KR102172403B1

KR102172403B1 - Ｃａｉｘ 계층화 기반 암 치료

Info

Publication number: KR102172403B1
Application number: KR1020157025649A
Authority: KR
Inventors: 올라프 빌헬름; 폴 베반; 바바라 팔; 피아 클룁퍼
Original assignee: 빌렉스 아게
Priority date: 2013-02-22
Filing date: 2014-02-21
Publication date: 2020-11-02
Also published as: MX363845B; IL240499A0; AU2014220705A1; CA2901531A1; BR112015020061A8; EP2958589A1; CA2901531C; US10620208B2; AU2014220705B2; KR20150119406A; IL240499B; CN105377295A; ZA201505937B; US20160002350A1; SG11201506635TA; NZ712023A; MX2015010740A; HK1215195A1; WO2014128258A1; BR112015020061A2

Abstract

본 발명은 암의 치료의 용도를 위한 탄산탈수효소 IX(carbonic anhydrase IX: CAIX) 표적 화합물로서, 상기 용도는 CAIX 발현을 정량화하는 것 및 CAIX 발현에 기반한 CAIX 점수의 결정을 포함한다. 본 발명은 또한, CAIX 발현을 정량화하는 단계, 및 CAIX 점수를 결정하는 단계를 포함하는 암 질환을 진단하고, 예측하고, 및/또는 분류하는 방법에 관한 것이다.

Description

ＣＡＩＸ 계층화 기반 암 치료{CAIX stratification based cancer treatment}

막통과 단백질 탄산탈수소효소 IX(CAIX)는 pH의 감소를 유도하는, 탄산으로의 이산화탄소의 가역적 수화를 촉매하는 능력을 공유하는 큰 패밀리의 탄산탈수소효소의 구성원이다(Opavsky R, et al., Genomics 1996, 33:480-487). CAIX 유전자 발현의 상향 조절은 저산소 유도성 인자-1 알파(hypoxia inducible factor-1 alpha:HIF-1α)에 의한 직접적 전사 활성을 통해 저산소에 반응하여 일어나고, 저산소 세포, 특히 종양의 저산소 영역 내의 산성 환경을 감지하고 유지하는데 관여하는 것으로 여겨진다(Wykoff et al., Cancer Res 2000, 60: 7075-708; Svastova et al., FEBS Letters 2004 577: 439-445.).

G250 항원은 신장 세포 암종과 같은 다수의 암종과 밀접하게 관련되어 있다. G250 항원은 신장 암-관련 항원으로 처음으로 밝혀졌다(WO 88/08854). 이후에, 이것은 CAIX로도 불려지는, 종양-관련 항원 MN, 탄산탈수소 활성을 갖는 세포 표면 항원과 동일하다는 것이 밝혀졌다.

정상 CAIX 발현은 pH 조절의 생리학적 기능을 보유하는 위, 장 및 담관 점막에서 나타난다. 이의 정상적 발현 이외에, CAIX 발현은 자궁경부 암종, 식도 암종, 대장암종, 폐암종, 췌장암종, 담관암종, 및 신장 투명 세포 암종(RCC)을 포함하는 다양한 종양에서 발견된다.

그러므로, CAIX에 대한 항체는 암 치료요법에 적용될 수 있다. 항-G250 항체는 예를 들면, EP 637336, WO 93/18152, WO 95/34650, WO 00/24913, WO 02/063010, WO 04/025302, WO 05/037083, WO 2011/139375 및 그의 외국대응 출원에서 기재된다. 추가적으로, WO 002/062972는 단일클론항체 G250을 생산하는 하이브리도마 세포주 DSM ACC 2526을 기재한다. 단일클론항체 G250은 바람직하게는 신장 세포 암종(RCC)의 막 상에서 발현되나, 정상 근위 세뇨관 상피(proximal tubular epithelium)에서는 발현되지 않는 항원을 인식한다. G250 항체는 MN 항원(참고로 예를 들면, WO 93/18152) 또는 CAIX(탄산탈수소효소 IX)로도 불리는 항원 G250과 결합한다.

CAIX 발현을 결정하는 방법은 통상의 기술자에게 알려져 있고, 예를 들면, Bui et al., Clinical Cancer Research 2003, 9:802-811, Atkins et al., Clin. Cancer Res 2005, 11:3714-3721, US 5,989,838, US 6,004,535, US 6,093,548, US 7,524,634에 기재된 조직 절편의 면역조직화학적 염색을 포함하나 그에 한정되지 않는다. 이러한 방법은 인간 신장 투명 세포 암종 예측에 사용될 수 있다.

본 발명의 목적은 CAIX-관련된 암 질환을 특징짓고, CAIX 표적 화합물이 얼마나 효과적인 또는 성공적인 치료일지 예측하는 방법을 제공하는 것이었다. 본 발명에 따르면, 이 목적은 신규한 CAIX 점수의 정의, 및 암의 치료, 진단, 예측, 및 분류에서의 그의 용도에 의해 달성된다.

그러므로, 본 발명의 제1 측면은 암 치료의 용도를 위한 탄산탈수효소 IX(carbonic anhydrase IX: CAIX) 표적 화합물로서, 상기 용도는 치료될 개체로부터 제공된 하나 이상의 종양 시료의 CAIX 발현을 정량화하는 단계, 상기 종양 시료의 CAIX 발현에 기반하여 CAIX 점수를 결정하는 단계, 및 미리 정의된 CAIX 점수에 도달한 경우 개체를 치료하는 단계를 포함하는 것에 관한 것이다. 그러므로, 치료될 암은 미리 정의된 CAIX 점수를 특징으로 한다.

본 발명의 관점에 있어서, CAIX 점수는 바람직하게는 종양 세포 크기 및 염색 강도의 조합에 의해 기술된 CAIX 발현에 기반하여 각각 결정되거나 계산된다. 즉, 염색된 종양 세포의 염색 강도 뿐만 아니라 CAIX 항원 발현 종양 세포의 양/퍼센트 둘 모두 본 명세서에서 사용된 CAIX 점수에서 고려된다. CAIX 발현은 항원 밀도의 측정, 바람직하게는 암, 바람직하게는 RCC 또는 ccRCC로 고통받는 환자의 종양 세포 내의 CAIX 폴리펩티드 밀도의 측정으로 고려될 수 있다. CAIX 점수는 시료 내 CAIX와 같은 마커의 면역 반응성의 양을 설명하는 값이다. 상기 점수는 특정 범위의 강도에서 염색된 세포의 염색 강도 및 퍼센트를 둘 다 고려한다. 상기 점수는 시료 내(예를 들면, ccRCC 암의 조직 절편)의 주어진 염색 강도(0-100)에서 염색된 퍼센트 세포 및 염색 강도(0-3)의 곱을 더함으로써 결정된다. 바람직하게는 상기 점수는 특정 구획(compartment), 예를 들면, 세포질, 막, 핵에 대해서 제공될 수 있다. 점수는 또한 염색 강도에 대한 0-4의 숫자 등급(numeric scale)을 활용하여 결정될 수 있다. 상기 점수는 0-3의 염색 강도를 갖는 점수의 경우의 0 내지 300 대신에 0 내지 400의 범위 내에 있다(McClelland et al., Cancer Res. 50:3545-3550, 1990)

특히, CAIX 점수는 다음의 식에 의해 결정되고 및/또는 계산된다:

CAIX 점수 = (0 x 염색 강도를 갖지 않는 생존 종양 세포의 퍼센트) + (1 x 희미한 염색 강도를 갖는 생존 종양 세포의 퍼센트) + (2 x 중간의 염색 강도를 갖는 생존 종양 세포의 퍼센트) + (3 x 강한 염색 강도를 갖는 생존 종양 세포의 퍼센트). 예를 들면, 1의 염색 강도 10%, 2의 염색 강도 20%, 및 3의 염색 20%, 염색되지 않은 세포 20%를 갖는 시료는 (1 x 10) + (2 x 20) + (3 x 20) + (0 x 50) = 110의 점수를 갖거나, 만약 계산된다면 (1 x 10/100) + (2 x 20/100) + (3 x 20/100) + (0 x 50/100) = 1.1이다.

CAIX 점수는 0 (염색 없음) 내지 300(3+의 강도 등급을 갖는 생존 종양 세포 100%), 또는 0 내지 3, 바람직하게는 0.0 내지 3.0 사이의 어느 값을 취할 수 있다.

본 발명의 맥락에 있어서, "종양 세포 크기(tumor cell extent)", 또는 CAIX항원 발현 종양 세포의 양은 생존 종양 세포 및 그들의 염색 강도의 퍼센트 비율의 표시에 의해 본 발명에 따른 CAIX 점수 수학식에서 고려된다. 생존 종양 세포는 통상의 기술자에게 알려진 방법에 의해 계수되거나 결정될 수 있다. 예를 들면, 세포의 수 및/또는 각각의 퍼센트 비율은 시각적 계수 또는 자동 영상화 시스템과 같은 컴퓨터-보조 프로그램(computer assisted programs)에 의해 결정될 수 있다.

CAIX 점수의 일부로서 종양세포 크기는 4-타이어(four-tired)의 등급 인자(0, 1+, 2+ 및 3+)로 등급이 매겨진다. 등급 인자 0은 대조군 시료 대비 CAIX 염색으로부터 유래되고, 및 CAIX 발현의 결핍을 나타낸다. 등급 인자 1+ 내지 3+는 간신히 인지가능한 것부터 강한 것까지의 종양 세포 염색을 나타내는 CAIX 발현 종양 세포의 평균 시료로부터 유래한다. 일반적으로 기술분야의 통상의 조직학자 또는 병리학자는 눈으로 통상적으로 방법에 의해 분류를 해낼 수 있다(Cregger et al., Arch. Pathol. Lab. Med., 2006, 130: 1026-1030). 염색 강도의 절대적인 값은 예를 들면, 적용된 염색 시약, 염색될 종양 조직 등에 의존할 수 있다. 그러나, 그 중에서도 이 문제는 등급 +1 내지 +3을 포함하는 상기 등급 시스템을 사용하여 극복될 수 있다.

종양 세포에서의 염색 강도는 간신히 인지가능한 염색부터 강한 염색으로 갈수록 거의 비례적으로 증가한다. 염색 강도의 이러한 선형 증가와 함께 CAIX를 발현하는 종양 세포는 각 군에 대해 동일한 염색 강도의 각각의 증가를 갖는 1+ 내지 3+의 등급을 갖는 세 개의 그룹으로 나누어진다. 즉, 생존 종양 세포는 희미한 또는 간신히 인지가능한 염색 강도(등급 1+), 중간 염색 강도 (2+) 및 강한 염색 강도(3+)를 갖는 세포로 분리된다.

점수 시스템이 기준 시스템을 정의하는 종양 세포의 평균 시료에서 특정 염색 시약 및 특정 종양 세포에 대해 확립되고 나면, 이것은 종양 세포의 추가적인 시료에 대해 사용될 수 있고, 즉, 각각의 CAIX 점수 시스템은 당연히 종양 세포의 각 시료에 대해 확립될 필요가 없다.

본 발명에 따른 "염색 강도(staining intensity)"는 각각의 4-타이어 등급 인자 내의 종양 세포의 퍼센트를 의미한다. 퍼센트는 0% 내지 100%일 수 있다. 염색의 강도는 등급 1+에 있어서 희미한 또는 간신히 인지가능한 막 염색을 나타내는 세포의 퍼센트, 등급 2+에 있어서 중간 막 염색을 나타내는 종양 세포의 퍼센트, 등급 3+에 있어서 중간 막 염색을 나타내는 종양 세포의 퍼센트로서, 각 조직 시료에 대해 결정된다(표 1).

염색 강도

	등급
희미한/간신히 인지가능한 막 염색을 나타내는 종양 세포의 %	1+
중간 막 염색을 나타내는 종양 세포의 %	2+
강한 막 염색을 나타내는 종양 세포의 %	3+

각각의 등급 군에 있어서 CAIX를 발현하는 종양 세포의 분류는 시료의 염색 강도를 CAIX 점수 시스템이 기반하는 기준 종양 시료(reference tumor sample)와 비교함으로써 용이하게 이루어질 수 있다. 그러므로, 종양 세포의 시료는 세 개의 등급 군을 모두 포함하지 않는 것이 가능하다.

통상의 기술자는 염색 강도 비교의 목적에 대하여 염색 강도를 결정하거나, 점수 시스템을 정의하거나, 또는 상이한 시료의 세포를 비교하거나 또는 점수 시스템으로 세포를 분류하는 방법을 알고 있다(Cregger et al., 1026, Arch. Pathol. Lab. Med., vol. 130, July 2006 참고). 염색 강도의 결정 또는 점수 시스템으로의 분류는 수동으로 또는 컴퓨터-보조 프로그램 또는 다른 적합한 방법에 의해 수행될 수 있다. 바람직한 구체예에 있어서, 점수 시스템은 정량적 및 객관적 결과를 제공하는 장치가 조합된 표준화된 대조군 종양 어세이를 사용하여 적용될 수 있다.

40% 중간 및 60% 강한 염색 강도를 갖는 100% CAIX 항원 규모 발현에 대해 CAIX 점수를 계산하는 예를 다음에서 나타낼 것이다. 상이한 규모의 CAIX 발현에 대한 추가적인 예, 상이한 내용의 염색 강도 및 각각의 점수는 표 2에 나타낸다.

CAIX 점수의 계산:

40% 중간 & 60% 강한 염색 강도를 갖는 100% CAIX 항원 규모 발현

(1*(0/100)) + (2*(40/100)) + (3*(60/100)

0 + 0.8 + 1.8 = 2.6

CAIX 발현 규모	1+	2+	3+	점수
100	0	40	60	2.60
100	10	60	30	2.20
100	5	25	70	2.65
100	50	30	20	1.70
100	0	10	90	2.90

10	0	100	0	0.20
10	100	0	0	0.10

50	100	0	0	0.50
50	30	30	40	1.05
50	50	30	20	0.85
50	20	70	10	0.95
50	70	20	10	0.70

본 발명에 따라서, CAIX 점수는 결정되어야 하는 CAIX 발현에 기반한다. 여기서 용어 CAIX 발현 및 CAIX 단백질 발현은 상호 호환적으로 사용된다. 바람직하게는 용어 CAIX 발현은 발현된 CAIX 단백질의 양과 관련된다. 그러므로 본 발명의 추가적인 측면은 암 치료의 용도를 위한 CAIX 표적 화합물로서, 상기 용도는 치료될 개체로부터 제공된 하나 이상의 종양 시료에서의 CAIX 단백질을 정량하는 것, 종양 시료에서의 CAIX 단백질에 기반한 CAIX 점수를 결정하는 것, 및 만약 미리 정의된 CAIX 점수에 도달한 경우 개체를 치료하는 것을 포함하는 것에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 측면은 환자의 암이 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5 또는 2.6 이상의 CAIX 점수를 갖는 것으로 밝혀진 경우 치료적 유효량의 CAIX 길항제를 환자에 투여하는 것을 포함하는 암 치료의 용도를 위한 탄산탈수소효소 IX(CAIX) 표적 화합물에 관한 것이다. 바람직한 구체예에 있어서, CAIX 점수는 200, 210, 220, 230, 240, 250 또는 260 이상이고, 가장 바람직하게는 CAIX 점수는 260 이상이다.

본 발명의 추가적인 구체예는 암 치료의 용도를 위한 탄산탈수소효소 IX(CAIX) 표적 화합물로서, 치료될 개체의 하나 이상의 종양 조직 시료는 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5 또는 2.6 이상, 더욱 바람직하게는 200, 210, 220, 230, 240, 250 또는 260 이상, 가장 바람직하게는 260 이상의 CAIX 점수를 특징으로 하는 것이 표적 화합물에 관한 것이다.

그러므로, 발현된 CAIX는 만약 치료될 개체로부터 유래된 하나 이상의 시료에 존재한다면 정량화된다. 바람직하게는 치료될 개체로부터 유래된 시료는 치료될 암의 조직 시료이다. 더욱 바람직하게는 치료될 암의 조직 시료는 신장 세포 암종(RCC)로부터, 가장 바람직하게는 신장 투명 세포 암종(ccRCC)으로부터 유래된 조직 시료이다.

바람직하게는, 발현된 CAIX는 종양 세포 염색, 바람직하게는 면역조직화학적 염색, 더욱 바람직하게는 면역조직화학적 염색으로서, CAIX 단백질 또는 CAIX 폴리펩티드가 특이적으로 단일클론항체, 더욱 바람직하게는 CAIX의 N-말단의 에피토프 결합 도메일을 갖는 단일클론항체, 더더욱 바람직하게는 단일클론항체 M75, 가장 바람직하게는 accession No. ATCC HB 11128을 갖는 하이브리도마 VU-M75로부터 분비된 단일클론항체에 의해 결합하는 것인 면역조직화학적 염색에 의해 정량화된다. 통상의 기술자는 적합한 방법의 면역조직화학적 염색 방법을 알고 있다. 면역조직화학적 염색을 위한 키트는 상업적으로 구매가능하고, Oncogene Science 100 Acorn Park Drive, Cambridge, MA 02140, USA에 의해 제공된 CAIX IHC 키트를 포함하나 그에 한정되지 않는다. 면역조직화학적 염색 방법에 대한 또 다른 예는 예를 들면, EP 1 501 939 B1에 기재되어 있다. 조직 절편의 면역조직화학적 염색은 Dako 염색 시스템(Dako Corporation, Carpenteria, USA)에 기재된 바와 같은 열 처리를 사용하는 항원 복구(antigen retrieval)와 함께 과산화수소 기법을 사용하여 항-CAIX 항체로 수행될 수 있다. 면역어세이 및/또는 면역조직화학적 염색에 사용된 항체는 다클론 또는 단클론일 수 있다. 바람직하게는 단일클론항체가 사용된다. 본 발명에 따른 면역조직화학적 염색 방법에 있어서, 표지된 또는 비표지된 항체가 사용될 수 있다. 표지된 검출 수단은 형광 수단, 효소, 보조-효소, 방사선뉴클레오티드, 화학발광 수단, 효소 기질, 입자, 염료 등을 포함하는 라벨을 포함한다. 각각의 어세이는 효소 면역 어세이, 형광면역어세이, 방사선면역 어세이, ELISA 등을 포함한다. 면역조직화학적 염색 조직에서의 검출 항체의 사용은 단일클론항체 M75, MN9, MN, 12, MN7을 포함한다. 본 발명에 따라 바람직하게 사용된 검출 항체는 M75이다. M75 항체는 US 5,981,711에 추가적으로 기재되어 있고, Oncogene Science에 의해 제공된 CAIX IHC 키트의 일부분이다(상기 참조). 특히 바람직한 것은 측정 가능한 및/또는 비교 가능한 결과, 예를 들면, 염료 강도, 형광 강도, 방사선 신호, 효소 활성 등을 제공하는 염색 방법이다.

바람직한 구체예에 따라, 발현된 CAIX는 CAIX 폴리펩티드 또는 CAIX 폴리펩티드의 단편을 포함한다. 또 다른 바람직한 구체예에 따라, 발현된 CAIX는 CAIX 폴리펩티드 또는 CAIX 폴리펩티드의 단편을 암호화하는 mRNA를 포함한다. 통상의 기술자는 세포의 시료 중 mRNA의 양을 결정하는 방법, 예를 들면, 노던 블랏, 마이크로어세이, 실시간 PCR 등을 알고 있다.

바람직한 구체예에 따라, 개체, 더욱 바람직하게는 65세 미만의 개체로부터 제공된 종양 시료 중 CAIX 점수가 ≥ 2.0인 경우 개체는 치료된다. 추가적인 더욱 바람직한 구체예에 있어서, 점수는 ≥ 2.1, 더욱 바람직하게는 ≥ 2.2, 더욱 바람직하게는 ≥ 2.3, 더욱 바람직하게는 ≥ 2.4, 더욱 바람직하게는 ≥ 2.5이다. 0.0 내지 3.0의 모든 가능한 CAIX 점수에 대한 분석은 CAIX 점수가 높을 수록, 치료 효과가 더욱 유의적임을 나타낸다. CAIX 점수 ≥ 2.6을 갖는 환자는 CAIX 표적 화합물, 특히 항-G250 항체로 치료될 때, 통계적으로 유의적인 치료 효과를 나타낸다. 그러므로 CAIX 점수 ≥ 2.6은 가장 바람직한 구체예로 여겨진다. 바람직하게는 개체로부터 제공된 종양 시료는 치료될 개체의 하나 이상의 암 시료 조직이다. 더욱 바람직하게는 개체로부터 제공된 시료는 치료될 개체의 신장 세포 암종(RCC), 가장 바람직하게는 신장 투명 세포 암종(ccRCC)로부터 유래된 하나 이상의 조직 시료이다.

추가적인 바람직한 구체예에 따라, CAIX 점수 또는 미리 정의된 CAIX 점수는 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5 또는 2.6 이상이다. 일부 구체예에 있어서, CAIX 점수 또는 미리 정의된 CAIX 점수는 200, 210, 220, 230, 240, 250 또는 260 이상이다. 바람직한 구체예에 있어서, CAIX 점수는 260 이상이다.

CAIX 표적 분자는 화합물, 상세하게는 CAXI 또는 그의 단편 또는 스플라이스 변이체(splice variant)에의 결합에 의해 그의 활성을 매개하는 CAIX를 인식하는 화합물이다; 활성 부위에 대한 입구부분(entrance)에의 비가역적인 결합, 및/또는 CAIX의 활성 부위에서 아연 이온과의 조화에 의한 CAIX 억제. 바람직하게는 CAIX 표적 화합물은 특이적으로 CAIX 폴리펩티드와 상호작용한다. 특이적으로 상호작용하는 것(예를 들면, 인식하는 것 또는 결합하는 것)은 CAIX 표적 화합물, 예를 들면, 항체가 다른 폴리펩티드에 비해 CAIX에 대한 더 큰 친화도를 갖는다는 것을 의미한다. 일 구체예에 있어서, CAIX 표적 화합물은 CAIX 폴리펩티드와 상호작용하거나(즉, 결합하거나 인식하고) 또는 활성을 조절하고, 및/또는 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 및/또는 보체 매개 세포독성(CDC)를 매개한다. 그러므로, 일 구체예에 따라, 표적 화합물은 CAIX 억제제이다. 상기 CAIX 억제제는 단백질 수준 또는 핵산 수준에서 작용할 수 있다. 단백질 수준에서 작용하는 CAIX 억제제에 대한 예는 예를 들면, 펩티드, 및 항-CAIX 항체, 그들 항체의 기능적 단편, 바람직하게는 500 g/mol의 분자량을 갖는 소유기분자(small organic molecule)를 포함하나 그에 한정되지 않는다. 항-CAIX 항체 또는 CAIX에 대한 항체의 예는 EP 637 336, WO 93/18152, WO 95/34650, WO 00/24913, WO 02/063010, WO 04/025302, WO 05/037083, WO 2011/139375, Murri-Plesko et al., Eur J Pharmacol 2011, 657: 173-183에 기재되어 있다. 소유기분자의 예는 술폰아미드, 헤테로방향족성 술폰아미드, 술파메이트, 쿠마린 및 티오쿠마린 및 BAY-79-4620을 포함하나 그에 한정되지 않는다. 핵산 수준에서 작용하는 억제제의 예는 siRNA 분자, 리보자임(ribozyme) 및/또는 안티센스 분자이다.

특히 바람직한 구체예에 따라, CAIX 표적 화합물 및/또는 억제제는 항-CAIX항체 및/또는 그러한 항체의 기능적 단편이다. 바람직한 구체예에 따라, 항-CAIX항체의 단편은 필수적으로 전장 항-CAIX 항체와 동일한 CAIX-결합 및/또는 억제 활성을 갖고, 및/또는 항-CAIX 항체의 에피토프-결합 단편이다.

또 다른 바람직한 구체예에 있어서, 항체 및/또는 그의 항체 단편은 다클론 항체, 단일클론항체, 그의 항원-결합 단편, 예를 들면, F(ab')₂, Fab', sFV, dsFv, 및 그의 키메라화된, 인간화된, 및 전체 인간 변이체로 구성된 군으로부터 선택된다. 추가적인 바람직한 구체예에 따라, 이 항-CAIX 항체 또는 그의 에피토프-결합 단편은 아미노산 서열 LSTAFARV 및/또는 ALGPGREYRA에 결합한다.

추가적인 특히 바람직한 구체예에 따라, CAIX 표적 화합물은 항체 항-G250 및/또는 그의 에피토프 결합 단편이다. 항-G250 항체는 예를 들면, EP-B-0 637 336에 기재되어 있다. 항-종양 항체는 키메라 또는 인간화 G250 항체 및/또는 그의 단편인 것이 특히 바람직하다. 본 발명의 용도를 위한 항체는 본 명세서에 참조로서 포함된 PCT/EP02/01282 및 PCT/EP02/01283에 기재된 방법을 포함하나, 그에 한정되지 않는 기술분야에 알려진 적합한 방법에 의해 생산될 수 있다.

특히 바람직한 항체는 cG250, 바람직하게는 기렌툭시맙(INN)이다. 또 다른 특히 바람직한 구체예는 하이브리도마 세포주 DSM ACC 2526에 의해 생산된 단일클론항체 G250이다. 항체 cG250은 본래의 마우스 단일클론항체 mG250의 IgG1 카파 경쇄 키메라 버전이다.

치료될 암은 CAIX를 발현하는 것을 특징으로 하는 암이다. 특히, 암은 여기서 정의된 CAIX 점수 ≥ 2.0을 갖는 것을 특징으로 하고, 바람직하게는 65세 미만의 나이의 개체로부터이고, 특히 상기 설정된 바와 같이 CAIX 점수 ≥ 2.6을 갖는 것이다. 특히 바람직한 구체예에 따라, 치료된 개체는 65세 미만의 나이이고, CAIX 점수 ≥ 2.6을 갖는다.

바람직하게는 암 또는 환자의 암은 자궁경부 암종, 식도 암종, 대장 암종, 난소 암종, 간 암종, 방광 암종, 폐 암종, 췌장 암종, 두경부암, 담관 암종, 및 신장 세포 암종을 포함하는 군으로부터 선택된다.

특히 바람직한 구체예에 있어서, 암은 신장 투명 세포 암종(RCC)이다.

본 발명의 가장 바람직한 구체예에 있어서, 신장 투명 세포 암종은 항체 G250, 특히 cG250, 바람직하게는 기렌툭시맙을 투여함으로써 치료된다.

치료된 개체는 암의 비-전이성 타입 또는 비-전이성 질환, 더욱 바람직하게는 암의 비-전이성 타입 또는 비-전이성 질환으로 진단되고 및/또는 재발의 고 위험을 갖는 것으로 진단된 개체가 바람직하다.

추가적인 구체예에 따라, CAIX 표적 화합물, 및 특히 항-G250 항체는 치료될 개체가 원발성 종양 절제, 바람직하게는 종양 신장절제술, 더욱 바람직하게는 종양 신장절제술 및 림프절 절제술을 받은 후에 사용된다. 바람직하게는 원발성 종양은 G250 항원-발현 종양이고, 특히 자궁경부 암종, 식도 암종, 위 암종, 대장 암종, 간 암종, 방광 암종, 폐 암종, 담관 암종, 두경부암 및 신장 투명 세포 암종(ccRCC)의 군으로부터 선택된다.

따라서, 추가적인 바람직한 구체예에 있어서, CAIX 표적 화합물, 및 특히 항-G250 항체는 보조 요법(adjuvant therapy)으로서 사용된다. 본 발명에 대하여, 보조 요법은 볼 수 없는 잔여 암 세포를 표적하는 방법을 나타낸다. 보조 요법은 일반적으로 1차 치료, 예를 들면, 암 재발을 막기 위한 수술 또는 방사선 조사 후에 사용된다. 보조 요법의 예는 일반적으로 모든 탐지 가능한 질환이 제거되지만, 육안으로 보이지 않는 질환에 의한 재발의 통계적 위험이 남아있는 수술 후에 제공되는 부가적인 치료이다. 보조 요법의 종류는 화학요법, 호르몬요법, 방사선 요법 및/또는 면역요법을 포함한다. 예를 들면, 방사선요법 또는 전신적 요법은 통상적으로 유방암에 대한 수술 후에 보조 치료로서 제공된다. 전신적 요법은 화학요법, 면역 요법, 또는 생물학적 반응 변형제(biological response modifiers) 또는 호르몬 요법으로 구성된다. 바람직하게는, 만약 본 발명에 따른 CAIX 표적 화합물이 사용된 경우, 보조 요법은 알려진 보조 요법의 이들 종류의 조합일 수 있다.

본 발명의 추가적인 측면은 CAIX를 발현하는 암 치료의 용도를 위한 CAIX 표적 화합물로서, 상기 암세포는 CAIX 점수 ≥ 2.0 및 특히 ≥ 2.6을 특징으로 하는 것인 화합물에 관한 것이다. 바람직하게는, CAIX 표적 화합물은 항-G250 항체이고, 특히 cG250 항체, 및/또는 그의 에피토프-결합 단편이다.

추가적인 구체예에 따라, CAIX 표적 화합물, 및 특히 항체 cG250은 CAIX 점수 ≥ 2.0 및 특히 ≥ 2.6을 갖는 신장 투명 세포 암종의 치료의 용도를 위한 것이다.

또 다른 구체예에 따라, CAIX 표적 화합물, 및 특히 항체 cG250은 CAIX 점수 ≥ 2.0을 갖는 신장 투명 세포 암종의 치료의 용도를 위한 것이고, 치료될 개체는 65세 미만의 나이이고 및/또는 CAIX 점수 ≥ 2.6을 갖는다.

본 발명의 추가적인 측면은

(a) 염색에 의해 암 시료의 CAIX의 발현을 정량화하는 단계 및

(b) 염색된 암 세포의 크기 및 염색 강도에 따라 암 질환을 분류하는 단계를 포함하는 암 질환을 진단하고, 예측하고 및/또는 분류하는 방법에 관한 것이다.

진단하는 방법은 상기 기재된 바와 같이 CAIX의 결정을 더 포함할 수 있다.

진단될 및/또는 분류될 암은 바람직하게는 상기 언급된 바와 같은 암이고, 특히 신장 투명 세포 암종이다. 바람직하게는 암은 CAIX 점수 ≥ 2.0, 더욱 바람직하게는 ≥ 2.6을 갖는다.

예측 구체예는 치료될 환자가 CAIX 표적화합물로의 치료, 특히 항-G250 항체로의 치료에 반응할지 안할지를 예측하기 위한 CAIX 점수의 용도를 포함한다. 특히 이것은 환자가 cG250 항체, 바람직하게는 기렌툭시맙의 치료에 반응할지를 예측하는데 사용된다. 즉, 어느 환자가 아마 CAIX 표적 화합물로의 치료로부터 유용할 것인지가 예측될 수 있다. 예를 들면, 상응하는 종양 세포 시료가 CAIX 점수 ≥ 2.6를 나타내는 신장 투명 세포 암종을 갖는 환자는 cG250 항체, 바람직하게는 기렌툭시맙으로의 치료가 가장 유용할 것이다.

고 T-단계(T3/T4), 저 등급(G1/G2), 림프절 관여 없음(N0/NX) 및 전이성 질환 없음(M0)을 갖는 환자는 고 CAIX 점수를 갖는 환자에 비해 저 CAIX 점수를 갖는 나쁜 예후를 갖는다.

본 발명의 추가적인 측면은 암을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은

(a) 치료될 개체로부터 얻어진 암 세포의 CAIX의 발현을 염색에 의해 정의하는 단계,

(b) 암 세포의 크기 및 염색 강도에 따라 CAIX 점수를 결정하는 단계 및

(c) 단계 (b)에서 미리 정의된 CAIX 임계 값(threshold value)을 초과한 경우 CAIX 표적 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.

바람직한 구체예에 따라, 본 발명의 CAIX 표적 화합물, 및 특히 항-G250 항체는 단일 치료요법 프로토콜로 투여되고, 바람직하게는 단일 치료요법으로 투여된다.

CAIX 표적 화합물, 및 특히 항-G250 항체, 바람직하게는 cG250 항체, 더욱 바람직하게는 기렌툭시맙은 또한 조합 치료요법 프로토콜 또는 조합 치료요법으로 투여될 수 있고, 예를 들면, 상기에서 이미 설명된 바와 같이, 보조제 항-G250 항체 치료는 다른 종류의 보조 요법과 조합될 수 있다. 바람직하게는, 항체-의존성 세포 독성(ADCC)을 증가시키기 위해, 및/또는 환자의 면역 시스템, 예를 들면, NK 세포를 활성화하기 위해 시토킨이 항체와 함께 병용-투여(co-administered)될 수 있다. 이 시토킨은 바람직하게는 인터루킨, 예를 들면, IL-2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -10, -12, -13, -14, 및 -15, 인터페론, 예를 들면, IFN-α, IFN-β 및 IFN-γ, TFN-α, TNF-β 신경성장인자, CD40, Fas, CD27 및 CD30의 리간드, 대식세포-억제 단백질, 란테스(Rantes), 그의 약학적으로 허용가능한 유사체, 및 유도체의 활성 단편, 및 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는 시토킨은 IL-2 및 IFN-α로부터 선택된다. 물론, 추가적인 세포독성 수단, 예를 들면, 독소루비신, 시스-플라틴 또는 카르보플라틴 및 다른 종양적 수단과의 조합이 가능하다.

통상의 기술자는 사용된 CAIX 표적 단백질, 및 특히 G250-항원-특이적 항체의 용량을 예를 들면, 나이, 몸무게, 상태 및 질병의 심각도에 기반하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 1 주기(weekly cycle)의 환자 당, 20 mg 또는 50 mg cG250 항체 용량 투여 계획은 0.5 ug/ml, 바람직하게는 1 ug/ml 초과의 농도를 전달할 것이고, 그러므로, 적절한 효능을 가질 것이다. 그러므로, 바람직한 구체예에 있어서, 5 내지 250 mg/week, 더욱 바람직하게는 10 내지 100 mg/week, 및 가장 바람직하게는 20 mg/week 내지 50 mg/week의 G250-특이적 항체의 주당 용량이 투여된다.

바람직한 구체예에 따라, G250 항원-특이적 항체 및/또는 그의 항체 단편은 상이한, 바람직하게는 항체의 양을 감소시키면서 투여되는 적어도 두 개의 치료 단계로 그를 필요로 하는 개체에 투여된다.

본 발명의 방법은 G250-항원-특이적 항체 및/또는 그의 항체 단편을 그를 필요로 하는 개체에 두 단계로 투여하는 단계를 포함하는 것이 바람직하고, 상기 두 단계는

(a) 10 내지 250 mg/week, 바람직하게는 20 내지 100 mg/week, 더욱 바람직하게는 30 내지 100 mg/week, 더욱 바람직하게는 30 내지 55 mg/week, 및 가장 바람직하게는 50 mg/week의 용량의 G250-항원-특이적 항체를 제1 치료 단계로 투여하는 단계 및

(b) 5 내지 100 mg, 바람직하게는 10 내지 50 mg, 더욱 바람직하게는 15 내지 25 mg, 가장 바람직하게는 20 mg/week의 용량의 G250-항원-특이적 항체를 제2 치료 단계로 투여하는 단계이다.

제1 치료 단계는 50 mg/week의 G250-특이적 항체의 투여를 포함하고, 제2 치료 단계는 20 mg/week의 투여를 포함하는 것이 더욱 바람직하다.

항종양 항체는 바람직하게는 정맥내, 바람직하게는 인퓨전(infusion) 또는 정맥내 주사로 투여된다. 인퓨전에 의한 항체의 투여는 바람직하게는 약 30분까지, 더욱 바람직하게는 약 15분까지 수행된다. 물론, CAIX 표적 화합물이 또한, 복강내 또는 근육내로 적용될 수 있다.

20 또는 50 mg의 cG250 항체의 20주까지의 주마다의 인퓨전을 갖는 복용 계획이 내성이 좋고, 유의적인 HACA 발달을 유도하지 않는 것으로 나타난다.

그러므로, 제1 치료 단계는 12주까지, 바람직하게는 6주까지, 더욱 바람직하게는 1주까지 포함하고, 제2 치료 단계는 15주까지, 바람직하게는 104주까지, 더욱 바람직하게는 52주까지, 더욱 바람직하게는 12 내지 24주까지 포함하는 것이 바람직하다.

가장 바람직한 구체예에 있어서, 신장 투명 세포 암종의 치료에 대해서 제1 치료 단계는 1주까지 및 단일 적재 용량 50 mg/week의 cG250 항체의 투여를 포함하고, 제2 치료 단계는 24주까지 및 20 mg/week의 cG250 항체의 투여를 포함한다.

추가적인 바람직한 구체예에 있어서, 신장 투명 세포 암종의 치료에 대해서, 제1 치료 단계는 1주까지 및 단일 적재 용량 50 mg/week의 cG250 항체의 정맥내 투여를 포함하고, 제2 치료 단계는 24주까지 및 20 mg/week의 cG250 항체의 투여를 포함하고, 신장 투명 세포 암종의 치료에 대해서, 바람직하게는 제2 치료 단계는 20 mg/week의 cG250 항체의 적어도 8번의 연이은 정맥내 투여를 포함한다.

CAIX 표적 화합물, 특히 cG250 항체는 물론, 약학적 조성물로 투여될 수 있다. 이 약학적으로 허용가능한 조성물은 허용 가능한 담체, 희석제 및/또는 보조제를 포함할 수 있다. 용어 "담체"는 본 명세서에서 사용될 때, 적용된 용량 및 농도에서 그에 노출될 세포 또는 포유류에 비독성인 담체, 부형제 및/또는 안정화제를 포함한다. 종종 생리학적으로 허용가능한 담체는 수성의 pH-완충 용액 또는 리포좀이다. 생리적으로 허용가능한 담체의 예는 완충액, 예를 들면, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산;아스코르브산을 포함하는 항산화제, 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들면, 혈청 알부민, 겔라틴 또는 면역글로불린; 소수성 폴리머, 예를 들면, 폴리비닐 피롤리돈; 아미노산, 예를 들면, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물, 겔화제, 예를 들면, EDTA, 당, 알코올, 예를 들면, 만니톨 또는 소비톨; 염-형성 반대이온(counterion), 예를 들면, 소듐; 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예를 들면, TWEEN, 폴리에틸렌 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

특히 바람직한 구체예에 있어서, CAIX 표적 화합물은 정상 염수(normal saline)(물 중 0.9% 멸균 염화나트륨) 중 투여된다.

특히 바람직한 구체예에 따라, 항체 cG250은 정맥 내 인퓨전으로 정상 염수 중, 예를 들면, 15 분 동안 100 ml 용액으로 투여된다.

용어 "탄산탈수소효소(carbonic anhydrase IX)" 및 "CAIX", "CA9", "MN", 및 "G250"은 본 명세서에서 동의어로 고려된다.

"cG250" 및 기렌툭시맙은 상호 호환적으로 사용된다.

"항원(antigen)"은 예를 들면, 항체에 의해 결합될 수 있는 리간드를 의미한다. 항체와 접촉하는 항원의 일부를 "에피토프(epitope)"라 명명한다.

다르게 언급되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 "염색(staining)"은 종양 세포를 시각화하는 방법을 의미한다. 바람직한 "염색" 방법은 상기 기재된 바와 같이 면역조직화학적 염색이다.

도 1: ITT(의도된 대로 분석군)(intended to treat) 및 PP 집단(계획서 순응군)(per protocol population)에 대한 CAIX-점수 값 증가에 따른 HR(위험 비율(hazard ratio)) 및 p-값
도 2: 2.6의 CAIX 컷-오프(cut-off)에 대한 치료군(treatment arm)에 의한 DFS(cG250 vs. 위약)
도 3: CAIX 점수 ≥ 2.6을 갖는 PP 집단에 대한 DFS 곡선
도 4: 고 CAIX 점수(≥ 2.0) 및 나이 < 65세 (ITT 집단)

하기의 결과는 신장 투명 세포 암종(ccRCC) 및 고위험의 재발성을 갖는 환자에서 보조제 cG250 대 위약의 효과를 평가하기 위해 무작위 이중 맹검 III 상 연구에 기반한 것이다.

목적:

본 연구의 목적은 위약(placebo) 대비 기렌툭시맙 치료 요법의 무질병생존(disease free survival: DFS)을 평가하고, 및 위약 대비 기렌툭시맙 치료 요법의 전체 생존(overall survival: OS)을 평가하기 위함이었다.

환자:

864명의 환자(ITT)를 전향(prospective), 두 개군(two armed), 무작위, 이중 맹검, 위약 대조군 연구에 등록하였다. 무질병생존의 평가는 독립적인 방사선학 검토 위원회(Radiological Review Committee)에 의해 평가되었다. 855명의 환자는 하나 이상의 연구 치료(cG250 또는 위약)를 받았고, 독립적인 자료 모니터링 위원회(Data Monitoring Committee)에 의해 안전성에 대해 분석되었다. 환자에 대한 포함기준은: 나이 ≥ 18세, 문서로 기록된 투명 세포 조직학을 갖는 원발성 신장 세포 암종의 사전(부분적 또는 전체) 신장절제술, 육안으로 보이는 및 현미경으로 보이는 잔류 질환(residual disease)의 징후 없음.

환자는 다음의 고위험군(High Risk Group: RG) 중 하나를 가져야 한다(TNM classification, 6th edition UICC, 2002 참조):

о RG I: T3aN0/XM0 또는 T3bN0/XM0 또는 T3cN0/XM0 또는 T4N0/XM0

о RG II: T 단계 및 N+ 질환 및 M0

о RG III: T1bN0/XM0 또는 T2N0/XM0, 각각은 등급 G 3(Fuhrman 또는 적어도 3 등급을 갖는 다른 핵 등급 시스템(nuclear grading system)),

신장절제술 날짜와 무작위화(randomisation)의 사이가 12주를 초과하지 않고, 0 내지 1의 ECOG.

연구 투약:

기렌툭시맙(cG250; 본래의 마우스 단일클론항체 mG250의 IgG1 카파 경쇄 키메라 버젼)을 50 mg의 단일 적재 용량(1주)으로 적용한 후에, 주마다 20 mg의 기렌툭시맙(2 내지 24주)의 인퓨전을 하였다. 약물을 100 ml 정상 염수(물 중 0.9% 멸균 염화나트륨)에 희석하고, 15분 동안 정맥내 인퓨전을 적용하였다. 위약군은 활성 성분 없이 폴리소르베이트 20 (Tween® 20)을 갖는 포스페이트-완충 염수를 받았다. 치료의 기간은 24주이었다.

면역조직화학:

파라핀 포매된 신장절제된 조직 표본을 3 내지 5 um의 절편으로 자르고 각각 부착성 슬라이드에 수집하였다. 탈파라핀화 및 탈수화를 Ventana Medical Systems, Inc.로부터의 EZ Prep mixture로 수행하였다. 조직 물질을 희석된 항체 (CAIX M75, 1:150)의 용액으로 블로킹하고 염색하였다. 항체를 비오틴화 IgG 항-마우스 IgG 항체(Ventana Medical Systems, Inc.), 및 뒤이은 컨쥬게이트 스트렙트아비딘 홀스래디쉬 퍼옥시다아제(conjugated streptavidin horseradish peroxidase)(Ventana Medical Systems, Inc.)를 사용하여 검출하였다. 신호 검출은 디아미노벤지딘 및 과산화수소(Ventana Medical Systems, Inc.)로 수행하였다. 양성 및 음성 조직 대조군은 기준으로서 포함된다.

통계 방법:

효능 평가는 모든 무작위 864명의 환자로 구성된 의도된 대로 분석군(Intent-to-treat: ITT)에 대해 일차적으로 분석하였다. 또한 분석은 766명의 환자로 구성된 계획서 순응군(Per Protocol: PP)에 대해 반복하였다. 적어도 8번의 연속적인 연구 의약의 투여(1주 내지 8주)를 받고, 언블라인딩(unblinding) 전에 편차 기준(deviation criteria)으로 정의된 주요 프로토콜 편차를 갖지 않는 환자를 계획서 순응군(PP)로서 평가하였다.

시료 크기 계산은 Pass 2002 프로그램을 사용하여 수행하였다. 통계적 개괄은 버젼 8.1 또는 그 이상의 SAS® 소프트웨어를 사용하여 생성하였다. 효능 분석을 위하여, 불완전한/부분적인 자료를 귀속시켰다(imputed); 누락된 안전성 자료는 귀속시키지 않았다. 부작용 및 병력은 국제의학 용어 사전(Medical Dictionary for Regulatory Activities)을 사용하여 코드화하였다; 의약은 세계보건기구 약물 사전(World Health Organisation Drug Dictionary)을 사용하여 코드화하였다. 일차 효능 분석은 의도된 대로 분석군(ITT)에 기반하였고, 계획서 순응군을 사용하여 반복하였다.

연속 변수(continuous variable)는 관찰의 수, 산술평균, 표준 편차, 최소, 중간, 및 최대를 사용하여 기술하였다. 범주 변수(categorical variable)는 관찰의 수 및 퍼센트를 사용하여 나타내었다. 계층적 테스트(hierarchical testing)는 포괄적 유의 수준 ≤ 5%를 유지하기 위해 DFS 및 OS에 대해 적용하였다. DFS 및 OS 둘 모두 로그-랭크 테스트(log-rank test) 및 카플란-마이어 방법(Kaplan-Meier method)을 사용하여 기렌툭시맙군과 위약군 사이에서 비교하였다. OS에 대한 유의 수준은 5%의 전체 유의 수준을 갖는 집단축차법(group sequential method)에 대해 오브라이언-플레밍 접근법(O'Brien-Fleming approach)을 사용하여 조절하였다. 비율에 대한 95% 신뢰구간을 추출 방법(Pearson-Clopper)을 사용하여 계산하였다.

DFS 및 OS에 둘 모두에 대한 예측 인자의 잠재적 효과는 Cox 비례위험 모형(Cox proportional hazards model)을 사용하여 조사하였다. 위험비율(기렌툭시맙 치료 대 위약)은 비례위험 모형을 사용하여 그의 관련된 95% 신뢰 구간 및 p-값과 함께 평가하였다.

결과의 요약:

데이터 분석을 위한 컷-오프(cut-off)의 시간에서 360명의 환자(41.7%)는 DFS 이벤트를 경험하였고, 504명(58.3%)은 여전히 국소 조사자 평가에 따른 질병이 없었다. DFS 환자의 0.6%가 기초선(baseline)에서 전이성 질환을 갖는 것으로 국소적으로 평가되었다. 전체 181명의 환자는 사망하였다. IRCC 센트럴 리딩 평가(IRCC central reading assessment) 후에, DFS 이벤트가 389명의 환자(45%)에 대해 할당될 수 있었던 반면, 검열된 자료(censor date)는 남아있는 475명의 환자(55%)에 대해 할당될 수 있었다. ITT 군에서 발생한 DFS 이벤트의 수(기초선에서 전이성 질환을 갖는 293명의 배제된 환자)는 치료군(cG250:142, 32.8%; 위약: 151, 35.0%) 사이에서 비슷하였고, 기렌툭시맙 환자의 11.5% 및 위약 환자의 10.7%에서 나타난, 기초선(DFS = 0)에서의 전이 비율이었다.

ITT 군에 대한 IRCC 평가에 기반한 DFS에 대한 일차 분석은 치료군 사이에서 전체 중간 DFS(median DFS)의 통계적으로 유의한 차이를 나타내지 않았다(위험 비율 [HR] = 0.999. p = 0.737). 기렌툭시맙에 대한 중간 DFS는 71.4개월이었고, 위약군에 대한 중간 DFS는 도달하지 않았다.

고위험군(RG) 분류에 관계없이, 치료군 사이에서 DFS의 통계적으로 유의한 차이는 없었다((RG I: HR=0.934, p=0.596; RG II: HR=1.73, p=0.084; RG III: HR=0.984, p=0.627)

또한, Bui et al.(Bui et al., Clinical Cancer Research 2003, 9: 802-811)에 따른 CAIX 항원 발현에만 기반한 분류를 사용하여 수행된 탐색적 분석(exploratory analyses)은 예후 또는 치료 효과에 대한 통계적 유의성의 결과를 내놓지 않았다. 그러나, 놀랍게도, CAIX 항원 발현과, 항원 밀도의 측정으로 고려될 수 있는 염색의 강도, CAIX 점수와의 조합은 예후에 대해서 뿐만 아니라, 치료 효과에 대해서도 유의적 결과를 나타내었다.

생존트리 분석(survival tree analyses)으로부터 유래된 CAIX 점수 컷-오프에 대한 다변량분석(multivariate analysis) (ITT에 대해 1.19, 및 ITT 위약에 대해 1.52)은 CAIX 점수가 예측적이고, DFS ITT, OS ITT 및 OS 위약의 예측에 대한 독립적인 인자가 아님을 나타낸다. 상기 결과는 1.52의 CAIX 점수 컷-오프(ITT 위약)가 예측에 유용할 수 있다는 것을 제안한다.

낮은 CAIX 점수를 갖는 환자에 대하여 상이한 치료군에 대한 카플란-마이어-곡선은 사용된 컷오프와는 관계없이 중복된다. 이것은 낮은 CAIX 점수를 갖는 환자가 치료로부터 이점을 얻지 못한다는 것을 명백하게 보여준다.

높은 CAIX 점수 ≥ 1.91은 치료 효과에 대한 긍정적인 추세를 나타내었다(HR = 0.879, p-값 0.248). 0.0 내지 3.0의 모든 CAIX 점수에 대한 서브그룹 분석은 CAIX 점수가 증가할수록, 치료 효과가 더 유의적으로 된다는 것을 나타낸다(도 1).

CAIX 점수 ≥ 2.6은 위약군의 51.2개월부터 cG250 환자의 73.6개월까지의 중간 DFS 증가를 갖는 통계적으로 유의한 치료 효과를 일으킨다(전체 환자 군의 17%, HR = 0.568; p = 0.022; 도 2). 높은 CAIX 점수 ≥ 2.6을 갖는 ITT 집단 중의 151명의 환자는 cG250 및 위약군 사이에서 균등하게 분포되었다. 흥미롭게도, 위약 군의 환자는 치료 군과 상관없이 CAIX 점수 < 2.6을 갖는 환자와 유사한 5년의 DFS 시간(48.4개월 대 51.7 개월)을 나타내었다. 기초선에서 전이를 갖는 환자 또는 양성의 림프 노드를 갖는 환자에 대한 집단의 조절은 결과를 변화시키지 않았다. CAIX 점수 ≥ 2.6을 갖는 PP 군(N = 139)을 취하는 것은 위험 비율 및 유의 수준을 둘 다 개선하였다(HR = 0.508; p = 0.007; 도 2).

전체적으로 ITT 군에서 나타난 결과는 PP 군에서의 결과에 의해 반영된다(도 3).

추가적인 서브그룹 분석은 위약 군의 55.2 개월로부터 CAIX 점수 ≥ 2.0 및 < 65세의 cG250 환자의 70.9개월까지의 중간 DFS 증가를 갖는 통계적으로 유의한 치료 효과를 나타내었다(HR = 0.60; 95% CI 0.40-0.89; p-값 = 0.01; 도 4).

또한, 상기 분석은 고 T-단계 (T3/T4), 저 등급(G1/G2), 림프절 관여 없음(N0/NX) 및 전이성 질환 없음을 갖는 투명 세포 RCC 환자는 고 CAIX 점수를 갖는 환자에 비해 저 CAIX 점수를 갖는 유의적으로 나쁜 예후를 갖는 것으로 나타났다.

Claims

항-CAIX 항체를 포함하는, 환자의 신장 투명 세포 암종 (ccRCC) 치료에 사용하기 위한 약학 조성물로서,
상기 환자는 종양 시료의 CAIX 발현에 기반하여 결정된 CAIX 점수가 ≥ 2.0에 도달한 환자이고,
상기 CAIX 점수는 종양 세포 크기(extent) 및 염색 강도의 조합에 의해 서술된 CAIX 발현에 기반하여 결정 또는 계산되고, 상기 CAIX 발현은 면역조직화학적 염색에 의해 정량화되고,
상기 CAIX 점수는 다음의 식에 의하여 결정 또는 계산된 것인 약학 조성물:
CAIX 점수 = (0 x 염색 강도를 갖지 않는 생존 종양 세포의 퍼센트) + (1 x 희미한 염색 강도를 갖는 생존 종양 세포의 퍼센트) + (2 x 중간의 염색 강도를 갖는 생존 종양 세포의 퍼센트) + (3 x 강한 염색 강도를 갖는 생존 종양 세포의 퍼센트).
청구항 1에 있어서, 상기 발현된 CAIX는 CAIX 폴리펩티드 또는 CAIX 폴리펩티드의 단편을 포함하는 것인 약학 조성물.
청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 발현된 CAIX는 CAIX 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA를 포함하는 것인 약학 조성물.
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청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 CAIX 점수는 ≥ 2.6인 것인 약학 조성물.
청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 항-CAIX 항체는 항체 기렌툭시맙(girentuximab) 또는 그의 단편인 것인 약학 조성물.
청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 항-CAIX 항체는 아미노산 서열 LSTAFARV 또는 ALGPGREYRAL에 결합하는 것인 약학 조성물.
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청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 항-CAIX 항체는 치료될 개체가 원발성 종양 절제술을 받은 이후에 사용되는 것인 약학 조성물.
청구항 1 또는 2에 있어서, 보조 요법(adjuvant therapy)으로 사용되는 것인 약학 조성물.
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청구항 1에 있어서, 상기 항-CAIX 항체는 G250 항체 또는 그의 에피토프 결합 단편인 것인 약학 조성물.
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청구항 1 또는 13에 있어서, 치료될 개체는 인간 또는 65세 미만의 나이를 갖는 것인 약학 조성물.
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