에 대해 0.01 내지 0.1 g의 시클로포스파미드, 및 상기 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 5 내지 250중량부의 D-만니톨 또는 락토오스를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을 0.2 μm 이하의 막 여과로 멸균하여 주사제용 용기에 분주하는 제2단계; 이전 단계로부터 용기에 분주한 용액을 동결건조하여 동결건조 케이크를 형성하는 제3단계; 및 밀봉하는 제4단계를 포함하는, 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제3양태는 무수 시클로포스파미드 100중량부를 기준으로 6 내지 8중량부의 물, 및 5 내지 250중량부의 D-만니톨 또는 락토오스를 포함하는, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해되는, 주사제용 동결건조 조성물을 제공한다.
본 발명의 제4양태는 40 내지 70℃의 반응용기에서 물 용매에 시클로포스파미드 및 동결건조 보호제를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을 동결건조하여 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 제조하는 제2단계; 및 이전 단계로부터 수득한 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 내지 500 mL의 제약용수를 첨가하여 용해시키는 제3단계를 포함하는, 시클로포스파미드 주사용제의 제조방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 보다 자세히 설명한다.
본 발명은, 잔류 용매로 인한 안전성 문제를 해결하기 위해, 종래 난용성 약물의 주사제용 동결건조 조성물을 제조하기 위하여 용매로 사용되던 부탄올 등의 유기용매를 사용하지 않고, 물 용매를 이용하여 난용성 약물인 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 제조하기 위한 방법에 관한 것으로, 시클로포스파미드를 물 용매에 완전히 용해시키기 위하여 동결건조 보호제를 적정량 함께 용해시키되 용액의 온도를 특정 범위로 유지함으로써 난용성 원료물질인 시클로포스파미드의 함량 및 활성은 유지하면서, 이를 완전히 용해시킬 수 있음을 발견한 것에 기초한다. 나아가, 이를 동결건조시켜 기존의 유기용매를 사용하여 제조한 동결건조 조성물 또는 상기 특정 범위 이외의 온도에서 용해 후 제조된 동결건조 조성물에 비해 주사용수에 재용해시켰을 때 안전성 및 용해도가 향상된 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 제공할 수 있으며, 상기 유기용매를 사용하지 않고 제조되었으므로 잔류 용매에 의한 부작용에 대해 안전하여 주사제로 사용하기에 적합함을 확인하였다.
특히, 상기 동결건조 조성물은 적정 부피의 주사용기에서 제조하여 밀봉한 형태로 제공되는 경우, 종래 분말형태로 밀봉된 조성물이나 t-부탄올 등의 유기용매로 동결건조한 조성물 또는 상기 특정 범위 이외의 온도에서 용해시켜 동결건조한 조성물에 비해 제약용수 주입시, 보다 빠르게 용해되므로 필드에서 사용이 편리한 장점을 갖는다.
구체적으로, 본 발명은, 최종 생성되는 동결건조 조성물이 주사제로 사용하기 위한 것임을 고려하여, 필드에서 사용에 편리하도록 최종 생성물인 동결건조 조성물이 빠른 시간 내에 예컨대, 십 수초 이내에 완전히 용해될 수 있는 정도의 용해도를 갖도록 할 수 있는 제조방법을 발굴하기 위한 최적화된 조건을 발굴하는 것을 목적으로 하여, 통상의 주사제용 동결건조 조성물을 제조하는 공정을 이용하되, 특정 공정에서의 조건을 변화시킴으로써 예컨대, 동결건조 이전에 원료물질 용액을 준비하는 단계에서, 특정한 동결건조 보호제를 사용하고, 특정한 온도 조건에서 용해시킴으로써 최종 생성되는 동결건조 조성물의 용해도를 현저히 향상시킬 수 있음을 발견한 것이 특징이다.
본 발명은 40 내지 70℃의 반응용기에서, 물 용매에 시클로포스파미드, 및 동결건조 보호제를 용해시키는 제1단계; 및 이전 단계로부터 수득한 용액을 동결건조하는 제2단계를 포함하는 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법을 제공한다. 이는 반응물을 용해시키는 온도를 조절함으로써 최종 제조되는 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 용해도를 현저히 향상시켜, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 완전히, 구체적으로, 최종 생성물의 99% 이상 용해(reconstitution)될 수 있도록 조절한 것이 특징이다. 이때, 상기 제약용수는 주사용수(Water for Injection), 음용수(Drinking Water), 정제수(Purified Water), 멸균정제수(Sterile Purified Water), 멸균주사용수(Sterile Water for Injection), 방부제 첨가 주사용수(Bacteriostatic Water for Injection), 증류수(distilled water) 또는 생리식염수(normal saline)일 수 있다.
본 발명의 제1단계는 물 용매에 시클로포스파미드 및 동결건조 보호제를 40 내지 70℃에서 용해시키는 것을 특징으로 한다. 상기 설정된 온도에서 용해시킴으로써, 이로부터 제조되는 동결건조 조성물은 이에 함유된 유효성분인 시클로포스파미드의 활성 및/또는 함량은 유지하면서, 용해도가 향상되어 최종적으로 필드에서 주사용제로 사용하기 위하여 주사용수를 주입할 때, 즉시 예컨대, 15초 이내에 99% 이상 용해되므로, 사용상의 편의성을 제공할 수 있다. 한편, 제1단계에서 40℃ 미만의 온도에서 용해시키는 경우, 시클로포스파미드의 불완전한 용해로 최종 동결건조 조성물 중 유효성분인 시클로포스파미드의 함량이 낮아질 수 있으며, 최종 생성된 동결건조 조성물의 주사용수 주입시 재용해율이 떨어지거나, 완전히 예컨대, 99% 이상이 용해되기까지의 시간이 길어질 수 있다. 70℃ 초과인 경우에는 시클로포스파미드의 1분 이내에 빠르게 용해되기는 하나, 유효성분인 시클로포스파미드의 함량이 떨어진다. 한편, 70℃ 초과의 고온에서 용해시키는 경우, 함량은 유지하더라도 고온 처리로 인해 시클로포스파미드의 약물로서의 유효성이 저하될 수 있으며, 최종 생성된 동결건조 조성물의 주사용수 주입시 재용해율이 떨어지거나, 완전히 예컨대, 99% 이상이 용해되기까지의 시간이 길어질 수 있다.
본 발명의 제조방법에서 사용되는 상기 시클로포스파미드의 양은 무수 시클로포스파미드인 경우 물 용매 1 mL에 대해 0.01 내지 0.1 g일 수 있다. 사용하는 시클로포스파미드의 양이 0.01 g/mL 미만인 경우 일정량의 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 생산하기 위하여 불필요하게 많은 양의 용매로 사용해야 하며 이에 따라 반응물의 부피가 증가되므로 반응 효율이 떨어지는 단점이 있으며, 0.1 g/mL 초과인 경우에는 원료물질인 시클로포스파미드가 용액 중에 완전히 용해되지 못할 수 있다.
"동결건조"는 용액 상태에 있는 시료를 동결하여 그대로의 상태로 감압 하에 방치함으로써 시료 중의 수분을 승화시켜 제거하는 건조법으로서, 물을 포함하는 시료의 건조에 사용될 수 있다.
그러나, 물을 포함하는 시료는 동결하면 동결 중에 물 분자끼리 용질이나 혼입물의 매질을 배제(排除)하면서 결정화하여 물 분자만으로 이루어진 얼음 결정을 형성하므로, 함수물 중에서 용질이나 혼입물의 매질이 불균일하게 확산되어, 동결 농축이 발생할 수 있다.
따라서, 이와 같은 문제점을 해결하기 위하여 용액에 물리적 및/또는 화학적 손상을 방지하고 구조 변화를 차단하기 위한 동결건조 보호제로 D-만니톨(mannitol) 또는 락토오스(lactose)를 추가로 포함하여 수행할 수 있다. 통상의 동결건조 조성물의 제조방법에서 동결건조 보호제로 DMSO(dimethylsulfoxide), 덱스트란(dextran), 자당(sucrose), 글리세롤(glycerol), 만니톨(mannitol), 솔비톨(sorbitol), 과당(fructose), 트레할로스(trehalose), 라피노스(raffinose), 혈청알부민(serum albumin) 등을 목적에 따라 조합하여 사용할 수 있다. 이들 동결건조 보호제의 생체 안전성은 이미 검증되어 있으나, 목적에 따른 혼합조건이 까다롭기 때문에, 제조방법이 복잡하고, 제조시 많은 비용이 소요될 수 있다. 이에 본 발명자들은 상기 동결건조 보호제 중 D-만니톨 또는 락토오스가 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조에 효과적임을 확인하여, 이를 동결건조 보호제로 사용한다. 구체적으로는 동결건조제로 D-만니톨을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서는, 동결건조 보호제로 D-만니톨 또는 락토오스를 사용하는 경우, 최종적으로 생성되는 동결건조 조성물의 케이크 형성에 유리하며, 나아가 상기 제조된 케이크에 제약용수를 첨가하여 용해시키는 경우 침투성이 우수하여 용해시간을 단축시킬 수 있음을 확인하였다. 반면, 동결건조 보호제로서 솔비톨, 자당 또는 덱스트로스 등을 사용하는 경우에는 D-만니톨 또는 락토오스를 사용하는 경우에 비해 케이크 형성이 열악하였으며, 이는 필드에서 사용시 용해시간을 연장시킬 수 있다(실시예 7 및8, 비교예 1 내지 3 및 도 3 내지 8 참조).
이때, 동결건조 보호제는 무수 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 5 내지 250중량부로 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체적으로, 상기 시클로포스파미드는 무수물을 기준으로 0.01 내지 0.1 g/mL 농도로, 상기 동결건조 보호제는 무수 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 5 내지 250중량부로 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서는 동결건조 보호제로서, D-만니톨 사용량을 무수 시클로포스파미드 1 g에 대해 0.1 g으로부터 2 g까지, 즉, 무수 시클로포스파미드 100중량부를 기준으로 D-만니톨을 10중량부 내지 200중량부로 첨가하여도 최종 동결건조 조성물은 주사용수 주입시 15초 이내에 완전히 용해되었다(표 5 및 6의 샘플 15 및 16).
또한, 제1단계 및 제2단계 사이에 멸균하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 멸균하는 단계는 0.2 μm 이하의 막을 통해 여과하여 수행할 수 있다. 예컨대, 상기 막을 이용한 여과를 통한 멸균은 크기에 따라 미생물을 배제함으로써 달성되는 것으로, 사용되는 막 표면의 기공 크기보다 큰 오염물을 배출할 수 있다. 현재 멸균을 위하여 사용되는 것은 0.2 μm 기공 크기의 막이나, 이에 제한되는 것은 아니며, 바이러스까지 제거하기 위해서는 20 내지 50 nm의 더 작은 기공 크기의 나노여과막을 사용할 수 있다.
한편, 상기 제3단계는 -40℃ 이하로 냉각시켜 유지하고, 200 내지 1000 mTorr로 유지하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 당업계에 공지된 동결건조 방법을 이용하여 수행할 수 있다. 구체적으로, -40℃ 이하로 냉각시켜 유지하고, 200 내지 1000 mTorr로 유지하고, 상기 압력 수준을 유지하면서 단계적으로 온도를 향상시키면서 일정 시간씩 유지함으로써 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예컨대, 본 발명의 구체적인 실시예에서는 -40℃로 냉각시켜 300분 동안 유지한 후 250 mTorr까지 감압하여 순차적으로 -15℃ 및 0℃로 온도를 단계적으로 증가시키면서 각 온도에서 1620분 및 2760분 동안 유지하여 동결건조하였다.
이때, 상기 제3단계는 주사제용 용기에서 수행할 수 있다. 본 발명의 동결건조 조성물인 시클로포스파미드는, 전술한 바와 같이, 용액상태에서 상대적으로 불안정하므로 주사제를 첨가하여 용액으로 제조한 후에는 즉시 사용하는 것이 바람직하므로 주사제용으로 제공하기 위해서는 1회 사용분량씩 분주하여 주사용기에 제공하는 것이 바람직하나, 일단 동결건조된 조성물은 1회 주사분량만큼 정확히 칭량하여 분주하는 것이 어려우므로, 용액 상태에서 직접 주사제용 용기에 적정 분량으로 분주하여 동결건조함으로써 일정량을 포함하는 동결건조 조성물을 용이하게 제조할 수 있다.
구체적으로, 제3단계 이후 밀봉하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 밀봉하는 단계는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 수행할 수 있으며, 질소로 치환하여 진공 해제시켜 밀봉할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
예컨대, 본 발명의 제조방법은 40 내지 90% 기공률을 갖는 케이크 형태의 동결건조 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명의, 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해되는, 안전성 및 용해도가 향상된 동결건조 조성물은 40 내지 70℃의 반응용기에서, 제약용수에 무수 시클로포스파미드의 중량을 기준으로 1 mL의 용매에 대해 0.01 내지 0.1 g의 시클로포스파미드, 및 무수 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 5 내지 250중량부의 동결건조 보호제를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을 0.2 μm 이하의 막 여과로 멸균하여 주사제용 용기에 분주하는 제2단계; 이전 단계로부터 용기에 분주한 용액을 동결건조하여 동결건조 케이크를 형성하는 제3단계; 및 밀봉하는 제4단계를 포함하는 공정을 통해 제조할 수 있다.
나아가, 본 발명은 무수 시클로포스파미드 100중량부를 기준으로 6 내지 8중량부의 물 및 5 내지 250중량부의 동결건조 보호제를 포함하는, 주사제용 동결건조 조성물을 제공할 수 있다. 상기 주사제용 동결건조 조성물은 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해가능한 것이 특징이다.
상기 본 발명의 동결건조 조성물은 본 발명의 제1양태에 따른 방법으로 제조할 수 있다. 구체적으로 상기 본 발명의 동결건조 조성물은 본 발명의 제2양태에 따른 방법으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
이상과 같이 제조된 본 발명의 주사제용 동결건조 조성물은 불용성 미립자 구체적으로, 직경 10 μm 이상 입자의 누적수가 컨테이너 당 6000개 이하, 직경 25 μm 이상 입자의 누적수가 컨테이너 당 600개 이하로 주사제로 허용되는 기준치를 충분히 만족시킨다. 본 발명의 구체적인 실시예에서는 통상 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조에 사용되는 유기용매인 t-부탄올을 용매로 사용하여 제조한 동결건조 조성물에 비해 본 발명의 동결건조 조성물에서 불용성 미립자의 수가 감소한 것을 확인하였다(도 1 및 2).
상기 본 발명의 동결건조 조성물은, 필드에서의 사용에 용이하도록, 무수 시클로포스파미드 1000 mg에 대해 50 내지 500 mL의 제약용수를 첨가할 수 있도록 정해진 부피의 주사제용 용기에 이에 상응하는 분량으로 밀봉되어 제공될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예컨대, 상기 본 발명의 동결건조 조성물은 일회 사용분에 적절한 부피의 용액을 담지할 수 있는 용기에 미국 약전에 따라 일회 투여량만큼 분주하여 제공되므로 제약용수 등의 용액을 주입하여 원하는 최종 농도의 용액으로 제조하여 주사할 수 있다. 예컨대, 최종 20 mg/mL의 농도로 제공될 수 있도록, 무수 시클로포스파미드 중량을 기준으로 각각 200 mg, 500 mg, 1 g 및 2 g인 동결건조 조성물을 10 mL, 25 mL, 50 mL 및 100 mL 분량의 용액을 수용할 수 있는 주사용기에 담아 제공할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 나아가, 정맥 내 주사시 최소 2 mg/mL 농도로 투여할 수 있으므로, 예컨대, 무수 시클로포스파미드 1000 mg를 500 mL의 제약용수를 투입할 수 있는 용기에 담아 제공할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 본 발명의 동결건조 조성물은, 전술한 바와 같이, 40 내지 90% 기공률을 갖는 케이크 형태로 제공될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
나아가, 전술한 바와 같이, 본 발명의 방법으로 제조된 동결건조 조성물의 증가된 용해도를 기반으로, 본 발명은 40 내지 70℃의 반응용기에서 물 용매에 시클로포스파미드 및 동결건조 보호제를 용해시키는 제1단계; 이전 단계로부터 수득한 용액을 동결건조하여 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 제조하는 제2단계; 및 이전 단계로부터 수득한 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 20 내지 500 mL의 제약용수를 첨가하여 용해시키는 제3단계를 포함하는, 시클로포스파미드 주사용제의 제조방법을 제공한다. 이때, 제약용수를 첨가하여 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 용해시키는 단계는 15초 이내에 달성될 수 있으며, 그때 사용된 시클로포스파미드 동결건조 조성물은 99% 이상 완전히 용해된 상태일 수 있다.
현재 임상에 사용되는 시클로포스파미드 주사제를 고려할 때, 통상 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1000 mg을 함유하는 동결건조 조성물을 50 mL의 주사용수에 용해시켜 20 mg/mL의 농도로 투여한다. 또는 최소한으로 이의 10배 희석된 농도인 2 mg/mL로 투여되기도 한다. 따라서, 본 발명의 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 이용한 주사용제는 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g의 동결건조 조성물에 50 내지 500 mL의 주사용수를 첨가하여 제조할 수 있다. 또는 20 내지 50 mL 미만의 주사용제를 첨가하여 보다 높은 농도의 원액으로 제조한 후 투여시 희석하여 사용할 수 있다. 다만, 무수 시클로포스파미드 1 g에 해당하는 동결건조 조성물을 용해시키기 위하여 첨가되는 주사용수의 양이 20 mL 미만 예컨대, 10 mL인 경우에는 불완전 용해되어 1000 룩스(lux) 조도에서 검은 배경하에 관찰시 액이 뿌연 것을 육안으로 확인할 수 있다. 이는 약 300 룩스 이하의 조도를 갖는 형광등 아래에서도 확인 가능하였다.
본 발명의 제조방법은 동결건조에 앞서 난용성 원료인 시클로포스파미드 용액 제조시 동결건조 보호제, 예컨대 D-만니톨을 일정량 첨가하고, 일정 범위까지 온도를 높여 용해시킴으로써 유기용매를 사용하지 않고도 난용성 원료물질을 완전히 용해시킬 수 있고, 이를 동결건조함으로써 안정성 및 용해도가 향상된 조성물을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 유기용매 사용시 유기용매 잔류로 인해 발생할 수 있는 위험도를 감소시킬 수 있으며, 유기용매 사용으로 발생되는 불용성 미립자를 줄일 수 있는 효과가 있다. 또한, 기존 분말제품에 비해 동결건조 제형으로 제조하는 경우 용해도가 향상되어 제약용수를 첨가하였을 때 유효성분이 완전히 용해되는 시간을 수 내지 십수초 이내로 현저히 단축시킬 수 있으므로 실제 필드에서 사용시 편리함을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 대해 측정된 불용성 미립자 카운트 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 비교예로서 주사용수 대신에 t-부탄올을 용매로 사용하여 제조한 시클로포스파미드 동결건조 조성물(비교 1)에 대해 측정된 불용성 미립자 카운트 결과를 나타낸 도이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 동결건조 보호제로 D-만니톨을 함유하는 원료 용액의 제조
시클로포스파미드 일수화물 1.069 g, 및 D-만니톨 0.75 g을 분량으로 혼합한 시료를 바이알에 넣고 각각 20, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70 및 80℃로 맞춰진 주사용수를 각 바이알에 20 mL씩 넣어 시료를 용해시키면서 주사용수를 넣는 순간으로부터 시료가 완전히 용해되는 순간까지의 시간을 측정하였다. 총 30분까지 유지한 후 여과하여 여과액 중의 시클로포스파미드 함량을 측정하였다. 측정된 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
용해 온도(℃) 시료 표기 테스트 1 테스트 2 테스트 3 평균 함량(wt/wt%)
20 샘플 1 불용 불용 불용 76.13
30 샘플 2 부분적 용해 부분적 용해 부분적 용해 90.82
35 샘플 3 부분적 용해 부분적 용해 부분적 용해 95.12
40 샘플 4 8분50초 8분36초 8분58초 100.29
45 샘플 5 5분12초 5분53초 4분58초 100.31
50 샘플 6 3분10초 2분58초 3분05초 100.43
55 샘플 7 2분24초 2분15초 2분30초 100.26
60 샘플 8 1분25초 1분42초 1분10초 100.29
70 샘플 9 0분52초 1분06초 0분56초 96.05
80 샘플 10 0분37초 0분30초 0분32초 76.48
상기 샘플 1, 2, 4, 6, 8, 9 및 10의 함량은 각각 다음의 식으로 계산되었다.
Figure 112018037101274-pat00002
나아가, 급격한 함량 변화를 나타내는 임계적 온도를 확인하기 위하여, 함량이 급격히 감소하는 70 내지 80℃ 범위의 온도를 세분하여 각각 72, 75 및 78℃의 주사용수를 이용하여 위와 동일한 방법으로 실험하고 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
용해 온도(℃) 시료 표기 테스트 1 테스트 2 테스트 3 평균 함량(wt/wt%)
78 샘플 11 0분38초 0분39초 0분42초 78.63
75 샘플 12 0분45초 0분53초 0분45초 89.39
72 샘플 13 0분49초 0분49초 0분49초 93.94
상기 샘플 11 내지 13의 함량은 각각 다음의 식으로 계산되었다.
Figure 112018037101274-pat00003
실시예 2: 멸균 여과 후 무균 시험 및 함량 변화 시험
상기 실시예 1에서와 유사하게 다양한 온도에서 제조한 용액을 0.2 ㎛ 기공 크기의 여과막으로 멸균한 후 무균 시험 및 시클로포스파미드 함량을 측정하여 그 변화를 확인하였다. 그 결과 모든 온도 조건에서 막 여과 후 무균 시험에서 적합 판정을 받았으며, 막 여과에 의한 멸균 과정에 따른 시클로포스파미드의 함량 변화도 거의 나타나지 않았다.
실시예 3: 동결건조 보호제로 D-만니톨을 함유하는 주사제용 동결건조 조성물의 대량생산(샘플 14)
하기 표 3에 개시한 바와 같이 1000 바이알 분량의 원료와 바이알을 준비하였다.
원료명 활성물질용량 규격 분량(바이알 당) 사용량
시클로포스파미드 수화물 무수물로서 USP 1 g 1,069 g (일수화물)
D-만니톨 KP 750 mg 750 g
주사용수 USP 20 mL 20L
바이알(50 cc, 무색) KP 1 바이알 1000 바이알
바이알 캡 - 1개 1000개
동결건조 고무전 KP 1개 1000개
상기와 같이 1000 바이알 분량의 시클로포스파미드 수화물, 및 D-만니톨을 주사용수에 용해시켜 준비하였다. 구체적으로, 상기 분량의 원료물질들을 20 L의 주사용수와 함께 반응용기에 넣고 반응용기를 40 내지 70℃로 유지하면서 용해시켰다. 구체적으로, 질소로 10분간 치환하여 산소량을 낮추고 50℃로 가온한 주사용수 약 18 L를 조제탱크에 넣고 상기 표 1에 개시한 분량의 원료를 넣고 교반하여 완전히 용해시킨 후 주사용수를 추가하여 20 L로 맞추었다. 원료가 완전히 용해된 것이 확인되면 용액은 더이상 교반하지 않았다.
상기와 같이 준비한 20 L의 원료용액을 포함하는 조제탱크에 질소압을 넣어 여과하였다. 필터 완전성 시험은 여과 전과 후 integrity test(Sartocheck4 integrity tester)하여 버블 포인트 수치를 측정하여 적부를 판정하였다. 여과가 완료되면 충전 공정으로 인계하였다.
정제수와 주사용수를 사용하여 바이알 캡 및 충전부품을 세척하고 고압증기멸균기에 넣어 멸균하였다. 동결건조 고무전은 무진 고무전으로 세척하지 않고 고압증기멸균기에서 멸균하였다. 바이알은 자동 바이알 세척기로 세척한 후 터널 멸균기로 멸균하였다. 이와 같이 멸균하여 준비한 1000개의 바이알에 상기 충전공정으로 인계된 용액 20 L를 각각 동일한 분량으로 분주하였다. 구체적으로 대용량 바이알 충전기를 이용하여, 바이알을 정돈하여 충전속도를 조절하면서 용액을 충전하였다. 바이알 당 20 mL 분량으로 충전하였으며, 고무전은 동결건조를 위하여 반 밀전하였다. 충전이 완료되면 동결건조 공정으로 인계하였다.
상기 동결건조 공정으로 인계된 충전된 바이알을 트레이에 정렬하여 동결건조기 챔버 내의 윗단으로부터 아랫단 순서로 주의하여 넣었다. 트레이를 전부 넣은 후 챔버 내 3개의 온도 센서를 각 선반의 바이알 내부에 넣었다. 트레이의 정렬상태를 다시 확인한 후 동결건조기의 문을 완전히 밀폐한 후 하기 표 4에 개시한 조건에 따라 동결건조하였다.
동결 감압 총 시간
1 2 3 4 5 6 7 8 분 시간
선반온도
(℃)		 -40 -15 -15 0 0 0 0 0 0
시간
(분)		 300 120 1500 240 600 120 480 120 1200 4380 73
진공
(mTorr)		 - 250 250 250 250 250 500 700 700 700
Condenser set temperature: -40℃
진공을 질소로 치환하여 해제하고, 자동 스토퍼 장치를 사용하여 동결건조 고무전을 완전히 밀전시켰다. 바이알의 높이에 맞게 자동실링기를 세팅하여 실링하였다. 실링 상태가 불량한 바이알 및 고무전의 밀전 상태가 파괴된 것은 폐기처분하였다. 이상과 같이 동결건조가 완료된 제품은 이물검사 공정으로 인계하였다. 구체적으로, 인계된 제품에 대해 흰색광원 직하 1,000 룩스 이상의 조도 하에서 흑/백 배경을 통해 육안으로 이물검사를 실시하였다.
실시예 4: D-만니톨 사용량 및 바이알 충전 조건에 따른 용해시간 변화
하기 표 5의 함량으로 각각 주사제용 바이알에 동결건조 조성물을 제조하고, 각 바이알에 50 mL 주사용수를 넣어 용해시키면서 완전히 용해되는 순간까지의 용해시간을 측정하고, 그 결과를 표 6에 나타내었다. 아울러 바이알 당 D-만니톨의 양을 0.75 g, 2 g 및 0.1 g 사용하여 동결건조 조성물을 제조하고 이들을 각각 샘플 14 내지 16으로 명명하였다.
원약분량(g)
시클로포스파미드 수화물 D-만니톨 주사용수(mL)
샘플 14 1.069 0.75 20
샘플 15 1.069 2 20
샘플 16 1.069 0.1 20
샘플명(조건) 용해시간 (주사용수 주입 후 용해소요시간)
test 1 test 2 test 3
샘플 14 5초 8초 7초
샘플 15 10초 9초 12초
샘플 16 12초 10초 14초
상기 표 6에 나타난 바와 같이, D-만니톨 사용량을 0.1 내지 2 g 사용하여 제조한 경우 주사용수 주입시 전체 동결건조 조성물이 완전히 용해되는데까지 소요되는 시간은 모두 15초 이내로 빨랐으며, 이는 동결건조 보호제인 D-만니톨을 상기 범위의 용량으로 사용하는 경우 케이크 형성에 유리하며, 결과적으로 주사용수를 주입하여 용해시키는 경우 물의 침투가 용이하여 나타나는 효과인 것으로 사료된다.
실시예 5: 불용성 미립자 측정
상기 제조된 동결건조 조성물 중의 불용성 미립자를 카운트 하였다. 컨테이너 당 6000개 이하의 직경 10 ㎛ 이상의 입자, 및 600개 이하의 직경 25 ㎛ 이상의 입자의 기준 허용치를 만족하였다. 측정 결과를 도 1에 나타내었다. 한편, 비교 1로서 주사용수 대신에 t-부탄올을 사용하여 제조한 동결건조 조성물에 대해 측정된 결과를 도 2에 나타내었다.
상기 도 1 및 2에 나타난 바와 같이, 10 ㎛ 이상의 크기를 갖는 불용성 미립자의 누적수는 본 발명의 샘플 11에서 컨테이너 당 1640개인데 비해 유기용매인 t-부탄올을 사용하여 제조한 비교 1의 경우 2477개로 훨씬 더 많은 불용성 미립자를 함유하는 하는 것을 확인하였다.
실시예 6: 기공률 측정
상기 본 발명에 따른 샘플 14 및 15(각각 D-만니톨을 0.75 g 및 2.0 g 포함), 비교 2로서 원료물질인 시클로포스파미드 분말의 기공 크기를 측정하였다. 상기 기공률의 측정은 본 출원인이 제조한 시료를 국제공인시험기관 한국고분자시험연구소에 의뢰하여 측정하였다. 샘플 14와 15, 및 비교 2에 대해 측정된 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
시료 분석항목 단위 결과
샘플 14 겉보기 밀도 g/cm3 0.59
평균 지름 ㎛ 0.43
기공률 % 57.8
샘플 15 겉보기 밀도 g/cm3 0.32
평균 지름 ㎛ 14.8
기공률 % 80.9
비교 2 겉보기 밀도 g/cm3 1.31
평균 지름 ㎛ 0.02
기공률 % 5.24
상기 표 7에 나타난 바와 같이, 동결건조 보호제인 D-만니톨을 불포함하여 원료물질인 시클로포스파미드 분말은 매우 낮은 기공률 및 이에 따라 현저히 높은 밀도를 갖는 것을 확인하였으며, 이는 상기 제형은 원료물질이 치밀하게 응집되어 있어 주사용수로 쉽게 용해시킬 수 없으므로 주사제로 필드에서 사용하기에 부적합함을 나타내는 것이다.
실시예 7 및 8: 동결건조 보호제로 D-만니톨 또는 락토오스를 함유하는 주사제용 동결건조 조성물의 제조
D-만니톨 및 상기 D-만니톨 대신 락토오스를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 3과 유사한 방법으로 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 함유하는 주사제용 바이알을 제조하였다. 구체적으로, 시클로포스파미드 수화물 2.67 g을 50 mL 플라스크에 넣고 55℃의 주사용수를 25 mL 가량 채워 용해시켰다. 상기 시클로포스파미드 용액에 각각 1.87 g의 D-만니톨 및 락토오스를 넣어 용해시키고, 50 mL까지 주사용수로 채웠다. 상기 혼합 용액을 50 cc 바이알에 10 mL씩 분주하여 실시예 3과 동일한 방법으로 동결건조하고 밀봉하여 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 포함하는 주사제용 바이알을 제조하였다. 케이크의 형성을 육안으로 확인하고, 사진으로 찍어 도 3 및 4에 나타내었다. 도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이, D-만니톨 및 락토오스를 동결건조 보호제로 사용하여 동결건조 조성물을 제조한 경우, 양질의 케이크가 균일하게 형성되었다.
비교예 1 내지 3: 동결건조 보호제로 솔비톨 , 수크로스 또는 덱스트로스를 함유하는 주사제용 동결건조 조성물의 제조
D-만니톨 또는 락토오스 대신에 동량의 솔비톨, 수크로스 또는 덱스트로스를 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 7 및 8과 동일한 방법으로 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 포함하는 주사제용 바이알을 제조하였다. 나아가, 이들에서 케이크 형성을 육안으로 확인하고, 사진으로 찍어 각각 도 5 내지 7에 나타내었다. 도 5 내지 7에 나타난 바와 같이, 이들 동결건조 조성물에서는 균일하게 형성된 케이크는 관찰되지 않았으며, 불규칙한 덩어리로 존재하였다. 나아가, 이들 동결건조 조성물의 용해도를 확인하기 위하여, 무수 시클로포스파미드를 500 mg씩 포함하는 각 바이알에 주사용수 25 mL를 주입하여 용해시킨 후 이를 사진으로 찍어 도 8에 나타내었다(좌측으로부터 솔비톨, 수크로스 및 덱스트로스). 비교를 위하여 동결건조 보호제로 락토오스를 사용하여 제조한 동결건조 조성물을 동일한 조건에서 용해시키고 사진으로 찍어 함께 도 8에 나타내었다(최우측). 도 8에 나타난 바와 같이, 락토오스를 사용하여 제조한 동결건조 조성물은 빠른 시간 내에 완전히 용해되었으나, 솔비톨, 수크로스 및 덱스트로스를 사용하여 제조한 동결건조 조성물은 모두 완전히 용해되지 못하고 상당량이 고체상태로 유지됨을 확인하였다.
실시예 9: 장기보존 안정성
본 발명에 따라 제조된 주사제용 바이알로 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물의 장기간 보존에 대한 안정성을 확인하기 위하여, 제조일로부터 9개월까지 25±2℃ 및 60±5% 상대습도 조건에서 보관하면서 미국약전(USP) 규격에 따른 안정성 시험을 수행하였다. 구체적으로, i) 성상, ii) 투명도와 완전성 및 불용성 이물 검출여부에 의한 용해 상태, iii) TLC 및 HPLC에 의한 성분 확인, iv) pH 및 v) 정량법의 5개 항목 및 추가적으로 수분 함량을 3개월 간격으로 테스트하였다. 각 테스트 기준은 하기 표 8에 나타내었다. 표 8을 기준으로 각기 다른 시기와 배치에서 제조한 제품에 대해 반복시험하고, 그 결과 모든 항목에서 적합한 규격을 갖추고 있으며, 시간이 경과하여도 이를 유지함을 확인하였다. 검사 결과는 하기 표 9에 나타내었다. 아울러, 표 9에 나타낸 바와 같이, 수분 함량은 1±0.1% 이내의 낮은 수준을 유지하였다.
시험항목 기준
성상 흰색의 동결건조 분말이 든 무색 투명한 바이알
용해상태 TLC 상 표준액과 동일한 Rf 및 색상
HPLD 상 표준액과 동일한 주 피크 유지 시간
성분 확인 비교액과 비숫한 투명도 및 완전한 용해
불용성 이물의 불검출
pH pH 3.0 내지 9.0
정량법 무수 시클로포스파미드 500 mg/바이알을 기준으로 90.0 내지 110%
수분 참고치
시험항목 기준 시험주기(Duration/Month)
초기 3개월 6개월 9개월
성상 흰색의 동결건조 분말이 든 무색 투명한 바이알 흰색의 동결건조 분말이 든 무색 투명한 바이알 흰색의 동결건조 분말이 든 무색 투명한 바이알 흰색의 동결건조 분말이 든 무색 투명한 바이알 흰색의 동결건조 분말이 든 무색 투명한 바이알
용해상태 투명도와 완전성 기준에 적합 기준에 적합 기준에 적합 기준에 적합
불용성 이물 불검출 불검출 불검출 불검출
확인시험 TLC 기준에 적합 기준에 적합 기준에 적합 기준에 적합
HPLC 기준에 적합 기준에 적합 기준에 적합 기준에 적합
pH 3.0 ~ 9.0 5.1 5.0 4.9 4.9
정량법 무수 시클로포스파미드
500 mg/바이알
90.0% ~ 110.0%		 101.3% 100.8% 100.5% 100.4%
수분 참고치 0.9% 1.1% 1.0% 1.1%
판정 적합 적합 적합 적합
시험일자 2017.04.17 2017.07.19 2017.10.17 2018.01.17

Claims (16)

  1. 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해(reconstitution)되도록, 40 내지 70℃의 반응용기에서 물 용매에 시클로포스파미드 및 동결건조 보호제로서 D-만니톨을 용해시키는 제1단계;
    이전 단계로부터 수득한 용액을, 멸균하여 준비한 바이알에 충진하는 제2단계; 및
    상기 바이알에 충진한 시클로포스파미드 용액을 동결건조하는 제3단계를 포함하는,
    시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법으로서,
    상기 동결건조 보호제는 무수 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 75 내지 250중량부로 사용하는 것인 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 제약용수는 주사용수(Water for Injection), 음용수(Drinking Water), 정제수(Purified Water), 멸균정제수(Sterile Purified Water), 멸균주사용수(Sterile Water for Injection), 방부제 첨가 주사용수(Bacteriostatic Water for Injection), 증류수(distilled water) 또는 생리식염수(normal saline)인 것인 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 제1단계에서 사용되는 시클로포스파미드는 무수 시클로포스파미드인 경우 물 용매 1 mL에 대해 0.01 내지 0.1 g인 것인 제조방법.
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 시클로포스파미드는 무수물을 기준으로 0.01 내지 0.1 g/mL 농도로, 상기 동결건조 보호제는 무수 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 75 내지 250중량부로 사용하는 것인 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    제1단계 및 제2단계 사이에 멸균하는 단계를 추가로 포함하는 것인 제조방법.
  7. 제1항에 있어서,
    제3단계는 -40℃ 이하로 냉각시켜 유지하고, 200 내지 1000 mTorr로 유지함으로써 수행하는 것인 제조방법.
  8. 제1항에 있어서,
    제3단계 이후 밀봉하는 단계를 추가로 포함하는 것인 제조방법.
  9. 제1항에 있어서,
    40 내지 90% 기공률을 갖는 케이크 형태의 동결건조 조성물을 제공하는 것인 제조방법.
  10. 최종 제조된 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 있어서, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해되도록, 40 내지 70℃의 반응용기에서, 제약용수에 무수 시클로포스파미드의 중량을 기준으로 1 mL의 물 용매에 대해 0.01 내지 0.1 g의 시클로포스파미드, 및 무수 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 75 내지 250중량부의 D-만니톨을 용해시키는 제1단계;
    이전 단계로부터 수득한 용액을 0.2 μm 이하의 막 여과로 멸균하여 주사제용 용기에 분주하는 제2단계;
    이전 단계로부터 용기에 분주한 용액을 동결건조하여 동결건조 케이크를 형성하는 제3단계; 및
    밀봉하는 제4단계를 포함하는,
    시클로포스파미드 동결건조 조성물의 제조방법.
  11. 무수 시클로포스파미드 100중량부를 기준으로 6 내지 8중량부의 물, 및 75 내지 250중량부의 D-만니톨을 포함하는, 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 50 mL의 제약용수 주입시 15초 이내에 99% 이상 용해되는, 주사제용 동결건조 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 동결건조 조성물은 제1항의 방법으로 제조된 것인 동결건조 조성물.
  13. 제11항에 있어서,
    상기 동결건조 조성물은 제10항의 방법으로 제조된 것인 동결건조 조성물.
  14. 제11항에 있어서,
    무수 시클로포스파미드 1000 mg에 대해 50 내지 500 mL의 제약용수를 첨가할 수 있도록 정해진 부피의 주사제용 용기에 이에 상응하는 분량으로 밀봉되어 제공되는 것인 동결건조 조성물.
  15. 40 내지 70℃의 반응용기에서 물 용매에 시클로포스파미드 및 D-만니톨을 용해시키는 제1단계;
    이전 단계로부터 수득한 용액을 동결건조하여 시클로포스파미드 동결건조 조성물을 제조하는 제2단계; 및
    이전 단계로부터 수득한 시클로포스파미드 동결건조 조성물에 무수 시클로포스파미드를 기준으로 1 g 당 20 내지 500 mL의 제약용수를 첨가하여 용해시키는 제3단계를 포함하는,
    시클로포스파미드 주사용제의 제조방법으로서,
    상기 D-만니톨은 무수 시클로포스파미드 100 중량부를 기준으로 75 내지 250중량부로 사용하는 것인 제조방법.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 제3단계는 15초 이내에 달성되는 것인 제조방법.
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