KR102173766B1 - 메틸영양세균을 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물 및 그의 생산 방법 - Google Patents

메틸영양세균을 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물 및 그의 생산 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 메틸영양세균을 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물 및 그의 생산 방법에 관한 것으로서, 상기 1,2-프로필렌글라이콜을 생산하지 못하는 메틸영양세균에 생합성 경로를 구축하여 1,2-프로필렌글라이콜을 생산하므로, 이를 효과적으로 1,2-프로필렌글라이콜의 생산에 이용할 수 있다.

Description

메틸영양세균을 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물 및 그의 생산 방법{Composition for 1,2-propylene glycol production using methylotroph and method for producing thereof}
본 발명은 메틸영양세균을 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물 및 그의 생산 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 자체적으로 1,2-프로필렌글라이콜을 생산하지 못하는 메틸영양세균에 생합성 경로를 구축하여 메탄올을 탄소원으로 하여 1,2-프로필렌글라이콜을 생산하는 방법에 관한 것이다.
1,2-프로필렌글라이콜(propanediol; PDO)은 동결방지, 폴리에스테르 레진(polyester resin), 약제(pharmaceuticals), 화장품(cosmetics), 세제(detergent) 등 다양한 분야의 구성 요소(building block)로 이용되는 물질이다. 이러한 높은 활용가능성으로 인해 미국에서만 연간 1조 lb 이상 판매되며 전세계적으로 수요는 3조 lb/yr 이상으로 추정된다.
한편, 대부분의 1,2-PDO는 석유화학공정을 통해서 생산된다. 수증기 분해(Steam cracking) 생산물인 프로필렌(propylene)이 프로필렌 옥사이드(propylene oxide)로 전환되고 가수분해를 거쳐 최종적으로 1,2-PDO를 생산하기까지 유해한 중간물질과 부산물이 생산된다. 이러한 공정을 보다 지속가능하고 친환경적인 바이오 공정으로 대체하기 위해 다양한 미생물을 이용한 1,2-PDO 생산 시도가 이루어졌다.
대표적인 예로는 대장균(Escherichia coli), 코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum), 사카로아미스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 클로스트리디움 써모사카롤리티쿰(Clostridium thermosaccharolyticum) 등이 있고 대부분 글루코스(glucose)나 글리세롤(glycerol) 등 당(sugar)을 기질로 이용하였다.
당은 그 가격이 계속 상승하고 있으며 식량문제를 야기시킨다는 단점으로 당을 대체할 수 있는 원료에 대한 요구와 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 메탄올은 메탄이 주성분인 셰일가스나 바이오 가스에서 합성 가능한 물질로 이전부터 주목받아 왔으며 당 대비 저렴한 가격으로 경제적이고, 수용액에서 용해도는 무한대에 가까울 정도로 크다.
또한 메탄올은 독성을 지니기 때문에 발효 공정상 발생할 수 있는 다른 미생물에 의한 오염을 줄일 수 있으며, 미네랄 배지에 공급되어 기질로 사용되기 때문에 다운스트리밍 공정에서의 비용을 줄일 수 있다. 따라서 메탄올을 탄소원으로 사용할 수 있는 메틸영양세균(methylotroph)을 이용하여 1,2-PDO를 생산하는 균주를 개발하고자 하였다.
이에 본 발명자들은 메틸로박테리움 엑스토르켄스에 외래 유전자를 도입하여 1,2-프로필렌글라이콜 생합성 경로를 구축한 결과 1,2-프로필렌글라이콜이 생산되는 것을 확인하였다.
이에, 본 발명의 목적은 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하고, 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 18로 표시되는 핵산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추가적으로 포함하는 재조합 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 메틸영양세균(Methylotroph)을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 메틸영양세균을 포함하는 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 다음 단계를 포함하는 1,2-프로필렌글라이콜의 생산 방법이다:
서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 메틸영양세균(Methylotroph)을 형질전환하는 형질전환 단계; 및
상기 형질전환된 메틸영양세균을 배양하는 배양 단계.
본 발명의 또 다른 목적은 1,2-프로필렌글라이콜 생합성 경로가 관련 유전자의 도입으로 유도된 메틸영양세균의 1,2-프로필렌글라이콜의 생산 용도에 관한 것이다.
본 발명은 메틸영양세균을 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물 및 그의 생산 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 방법은 메탄올을 탄소원으로 하여 1,2-프로필렌글라이콜을 생산하는 방법을 나타낸다.
본 발명자들은 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens)에 외래 유전자를 도입하여 1,2-프로필렌글라이콜 생합성 경로를 구축한 결과 1,2-프로필렌글라이콜이 생산되는 것을 확인하였다.
이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
본 발명의 일 양태는 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하고, 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 18로 표시되는 핵산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추가적으로 포함하는 재조합 벡터이다.
서열번호 2는 디하이드록시아세톤 포스페이트(dihydroxyacetone phosphate; DHAP)를 메틸글리옥살(methylglyoxal; MG)로 전환하는 효소인 메틸글리옥살 합성효소(synthase)인 mgsA 코딩 핵산 서열이고, 서열번호 5는 하이드록시아세톤을 1,2-PDO로 전환하는 효소인 글리세롤 탈수소효소(dehydrogenase)인 gldA 코딩 핵산 서열이므로, MG를 하이드록시아세톤으로 전환하는 효소인 메틸글리옥살 환원효소(reductase)를 코딩하는 서열번호 3으로 표시되는 ydjG 코딩 핵산 서열 또는 서열번호 4로 표시되는 yqhD 코딩 핵산 서열을 추가적으로 포함하게 되는 경우 상기 재조합 벡터를 이용하여 하이드록시아세톤 경로를 발현시킬 수 있고, 서열번호 18로 표시되는 락트알데히드를 1,2-PDO로 전환하는 효소인 락트알데히드 환원효소인 fucO 코딩 핵산 서열을 추가적으로 포함하게 되는 경우 상기 재조합 벡터를 이용하여 L-락트알데히드 경로를 발현시킬 수 있다.
상기 용어 "벡터(vector)"는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단을 의미한다. 예를 들어, 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터 및 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노연관 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터를 포함한다. 상기 재조합 벡터로 사용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드 (예를 들면, pSC101, pGV1106, pACYC177, ColE1, pKT230, pME290, pBR322, pUC8/9, pUC6, pBD9, pHC79, pIJ61, pLAFR1, pHV14, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파지 (예를 들면, λgt4λB, λ-Charon, λ△z1 및 M13 등) 또는 바이러스 (예를 들면, SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 재조합 벡터는, 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 상기 발현용 벡터는 당업계에서 식물, 동물 또는 미생물에서 외래의 단백질을 발현하는 데 사용되는 통상의 것을 사용할 수 있다. 상기 재조합 벡터는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있다.
상기 재조합 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 예를 들어, 사용되는 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터 (예를 들어, pLλ 프로모터, CMV 프로모터, trp 프로모터, lac 프로모터, tac 프로모터, T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 벡터에 포함되는 진핵 세포에서 작동하는 복제원점은 f1 복제원점, SV40 복제원점, pMB1 복제원점, 아데노 복제원점, AAV 복제원점 및 BBV 복제원점 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 tk 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.
본 발명의 일 예에서, 재조합 벡터를 숙주세포에 삽입함으로써 형질전환체를 만들 수 있으며, 상기 형질전환체는 상기 재조합 벡터를 적절한 숙주 세포에 도입시킴으로써 얻어진 것일 수 있다.
상기 숙주세포는 상기 발현벡터를 안정되면서 연속적으로 클로닝 또는 발현시킬 수 있는 세포로서 당업계에 공지된 어떠한 숙주 세포도 이용할 수 있다.
본 발명에서 사용된 숙주세포로는 대장균, 효모, 동물세포, 식물세포, 또는 곤충세포 등을 포함할 수 있으며, 원핵세포로는, 예를 들어, E. coli JM109, E. coli BL21, E. coli RR1, E. coli LE392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 츄린겐시스와 같은 바실러스 속 균주, 그리고 살모넬라 티피무리움, 세라티아 마르세슨스 및 다양한 슈도모나스 종과 같은 장내균과 균주 등이 있으며, 진핵 세포에 형질 전환시키는 경우에는 숙주 세포로서, 효모(Saccharomyce cerevisiae), 곤충 세포, 식물 세포 및 동물 세포, 예를 들어, Sp2/0, CHO(Chinese hamster ovary) K1, CHO DG44, PER.C6, W138, BHK, COS7, 293, HepG2, Huh7, 3T3, RIN, MDCK 세포주 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 폴리뉴클레오타이드 또는 이를 포함하는 재조합 벡터의 숙주 세포 내로의 운반(도입)은, 당업계에 널리 알려진 운반 방법을 사용할 수 있다. 상기 운반 방법은 예를 들어, 숙주 세포가 원핵 세포인 경우, CaCl2 방법 또는 전기 천공 방법 등을 사용할 수 있고, 숙주 세포가 진핵 세포인 경우에는, 미세 주입법, 칼슘 포스페이트 침전법, 전기 천공법, 리포좀매개 형질감염법 및 유전자 밤바드먼트 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정하지는 않는다.
상기 형질 전환된 숙주 세포를 선별하는 방법은 선택 표지에 의해 발현되는 표현형을 이용하여, 당업계에 널리 알려진 방법에 따라 용이하게 실시할 수 있다. 예를 들어, 상기 선택 표지가 특정 항생제 내성 유전자인 경우에는, 상기 항생제가 함유된 배지에서 형질전환체를 배양함으로써 형질전환체를 용이하게 선별할 수 있다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 1로 표시되는 핵산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 메틸영양세균(Methylotroph)이다.
본 명세서상의 용어 "메틸영양세균"은 메탄이나 메탄올과 같은 환원성 일원자 탄소분자를 유일한 탄소원 및 에너지원으로 사용하는 세균을 의미한다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 3으로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 4로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 18로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 메틸영양세균은 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens), 메틸로박테리움 수오미엔스(Methylobacterium suomiense), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 메틸로박테리움 어드해시붐(Methylobacterium adhaesivum), 메틸로박테리움 솔라이(Methylobacterium soli) 및 메틸로박테리움 클로로메타니쿰(Methylobacterium chloromethanicum)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 메틸영양세균을 포함하는 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물이다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 3으로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 4로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 18로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 메틸영양세균은 메틸로박테리움 엑스토르켄스, 메틸로박테리움 수오미엔스, 메틸로박테리움 플래타니, 메틸로박테리움 어드해시붐, 메틸로박테리움 솔라이 및 메틸로박테리움 클로로메타니쿰으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 양태는 다음 단계를 포함하는 1,2-프로필렌글라이콜의 생산 방법이다:
서열번호 2로 표시되는 핵산 서열 및 서열번호 5로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 메틸영양세균(Methylotroph)을 형질전환하는 형질전환 단계; 및
상기 형질전환된 메틸영양세균을 배양하는 배양 단계.
상기 재조합 벡터는 서열번호 3으로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 4로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 벡터는 서열번호 18로 표시되는 핵산 서열을 추가적으로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 메틸영양세균은 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens), 메틸로박테리움 수오미엔스(Methylobacterium suomiense), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 메틸로박테리움 어드해시붐(Methylobacterium adhaesivum), 메틸로박테리움 솔라이(Methylobacterium soli) 및 메틸로박테리움 클로로메타니쿰(Methylobacterium chloromethanicum)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 메틸영양세균을 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물 및 그의 생산 방법에 관한 것으로서, 상기 1,2-프로필렌글라이콜을 생산하지 못하는 메틸영양세균에 생합성 경로를 구축하여 1,2-프로필렌글라이콜을 생산하므로, 이를 효과적으로 1,2-프로필렌글라이콜의 생산에 이용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 1,2-PDO 생합성 경로를 보여주는 그래프이다.
도 2는 도입 유전자 없이 벡터만으로 형질도입한 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens) AM1으로부터의 1,2-프로필렌글라이콜 생산량을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 메틸로박테리움 엑스토르켄스 AM1::pMEV::mgsA::yqhD::gldA로부터의 1,2-프로필렌글라이콜 생산량을 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 메틸로박테리움 엑스토르켄스 AM1::pMEV::mgsA::ydjG::gldA로부터의 1,2-프로필렌글라이콜 생산량을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 메틸로박테리움 엑스토르켄스 AM1::pMEV::mgsA::gldA::fucO로부터의 1,2-프로필렌글라이콜 생산량을 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 1,2-프로필렌글라이콜 생합성 경로 구축
재조합 호스트(Host)로는 메탄올을 탄소원으로 이용 가능하며 대사 작용이 알려져 있고 유전자 조작 툴이 개발되어 있는 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens) AM1을 사용하였다. M. extorquens AM1 wild type은 1,2-PDO를 생산하지 못해 외래 유전자를 도입하여 1,2-PDO 생합성 경로를 도 1과 같이 구축하였다. 파란색으로 표시한 화살표가 도입한 경로를 나타낸다.
1,2-PDO 생산경로는 하이드록시아세톤(hydroxyacetone)을 거치는 경로와 L-락트알데히드(lactaldehyde)를 거치는 경로 두 가지 종류가 있다. 어느 경로가 더 1,2-PDO 생산에 적합한지 확인하기 위해 하이드록시아세톤을 거치는 경로를 지닌 재조합 균주 2종과 L- 락트알데히드를 거치는 경로를 지닌 재조합 균주 1종 그리고 대조군(control) 균주 1종(M. extorquens AM1::pMEV)을 제작하였다.
실시예 2: 하이드록시아세톤 경로를 지닌 재조합 균주의 제조
하이드록시아세톤을 거치는 경로는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 유래의 디하이드록시아세톤 포스페이트(dihydroxyacetone phosphate; DHAP)를 메틸글리옥살(methylglyoxal; MG)로 전환하는 효소인 메틸글리옥살 합성효소(synthase)를 코딩하는 mgsA 유전자, 대장균(Escherichia coli) 유래의 MG를 하이드록시아세톤으로 전환하는 효소인 메틸글리옥살 환원효소(reductase)를 코딩하는 yqhD 또는 ydjG 유전자, 대장균 유래의 하이드록시아세톤을 1,2-PDO로 전환하는 효소인 글리세롤 탈수소효소(dehydrogenase)를 코딩하는 gldA 유전자를 pMEV 벡터에 도입하고 이 벡터를 이용하여 과발현하였다. 개발한 균주 2종은 M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::yqhD::gldA 및 M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::ydjG::gldA이다.
관련 벡터의 서열정보는 하기 표 1과 같다.
서열번호 1
명칭 pMEV 벡터 핵산 서열
서열 gaccctttccgacgctcaccgggctggttgccctcgccgctgggctggcggccgtctatggccctgcaaacgcgccagaaacgccgtcgaagccgtgtgcgagacaccgcggccgccggcgttgtggatacctcgcggaaaacttggccctcactgacagatgaggggcggacgttgacacttgaggggccgactcacccggcgcggcgttgacagatgaggggcaggctcgatttcggccggcgacgtggagctggccagcctcgcaaatcggcgaaaacgcctgattttacgcgagtttcccacagatgatgtggacaagcctggggataagtgccctgcggtattgacacttgaggggcgcgactactgacagatgaggggcgcgatccttgacacttgaggggcagagtgctgacagatgaggggcgcacctattgacatttgaggggctgtccacaggcagaaaatccagcatttgcaagggtttccgcccgtttttcggccaccgctaacctgtcttttaacctgcttttaaaccaatatttataaaccttgtttttaaccagggctgcgccctgtgcgcgtgaccgcgcacgccgaaggggggtgcccccccttctcgaaccctcccggcccgctaacgcgggcctcccatccccccaggggctgcgcccctcggccgcgaacggcctcaccccaaaaatggcagccaagctgaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcaccagtactgaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtagcatgcgttgacgacaacggtgcgatgggtcccggccccggtcaagacgatgccaatacgttgcgacactacgccttggcacttttagaattgccttatcgtcctgataagaaatgtccgaccagctaaagacatcgcgtccaatcaaagcctagaaaatataggcgaagggacgctaatgggcccttcacacagaggagagacagcgaattctggtaccttctagactatcgactagttggtacctctgcagaagcttccggagctcttaagccagccccgctgctcccggcatccgcttacagataaaacgaaaggctcagtcgaaagactgggcctttcgttttatacaagccctccaggggagatgcgtggatccttagatctaggcctgaatcgccccatcatccagccagaaagtgagggagccacggttgatgagagctttgttgtaggtggaccagttggtgattttgaacttttgctttgccacggaacggtctgcgttgtcgggaagatgcgtgatctgatccttcaactcagcaaaagttcgatttattcaacaaagccgccgtcccgtcaagtcagcgtaatgctctgccagtgttacaaccaattaaccaattctgattagaaaaactcatcgagcatcaaatgaaactgcaatttattcatatcaggattatcaataccatatttttgaaaaagccgtttctgtaatgaaggagaaaactcaccgaggcagttccataggatggcaagatcctggtatcggtctgcgattccgactcgtccaacatcaatacaacctattaatttcccctcgtcaaaaataaggttatcaagtgagaaatcaccatgagtgacgactgaatccggtgagaatggcaaaagcttatgcatttctttccagacttgttcaacaggccagccattacgctcgtcatcaaaatcactcgcatcaaccaaaccgttattcattcgtgattgcgcctgagcgagacgaaatacgcgatcgctgttaaaaggacaattacaaacaggaatcgaatgcaaccggcgcaggaacactgccagcgcatcaacaatattttcacctgaatcaggatattcttctaatacctggaatgctgttttcccggggatcgcagtggtgagtaaccatgcatcatcaggagtacggataaaatgcttgatggtcggaagaggcataaattccgtcagccagtttagtctgaccatctcatctgtaacatcattggcaacgctacctttgccatgtttcagaaacaactctggcgcatcgggcttcccatacaatcgatagattgtcgcacctgattgcccgacattatcgcgagcccatttatacccatataaatcagcatccatgttggaatttaatcgcggcctcgagcaagacgtttcccgttgaatatggctcataacaccccttgtattactgtttatgtaagcagacagttttattgttcatgatgatatatttttatcttgtgcaatgtaacatcagagattttgagacacaacgtggctttcccccccccccctgcaggtccgacacggggatggatggcgttcccgatcatggtcctgcttgcttcgggtggcatcggaatgccggcgctgcaagcaatgttgtccaggcaggtggatgaggaacgtcaggggcagctgcaaggctcactggcggcgctcaccagcctgacctcgatcgtcggacccctcctcttcacggcgatctatgcggcttctataacaacgtggaacgggtgggcatggattgcaggcgctgccctctacttgctctgcctgccggcgctgcgtcgcgggctttggagcggcgcagggcaacgagccgatcgctgatcgtggaaacgataggcctatgccatgcgggtcaaggcgacttccggcaagctatacgcgccctagaattgtcaattttaatcctctgtttatcggcagttcgtagagcgcgccgtgcgtcccgagcgatactgagcgaagcaagtgcgtcgagcagtgcccgcttgttcctgaaatgccagtaaagcgctggctgctgaacccccagccggaactgaccccacaaggccctagcgtttgcaatgcaccaggtcatcattgacccaggcgtgttccaccaggccgctgcctcgcaactcttcgcaggcttcgccgacctgctcgcgccacttcttcacgcgggtggaatccgatccgcacatgaggcggaaggtttccagcttgagcgggtacggctcccggtgcgagctgaaatagtcgaacatccgtcgggccgtcggcgacagcttgcggtacttctcccatatgaatttcgtgtagtggtcgccagcaaacagcacgacgatttcctcgtcgatcaggacctggcaacgggacgttttcttgccacggtccaggacgcggaagcggtgcagcagcgacaccgattccaggtgcccaacgcggtcggacgtgaagcccatcgccgtcgcctgtaggcgcgacaggcattcctcggccttcgtgtaataccggccattgatcgaccagcccaggtcctggcaaagctcgtagaacgtgaaggtgatcggctcgccgataggggtgcgcttcgcgtactccaacacctgctgccacaccagttcgtcatcgtcggcccgcagctcgacgccggtgtaggtgatcttcacgtccttgttgacgtggaaaatgaccttgttttgcagcgcctcgcgcgggattttcttgttgcgcgtggtgaacagggcagagcgggccgtgtcgtttggcatcgctcgcatcgtgtccggccacggcgcaatatcgaacaaggaaagctgcatttccttgatctgctgcttcgtgtgtttcagcaacgcggcctgcttggcctcgctgacctgttttgccaggtcctcgccggcggtttttcgcttcttggtcgtcatagttcctcgcgtgtcgatggtcatcgacttcgccaaacctgccgcctcctgttcgagacgacgcgaacgctccacggcggccgatggcgcgggcagggcagggggagccagttgcacgctgtcgcgctcgatcttggccgtagcttgctggaccatcgagccgacggactggaaggtttcgcggggcgcacgcatgacggtgcggcttgcgatggtttcggcatcctcggcggaaaaccccgcgtcgatcagttcttgcctgtatgccttccggtcaaacgtccgattcattcaccctccttgcgggattgccccgactcacgccggggcaatgtgcccttattcctgatttgacccgcctggtgccttggtgtccagataatccaccttatcggcaatgaagtcggtcccgtagaccgtctggccgtccttctcgtacttggtattccgaatcttgccctgcacgaataccagctccgcgaagtcgctcttcttgatggagcgcatggggacgtgcttggcaatcacgcgcaccccccggccgttttagcggctaaaaaagtcatggctctgccctcgggcggaccacgcccatcatgaccttgccaagctcgtcctgcttctcttcgatcttcgccagcagggcgaggatcgtggcatcaccgaaccgcgccgtgcgcgggtcgtcggtgagccagagtttcagcaggccgcccaggcggcccaggtcgccattgatgcgggccagctcgcggacgtgctcatagtccacgacgcccgtgattttgtagccctggccgacggccagcaggtaggcctacaggctcatgccggccgccgccgccttttcctcaatcgctcttcgttcgtctggaaggcagtacaccttgataggtgggctgcccttcctggttggcttggtttcatcagccatccgcttgccctcatctgttacgccggcggtagccggccagcctcgcagagcaggattcccgttgagcaccgccaggtgcgaataagggacagtgaagaaggaacacccgctcgcgggtgggcctacttcacctatcctgcccggctgacgccgttggatacaccaaggaaagtctacacgaaccctttggcaaaatcctgtatatcgtgcgaaaaaggatggatataccgaaaaaatcgctataatgaccccgaagcagggttatgcagcggaaaagatccgtc
관련 유전자의 서열정보는 하기 표 2와 같다.
서열번호 명칭 서열
2 mgsA 코딩핵산 서열 ATGAAAATTGCTTTGATCGCGCATGACAAGAAAAAACAGGATATGGTTCAATTTACGACTGCCTATCGGGATATTTTAAAGAATCATGATCTATACGCAACCGGAACCACAGGGTTGAAAATTCATGAGGCGACAGGTCTTCAAATTGAACGTTTTCAATCCGGCCCTTTAGGGGGAGACCAGCAAATCGGTGCACTGATCGCTGCCAATGCACTCGATCTTGTCATTTTTTTGCGCGACCCGCTGACCGCGCAGCCGCATGAACCGGATGTCTCGGCATTAATCCGTTTATGTGATGTGTATTCCATTCCGCTCGCCACAAATATGGGTACTGCGGAAATTCTTGTGCGCACACTTGATGAAGGTGTTTTCGAATTCCGTGACCTTCTTCGGGGAGAAGAGCCGAATGTATAA
3 ydjG 코딩
핵산 서열		 ATGAAAAAGATACCTTTAGGCACAACGGATATTACGCTTTCGCGAATGGGGTTGGGGACATGGGCCATTGGCGGCGGTCCTGCATGGAATGGCGATCTCGATCGGCAAATATGTATTGATACGATTCTTGAAGCCCATCGTTGTGGCATTAATCTGATTGATACTGCGCCAGGATATAACTTTGGCAATAGTGAAGTTATCGTCGGTCAGGCGTTAAAAAAACTGCCCCGTGAACAGGTTGTAGTAGAAACCAAATGCGGCATTGTCTGGGAACGAAAAGGAAGTTTATTCAACAAAGTTGGCGATCGGCAGTTGTATAAAAACCTTTCCCCGGAATCTATCCGCGAAGAGGTAGCAGCGAGCTTGCAACGTCTGGGTATTGATTACATCGATATCTACATGACGCACTGGCAGTCGGTGCCGCCATTTTTTACGCCGATCGCTGAAACTGTCGCAGTGCTTAATGAGTTAAAGTCTGAAGGGAAAATTCGCGCTATAGGCGCTGCTAACGTCGATGCTGACCATATCCGCGAGTATCTGCAATATGGTGAACTGGATATTATTCAGGCGAAATACAGTATCCTCGACCGGGCAATGGAAAACGAACTGCTGCCACTATGTCGTGATAATGGCATTGTGGTTCAGGTTTATTCCCCGCTAGAGCAGGGATTGTTGACCGGCACCATCACTCGTGATTACGTTCCGGGCGGCGCTCGGGCAAATAAAGTCTGGTTCCAGCGTGAAAACATGCTGAAAGTGATTGATATGCTTGAACAGTGGCAGCCACTTTGTGCTCGTTATCAGTGCACAATTCCCACTCTGGCACTGGCGTGGATATTAAAACAGAGTGATTTAATCTCCATTCTTAGTGGGGCTACTGCACCGGAACAGGTACGCGAAAATGTCGCGGCACTGAATATCAACTTATCGGATGCAGACGCAACATTGATGAGGGAAATGGCAGAGGCCCTGGAGCGTTAA
4 yqhD 코딩
핵산 서열		 ATGAACAACTTTAATCTGCACACCCCAACCCGCATTCTGTTTGGTAAAGGCGCAATCGCTGGTTTACGCGAACAAATTCCTCACGATGCTCGCGTATTGATTACCTACGGCGGCGGCAGCGTGAAAAAAACCGGCGTTCTCGATCAAGTTCTGGATGCCCTGAAAGGCATGGACGTGCTGGAATTTGGCGGTATTGAGCCAAACCCGGCTTATGAAACGCTGATGAACGCCGTGAAACTGGTTCGCGAACAGAAAGTGACTTTCCTGCTGGCGGTTGGCGGCGGTTCTGTACTGGACGGCACCAAATTTATCGCCGCAGCGGCTAACTATCCGGAAAATATCGATCCGTGGCACATTCTGCAAACGGGCGGTAAAGAGATTAAAAGCGCCATCCCGATGGGCTGTGTGCTGACGCTGCCAGCAACCGGTTCAGAATCCAACGCAGGCGCGGTGATCTCCCGTAAAACCACAGGCGACAAGCAGGCGTTCCATTCTGCCCATGTTCAGCCGGTATTTGCCGTGCTCGATCCGGTTTATACCTACACCCTGCCGCCGCGTCAGGTGGCTAACGGCGTAGTGGACGCCTTTGTACACACCGTGGAACAGTATGTTACCAAACCGGTTGATGCCAAAATTCAGGACCGTTTCGCAGAAGGCATTTTGCTGACGCTAATCGAAGATGGTCCGAAAGCCCTGAAAGAGCCAGAAAACTACGATGTGCGCGCCAACGTCATGTGGGCGGCGACTCAGGCGCTGAACGGTTTGATTGGCGCTGGCGTACCGCAGGACTGGGCAACGCATATGCTGGGCCACGAACTGACTGCGATGCACGGTCTGGATCACGCGCAAACACTGGCTATCGTCCTGCCTGCACTGTGGAATGAAAAACGCGATACCAAGCGCGCTAAGCTGCTGCAATATGCTGAACGCGTCTGGAACATCACTGAAGGTTCCGATGATGAGCGTATTGACGCCGCGATTGCCGCAACCCGCAATTTCTTTGAGCAATTAGGCGTGCCGACCCACCTCTCCGACTACGGTCTGGACGGCAGCTCCATCCCGGCTTTGCTGAAAAAACTGGAAGAGCACGGCATGACCCAACTGGGCGAAAATCATGACATTACGTTGGATGTCAGCCGCCGTATATACGAAGCCGCCCGCTAA
5 gldA 코딩
핵산 서열		 ATGGACCGCATTATTCAATCACCGGGTAAATACATCCAGGGCGCTGATGTGATTAATCGTCTGGGCGAATACCTGAAGCCGCTGGCAGAACGCTGGTTAGTGGTGGGTGACAAATTTGTTTTAGGTTTTGCTCAATCCACTGTCGAGAAAAGCTTTAAAGATGCTGGACTGGTAGTAGAAATTGCGCCGTTTGGCGGTGAATGTTCGCAAAATGAGATCGACCGTCTGCGTGGCATCGCGGAGACTGCGCAGTGTGGCGCAATTCTCGGTATCGGTGGCGGAAAAACCCTCGATACTGCCAAAGCACTGGCACATTTCATGGGTGTTCCGGTAGCGATCGCACCGACTATCGCCTCTACCGATGCACCGTGCAGCGCATTGTCTGTTATCTACACCGATGAGGGTGAGTTTGACCGCTATCTGCTGTTGCCAAATAACCCGAATATGGTCATTGTCGACACCAAAATCGTCGCTGGCGCACCTGCACGTCTGTTAGCGGCGGGTATCGGCGATGCGCTGGCAACCTGGTTTGAAGCGCGTGCCTGCTCTCGTAGCGGCGCGACCACCATGGCGGGCGGCAAGTGCACCCAGGCTGCGCTGGCACTGGCTGAACTGTGCTACAACACCCTGCTGGAAGAAGGCGAAAAAGCGATGCTTGCTGCCGAACAGCATGTAGTGACTCCGGCGCTGGAGCGCGTGATTGAAGCGAACACCTATTTGAGCGGTGTTGGTTTTGAAAGTGGTGGTCTGGCTGCGGCGCACGCAGTGCATAACGGCCTGACCGCTATCCCGGACGCGCATCACTATTATCACGGTGAAAAAGTGGCATTCGGTACGCTGACGCAGCTGGTTCTGGAAAATGCGCCGGTGGAGGAAATCGAAACCGTAGCTGCCCTTAGCCATGCGGTAGGTTTGCCAATAACTCTCGCTCAACTGGATATTAAAGAAGATGTCCCGGCGAAAATGCGAATTGTGGCAGAAGCGGCATGTGCAGAAGGTGAAACCATTCACAACATGCCTGGCGGCGCGACGCCAGATCAGGTTTACGCCGCTCTGCTGGTAGCCGACCAGTACGGTCAGCGTTTCCTGCAAGAGTGGGAATAA
균주 제작은 Infusion 효소를 이용하여 클로닝(Multi-insert Cloning)하였으며 제한효소로는 EcoR1과 Sac1을 이용하였다. M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::yqhD::gldA 클로닝에 사용한 프라이머는 서열번호 6 내지 11, M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::ydjG::gldA 클로닝에 사용한 프라이머는 서열번호 12 내지 17로, 하기 표 3과 같다. 밑줄 친 서열은 리보솜 결합부위(ribosome binding site; RBS)이다.
서열번호 명칭 서열
6 정방향 프라이머 1 GAGAGACAGCGAATTCCCGCGAGGGAATTCCCAAAGGCCAGGTATTTTATGAAAATTGCTTTGATCGC
7 역방향 프라이머 1 TGGGTCTATTGGGAGTTATACATTCGGCTCTTCTCCC
8 정방향 프라이머 2 CTCCCAATAGACCCAAAGGCGGTAGAGAAATGAACAACTTTAATCTGCACACCC
9 역방향 프라이머 2 TTGCGCTTAGTTGCCTTAGCGGGCGGCTTCGTATATA
10 정방향 프라이머 3 GGCAACTAAGCGCAAAGATCGAGGTAATAAATGGACCGCATTATTCAATCA
11 역방향 프라이머 3 CGGGGCTGGCTTAAGAGCTCTTATTCCCACTCTTGCAGGAA
12 정방향 프라이머 1 GAGAGACAGCGAATTCCCGCGAGGGAATTCCCAAAGGCCAGGTATTTTATGAAAATTGCTTTGATCGC
13 역방향 프라이머 1 CTATATGGTATCCTTTTTTTTCCGATTATACATTCGGCTCTTCTC
14 정방향 프라이머 2 TCGGAAAAAAAAGGATACCATATATGAAAAAGATACCTTTAGGCACAAC
15 역방향 프라이머 2 TTTTTTTTTCTCCCTACTGCGAGCCTTAACGCTCCAGGGCCTC
16 정방향 프라이머 3 GGCTCGCAGTAGGGAGAAAAAAAAAAAGGGGGCGAGGTATATTATGGACCGCATTATTCAATCA
17 역방향 프라이머 3 CGGGGCTGGCTTAAGAGCTCTTATTCCCACTCTTGCAGGAA
실시예 3: L- 락트알데히드 경로를 지닌 재조합 균주의 제조
L-락트알데히드를 거치는 경로는 디하이드록시아세톤 포스페이트를 메틸글리옥살로 전환하는 효소인 메틸글리옥살 합성효소를 코딩하는 mgsA 유전자, MG를 L-락트알데히드로 전환하는 효소인 글리세롤 탈수소효소를 코딩하는 gldA 유전자, 대장균 유래의 L-락트알데히드를 1,2-PDO로 전환하는 효소인 락트알데히드 환원효소를 코딩하는 fucO 유전자를 pMEV 벡터에 도입하고 이 벡터를 이용하여 과발현하였다. 개발한 균주 1종은 M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::gldA::fucO와 같다.
관련 유전자의 서열정보는 하기 표 4와 같다.
서열번호 명칭 서열
18 fucO 코딩 핵산 서열 ATGATGGCTAACAGAATGATTCTGAACGAAACGGCATGGTTTGGTCGGGGTGCTGTTGGGGCTTTAACCGATGAGGTGAAACGCCGTGGTTATCAGAAGGCGCTGATCGTCACCGATAAAACGCTGGTGCAATGCGGCGTGGTGGCGAAAGTGACCGATAAGATGGATGCTGCAGGGCTGGCATGGGCGATTTACGACGGCGTAGTGCCCAACCCAACAATTACTGTCGTCAAAGAAGGGCTCGGTGTATTCCAGAATAGCGGCGCGGATTACCTGATCGCTATTGGTGGTGGTTCTCCACAGGATACTTGTAAAGCGATTGGCATTATCAGCAACAACCCGGAGTTTGCCGATGTGCGTAGCCTGGAAGGGCTTTCCCCGACCAATAAACCCAGTGTACCGATTCTGGCAATTCCTACCACAGCAGGTACTGCGGCAGAAGTGACCATTAACTACGTGATCACTGACGAAGAGAAACGGCGCAAGTTTGTTTGCGTTGATCCGCATGATATCCCGCAGGTGGCGTTTATTGACGCTGACATGATGGATGGTATGCCTCCAGCGCTGAAAGCTGCGACGGGTGTCGATGCGCTCACTCATGCTATTGAGGGGTATATTACCCGTGGCGCGTGGGCGCTAACCGATGCACTGCACATTAAAGCGATTGAAATCATTGCTGGGGCGCTGCGAGGATCGGTTGCTGGTGATAAGGATGCCGGAGAAGAAATGGCGCTCGGGCAGTATGTTGCGGGTATGGGCTTCTCGAATGTTGGGTTAGGGTTGGTGCATGGTATGGCGCATCCACTGGGCGCGTTTTATAACACTCCACACGGTGTTGCGAACGCCATCCTGTTACCGCATGTCATGCGTTATAACGCTGACTTTACCGGTGAGAAGTACCGCGATATCGCGCGCGTTATGGGCGTGAAAGTGGAAGGTATGAGCCTGGAAGAGGCGCGTAATGCCGCTGTTGAAGCGGTGTTTGCTCTCAACCGTGATGTCGGTATTCCGCCACATTTGCGTGATGTTGGTGTACGCAAGGAAGACATTCCGGCACTGGCGCAGGCGGCACTGGATGATGTTTGTACCGGTGGCAACCCGCGTGAAGCAACGCTTGAGGATATTGTAGAGCTTTACCATACCGCCTGGTAA
균주 제작은 Infusion 효소를 이용하여 클로닝(Multi-insert Cloning)하였으며 제한효소로는 EcoR1과 Sac1을 이용하였다. 클로닝에 사용한 프라이머는 하기 표 5와 같다. 밑줄 친 서열은 리보솜 결합부위이다.
서열번호 명칭 서열
19 정방향 프라이머 1 GAGAGACAGCGAATTCCCGCGAGGGAATTCCCAAAGGCCAGGTATTTTATGAAAATTGCTTTGATCGC
20 역방향 프라이머 1 TGGGAATGTACGCGTTTATACATTCGGCTCTTCTC
21 정방향 프라이머 2 ACGCGTACATTCCCAAGTCAAAGGAGGTATAGTTATGGACCGCATTATTCAATCA
22 역방향 프라이머 2 CCTTTATTCGTAATCTTATTCCCACTCTTGCAGGAA
23 정방향 프라이머 3 GATTACGAATAAAGGAGGTTTTTTTATGATGGCTAACAGAATGATTCTG
24 역방향 프라이머 3 CGGGGCTGGCTTAAGAGCTCTTACCAGGCGGTATGGTAAAG
실시예 4: 재조합 균주를 이용한 1,2-프로필렌글라이콜 생산량 확인
실시예 2 및 3에서 제조한 균주들은 500 ml 배플 플라스크에 100 ml의 NMS 배지를 포함하고 30℃, rpm 200의 조건으로 배양하였다. 배지의 조성은 하기 표 6과 같다.
NMS 스탁 용액 조성 Adding amount for ml/1L
MeOH 125mM
MgSO4·7H2O Stock 1g
KNO3 Stock 1g
CaCl2·2H2O Stock 0.228g
3.8% (w/v) solution Fe-EDTA 0.0038g
0.1% (w/v) NaMo·H2O 0.0006g
FeSO4·H2O 0.0005g
ZnSO4·H2O 0.0004g
MnCl2·H2O 0.00002g
CoCl2·H2O 0.00005g
NiCl2·H2O 0.00001g
H3BO3 (boric acid) 0.000015g
EDTA 0.00025g
KH2PO4 0.26g
Na2HPO4·(H2O) 0.62g
Biotin 0.02mg
Folic acid 0.02mg
Thiamine HCl 0.05mg
Ca pantothenate 0.05mg
Vitamin B12 0.001mg
Riboflavin 0.05mg
Nicotiamide 0.05mg
CuSO4 5H2O 2.5mg
M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::yqhD::gldA(이하 Operon1), M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::ydjG::gldA(이하 Operon2), M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::gldA::fucO(이하 Operon3)의 균주를 배양하여 1,2-프로필렌글라이콜의 생산량을 확인하였다. 대조군은 도입 유전자 없이 벡터만 삽입한 M. extorquens AM1::pMEV를 이용하였다.
표 7, 도 2 내지 5에서 확인할 수 있듯이, 1,2-PDO 생합성 경로를 삽입한 재조합 균주 3종 모두 1,2-PDO를 생산하였음을 확인하였다.
MeOH 소모량 1,2-PDO 생산량
대조군 4.4 g 0 mg
Operon1 4.7 g 19.7 mg
Operon2 4.4 g 0.7 mg
Operon3 4.6 g 1.9 mg
특히 M. extorquens AM1::pMEV::mgsA::yqhD::gldA 균주가 19.7 mg/L로 가장 높은 1,2-PDO 생산량을 보였으며 최대 1,2-PDO 생산량은 24.6 mg/L이었다.
<110> Industry-University Cooperation Foundation Sogang University <120> Composition for 1,2-propylene glycol production using methylotroph and method for producing thereof <130> PN180360 <160> 24 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 5730 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 1 gaccctttcc gacgctcacc gggctggttg ccctcgccgc tgggctggcg gccgtctatg 60 gccctgcaaa cgcgccagaa acgccgtcga agccgtgtgc gagacaccgc ggccgccggc 120 gttgtggata cctcgcggaa aacttggccc tcactgacag atgaggggcg gacgttgaca 180 cttgaggggc cgactcaccc ggcgcggcgt tgacagatga ggggcaggct cgatttcggc 240 cggcgacgtg gagctggcca gcctcgcaaa tcggcgaaaa cgcctgattt tacgcgagtt 300 tcccacagat gatgtggaca agcctgggga taagtgccct gcggtattga cacttgaggg 360 gcgcgactac tgacagatga ggggcgcgat ccttgacact tgaggggcag agtgctgaca 420 gatgaggggc gcacctattg acatttgagg ggctgtccac aggcagaaaa tccagcattt 480 gcaagggttt ccgcccgttt ttcggccacc gctaacctgt cttttaacct gcttttaaac 540 caatatttat aaaccttgtt tttaaccagg gctgcgccct gtgcgcgtga ccgcgcacgc 600 cgaagggggg tgccccccct tctcgaaccc tcccggcccg ctaacgcggg cctcccatcc 660 ccccaggggc tgcgcccctc ggccgcgaac ggcctcaccc caaaaatggc agccaagctg 720 accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg 780 tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc accagtactg accccgtaga aaagatcaaa 840 ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca 900 ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta 960 actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc 1020 caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca 1080 gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta 1140 ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag 1200 cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt 1260 cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc 1320 acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac 1380 ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac 1440 gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc 1500 tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtagca tgcgttgacg acaacggtgc 1560 gatgggtccc ggccccggtc aagacgatgc caatacgttg cgacactacg ccttggcact 1620 tttagaattg ccttatcgtc ctgataagaa atgtccgacc agctaaagac atcgcgtcca 1680 atcaaagcct agaaaatata ggcgaaggga cgctaatggg cccttcacac agaggagaga 1740 cagcgaattc tggtaccttc tagactatcg actagttggt acctctgcag aagcttccgg 1800 agctcttaag ccagccccgc tgctcccggc atccgcttac agataaaacg aaaggctcag 1860 tcgaaagact gggcctttcg ttttatacaa gccctccagg ggagatgcgt ggatccttag 1920 atctaggcct gaatcgcccc atcatccagc cagaaagtga gggagccacg gttgatgaga 1980 gctttgttgt aggtggacca gttggtgatt ttgaactttt gctttgccac ggaacggtct 2040 gcgttgtcgg gaagatgcgt gatctgatcc ttcaactcag caaaagttcg atttattcaa 2100 caaagccgcc gtcccgtcaa gtcagcgtaa tgctctgcca gtgttacaac caattaacca 2160 attctgatta gaaaaactca tcgagcatca aatgaaactg caatttattc atatcaggat 2220 tatcaatacc atatttttga aaaagccgtt tctgtaatga aggagaaaac tcaccgaggc 2280 agttccatag gatggcaaga tcctggtatc ggtctgcgat tccgactcgt ccaacatcaa 2340 tacaacctat taatttcccc tcgtcaaaaa taaggttatc aagtgagaaa tcaccatgag 2400 tgacgactga atccggtgag aatggcaaaa gcttatgcat ttctttccag acttgttcaa 2460 caggccagcc attacgctcg tcatcaaaat cactcgcatc aaccaaaccg ttattcattc 2520 gtgattgcgc ctgagcgaga cgaaatacgc gatcgctgtt aaaaggacaa ttacaaacag 2580 gaatcgaatg caaccggcgc aggaacactg ccagcgcatc aacaatattt tcacctgaat 2640 caggatattc ttctaatacc tggaatgctg ttttcccggg gatcgcagtg gtgagtaacc 2700 atgcatcatc aggagtacgg ataaaatgct tgatggtcgg aagaggcata aattccgtca 2760 gccagtttag tctgaccatc tcatctgtaa catcattggc aacgctacct ttgccatgtt 2820 tcagaaacaa ctctggcgca tcgggcttcc catacaatcg atagattgtc gcacctgatt 2880 gcccgacatt atcgcgagcc catttatacc catataaatc agcatccatg ttggaattta 2940 atcgcggcct cgagcaagac gtttcccgtt gaatatggct cataacaccc cttgtattac 3000 tgtttatgta agcagacagt tttattgttc atgatgatat atttttatct tgtgcaatgt 3060 aacatcagag attttgagac acaacgtggc tttccccccc ccccctgcag gtccgacacg 3120 gggatggatg gcgttcccga tcatggtcct gcttgcttcg ggtggcatcg gaatgccggc 3180 gctgcaagca atgttgtcca ggcaggtgga tgaggaacgt caggggcagc tgcaaggctc 3240 actggcggcg ctcaccagcc tgacctcgat cgtcggaccc ctcctcttca cggcgatcta 3300 tgcggcttct ataacaacgt ggaacgggtg ggcatggatt gcaggcgctg ccctctactt 3360 gctctgcctg ccggcgctgc gtcgcgggct ttggagcggc gcagggcaac gagccgatcg 3420 ctgatcgtgg aaacgatagg cctatgccat gcgggtcaag gcgacttccg gcaagctata 3480 cgcgccctag aattgtcaat tttaatcctc tgtttatcgg cagttcgtag agcgcgccgt 3540 gcgtcccgag cgatactgag cgaagcaagt gcgtcgagca gtgcccgctt gttcctgaaa 3600 tgccagtaaa gcgctggctg ctgaaccccc agccggaact gaccccacaa ggccctagcg 3660 tttgcaatgc accaggtcat cattgaccca ggcgtgttcc accaggccgc tgcctcgcaa 3720 ctcttcgcag gcttcgccga cctgctcgcg ccacttcttc acgcgggtgg aatccgatcc 3780 gcacatgagg cggaaggttt ccagcttgag cgggtacggc tcccggtgcg agctgaaata 3840 gtcgaacatc cgtcgggccg tcggcgacag cttgcggtac ttctcccata tgaatttcgt 3900 gtagtggtcg ccagcaaaca gcacgacgat ttcctcgtcg atcaggacct ggcaacggga 3960 cgttttcttg ccacggtcca ggacgcggaa gcggtgcagc agcgacaccg attccaggtg 4020 cccaacgcgg tcggacgtga agcccatcgc cgtcgcctgt aggcgcgaca ggcattcctc 4080 ggccttcgtg taataccggc cattgatcga ccagcccagg tcctggcaaa gctcgtagaa 4140 cgtgaaggtg atcggctcgc cgataggggt gcgcttcgcg tactccaaca cctgctgcca 4200 caccagttcg tcatcgtcgg cccgcagctc gacgccggtg taggtgatct tcacgtcctt 4260 gttgacgtgg aaaatgacct tgttttgcag cgcctcgcgc gggattttct tgttgcgcgt 4320 ggtgaacagg gcagagcggg ccgtgtcgtt tggcatcgct cgcatcgtgt ccggccacgg 4380 cgcaatatcg aacaaggaaa gctgcatttc cttgatctgc tgcttcgtgt gtttcagcaa 4440 cgcggcctgc ttggcctcgc tgacctgttt tgccaggtcc tcgccggcgg tttttcgctt 4500 cttggtcgtc atagttcctc gcgtgtcgat ggtcatcgac ttcgccaaac ctgccgcctc 4560 ctgttcgaga cgacgcgaac gctccacggc ggccgatggc gcgggcaggg cagggggagc 4620 cagttgcacg ctgtcgcgct cgatcttggc cgtagcttgc tggaccatcg agccgacgga 4680 ctggaaggtt tcgcggggcg cacgcatgac ggtgcggctt gcgatggttt cggcatcctc 4740 ggcggaaaac cccgcgtcga tcagttcttg cctgtatgcc ttccggtcaa acgtccgatt 4800 cattcaccct ccttgcggga ttgccccgac tcacgccggg gcaatgtgcc cttattcctg 4860 atttgacccg cctggtgcct tggtgtccag ataatccacc ttatcggcaa tgaagtcggt 4920 cccgtagacc gtctggccgt ccttctcgta cttggtattc cgaatcttgc cctgcacgaa 4980 taccagctcc gcgaagtcgc tcttcttgat ggagcgcatg gggacgtgct tggcaatcac 5040 gcgcaccccc cggccgtttt agcggctaaa aaagtcatgg ctctgccctc gggcggacca 5100 cgcccatcat gaccttgcca agctcgtcct gcttctcttc gatcttcgcc agcagggcga 5160 ggatcgtggc atcaccgaac cgcgccgtgc gcgggtcgtc ggtgagccag agtttcagca 5220 ggccgcccag gcggcccagg tcgccattga tgcgggccag ctcgcggacg tgctcatagt 5280 ccacgacgcc cgtgattttg tagccctggc cgacggccag caggtaggcc tacaggctca 5340 tgccggccgc cgccgccttt tcctcaatcg ctcttcgttc gtctggaagg cagtacacct 5400 tgataggtgg gctgcccttc ctggttggct tggtttcatc agccatccgc ttgccctcat 5460 ctgttacgcc ggcggtagcc ggccagcctc gcagagcagg attcccgttg agcaccgcca 5520 ggtgcgaata agggacagtg aagaaggaac acccgctcgc gggtgggcct acttcaccta 5580 tcctgcccgg ctgacgccgt tggatacacc aaggaaagtc tacacgaacc ctttggcaaa 5640 atcctgtata tcgtgcgaaa aaggatggat ataccgaaaa aatcgctata atgaccccga 5700 agcagggtta tgcagcggaa aagatccgtc 5730 <210> 2 <211> 414 <212> DNA <213> Bacillus subtilis <400> 2 atgaaaattg ctttgatcgc gcatgacaag aaaaaacagg atatggttca atttacgact 60 gcctatcggg atattttaaa gaatcatgat ctatacgcaa ccggaaccac agggttgaaa 120 attcatgagg cgacaggtct tcaaattgaa cgttttcaat ccggcccttt agggggagac 180 cagcaaatcg gtgcactgat cgctgccaat gcactcgatc ttgtcatttt tttgcgcgac 240 ccgctgaccg cgcagccgca tgaaccggat gtctcggcat taatccgttt atgtgatgtg 300 tattccattc cgctcgccac aaatatgggt actgcggaaa ttcttgtgcg cacacttgat 360 gaaggtgttt tcgaattccg tgaccttctt cggggagaag agccgaatgt ataa 414 <210> 3 <211> 981 <212> DNA <213> Escherichia coli <400> 3 atgaaaaaga tacctttagg cacaacggat attacgcttt cgcgaatggg gttggggaca 60 tgggccattg gcggcggtcc tgcatggaat ggcgatctcg atcggcaaat atgtattgat 120 acgattcttg aagcccatcg ttgtggcatt aatctgattg atactgcgcc aggatataac 180 tttggcaata gtgaagttat cgtcggtcag gcgttaaaaa aactgccccg tgaacaggtt 240 gtagtagaaa ccaaatgcgg cattgtctgg gaacgaaaag gaagtttatt caacaaagtt 300 ggcgatcggc agttgtataa aaacctttcc ccggaatcta tccgcgaaga ggtagcagcg 360 agcttgcaac gtctgggtat tgattacatc gatatctaca tgacgcactg gcagtcggtg 420 ccgccatttt ttacgccgat cgctgaaact gtcgcagtgc ttaatgagtt aaagtctgaa 480 gggaaaattc gcgctatagg cgctgctaac gtcgatgctg accatatccg cgagtatctg 540 caatatggtg aactggatat tattcaggcg aaatacagta tcctcgaccg ggcaatggaa 600 aacgaactgc tgccactatg tcgtgataat ggcattgtgg ttcaggttta ttccccgcta 660 gagcagggat tgttgaccgg caccatcact cgtgattacg ttccgggcgg cgctcgggca 720 aataaagtct ggttccagcg tgaaaacatg ctgaaagtga ttgatatgct tgaacagtgg 780 cagccacttt gtgctcgtta tcagtgcaca attcccactc tggcactggc gtggatatta 840 aaacagagtg atttaatctc cattcttagt ggggctactg caccggaaca ggtacgcgaa 900 aatgtcgcgg cactgaatat caacttatcg gatgcagacg caacattgat gagggaaatg 960 gcagaggccc tggagcgtta a 981 <210> 4 <211> 1164 <212> DNA <213> Escherichia coli <400> 4 atgaacaact ttaatctgca caccccaacc cgcattctgt ttggtaaagg cgcaatcgct 60 ggtttacgcg aacaaattcc tcacgatgct cgcgtattga ttacctacgg cggcggcagc 120 gtgaaaaaaa ccggcgttct cgatcaagtt ctggatgccc tgaaaggcat ggacgtgctg 180 gaatttggcg gtattgagcc aaacccggct tatgaaacgc tgatgaacgc cgtgaaactg 240 gttcgcgaac agaaagtgac tttcctgctg gcggttggcg gcggttctgt actggacggc 300 accaaattta tcgccgcagc ggctaactat ccggaaaata tcgatccgtg gcacattctg 360 caaacgggcg gtaaagagat taaaagcgcc atcccgatgg gctgtgtgct gacgctgcca 420 gcaaccggtt cagaatccaa cgcaggcgcg gtgatctccc gtaaaaccac aggcgacaag 480 caggcgttcc attctgccca tgttcagccg gtatttgccg tgctcgatcc ggtttatacc 540 tacaccctgc cgccgcgtca ggtggctaac ggcgtagtgg acgcctttgt acacaccgtg 600 gaacagtatg ttaccaaacc ggttgatgcc aaaattcagg accgtttcgc agaaggcatt 660 ttgctgacgc taatcgaaga tggtccgaaa gccctgaaag agccagaaaa ctacgatgtg 720 cgcgccaacg tcatgtgggc ggcgactcag gcgctgaacg gtttgattgg cgctggcgta 780 ccgcaggact gggcaacgca tatgctgggc cacgaactga ctgcgatgca cggtctggat 840 cacgcgcaaa cactggctat cgtcctgcct gcactgtgga atgaaaaacg cgataccaag 900 cgcgctaagc tgctgcaata tgctgaacgc gtctggaaca tcactgaagg ttccgatgat 960 gagcgtattg acgccgcgat tgccgcaacc cgcaatttct ttgagcaatt aggcgtgccg 1020 acccacctct ccgactacgg tctggacggc agctccatcc cggctttgct gaaaaaactg 1080 gaagagcacg gcatgaccca actgggcgaa aatcatgaca ttacgttgga tgtcagccgc 1140 cgtatatacg aagccgcccg ctaa 1164 <210> 5 <211> 1104 <212> DNA <213> Escherichia coli <400> 5 atggaccgca ttattcaatc accgggtaaa tacatccagg gcgctgatgt gattaatcgt 60 ctgggcgaat acctgaagcc gctggcagaa cgctggttag tggtgggtga caaatttgtt 120 ttaggttttg ctcaatccac tgtcgagaaa agctttaaag atgctggact ggtagtagaa 180 attgcgccgt ttggcggtga atgttcgcaa aatgagatcg accgtctgcg tggcatcgcg 240 gagactgcgc agtgtggcgc aattctcggt atcggtggcg gaaaaaccct cgatactgcc 300 aaagcactgg cacatttcat gggtgttccg gtagcgatcg caccgactat cgcctctacc 360 gatgcaccgt gcagcgcatt gtctgttatc tacaccgatg agggtgagtt tgaccgctat 420 ctgctgttgc caaataaccc gaatatggtc attgtcgaca ccaaaatcgt cgctggcgca 480 cctgcacgtc tgttagcggc gggtatcggc gatgcgctgg caacctggtt tgaagcgcgt 540 gcctgctctc gtagcggcgc gaccaccatg gcgggcggca agtgcaccca ggctgcgctg 600 gcactggctg aactgtgcta caacaccctg ctggaagaag gcgaaaaagc gatgcttgct 660 gccgaacagc atgtagtgac tccggcgctg gagcgcgtga ttgaagcgaa cacctatttg 720 agcggtgttg gttttgaaag tggtggtctg gctgcggcgc acgcagtgca taacggcctg 780 accgctatcc cggacgcgca tcactattat cacggtgaaa aagtggcatt cggtacgctg 840 acgcagctgg ttctggaaaa tgcgccggtg gaggaaatcg aaaccgtagc tgcccttagc 900 catgcggtag gtttgccaat aactctcgct caactggata ttaaagaaga tgtcccggcg 960 aaaatgcgaa ttgtggcaga agcggcatgt gcagaaggtg aaaccattca caacatgcct 1020 ggcggcgcga cgccagatca ggtttacgcc gctctgctgg tagccgacca gtacggtcag 1080 cgtttcctgc aagagtggga ataa 1104 <210> 6 <211> 68 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 6 gagagacagc gaattcccgc gagggaattc ccaaaggcca ggtattttat gaaaattgct 60 ttgatcgc 68 <210> 7 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 7 tgggtctatt gggagttata cattcggctc ttctccc 37 <210> 8 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 8 ctcccaatag acccaaaggc ggtagagaaa tgaacaactt taatctgcac accc 54 <210> 9 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 9 ttgcgcttag ttgccttagc gggcggcttc gtatata 37 <210> 10 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 10 ggcaactaag cgcaaagatc gaggtaataa atggaccgca ttattcaatc a 51 <210> 11 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 11 cggggctggc ttaagagctc ttattcccac tcttgcagga a 41 <210> 12 <211> 68 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 12 gagagacagc gaattcccgc gagggaattc ccaaaggcca ggtattttat gaaaattgct 60 ttgatcgc 68 <210> 13 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 13 ctatatggta tccttttttt tccgattata cattcggctc ttctc 45 <210> 14 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 14 tcggaaaaaa aaggatacca tatatgaaaa agataccttt aggcacaac 49 <210> 15 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 15 tttttttttc tccctactgc gagccttaac gctccagggc ctc 43 <210> 16 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 16 ggctcgcagt agggagaaaa aaaaaaaggg ggcgaggtat attatggacc gcattattca 60 atca 64 <210> 17 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 17 cggggctggc ttaagagctc ttattcccac tcttgcagga a 41 <210> 18 <211> 1152 <212> DNA <213> Escherichia coli <400> 18 atgatggcta acagaatgat tctgaacgaa acggcatggt ttggtcgggg tgctgttggg 60 gctttaaccg atgaggtgaa acgccgtggt tatcagaagg cgctgatcgt caccgataaa 120 acgctggtgc aatgcggcgt ggtggcgaaa gtgaccgata agatggatgc tgcagggctg 180 gcatgggcga tttacgacgg cgtagtgccc aacccaacaa ttactgtcgt caaagaaggg 240 ctcggtgtat tccagaatag cggcgcggat tacctgatcg ctattggtgg tggttctcca 300 caggatactt gtaaagcgat tggcattatc agcaacaacc cggagtttgc cgatgtgcgt 360 agcctggaag ggctttcccc gaccaataaa cccagtgtac cgattctggc aattcctacc 420 acagcaggta ctgcggcaga agtgaccatt aactacgtga tcactgacga agagaaacgg 480 cgcaagtttg tttgcgttga tccgcatgat atcccgcagg tggcgtttat tgacgctgac 540 atgatggatg gtatgcctcc agcgctgaaa gctgcgacgg gtgtcgatgc gctcactcat 600 gctattgagg ggtatattac ccgtggcgcg tgggcgctaa ccgatgcact gcacattaaa 660 gcgattgaaa tcattgctgg ggcgctgcga ggatcggttg ctggtgataa ggatgccgga 720 gaagaaatgg cgctcgggca gtatgttgcg ggtatgggct tctcgaatgt tgggttaggg 780 ttggtgcatg gtatggcgca tccactgggc gcgttttata acactccaca cggtgttgcg 840 aacgccatcc tgttaccgca tgtcatgcgt tataacgctg actttaccgg tgagaagtac 900 cgcgatatcg cgcgcgttat gggcgtgaaa gtggaaggta tgagcctgga agaggcgcgt 960 aatgccgctg ttgaagcggt gtttgctctc aaccgtgatg tcggtattcc gccacatttg 1020 cgtgatgttg gtgtacgcaa ggaagacatt ccggcactgg cgcaggcggc actggatgat 1080 gtttgtaccg gtggcaaccc gcgtgaagca acgcttgagg atattgtaga gctttaccat 1140 accgcctggt aa 1152 <210> 19 <211> 68 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 19 gagagacagc gaattcccgc gagggaattc ccaaaggcca ggtattttat gaaaattgct 60 ttgatcgc 68 <210> 20 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 20 tgggaatgta cgcgtttata cattcggctc ttctc 35 <210> 21 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 21 acgcgtacat tcccaagtca aaggaggtat agttatggac cgcattattc aatca 55 <210> 22 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 22 cctttattcg taatcttatt cccactcttg caggaa 36 <210> 23 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 23 gattacgaat aaaggaggtt tttttatgat ggctaacaga atgattctg 49 <210> 24 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial sequences <400> 24 cggggctggc ttaagagctc ttaccaggcg gtatggtaaa g 41

Claims (13)

  1. 삭제
  2. 메틸글리옥살 합성효소(methylglyoxal synthase; mgsA)를 코딩하는 핵산 서열, 글리세롤 탈수소효소(glycerol dehydrogenase; gldA)를 코딩하는 핵산 서열 및 메틸글리옥살 환원효소(methylglyoxal reductase; yqhD)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 메틸영양세균(Methylotroph)에 있어서,
    상기 메틸글리옥살 합성효소는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 유래인 것인, 메틸영양세균.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제2항에 있어서, 상기 메틸영양세균은 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens), 메틸로박테리움 수오미엔스(Methylobacterium suomiense), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 메틸로박테리움 어드해시붐(Methylobacterium adhaesivum), 메틸로박테리움 솔라이(Methylobacterium soli) 및 메틸로박테리움 클로로메타니쿰(Methylobacterium chloromethanicum)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것인, 메틸영양세균.
  6. 메틸글리옥살 합성효소(methylglyoxal synthase; mgsA)를 코딩하는 핵산 서열, 글리세롤 탈수소효소(glycerol dehydrogenase; gldA)를 코딩하는 핵산 서열 및 메틸글리옥살 환원효소(methylglyoxal reductase; yqhD)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 메틸영양세균; 및 NMS 배지를 포함하는 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물에 있어서,
    상기 메틸글리옥살 합성효소는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 유래인 것인, 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제6항에 있어서, 상기 메틸영양세균은 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens), 메틸로박테리움 수오미엔스(Methylobacterium suomiense), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 메틸로박테리움 어드해시붐(Methylobacterium adhaesivum), 메틸로박테리움 솔라이(Methylobacterium soli) 및 메틸로박테리움 클로로메타니쿰(Methylobacterium chloromethanicum)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것인, 1,2-프로필렌글라이콜 생산용 조성물.
  10. 다음 단계를 포함하는 1,2-프로필렌글라이콜의 생산 방법:
    메틸글리옥살 합성효소(methylglyoxal synthase; mgsA)를 코딩하는 핵산 서열, 글리세롤 탈수소효소(glycerol dehydrogenase; gldA)를 코딩하는 핵산 서열 및 메틸글리옥살 환원효소(methylglyoxal reductase; yqhD)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 벡터로 메틸영양세균(Methylotroph)을 형질전환하는 형질전환 단계; 및
    상기 형질전환된 메틸영양세균을 NMS 배지에 배양하는 배양 단계
    에 있어서,
    상기 메틸글리옥살 합성효소는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 유래인 것인, 1,2-프로필렌글라이콜의 생산 방법.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 제10항에 있어서, 상기 메틸영양세균은 메틸로박테리움 엑스토르켄스(Methylobacterium extorquens), 메틸로박테리움 수오미엔스(Methylobacterium suomiense), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 메틸로박테리움 어드해시붐(Methylobacterium adhaesivum), 메틸로박테리움 솔라이(Methylobacterium soli) 및 메틸로박테리움 클로로메타니쿰(Methylobacterium chloromethanicum)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것인, 1,2-프로필렌글라이콜의 생산 방법.
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