KR102169935B1 - 마리골드 추출물을 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물 - Google Patents

마리골드 추출물을 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 마리골드 추출물을 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 마리골드 추출물 또는 마리골드 추출물로부터 유래한 루테인과 이노시톨 및 글루타치온을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 히알루론산 합성효소의 발현을 증가시켜 히알루론산의 합성을 촉진하는 한편, 콜라겐의 생합성을 촉진하는 효과를 동시에 나타내는 것을 특징으로 하여, 피부 수분 보충 및 재생과 안구 건조증 개선 등의 복합적인 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

Description

마리골드 추출물을 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물{COMPOSITION FOR PROMOTING HYALURONIC ACID AND COLLAGEN PRODUCTION, INCLUDING MARIGOLD EXTRACT}
본 발명은 마리골드 추출물을 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물에 관한 것이다.
피부는 외부 자극으로부터 우리 몸의 여러 기관을 보호하고 있는 가장 큰 기관으로써, 다양한 생리적 역할을 담당하고 있다. 하지만 나이가 들면서 여러 가지 내적, 외적요인에 의하여 피부의 생리적기능과 장벽으로서의 기능이 저하되어, 외부의 작은 자극에 의하여서도 피부 손상이 쉽게 일어난다. 따라서 외부 자극에 의한 피부 손상을 경감시켜 주기 위하여 화장품 사용의 필요성이 대두되고 있다.
오늘날 거의 모든 사람이 다양한 종류와 형태의 화장품을 사용하고 있고, 화장품 업계는 끊임없이 새로운 소재의 화장품을 연구 개발하는데 주력하고 있다.
피부는 크게 표피, 진피, 피하지방조직의 3개 층으로 구성된다. 표피(epidermis)는 바깥쪽에서 안쪽으로 각질층, 투명층, 과립층, 기저층으로 나뉜다. 표피의 최외곽 층인 피부 각질층(stratum corneum)은 피부장벽 기능의 가장 중요한 구조로서, 무핵의 편평한 각질세포(corneocytes)와, 각질세포간 지질(SC intercellular lipid)로 이루어져 있다. 정상적인 표피세포의 분열 및 분화과정을 통해 유지되는 피부장벽의 각질세포가 합성하는 세라마이드, 콜레스테롤, 및 지방산과 같은 세포간 지질로 형성된 다층지질막(multi lamella lipid layer)은 피부 내의 수분이 증발하지 않도록 방어막 역할을 한다.
피부 각질층의 각질세포 간에는 다양한 종류의 지질이 존재하고, 이러한 지질들은 각질세포 사이에 존재하여 피부 수분의 증발을 방지하고, 외부 자극이나 오염으로부터 피부를 보호하는 피부장벽의 기능을 한다.
화장품 및 식품 등 각 업계에서는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 제품이 다수 개발되고 있으며, 특히 피부의 노화 및 탄력과 직접적으로 관련된 히알루론산 및 콜라겐을 피부조직에 공급하는 방안을 넘어서서, 체내에서 생성을 촉진하는 방안에 대해 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황이다.
Rasia Li, Stephen D, Turner, David L, Brautigan Biochemistry and Biophysics Reports 4 (2015) 52-58 S. Grether-Beck, A.Marini, T. Jaenicke,W.Stahl,Krutmann, British Journal of Dermatology (2017)176 pp1231-1240
본 발명의 목적은 마리골드 추출물, 이노시톨 및 글루타치온을 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 루테인, 이노시톨 및 글루타치온을 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 포함하는, 피부 재생 및 피부 노화 방지용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 식품 조성물 또는 화장품 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 측면은 마리골드 추출물, 이노시톨 및 글루타치온을 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 루테인, 이노시톨 및 글루타치온을 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에서, 상기 “루테인(lutein)”은 잔토필의 하나로서, 현재까지 알려진 600개의 자연 발생 카로티노이드 가운데 하나이다. 루테인은 식물, 기타 잔토필에서만 합성되며 시금치, 케일, 노란당근 등의 잎채소에서 대량으로 발견된다. 루테인은 3차원 시야를 책임지는 망막의 조그마한 부위인 황반에 농축되어 있는 것으로 알려져 있다. 주황색, 노란색 과일과 잎이 많은 녹색채소를 통해 자연스럽게 루테인을 섭취할 수 있다. 최근까지의 연구에서도 루테인이 피부 및 점막의 진피 조직에서 히알루론산과 콜라겐의 생합성에 관여하는 사실은 알려져 있지 않으며, 본 발명에서 최초로 규명한 것이다.
본 발명에서 상기 “히알루론산(hyaluronic acid)”은 결합 조직, 상피 조직, 피부조직 및 신경 조직에 널리 분포하는 음이온 성 비황산화 글리코사미노글리칸의 일종으로 분자량 20-100의 고분자 물질이다. 히알루론산은 세포기질의 주요성분으로 세포 성장인자 및 영양성분의 저장 및 확산에 관여할 뿐만 아니라 세포의 분화, 이동, 수분저장, 세포간격 유지에 관여하는 것으로 알려져 있다(S. I. Lamberg and A. C. Stoolmiller, J. Invest Dermatol., 63, 433 (1974)).
사람의 체내에 존재하는 히알루론산의 50% 이상은 표피세포간의 간격과 진피 세포의 외기질에 분포되어 있다고 보고되어 있으며, 주로 섬유아세포에 의해서생성 되는 것으로 알려져 있다(I. Ghersetich, T. Lotti, G. Campanile, C. Grappone, and G. Dini, Int. J. Dermatol., 33, 119 (1994)). 이러한 피부의 히알루론산은 콜라겐, 엘라스틴 단백질과 함께 나이가 들어감에 따라 그 생성량이 줄어들어 주름과 피부 탄력의 감소와 같은 피부노화의 큰 원인이 되고 있다(R.Fleischmajer, J. S. Perlish, and R. I. Bashey, Biochim. Biophys. Acta., 279, 265(1972)).
또한, 히알루론산은 관절 연골의 중요한 구성 성분으로 각 세포 (연골 세포)주위에 외피로 존재한다. 히알루론산은 물을 흡수하고 연골의 복원력 일으키며, 인접한 조직 층들 사이의 슬라이딩을 향상시키기 위해 근육 결합 조직에서의 윤활제 역할을 한다(Stecco C, Stern R, Porzionato A, Macchi V, Masiero S, Stecco A,De Caro R, pain in Surg Radiol Anat 33(10):891 (2011)).
따라서 히알루론산의 합성과 분해를 적절히 조절함으로써 피부의 항노화, 수분 보충, 관절 연골치료의 예방 및 치료법으로서 사용 가능할 것으로 기대되어 활발한 연구가 진행되고 있다.
본 발명에서 상기 “콜라겐(collagen)”은 결합 조직의 주성분이며 뼈와 피부에 주로 있지만, 관절, 각 장기의 막, 머리카락 등 우리 몸 전체에 분포되어 있는 성분이다. 포유동물에 가장 풍부한 단백질로, 전신 단백질 성분 중 25~35%를 차지한다. 콜라겐은 피부노화와 관련된 주요 피부조직 성분이며, 피부의 강도, 탄력성, 유연성을 유지할 수 있게 하는 기능을 부여한다. 따라서 콜라겐의 합성증진 및 분해억제는 피부미용 및 노화억제와 관련하여 주요 관심사가 되었으며, UV에 의한 광노화를 억제하면서 콜라겐의 합성을 증진시킬 수 있는 미용식품의 개발이 요구되고 있다.
본 발명자는 안과 전문의로서 퇴행성 눈 질환의 외과적 수술과 더불어 황반 및 눈의 노화를 완화시켜주는 다양한 식품소재에 관하여 연구를 지속하였고, 그 결과 루테인이 포함된 마리골드 추출물이 히알루론산과 콜라겐의 생합성을 촉진함으로써 눈 점막 조직의 재생 및 노화를 방지할 수 있음을 확인하였다(표 1, 7).
나아가, 루테인과 이노시톨 및 글루타치온을 혼합하는 경우 피부의 히알루론산과 콜라겐 합성 효과를 극대화하는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다(표 6, 7).
또한, 본 발명 실험예에서는 루테인, 이노시톨 및 글루타치온을 혼합한 복합물이 분자단위로 작용하여 히알루론산 생성 효소인 HAS2(Hyaluronan synthase 2)의 유전자인 HAS2의 발현을 증가시키는 것을 확인하였다(표 3).
구체적으로, 상기 조성물은 히알루론산, 피쉬콜라겐, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil), 에이코사펜타엔산(EPA), 도코사헥사엔산(DHA), 속단(Phlomis umbrosa) 추출물, 효모 추출물, 대두 배아 추출물, 대두 레시틴, N-아세틸글루코사민, 밀납, 포도씨유 및 비타민C를 추가로 더 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 용어 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분으로 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다.
예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다. 상기 추출물은 건조 후 분말화하거나, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득할 수 있다.
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 석유에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 트리클로로메탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 1,3-부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있고, 구체적으로 70 내지 85% 농도(v/v)의 에탄올에 의해 추출될 수 있다.
상기 원료에 포함된 유효성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으며, 상기 에탄올은 천연 원료의 생리 활성 물질 추출에 있어서 선택성이 뛰어나므로 상기 에탄올 추출에 의해 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 포함하는, 피부 수분 보충 및 피부 탄력 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은, 상기 조성물을 포함하는 안구건조증 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품은 소세지, 육류, 빵, 초콜릿류, 스넥류, 캔디류, 과자류, 라면, 피자, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다. 음료수로 제형화할 경우에 본 발명의 조성물 외에 첨가되는 액체 성분으로는 이에 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올일 수 있다.
상기 식품의 종류는 구체적으로 건강기능식품일 수 있다. 상기 건강기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 점증제, pH 조절제, 안정화제, 보존제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 건강기능 식품은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
상기 건강기능식품은 식품의 생체 조절 기능을 강조한 식품으로 물리적, 생화학적, 생물공학적인 방법을 이용하여 특정 목적에 작용 및 발현하도록 부가가치를 부여한 식품이다. 이러한 건강기능 식품의 성분은 생체 방어와 신체 리듬의 조절, 질환의 방지 및 회복에 관계하는 신체 조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발휘하도록 설계하여 가공하게 되며, 식품으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제, 감미료 또는 기능성 원료를 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물을 건강기능식품(또는 건강기능 음료 첨가물)으로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용하고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 상기 조성물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 개선, 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은, 상기 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 포함하는, 피부 수분 보충 및 피부 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은, 상기 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 포함하는, 안구건조증 또는 황반변성의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 투여를 위하여, 상기 본 발명의 마리골드 추출물, 루테인, 이노시톨 및 글루타치온 외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 어떠한 제형으로도 적용가능하며, 보다 구체적으로 경구용 제형일 수 있다.
또한 비경구용 제형으로도 적용될 수 있으며, 비경구형 제형으로는 주사용, 도포용, 에어로졸 등의 스프레이 형일 수 있다. 더욱 구체적으로는 주사제 형태일 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 적용될 수 있으며, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 성병, 연령, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 또 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 다른 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 또한 본 발명의 약학적 조성물은 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 필요에 따라 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 용어 "개체"는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 증상이 호전될 수 있는 안구 건조증을 가진 동물 또는 인간을 포함한다. 본 발명에 따른 치료용 조성물을 개체에게 투여함으로써, 안구 건조증을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다.
본 발명의 용어 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 인간 또는 동물에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명에 따른 치료용 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 치료용 조성물은 유효성분이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 조성물은 히알루론산 합성효소의 발현을 증가시켜 히알루론산의 합성을 촉진하는 한편, 콜라겐의 생합성을 촉진하는 효과를 동시에 나타내는 것을 특징으로 하여, 피부 수분 보충 및 재생과 안구 건조증 개선 등의 복합적인 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 조성물은 분자 단위로 작용하여 히알루론산 합성 효소의 유전자 발현을 촉진하는 효과를 나타내므로, 그 적용 분야가 매우 광범위할 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 마리골드 추출물, 루테인 및 지아잔틴의 히알루론산 합성 촉진 효과 확인
마리골드 추출물, 루테인 및 지아잔틴의 히알루론산 합성 촉진 효과를 확인하였다.
구체적으로, 사람 피부유래 섬유아세포 3x105개를 6 웰 플레이트에 분주하여 24시간 동안 배양한 후에 무혈청 배지로 2번 세척하고 교체하여 세포를 준비하였다.
이후, 상기 마리골드 추출물, 루테인 및 지아잔틴을 3μg/ml의 농도로 섞어준 후 24시간 배양하였다.
배양 후 상등액을 수거하여 히알루론산의 양을 ELISA 키트를 이용하여 정량하고, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
투여물질
(3ug/ml)		 대조군 마리골드 추출물 루테인 지아잔틴
히알루론산
생성량 (ng/ml)		 220.3 345.2 316.4 230.4
상기 표 1에 나타난 바와 같이, 마리골드 추출물 및 루테인이 사람의 피부세포에서 히알루론산 생합성 촉진 능력이 있음을 확인하였다.
실시예 2. 인간 섬유아세포에서 마리골츠 추출물의 HAS-2 유전자 발현 효과 측정
마리골드 추출물이 히알루론산 생성을 증가시킨다는 실험으로부터, 상기 마리골드 추출물이 분자단위에서 유전자의 발현을 증가시키는 효과를 나타내는지 확인하기 위하여, 히알루론산 생성 효소인 HAS2(Hyaluronan synthase 2)의 유전자인 HAS2의 발현 정도를 확인하였다.
구체적으로, 사람 피부유래 섬유아세포를 10% 우태아혈청(FBS), 페니실린 50U/mL, 스트렙토마이신 50μg/mL를 첨가한 DMEM(Dulbecco' s modified Eagle' s medium) 배지에서 5%의 CO2, 37℃ 조건에서 배양하였다. 사람 피부유래 섬유아세포 3x105 개를 6웰 플레이트에 분주하여 24hr 배양 후에 무혈청 배지로 교체하여 마리골드 추출물을 각 0, 3, 6, 9 μg/ml의 농도로 섞어준 후 24hr 배양하였다.
배양 후 수거한 세포들을 RNeasy mini kit(Qiagen, 독일)를 이용하여 RNA 추출하였다.
상기 추출한 RNA를 정량하여 1μg을 GeneAmp RNA PCR kit(Applied Biosystems, 미국)를 이용하여 역전사(reverse transcription) 하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 cDNA를 HAS-2, GAPDH 프라이머를 활용하여 PCR 반응을 통해 증폭하고 아가로스 겔 전기영동 후 FluoroS Multimanager (Biorad 사)를 이용하여 발현정도를 분석하였다.
상기 HAS-2 및 GAPDH의 PCR 반응을 위한 프라이머는 하기 표 2에 나타내었다.
프라이머 명 염기서열 서열번호
HAS-2 Forward primer 5'-CTGTGAAAAGGCTGACCTAC-3' 1
HAS-2 Reverse primer 5'-TCAGTAAGGCACTTGGACCG-3' 2
GAPDH forward primer 5'-CTGATGCCCCCATGTTCGT-3' 3
GAPDH reverse primer 5'-TGTGAGGAGGGGAGATTCA-3' 4
상기 프라이머를 이용하여 유전자 발현을 분석한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
마리골드 추출물 투여량(μg/ml) 0 3 6 9
HAS2 발현정도
(대조군 대비 %)		 100 168.2 223.6 248.9
상기 표 3에 나타난 바와 같이, 마리골드 추출물을 각각 3μg/ml, 6μg/ml, 9μg/ml 농도로 처리하였을 때 HAS-2 유전자의 발현이 현저히 증가하는 것을 확인하였다.또한, 발현 정도를 분석한 결과 마리골드 추출물에 농도 의존적으로 HAS-2의 발현이 증가하는 것을 확인하였는 바, 이러한 결과는 마리골드 추출물이 인체 섬유아세포에서 히알루론산 합성 효소 유전자인 HAS-2의 발현을 효과적으로 증가시킨다는 것을 의미한다.
실시예 3. 루테인 및 지아잔틴의 인간 섬유아세포에서 HAS-2 유전자 발현 효과 확인
상기 실시예 2에서는 마리골드 추출물이 인간 섬유아세포에서 히알루론산 합성 효소 유전자인 HAS-2의 발현을 현저히 증가시키는 것을 확인하였으므로, 마리골드 추출물에 함유된 다수의 생체분자 중에서 눈에 중요한 유효물질로 알려진 루테인과 지아잔틴 각각의 효과를 확인하였다.
상기 실시예 2과 같은 방법으로 인체 섬유아세포를 배양하고, 루테인 및 지아잔틴을 각각 0.5μg/ml, 1μg/ml, 2μg/ml 농도로 처리한 후 24시간 배양하여 HAS-2의 발현정도를 확인한 결과를 하기 표 4 및 표 5에 나타내었다.
루테인 투여량
(μg/ml)		 0 0.5 1 2
HAS2 발현정도
(대조군 대비 %)		 100 134.3 155.4 175.6
지아잔틴 투여량
(μg/ml)		 0 0.5 1 2
HAS2 발현정도
(대조군 대비 %)		 100 114.7 101.6 105.8
상기 표 4에 나타난 바와 같이, 루테인을 처리한 섬유아세포를 24시간 배양 후에 측정한 결과 HAS-2 유전자의 발현은 현저히 증가하는 반면, 표 5에 나타난 바와 같이 지아잔틴을 처리한 섬유아세포에서의 HAS-2 유전자의 발현은 증가하지 않았다. 즉, 이러한 결과로부터 루테인이 인체 섬유아세포에서 히알루론산 합성효소 유전자인 HAS-2의 발현을 효과적으로 증가시키는 유효 성분임을 확인하였다.
또한, 상기 실시예 1의 결과에 나타난 바와 같이, 마리골드 추출물을 처리한 경우에 루테인을 단독으로 처리한 경우보다 효과가 소폭 상승하는 결과를 보였는 바, 이는 마리골드 추출물에 포함된 다른 생체분자들과 루테인이 상호작용한 결과로 보인다.
실시예 4. 루테인, 이노시톨 및 글루타치온 복합물의 히알루론산 합성 촉진 효과 확인
루테인에 이노시톨 및 글루타치온을 더 추가하여 복합물을 형상한 경우의 섬유아세포내의 히알루론산 합성 촉진 정도를 확인하였다.
구체적으로, 사람 피부유래 섬유아세포 3x105개를 6 웰 플레이트에 분주하여 24시간 배양 후에 무혈청 배지로 2번 세척하고 교체하고, 루테인, 이노시톨, 글루타치온 및 세가지 모두를 혼합한 복합물을 3μg/ml의 농도로 섞어준 후 24시간 배양하였다.
배양 후 상등액을 수거하여 히알루론산의 양을 ELISA Kit를 이용하여 정량하고, 정량된 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
투여물질(3ug/ml) 대조군 루테인 이노시톨 글루타치온 복합체
히알루론산
생성량(ng/ml)		 210.1 310.2
(+100.1)		 236.4
(+26.3)		 230.4
(+20.3)		 380.9
(+170.8)
상기 표 6에 나타난 바와 같이, 루테인 뿐만 아니라 이노시톨과 글루타치온 또한 사람의 피부세포에서 히알루론산 생합성 촉진 효과가 있음을 확인하였다. 특히, 상기 세가지를 혼합한 복합물의 경우에는 루테인, 이노시톨, 글루타치온 각각의 증가량보다 현저히 우수한 효과를 보였는 바, 이는 상기 물질들이 세포내에서 상호작용을 통해 단순히 예상되는 정도의 효과를 넘는 현저한 효과를 발휘하는 것을 의미한다.
실시예 5. 루테인, 이노시톨 및 글루타치온의 콜라겐 생성 효과 확인
루테인, 이노시톨 및 글루타치온이 콜라겐 생성 효과를 갖는지 확인하기 위한 실험을 진행하였다.
구체적으로, 섬유아세포내의 콜라겐 type 1의 생성량을 확인하기 위해서 사람 피부유래 섬유아세포 7x105개를 6웰 플레이트에 분주하여 24시간 배양한 후에 무혈청 배지로 2번 세척하고 교체하여 각 물질 및 복합물을 3μg/ml의 농도로 섞어준 후 24시간동안 배양하였다.
배양 후 상등액을 수거하여 콜라겐 type 1의 양을 ELISA Kit를 이용하여 정량하고, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
투여물질 (3ug/ml) 대조군 루테인 이노시톨 글루타치온 복합체
콜라겐 Type 1
생성량(%)		 100 134.6 101.4 180.4 280.6
상기 표 5에 나타난 바와 같이, 루테인 및 글루타치온은 사람의 피부세포에서 콜라겐 type1의 생합성 촉진 능력이 있으나, 이노시톨은 촉진 효과를 나타내지 못하는 것을 확인하였다. 하지만, 각 물질을 혼합하여 복합물로 투여했을 때에는 콜라겐 생합성의 효과가 현저히 증가함을 확인하였다.
실시예 6. 마리골드 추출물, 이노시톨 및 글루타치온을 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물의 제조
상기 실시예 1 내지 5를 통해 마리골드 추출물의 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진 효과를 확인하였는 바, 마리골드 추출물을 포함하고, 이노시톨 및 글루타치온을 비롯한 기타 부재료를 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 제조하였다.
구체적으로, 상기 조성물은 마리골드 추출물 5 내지 50 중량부, 이노시톨 50 내지 200 중량부, 글루타치온 1 내지 20 중량부를 포함하고, 부재료로서 히알루론산 70 내지 140 중량부, 피쉬콜라겐 70 내지 150 중량부, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil) 5 내지 60 중량부, 에이코사펜타엔산(EPA) 10 내지 60 중량부, 도코사헥사엔산(DHA) 5 내지 60 중량부, 속단(Phlomis umbrosa) 추출물 80 내지 130 중량부, 효모 추출물 80 내지 130 중량부, 대두 배아 추출물 70 내지 140 중량부, 대두 레시틴 70 내지 125 중량부 및 N-아세틸글루코사민 50 내지 150 중량부, 밀납 50 내지 150 중량부, 포도씨유 50 내지 150 중량부, 비타민C 50 내지 150 중량부를 포함하여 제조할 수 있으며, 더욱 구체적으로는, 마리골드 추출물 20 중량부, 이노시톨 100 중량부, 글루타치온 8 중량부를 포함하고, 부재료로서 히알루론산 90 중량부, 피쉬콜라겐 100 중량부, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil) 30 중량부, 에이코사펜타엔산(EPA) 33 중량부, 도코사헥사엔산(DHA) 22 중량부, 속단(Phlomis umbrosa) 추출물 100 중량부, 효모 추출물 100 중량부, 대두 배아 추출물 100 중량부, 대두 레시틴 100 중량부 및 N-아세틸글루코사민 100 중량부, 밀납 100 중량부, 포도씨유 100 중량부, 비타민C 100 중량부를 포함하여 제조하였다.
상기 속단 추출물은 속단을 70 내지 85%의 에탄올을 이용하여 70 내지 80℃에서 45분 내지 90분동안 환류 추출하여 수득한 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이때, 상기 효모 추출물은 피치아 크루이베리(Pichia Kluyveri), 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces Cerevisiae), 사카로마이세스 멘드슈리커스(Saccharomyces Mandshuricus), 사카로마이세스 보르데르만니(Saccharomyces Vordermannii), 사카로마이세스 마시안너스(Saccharomyces Marxianus), 지고 사카로마이세스 메저(Zygo Saccharomyces Major) 및 한세누라 아노마라(Hansenula Anomala)로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 효모의 혼합물로부터 추출된 것일 수 있으나, 더욱 구체적으로는 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces Cerevisiae), 사카로마이세스 멘드슈리커스(Saccharomyces Mandshuricus), 사카로마이세스 마시안너스(Saccharomyces Marxianus), 지고 사카로마이세스 메저(Zygo Saccharomyces Major) 및 한세누라 아노마라(Hansenula Anomala)가 1:1:1.5:0.5:1의 중량비로 구성된 효모 혼합물로부터 추출한 것을 사용하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
실시예 7. 루테인, 이노시톨 및 글루타치온을 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물의 제조
상기 실시예 3 내지 5를 통해 마리골드 추출물 중 루테인이 핵심적인 요소임을 확인하였고, 마리골드 추출물을 그대로 이용하는 경우보다 다소간의 효과차이가 있으나, 인공적으로 합성된 루테인을 사용할 수 있으므로 루테인, 이노시톨 및 글루타치온을 비롯한 기타 부재료를 포함하는 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 조성물을 제조하였다.
구체적으로, 상기 조성물은 루테인 20 중량부, 이노시톨 100 중량부, 글루타치온 8 중량부를 포함하고, 부재료로서 히알루론산 90 중량부, 피쉬콜라겐 100 중량부, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil) 30 중량부, 에이코사펜타엔산(EPA) 33 중량부, 도코사헥사엔산(DHA) 22 중량부, 속단(Phlomis umbrosa) 추출물 100 중량부, 효모 추출물 100 중량부, 대두 배아 추출물 100 중량부, 대두 레시틴 100 중량부 및 N-아세틸글루코사민 100 중량부를 포함하여 제조하였다.
상기 속단 추출물 및 효모 추출물에 대해서는 전술한 바와 같다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

  1. 마리골드 추출물 5 내지 50 중량부, 이노시톨 50 내지 200 중량부 및 글루타치온 1 내지 20 중량부, 히알루론산 70 내지 140 중량부, 피쉬콜라겐 70 내지 150 중량부, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil) 5 내지 60 중량부, 에이코사펜타엔산(EPA) 10 내지 60 중량부, 도코사헥사엔산(DHA) 5 내지 60 중량부, 속단(Phlomis umbrosa) 추출물 80 내지 130 중량부, 효모 추출물 80 내지 130 중량부, 대두 배아 추출물 70 내지 140 중량부, 대두 레시틴 70 내지 125 중량부 및 N-아세틸글루코사민 50 내지 150 중량부, 밀납 50 내지 150 중량부, 포도씨유 50 내지 150 중량부 및 비타민C 50 내지 150 중량부를 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 식품 조성물.
  2. 루테인 20 중량부, 이노시톨 100 중량부, 글루타치온 8 중량부를 포함하고, 부재료로서 히알루론산 90 중량부, 피쉬콜라겐 100 중량부, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil) 30 중량부, 에이코사펜타엔산(EPA) 33 중량부, 도코사헥사엔산(DHA) 22 중량부, 속단(Phlomis umbrosa) 추출물 100 중량부, 효모 추출물 100 중량부, 대두 배아 추출물 100 중량부, 대두 레시틴 100 중량부 및 N-아세틸글루코사민 100 중량부를 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 식품 조성물.
  3. 마리골드 추출물 5 내지 50 중량부, 이노시톨 50 내지 200 중량부 및 글루타치온 1 내지 20 중량부, 히알루론산 70 내지 140 중량부, 피쉬콜라겐 70 내지 150 중량부, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil) 5 내지 60 중량부, 에이코사펜타엔산(EPA) 10 내지 60 중량부, 도코사헥사엔산(DHA) 5 내지 60 중량부, 속단(Phlomis umbrosa) 추출물 80 내지 130 중량부, 효모 추출물 80 내지 130 중량부, 대두 배아 추출물 70 내지 140 중량부, 대두 레시틴 70 내지 125 중량부 및 N-아세틸글루코사민 50 내지 150 중량부, 밀납 50 내지 150 중량부, 포도씨유 50 내지 150 중량부 및 비타민C 50 내지 150 중량부를 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 화장료 조성물.
  4. 루테인 20 중량부, 이노시톨 100 중량부, 글루타치온 8 중량부를 포함하고, 부재료로서 히알루론산 90 중량부, 피쉬콜라겐 100 중량부, 유성비타민A지방산에스테르(Vitamin A in Oil) 30 중량부, 에이코사펜타엔산(EPA) 33 중량부, 도코사헥사엔산(DHA) 22 중량부, 속단(Phlomis umbrosa) 추출물 100 중량부, 효모 추출물 100 중량부, 대두 배아 추출물 100 중량부, 대두 레시틴 100 중량부 및 N-아세틸글루코사민 100 중량부를 포함하는, 히알루론산 및 콜라겐 생성 촉진용 화장료 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 피부 수분 보충, 피부 탄력 개선 및 안구건조증 개선 효과를 갖는 것인, 식품 조성물.
  6. 제3항 또는 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 피부 수분 보충, 피부 탄력 개선 및 안구건조증 개선 효과를 갖는 것인, 화장료 조성물.
  7. 삭제
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