KR102167264B1 - 아데노바이러스 55형에 특이적인 단클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 - Google Patents

아데노바이러스 55형에 특이적인 단클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 Download PDF

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Abstract

본 발명은 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주에 의하여 생산되고, 아데노바이러스 55형에 특이적으로 결합하는 단클론항체 및 상기 단클론항체를 생산하는 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주에 관한 것으로, 본 발명에서 개발된 단클론항체는 아데노바이러스 55형 감염을 진단하는 방법에 유용하게 활용될 수 있을 것이다.

Description

아데노바이러스 55형에 특이적인 단클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마 세포주{Monoclonal antibody specific to Adenovirus type 55 and hybridoma cell line producing the same}
본 발명은 아데노바이러스 55형에 특이적인 단클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마 세포주에 관한 것이다.
아데노바이러스는 90~100nm의 중형 크기의 비-외피성(non-enveloped) 바이러스이다. 모양은 정이십면체로 되어 있으며, dsDNA(double-stranded DNA)를 가지고 있다. 아데노바이러스는 A부터 G까지 7개의 아속(subgenera)으로 분류되며, 현재까지 103개의 유전형이 보고되었다.
아데노바이러스는 어린이가 걸린 상부 호흡기 질환 중 5~10%의 원인이며, 어른들도 감염되기도 한다. 급성호흡기 질환과 관련있는 아데노바이러스 유전자형은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21, 55형이 있고, 아데노바이러스 감염은 주로 경미한 임상경과를 보이지만 건강한 소아와 성인에서 중증 감염으로 나타나는 경우가 종종 있다. 중증 아데노바이러스 감염은 주로 아데노바이러스 5, 7, 14 및 21형과 연관된 것으로 알려져 있으며, 특히 군 훈련소나 학교를 중심으로 발병하는 경우가 많다. 실제로 군대에서 발생하는 폐렴의 대부분(79.3%)이 아데노바이러스에 의한 것이라는 연구도 있으며 중증 폐렴 및 사망으로 진행하는 사례도 알려져 있다(Infect Chemother (2012) 44:372-376, Emerg Infect Dis (2014) 20:875-877).
인간 아데노바이러스 55형은 11형과 14형간의 헥손(hexon) 유전자 재배열(rearrangement)에 의해 생성된 새로운 유전형으로, 2004년 터키, 2005년 싱가포르, 2009년 중국 등지에서 유행이 있었던 것으로 알려져 있다. 2005년 이후로 중국 등지에서는 아데노바이러스 55형이 산발적인 유행의 중요한 원인으로 보고되고 있으며 소아에서 검출되는 아데노바이러스의 3.1%를 차지하는 것으로 나타났다. 또한 다른 혈청형에 비해 pneumonia severity index 점수가 높았고, 일반적인 폐렴과 비교해 중증도가 낮지 않은 것으로 파악되고 있다. 아데노바이러스 55형의 유입경로 및 시기는 명확하지 않지만 이미 국내에도 확산되어 유행을 일으켰을 가능성도 있다.
아데노바이러스 감염은 초기 진단 및 치료 시에는 치료율이 높으나 병의 진행이 빠르기 때문에 조기진단 및/또는 치료 실패 시 폐렴으로 진행되어 위험하다. 따라서, 아데노바이러스 감염의 정확한 조기 현장진단 방법이 요구되는 실정이다.
한편, 한국등록특허 제2076343호에는 '실시간 LAMP법을 이용한 아데노바이러스 55형 검출용 조성물 및 이의 용도'가 개시되어 있고, 한국등록특허 제1993319호에는 '인간 아데노바이러스 유전자형 판별용 프라이머 세트 및 이의 용도'가 개시되어 있으나, 본 발명의 아데노바이러스 55형에 특이적인 단클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마 세포주에 관한 내용은 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자는 아데노바이러스 55형에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 제조한 후, 다양한 아데노바이러스 유전형에 대해 상기 단클론항체의 중화능을 시험한 결과, 본 발명의 하이브리도마 세포주로부터 생산되는 단클론항체가 아데노바이러스 55형에 대해 특이적인 중화능을 나타내며, 아데노바이러스 55형을 신속하게 검출할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주에 의하여 생산되고, 아데노바이러스 55형에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단클론항체를 생산하는 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단클론항체를 포함하는 아데노바이러스 55형 검출용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단클론항체를 시료 샘플과 접촉시켜 형성된 항원-항체 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 아데노바이러스 55형의 검출 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 단클론항체를 포함하는 아데노바이러스 55형 검출용 키트를 제공한다.
본 발명에서 개발된 단클론항체는 아데노바이러스 55형을 신속하게 진단할 수 있는 진단용 키트 또는 아데노바이러스 55형 감염을 진단하는 방법에 유용하게 활용될 수 있을 것이다.
도 1은 배양한 아데노바이러스의 역가를 측정하기 위한 플라크 분석(plaque assay) 결과이다.
도 2는 아데노바이러스 55형에 대한 단클론항체 4종(1P11, 1P63, 1P84, 1P95)의 전기영동 분석 결과이다.
도 3은 아데노바이러스 55형에 대한 단클론항체 4종(1P11, 1P63, 1P84, 1P95)의 중화능을 분석하기 위한 PRNT(plaque reduction neutralization test) 결과이다.
도 4는 아데노바이러스 55형에 대한 단클론항체 4종(1P11, 1P63, 1P84, 1P95; 처리 농도 2ng)의 아데노바이러스 유전형별 중화능을 분석한 PRNT 결과이다. Cont.; mouse total IgG.
도 5는 아데노바이러스 55형에 대한 단클론항체 1P63가 적용된 RDT(rapid diagnostic test) 키트를 이용하여 아데노바이러스 55형에 대한 검출 한계를 분석한 결과이다. C: control, Pan: 아데노바이러스 모든 유형에 대해 결합가능한 항체 1P65 사용, 55: 아데노바이러스 55형 특이적 항체 1P63 사용.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주에 의하여 생산되고, 아데노바이러스 55형에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 제공한다.
아데노바이러스의 주요 단백질로는 헥손(Hexon), 펜톤(Penton), 섬유(Fiber)가 알려져 있으며, 헥손(hexon) 단백질은 아데노바이러스 복제에 필요한 캡시드 단백질의 필수 구성 요소이다. 아데노바이러스의 정이십면체 캡시드(icosahedral capsid)는 240개의 헥손과 12개의 펜톤(penton)으로 구성되어 있으며, 각각의 펜톤이 꼭지점을 구성하며 펜톤 섬유(penton fibre)가 돌출되어 있다. 헥손은 그룹 특이적 항원(group specific antigen)이고, 펜톤 섬유는 유전형 특이적 항원(type specific antigen)이다.
본 발명에 따른 상기 단클론항체는 항원과 결합하여 그 작용을 억제하거나, 중화(neutralization)시킬 수 있다.
본 발명에서 용어 '단클론항체'란 당해 분야에 공지된 용어로서 단일 항원성 부위에 대해서 지시되는 고도의 특이적인 항체를 의미한다. 단클론항체는 단세포군 항체 또는 단일클론항체라고 불리기도 한다. 통상적으로, 상이한 에피토프(항원결정기)들에 대해 지시되는 상이한 항체들을 포함하는 다클론항체와는 다르게, 단클론항체는 항원상의 단일 결정기에 대해서 지시된다. 단클론항체는 항원-항체 결합을 이용하는 진단 및 분석학적 분석법의 선택성과 특이성을 개선시키는 장점이 있으며, 또한 하이브리도마 세포 배양에 의해 합성되기 때문에 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는 또 다른 장점을 갖는다.
상기 하이브리도마가 생산하는 단클론항체는 정제하지 않고 사용할 수도 있으나, 최선의 결과를 얻기 위해서는 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려져 있는 방법에 따라 고순도(예컨대, 95% 이상)로 정제하여 사용하는 것이 바람직하다. 이러한 정제 기술로는, 예를 들어 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토 그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 정제 방법을 이용하여 배양 배지 또는 복수액으로부터 분리될 수 있다.
본 발명의 단클론항체는 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2020년 03월 26일자로 기탁된, 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주(Hybridoma(NS-1) cell(1P63))에 의하여 생산되는 단클론항체 1P63인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 상기 단클론항체는 아데노바이러스 55형에 특이적으로 결합하는 것이 특징이며, 추가로 아데노바이러스 11형에도 결합한다.
본 발명은 또한, 상기 단클론항체를 생산하는 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주를 제공한다.
상기 하이브리도마 세포주는 아데노바이러스 55형에 특이적으로 결합하는 단클론항체인 1P63를 생산하는 하이브리도마 세포주(Hybridoma(NS-1) cell(1P63))로, 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2020년 03월 26일자로 기탁되었다.
본 발명은 또한, 상기 단클론항체를 포함하는 아데노바이러스 55형 검출용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 유효성분으로 아데노바이러스 55형에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 포함하며, 바람직하게는 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주(Hybridoma(NS-1) cell(1P63))에 의하여 생산되는 단클론항체 1P63을 포함하며, 상기 단클론항체를 이용하여 아데노바이러스 55형에 대해 형성된 항원-항체 복합체를 검출함으로써 아데노바이러스 55형을 면역학적으로 검출할 수 있는 것이다.
본 발명은 또한, 상기 단클론항체를 시료 샘플과 접촉시켜 형성된 항원-항체 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 아데노바이러스 55형의 검출 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 검출 방법에 있어서, 상기 시료란 인간을 포함한 동물, 예를 들어 포유동물의 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇌척수액, 요(尿) 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 상기 시료를 조작하거나 조작하지 않은 상태로 본 발명에 따른 단클론항체와 반응시켜 아데노바이러스 55형을 검출할 수 있다.
본 발명에서 용어 "항원-항체 복합체"란, 시료 중의 아데노바이러스 55형 항원과 이를 인지하는 본 발명에 따른 단클론항체의 결합물을 의미하며, 이러한 항원-항체 복합체는 비색법(colormetric method), 전기화학법(electrochemical method), 형광법(fluorimetric method), 발광법(luminometry), 입자계수법(particle counting method), 육안측정법(visual assessment) 및 섬광계수법(scintillation counting method)으로 이루어진 군에서 선택되는 임의의 방법으로 검출할 수 있으나, 이에 제한되지 않고 다양한 응용과 적용이 가능하다.
본 발명에서는 항원-항체 복합체를 검출하기 위한 것으로 여러가지 표지체를 사용할 수 있다. 구체적인 예로는 이에 한정되지 않으나, 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자, 방사성 동위원소로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다.
검출 표지체로서 사용되는 바람직한 효소로는 아세틸콜린에스테라제, 알칼라인 포스파타제, β-D-갈락토시다제, 호스래디쉬 퍼옥시다제 또는 β-락타마제가 있으며, 바람직한 형광물로는 양자점, 플루오레세인, Eu3+, Eu3+ 킬레이트 또는 크립테이트가 있으며, 바람직한 리간드로는 바이오틴 유도체가 있고, 바람직한 발광물로는 아크리디늄 에스테르 또는 이소루미놀 유도체가 있으며, 바람직한 미소입자로는 콜로이드 금 또는 착색된 라텍스가 있고, 바람직한 방사성 동위원소로는 57Co, 3H, 125I 또는 125I-볼톤(Bolton) 헌터(Hunter) 시약이 있으나, 이에 제한되지 않는다.
항원-항체 복합체를 검출하는 방법은 바람직하게는 효소면역흡착법(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)을 이용하여 검출할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 효소면역흡착법은 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 항체를 이용하는 직접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 항체의 복합체에서 포획 항체를 인지하는 표지된 이차 항체를 이용하는 간접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 표지된 또 다른 항체를 이용하는 직접적 샌드위치 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 또 다른 항체와 반응시킨 후 이 항체를 인지하는 표지된 이차 항체를 이용하는 간접적 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법을 포함한다.
상기 단클론항체는 검출 표지체를 가질 수 있으며, 검출 표지체를 가지지 않을 경우는 이들 단클론항체를 포획할 수 있고, 검출 표지체를 가지는 또 다른 항체를 처리하여 확인할 수 있다.
본 발명은 또한, 상기 단클론항체를 포함하는 아데노바이러스 55형 검출용 키트를 제공한다.
본 발명의 키트에 포함되는 단클론항체는 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주(Hybridoma(NS-1) cell(1P63))에 의하여 생산되는 단클론항체 1P63일 수 있으나, 이에 제한하지 않는다.
본 발명에 사용하기 위한 키트 시스템은 이에 한정되는 것은 아니나, ELISA 플레이트, 딥-스틱 디바이스, 면역크로마토그래피법 및 방사 분할 면역검정 디바이스, 플로우-쓰로우(flow-through) 디바이스 등을 포함한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
재료 및 방법
1. 아데노바이러스 배양
아데노바이러스는 A549 세포(ATCC® CCL-185™)에 접종하고 72시간 후에 90% 이상의 CPE(cytopathic effects)를 확인하고, 상등액을 수집하여 4,500rpm, 10분간 원심분리하여 상등액을 채취하여 plaque assay, PRNT(Plaque Reduction Neutralization Test), 동물 면역에 사용하였다. 본 발명에서 사용한 아데노바이러스 55형은 국군의학연구소에서 감염 환자로부터 분리 배양한 12-164번을 사용하였으며, 아데노바이러스 4형은 국가병원체자원은행 자원번호 NCCP43156, 아데노바이러스 7형은 ATCC 자원번호 VR-7을 구입하여 사용하였다. 배양한 각 아데노바이러스의 역가는 Plaque assay를 수행하여 측정한 후 실험에 사용되었다(도 1).
2. 아데노바이러스 마우스 면역
배양한 아데노바이러스 55형을 1 x 108 pfu/㎖로 맞추고 250 ㎕ 바이러스와 250 ㎕ Freund's complete adjuvant를 섞어서 Balb/c 마우스(6주령, 수컷)의 복강에 2주 간격으로 3회 면역하고, 마우스 혈청을 채혈하여 ELISA를 통하여 항체 형성 여부를 확인한 후, 하이브리도마 세포주를 생산하였다.
3. 하이브리도마 클론 선별
상기 면역된 마우스로부터 확보한 B 세포를 마우스 유래의 골수종 세포인 Sp2 세포(myeloma cell)와 융합하여 단클론항체를 분비하는 융합세포인 하이브리도마를 제조하였다. 세포 융합의 일반적 과정은 Kohler and Milsten 방법을 참고하였다. 생산된 하이브리도마 세포를 배양하여 supernatant에서 항체 여부를 ELISA 테스트를 통하여 분석하였다. ELISA는 배양한 각 유전형의 아데노바이러스를 불활성화시켜 ELISA Plate에 코팅한 후 사용하였으며, 음성 대조군(마우스 total serum)과 비교하여 3배 이상 높은 반응을 보이는 클론 24종을 1차로 선별하였으며, 선별된 24종 중 아데노바이러스 55형에 대하여 중화반응이 우수한 4종의 클론(1P11, 1P63, 1P84, 1P95)을 선별하였다.
4. 플라크 감소 중화항체 검사법(plaque reduction neutralization test)
플라크 감소 중화항체 검사법(Plaque Reduction Neutralization Test, PRNT)은 아데노바이러스 플라크의 감소 정도를 측정하여 항체의 중화능을 측정하는 방법으로 분석 방법은 다음과 같다. 배양한 아데노바이러스를 1,000 pfu/㎖의 농도로 희석하고, 측정하고자 하는 단클론항체 또는 항혈청을 1/2배 단계희석으로 6단계를 진행하여 상기에서 준비한 아데노바이러스와 1:1로 섞어서 37℃, 1시간 반응 후에 4℃, overnight 정치하여 아데노바이러스와 단클론항체 또는 항혈청이 항원-항체 결합체를 형성하도록 유도한다. 그 후, 6-well plate에 빈틈 없이 키운 A549 세포에 전날 반응시킨 항원-항체 희석액을 도포하여 감염을 유도한 후에 상등액을 제거하고 배양배지에 최종 0.8% 아가로스를 녹인 배지를 도포하여 굳히고 37℃, 5% CO2 배양기에서 5일간 배양하고, 4% 파라포름알데히드(paraformaldehyde)로 1시간 고정하고, 1% 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색하여 아데노바이러스만 접종한 well과 비교하여 플라크 개수가 50% 이상 감소한 well을 단클론항체 또는 항혈청 희석비율로 중화역가를 측정한다.
5. RDT(rapid diagnostic test) 진단
RDT 실험은 환자로부터 swab을 이용하여 비인두 분비물을 채취하고 RDT 전개용액 400 ㎕에 섞은 후에 swab을 제거하고 전개용액을 디바이스의 점적부위에 추출된 검체를 수직으로 6방울 떨어뜨리고 15분 후 판독하여 아데노바이러스 pan/55를 진단하였다. 아데노바이러스 모든 유전형에 대해 결합가능한 항체(Pan)로는 1P65를 사용하였고, 상기 1P65 항체는 본 발명의 하이브리도마 제작 시 스크리닝 과정 중에 모든 아데노바이러스 유전형에 결합할 수 있는 특성을 보이는 단클론항체를 생산하는 클론을 선별하여, 이로부터 생산되는 단클론항체를 1P65로 명명하고 사용한 것이다.
실시예 1. 아데노바이러스 55형에 결합하는 단클론항체의 특성 분석
아데노바이러스 55형에 대하여 중화반응이 우수한 단클론항체를 생산하는 것으로 선별된 4종의 하이브리도마 세포주 클론(1P11, 1P63, 1P84, 1P95) 유래 단클론항체는 이하, 각각의 하이브리도마 세포주 명칭으로 동일하게 사용하였다. 본 발명자는 ThermoFisher사의 Rapid ELISA Mouse mAb Isotyping kit를 사용하여 선별한 4종의 단클론항체(1P11, 1P63, 1P84, 1P95)가 IgG임을 확인하였으며, 비환원 및 환원 조건의 겔에 로딩하여 분석한 결과, 4종 모두 예상되는 분자량으로 확인되었다(도 2).
실시예 2. 아데노바이러스 55형에 결합하는 단클론항체의 중화능 분석
상기 4종의 단클론항체의 아데노바이러스 55형에 대한 중화항체가 확인을 위해 플라크 감소 중화항체 검사법(PRNT)을 진행하였다. 그 결과, 1P11 항체는 0.19 ng/well 이하의 농도에서, 1P63 항체는 0.17 ng/well 이하의 농도에서, 1P84 항체는 0.171 ng/well 이하의 농도에서, 1P95 항체는 0.24 ng/well 이하의 농도에서 아데노바이러스 55형을 완벽하게 중화시킬 수 있음을 확인할 수 있었다(도 3).
또한, 아데노바이러스의 유전형에 따른 각 단클론항체의 중화능을 PRNT로 분석한 결과, 1P11, 1P63, 1P84 및 1P95 항체 모두 아데노바이러스 4형 및 7형에 대해서는 중화효과가 없는 것으로 확인되었으며(도 4B 및 4C), 아데노바이러스 55형에 특이적으로 중화효과를 나타내는 것으로 관찰되었다(도 4A).
단클론항체 4종의 아데노바이러스 유전형별 중화효과 분석
clone hAdV4 hAdV7 hAdV55
1P11 - - < 2 ng/well
1P63 - - < 2 ng/well
1P84 - - < 2 ng/well
1P95 - - < 2 ng/well
실시예 3. 단클론항체 1P63을 이용한 아데노바이러스 RDT 진단
아데노바이러스 55형에 대한 중화효과가 우수한 단클론항체 1P63를 이용하여, 아데노바이러스 유전형 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 14, 18, 19, 23형에 대한 교차 반응성을 RDT(rapid diagnostic test)로 분석하였다. 그 결과, 본 발명의 단클론항체 1P63는 아데노바이러스 55형과 11형을 동일하게 진단하였으며, 다른 유전형의 아데노바이러스에 대해서는 교차 반응성을 나타내지 않았다(표 2). 이는 아데노바이러스 55형이 11형과 14형간의 헥손(hexon) 유전자 재배열에 의해 생성된 새로운 유전형인 점에서 기인한 것으로 사료되며, 특히 아데노바이러스 11형의 헥손 단백질이 14형에 비해 55형과 높은 유사성을 보여, 55형과 11형 두 유전자형의 변별력이 높지 않았던 것으로 판단되었다.
Figure 112020037109264-pat00001
또한, 단클론항체 1P63를 이용한 RDT 진단에서 아데노바이러스 55형의 검출한계를 분석한 결과, 본 발명의 단클론항체 1P63은 1 x 104 pfu/rxn까지 아데노바이러스 55형을 검출할 수 있음을 확인하였다(도 5).
한국생명공학연구원 KCTC18813P 20200326

Claims (6)

  1. 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주에 의하여 생산되고, 아데노바이러스 55형 및 11형에 특이적으로 결합하는 단클론항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단클론항체는 IgG의 아이소타입(isotype)인 단클론항체.
  3. 제1항의 단클론항체를 생산하는 기탁번호가 KCTC18813P인 하이브리도마 세포주.
  4. 제1항의 단클론항체를 포함하는 아데노바이러스 55형 또는 11형 검출용 조성물.
  5. 제1항의 단클론항체를 시료 샘플과 접촉시켜 형성된 항원-항체 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 아데노바이러스 55형 또는 11형의 검출 방법.
  6. 제1항의 단클론항체를 포함하는 아데노바이러스 55형 또는 11형 검출용 키트.
KR1020200043493A 2020-04-09 2020-04-09 아데노바이러스 55형에 특이적인 단클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 KR102167264B1 (ko)

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Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Emerging Microbes & Infections, Vol. 7, pp. 206(2018.12.08.) *
Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, Vol. 9, Article 417, pp. 1-8(2019.12.04.) *
Virology, Vol. 518, pp. 272-283(2018.03.15.) *
Virology, Vol. 543, pp. 20-26(2019.12.12.) *
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