KR102159051B1 - 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 - Google Patents
라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102159051B1 KR102159051B1 KR1020190084737A KR20190084737A KR102159051B1 KR 102159051 B1 KR102159051 B1 KR 102159051B1 KR 1020190084737 A KR1020190084737 A KR 1020190084737A KR 20190084737 A KR20190084737 A KR 20190084737A KR 102159051 B1 KR102159051 B1 KR 102159051B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- vector
- promoter
- gene
- recombinant
- promoter region
- Prior art date
Links
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 title claims abstract description 57
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 title claims abstract description 35
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 64
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 31
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 4
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 claims description 4
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 claims description 4
- 241000713896 Spleen necrosis virus Species 0.000 claims description 4
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 claims description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 claims description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 2
- 208000004668 avian leukosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005266 avian sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 claims description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 abstract description 45
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 10
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 10
- 101000609762 Gallus gallus Ovalbumin Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 108010082455 Sebelipase alfa Proteins 0.000 description 7
- 229940041615 kanuma Drugs 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010007005 Estrogen Receptor alpha Proteins 0.000 description 4
- 102100038595 Estrogen receptor Human genes 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 4
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 3
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000004037 cervical canal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/30—Bird
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
- C12N2015/8518—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic expressing industrially exogenous proteins, e.g. for pharmaceutical use, human insulin, blood factors, immunoglobulins, pseudoparticles
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 관한 것으로서, 본 발명의 재조합 프로모터 및 벡터를 이용하는 경우 닭에서 목적단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
Description
본 발명은 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터, 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
본 발명은 난관 특이적 발현 프로모터 및 이를 포함하는 재조합 발현 벡터에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 닭의 난관에서 특이적으로 발현하는 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 발현 벡터에 관한 것이다.
가금의 난관은 오브알부민(ovalbumin)을 포함하는 여러 가지 단백질들을 분비하고 세포의 증식 및 분화가 주기적으로 일어나는 곳이며, 일명 ‘나팔관’이라고 불리는 기관이다. 특히, 난생인 동물들에서는 난관벽에서 영양성분 및 난각 등을 분비하여 알에 공급하는 것으로 알려져 있고, 계란의 경우에도 계란에 대량의 단백질을 축적하기 위하여 많은 단백질을 분비하는 기관으로 잘 알려져 있다(오봉국, 현대가금학, 1988).
일반적으로 계란은 단백질, 비타민A, 콜레스테롤, 무기질 등의 많은 영양성분이 함유된 식품으로 단백질은 우유에 비해 2배 정도 높은 함유량을 가지고 있고 지방 함유량도 우유나 치즈, 소고기에 비해 높아 뛰어난 영양학적 가치를 지니고 있다. 이 외에도 계란은 면역촉진 및 질병 치료의 기능적 성질을 보유하고 있는 것으로 밝혀진 바 있으며, 특히, 계란의 난백은 독성물질 및 자극물질을 섭취 하였을 때 이에 대한 해독제의 기능을 하며, 위와 장의 점막을 보호하고 궤양의 형성을 예방하는 것으로 알려진 바 있다. 따라서 이러한 계란의 소비가 최근 들어 매우 급증하고 있는 추세이며, 이에 따라 여러 가지 인체에 유용한 새로운 기능을 함유하는 기능성 계란을 생산하기 위한 기술 개발에 관심이 대두되고 있다. 이와 관련되어 현재까지 개발된 종래기술들로는 대한민국 공개특허 제2006-0030186호에 우모분 및 피리독신이 첨가된 사료로 산란계를 사양하여 타우린이 증가된 계란을 생산하는 방법이 개시된 바 있고, 대한민국 공개특허 제2003-0082207호에는 일반 배합사료에 함초를 가미하여 함초에 풍부한 마그네슘, 칼슘, 칼륨, 철, 인, 요오드, 나트륨 및 염분 등 바닷물 속에 함유된 각종 미네랄 성분이 풍부하게 함유된 미네랄 활성 함초 계란의 생산방법이 개시된 바 있으며, 대한민국 등록특허 제 0567311호에는 알로에를 함유하는 산란계 사료조성물을 이용한 특수란 생산방법이 개시된 바 있다. 그러나 상기 종래기술에 의한 기능성 계란의 생산은 배합사료에 특정성분을 첨가하여 닭에 섭취시킬 경우 첨가량에 비례하여 난백 및 난황 속에 특정 영양성분이 증가한다는 점을 감안한 것으로 이는 배합사료의 구입비 외에 첨가제의 부대비용이 증가한다는 단점이 있다.
따라서 최근에는 유전공학 기술의 발달로 인해 이를 이용한 기능성 계란을 생산하려는 기술들이 개발되고 있는데, 특히, 이중에서 제일 관심을 받고 있는 주제는 형질전환 닭으로서 인체에 유용한 유전물질을 함유한 계란을 생산하는 닭을 개발하고자 많은 연구가 국내외에서 진행 중에 있다. 현재까지 형질전환 닭을 생산하기 위해 사용되고 있는 유전공학 기술로는 유용 단백질을 발현하는 유전자를 포함하는 벡터를 이용하여 형질전환 닭을 생산하거나(Harvey A. J. et al., Nat. Biotechnol. 20, 396-399, 2002) 또는 프로모터를 이용하여 닭 내에서 유용 단백질을 생산하는 방법 등이 있다(Harvey A. J. & Ivarie R., Poult Sci. 82, 927-930, 2003; Chen Y. X., Mol. Vis. 17,874-883, 2004). 특히, 상기 프로모터를 이용하는 방법에 있어서, CMV 프로모터 및 오브알부민 프로모터를 이용하는 방법들이 개발된 바 있으나, 상기 CMV 프로모터는 임의적으로 몸 전체에서 발현이 되어 발현 조절이 어려울 뿐 아니라 닭 자체의 생리 현상을 변화시킬 수 있는 단점이 있다. 반면, 오브알부민 프로모터는 난관과 계란에서만 특이적으로 발현되어 조직 특이적으로 단백질의 발현을 유도할 수 있기 때문에 비정상적인 닭의 생리 현상을 최소화 시킬 수 있다. 그러나 이러한 오브알부민 프로모터는 이미 특허권을 외국에서 가지고 있는 관계로 이를 활용한 형질전환 닭을 생산한다고 하여도 산업화하는 데는 많은 어려움이 있으며 이를 이용한 조직 특이적인 형질전환 닭을 생산한 사례가 극소수에 불과하다.
따라서 기능성 계란의 생산뿐만 아니라 이를 생산하는 형질전환 닭의 생산 및 이로부터 인체에 유용한 단백질들을 생산하기 위하여 조직 특이적으로 발현하며 닭의 생리 현상에 큰 영향을 미치지 않는 새로운 유전자 및 프로모터의 발굴이 시급한 실정이다.
이에 본 발명자들은 기능성 계란의 생산 및 이를 생산하는 형질전환 닭의 생산을 위하여 조직 특이적으로 발현을 유도하는 새로운 프로모터를 발굴하기 위해 실험을 수행하던 중, 닭의 난관에서 특이적으로 발현하는 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 발현 벡터를 제조함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공한다.
또한, 본 발명을 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터, 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 이용하는 경우 닭에서 목적단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
도 1은 재조합 프로모터에 포함된 라이소자임 유전자의 프로모터 영역의 염기서열(857 bp)을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에서 제조한 재조합 프로모터의 개략도를 나타낸 것이다.
도 3은 닭의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 리포터 벡터(LYS-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 리포터 벡터(Kanuma)를 비교하여 나타낸 것이다.
도 4는 HeLa 세포에서 LYS-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 5는 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포(cOECs)에서 LYS-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 2는 본 발명에서 제조한 재조합 프로모터의 개략도를 나타낸 것이다.
도 3은 닭의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 리포터 벡터(LYS-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 리포터 벡터(Kanuma)를 비교하여 나타낸 것이다.
도 4는 HeLa 세포에서 LYS-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 5는 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포(cOECs)에서 LYS-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터에 관한 것으로서, 상기 재조합 프로모터는 목적 단백질을 닭에서 발현시키는데 사용될 수 있다.
상기 라이소자임 유전자의 프로모터 영역은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하고, 상기 오브알부민 유전자의 프로모터 영역은 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 프로모터 영역 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 변이체는 염기서열은 변화되지만, 서열번호 1 또는 2의 염기 서열과 유사한 기능적 특성을 갖는 염기 서열이다. 구체적으로, 상기 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 염기서열은 서열번호 1의 염기 서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있고, 상기 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 염기서열은 서열번호 2의 염기서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어, '프로모터(promoter)'란, 일반적으로 전사를 개시하는 지점을 포함하는 암호화 부위의 상류 쪽에 위치하는 유전자 부위로, 흔히 유전자 발현을 조절하는 TATA 박스, CAAT 박스 부위, 외부 자극에 반응하여 유전자 발현에 영향을 주는 부위 및 위치와 방향에 상관없이 거의 모든 유전자의 발현을 촉진하는 인핸서 등으로 이루어져 있다.
본 발명은 형질전환 암탉의 계란에서 유용단백질 생산을 위해 기존에 활용되고 있는 오브알부민 프로모터에 비하여 크기가 작고 프로모터의 활성이 강력한 재조합 프로모터로서, 계란 난백의 단백질 성분 중 54%를 차지하는 단백질인 오브알부민(ovalbumin)과 이를 제외한 나머지 계란 단백질 중 3.4%를 차지하는 라이소자임(lysozyme) 각각의 프로모터 영역을 연결하였다.
본 발명의 재조합 프로모터에 포함되어 있는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역에는 에스트로겐 호르몬에 반응하는 영역(Estrogen response element, ERE) 또는 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위가 존재할 수 있다.
상기 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위는 재조합 프로모터에 포함되어 있는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역에 1개 내지 5개가 포함되어 있을 수 있고, 바람직하게는 2개 내지 3개가 포함되어 있을 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 닭의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역의 일부(857 bp)와 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역의 일부(1653 bp)가 순차적으로 연결된 재조합 프로모터를 제조하였다(실시예 1 참조).
본 발명의 구체적인 실시예에서, 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터의 활성을 리포터 분석을 통해 인간세포에서 측정한 결과, 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 전체를 포함(에스트로겐 반응성 요소(estrogen responsive element, ERE)하는 4.4 kb 오브알부민 프로모터(미국등록특허 8507749B2))하는 카누마 프로모터에 비해서 프로모터의 활성이 높았다(실험예 1 참조).
또한, 상기 재조합 프로모터의 활성을 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포에서 측정한 결과 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 전체를 포함하는 카누마 프로모터에 비해서 프로모터의 활성이 높았다.
따라서, 본 발명의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터가 포함된 벡터는 종래기술의 프로모터가 포함된 벡터에 비해서 그 크기가 작고, 종래기술의 프로모터가 포함된 벡터에 비해서 목적 단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
본 발명은 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공한다. 바람직하게 상기 벡터는 프로모터의 하류(downstream)에 작동 가능하게 연결된 목적 단백질을 암호화하는 유전자를 더 포함할 수 있다.
상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터는 종래기술의 프로모터를 포함하는 벡터에 비해서 그 크기가 작을 수 있다.
본 발명에 있어서 "벡터(vector)"는 적합한 숙주 내에서 DNA를 발현시킬 수 있도록 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 DNA 서열을 보유하는 DNA 제조물을 의미한다. 벡터는 플라스미드, 파지 입자, 또는 간단하게 잠재적 게놈 도입물일 수 있다. 적당한 숙주로 형질 전환되면 벡터는 숙주 게놈과 무관하게 복제하고 기능할 수 있거나, 또는 일부 경우에 게놈 그 자체에 통합될 수 있다.
상기 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, HIV(Human immunodeficiency virus) 벡터, MLV(Murineleukemia virus) 벡터, ASLV(Avian sarcoma/leukosis) 벡터, SNV(Spleen necrosis virus) 벡터, RSV(Rous sarcoma virus) 벡터, MMTV(Mouse mammary tumor virus) 벡터, 아데노바이러스(Adenovirus) 벡터 및 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes simplex virus) 벡터, 렌티바이러스(lentivirus) 벡터 및 에피조말(episomal) 벡터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 벡터일 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "발현벡터" 또는 "발현을 위한 벡터"는 목적한 코딩 서열과, 특정 숙주 생물에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열을 발현하는데 필수적인 적정 핵산 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자를 의미한다.
발현벡터는 바람직하게는 하나 이상의 선택성 마커를 포함할 수 있다. 상기 마커는 통상적으로 화학적인 방법으로 선택될 수 있는 특성을 갖는 핵산 서열로, 형질 전환된 세포를 비 형질전환 세포로부터 구별할 수 있는 모든 유전자가 이에 해당된다. 그 예로는 암피실린(ampicilin), 카나마이신(kanamycin), 네오마이신(neomycin), G418, 블레오마이신(Bleomycin), 하이그로마이신(hygromycin), 클로람페니콜(chloramphenicol)과 같은 항생제 내성 유전자가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 당업자에 의해 적절히 선택 가능하다.
본 발명에 있어, "작동 가능하게 연결(operably linked)" 된다는 것은 적절한 분자가 발현 조절 서열에 결합할 때 유전자 발현을 가능하게 하는 방식으로 연결되는 것을 의미한다. 또한, "발현 조절 서열(expression control sequence)"이란, 특정한 숙주 세포에서 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 DNA 서열을 의미한다. 그러한 조절 서열은 전사를 실시하기 위한 프로모터, 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합 부위를 코딩하는 서열 및 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열을 포함한다.
본 발명에 있어서, "목적 단백질"이란 본 발명의 프로모터에 의해 고발현되길 원하는 외부 유래의 어떤 표적 단백질을 말하며, 바람직하게는 외인성 단백질이거나 또는 내인성 단백질 및 리포터 단백질일 수 있다.
본 발명의 상기 벡터는 형질전환 닭 생산용 바이러스 제조를 위한 목적으로 사용될 수 있다.
본 발명은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공한다.
본 발명에서 형질전환된 닭을 제조하기 위해서, 상기 재조합 프로모터를 포함하는 형질전환 닭 생산용 바이러스 제조를 위한 벡터를 닭의 배반엽단계 수정란에 미세 주입을 통하여 도입할 수 있다. 상기 수정란의 배양 및 이식을 통해 제1세대 후보 형질전환 병아리(mosaic, G0)를 생산하고, 생산된 수컷 후보 중 성선에 그 형질이 전달(Germline transmission)된 개체를 선발하여 인공수정을 통해 제1세대 형질전환 닭(G1)을 생산하고 G1 개체를 포함하는 교배 계획을 통해 재조합 프로모터 및 목적 유전자를 가지는 제2세대 및 그 이후 세대의 형질전환 닭(G2)을 계속 생산할 수 있다.
본 발명은 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭의 상피세포에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공한다.
본 발명에서 상기 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터는 하류(downstream)에 작동 가능하게 연결된 목적 단백질을 암호화하는 유전자를 더 포함할 수 있고, 상기 재조합 프로모터를 닭에 형질전환시키는 경우, 목적 단백질을 닭의 난관상피세포에서 발현시킬 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 닭에서 유용단백질 발현을 위한 재조합 프로모터 제작
닭의 계란에서 유용단백질 발현을 위해 도 1과 같이 라이소자임 유전자의 프로모터 영역과 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 결합된 재조합 프로모터를 제작하였다.
구체적으로, ThermoFisher사에 의뢰하여 5'에서 3' 방향으로 Xho I 제한효소 인식 서열, 닭의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역(857 bp)(서열번호 1), 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역(1653 bp)(서열번호 2), EcoR V 제한효소 인식 서열이 순차적으로 연결된 폴리뉴클레오티드를 합성하였다. 상기 제조한 폴리뉴클레오티드에 Xho I 및 EcoR V 제한효소를 처리하고 동일한 효소를 처리한 리포터 분석용 벡터(pGL4.11, Promega)에 도입하였다(LYS-pOV). 5'에서 3' 방향으로 닭의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역(857 bp)(서열번호 1), 및 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역(1653 bp)(서열번호 2)이 결합된 재조합 프로모터의 염기서열은 서열번호 3에 개시되어 있다.
또한, 공지된 대조군 벡터(카누마, Kanuma)를 제조하기 위해서 ERE(estrogen responsive element)를 포함하는 1.6 Kb 크기의 닭 오브알부민 유전자의 프로모터 영역과 2.8 kb 크기의 닭 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 연결된 4.4 kb 오브알부민 프로모터(미국등록특허 8507749B2)를 상기와 동일한 방식으로 합성하고 리포터 분석용 벡터(pGL4.11)에 클로닝하여 대조군 벡터를 제조하였다. 닭의 라이소자임 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 벡터(LYS-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 벡터(kanuma)를 비교하여 도 3에 나타냈다.
구축한 재조합 프로모터 벡터들은 염기서열 분석을 통하여 클로닝하고자 한 상기 프로모터들이 정상적으로 삽입되었음을 확인하였다.
실험예 1: 인간 세포에서 재조합 프로모터의 활성 검증
실시예 1에서 제조한 두 가지 프로모터(Kanuma, LYS-pOV) 및 음성대조군인 공벡터(Mock, pGL4.11)를 지질 매개성 유전자 도입 방식으로 HeLa(Human cervix epithelial cells) 세포 및 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포(cOECs)에 도입하고, 24시간 후에 luciferase assay kit(Promega)로 제조사의 프로토콜에 따라 각 프로모터의 활성을 분석하였다.
그 결과 HeLa 세포에서 LYS-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터(Mut-4.4kb-pOV)의 활성에 비해 2.26 배 높았고(도 4 참조), 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포(cOECs)에서 LYS-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터(Mut-4.4kb-pOV)의 활성에 비해 25.18 배 높음을 확인하였다(도 5 참조).
<110> RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION
<120> Recombinant promoter comprising the promoter region of the
lysozyme gene and the promoter region of the ovalbumin gene
<130> 2019p-06-003
<160> 3
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 857
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> lysozyme promoter DNA sequence
<400> 1
gctccacatc tttcctgtac tgggggcccc aggcctgaat gcagtactcc agatggggcc 60
tcaaaagagc agagtaaaga gggacaatca ccttcctcac cctgctggcc agccctcttc 120
tgatggagcc ctggatacaa ctggctttct gagctgcaac ttctccttat cagttccact 180
attaaaacag gaacaataca acaggtgctg atggccagtg cagagttttt cacacttctt 240
catttcggta gatcttagat gaggaacgtt gaagttgtgc ttctgcgtgt gcttcttcct 300
cctcaaatac tcctgcctga tacctcaccc cacctgccac tgaatggctc catggccccc 360
tgcagccagg gccctgatga acccagcact gcttcagatg ctgtttaata gcacagtatg 420
accaagttgc acctatgaat acacaaacaa tgtgttgcat ccttcagcac ttgagaagaa 480
gagccaaatt tgcattgtca ggaaatggtt tagtaattct gccaattaaa acttgtttat 540
ctaccatggc tgtttttatg gctgttagta gtggtacact gatgatgaac aatggctatg 600
cagtaaaatc aagactgtag atattgcaac agactataaa attcctctgt ggcttagcca 660
atgtggtact tcccacattg tataagaaat ttggcaagtt tagagcaatg tttgaagtgt 720
tgggaaattt ctgtatactc aagagggcgt ttttgacaac tgtagaacag aggaatcaaa 780
agggggtggg aggaagttaa aagaagaggc aggtgcaaga gagcttgcag tcccgctgtg 840
tgtacgacac tggcaac 857
<210> 2
<211> 1653
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ovalbumin promoter DNA sequence
<400> 2
tctcttcaga atggcacagc accgctgcag aaagatgcca ggtggactat gaactcacat 60
ccaaaggagc ttgacctgat acctgatttt cttcaaacag gggaaacaac acaatcccac 120
aaaacagctc agagagaaac catcactgat ggctacagca ccaaggtatg caatggcaat 180
ccattcgaca ttcatctgtg acctgagcaa aatgatttat ctctccatga atggttgctt 240
ctttccctca tgaaaaggca atttccacac tcacaatatg caacaaagac aaacagagaa 300
caattaatgt gctccttcct aatgtcaaaa ttgtagtggc aaagaggaga acaaaacctc 360
aagttctgag taggttttag tgattggata agaggctttg acctgtgagc tcacctggac 420
ttcatatcct tttggataaa aagtgctttt ataactttca ggtctccgag tctttattca 480
tgagactgtt ggtttaggga cagacccaca atgaaatgcc tggcatagga aagggcagca 540
gagccttagc tgaccttttc ttgggacaag cattatcaaa caatgtgtga caaaactatt 600
tgtactgctt tgcacagctg tgctgggcag ggcaatccat tgccacctat cccaggtaac 660
cttccaactg caagaagatt gttgcttact ctctctagac ccccaagtca aaccaactat 720
gcaggtatgc tgacaacgct atgatgacag cctgttctga tcaagatctc atttgttcat 780
ggacaatttt tgttgcttgc agctggtctt ccattgggaa agagtgtagt atatccttct 840
catctgacag aaaagcagaa attctcatgc tccacactta atctacattg ttttaaacca 900
ccggctactt cttggagagg aaaaatggct tttataagac tcacaaaaca aagctctgca 960
agtcaaatgc atacaaaact gttctgtagg tctggaatca ggacactatg tggaagtcaa 1020
atagagaagc tttaaaaaaa cctttgggat cattctcatc ttatatttgc agcacgatac 1080
tatgacagtg ataactgaca taactgcatc aatttccttg atattttatt tgtcttaaag 1140
tacaagacat agagatggac gtaaagatgg acatatgact caggtctgga caggtccgtg 1200
gtccatgtat gataaaagag atgaagggaa ggagaattga gactgtctaa gaagggcttc 1260
agggacgttc tgaaggcaga tttgactgaa tcagatgtac tgtccaagtc tcatatgtag 1320
caatggaaga ctgatattgg agaaatataa agaaatgggt gtgaactcaa agtgaccctg 1380
aacagaaaag ggatatggag ttaaaataat ggcacagaac tgaggtttat atgatatacc 1440
atgggctgca gagggtcaga gtgctccacc atgggcctct cttgggctgc agggaacttc 1500
tgttctacac ctggaacacc tcctgccctc ctccgcactg acctcagtgt catcagggct 1560
gtttctctca cattttctca ctcacctctc ccaactacca ttgtacagca gttgttctta 1620
catcttgctc ctcctgaggt gcatctagca tcg 1653
<210> 3
<211> 2510
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Recombinant promoter DNA sequence
<400> 3
tctcttcaga atggcacagc accgctgcag aaagatgcca ggtggactat gaactcacat 60
ccaaaggagc ttgacctgat acctgatttt cttcaaacag gggaaacaac acaatcccac 120
aaaacagctc agagagaaac catcactgat ggctacagca ccaaggtatg caatggcaat 180
ccattcgaca ttcatctgtg acctgagcaa aatgatttat ctctccatga atggttgctt 240
ctttccctca tgaaaaggca atttccacac tcacaatatg caacaaagac aaacagagaa 300
caattaatgt gctccttcct aatgtcaaaa ttgtagtggc aaagaggaga acaaaacctc 360
aagttctgag taggttttag tgattggata agaggctttg acctgtgagc tcacctggac 420
ttcatatcct tttggataaa aagtgctttt ataactttca ggtctccgag tctttattca 480
tgagactgtt ggtttaggga cagacccaca atgaaatgcc tggcatagga aagggcagca 540
gagccttagc tgaccttttc ttgggacaag cattatcaaa caatgtgtga caaaactatt 600
tgtactgctt tgcacagctg tgctgggcag ggcaatccat tgccacctat cccaggtaac 660
cttccaactg caagaagatt gttgcttact ctctctagac ccccaagtca aaccaactat 720
gcaggtatgc tgacaacgct atgatgacag cctgttctga tcaagatctc atttgttcat 780
ggacaatttt tgttgcttgc agctggtctt ccattgggaa agagtgtagt atatccttct 840
catctgacag aaaagcagaa attctcatgc tccacactta atctacattg ttttaaacca 900
ccggctactt cttggagagg aaaaatggct tttataagac tcacaaaaca aagctctgca 960
agtcaaatgc atacaaaact gttctgtagg tctggaatca ggacactatg tggaagtcaa 1020
atagagaagc tttaaaaaaa cctttgggat cattctcatc ttatatttgc agcacgatac 1080
tatgacagtg ataactgaca taactgcatc aatttccttg atattttatt tgtcttaaag 1140
tacaagacat agagatggac gtaaagatgg acatatgact caggtctgga caggtccgtg 1200
gtccatgtat gataaaagag atgaagggaa ggagaattga gactgtctaa gaagggcttc 1260
agggacgttc tgaaggcaga tttgactgaa tcagatgtac tgtccaagtc tcatatgtag 1320
caatggaaga ctgatattgg agaaatataa agaaatgggt gtgaactcaa agtgaccctg 1380
aacagaaaag ggatatggag ttaaaataat ggcacagaac tgaggtttat atgatatacc 1440
atgggctgca gagggtcaga gtgctccacc atgggcctct cttgggctgc agggaacttc 1500
tgttctacac ctggaacacc tcctgccctc ctccgcactg acctcagtgt catcagggct 1560
gtttctctca cattttctca ctcacctctc ccaactacca ttgtacagca gttgttctta 1620
catcttgctc ctcctgaggt gcatctagca tcggctccac atctttcctg tactgggggc 1680
cccaggcctg aatgcagtac tccagatggg gcctcaaaag agcagagtaa agagggacaa 1740
tcaccttcct caccctgctg gccagccctc ttctgatgga gccctggata caactggctt 1800
tctgagctgc aacttctcct tatcagttcc actattaaaa caggaacaat acaacaggtg 1860
ctgatggcca gtgcagagtt tttcacactt cttcatttcg gtagatctta gatgaggaac 1920
gttgaagttg tgcttctgcg tgtgcttctt cctcctcaaa tactcctgcc tgatacctca 1980
ccccacctgc cactgaatgg ctccatggcc ccctgcagcc agggccctga tgaacccagc 2040
actgcttcag atgctgttta atagcacagt atgaccaagt tgcacctatg aatacacaaa 2100
caatgtgttg catccttcag cacttgagaa gaagagccaa atttgcattg tcaggaaatg 2160
gtttagtaat tctgccaatt aaaacttgtt tatctaccat ggctgttttt atggctgtta 2220
gtagtggtac actgatgatg aacaatggct atgcagtaaa atcaagactg tagatattgc 2280
aacagactat aaaattcctc tgtggcttag ccaatgtggt acttcccaca ttgtataaga 2340
aatttggcaa gtttagagca atgtttgaag tgttgggaaa tttctgtata ctcaagaggg 2400
cgtttttgac aactgtagaa cagaggaatc aaaagggggt gggaggaagt taaaagaaga 2460
ggcaggtgca agagagcttg cagtcccgct gtgtgtacga cactggcaac 2510
Claims (8)
- 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 서열번호 2의 염기서열로 구성되는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터.
- 삭제
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 재조합 프로모터는 목적 단백질을 과발현시키기 위한 것인, 재조합 프로모터.
- 제 1항 및 제 4항 중 어느 한 항의 재조합 프로모터를 포함하는 벡터.
- 제 5항에 있어서, 상기 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, HIV(Human immunodeficiency virus) 벡터, MLV(Murineleukemia virus) 벡터, ASLV(Avian sarcoma/leukosis) 벡터, SNV(Spleen necrosis virus) 벡터, RSV(Rous sarcoma virus) 벡터, MMTV(Mouse mammary tumor virus) 벡터, 아데노바이러스(Adenovirus) 벡터 및 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes simplex virus) 벡터, 렌티바이러스(lentivirus) 벡터 및 에피조말(episomal) 벡터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제 5항의 벡터에 의해 형질전환된 닭.
- 목적 유전자를 포함하는 제 5항의 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020190084737A KR102159051B1 (ko) | 2019-07-12 | 2019-07-12 | 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020190084737A KR102159051B1 (ko) | 2019-07-12 | 2019-07-12 | 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR102159051B1 true KR102159051B1 (ko) | 2020-09-24 |
Family
ID=72706438
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020190084737A KR102159051B1 (ko) | 2019-07-12 | 2019-07-12 | 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR102159051B1 (ko) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20220076890A (ko) * | 2020-12-01 | 2022-06-08 | 대한민국(농촌진흥청장) | 변형 오브트렌스페린 유전자의 재조합 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20010031190A (ko) * | 1997-10-16 | 2001-04-16 | 아비게닉스, 인코포레이티드 | 조류 트랜스제네시스용 매그넘-특이적 프로모터를함유하는 벡터 |
KR20090102876A (ko) * | 2007-01-26 | 2009-09-30 | 시나게바 바이오파르마, 코포레이션 | 조류에서 이식유전자 발현 |
KR20110057365A (ko) * | 2009-11-24 | 2011-06-01 | 대한민국(농촌진흥청장) | 사람의 락토페린 유전자와 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 결합한 렌티바이러스 벡터 및 이를 이용한 사람의 락토페린 유전자를 가지는 닭의 생산 방법 |
-
2019
- 2019-07-12 KR KR1020190084737A patent/KR102159051B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20010031190A (ko) * | 1997-10-16 | 2001-04-16 | 아비게닉스, 인코포레이티드 | 조류 트랜스제네시스용 매그넘-특이적 프로모터를함유하는 벡터 |
KR20090102876A (ko) * | 2007-01-26 | 2009-09-30 | 시나게바 바이오파르마, 코포레이션 | 조류에서 이식유전자 발현 |
KR101471445B1 (ko) * | 2007-01-26 | 2014-12-15 | 시나게바 바이오파르마, 코포레이션 | 조류에서 이식유전자 발현 |
KR20110057365A (ko) * | 2009-11-24 | 2011-06-01 | 대한민국(농촌진흥청장) | 사람의 락토페린 유전자와 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 결합한 렌티바이러스 벡터 및 이를 이용한 사람의 락토페린 유전자를 가지는 닭의 생산 방법 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
GenBank Accession M12532.1(2016.7.26.)* * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20220076890A (ko) * | 2020-12-01 | 2022-06-08 | 대한민국(농촌진흥청장) | 변형 오브트렌스페린 유전자의 재조합 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
KR102429945B1 (ko) | 2020-12-01 | 2022-08-05 | 대한민국 | 변형 오브트렌스페린 유전자의 재조합 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hann et al. | A non-AUG translational initiation in c-myc exon 1 generates an N-terminally distinct protein whose synthesis is disrupted in Burkitt's lymphomas | |
Liu et al. | EGR-1, the reluctant suppression factor | |
Daubresse et al. | The Drosophila kismet gene is related to chromatin-remodeling factors and is required for both segmentation and segment identity | |
ES2263290T3 (es) | Dominios de union d dedo de cinc para gnn. | |
JP2009159966A (ja) | Cnnについての亜鉛フィンガー結合ドメイン | |
CN1816564B (zh) | 能选择性杀伤癌细胞的RasGAP衍生肽 | |
KR102159051B1 (ko) | 라이소자임 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 | |
Zhang et al. | Characterization of cis elements of the probasin promoter necessary for prostate‐specific gene expression | |
Leone et al. | Ccdc6 knock-in mice develop thyroid hyperplasia associated to an enhanced CREB1 activity | |
KR102159050B1 (ko) | 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 | |
JP2002505577A (ja) | Smad相互作用ポリペプチド及びそれらの使用 | |
Zeng et al. | BmYki is transcribed into four functional splicing isoforms in the silk glands of the silkworm Bombyx mori | |
JP2004537293A (ja) | 新規なエストロゲン受容体リガンド結合ドメイン変異体及び新規なリガンド及び医薬組成物 | |
KR102159809B1 (ko) | 오브트렌스페린 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 | |
KR102207951B1 (ko) | 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 | |
Yang et al. | BMPR-IB gene disruption causes severe limb deformities in pigs | |
KR101759785B1 (ko) | Dna 메틸화 형질전환 예쁜꼬마선충의 제작 및 이의 이용 | |
CN1995065B (zh) | 具有抑制pttg表达作用的融合蛋白及其编码基因与应用 | |
AU731765B2 (en) | Syndecan enhancer element and its use for targeting gene expression | |
US20040121323A1 (en) | Mrna binding motif | |
Dunkelberg et al. | LZ-FYVE: a novel developmental stage-specific leucine zipper, FYVE-finger protein | |
ES2319977T3 (es) | Represor de la diferenciacion del musculo esqueletico, acido nucleico que lo codifica y su uso en diagnostico y terapia. | |
KR100566111B1 (ko) | E2F 프로모터를 인지하는 Caudal단백질, 상기단백질을 과발현하는 형질전환체 및 이의 용도 | |
JP2003014740A (ja) | 薬物および他の物質のスクリーニングおよび確認のためのインビボアッセイ系 | |
Ri et al. | Cloning, characterization, and transcriptional activity of β-actin promoter of African catfish (Clarias gariepinus) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |