KR102159050B1 - 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 - Google Patents
오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 관한 것으로서, 본 발명의 재조합 프로모터 및 벡터를 이용하는 경우 닭에서 목적단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
Description
본 발명은 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터, 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
본 발명은 난관 특이적 발현 프로모터 및 이를 포함하는 재조합 발현 벡터에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 닭의 난관에서 특이적으로 발현하는 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 발현 벡터에 관한 것이다.
가금의 난관은 오브알부민(ovalbumin)을 포함하는 여러 가지 단백질들을 분비하고 세포의 증식 및 분화가 주기적으로 일어나는 곳이며, 일명 ‘나팔관’이라고 불리는 기관이다. 특히, 난생인 동물들에서는 난관벽에서 영양성분 및 난각 등을 분비하여 알에 공급하는 것으로 알려져 있고, 계란의 경우에도 계란에 대량의 단백질을 축적하기 위하여 많은 단백질을 분비하는 기관으로 잘 알려져 있다(오봉국, 현대가금학, 1988).
일반적으로 계란은 단백질, 비타민A, 콜레스테롤, 무기질 등의 많은 영양성분이 함유된 식품으로 단백질은 우유에 비해 2배 정도 높은 함유량을 가지고 있고 지방 함유량도 우유나 치즈, 소고기에 비해 높아 뛰어난 영양학적 가치를 지니고 있다. 이 외에도 계란은 면역촉진 및 질병 치료의 기능적 성질을 보유하고 있는 것으로 밝혀진 바 있으며, 특히, 계란의 난백은 독성물질 및 자극물질을 섭취 하였을 때 이에 대한 해독제의 기능을 하며, 위와 장의 점막을 보호하고 궤양의 형성을 예방하는 것으로 알려진 바 있다. 따라서 이러한 계란의 소비가 최근 들어 매우 급증하고 있는 추세이며, 이에 따라 여러 가지 인체에 유용한 새로운 기능을 함유하는 기능성 계란을 생산하기 위한 기술 개발에 관심이 대두되고 있다. 이와 관련되어 현재까지 개발된 종래기술들로는 대한민국 공개특허 제2006-0030186호에 우모분 및 피리독신이 첨가된 사료로 산란계를 사양하여 타우린이 증가된 계란을 생산하는 방법이 개시된 바 있고, 대한민국 공개특허 제2003-0082207호에는 일반 배합사료에 함초를 가미하여 함초에 풍부한 마그네슘, 칼슘, 칼륨, 철, 인, 요오드, 나트륨 및 염분 등 바닷물 속에 함유된 각종 미네랄 성분이 풍부하게 함유된 미네랄 활성 함초 계란의 생산방법이 개시된 바 있으며, 대한민국 등록특허 제 0567311호에는 알로에를 함유하는 산란계 사료조성물을 이용한 특수란 생산방법이 개시된 바 있다. 그러나 상기 종래기술에 의한 기능성 계란의 생산은 배합사료에 특정성분을 첨가하여 닭에 섭취시킬 경우 첨가량에 비례하여 난백 및 난황 속에 특정 영양성분이 증가한다는 점을 감안한 것으로 이는 배합사료의 구입비 외에 첨가제의 부대비용이 증가한다는 단점이 있다.
따라서 최근에는 유전공학 기술의 발달로 인해 이를 이용한 기능성 계란을 생산하려는 기술들이 개발되고 있는데, 특히, 이중에서 제일 관심을 받고 있는 주제는 형질전환 닭으로서 인체에 유용한 유전물질을 함유한 계란을 생산하는 닭을 개발하고자 많은 연구가 국내외에서 진행 중에 있다. 현재까지 형질전환 닭을 생산하기 위해 사용되고 있는 유전공학 기술로는 유용 단백질을 발현하는 유전자를 포함하는 벡터를 이용하여 형질전환 닭을 생산하거나(Harvey A. J. et al., Nat. Biotechnol. 20, 396-399, 2002) 또는 프로모터를 이용하여 닭 내에서 유용 단백질을 생산하는 방법 등이 있다(Harvey A. J. & Ivarie R., Poult Sci. 82, 927-930, 2003; Chen Y. X., Mol. Vis. 17,874-883, 2004). 특히, 상기 프로모터를 이용하는 방법에 있어서, CMV 프로모터 및 오브알부민 프로모터를 이용하는 방법들이 개발된 바 있으나, 상기 CMV 프로모터는 임의적으로 몸 전체에서 발현이 되어 발현 조절이 어려울 뿐 아니라 닭 자체의 생리 현상을 변화시킬 수 있는 단점이 있다. 반면, 오브알부민 프로모터는 난관과 계란에서만 특이적으로 발현되어 조직 특이적으로 단백질의 발현을 유도할 수 있기 때문에 비정상적인 닭의 생리 현상을 최소화 시킬 수 있다. 그러나 이러한 오브알부민 프로모터는 이미 특허권을 외국에서 가지고 있는 관계로 이를 활용한 형질전환 닭을 생산한다고 하여도 산업화하는 데는 많은 어려움이 있으며 이를 이용한 조직 특이적인 형질전환 닭을 생산한 사례가 극소수에 불과하다.
따라서 기능성 계란의 생산뿐만 아니라 이를 생산하는 형질전환 닭의 생산 및 이로부터 인체에 유용한 단백질들을 생산하기 위하여 조직 특이적으로 발현하며 닭의 생리 현상에 큰 영향을 미치지 않는 새로운 유전자 및 프로모터의 발굴이 시급한 실정이다.
이에 본 발명자들은 기능성 계란의 생산 및 이를 생산하는 형질전환 닭의 생산을 위하여 조직 특이적으로 발현을 유도하는 새로운 프로모터를 발굴하기 위해 실험을 수행하던 중, 닭의 난관에서 특이적으로 발현하는 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 발현 벡터를 제조함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공한다.
또한, 본 발명을 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터, 및 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 이용하는 경우 닭에서 목적단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
도 1은 재조합 프로모터에 포함된 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역의 염기서열(1350 bp)을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에서 제조한 재조합 프로모터의 개략도를 나타낸 것이다.
도 3은 닭의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 리포터 벡터(OVM-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 리포터 벡터(Kanuma)를 비교하여 나타낸 것이다.
도 4는 HeLa 세포에서 OVM-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 5는 MES-SA 세포에서 OVM-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 6은 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포(cOECs)에서 OVM-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 2는 본 발명에서 제조한 재조합 프로모터의 개략도를 나타낸 것이다.
도 3은 닭의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 리포터 벡터(OVM-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 리포터 벡터(Kanuma)를 비교하여 나타낸 것이다.
도 4는 HeLa 세포에서 OVM-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 5는 MES-SA 세포에서 OVM-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
도 6은 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포(cOECs)에서 OVM-pOV 프로모터의 활성을 대조군과 비교한 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터에 관한 것으로서, 상기 재조합 프로모터는 목적 단백질을 닭에서 발현시키는데 사용될 수 있다.
상기 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하고, 상기 오브알부민 유전자의 프로모터 영역은 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 프로모터 영역 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 변이체는 염기서열은 변화되지만, 서열번호 1 또는 2의 염기 서열과 유사한 기능적 특성을 갖는 염기 서열이다. 구체적으로, 상기 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 염기서열은 서열번호 1의 염기 서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있고, 상기 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 염기서열은 서열번호 2의 염기서열과 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어, '프로모터(promoter)'란, 일반적으로 전사를 개시하는 지점을 포함하는 암호화 부위의 상류 쪽에 위치하는 유전자 부위로, 흔히 유전자 발현을 조절하는 TATA 박스, CAAT 박스 부위, 외부 자극에 반응하여 유전자 발현에 영향을 주는 부위 및 위치와 방향에 상관없이 거의 모든 유전자의 발현을 촉진하는 인핸서 등으로 이루어져 있다.
본 발명은 형질전환 암탉의 계란에서 유용단백질 생산을 위해 기존에 활용되고 있는 오브알부민 프로모터에 비하여 크기가 작고 프로모터의 활성이 강력한 재조합 프로모터로서, 계란 난백에서 가장 많이 발현되는 단백질인 오브알부민(ovalbumin)과 그 다음으로 많이 발현되는 오보뮤코이드(ovomucoid) 각각의 프로모터 영역을 연결하였다.
본 발명의 재조합 프로모터에 포함되어 있는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역에는 에스트로겐 호르몬에 반응하는 영역(Estrogen response element, ERE) 또는 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위가 존재할 수 있다.
상기 ERα(Estrogen receptor alpha) 결합 부위는 재조합 프로모터에 포함되어 있는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역에 1개 내지 5개가 포함되어 있을 수 있고, 바람직하게는 2개 내지 3개가 포함되어 있을 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 닭의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역의 일부(1350 bp)와 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역의 일부(1653 bp)가 순차적으로 연결된 재조합 프로모터를 제조하였다(실시예 1 참조).
본 발명의 구체적인 실시예에서, 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터의 활성을 리포터 분석을 통해 인간세포에서 측정한 결과, 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 전체를 포함(에스트로겐 반응성 요소(estrogen responsive element, ERE)하는 4.4 kb 오브알부민 프로모터(미국등록특허 8507749B2))하는 카누마 프로모터에 비해서 프로모터의 활성이 높았다(실험예 1 참조).
또한, 상기 재조합 프로모터의 활성을 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포에서 측정한 결과 오브알부민 유전자의 프로모터 영역 전체를 포함하는 카누마 프로모터에 비해서 프로모터의 활성이 높았다.
따라서, 본 발명의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터가 포함된 벡터는 종래기술의 프로모터가 포함된 벡터에 비해서 그 크기가 작고, 종래기술의 프로모터가 포함된 벡터에 비해서 목적 단백질을 높은 효율로 과발현시킬 수 있다.
본 발명은 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터를 포함하는 벡터를 제공한다. 바람직하게 상기 벡터는 프로모터의 하류(downstream)에 작동 가능하게 연결된 목적 단백질을 암호화하는 유전자를 더 포함할 수 있다.
상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터는 종래기술의 프로모터를 포함하는 벡터에 비해서 그 크기가 작을 수 있다.
본 발명에 있어서 "벡터(vector)"는 적합한 숙주 내에서 DNA를 발현시킬 수 있도록 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 DNA 서열을 보유하는 DNA 제조물을 의미한다. 벡터는 플라스미드, 파지 입자, 또는 간단하게 잠재적 게놈 도입물일 수 있다. 적당한 숙주로 형질 전환되면 벡터는 숙주 게놈과 무관하게 복제하고 기능할 수 있거나, 또는 일부 경우에 게놈 그 자체에 통합될 수 있다.
상기 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, HIV(Human immunodeficiency virus) 벡터, MLV(Murineleukemia virus) 벡터, ASLV(Avian sarcoma/leukosis) 벡터, SNV(Spleen necrosis virus) 벡터, RSV(Rous sarcoma virus) 벡터, MMTV(Mouse mammary tumor virus) 벡터, 아데노바이러스(Adenovirus) 벡터 및 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes simplex virus) 벡터, 렌티바이러스(lentivirus) 벡터 및 에피조말(episomal) 벡터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 벡터일 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "발현벡터" 또는 "발현을 위한 벡터"는 목적한 코딩 서열과, 특정 숙주 생물에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열을 발현하는데 필수적인 적정 핵산 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자를 의미한다.
발현벡터는 바람직하게는 하나 이상의 선택성 마커를 포함할 수 있다. 상기 마커는 통상적으로 화학적인 방법으로 선택될 수 있는 특성을 갖는 핵산 서열로, 형질 전환된 세포를 비 형질전환 세포로부터 구별할 수 있는 모든 유전자가 이에 해당된다. 그 예로는 암피실린(ampicilin), 카나마이신(kanamycin), 네오마이신(neomycin), G418, 블레오마이신(Bleomycin), 하이그로마이신(hygromycin), 클로람페니콜(chloramphenicol)과 같은 항생제 내성 유전자가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 당업자에 의해 적절히 선택 가능하다.
본 발명에 있어, "작동 가능하게 연결(operably linked)" 된다는 것은 적절한 분자가 발현 조절 서열에 결합할 때 유전자 발현을 가능하게 하는 방식으로 연결되는 것을 의미한다. 또한, "발현 조절 서열(expression control sequence)"이란, 특정한 숙주 세포에서 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 DNA 서열을 의미한다. 그러한 조절 서열은 전사를 실시하기 위한 프로모터, 전사를 조절하기 위한 임의의 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보좀 결합 부위를 코딩하는 서열 및 전사 및 해독의 종결을 조절하는 서열을 포함한다.
본 발명에 있어서, "목적 단백질"이란 본 발명의 프로모터에 의해 고발현되길 원하는 외부 유래의 어떤 표적 단백질을 말하며, 바람직하게는 외인성 단백질이거나 또는 내인성 단백질 및 리포터 단백질일 수 있다.
본 발명의 상기 벡터는 형질전환 닭 생산용 바이러스 제조를 위한 목적으로 사용될 수 있다.
본 발명은 상기 재조합 프로모터를 포함하는 벡터에 의해 형질전환된 닭을 제공한다.
본 발명에서 형질전환된 닭을 제조하기 위해서, 상기 재조합 프로모터를 포함하는 형질전환 닭 생산용 바이러스 제조를 위한 벡터를 닭의 배반엽단계 수정란에 미세 주입을 통하여 도입할 수 있다. 상기 수정란의 배양 및 이식을 통해 제1세대 후보 형질전환 병아리(mosaic, G0)를 생산하고, 생산된 수컷 후보 중 성선에 그 형질이 전달(Germline transmission)된 개체를 선발하여 인공수정을 통해 제1세대 형질전환 닭(G1)을 생산하고 G1 개체를 포함하는 교배 계획을 통해 재조합 프로모터 및 목적 유전자를 가지는 제2세대 및 그 이후 세대의 형질전환 닭(G2)을 계속 생산할 수 있다.
본 발명은 목적 유전자를 포함하는 상기 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭의 상피세포에서 목적 단백질을 발현시키는 방법을 제공한다.
본 발명에서 상기 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터는 하류(downstream)에 작동 가능하게 연결된 목적 단백질을 암호화하는 유전자를 더 포함할 수 있고, 상기 재조합 프로모터를 닭에 형질전환시키는 경우, 목적 단백질을 닭의 난관 상피세포에서 발현시킬 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 닭에서 유용단백질 발현을 위한 재조합 프로모터 제작
닭의 계란에서 유용단백질 발현을 위해 도 1과 같이 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역과 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 결합된 재조합 프로모터를 제작하였다.
구체적으로, ThermoFisher사에 의뢰하여 5'에서 3' 방향으로 Xho I 제한효소 인식 서열, 닭의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역(1350 bp)(서열번호 1), 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역(1653 bp)(서열번호 2), EcoR V 제한효소 인식 서열이 순차적으로 연결된 폴리뉴클레오티드를 합성하였다. 상기 제조한 폴리뉴클레오티드에 Xho I 및 EcoR V 제한효소를 처리하고 동일한 효소를 처리한 리포터 분석용 벡터(pGL4.11, Promega)에 도입하였다(OVM-pOV). 5'에서 3' 방향으로 닭의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역(1350 bp)(서열번호 1), 및 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역(1653 bp)(서열번호 2)이 결합된 재조합 프로모터의 염기서열은 서열번호 3에 개시되어 있다.
또한, 공지된 대조군 벡터(카누마, Kanuma)를 제조하기 위해서 ERE(estrogen responsive element)를 포함하는 1.6 kb 크기의 닭 오브알부민 유전자의 프로모터 영역과 2.8 kb 크기의 닭 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 연결된 4.4 kb 오브알부민 프로모터(미국등록특허 8507749B2)를 상기와 동일한 방식으로 합성하고 리포터 분석용 벡터(pGL4.11)에 클로닝하여 대조군 벡터를 제조하였다. 닭의 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역과 닭의 오브알부민 유전자의 프로모터 영역이 재조합된 벡터(OVM-pOV)와 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 대조군 벡터(kanuma)를 비교하여 도 3에 나타냈다.
구축한 재조합 프로모터 벡터들은 염기서열 분석을 통하여 클로닝하고자 한 상기 프로모터들이 정상적으로 삽입되었음을 확인하였다.
실험예 1: 인간 세포에서 재조합 프로모터의 활성 검증
실시예 1에서 제조한 두 가지 프로모터(Kanuma, OVM-pOV) 및 음성대조군인 공벡터(Mock, pGL4.11)를 지질 매개성 유전자 도입 방식으로 HeLa(Human cervix epithelial cells) 세포, MES-SA(Human uterus epithelial cells) 세포 및 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포에 도입하고, 24시간 후에 luciferase assay kit(Promega)로 제조사의 프로토콜에 따라 각 프로모터의 활성을 분석하였다.
그 결과 HeLa 세포에서 OVM-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터(Mut-4.4kb-pOV)의 활성에 비해 1.13배 높았고(도 4 참조), MES-SA 세포에서 OVM-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터(Mut-4.4kb-pOV)의 활성에 비해 1.78배 높았다(도 5 참조). 또한, 닭 난관 상피조직으로부터 분리한 세포(cOECs)에서 OVM-pOV 프로모터의 활성은 대조군인 카누마 프로모터(Mut-4.4kb-pOV)의 활성에 비해 4.4배 높음을 확인하였다(도 6 참조).
<110> RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION
<120> Recombinant promoter comprising the promoter region of the
ovomucoid gene and the promoter region of the ovalbumin gene
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<160> 3
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<210> 1
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ovomucoid promoter DNA sequence
<400> 1
cactcctgta ggtgctaggg aaaatctctg gttcccaggg atgcattcat aaggacaata 60
tatcttgagg ctgtgccaaa tctttctgaa atattcatgc atgttccctt aatttataga 120
aacaaacaca gcagaataat tattccaatg cctcccctcg aaggaaaccc atatttctat 180
gtagaaatgt aacctatata cacacagcca tgctgcatcc ttcagaacat gccagtgctc 240
atctcccatg gcaaaatact acaggtattc tcactatgtt ggacctgtga aaggaaccat 300
ggtaagaaac tcaggttaaa ggtatggctg caaaactact cataccaaaa cagcagagct 360
ccagacctcc tcctaggaaa gagccacttg gagagggatg gtgtgaaggc tggaggtgag 420
agacagagcc tgtcccagtt ttcctgtctc tattttctga aacgtctgca ggaggaaagg 480
acaactgtac tttcaggcat agctggtgcc ctcacgtaaa taagttcccc gaacttctgt 540
gtcatttgtt cttaagatgc tttggcagaa cactttgagt caattcgctt aactgtgact 600
aggtctgtaa ataagtgctc cctgctgata aggttcaagt gacattttta gtggtatttg 660
acagcattta ccttgctttc aagtcttcta ccaagctctt ctatacttaa gcagtgaaac 720
cgccaagaaa cccttccttt tatcaagcta gtgctaaata ccattaactt cataggttag 780
atacggtgct gccagcttca cctggcagtg gttggtcagt tctgctggtg acaaagcctc 840
cctggcctgt gcttttacct agaggtgaat atccaagaat gcagaactgc atggaaagca 900
gagctgcagg cacgatggtg ctgagcctta gctgcttcct gctgggagat gtggatgcag 960
agacgaatga aggacctgtc ccttactccc ctcagcattc tgtgctattt agggttctac 1020
cagagtcctt aagaggtttt tttttttttt tggtccaaaa ggctgtttgt ttggttttga 1080
ccactgagag catgtgacac ttgtctcaag ctattaacca agtgtccagc caaaatcaat 1140
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<213> Artificial Sequence
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gaggtcagga cctcaataaa tattaccagc ctcattgtgc cgctgacaga ttcagctggc 2880
tgctccgtgt tccagtccaa cagttcggac gccacgtttg tatatatttg caggcagcct 2940
cggggggacc atctcaggag cagagcaccg gcagccgcct gcagagccgg gcagtacctc 3000
acc 3003
Claims (8)
- 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 서열번호 2의 염기서열로 구성되는 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터.
- 삭제
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 재조합 프로모터는 목적 단백질을 과발현시키기 위한 것인, 재조합 프로모터.
- 제 1항 및 제 4항 중 어느 한 항의 재조합 프로모터를 포함하는 벡터.
- 제 5항에 있어서, 상기 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, HIV(Human immunodeficiency virus) 벡터, MLV(Murineleukemia virus) 벡터, ASLV(Avian sarcoma/leukosis) 벡터, SNV(Spleen necrosis virus) 벡터, RSV(Rous sarcoma virus) 벡터, MMTV(Mouse mammary tumor virus) 벡터, 아데노바이러스(Adenovirus) 벡터 및 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes simplex virus) 벡터, 렌티바이러스(lentivirus) 벡터 및 에피조말(episomal) 벡터로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제 5항의 벡터에 의해 형질전환된 닭.
- 목적 유전자를 포함하는 제 5항의 재조합 벡터를 닭에 형질전환하여, 닭에서 목적 단백질을 발현시키는 방법.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| KR1020190084736A KR102159050B1 (ko) | 2019-07-12 | 2019-07-12 | 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| KR1020190084736A KR102159050B1 (ko) | 2019-07-12 | 2019-07-12 | 오보뮤코이드 유전자의 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
Publications (1)
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| KR102159050B1 true KR102159050B1 (ko) | 2020-09-24 |
Family
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Family Applications (1)
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|---|---|
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220076890A (ko) * | 2020-12-01 | 2022-06-08 | 대한민국(농촌진흥청장) | 변형 오브트렌스페린 유전자의 재조합 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
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-
2019
- 2019-07-12 KR KR1020190084736A patent/KR102159050B1/ko active IP Right Grant
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GenBank Accession AF453747.1(2016.7.25.)* * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220076890A (ko) * | 2020-12-01 | 2022-06-08 | 대한민국(농촌진흥청장) | 변형 오브트렌스페린 유전자의 재조합 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
| KR102429945B1 (ko) | 2020-12-01 | 2022-08-05 | 대한민국 | 변형 오브트렌스페린 유전자의 재조합 프로모터 영역 및 오브알부민 유전자의 프로모터 영역을 포함하는 재조합 프로모터 |
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