KR102207951B1 - 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 - Google Patents
오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 오브뮤신 알파 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 위한 재조합 프로모터, 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 관한 것으로서, 본 발명의 재조합 프로모터, 및 벡터를 이용하는 경우 닭에서 단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
Description
본 발명은 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터, 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
현대 과학기술의 발전으로 인한 의료 기술의 발전은 사람의 수명연장을 가져왔으며, 더불어 사람에게 유용한 생리 활성 단백질들의 수요가 증가되고 있다. 현재 가장 일반적인 생리 활성 단백질의 생산 방법은 대장균을 이용하는 방법이지만, 대장균을 이용한 생산 방법은 당이 결합된 복잡한 구조의 단백질은 생산하지 못하는 문제점이 있어 구조가 복잡한 단백질은 동물 세포주를 이용하여 생산하고 있다. 최근에는 가축을 이용하여 유용 단백질을 생산하고자 하는 연구가 진행되고 있으며, 일부에서는 가시적인 성과가 보고되고 있다. 현재까지 생리활성물질 단백질 생산에 활용되고 있는 동물들은 대부분 중/대 가축들로서 분비선 즉 유선(우유)을 이용한 방법이 주로 활용되고 있다.
종래의 중/대 가축들을 이용하여 유용 단백질을 생산하는 방법을 사용하는 경우 가축을 이용하여 단백질을 생산하는데 비용이 많이 소요되고, 생산 효율이 낮다는 문제가 있었다.
반면, 닭은 포유류 가축들에 비해 산자수가 많고, 세대간격이 짧은 특징으로 인해 단기간에 하나의 개체에서 대량번식이 가능하고, 특히 산란계의 경우 일년 동안 300-330개의 계란을 생산한다는 장점이 있어서, 닭의 계란을 이용하여 유용 단백질을 생산하는 방법이 최근에 각광 받고 있다.
본 발명의 종래기술로는 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 이용하여 제조한 프로모터에 관한 미국 등록 특허 제8507749 B2가 있다.
본 발명자들은 소형 가축인 닭을 이용하여 유용 단백질을 효과적으로 발현시키기 위해서, 종래 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터를 개량하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 프로모터를 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공한다.
또한, 본 발명은 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터, 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 이용하는 경우 닭에서 목적 단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
도 1은 재조합 프로모터에 포함된 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역에 존재하는 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에서 제조한 재조합 프로모터의 개략도를 나타낸 것이다.
도 3은 닭의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 리포터 벡터(OVA-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 리포터 벡터(Mut-4.4kb-pOV)를 비교하여 나타낸 것이다.
도 4는 HeLa 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 5는 MES-SA 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 6은 cOECs 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 2는 본 발명에서 제조한 재조합 프로모터의 개략도를 나타낸 것이다.
도 3은 닭의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 리포터 벡터(OVA-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 리포터 벡터(Mut-4.4kb-pOV)를 비교하여 나타낸 것이다.
도 4는 HeLa 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 5는 MES-SA 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 6은 cOECs 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터에 관한 것으로서, 상기 재조합 프로모터는 목적 단백질을 닭에서 발현시키는데 사용될 수 있다.
상기 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하고, 상기 오브알부민 유전자의 프로모터 영역은 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 프로모터 영역 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 변이체는 염기서열은 변화되지만, 서열번호 1 또는 2의 염기 서열과 유사한 기능적 특성을 갖는 염기 서열이다. 구체적으로, 상기 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 염기서열은 서열번호 1의 염기 서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있고, 상기 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 염기서열은 서열번호 2의 염기서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어, '프로모터(promoter)'란, 일반적으로 전사를 개시하는 지점을 포함하는 암호화 부위의 상류 쪽에 위치하는 유전자 부위로, 흔히 유전자 발현을 조절하는 TATA 박스, CAAT 박스 부위, 외부 자극에 반응하여 유전자 발현에 영향을 주는 부위 및 위치와 방향에 상관없이 거의 모든 유전자의 발현을 촉진하는 인핸서 등으로 이루어져 있다.
본 발명은 형질전환 암탉의 계란에서 유용단백질 생산을 위해 기존에 활용되고 있는 오브알부민 프로모터에 비하여 크기가 작고 프로모터의 활성이 강력한 재조합 프로모터로서, 계란 난백에서 발현되는 단백질 성분 중 54%를 차지하는 오브알부민(ovalbumin)과 계란 난백에서 발현되는 단백질 성분 중 3.5%를 차지하는 오브뮤신 중 오브뮤신 알파(ovomucin alpha) 각각의 프로모터 영역을 연결하였다.
본 발명의 재조합 프로모터에 포함되어 있는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역에는 에스트로겐 호르몬에 반응하는 영역(Estrogen response element, ERE) 또는 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위가 존재할 수 있다.
상기 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위는 재조합 프로모터에 포함되어 있는 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역에 1개 내지 5개가 포함되어 있을 수 있고, 바람직하게는 1개 내지 2개가 포함되어 있을 수 있다(도 1 참조).
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 닭의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역의 일부(977 bp)와 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역의 일부(2.8 kb)가 순차적으로 연결된 재조합 프로모터를 제조하였다(실시예 1 참조).
본 발명의 구체적인 실시예에서, 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터의 활성을 리포터 분석을 통해 인간세포에서 측정한 결과, 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 전체를 포함(에스트로겐 반응성 요소(estrogen responsive element, ERE)하는 4.4 kb 오브알부민 프로모터(미국등록특허 8507749B2))하는 카누마 프로모터에 비해서 프로모터의 활성이 높았다(실험예 1 참조).
또한, 상기 재조합 프로모터의 활성을 닭 상피세포에서 측정한 결과 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 전체를 포함하는 카누마 프로모터에 비해서 프로모터의 활성이 높았다.
따라서, 본 발명의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터가 포함된 벡터는 종래기술의 프로모터가 포함된 벡터에 비해서 그 크기가 작고, 종래기술의 프로모터가 포함된 벡터에 비해서 목적 단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
본 발명은 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공한다. 바람직하게 상기 벡터는 프로모터의 하류(downstream)에 작동 가능하게 연결된 목적 단백질을 암호화하는 유전자를 더 포함할 수 있다.
상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터는 종래기술의 프로모터를 포함하는 벡터에 비해서 그 크기가 작을 수 있다.
본 발명에 있어서 "벡터(vector)"는 적합한 숙주 내에서 DNA를 발현시킬 수 있도록 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 DNA 서열을 보유하는 DNA 제조물을 의미한다. 벡터는 플라스미드, 파지 입자, 또는 간단하게 잠재적 게놈 도입물일 수 있다. 적당한 숙주로 형질 전환되면 벡터는 숙주 게놈과 무관하게 복제하고 기능할 수 있거나, 또는 일부 경우에 게놈 그 자체에 통합될 수 있다.
상기 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, HIV(Human immunodeficiency virus) 벡터, MLV(Murineleukemia virus) 벡터, ASLV(Avian sarcoma/leukosis) 벡터, SNV(Spleen necrosis virus) 벡터, RSV(Rous sarcoma virus) 벡터, MMTV(Mouse mammary tumor virus) 벡터, 아데노바이러스(Adenovirus) 벡터 및 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes simplex virus) 벡터, 렌티바이러스(lentivirus) 벡터 및 에피조말(episomal) 벡터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 벡터일 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "발현벡터" 또는 "발현을 위한 벡터"는 목적한 코딩 서열과, 특정 숙주 생물에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열을 발현하는데 필수적인 적정 핵산 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자를 의미한다.
발현벡터는 바람직하게는 하나 이상의 선별 마커(selective marker)를 포함할 수 있다. 상기 마커는 통상적으로 화학적인 방법으로 선택될 수 있는 특성을 갖는 핵산 서열로, 형질 전환된 세포를 비 형질전환 세포로부터 구별할 수 있는 모든 유전자가 이에 해당된다. 그 예로는 암피실린(ampicilin), 카나마이신(kanamycin), 네오마이신(neomycin), G418, 블레오마이신(Bleomycin), 하이그로마이신(hygromycin), 클로람페니콜(chloramphenicol)과 같은 항생제 저항성 유전자가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 당업자에 의해 적절히 선택 가능하다.
본 발명에 있어, "작동 가능하게 연결(operably linked)" 된다는 것은 적절한 분자가 발현 조절 서열에 결합할 때 유전자 발현을 가능하게 하는 방식으로 연결되는 것을 의미한다. 또한, "발현 조절 서열(expression control sequence)"이란, 특정한 숙주 세포에서 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 DNA 서열을 의미한다. 그러한 조절 서열은 전사를 실시하기 위한 프로모터, 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합 부위를 코딩하는 서열 및 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열을 포함한다.
본 발명에 있어서, "목적 단백질"이란 본 발명의 프로모터에 의해 고 발현되길 원하는 외부 유래의 어떤 표적 단백질을 말하며, 바람직하게는 외인성 단백질이거나 또는 내인성 단백질 및 리포터 단백질일 수 있다.
본 발명의 상기 벡터는 형질전환 닭 생산용 바이러스 제조를 위한 목적으로 사용될 수 있다.
본 발명은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공한다.
본 발명에서 형질전환된 닭을 제조하기 위해서, 상기 재조합 프로모터를 포함하는 형질전환 닭 생산용 바이러스 제조를 위한 벡터를 닭의 배반엽단계 수정란에 미세 주입을 통하여 도입할 수 있다. 상기 수정란의 배양 및 이식을 통해 제1세대 후보 형질전환 병아리(mosaic, G0)를 생산하고, 생산된 수컷 후보 중 성선에 그 형질이 전달(Germline transmission)된 개체를 선발하여 인공수정을 통해 제1세대 형질전환 닭(G1)을 생산하고 G1 개체를 포함하는 교배 계획을 통해 재조합 프로모터 및 목적 유전자를 가지는 제2세대(G2) 및 그 이후 세대의 형질전환 닭을 계속 생산할 수 있다.
본 발명은 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭의 상피세포에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공한다.
본 발명에서 상기 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터는 하류(downstream)에 작동 가능하게 연결된 목적 단백질을 암호화하는 유전자를 더 포함할 수 있고, 상기 재조합 프로모터를 닭에 형질전환시키는 경우, 목적 단백질을 닭의 상피세포에서 발현시킬 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 닭에서 유용단백질 발현을 위한 재조합 프로모터 제작
닭의 계란에서 유용단백질 발현을 위해 도 1과 같이 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역과 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 결합된 재조합 프로모터를 제작하였다.
구체적으로, ThermoFisher사에 의뢰하여 5'에서 3' 방향으로 Nhe I 제한효소 인식 서열, 닭의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역(977 bp)(서열번호 1), 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역(2784 bp)(서열번호 2), Xho I 제한효소 인식 서열이 순차적으로 연결된 폴리뉴클레오티드를 합성하였다. 상기 제조한 폴리뉴클레오티드에 Nhe I 및 Xho I 제한효소를 처리하고 동일한 효소를 처리한 리포터 분석용 벡터(pGL4.11, Promega)에 도입하였다(OVA-pOV). 5'에서 3' 방향으로 닭의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역(977 bp)(서열번호 1), 및 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역(2784 bp)(서열번호 2)이 결합된 재조합 프로모터의 염기서열은 서열번호 3에 개시되어 있다.
또한, 공지된 대조군 벡터(카누마, Kanuma)를 제조하기 위해서 ERE(estrogen responsive element)를 포함하는 1.6 kb 크기의 닭 오브알부민 유전자의 프로모터 영역과 2.8 kb 크기의 닭 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 연결된 4.4 kb 오브알부민 프로모터(미국등록특허 8507749B2)를 상기와 동일한 방식으로 합성하고 리포터 분석용 벡터(pGL4.11)에 클로닝하여 대조군 벡터를 제조하였다. 닭의 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 벡터(OVA-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 벡터(kanuma)를 비교하여 도 3에 나타냈다.
구축한 재조합 프로모터 벡터들은 염기서열 분석을 통하여 클로닝하고자 한 상기 프로모터들이 정상적으로 삽입되었음을 확인하였다.
<실험예 1> 인간 세포에서 재조합 프로모터의 활성 검증
실시예 1에서 제조한 두 가지 프로모터(Kanuma, OVA-pOV) 및 음성대조군인 공벡터(Mock, pGL4.11)를 지질 매개성 유전자 도입 방식으로 HeLa(Human cervix epithelial cells) 세포, 또는 MES-SA(Human uterus epithelial cells) 세포에 도입하고, 24시간 후에 luciferase assay kit(Promega)로 제조사의 프로토콜에 따라 각 프로모터의 활성을 분석하였다.
그 결과 HeLa 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터의 활성과 거의 유사했고(도 4), MES-SA 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터의 활성보다 2.71배 높았다(도 5).
<실험예 2> 닭난관상피세포에서 재조합 프로모터의 활성 검증
실시예 1에서 제조한 두 가지 프로모터(Kanuma, OVA-pOV) 및 음성대조군인 공벡터(Mock, pGL4.11)를 지질 매개성 유전자 도입 방식으로 닭 난관상피세포(chicken oviduct epithelial cells, cOECs)에 도입하고, 24시간 후에 luciferase assay kit(Promega)로 제조사의 프로토콜에 따라 각 프로모터의 활성을 분석하였다.
그 결과 cOECs 세포에서 OVA-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터의 활성보다 2.29배 높았다(도 6).
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION)
<120> Recombinant promoter comprising the promoter region of the
ovomucin alpha gene and the promoter region of the ovalbumin gene
<130> 2019p-05-033
<160> 3
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 977
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ovomucin alpha promoter
<400> 1
cagttctctt ttaagcagta aaaaaagcaa caggaactct gattgaagaa cacagctttg 60
cactgtgcct gtgacctggc acagcagtga catttcaata gcctgtctct ttggactggt 120
gtagctgagg acttcttgct ctttgtttgc agtatctgtg ggagctgtac actcctgcac 180
cctcttaaaa atgcagacag cctgagggcc ttgaatagga atttagtaag tcaaatgctg 240
catttctttg ggcctctagt aactttcagt gtggtggcaa tggtgactct gtgtgtaatt 300
tcatgtattt tcgcagttat actgacttca gtattaagta tgcagtggtc ttttctgcat 360
tgtcttggca tccatgaagg aagaaattgc ttgtacaaaa gagaggggga agtatctgct 420
ctagcctgaa acccatgaag ctgtaattct tacagcagaa ttttcatatc ctcccccaaa 480
tggggtcagg gtttccatta ttctgctact ccacattttt cactaggaag gttatttaaa 540
gaaaaatctt ttgggtagag caagcccaag ggctcctgat gagatggctt tctgtgcagg 600
gagtctttct taagtgagaa agtgccaata ggtcaatgag acctgtgtgt gcaaacacct 660
atcggccatg tcgttgcaat ctgtggatat ggattttgaa agatctacat cttcttaaaa 720
aaacagaaaa ggagaaactg aactgattcc ttgcaaatgg gagtaactga tgtccttgat 780
aagttctgga aaggttaagg aacccctgtg atgagatgag aggttaagga gttctttgtt 840
cattttaagg caaaaatgta agaaaatacc cactcatctc ctaccaaaac tgaaatacca 900
aaggcattct tcatgtgttt tgatagacaa ttaactttgc ctgttagaac tcaccttatg 960
ccaccagcca attccaa 977
<210> 2
<211> 2784
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ovalbumin promoter
<400> 2
ttaagtcctc agacttggca aggagaatgt agatttctac agtatatatg ttttcacaaa 60
aggaaggaga gaaacaaaag aaaatggcac tgactaaact tcagctagtg gtataggaaa 120
gtaattctgc ttaacagaga ttgcagtgat ctctatgtat gtcctgaaga attatgttgt 180
acttttttcc ctcattttta aatcaaacag tgctttacag aggtcagaat ggtttcttta 240
ctgtttgtca attctattat ttcaatacag aacaatagct tctataactg aaatatattt 300
gctattgtat attatgattg tccctcgaac catgaacact cctccagctg aatttcacaa 360
ttcctctgtc atctgccagg ccattaagtt attcatggaa gatctttgag gaacactgca 420
agttcatatc ataaacacat ttgaaattga gtattgtttt gcattgtatg gagctatgtt 480
ttgctgtatc ctcagaaaaa aagtttgtta taaagcattc acacccataa aaagatagat 540
ttaaatattc cagctatagg aaagaaagtg cgtctgctct tcactctagt ctcagttggc 600
tccttcacat gcacgcttct ttatttctcc tattttgtca agaaaataat aggtcacgtc 660
ttgttctcac ttatgtcctg cctagcatgg ctcagatgca cgttgtacat acaagaagga 720
tcaaatgaaa cagacttctg gtctgttact acaaccatag taataagcac actaactaat 780
aattgctaat tatgttttcc atctccaagg ttcccacatt tttctgtttt cttaaagatc 840
ccattatctg gttgtaactg aagctcaatg gaacatgagc aatatttccc agtcttctct 900
cccatccaac agtcctgatg gattagcaga acaggcagaa aacacattgt tacccagaat 960
taaaaactaa tatttgctct ccattcaatc caaaatggac ctattgaaac taaaatctaa 1020
cccaatccca ttaaatgatt tctatggcgt caaaggtcaa acttctgaag ggaacctgtg 1080
ggtgggtcac aattcaggct atatattccc cagggctcag ccagtgtctg tacatacagc 1140
tagaaagctg tattgccttt agcactcaag ctcaaaaggt aagcaactct ctggaattac 1200
cttctctcta tattagctct tacttgcacc taaactttaa aaaattaaca attattgtgt 1260
tatgtgttgt atctttaagg gtgaagtacc tgcgtgatac cccctataaa aacttctcac 1320
ctgtgtatgc attctgcact attttattat gtgtaaaagc tttgtgtttg ttttcaggag 1380
gcttattctt tgtgcttaaa atatgttttt aatttcagaa catcttatcc tgtcgttcac 1440
tatctgatat gctttgcagt ttgcctgatt aacttctagc cctacagagt gcacagagag 1500
caaaatcatg gtgttcagtg aattctgggg agttatttta atgtgaaaat tctctagaag 1560
tttaattcct gcaaagtgca gctgctgatc actacacaag ataaaaatgt ggggggtgca 1620
taaacgtata ttcttacaat aatagataca tgtgaacttg tatacagaaa agaaaatgag 1680
aaaaatgtgt gtgcgtatac tcacacacgt ggtcagtaaa aacttttgag gggtttaata 1740
cagaaaatcc aatcctgagg ccccagcact cagtacgcat ataaagggct gggctctgaa 1800
ggacttctga ctttcacaga ttatataaat ctcaggaaag caactagatt catgctggct 1860
ccaaaagctg tgctttatat aagcacactg gctatacaat agttgtacag ttcagctctt 1920
tataatagaa acagacagaa caagtataaa tcttctattg gtctatgtca tgaacaagaa 1980
ttcattcagt ggctctgttt tatagtaaac attgctattt tatcatgtct gcatttctct 2040
tctgtctgaa tgtcaccact aaaatttaac tccacagaaa gtttatacta cagtacacat 2100
gcatatcttt gagcaaagca aaccatacct gaaagtgcaa tagagcagaa tatgaattac 2160
atgcgtgtct ttctcctaga ctacatgacc ccatataaat tacattcctt atctattctg 2220
ccatcaccaa aacaaaggta aaaatacttt tgaagatcta ctcatagcaa gtagtgtgca 2280
acaaacagat atttctctac atttattttt agggaataaa aataagaaat aaaatagtca 2340
gcaagcctct gctttctcat atatctgtcc aaacctaaag tttactgaaa tttgctcttt 2400
gaatttccag ttttgcaagc ctatcagatt gtgttttaat cagaggtact gaaaagtatc 2460
aatgaattct agctttcact gaacaaaaat atgtagaggc aactggcttc tgggacagtt 2520
tgctacccaa aagacaactg aatgcaaata cataaataga tttatgaata tggttttgaa 2580
catgcacatg agaggtggat atagcaacag acacattacc acagaattac tttaaaacta 2640
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gtaccctgca tggtactatg tacagcattc catccttaca ttttcactgt tctgctgttt 2760
gctctagaca actcagagtt cacc 2784
<210> 3
<211> 3761
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> recombinant promoter
<400> 3
cagttctctt ttaagcagta aaaaaagcaa caggaactct gattgaagaa cacagctttg 60
cactgtgcct gtgacctggc acagcagtga catttcaata gcctgtctct ttggactggt 120
gtagctgagg acttcttgct ctttgtttgc agtatctgtg ggagctgtac actcctgcac 180
cctcttaaaa atgcagacag cctgagggcc ttgaatagga atttagtaag tcaaatgctg 240
catttctttg ggcctctagt aactttcagt gtggtggcaa tggtgactct gtgtgtaatt 300
tcatgtattt tcgcagttat actgacttca gtattaagta tgcagtggtc ttttctgcat 360
tgtcttggca tccatgaagg aagaaattgc ttgtacaaaa gagaggggga agtatctgct 420
ctagcctgaa acccatgaag ctgtaattct tacagcagaa ttttcatatc ctcccccaaa 480
tggggtcagg gtttccatta ttctgctact ccacattttt cactaggaag gttatttaaa 540
gaaaaatctt ttgggtagag caagcccaag ggctcctgat gagatggctt tctgtgcagg 600
gagtctttct taagtgagaa agtgccaata ggtcaatgag acctgtgtgt gcaaacacct 660
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cattttaagg caaaaatgta agaaaatacc cactcatctc ctaccaaaac tgaaatacca 900
aaggcattct tcatgtgttt tgatagacaa ttaactttgc ctgttagaac tcaccttatg 960
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agcagaatat gaattacatg cgtgtctttc tcctagacta catgacccca tataaattac 3180
attccttatc tattctgcca tcaccaaaac aaaggtaaaa atacttttga agatctactc 3240
atagcaagta gtgtgcaaca aacagatatt tctctacatt tatttttagg gaataaaaat 3300
aagaaataaa atagtcagca agcctctgct ttctcatata tctgtccaaa cctaaagttt 3360
actgaaattt gctctttgaa tttccagttt tgcaagccta tcagattgtg ttttaatcag 3420
aggtactgaa aagtatcaat gaattctagc tttcactgaa caaaaatatg tagaggcaac 3480
tggcttctgg gacagtttgc tacccaaaag acaactgaat gcaaatacat aaatagattt 3540
atgaatatgg ttttgaacat gcacatgaga ggtggatata gcaacagaca cattaccaca 3600
gaattacttt aaaactactt gttaacattt aattgcctaa aaactgctcg taatttactg 3660
ttgtagccta ccatagagta ccctgcatgg tactatgtac agcattccat ccttacattt 3720
tcactgttct gctgtttgct ctagacaact cagagttcac c 3761
Claims (9)
- 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 서열번호 2의 염기서열로 구성되는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터.
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 재조합 프로모터는 목적 단백질을 과발현시키기 위한 것인, 재조합 프로모터.
- 제1항에 있어서, 상기 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역은 1개의 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위를 포함하는 것인, 재조합 프로모터.
- 제1항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항의 재조합 프로모터를 포함하는 벡터.
- 제6항에 있어서, 상기 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, HIV(Human immunodeficiency virus) 벡터, MLV(Murineleukemia virus) 벡터, ASLV(Avian sarcoma/leukosis) 벡터, SNV(Spleen necrosis virus) 벡터, RSV(Rous sarcoma virus) 벡터, MMTV(Mouse mammary tumor virus) 벡터, 아데노바이러스(Adenovirus) 벡터 및 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes simplex virus) 벡터, 렌티바이러스(lentivirus) 벡터 및 에피조말(episomal) 벡터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제6항의 벡터에 의해 형질전환된 닭.
- 목적 유전자를 포함하는 제6항의 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| KR1020190084730A KR102207951B1 (ko) | 2019-07-12 | 2019-07-12 | 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190084730A KR102207951B1 (ko) | 2019-07-12 | 2019-07-12 | 오브뮤신 알파 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
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| KR20210008275A KR20210008275A (ko) | 2021-01-21 |
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Family Applications (1)
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Citations (1)
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2019
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| Cell.,18(3)829-842(1979.) |
| NEJM.,364(16):1503-1512(2011.4.21.)* |
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