KR102157912B1 - 효소-활성화 화합물 및 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 특정 효소의 조절에 유용한 화합물 및 조성물을 제공한다. 화합물 및 조성물은 세포 사멸, 특히 암 세포 사멸을 유도할 수 있다. 본 발명은 또한 세포에서 아폽토시스의 선택적 유도 및 암의 치료 요법에서 화합물 및 조성물의 사용을 포함한, 화합물 및 조성물의 합성 및 사용 방법을 제공한다.

Description

효소-활성화 화합물 및 조성물 {ENZYME-ACTIVATING COMPOUNDS AND COMPOSITIONS}

관련 출원

본 출원은 35 U.S.C. §119(e)하에 2012년 8월 3일에 출원된 미국 가특허출원 번호 61/679,129를 우선권 주장하며, 이 가출원은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

아폽토시스는 과도하게, 손상되거나, 잠재적으로 위험한 세포를 제거함으로써 항상성을 유지하는 고등 동물에 의해 사용되는 과정이다. 카스파제 효소는 C-말단 아스파르테이트 잔기로의 서열 인식 후에 세포 기질을 분해하는 시스테인 프로테아제의 부류이다. 카스파제 효소의 활성화는 아폽토시스에 대단히 중요하다. 아폽토시스-개시 자극이 세포내 (내인성 경로) 또는 세포외 (외인성 경로)라는 점에서 다른, 두 가지 공인된 아폽토시스 경로가 있다. 이들 경로는 프로카스파제-3의 분해에서 수렴하여, 수백의 단백질 기질의 가수분해를 촉매하는 주요 "실행자" 카스파제인 활성 카스파제-3을 형성하여, 세포 사멸을 야기한다.

암의 특징 중의 하나는 아폽토시스를 피하여, 저지되지 않은 증식을 허용하는 암 세포의 능력이다. 따라서, 결함이 있는 아폽토시스 경로를 갖는 세포에서의 아폽토시스의 재활성화는 유망한 항암 전략이다. 화합물, 예컨대 p53-MDM2 교란물질 (누틀린(Nutlin)), Bcl-2 억제제 (ABT-737), 및 XIAP의 억제제 (SM-164)는 모두 아폽토시스 캐스케이드에서 단백질에 대해 직접 작용하여, 아폽토시스를 유도하고 암 세포의 사멸을 야기한다.

상기 기재된 전략에 보완적으로, 소분자를 사용한 프로카스파제-3의 직접 활성화는 암 치료를 개별맞춤화하는 잠재력을 갖는다. 프로카스파제-3 수준은 림프종, 백혈병, 흑색종, 췌장암, 간암, 폐암, 유방암, 및 결장암을 포함한, 특정 암에서 상승된다. 암 세포에서 프로카스파제-3의 상승된 수준, 아폽토시스를 위한 카스파제-3 활성화의 필요, 및 아폽토시스 캐스케이드에서 프로카스파제-3의 상대적 하류 위치로 인해, 프로카스파제-3의 직접 활성화에 의한 아폽토시스의 유도는 개별맞춤화 항암 전략으로서 활발히 탐색된다. 따라서, 프로카스파제-3 활성을 조절하는 신규 화합물, 특히 프로카스파제-3을 활성화시키고 효과적인 임상 치료에 충분히 대사적으로 안정한 화합물에 대한 필요가 존재한다.

프로카스파제-활성화 화합물 1 (PAC- 1)은 시험관내에서 프로카스파제-3의 효소 활성을 향상시키고 암 세포에서 아폽토시스를 유발하는 오르토-히드록시 N-아실 히드라존이다. S-PAC-1로 칭해지는 PAC-1의 유사체는 수의 임상 시험에서 림프종이 있는 애완견에서 평가되어 항암제로서 상당한 잠재력을 갖는 것으로 밝혀졌다. 실험 치료학의 이러한 유망한 부류에서 더 강력한 화합물을 확인하는 것을 목표로, PAC-1을 기반으로 한 조합 라이브러리를 생성하였고, 배양액에서 암 세포의 사멸을 유도하는 화합물의 능력에 대해 화합물을 평가하였다. 암 세포에서 아폽토시스를 유발하는 화합물의 능력 및 화합물의 대사 안정성에 대해 화합물을 평가하였다. 새로 확인된 화합물은 프로카스파제-3의 향상된 발현 수준을 갖는 많은 암의 치료를 위한 치료법을 제공할 수 있다.

암 세포에서 그의 비활성 형태로 종종 과다발현되는 효소를 활성화할 수 있는 화합물이 발견되었다. 화합물은 상향조절된 프로카스파제-3을 갖는 것을 포함한, 암 세포에서 프로그램화된 세포 사멸 (아폽토시스)을 유도할 수 있다. 많은 암은 표준 화학요법에 저항한다. 본원에 기재된 화합물은 암 세포에서 상향조절될 수 있고 따라서 그의 아폽토시스 기구에 결함이 있는 세포에서조차 효과적일 수 있는 생물학적 표적을 이용할 수 있다. 이들 화합물은 또한 더 낮은 수준의 프로카스파제-3을 갖는 비-암성 세포에 대해 대등하게 감소된 유해 반응을 갖는 암 세포를 선택적으로 사멸시킴으로써 표적화된 암 치료에서 성공적일 수 있다. 이러한 유해 반응은 독성, 특히 신경 독성을 포함할 수 있다.

따라서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다.

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹은 임의로 치환된 벤조일, 페닐, (아릴)메틸렌, 또는 (아릴)메틴이고 여기서 메틴 탄소는 페닐로 임의로 치환되고;

n은 1, 2, 3, 또는 4이고;

각각의 R²는 독립적으로 H, 알킬, 알콕시, 히드록시, 카르복시, 할로, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 벤질, 벤질옥시, 니트로, 시아노 (-CN), 술폰아미드 (-SO₂NH₂), 2-프로페닐, 아세틸렌, N-알킬-트리아졸, 또는 N-벤질-트리아졸이거나; 2개의 R² 기는 오르토-융합 벤조 기를 형성한다.

일부 실시양태에서, R¹은 벤조일 (Ph(C=O)-)이다. 다른 실시양태에서, R¹은 치환된 벤조일이다. 벤조일 기는 1, 2, 3, 또는 4개의 R² 기로 치환될 수 있다. 가변기 R²는 벤조일 기의 카르보닐에 대해 오르토, 메타, 또는 파라, 또는 그의 조합일 수 있다.

일부 실시양태에서, n은 1 또는 2이다. 다른 실시양태에서, n은 3 또는 4이다. 가변기 R²는 화학식 I의 히드록실 기에 대해 오르토, 메타, 또는 파라, 또는 그의 조합일 수 있다.

일부 실시양태에서, R²는 메틸, t-부틸, 메톡시, 히드록시, 플루오로, 클로로, 브로모, 아이오도, 아미노, 에틸아미노, 디에틸아미노, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 벤질, 벤질옥시, 니트로, 시아노, 술폰아미드, 2-프로페닐, 아세틸렌, N-메틸-트리아졸, 또는 N-벤질-트리아졸이다. 다양한 실시양태에서, n은 2이고, 2개의 R² 기는 오르토-융합 벤조 기를 형성한다. 일부 실시양태에서, R¹ 페닐 기 상에서의 치환기는 치환기 R²일 수 있다. 다양한 실시양태에서, R²는 독립적으로 벤조일 기를 포함한, R¹ 아릴 기 상에서의 치환기일 수 있고, 이러한 기들은 1 내지 5개의 R² 치환기를 가질 수 있다.

일부 실시양태에서, n은 2이고, 각각의 R²는 t-부틸이다.

일부 실시양태에서, n은 1이고, R²는 2-프로페닐이다.

일부 실시양태에서, R¹은 메톡시-벤질; 디메톡시-벤질; 벤질옥시-벤질; t-부틸-벤질; 나프틸메틸렌; 또는 에틸-벤질이다.

특정 구체적 실시양태에서, R¹은 4-메톡시-벤질; 2,5-디메톡시-벤질; 4-벤질옥시-벤질; 4-t-부틸-벤질; 2-나프틸메틸렌; 또는 4-에틸-벤질이다.

특정 다른 구체적 실시양태에서, R¹은 다음과 같다.

다양한 구체적 실시양태에서, 화합물은 하나 이상의 실시예 4의 화합물 1-45, 표 1의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물이다. 다른 실시양태에서, 화합물은 원위 피페라진 질소에 부착된 메틸렌 탄소에 옥소 기가 없는 본원에 기재되거나 예시된 각 화합물에 대해, 원위 피페라진 질소에 부착된 메틸렌 탄소가 옥소 기로 치환된 본원에 기재된 화합물이며, 예를 들어

은

에 대한 지지체를 제공하고;

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에 대한 지지체를 제공하고;

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에 대한 지지체를 제공하는 등이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 화합물은 화학식 X의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물이다.

<화학식 X>

상기 식에서,

R¹⁰은 H, F, Cl, Br, -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, 또는 -SO₂NH₂이고;

R²⁰은 H, F, Cl, Br, -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, 또는 -SO₂NH₂이고;

R³⁰은 H, (C₁-C₆)알킬, (C₁-C₆)알케닐, 또는 (C₁-C₆)알콕시이다.

일부 실시양태에서, R¹⁰은 H이다.

일부 실시양태에서, R¹⁰은 F, Cl, 또는 Br이다.

일부 실시양태에서, R¹⁰은 -NO₂ 또는 -CN이다.

일부 실시양태에서, R¹⁰은 -CF₃, -OCF₃, 또는 -SO₂NH₂이다.

일부 실시양태에서, R²⁰은 H이다. 일부 실시양태에서, R²⁰은 F이다. 일부 실시양태에서, R²⁰은 H 또는 F이다.

일부 실시양태에서, R²⁰은 F, Cl, 또는 Br이다.

일부 실시양태에서, R²⁰은 -NO₂ 또는 -CN이다.

일부 실시양태에서, R²⁰은 -CF₃, -OCF₃, 또는 -SO₂NH₂이다.

일부 실시양태에서, R³⁰은 H이다.

일부 실시양태에서, R³⁰은 n-프로필이다.

일부 실시양태에서, R³⁰은 2-프로페닐 (알릴)이다.

일부 실시양태에서, R¹⁰은 상기 기재된 바와 같은 R¹일 수 있고, 그 역도 마찬가지이다.

일부 실시양태에서, R²⁰은 상기 기재된 바와 같은 R²일 수 있고, 그 역도 마찬가지이다.

일부 실시양태에서, R³⁰은 상기 기재된 바와 같은 R³일 수 있고, 그 역도 마찬가지이다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 화합물 및 제약상 허용되는 희석제, 부형제, 또는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 화합물은 배양액에서 암 세포의 사멸을 유도한다.

본 발명은 추가로 (a) 암 세포의 치료 감수성을 프로카스파제 활성화제 화합물로 확인하는 것; 및 (b) 암 세포를 유효량의 프로카스파제 활성화제 화합물에 노출시키는 것을 포함하며; 여기서 프로카스파제 활성화제 화합물은 본원에 기재된 화합물인, 암 세포를 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 세포에 유효량의 본원에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법을 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 유효 농도, 예컨대 약 10 nM 내지 약 100 μM의 화합물 또는 화학식과 관련된, 화합물 및 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 유효 농도는 약 200 nM 내지 약 5 μM이다. 또 다른 실시양태에서, 유효 농도는 직접 프로카스파제 활성화 검정, 세포 아폽토시스 유도 검정, 또는 동물 임상 치료 평가에서 50% 활성 농도와 같은 값이다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 값은 약 200 μM 미만이다. 다양한 실시양태에서, 상기 값은 약 10 μM 미만이다. 다양한 실시양태에서, 화합물은 상당한 대사 안정성을 가질 수 있다. 예를 들어, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 95% 이상의 화합물의 샘플이 간 마이크로솜 안정성 검정에서 3시간 인큐베이션 후에 남아있을 수 있다.

따라서 본 발명은 화합물, 조성물, 및 치료적 치료 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 다양한 암 질환 및 암 세포 유형, 그 중에서도, 예컨대 유방, 림프종, 부신, 신장, 흑색종, 백혈병, 신경모세포종, 폐, 뇌의 맥락에서 적용가능하다.

본 발명은 본원에 기재된 신규 화합물 및 본원에 기재된 화학식의 화합물, 이러한 화합물의 합성을 위한 중간체뿐만 아니라, 화합물의 제조 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 다른 유용한 화합물의 합성을 위한 중간체로서 유용한 화합물을 제공한다.

본 발명은 또한 의료 요법에 사용하기 위한 본원에 기재된 조성물의 용도를 제공한다. 의료 요법은 암, 예를 들어 림프종, 백혈병, 흑색종, 췌장암, 간암, 폐암, 유방암, 및 결장암을 치료하는 것일 수 있다. 본 발명은 또한 포유동물에서 질환, 예를 들어 인간에서 암을 치료하는 의약의 제조를 위한, 본원에 기재된 바와 같은 조성물의 용도를 제공한다. 의약은 제약상 허용되는 희석제, 부형제, 또는 담체를 포함할 수 있다.

하기 도면은 명세서의 일부를 형성하고, 본 발명의 특정 실시양태 또는 다양한 측면을 추가로 나타내기 위해 포함된다. 일부 예에서, 본 발명의 실시양태는 본원에서 제시되는 상세한 설명과 조합하여 첨부 도면을 참조함으로써 가장 잘 이해될 수 있다. 설명 및 첨부 도면은 본 발명의 특정 구체적 예, 또는 특정 측면을 강조할 수 있다. 그러나, 통상의 기술자는 예 또는 측면의 일부가 본 발명의 다른 예 또는 측면과 조합하여 사용될 수 있음을 이해할 것이다.
도 1. PAC -1 유사체의 조합 라이브러리를 제작하는데 사용되는 히드라지드. 또한, 각각의 R¹ 벤질 히드라지드 전구체는, 다양한 실시양태에서, 상응하는 R¹ 벤조일 히드라지드 전구체 화합물일 수 있다.
도 2. 특정 실시양태에 따른, PAC-1 유사체의 조합 라이브러리를 제작하는데 사용되는 알데히드.
도 3. 세포 배양 활성. 24시간 동안 25 μM에서 화합물로 처리된 U-937 세포 (인간 림프종). 알라마르 블루(Alamar blue) 검정에 의해 평가된 세포 생존성. 오차 막대는 평균으로부터의 표준 오차를 나타낸다 (n = 3).
도 4. 간 마이크로솜 안정성 검정. 3시간 동안 간 마이크로솜과 함께 인큐베이션되고 MeCN 함유 내부 표준으로 켄칭되고, LC/MS (280 nm)에 의해 분석된 화합물 (10 μM).

2006년에, 프로카스파제-활성화 화합물 1 (PAC-1, 반응식 A)의 발견이 보고되었다 (Putt et al., Nat Chem Biol 2006, 2, 543-550). PAC -1은 시험관내에서 프로카스파제-3의 효소 활성을 향상시키고, 암 세포에서 아폽토시스 세포 사멸을 유도하고, 다수의 뮤린 종양 모델에서 효능을 나타낸다. 구조-활성 관계 연구에 의하면 시험관내 및 세포 배양액에서의 PAC-1의 활성은, 금속 킬레이트화에 관여하는 것으로 공지된 관능기인 오르토-히드록시 N-아실 히드라존 모이어티의 존재 (반응식 A)에 좌우되는 것으로 밝혀졌다. 사실상, 아연은 프로카스파제-3 효소 활성의 강력한 억제제이고, PAC-1이 시험관내에서 프로카스파제-3을 활성화시키는 메카니즘은 프로카스파제-3으로부터 억제성 아연의 킬레이트화를 통하며, 이는 프로카스파제-3 자체가 활성 형태로 프로세싱되는 것을 가능하게 한다. 이러한 동일한 기초 메카니즘은 마찬가지로 세포 배양액에서도 작동가능한 것으로 보인다: 대략 10%의 세포내 아연은 단단히 결합되어 있는 것이 아니라 "불안정성 아연 풀"로서 존재한다. 불안정성 풀로부터의 아연이 프로카스파제-3과 공동-국재화되는 것으로 확인되었기 때문에, 세포 내부에서 이러한 불안정성 아연의 PAC-1 킬레이트화가 프로카스파제-3 활성을 향상시켜, 아폽토시스를 야기하는 것으로 보인다.

반응식 A: PAC-1 및 S-PAC-1과 오르토-히드록시 N-아실 히드라존 모티프, 및 상응하는 벤조일 (Bz) 유도체.

PAC-1은 48시간 동안 ~10 μM의 혈청 농도를 제공하는 용량으로 마우스 및 연구용 개에게 안전하게 투여할 수 있다. S -PAC-1 (반응식 A)로 칭해지는, PAC-1의 술폰아미드-함유 유도체는, 마우스에서 매우 높은 혈청 농도 (~3.5 mM)를 제공하는 용량에서 안전하게 투여할 수 있다. 고무적으로, 자연적으로 발생하는 림프종이 있는 애완견에서 S-PAC-1 (24- 또는 72-시간 연속 IV 주입)의 수의 임상 시험에 의하면 이러한 화합물이 모든 수의 환자에서 안정하고 6마리 환자 중 4마리에서 종양 성장을 감소 또는 안정화시키는데 효과적인 것으로 밝혀졌다. 이러한 결과는 불안정성 아연의 소분자 킬레이트화를 통한 프로카스파제-3 활성화가 안전하고 효과적인 항암 전략일 수 있다는 견해에 개념 실증을 제공한다. PAC -1의 더 강력한 유도체에 대한 계속되는 연구에서, 본 출원인은 여기서 신규 PAC-1 유사체의 합성, 배양액에서의 암 세포의 사멸을 유도하는 그의 능력에 대한 이들 화합물의 평가, 및 고조된 대사 안정성을 갖는 다양한 화합물의 추가의 특성화를 보고한다.

PAC-1 을 기반으로 한 조합 라이브러리의 설계 및 합성. 배양액에서 암 세포의 강력한 사멸을 도출할 수 있는 화합물을 확인하는 것을 목표로 PAC-1 유사체의 라이브러리를 설계하였다. S -PAC-1의 최대 세포독성이 적어도 24시간이 되어야 도달하고, PAC-1 및 S-PAC-1 둘 다 생체내에서 1-2 시간의 짧은 반감기를 나타내기 때문에, 이러한 연구의 제2 목표는 아폽토시스를 더 신속히 유도할 수 있는 PAC-1 유사체를 확인하는 것이었다. PAC -1 및 S-PAC-1로뿐만 아니라, 다른 PAC-1 유사체로의 보고된 합성 경로는, 합성 반응식에서의 최종 단계로서 히드라지드와 알데히드의 축합을 이용한다 (미국 특허 공개 번호 2007/0049602) (WO 2008/134474 (헤르겐로터(Hergenrother) 등)). PAC -1 합성의 이러한 모듈 특성은 프로카스파제-3 활성화 및 아폽토시스의 유도에 필수적인 코어 오르토-히드록시 N-아실 히드라존 모티프를 변경함이 없이 PAC-1 스캐폴드에 편리하게 혼입될 수 있는 관능기의 다양한 배열을 가능하게 한다.

도 1 및 2에 도시된 바와 같이, 31개 히드라지드 (1{1-31}) 및 27개 알데히드 (2{1-27})를 선택하여 837개 PAC-1 유사체의 라이브러리를 구축하였다. 히드라지드를 시판되는 벤질 할라이드 출발 물질로부터 제작하였다. 히드라지드 (1{1-6})의 합성은 이전에 보고되었다 (Putt et al., Nat Chem Biol 2006, 2, 543-550; Peterson et al., J Med Chem 2009, 52, 5721-5731; Peterson et al., Cancer Res 2010, 70, 7232-41). 히드라지드 (1{7-27})를 반응식 1에 따라 합성하였다. 치환된 벤질 할라이드 (4{7-27})를 먼저 피페라진과 반응시켜 치환된 벤질피페라진 (5{7-27})를 형성시켰다. 에틸 클로로아세테이트를 사용하여 피페라진 고리를 제2 알킬화하여 이치환 피페라진 (6{7-27})을 수득한 다음, 에스테르를 히드라진과 반응시켜 히드라지드 (1{7-27})로 전환시켰다.

반응식 1: 히드라지드 (1{7-27})의 합성.

히드라지드 (1{28-31})로의 합성 경로를 반응식 2에 상세히 나타냈다. 히드라지드 (1{28})의 합성은, 4-비닐벤질 클로라이드 (7)를 사용하여 피페라진을 알킬화하여 일치환 피페라진 (8) (반응식 2, 방정식 1)을 형성시킴으로써 개시되었다. 에틸 클로로아세테이트를 사용하여 제2 알킬화하여 에스테르 (9)를 형성시켰고, 히드라진과 반응시켜 히드라지드를 형성시키고 올레핀을 환원시켜, 히드라지드 (1{28})를 수득하였다. 히드라진으로 올레핀을 환원시키는 것은 전형적으로 산화제의 첨가를 포함하지만 (Miller, C. E., Hydrogenation with Diimide. J Chem Educ 1965, 42, 254), 대기 중의 산소의 존재는 이러한 변환을 달성하는데 충분하였다.

반응식 2: 히드라지드 (1{28-31})의 합성.

히드라지드 (1{29}) (반응식 2, 방정식 2)의 합성은, 에틸 2-(피페라진-1-일)아세테이트 (10)를 벤질 브로마이드 (4{29})와 반응시켜 중간체 (6{29})를 형성시키는 것으로 개시되었다. 그 다음, 6{29}을 히드라진과 반응시켜 히드라지드 (1{29})를 형성시켰다. 히드라지드 (1{30}) (반응식 2, 방정식 3)는, 1-페닐피페라진 (5{30})을 에틸 클로로아세테이트와 반응시켜 이치환 피페라진 (6{30})을 형성시키는 것으로 개시되고, 히드라진과 반응시켜 히드라지드 (1{30})를 형성시켰다. 히드라지드 (1{31})는, 반응식 2, 방정식 4에 나타낸 바와 같이, 먼저 4-메틸벤조페논 (11)을 에틸렌 아세탈 (12)로서 보호시킴으로써 합성하였다. 이 화합물을 라디칼 조건하에 브로민화하여 벤질 브로마이드 (13)를 수득하였다. 일치환 피페라진 (10)과 반응시켜 중간체 (14)를 수득하고, 히드라진과 반응시켜 히드라지드 (15)를 수득하였다. 아세탈을 수성 산으로 탈보호시켜 히드라지드 (1{31})를 수득하였다.

~30개 화합물의 합성 및 평가로부터 유래된 PAC-1의 구조-활성 관계는 오르 토-히드록실 기의 필요성을 입증하였고, 따라서 27개의 살리실알데히드 빌딩 블록을 선택하여 라이브러리를 제작하였다. 알데히드 (2{1-23})를 상업적 공급원으로부터 입수하였고, 알데히드 (2{24-26})의 합성은 이전에 보고되었다 (Peterson et al., J Med Chem 2009, 52, 5721-5731; Peterson et al., Cancer Res 2010, 70, 7232-41; Chang et al., Dalton Trans 2004, 1731-8). 알데히드 (2{27})는, 반응식 3에 나타낸 바와 같이, 알데히드 (2{26})를 벤질 아지드로 구리-촉매화 부가환화시켜 합성하였다.

반응식 3: 알데히드 (2{27})의 합성.

부치(Buechi) 신코어(Syncore) 병렬 합성기를 사용하여, 각각의 히드라지드를 각각의 알데히드와 축합시켰고, 여기서 80회 초과의 반응이 동시에 수행되었다. 각각의 알데히드 (5-15 mg)를 과량의 히드라지드 (1.7 당량)와 반응시켰고, 질량 분석법을 사용하여 반응 혼합물로부터 알데히드의 소멸을 모니터링하였다. 알데히드가 완전히 반응한 경우, 폴리스티렌-결합 벤즈알데히드를 스캐빈저 수지로서 첨가하여 과량의 히드라지드와 반응시키고 이를 제거하였다. 질량 분석법에 의해 어떤 히드라지드도 남아있지 않은 것으로 확인된 경우, 비드를 여과하고, 용액을 고 진공 하에 건조시켰다. 837개 화합물 각각을 HPLC/MS에 의해 평가하였다. 각각의 화합물의 순도는 약 74-100%이었고, 평균 순도는 91%이다.

PAC-1 조합 라이브러리의 평가. 현재 다루고 있는 837개 PAC-1 유사체를 사용하여, 화합물을, 세포 배양액에서 아폽토시스를 유발하는 그의 능력에 대해 평가하였다. U-937 인간 림프종 세포를 20 μM의 농도에서 24시간 동안 화합물에 노출시켰다. PAC-1 및 S-PAC-1은 둘 다 이러한 조건 하에 이러한 세포주에 비해서 중간 정도의 효능 (~50% 세포 사멸)을 나타낸다. 아넥신 V-FITC/프로피디움 아이오다이드 염색을 사용하여, 아폽토시스 세포 사멸을 유동 세포측정법에 의해 평가하였다. 이러한 스크리닝 과정을 통해, 이러한 조건 하에 >80% 세포 사멸을 유도하는 6개 화합물을 확인 및 검증하였다.

<표 A>

6개 라이브러리 화합물은 24 및 72시간 실험 둘 다에서 U-937 세포 (인간 림프종)의 강력한 세포 사멸을 유도하며, 여기서 바이오매스는 술포로다민 B 검정을 사용하여 정량화되었다.

유효 화합물(hit compound)에 의한 프로카스파제 -3의 세포 사멸 유도 및 아연-매개 억제의 경감. 유효 화합물 (3{2,7}, 3{4,7}, 3{18,7}, 3{20,24}, 3{25,7}, 및 3{28,7})의 재합성 후, 화합물의 분석적으로 순수한 샘플을 추가 생물학적 검정으로 평가하였다. 이들 구조 및 생물학적 결과는 상기, 표 A에 나타냈다. 화합물을, 농도의 범위에서, U-937 세포에서 세포 사멸을 유도하는 그의 능력에 대해서 뿐만 아니라, 시험관내에서 프로카스파제-3을 활성화시키는 그의 능력에 대해서 평가하였다. 이들 유효 화합물 중 6개가 모두 72시간 처리에서 PAC-1 및 S-PAC-1보다 세포 배양액에서 2-4배 더 강력한 것으로 밝혀졌다.

제2 실험에서, 아넥신 V-FITC/프로피디움 아이오다이드를 사용하는 유동 세포측정법 분석을 24시간 동안 단일 농도 (7.5 μM)에서 화합물에 노출시킨 U-937 세포 상에서 수행하였다 (표 A). 24시간 이내에 대부분의 화합물 처리된 세포는 아폽토시스를 겪거나 (히스토그램의 우측 하단 사분면에서의 세포 - 아넥신 V 양성, 프로피디움 아이오다이드 음성), 말기 아폽토시스/괴사 단계에 있었다 (우측 상단 사분면 - 아넥신 V 양성, 프로피디움 아이오다이드 양성). 신규 유사체는 이들 24시간 조건하에 PAC-1보다 더 강력한 것으로 밝혀졌다.

그 다음, 6개의 확인된 유효 화합물을 시험관내에서 프로카스파제-3의 아연-매개 억제를 경감시키는 그의 능력에 대해 평가하였다. (표 A). 이러한 실험에서, 프로카스파제-3을 프로카스파제-3가 어떤 효소 활성도 갖지 않는 조건인 ZnSO₄와 함께 배양하였다. 모든 화합물은 이러한 조건 하에 프로카스파제-3 효소 활성을 증가시킬 수 있었고 (비색 카스파제-3 기질 Ac-DEVD-pNA의 분해에 의해 평가된 바와 같음, 이전에 보고된 바와 같이 합성됨 (Peterson et al., Nat Protoc 2010, 5, 294-302)), 6개의 유효 화합물 중 5개는 이 검정에서 PAC-1보다 더 큰 활성을 나타냈다. 이들 데이터는 화합물이 억제성 아연의 킬레이트화를 통해 시험관내에서 프로카스파제-3의 활성을 향상시킨다는 것을 나타내며, 세포에서 화합물이 불안정성 풀로부터 아연을 킬레이트화하고, 이로써 프로카스파제-3이 활성 카스파제-3으로 프로세싱되어, 아폽토시스 세포 사멸을 야기한다는 것을 시사한다.

아폽토시스 단백질의 직접 조절이 실제적인 항암 전략이다. 불안정성 세포내 아연을 킬레이트화하고 암 세포에서 아폽토시스를 유도하는 PAC-1 및 그의 유도체 S-PAC-1은 다양한 전임상 항-종양 모델에서 효과적이었다. 그러나, 세포 사멸을 더 신속히 그리고 더 강력하게 유도하는 유도체가 치료제로서 훨씬 더 매력적일 것이다. 병렬 합성을 사용하고 공지된 SAR에 의해 유도되어, 본 출원인은 837개 PAC-1 유사체를 제작하고, 그의 세포 사멸 유도 특성에 대해 유사체를 평가하였다. 표 A에 나타낸 6개의 화합물은 이러한 노력으로부터 대두된 것이다. 이들 화합물은 24시간 및 72시간 검정 둘 다에서 암 세포 사멸의 유도에 있어 PAC-1보다 2배 내지 4배 더 강력하다.

PAC-1에 비해 유효 화합물의 일반적인 소수성을 고려할 때, 향상된 효능 및 향상된 세포 사멸 속도는 향상된 세포 투과성에 의해 구동될 수 있다. 이러한 특성은 화합물이 생체내로 이동함에 따라 유리할 가능성이 있다. 또한, 이러한 라이브러리의 다른 구성원은 교호 특성 (예컨대 생체내 연구를 위한, 혈액 뇌 장벽을 관통하는 경향, 개선된 대사 안정성, 개선된 용해도/제제 등)이 조사됨에 따라 생체내 후보에서 생존가능한 것으로서 대두될 가능성이 있다. 따라서, 837개 화합물의 이러한 라이브러리는 그로부터 차세대 프로카스파제-3 활성화 화합물을 개발하기 위한 풍부한 공급원일 것이다.

추가 화합물 및 분석.

대략 20,000개 화합물의 고처리량 스크린은 PAC-1 (1, 반응식 A1)을 시험관내에서 프로카스파제-3의 분해를 향상시킨 화합물로서 확인하였다. 화합물은 배양액에서 다수의 암 세포주에서 아폽토시스 세포 사멸을 유도하고 다수의 뮤린 종양 모델에서 항암 효능을 나타낸다.¹ 구조-활성 관계 (SAR)의 추가 연구로 오르토-히드록시-N-아실히드라존을 주요 약리작용단으로서 확인하였다.^{2 - 3} 이러한 모티프를 함유하는 수개의 PAC-1 유도체는 시험관내 및 세포 배양액에서 대등한 활성을 갖지만, 변형된 코어를 갖는 유도체는 활성을 상실한다.³ 오르토-히드록시-N-아실히드라존은 금속을 킬레이트화하는 것으로 공지되어 있고,⁴ 이들 중 다수는 또한 프로카스파제 및 카스파제 효소를 억제하는 것으로 공지되어 있다.^{2 , 5- 7} 특히, 느슨하게 결합되어 이들 단백질에서 활성에 본질적인 역할을 하지 않는, 불안정성 아연 풀로부터의 아연은 프로카스파제-3과 공동-국재화하고 그의 효소 활성을 억제하는 것으로 나타났다. PAC -1의 작용의 메카니즘은 아마도 불안정성 풀로부터 아연의 킬레이트화를 포함하고, 이는 프로카스파제-3의 아연-매개 억제를 경감시키고 효소 자체가 활성 형태로 프로세싱되는 것을 가능하게 한다.^2-3

반응식 A1. PAC -1 (1) 및 S-PAC-1 (2)의 구조.

PAC-1을 사용한 약동학적 연구에 의하면 최소 부작용으로 대략 10 μM의 혈청 농도가 달성될 수 있는 것으로 밝혀졌다.⁸ S -PAC-1 (2, 반응식 A1)로 칭해지는, PAC-1의 술폰아미드-함유 유도체는, 350 mg/kg 이상의 용량으로 안전하게 투여될 수 있고, 이는 3.5 mM의 피크 혈장 농도를 제공한다.⁹ 개선된 안전성 프로파일은 대부분, PAC-1과 비교하여, 혈액 뇌 장벽 (BBB)을 관통하는 그의 감소된 능력에 기인한다.¹⁰ 고무적으로, S-PAC-1은 자연적으로 발생하는 림프종이 있는 6마리 개 환자 중 4마리에서 종양 성장을 감소 또는 안정화시키는데 효과적이었고, 화합물은 6마리 개 모두에서 허용성이 우수하였다.⁹ 이들 결과는 안전하고 유효한 항암 전략으로서 프로카스파제 활성화의 잠재성을 입증한다.

결과 및 논의. 화합물 합성. PAC -1 및 다른 유도체의 이전 합성은 주요 오르토-히드록시-N-아실히드라존을 형성시키는 히드라지드와 알데히드의 말기의 축합을 포함하였다.^{1 ,3,9, 11} 이 반응은 비교적 소수의 출발 물질로부터 대다수의 유도체의 생성에 유용하였다.¹¹ 이러한 연구에서, PAC-1 유사체 (1- 45)는, 반응식 A2에 나타낸 바와 같이, 9개 히드라지드 (46a-i)와 5개 알데히드 (47a-e)의 축합에 의해 합성하였다.

반응식 A2. 라이브러리를 제작하는데 사용된 빌딩 블록.

히드라지드를 반응식 A3a -c에 따라 합성하였다. 합성은 에틸 클로로아세테이트 ( 49)를 사용하여 피페라진 (48)을 알킬화하여 일치환 피페라진 (50)을 형성함으로써 개시되었다. 그 다음, 화합물 (50)을 치환된 벤질 또는 벤조일 할라이드와 반응시켜 이치환 피페라진 (51a-i)을 고 수율로 수득하였다. 그 다음, 에스테르를 히드라진과 반응시켜 히드라지드 (46a-i)를 수득하였다.

반응식 A3. PAC-1 유사체의 합성. (a) 히드라지드 (46a-i)의 합성. (b) 알데히드 (47a-e)의 합성. (c) PAC-1 유사체 (1- 45)를 형성시키기 위한 히드라지드와 알데히드의 축합.

알데히드의 합성을 반응식 A3b에 나타냈다. 살리실알데히드 (52) 및 5-플루오로살리실알데히드 (47c)를 둘 다 알릴 브로마이드로 알킬화하여 알릴옥시벤즈알데히드 (53a-b)를 고 수율로 수득하였다. 이들 화합물을 200℃에서 가열하여 이들 기질이 클라이젠(Claisen) 재정렬을 겪게 하여 대략 50% 수율로 알데히드 (47a) 및 (47d)를 수득하였다. 마지막으로, 디페닐 술피드를 촉매 독으로서 사용하여 화학선택적으로 수소화시켜¹² 알데히드 (47b) 및 (47e)를 고 수율로 수득하였다. 반응식 A3c에 나타낸 바와 같이, 히드라지드 각각 (46a-i)을 촉매 HCl의 존재하에 알데히드 각각 (47a-e)과 축합시켜 PAC-1 유도체 (1- 45)를 수득하고, 이의 구조는 표 1에 제시하였다 (또한, 도 3 및 4 참조).

<표 1> PAC-1 유사체의 구조, 실험 데이터, 및 예측된 logBB 값.

PAC-1 유사체의 평가. 합성을 완료한 후, 화합물의 생물학적 활성을 평가하였다. 먼저, 배양액에서 U-937 세포에 대한 화합물의 72시간 IC₅₀ 값을 결정하였다 (표 1). 고무적으로, 화합물 각각은 이러한 조건 하에 용량-의존성 세포 사멸을 유도하는 것으로 밝혀졌고, 대부분의 화합물은 대략 PAC-1 및 S-PAC-1 만큼 강력하였다.

그 다음, 화합물의 대사 안정성을 래트 간 마이크로솜에서 평가하였다. 화합물을 10 μM에서 3시간 동안 평가하였고, 대사산물을 LC/MS에 의해 관찰하였다. 이 검정의 결과를 표 1에 나타냈다. 벤조일 치환기를 함유한 화합물은 벤질 기를 함유하는 유사한 화합물보다 상당히 더 안정하였다. 예상외로, 프로필-함유 화합물이 알릴-함유 화합물보다 덜 안정하였지만, 디히드록실화 대사산물은 프로필 화합물을 사용한 경우에는 관찰되지 않았다. 또한, S-PAC-1은, 화합물의 짧은 생체내 반감기에도 불구하고, 간 마이크로솜에서 상당히 안정적이었는데, 이는 다른 클리어런스(clearance) 메카니즘이 신체로부터 S-PAC-1의 제거에서 더 큰 역할을 한다는 것을 시사한다.

마지막으로, 예측된 logBB 값을 각각의 화합물에 대해 계산하였다. 극 표면적 및 ClogP를 포함하는 이러한 알고리즘을 사용하여, 혈액 뇌 장벽 (BBB)을 관통하는 소분자의 투과성을 예측한다.¹³ 더 양성의 logBB 값을 갖는 화합물은 더 높은 뇌중 농도를 가질 것이며, 한편 더 음성의 logBB 값을 갖는 화합물은 더 높은 혈중 농도를 가질 것이다. 결과는 표 1에 나타냈다. 예상된 바와 같이, 더 소수성의 치환기를 함유하는 화합물은 더 극성의 치환기를 함유하는 화합물보다 BBB를 보다 현저히 관통하는 것으로 예측된다.

생체내 독성의 평가. 개선된 허용성을 갖는 화합물을 확인하는 것을 목표로, 45개 PAC-1 유사체 중 32개를 마우스에서 평가하였다. 독성 연구의 결과를 표 1에 나타냈다. 독성의 수준을 0 (어떤 관찰가능한 유해 효과도 없음) 내지 3 (심한 독성, 거의 치명적)의 등급으로 등급화하였다. 많은 화합물이 마우스에 치명적이었는데, 그 이유는 처리 24시간 이내에 또는 72시간 초과 처리 후 마우스가 사망하였기 때문이며; 이들 결과가 또한 주목된다.

인용 문헌.

정의

본원에서 사용된 바와 같이, 언급된 용어는 다음 의미를 갖는다. 본 명세서에서 사용된 모든 다른 용어 및 문구는 통상의 기술자가 이해하는 바와 같은 그의 통상적인 의미를 갖는다. 이러한 통상적인 의미는 기술 사전, 예컨대 문헌 [Hawley's Condensed Chemical Dictionary 14^th Edition, by R.J. Lewis, John Wiley & Sons, New York, N.Y., 2001]을 참조로 얻을 수 있다.

명세서에서 "한 실시양태", "실시양태" 등의 언급은 기재된 실시양태가 특정 측면, 특징, 구조, 모이어티, 또는 특성을 포함할 수 있음을 나타내지만, 모든 실시양태가 반드시 그 측면, 특징, 구조, 모이어티, 또는 특성을 포함하는 것은 아니다. 또한, 이러한 문구는 명세서의 다른 부분에서 언급되는 동일한 실시양태를 지칭할 수 있지만, 반드시 그런 것은 아니다. 또한, 특정 측면, 특징, 구조, 모이어티, 또는 특성이 실시양태와 관련하여 설명될 때, 명시적으로 설명되었는지 여부와 상관없이, 상기 측면, 특징, 구조, 모이어티, 또는 특성에 영향을 주거나 다른 실시양태와 결부시키는 것은 통상의 기술자의 지식 범위 내에 있다.

단수 형태는 문맥상 명백하게 달리 나타내지 않으면 복수 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "화합물"의 언급은 복수개의 상기 화합물을 포함하고, 따라서 화합물 X는 복수개의 화합물 X를 포함한다. 또한, 청구항은 임의의 선택적인 요소를 배제하도록 작성될 수 있다는 점에 유의한다. 따라서, 상기 언급은 청구항 요소의 인용 또는 "부정적" 한정의 사용과 관련하여, 배타적인 용어, 예컨대 "유일하게", "단지" 등의 사용을 위한 선행 기초로서 기능하는 것으로 의도된다.

용어 "및/또는"은 이 용어가 연관되는 항목 중의 임의의 하나, 항목의 임의의 조합, 또는 모든 항목을 의미한다. 문구 "하나 이상"은, 특히 그의 사용 문맥을 통해 통상의 기술자에 의해 쉽게 이해된다. 예를 들어, 페닐 고리 상의 하나 이상의 치환기는, 예를 들어 페닐 고리가 이치환될 경우 1 내지 5, 또는 1 내지 4개를 지칭한다.

용어 "약"은 특정된 값의 ±5%, ±10%, ±20%, 또는 ±25%의 변화를 지칭할 수 있다. 예를 들어, "약 50" 퍼센트는 일부 실시양태에서 45 내지 55 퍼센트의 변화를 포함한다. 정수 범위에 대해, 용어 "약"은 범위의 각 말단에서 언급된 정수보다 1 또는 2 정수 초과 및/또는 미만을 포함할 수 있다. 본원에서 달리 나타내지 않으면, 용어 "약"은 개별적인 성분, 조성물, 또는 실시양태의 기능성의 측면에서 동등한, 언급된 범위에 근접한 값, 예를 들어 중량 퍼센트를 포함하고자 의도된다.

통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 성분의 양, 특성, 예컨대 분자량, 반응 조건 등을 표현하는 것을 포함하는 모든 수치는 근사치이고, 모든 예에서 용어 "약"에 의해 임의로 변형되는 것으로 이해된다. 이들 값은 본원의 설명의 교시내용을 이용하여 통상의 기술자가 얻고자 하는 목적하는 특성에 따라 변할 수 있다. 또한, 상기 값은 본질적으로 그 각각의 시험 측정에서 발견되는 표준 편차에 의해 반드시 발생하는 가변성을 함유하는 것이 이해된다.

통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 임의의 및 모든 목적을 위해, 특히 상세한 설명을 제공하는 측면에서, 본원에 언급된 모든 범위는 또한 임의의 및 모든 가능한 하위-범위 및 그의 하위-범위의 조합뿐만 아니라, 범위를 이루는 개별적인 값, 특히 정수 값을 포함한다. 언급된 범위 (예를 들어, 중량 퍼센트 또는 탄소 군)는 범위 내의 각각의 구체적인 값, 정수, 소수 또는 아이덴터티를 포함한다. 임의의 나열된 범위는 동일한 범위를 적어도 동일한 1/2, 1/3, 1/4, 1/5 또는 1/10로 나눠지는 것을 충분히 설명하고 이와 같이 나눌 수 있음을 쉽게 알 수 있다. 비-제한적인 예로서, 본원에 논의된 각각의 범위는 하위 1/3, 중간 1/3 및 상위 1/3 등으로 쉽게 나눌 수 있다. 또한, 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, "까지", "적어도", "초과", "미만", "초과", "또는 그 초과의" 등과 같은 모든 용어는 언급된 수치를 포함하고, 상기 용어는 후속적으로 상기 논의된 바와 같이 하위-범위로 나눌 수 있는 범위를 지칭한다. 동일한 방식으로, 본원에 언급된 모든 비율은 또한 보다 넓은 비율 내에 포함되는 모든 하위-비율을 포함한다. 따라서, 라디칼, 치환기, 및 범위에 대해 언급된 구체적인 값은 단지 예시를 위한 것이고; 다른 규정된 값 또는 라디칼 및 치환기에 대해 규정된 범위 내의 다른 값을 배제하지 않는다.

통상의 기술자는 또한 구성원이 통상적인 방식, 예컨대 마쿠쉬(Markush) 군으로 분류될 경우, 본 발명이 전체적으로 나열된 전체 군뿐만 아니라 개별적으로 군의 각각의 구성원 및 주요 군의 모든 가능한 하위군도 포함함을 쉽게 알 것이다. 추가로, 모든 목적을 위해, 본 발명은 주요 군뿐만 아니라 하나 이상의 군 구성원이 없는 주요 군도 포함한다. 본 발명은 따라서 언급된 군의 임의의 하나 이상의 구성원의 명백한 배제를 고려한다. 따라서, 단서 조항이 임의의 개시된 범주 또는 실시양태에 적용될 수 있고, 이로 인해 임의의 하나 이상의 언급된 요소, 종, 또는 실시양태는, 예를 들어, 명백한 부정적 한정에서 사용되는 바와 같이 상기 범주 또는 실시양태로부터 제외될 수 있다.

용어 "접촉하는"은 예를 들어 용액에서, 반응 혼합물에서, 시험관내에서, 또는 생체내에서, 예를 들어 생리학적 반응, 화학적 반응, 또는 물리적 변화를 유발하기 위해 세포 또는 분자 수준을 비롯한 터치, 접촉 또는 인접한 또는 가까운 근접 유발 행위를 지칭한다.

"유효량"은 질환, 장애, 및/또는 상태를 치료하기 위해, 또는 언급되는 효과, 예컨대 활성화 또는 억제를 유도하는데 효과적인 양을 지칭한다. 예를 들어, 유효량은 치료되는 상태 또는 증상의 진행 또는 중증도를 감소시키는데 효과적인 양일 수 있다. 치료 유효량의 결정은 통상의 기술자의 능력으로 잘 실시될 수 있다. 용어 "유효량"은 예를 들어 숙주에서 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에, 또는 질환 또는 장애의 증상 치료에 효과적인 본원에 기재된 화합물의 양, 또는 본원에 기재된 화합물의 조합물의 양을 포함하고자 의도된다. 따라서, "유효량"은 일반적으로 목적하는 효과를 제공하는 양을 의미한다. 한 실시양태에서, 유효량은 성장 또는 증식을 억제할 때, 과다증식 세포의 사멸을 유도하거나 성장을 방지할 때, 세포 또는 대상체, 예를 들어 환자에게 단독으로 또는 제약상 담체와 조합하여 단일 또는 다중 용량의 투여시에 효과적인 본원에 기재된 활성제의 양을 지칭한다. 상기 성장 방지 또는 사멸은 상기 처리의 부재시에 예상되는 것을 초과하는 대상체, 예를 들어 환자의 생존 연장, 또는 상기 처리의 부재시에 비해 대상체의 예후의 임의의 개선으로서 반영될 수 있다.

용어 "치료하는", "치료하다" 및 "치료"는 (i) 질환, 병리학적 또는 의학적 상태의 발생 방지 (예를 들어, 예방); (ii) 질환, 병리학적 또는 의학적 상태의 억제 또는 그의 발달 정지; (iii) 질환, 병리학적 또는 의학적 상태의 경감; 및/또는 (iv) 질환, 병리학적 또는 의학적 상태와 연관된 증상의 완화를 포함한다. 따라서, 용어 "치료하다", "치료", 및 "치료하는"은 예방으로 확장될 수 있고, 치료되는 상태 또는 증상의 진행 또는 중증도의 방지 (방지하다, 방지하는), 억제, 저하, 중지 또는 역전을 포함할 수 있다. 따라서, 용어 "치료"는 적절한 경우 의료적, 치료적, 및/또는 예방적 투여를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 용어 "치료", "치료하다" 또는 "치료되는"은 (i) 종양 성장 또는 종양 재성장의 방지 (예방), (ii) 관심 증상 또는 질환의 감소 또는 제거 (치료) 또는 (iii) 종양의 제거 또는 파괴 (치유)를 의미할 수 있다.

용어 "억제하다", "억제하는", 및 "억제"는 질환, 감염, 상태, 또는 세포의 집단의 성장 또는 진행의 둔화, 정지 또는 역전을 지칭한다. 억제는 예를 들어 치료 또는 접촉의 부재시에 발생하는 성장 또는 진행에 비해 약 20%, 40%, 60%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 초과일 수 있다. 추가로, 용어 "유도하다", "억제하다", "강화하다", "상승시키다", "증가시키다", "감소시키다" 등은 두 상태 사이의 정량적 차이를 나타내고, 두 상태 사이의 적어도 통계적으로 유의한 차이를 의미한다. 예를 들어, "과다증식 세포의 성장 억제에 효과적인 양"은 세포의 성장 속도가 일부 실시양태에서 미처리 세포와 적어도 통계적으로 유의하게 상이할 수 있음을 의미한다. 상기 용어는 본원에서, 예를 들어 증식 속도에 적용될 수 있다.

문구 과다증식 세포, 예를 들어 신생물성 세포의 "성장 또는 증식을 억제하는"은 그의 성장 및 전이의 둔화, 방해, 정지 또는 중지를 지칭하고, 반드시 신생물성 성장의 완전한 제거를 나타내지는 않는다.

용어 "암 세포"는 관련 기술분야에서 널리 이해되는 바와 같은 정의를 포함한다. 한 실시양태에서, 용어는 인간 또는 동물에서 암의 임상 상태에 한 원인이 될 수 있는 비정상적으로 조절된 세포를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 용어는 인체 또는 동물체 내에 또는 그로부터 유래된 배양된 세포주 또는 세포를 지칭할 수 있다. 암 세포는 관련 기술분야에 이해되고, 또한 본원에 기재된 바와 같은 다양한 분화된 세포, 조직, 또는 기관 유형일 수 있다.

따라서, 용어 "암"은 일반적으로 이상 세포의 제어되지 않은 성장에 의해 야기되는 임의의 100종 초과의 질환의 군을 지칭한다. 암은 고형 종양 및 림프종, 및 비-고형 암, 예컨대 백혈병의 형태를 취할 수 있다. 성숙시까지 재생되고, 이후에는 손상된 세포를 대체하기 위해 필요할 때만 재생되는 정상 세포와는 달리, 암 세포는 무한 성장 및 분열하고, 근처 세포를 밀어내고, 종국적으로 신체의 다른 부분까지 퍼질 수 있다.

본 발명은 암 및 암성 상태의 치료 방법을 제공한다. 용어 "암성 상태"는 세포가 비정상적인 상태로 존재하는 임의의 상태 또는 신속한 증식 또는 신생물을 특징으로 하는 상태를 지칭한다. 암성 상태는 본래 악성 또는 비-악성 (예를 들어 전암성 상태)일 수 있다. "암성 상태"를 추가로 설명하기 위해, 용어 "과다증식", "과형성성", "과형성", "악성", "신생물성" 및 "신생물"이 사용될 수 있다. 이들 용어는 교환가능하게 사용될 수 있고, 조직병리학적 유형, 침습 시기, 또는 암성 결정 (예를 들어 악성 및 비악성)과 무관하게, 모든 유형의 과다증식 성장, 과형성성 성장, 암성 성장 또는 종양 형성 과정, 전이성 조직 또는 악성으로 형질전환된 세포, 조직 또는 장기를 포함함을 의미한다.

용어 "신생물"은 정상 성장 제어에 대한 반응성의 상실을 야기하는 새로운 세포 성장, 예를 들어 신생물성 세포 성장을 지칭한다. "과형성물"은 비정상적으로 높은 성장 속도를 겪는 세포를 지칭한다. 그러나, 이들 용어는 문맥이 보여주는 것처럼 교환가능하게 사용될 수 있고, 일반적으로 비정상적인 세포 성장 속도를 경험하는 세포를 지칭한다. "신생물" 및 "과형성물"은 양성, 전암성, 상피내 암종, 악성, 고형 또는 비-고형일 수 있는 종양을 포함한다.

본원에 기재된 화합물은 뇌의 암을 치료하는데 특히 효과적인 것으로 밝혀졌다. 뇌의 암은 다형성 교모세포종 (GBM)을 포함한 교모세포종 및 핍지교종을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 암성 세포에 이환된 조직은 뇌 자체 (예를 들어, 두개골 또는 중추 척추관) 내에 또는 림프 조직, 혈관, 뇌신경, 뇌 외막 (수막), 두개, 뇌하수체, 또는 송과선 내에 있을 수 있다. 치료할 수 있는 특수한 형태의 뇌암은 성상세포종, 연골종, 연골육종, 척삭종, CNS (중추 신경계) 림프종, 두개인두종, 상의세포종, 신경절교종, 신경절신경종 (신경절세포종으로도 불림), 신경교종, 예를 들어 성상세포종, 핍지교종, 및 상의세포종, 혈관모세포종 (혈관 종양으로도 불림), 원시 신경외배엽 종양 (PNET), 예컨대 수모세포종, 수막종, 및 전정 슈반세포종 (이전에 청신경종/슈반세포종으로서 알려짐)을 포함한다.

본원에 기재된 화합물은 또한 신체의 다른 장기에서 기원하는 암으로부터 두개내 영역에 침범하는 전이성 종양을 치료하는데 사용할 수 있다. 이들 상태는 대개 속발성 뇌 종양으로 지칭된다. 본원에 기재된 화합물을 사용하여 치료할 수 있는 속발성 뇌 종양은 폐암, 유방암, 악성 흑색종, 신장암, 결장암, 및 다른 암종으로부터 기원하는 뇌의 전이성 종양을 포함한다.

본 발명의 범위 내에 포함되는 암성 상태의 다른 예는 신경모세포종 및 골원성 암종 (예를 들어, 골의 암 또는 골 내의 조직의 신생물성 성장)을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 본원에 기재된 화합물을 사용하여 치료할 수 있는 악성 원발성 골 종양의 예는 골육종, 연골육종, 유잉 육종, 섬유육종 등, 및 속발성 골 종양, 예컨대 유방, 폐, 및 전립선의 암종을 포함한, 다른 장기로부터 확산한 전이성 병변을 포함한다.

용어 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알케닐, 아릴, 아미노 기, 알콕시, 할로, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, 및 에스테르는, 미국 특허 공개 번호 2012/0040995 (헤르겐로터 등)에 기재된 바와 같은, 관련 기술분야에 잘 알려져 있고 그의 관련 기술분야에 인식된 정의를 갖는다.

예를 들어, 용어 "알킬"은 바람직하게는 1 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 모노라디칼 분지형 또는 비분지형 포화 탄화수소 쇄 및 3 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 1개 이상의 고리를 갖는 시클로알킬 기를 지칭한다. 짧은 알킬 기는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실 기 (그의 모든 이성질체 포함)를 포함한, 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 것이다. 긴 알킬 기는 8-22개의 탄소 원자를 갖는 것 및 바람직하게는 12-22개의 탄소 원자를 갖는 것뿐만 아니라 12-20개의 탄소 원자를 갖는 것 및 16-18개의 탄소 원자를 갖는 것이다.

따라서, 용어 "알킬"은 바람직하게는 1 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 모노라디칼 분지형 또는 비분지형 포화 탄화수소 쇄를 지칭할 수 있다. 짧은 알킬 기는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실 기 (그의 모든 이성질체 포함)를 포함한, 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 것이다. 긴 알킬 기는 12-22개의 탄소 원자를 갖는 것이다. 기는 말단 기 또는 가교 기일 수 있다.

알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클 기, 및 그의 시클릭 및/또는 불포화 형태는, 화학식 I의 R 기일 수 있고, 각각의 기는 임의로 치환될 수 있다. 따라서, 다양한 실시양태에서, 하기 치환기 중 어느 하나 이상은 본원에 기재된 기 또는 화학식의 R 기 (예를 들어, R¹, R², R², R¹⁰, R²⁰, R³⁰ 등)일 수 있다. 용어 "치환된"은 "치환된"을 사용한 표현에서 나타낸 기 상에서 1개 이상의 수소 원자가 "치환기"로 대체됨을 나타낸다. '1개 이상'에 의해 언급된 수는 치환기가 존재하는 모이어티 수로부터 명백할 것이다. 예를 들어, 1개 이상은, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6을 지칭할 수 있고; 일부 실시양태에서 1, 2, 또는 3을 지칭할 수 있고; 다른 실시양태에서 1 또는 2를 지칭할 수 있다. 치환기는 명시된 기의 선택 중 하나일 수 있거나, 통상의 기술자에게 공지된 적합한 기일 수 있되, 단, 치환된 원자의 정상 원자가는 초과되지 않고, 단, 치환은 안정한 화합물을 초래한다. 적합한 치환기 군은, 예를 들어, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 할로, 할로알킬, 히드록시, 히드록시알킬, 아릴, 아로일, (아릴)알킬 (예를 들어, 벤질 또는 페닐에틸), 헤테로아릴, 헤테로사이클, 시클로알킬, 알카노일, 알콕시카르보닐, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 트리플루오로메틸티오, 디플루오로메틸, 아실아미노, 니트로, 카르복시, 카르복시알킬, 케토, 티옥소, 알킬티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 헤테로사이클술피닐, 헤테로사이클술포닐, 포스페이트, 술페이트, 히드록실 아민, 히드록실 (알킬)아민, 및 시아노를 포함한다. 또한, 적합한 치환기 군은, 예를 들어, -X, -R, -O^-, -OR, -SR, -S^-, -NR₂, -NR₃, =NR, -CX₃, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO₂, =N₂, -N₃, -NC(=O)R, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -S(=O)₂O^-, -S(=O)₂OH, -S(=O)₂R, -OS(=O)₂OR, -S(=O)₂NR, -S(=O)R, -OP(=O)O₂RR, -P(=O)O₂RR, -P(=O)(O^-)₂, -P(=O)(OH)₂, -C(=O)R, -C(=O)X, -C(S)R, -C(O)OR, -C(O)O^-, -C(S)OR, -C(O)SR, -C(S)SR, -C(O)NRR, -C(S)NRR, 또는 -C(NR)NRR일 수 있고, 여기서 각각의 X는 독립적으로 할로겐 ("할로"): F, Cl, Br, 또는 I이고; 각각의 R은 독립적으로 H, 알킬, 아릴, (아릴)알킬 (예를 들어, 벤질), 헤테로아릴, (헤테로아릴)알킬, 헤테로사이클, 헤테로사이클(알킬), 또는 보호 기일 수 있다. 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 치환기가 케토 (=O) 또는 티옥소 (=S) 등인 경우는, 치환된 원자 상의 2개의 수소 원자가 대체된다. 일부 실시양태에서, 상기 치환기 중 1개 이상은 치환된 기, 예컨대 본원에 기재된 기 또는 화학식의 R 기 (예를 들어, R¹, R², R², R¹⁰, R²⁰, R³⁰ 등) 상에 치환기에 관한 잠재적 가치의 기로부터 제외될 수 있다.

용어 "시클로알킬"은 단일 시클릭 고리 또는 다수의 축합 고리를 갖는 3 내지 22개의 탄소 원자의 시클릭 알킬 기를 지칭한다. 시클로알킬 기는 3-8원 고리를 갖는 것 및 5 및 6원 고리를 갖는 것을 포함한다. 시클로알킬 기는, 예로서, 단일 고리 구조, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로옥틸 등, 또는 다수의 고리 구조, 예컨대 아다만타닐 등을 포함한다.

용어 "알케닐"은 바람직하게는 2 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 분지형 또는 비분지형 불포화 탄화수소 기의 모노라디칼 및 3 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 1개 이상의 고리를 갖고, 여기서 적어도 1개의 고리는 이중 결합을 함유하는 것인, 시클로알케닐 기를 지칭한다. 알케닐 기는 접합될 수 있는 1개 이상의 이중 결합 (C=C)을 함유할 수 있다. 바람직한 알케닐 기는 1 또는 2개의 이중 결합을 갖는 것이다. 짧은 알케닐 기는 에틸렌 (비닐) 프로필렌, 부틸렌, 펜틸렌 및 헥실렌 기 (그의 모든 이성질체 포함)를 포함한, 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 것이다. 긴 알케닐 기는 8-22개의 탄소 원자를 갖는 것 및 바람직하게는 12-22개의 탄소 원자를 갖는 것뿐만 아니라, 12-20개의 탄소 원자를 갖는 것 및 16-18개의 탄소 원자를 갖는 것이다. 용어 "시클로알케닐"은 단일 시클릭 고리 또는 다수의 축합 고리를 갖는 3 내지 22개의 탄소 원자의 시클릭 알케닐 기를 지칭하며, 여기서 적어도 1개의 고리는 이중 결합 (C=C)을 함유한다. 시클로알케닐 기는, 예로서, 단일 고리 구조, 예컨대 시클로프로페닐, 시클로부테닐, 시클로펜테닐, 시클로옥테닐, 시클로옥타디에닐 및 시클로옥타트리에닐을 포함한다. 용어 알릴은 알케닐 기 -CH₂-CH=CH₂를 지칭한다.

용어 "알키닐"은 바람직하게는 2 내지 22개의 탄소 원자를 갖고 1개 이상의 삼중 결합 (C≡C)을 갖는 불포화 탄화수소의 모노라디칼을 지칭한다. 알키닐 기는 에티닐, 프로파르길 등을 포함한다. 짧은 알키닐 기는 2 내지 6개의 탄소 원자 (그의 모든 이성질체 포함)를 갖는 것이다. 긴 알키닐 기는 8-22개의 탄소 원자를 갖는 것 및 바람직하게는 12-22개의 탄소 원자를 갖는 것뿐만 아니라, 12-20개의 탄소 원자를 갖는 것 및 16-18개의 탄소 원자를 갖는 것이다.

용어 "아릴"은 단일 고리 (예를 들어, 페닐), 1개 이상의 고리 (예를 들어, 비페닐) 또는 다수의 축합 (융합) 고리를 갖는 6 내지 22개의 탄소 원자의 불포화 방향족 카르보시클릭 기를 함유하는 기를 지칭하며, 여기서 적어도 1개의 고리는 방향족 (예를 들어, 나프틸, 디히드로페난트레닐, 플루오레닐, 또는 안트릴)이다. 아릴은 페닐, 나프틸 등을 포함한다. 아릴 기는 불포화 방향족 고리(들) 이외에도 알킬, 알케닐 또는 알키닐인 부분을 함유할 수 있다. 용어 "알크아릴"은 알킬 부분을 함유하는 아릴 기, 즉, -알킬렌-아릴, 및 -치환된 알킬렌-아릴을 지칭한다. 이러한 알크아릴 기는 벤질 (-CH₂-페닐), 페네틸 등으로 예시된다.

알킬, 알케닐, 알키닐 및 아릴 기는 본원에 기재된 바와 같이 임의로 치환되고 (용어(들)는 치환된 변형을 포함할 수 있음), 기 내의 탄소 원자의 수 및 기의 불포화도에 따라 1-8개의 비-수소 치환기를 함유할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 모든 이러한 가변기는 비치환 (여기서 수소일 수 있는 임의의 가변기는 수소임)되거나, 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘을 포함한 할로겐, C1-C3 할로알킬, 히드록실 (OH), 티올 (HS-), C1-C6 알킬, C1-C3 알킬, C1-C6 알콕시, C1-C3 알콕시, 페닐, 벤질, 알케닐, C2-C4 알케닐, 알키닐, C2-C4 알키닐, -NH₂, -NR'H, -NR'R", R'CO-, R'R"NCO-, R'CO-NH-, 또는 R'CO-NR'- (여기서 R' 및 R"는 C1-C6 알킬, C1-C3 알킬 또는 페닐임)로부터 선택된 1개 이상의 비-수소 치환기로 치환될 수 있다.

용어 "아미노"는 기 -NH₂ 또는 기-NR'R"를 지칭하고, 여기서 각각의 R' 및 R"는 독립적으로 수소, 알킬 또는 아릴 기로 이루어진 군으로부터 선택된다.

"할로알킬"은 동일하거나 상이할 수 있는, 본원에 정의된 바와 같은 1개 이상의 할로 기에 의해 치환된 본원에 정의된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 대표적 할로알킬 기는, 예로서, 트리플루오로메틸, 3-플루오로도데실, 12,12,12-트리플루오로도데실, 2-브로모옥틸, 3-브로모-6-클로로헵틸 등을 포함한다.

용어 "헤테로아릴"은 적어도 1개의 고리 내에 (1개 초과의 고리가 존재하는 경우) 산소, 질소 및 황으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 2 내지 22개의 탄소 원자의 방향족 기를 지칭한다. 헤테로아릴 기는 임의로 치환될 수 있다. 헤테로아릴 기는 그 중에서도 5 및 6-원 고리를 갖는 것 및 고리 내에 1 또는 2개의 질소를 갖는 것, 고리 내에 1 또는 2개의 산소를 갖는 것뿐만 아니라 고리 내에 1 또는 2개의 황을 갖는 것을 포함한다

용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로시클릭"은 2-22개의 탄소 원자, 및 적어도 1개의 고리 내에 질소, 황, 인, 및/또는 산소로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자의 단일 고리 또는 다수의 축합 고리를 갖는 모노라디칼 포화 또는 불포화 기를 지칭한다. 헤테로시클릭 기는 치환될 수 있다. 고리는 바람직하게는 3-10개 구성원, 더 구체적으로 5 또는 6개 구성원을 갖는다.

용어 "에스테르"는 관련 기술분야에 이해되는 바와 같은 화학 물질을 지칭하고 특히 형태 (RCO-)의 기를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물은 개시된 화합물의 치환으로 인한 모든 신규 입체화학적 이성질체를 포함한다.

제약 제제

본원에 기재된 화합물은 치료적 제약 조성물을 제조하는데 사용될 수 있다. 화합물은 염 또는 용매화물의 형태로 조성물에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 화합물이 안정한 비독성 산 또는 염기 염을 형성하기에 충분히 염기성 또는 산성인 경우에, 염으로서의 화합물의 투여가 적절할 수 있다. 제약상 허용되는 염의 예는 생리학상 허용되는 음이온을 형성하는 산과 함께 형성되는 유기산 부가염, 예를 들어 토실레이트, 메탄술포네이트, 아세테이트, 시트레이트, 말로네이트, 타르트레이트, 숙시네이트, 벤조에이트, 아스코르베이트, α-케토글루타레이트, 및 β-글리세로포스페이트이다. 또한, 히드로클로라이드, 할라이드, 술페이트, 니트레이트, 비카르보네이트, 및 카르보네이트 염을 포함하는 적합한 무기염이 형성될 수 있다.

제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 잘 알려진 표준 절차를 사용하여, 예를 들어 충분히 염기성인 화합물, 예컨대 아민을 적합한 산과 반응시켜 생리학상 허용되는 이온성 화합물을 제공함으로써 얻을 수 있다. 또한, 카르복실산의 알칼리 금속 (예를 들어, 나트륨, 칼륨 또는 리튬) 또는 알칼리 토금속 (예를 들어, 칼슘) 염이 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.

본원에 기재된 화학식의 화합물은 제약 조성물로서 제제화되고, 포유동물 숙주, 예컨대 인간 환자에게 다양한 형태로 투여될 수 있다. 형태는 선택된 투여 경로, 예를 들어 경구 또는 비경구 투여, 정맥내, 근육내, 국소 또는 피하 경로에 특이적으로 조정될 수 있다.

본원에 기재된 화합물은 제약상 허용되는 비히클, 예컨대 불활성 희석제 또는 동화가능한, 식용 담체와 조합하여 전신 투여될 수 있다. 경구 투여를 위해, 화합물은 경질 또는 연질 외피 젤라틴 캡슐 내에 담기거나, 정제로 압축되거나, 환자 식이의 음식에 직접 혼입될 수 있다. 화합물은 또한 하나 이상의 부형제와 조합되고, 섭취가능 정제, 구강 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 상기 조성물 및 제제는 전형적으로 적어도 0.1%의 활성 화합물을 함유한다. 조성물 및 제제의 백분율은 다양할 수 있고, 편리하게는 제시된 단위 투여 형태의 중량의 약 2% 내지 약 60%일 수 있다. 상기 치료상 유용한 조성물 내의 활성 화합물의 양은 효과적인 투여량 수준이 얻어질 수 있도록 하는 양이다.

정제, 트로키, 환제, 캡슐 등은 또한 다음 중에서 하나 이상을 함유할 수 있다: 결합제, 예컨대 트라가칸트 검, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대 인산이칼슘; 붕해제, 예컨대 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산 등; 및 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘. 감미제, 예컨대 수크로스, 프룩토스, 락토스 또는 아스파르탐; 또는 향미제, 예컨대 페퍼민트, 윈터그린 오일, 또는 체리 향미제가 첨가될 수 있다. 단위 투여 형태가 캡슐일 때, 이것은 상기 유형의 물질 이외에, 액체 담체, 예컨대 식물성 오일 또는 폴리에틸렌 글리콜을 함유할 수 있다. 다양한 다른 물질이 코팅으로서 또는 고체 단위 투여 형태의 물리적 형태를 달리 변형시키기 위해 존재할 수 있다. 예를 들어, 정제, 환제, 또는 캡슐은 젤라틴, 왁스, 쉘락 또는 당 등으로 코팅될 수 있다. 시럽 또는 엘릭시르는 활성 화합물, 감미제로서 수크로스 또는 프룩토스, 보존제로서 메틸 및 프로필 파라벤, 염료 및 향미제, 예컨대 체리 또는 오렌지 향을 함유할 수 있다. 임의의 단위 투여 형태를 제조하는데 사용되는 임의의 물질은 사용된 양에서 제약상 허용되고 실질적으로 비-독성이어야 한다. 또한, 활성 화합물은 지속 방출 제제 및 장치 내에 혼입될 수 있다.

활성 화합물은 주입 또는 주사에 의해 정맥내로 또는 복강내로 투여될 수 있다. 활성 화합물 또는 그의 염의 용액은 임의로 비독성 계면활성제와 혼합된 물 내에 제조될 수 있다. 분산액은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 트리아세틴, 또는 이들의 혼합물 내에, 또는 제약상 허용되는 오일 내에 제조될 수 있다. 통상적인 저장 및 사용 조건 하에, 제제는 미생물의 성장을 방지하기 위해 보존제를 함유할 수 있다.

주사 또는 주입에 적합한 제약 투여 형태는 멸균 수용액, 분산액, 또는 임의로 리포솜 내에 캡슐화된, 멸균 주사가능 또는 주입가능 용액 또는 분산액의 즉석 제조에 적합화된 활성 성분을 포함하는 멸균 분말을 포함할 수 있다. 최종 투여 형태는 멸균 유체이며 제조 및 저장 조건 하에 안정하여야 한다. 액체 담체 또는 비히클은 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 식물성 오일, 비독성 글리세릴 에스테르, 및 이들의 적합한 혼합물을 포함하는 용매 또는 액체 분산액 매질일 수 있다. 적합한 유동성은 예를 들어 리포솜의 형성에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 또는 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티오메르살 등에 의해 일어날 수 있다. 많은 경우에, 등장제, 예를 들어 당, 완충제, 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능 조성물의 연장된 흡수는 흡수 지연제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및/또는 젤라틴에 의해 일어날 수 있다.

멸균 주사가능 용액은 요구되는 양의 활성 화합물을, 상기 나열된 다양한 다른 성분과 함께 적절한 용매 내에 혼입시킨 후, 필요한 경우, 필터 멸균함으로써 제조할 수 있다. 멸균 주사가능 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 제조 방법은 사전에 멸균-여과된 용액 내에 존재하는 활성 성분에 더하여 임의의 추가의 목적하는 성분의 분말을 생성하는, 진공 건조 및 동결 건조 기술을 포함할 수 있다.

국소 투여용으로, 화합물은 순수한 형태, 예를 들어, 화합물이 액체인 경우, 적용될 수 있다. 그러나, 일반적으로, 활성제를 예를 들어, 고체 또는 액체일 수 있는, 피부과적으로 허용되는 담체와 조합하여, 조성물 또는 제제로서 피부에 적용하는 것이 바람직할 것이다.

유용한 고체 담체는 미분 고체, 예컨대, 탈크, 점토, 미세결정질 셀룰로스, 실리카, 알루미나 등을 포함한다. 유용한 액체 담체는 물, 디메틸 술폭시드 (DMSO), 알콜, 글리콜, 또는 물-알콜/글리콜 블렌드를 포함하고, 여기서 화합물은, 임의로 비독성 계면활성제를 활용하여, 유효 수준에서 용해 또는 분산될 수 있다. 아주반트, 예컨대, 향료 및 추가의 항균제를 첨가하여 주어진 용도를 위한 특성을 최적화할 수 있다. 생성된 액체 조성물을 흡수성 패드로부터 적용하고, 사용하여 붕대 및 다른 드레싱에 스며들게 하거나, 펌프-형 또는 에어로졸 분무기를 사용하여 환부 상으로 분무할 수 있다.

증점제, 예컨대 합성 중합체, 지방산, 지방산 염 및 에스테르, 지방 알콜, 변형 셀룰로스, 또는 변형 무기 물질을 또한 액체 담체와 함께 사용하여 도포가능한 페이스트, 겔, 연고, 비누 등을, 사용자의 피부에 직접 적용하기 위해 형성시킬 수 있다.

활성제를 피부에 전달하기 위한 피부과용 조성물의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다; 예를 들어, 미국 특허 번호 4,992,478 (게리아(Geria)), 4,820,508 (워츠만(Wortzman)), 4,608,392 (쟈케트(Jacquet) 등), 및 4,559,157 (스미스(Smith) 등) 참조. 이러한 피부과용 조성물을 본원에 기재된 화합물과 조합하여 사용할 수 있고 여기서 이러한 조성물의 성분은 본원에 기재된 화합물에 의해 대체될 수 있거나, 본원에 기재된 화합물을 조성물에 첨가할 수 있다.

본원에 기재된 화합물의 유용한 투여량은 그들의 시험관내 활성, 및 동물 모델 내에서 생체내 활성을 비교함으로써 결정할 수 있다. 마우스, 및 다른 동물에서의 효과적인 투여량을 인간에게 외삽하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다; 예를 들어, 미국 특허 번호 4,938,949 (보치(Borch) 등) 참조. 치료에 사용하기 위해 필요한 화합물 또는 그의 활성 염 또는 유도체의 양은 선택된 특정 화합물 또는 염뿐만 아니라, 또한 투여 경로, 치료되는 상태의 특성, 및 환자의 연령 및 상태에 따라서도 변할 것이고, 최종적으로 담당 내과의 또는 임상의의 판단에 따라 결정될 것이다.

화합물은 예를 들어 단위 투여 형태당 5 내지 1000 mg/㎡, 편리하게는 10 내지 750 mg/㎡, 가장 편리하게는 50 내지 500 mg/㎡의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 편리하게 투여될 수 있다. 목적하는 용량은 편리하게는 단일 용량으로 또는 적절한 간격으로 투여되는 분할 용량으로서, 예를 들어 1일 2, 3, 4회 또는 그 초과의 하위-용량으로서 제시될 수 있다. 하위-용량 자체는 예를 들어 많은 별개의 느슨하게 이격된 투여로 추가로 나누어질 수 있다.

본원에 기재된 화합물은 효과적인 항-종양제이고, PAC-1에 비해 더 큰 효력 및/또는 감소된 독성을 가질 수 있다. 본 발명의 화합물은 PAC-1보다 더 강력하고 PAC-1보다 덜 독성일 수 있고/거나, PAC-1과 직면하는 이화 작용의 잠재 부위를 피할 수 있으며, 즉 본 발명의 화합물은 PAC-1과 상이한 대사 프로파일을 갖는다.

본 발명은 암을 갖는 포유동물에게 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 암을 치료하는 치료 방법을 제공한다. 포유동물은 영장류, 인간, 설치류, 개, 고양이, 소, 양, 말, 돼지, 염소, 소 등을 포함한다. 암은 임의의 다양한 유형의 악성 신생물, 예를 들어 결장암, 유방암, 흑색종 및 백혈병을 지칭하고, 일반적으로 바람직하지 않은 세포 증식, 예를 들어 비조절된 성장, 분화의 결여, 국소 조직 침습, 및 전이를 특징으로 한다.

암을 치료하는 본 발명의 화합물의 능력은 관련 기술분야에 잘 알려진 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 치료 프로토콜의 설계, 독성 평가, 데이터 분석, 종양 세포 사멸의 정량, 및 이식가능 종양 스크린의 사용의 생물학적 유의성이 공지되어 있다. 또한, 암을 치료하는 화합물의 능력은 하기에 기재된 바와 같은 시험을 이용하여 결정할 수 있다.

하기 실시예는 상기 발명을 예시하기 위한 것이고 그 범위를 축소하기 위한 것으로 해석되지 않아야 한다. 통상의 기술자는 실시예가 본 발명이 실행될 수 있는 많은 다른 방식을 제시함을 쉽게 알 것이다. 본 발명의 범위 내에 계속 포함되는 많은 변이 및 변형이 이루어질 수 있음이 이해되어야 한다.

실시예

실시예 1. PAC -1 유사체의 합성에 관한 일반 절차

16 × 150 mm 시험 튜브에 히드라지드 (1.7 당량), 알데히드 (1.0 당량), 2-에톡시에탄올 (1 mL), 및 1.2 M HCl (10 mol%)을 첨가하였다. 모든 알데히드가 반응할 때까지 (ESI-MS에 의해 모니터링된 바와 같이) 시험 튜브를 110℃에서 부치 신코어 병렬 합성기 상에서 진탕하였다. 반응 혼합물을 실온 (~23℃)으로 냉각하고, 폴리스티렌-벤즈알데히드 (3.5 당량)를 첨가하였다. 어떤 히드라지드도 남아있지 않을 때까지 (ESI-MS에 의해 모니터링된 바와 같이) 반응 혼합물을 25-80℃에서 진탕하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 수지를 여과하고 2-에톡시에탄올로 세척하였다. 여액을 고 진공하에 건조시켜 PAC-1 유사체를 수득하였다.

실시예 2. PAC -1 유사체의 병렬 합성

오븐-건조된 유리 용기에서 질소 또는 아르곤의 포지티브 분위기하에 무수 조건을 필요로 하는 반응을 수행하였다. 액체의 무수 첨가에 표준 시린지 기법을 사용하였다. 달리 언급이 없으면, 모든 출발 물질, 용매, 및 시약을 상업적 공급자로부터 획득하였고 추가 정제없이 사용하였다. 플래시 크로마토그래피를 230-400 메시 실리카겔을 사용하여 수행하였다. 화합물 (1{1}, 1{2}, 1{3}, 1{4}, 1{5}, 1{6}, 2{24}, 2{25}, 2{26}), 및 PAC-1을 이전에 보고된 바와 같이 합성하였다..

화합물 분석. ¹H-NMR 및 ¹³C-NMR 실험을 위한 내부 기준으로서 잔류 비중수소화된 용매, 및 ¹⁹F-NMR을 위한 외부 기준으로서 1% CFCl₃/CDCl₃를 사용하여 베리언 유니티(Varian Unity) 400 MHz 또는 500 MHz 분광계 상에서 CDCl₃ (시그마(Sigma), CD₃OD (시그마), 또는 (CD₃)₂CO (시그마) 중에서 NMR 실험을 기록하였다. 화학적 이동, δ (ppm); 결합 상수, J (Hz); 다중도 (s = 단일선, d = 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, m = 다중선, br = 넓음); 및 적분을 보고하였다. 고분해능 질량 스펙트럼 데이터를 일리노이 대학교 질량 분광측정 실험실에서 마이크로매스(Micromass) Q-Tof 울티마(Ultima) 하이브리드 사중극자/비행시간형 ESI 질량 분석계 상에서 기록하였다.

일반 절차 A: 1- 벤질피페라진의 합성. 무수 피페라진 (6.0 당량)을 THF (0.45 M 벤질 할라이드)에 현탁시켰다. 혼합물을 피페라진이 완전히 용해될 때까지 환류 가열하였다. 용해 직후, 치환된 벤질 할라이드 (1.0 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 백색 고체가 즉시 형성되었다. 반응 혼합물을 2.5시간 동안 환류 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하였다. 고체를 여과하고 THF 및 EtOAc로 세척하였다. 합해진 여액을 원래 부피의 10%로 농축하였다. KOH로 염기성 (pH > 12)으로 만든 5% 염수/H₂O가 있는 분별 깔대기에 농축물을 부었다. 수성 층을 DCM 및 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 합하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 순수한 1-벤질피페라진을 수득하였다.

일반 절차 B: 에틸 에스테르의 합성. 치환된 1-벤질피페라진 (1.0 당량)을 아세톤 (0.5 M)에 용해시키고, 클로로포름을 일부 반응 혼합물에 필요한 경우 첨가하여 1-벤질피페라진을 완전히 용해시켰다. NaHCO₃ (1.25 당량)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 그 다음, 에틸 클로로아세테이트 (1.1 당량)를 적가하였다. 반응 혼합물을 환류로 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하였다. 고체를 여과하고 아세톤으로 세척하였다. 여액을 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 순수한 에틸 에스테르를 수득하였다.

일반 절차 C: 히드라지드의 합성. 치환된 에틸 2-(4-벤질피페라진-1-일)아세테이트 (1.0 당량)를 EtOH (0.5 M)에 용해시켰다. 용액을 교반하고, 무수 히드라진 (3.0-4.0 당량)을 적가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축하였다. KOH로 염기성 (pH > 12)으로 만든 1:1 염수/H₂O를 함유하는 분별 깔대기에 농축물을 옮겼다. 수성 층을 DCM (3x) 및 EtOAc (1x)로 추출하였다. 합해진 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 또는 재결정화에 의해 정제하여 순수한 히드라지드를 수득하였다.

상응하는 1-벤조일피페라진을, 예를 들어, 본원에 기재되고 예시된 바와 같은 유사한 방법에 의해, 적절한 임의로 치환된 벤조일 할라이드 또는 벤조산, 및 아미드 형성 조건, 예컨대 아민 염기 (예를 들어, Et₃N) 또는 EDC-HCl 및 DMAP를 사용하여 제조할 수 있다.

다양한 유용한 제조 방법은 미국 특허 공개 번호 2011/0257398 (헤르겐로터 등), 2012/0040995 (헤르겐로터 등), 및 2013/0096133 (헤르겐로터 등)에 기재되어 있다. 본 발명은 또한 앞서 언급한 공개에 기재된 화합물에 관한 것이고, 여기서히드라지드 모이어티에 원위인 피페라진 질소가 메틸렌과 대향되는 바와 같은 카르보닐에 연결되어 있다.

반응식 B. 히드라지드의 합성을 위해 사용된 출발 물질.

일반 합성 절차 중 한 예를 하기에 기재하였다.

1-(4-( tert -부틸) 벤질 )피페라진 (5{20})

일반 절차 A에 따라 합성하였다: 4-tert-부틸벤질 브로마이드 (4{20}, 4.05 mL, 22.0 mmol, 1 당량), 피페라진(11.4 g, 132.1 mmol, 6 당량), THF (48.1 mL). 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피로 정제 (4:1 EtOAc:MeOH)하여 5{20} (3.75 g, 73%)를 베이지색 고체로서 수득하였다.

에틸 2-(4-(4-( tert -부틸) 벤질 )피페라진-1-일)아세테이트 (6{20})

일반 절차 B에 따라 합성하였다: 5{20} (3.46 g, 14.9 mmol, 1 당량), 에틸 클로로아세테이트 (1.8 mL, 16.4 mmol, 1.1 당량), NaHCO₃ (1.56 g, 18.6 mmol, 1.25 당량), 아세톤 (29.8 mL), 클로로포름 (10 mL). 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피로 정제 (1:1 헥산:EtOAc)하여 6{20} (4.25 g, 90%)을 오렌지색 오일로서 수득하였다.

2-(4-(4-( tert -부틸) 벤질 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (1{20})

일반 절차 C에 따라 합성하였다: 6{20} (4.12 g, 12.9 mmol, 1 당량), 무수 히드라진 (1.2 mL, 38.8 mmol, 3 당량), 에탄올 (26.0 mL). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (4:1 EtOAc:MeOH)하여 1{20} (3.36 g, 84%)을 베이지색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4-( tert -부틸) 벤질 )피페라진-1-일) 아 세토히드라지드 (3{20,24})

EtOH (2.2 mL, 0.15 M) 중 히드라지드 1{20} (100 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량) 및 알데히드 2{24} (53.5 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 1.2 M HCl (7 mol%)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 3{20,24} (102.0 mg, 0.23 mmol, 68.9%)을 담갈색 고체로서 수득하였다.

실시예 3. PAC -1의 유사체의 생물학적 평가

물질. 달리 명시되지 않는 한 모든 시약을 피셔(Fisher)로부터 입수하였다. 모든 완충제는 밀리큐(MilliQ) 정제수로 제조하였다. Ac-DEVD-pNA를 이전에 기재된 바와 같이 합성하였다.⁵ 루리아 브로쓰(Luria broth) (LB)를 EMD로부터 입수하였다. 독소루비신을 시그마로부터 입수하였다. 카스파제 활성 완충제는 50 mM HEPES, 300 mM NaCl, 1.5mM TCEP, 0.01% 트리톤(Triton)X-100을 함유하고 켈렉스(Chelex)® 처리되었다. Ni NTA 결합 완충제는 50 mM 트리스(Tris) (pH 8.0), 300 mM NaCl, 및 10 mM 이미다졸을 함유하였다. Ni NTA 세척 완충제는 50 mM 트리스 (pH 8.0), 300 mM NaCl, 및 50 mM 이미다졸을 함유하였다. Ni NTA 용리 완충제는 50 mM 트리스 (pH 8.0), 300 mM NaCl, 및 500 mM 이미다졸을 함유하였다. 아넥신 V 결합 완충제는 10 mM HEPES pH 7.4, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, 0.1% BSA를 함유하였다. C-말단 6xHis-태그부착된 프로카스파제-3 단백질은 하기 기재된 바와 같이 발현되었다.

세포 배양. U-937 세포는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)으로부터 입수하고 낮은 계대 수로 유지하였다. 배양액을 37℃ 및 5% CO₂에서 10% 소 태아 혈청 및 1% 페니실린-스트렙토마이신으로 보충된 RPMI 1640에 유지시켰다.

초기 스크린을 위한 세포 사멸 검정. 화합물 (2 μL의 10 mM DMSO 용액)을 최종 화합물 농도 20 μM에서 RPMI 1640 배지 (10% FBS) 중의 998 μL U-937 세포 (1×10⁶) 함유 웰에 한번에 직접 첨가하였다. 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션 후, 세포를 유세포 분석관에 옮기고, 세척하고, 아넥신 V 결합 완충제에 재현탁시켰다. 세포를 FITC-아넥신 V 및 프로피디움 아이오다이드로 이중 염색하고 적어도 10,000개 사례의 세포 집단을 LSR II 유세포 분석기에 의해 수집하였다. 생존 세포 백분율 (아넥신 V - 음성, 프로피디움 아이오다이드 - 음성)을 FCS 익스프레스(Express) 소프트웨어를 사용하여 결정하였다.

72시간 IC ₅₀ 세포 사멸 검정. U-937 인간 림프종 세포를 10% FBS 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(pen-strep)을 갖는 99 μL의 RPMI 1640 성장 배지에 웰 당15,000개 세포의 밀도로 96 웰 플레이트의 웰에 도말하였다. 각각의 웰에 다양한 농도로 DMSO 중의 1 μL의 화합물 스톡 용액을 첨가하여 세포가 0 μM 내지 100 μM 화합물의 농도로 처리되도록 하였다. 각각의 농도를 플레이트당 5중으로 시험하였다. 각각의 플레이트에서 5개 웰에 양성 사멸 대조군으로서 20 μM 독소루비신을 공급하고 5개 웰에 음성 대조군으로서 1 μL의 DMSO를 공급하였다. 그 다음, 플레이트를 72시간 동안 37℃ 및 5% CO2에서 인큐베이션하였다.

72시간 인큐베이션 기간 후에, 플레이트를 술포로다민 B 검정을 사용하여 분석하였다 (Vichai and Kirtikara, Nat Protoc 2006, 1, 1112-1116). 구체적으로, 플레이트의 각각의 웰에 H₂O 중 트리클로로아세트산의 50% (w/v) 용액 25 μL를 첨가하고 플레이트를 4℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 플레이트를 물로 5회 부드럽게 세척하였다. 플레이트를 공기 건조시킨 후 1% (v/v) 아세트산 용액 중 0.057% (w/v) 술로포다민 B 100 μL를 각각의 웰에 실온에서 30분 동안 첨가하였다. 플레이트를 1% (v/v) 아세트산으로 5회 부드럽게 세척하고 공기 건조시켰다. 200 μL의 10 mM 트리스 염기 (pH 10.4)를 각각의 웰에 건조시키고 플레이트를 30분 동안 오비탈 진탕기 상에 위치시켰다. SRB의 수준을 몰레큘라 디바이시즈(Molecular Devices) 플레이트 판독기 상에서, 여기 및 방출 파장 각각 488 및 585 nm에서 형광분석으로 정량화하고 세포 사멸 백분율을 계산하고 양성 대조군 (100% 세포 사멸) 및 음성 대조군 (0% 세포 사멸)에 대해 표준화하였다. 세포 사멸 퍼센트를 각각의 화합물 농도에 대해 평균을 내고 화합물 농도의 함수로서 플로팅하였다. 데이터를 테이블 곡선 2D를 사용하는 로지스틱 용량 반응 곡선에 근사시키고 IC₅₀ 값을 계산하였다. 실험을 3회 반복하고 계산된 IC₅₀ 값의 평균을 보고하였다. 평균의 표준 오차 (SEM)를 결정하고 3중 실험에 대해 보고하였다.

유효 화합물에 의한 아폽토시스의 유도. U-937 세포 (1 mL의 6 × 10⁵개 세포/mL)를 화합물의 750 μM DMSO 용액 10 μL로 처리하여 최종 농도 7.5 μM을 달성하였다. 세포를 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 세포를 원심분리를 통해 수거하고 (5분 동안 200 g), PBS (2 mL)로 세척하고, 450 μL 아넥신 V 결합 완충제에 재현탁시켰다. 각각의 샘플에 3.5 μL의 FITC 접합된 아넥신 V 균주 (서던 바이오테크(Southern Biotech)) 및 3.5 μL의 프로피디움 아이오다이드 (시그마)를 첨가하여 최종 농도 50 μg/mL가 되도록 하였다. 세포 집단을 벤톤 디킨슨(Benton Dickinson) LSR II 세포 유세포 분석기 상에서 분석하였다.

프로카스파제 -3의 재조합 발현 및 정제. 헤르겐로터 및 동료들로부터 개조된 기법 (Putt et al., Nat Chem Biol 2006, 2, 543-550). 로제타 이 콜라이(Rosetta E. coli) 함유 프로카스파제-3 (야생형) 발현 플라스미드의 밤새 배양의 20 mL 부피를 암피실린 함유 2 L의 LB 배지에 시딩하였다. 배양액을 OD600 = 1.0으로 성장시키고, 그 시점에서 단백질 발현을 IPTG의 첨가 (1 mM으로)를 통해 유도하였고; 배양액을 추가 30분 동안 성장시켰다. 그 다음, 세포를 수거하고 (10,000xg에서 10분 회전), NTA 결합 완충제 (300 mM NaCl, 50 mM 트리스, 10 mM 이미다졸, pH 8.0)에 재현탁시켰다. 세포를 초음파처리를 통해 얼음 상에서 용해시켰다. 그 다음, 세포 용해물을 35분 동안 35,000xg에서 회전시켰다. 상청액을 기울여 따르고 1 mL의 니켈-NTA 수지를 첨가하였다. 세포 용해물을 4℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 수지를 칼럼 상에 로딩하고, 10 mL NTA 결합 완충제, 이어서 10 mL NTA 세척 완충제 (300 mM NaCl, 50 mM 트리스, 50 mM 이미다졸, pH 8.0)로 세척하였다. 단백질을 0.5 mL 분획으로 10 mL의 NTA 용리 완충제 (300 mM NaCl, 50 mM 트리스, 500 mM 이미다졸, pH 8.0)로 용리시켰다. 단백질 함유 분획을 모으고 추가로 정제하여, 단백질을 켈렉스® 수지로 처리된 카스파제 활성 완충제로 충전된 PD-10 칼럼 (지이 헬스케어(GE Healthcare))에 적용함으로써 임의의 오염 아연을 제거하였다. 생성 농도는, 에델호크(Edelhoch) 방법 및 26150 M^{- 1} cm^-1의 프로카스파제-3의 몰 흡광계수를 사용하여 결정하였다. 단백질 스톡을 액체 질소에서 급속-동결시키고 -80℃에서 저장하였다.

프로카스파제 -3 활성 검정. 384-웰 플레이트에서 카스파제 활성 완충제 (50 mM HEPES, 300 mM NaCl, 1.5mM TCEP, 0.01% 트리톤X-100) 중의 재조합 발현된, 아연-무함유 프로카스파제-3 (야생형, 1 μM에서)을 3.5 μM ZnSO₄의 존재하에 37℃에서 인큐베이션하고 기초 활성을 Ac-DEVD-pNA를 첨가 (웰 중 최종 농도 200 μM)하여 평가하였다. 405 nm에서 흡광도를 스펙트라맥스(SpectraMax) 플레이트 판독기 (몰레큘라 디바이시즈)로 모니터링하였다. 기초 활성을 측정한 후, DMSO, PAC-1 및 유사체를 각각의 샘플에 첨가하여 최종 농도 25 μM이 되도록 하였다. 각각의 처리의 활성을 5분 동역학 판독을 통해 5, 20, 40 및 60분에서 평가하였다. 각각의 데이터 세트의 기울기를 사용하여 단백질의 활성을 결정하였다. 활성을 DMSO로 처리된 아연-억제 샘플 및 무아연 샘플을 사용하여 각각의 시점에서 활성 백분율로 표준화하였다.

실시예 4. 화합물 제조

물질 및 방법. 일반 오븐-건조된 유리 용기에서 질소 또는 아르곤의 포지티브 분위기하에 무수 조건을 필요로 하는 모든 반응을 수행하였다. 액체의 무수 첨가에 표준 시린지 기법을 사용하였다. 달리 언급이 없으면, 모든 출발 물질, 용매, 및 시약을 상업적 공급자로부터 획득하였고 추가 정제없이 사용하였다. 플래시 크로마토그래피를 230-400 메시 실리카겔을 사용하여 수행하였다. 46a,¹ 46b,² 46h,³ 47a,² 50,² PAC-1 (1),¹ 및 S-PAC-1 (2)²의 합성은 이전에 기재되었다.

화합물 분석. ¹H-NMR 및 ¹³C-NMR을 위한 내부 기준으로서 잔류 비중수소화 용매, 및 ¹⁹F-NMR을 위한 내부 기준으로서 C₆F₆를 사용하여 베리언 유니티 500 MHz 분광계 상에서 CDCl₃ (시그마 또는 켐브리지(Cambridge)), CD₃OD (시그마), 또는 (CD₃)₂CO (시그마 또는 켐브리지) 중에서 NMR 실험을 기록하였다. 화학적 이동, δ (ppm); 결합 상수, J (Hz); 다중도 (s = 단일선, d = 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, quint = 오중선, sext = 육중선, m = 다중선, br = 넓음); 및 적분을 보고하였다. 고분해능 질량 스펙트럼 데이터를 일리노이 대학교 질량 분광측정 실험실에서 마이크로매스 Q-Tof 울티마 하이브리드 사중극자/비행시간형 ESI 질량 분석계 또는 마이크로매스 70-VSE 상에서 기록하였다.

일반 절차 A: 디알킬화 피페라진의 합성. 둥근-바닥 플라스크에 벤질 할라이드 (1.0 당량), K₂CO₃ (3.0 당량), 및 아세톤 (0.2 M)을 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 50 (1.5 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하였다. 고체를 여과하고 아세톤으로 세척하였다. 여액을 농축하고, 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

일반 절차 B: 아미드의 합성. 오븐-건조된 둥근-바닥 플라스크에 50 (1.0 당량), 무수 테트라히드로푸란 (0.2 M), 및 새로 증류된 Et₃N (2.0 당량)을 첨가하였다. 용액을 N₂ 하에 0℃에서 교반하고, 벤조일 클로라이드 (1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N₂ 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고 포화 NaHCO₃ (2x), H₂O, 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

일반 절차 C: 히드라지드의 합성. 둥근-바닥 플라스크에 에틸 에스테르 (1.0 당량) 및 EtOH 또는 2:1 EtOH:MeOH (0.5 M)를 첨가하였다. 용액을 교반하고, 무수 히드라진 (4.0 당량)을 적가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축하였다. 생성 잔류물을 CH₂Cl₂/1:1 염수:0.1 M KOH 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 CH₂Cl₂ (2x)로 추출하였다. 합해진 유기 층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 또는 재결정화하여 순수한 히드라지드를 수득하였다.

에틸 2-(4- 벤조일피페라진 -1-일)아세테이트 (51c)

일반 절차 B에 따라 합성하였다: 50 (2.45 g, 14.2 mmol, 1.0 당량), 무수 테트라히드로푸란 (70 mL, 0.2 M), 새로 증류된 Et₃N (4.0 mL, 28.4 mmol, 2.0 당량), 벤조일 클로라이드 (54c, 2.0 g, 1.7 mL, 1.0 당량). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (50-100% EtOAc/헥산)하여 51c (2.87 g, 73.1%)를 담황색 오일로서 수득하였다.

2-(4- 벤조일피페라진 -1-일) 아세토히드라지드 (46c)

일반 절차 C에 따라 합성하였다: 51c (2.87 g, 10.4 mmol, 1.0 당량), 무수 히드라진 (1.31 mL, 41.6 mmol, 4.0 당량), EtOH (20 mL, 0.5 M). 추가 정제 없이 추출 후 46c (1.41 g, 51.5%)를 백색 고체로서 수득하였다.

에틸 2-(4-(4- 시아노벤질 )피페라진-1-일)아세테이트 (51d)

일반 절차 A에 따라 합성하였다: 4-(브로모메틸)벤조니트릴 (54d, 2.0 g, 10.2 mmol, 1.0 당량), 50 (2.64 g, 15.3 mmol, 1.5 당량), K₂CO₃ (4.22 g, 30.6 mmol, 3.0 당량), 아세톤 (50 mL, 0.2 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (50-100% EtOAc/헥산)하여 51d (2.71 g, 92.3%)를 황색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤질 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (46d)

일반 절차 C에 따라 합성하였다: 51d (2.71 g, 9.43 mmol, 1.0 당량), 무수 히드라진 (1.18 mL, 37.7 mmol, 4.0 당량), EtOH (19 mL, 0.5 M). 추가 정제없이 추출 후 46d (1.73 g, 67.1%)를 회백색 고체로서 수득하였다.

에틸 2-(4-(4- 시아노벤조일 )피페라진-1-일)아세테이트 (51e)

일반 절차 B에 따라 합성하였다: 50 (5.20 g, 30.2 mmol, 1.0 당량), 무수 테트라히드로푸란 (150 mL, 0.2 M), 새로 증류된 Et₃N (8.4 mL, 60.4 mmol, 2.0 당량), 4-시아노벤조일 클로라이드 (54e, 5.0 g, 30.2 mmol, 1.0 당량). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (0-10% MeOH/EtOAc)하여 51e (5.95 g, 65.4%)를 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤조일 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (46e)

언급된 바와 같이 변형하여 일반 절차 C에 따라 합성하였다: 51e (5.59 g, 18.6 mmol, 1.0 당량), 무수 히드라진 (2.4 mL, 74.4 mmol, 4.0 당량), EtOH (35 mL, 0.5 M). CH₂Cl₂로 추출 후, 수성 층을 EtOAc (3x)로 추출하였다. 추가 정제없이 추출 후 46e (2.98 g, 55.8%)를 회백색 고체로서 수득하였다.

에틸 2-(4-(4- 플루오로벤질 )피페라진-1-일)아세테이트 (51f)

일반 절차 A에 따라 합성하였다: 4-플루오로벤질 클로라이드 (54f, 2.5 g, 2.1 mL, 17.3 mmol, 1.0 당량), 50 (4.48 g, 26.0 mmol, 1.5 당량), K₂CO₃ (7.19 g, 52.0 mmol, 3.0 당량), 아세톤 (90 mL, 0.2 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 50-100% EtOAc/헥산)하여 51f (3.66 g, 75.4%)를 황색 오일로서 수득하였다.

2-(4-(4- 플루오로벤질 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (46f)

일반 절차 C에 따라 합성하였다: 51f (3.0 g, 10.7 mmol, 1.0 당량), 무수 히드라진 (1.4 mL, 42.8 mmol, 4.0 당량), EtOH (20 mL, 0.5 M). 추가 정제없이 추출 후 46f (2.59 g, 91.1%)를 백색 고체로서 수득하였다.

에틸 2-(4-(4- 플루오로벤조일 )피페라진-1-일)아세테이트 (51g)

일반 절차 B에 따라 합성하였다: 50 (2.58 g, 15.0 mmol, 1.0 당량), 무수 테트라히드로푸란 (30 mL, 0.5 M), 새로 증류된 Et₃N (4.2 mL, 30.0 mmol, 2.0 당량), 4-플루오로벤조일 클로라이드 (54g, 1.8 mL, 15.0 mmol, 1.0 당량). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (50-100% EtOAc/헥산)하여 51g (3.74 g, 84.7%)를 담황색 오일로서 수득하였다.

2-(4-(4- 플루오로벤조일 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (46g)

일반 절차 C에 따라 합성하였다: 51g (3.73 g, 12.7 mmol, 1.0 당량), 무수 히드라진 (1.6 mL, 50.8 mmol, 4.0 당량), EtOH (25 mL, 0.5 M). 추가 정제없이 추출 후 46g (2.28 g, 64.1%)를 백색 고체로서 수득하였다.

에틸 2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤조일 )피페라진-1-일)아세테이트 (51i)

일반 절차 B에 따라 합성하였다: 50 (2.58 g, 15.0 mmol, 1.0 당량), 무수 테트라히드로푸란 (30 mL, 0.5 M), 새로 증류된 Et₃N (4.2 mL, 30.0 mmol, 2.0 당량), 4-(트리플루오로메틸)벤조일 클로라이드 (54i, 2.2 mL, 15.0 mmol, 1.0 당량). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (50-100% EtOAc/헥산)하여 51i (4.01 g, 77.5%)를 황색 오일로서 수득하였다.

2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤조일 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (46i)

일반 절차 C에 따라 합성하였다: 51i (4.00 g, 11.6 mmol, 1.0 당량), 무수 히드라진 (1.5 mL, 46.4 mmol, 4.0 당량), EtOH (25 mL, 0.5 M). 추가 정제없이 추출 후 46i (2.35 g, 61.4%)를 백색 고체로서 수득하였다.

3- 프로필살리실알데히드 (47b)

둥근-바닥 플라스크에 알데히드 47a (1.62 g, 10.0 mmol, 1.0 당량), 5% Pd/C (324 mg, 20 wt%의 47a), 디페닐 술피드 (17 μL, 0.10 mmol, 0.010 당량), 및 EtOAc (40 mL, 0.25 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H₂의 분위기 (벌룬 압력) 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 EtOAc로 철저히 세척하였다. 여액을 농축하여 알데히드 47b (1.50 g, 91.7%)를 황색 오일로서 수득하였다.

2-( 알릴옥시 )-5- 플루오로벤즈알데히드 (53b)

둥근-바닥 플라스크에 5-플루오로살리실알데히드 (47c, 4.0 g, 28.5 mmol, 1.0 당량), 탄산칼륨 (4.92 g, 35.6 mmol, 1.25 당량), 및 DMF (20 mL)를 첨가하였다. 알릴 브로마이드 (3.7 mL, 42.8 mmol, 1.5 당량)를 혼합물에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 층을 물 (2 x 25 mL), 0.1M KOH (2 x 25 mL), 물 (2 x 25 mL), 및 염수 (2 x 25 mL)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 53b (4.64 g, 90.2%)를 담황색 액체로서 수득하였다.

3-알릴-5- 플루오로살리실알데히드 (47d)

53b (4.64 g, 25.8 mmol)를 200℃에서 밤새 그대로 가열하였다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (헥산)하여 47d (2.24 g, 48.3%)를 담황색 오일로서 수득하였다.

5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤즈알데히드 (47e)

둥근-바닥 플라스크에 알데히드 47d (1.10 g, 6.11 mmol, 1.0 당량), 5% Pd/C (220 mg, 20 wt%의 47d), 디페닐 술피드 (10 μL, 0.061 mmol, 0.010 당량), 및 EtOAc (25 mL, 0.25 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H₂의 분위기 (벌룬 압력)하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 EtOAc로 철저히 세척하였다. 여액을 농축하여 알데히드 47e (991 mg, 89.3%)를 황색 오일로서 수득하였다.

일반 절차 D: PAC-1 유사체의 합성

16 x 150 mm 시험 튜브에 히드라지드 (1.0 당량), 알데히드 (1.0 당량), EtOH 또는 2:1 MeOH:MeCN (0.15 M), 및 1.2 M HCl (7 mol%)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 부치 신코어 병렬 합성기 상에서 환류로 밤새 진탕하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 또는 재결정화에 의해 정제하여 순수한 PAC-1 유사체를 수득하였다.

N '-(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4- 벤조일피페라진 -1-일) 아세토히드라지드 (3)

둥근-바닥 플라스크에서를 제외하고는, 일반 절차 D에 따라 합성하였다: 46c (262 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 47a (162 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (58 μL, 0.070 mmol, 0.070 당량), EtOH (7 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 3 (284 mg, 69.8%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 시아노벤질 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (4)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: 46d (273 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 47a (162 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (58 μL, 0.070 mmol, 0.070 당량), EtOH (7 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 4 (367 mg, 87.7%)를 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 시아노벤조일 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (5)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: 46e (287 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 47a (162 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (58 μL, 0.070 mmol, 0.070 당량), EtOH (7 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 5 (378 mg, 87.6%)를 담황색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤질 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (6)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H11 (133 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47a (81 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)한 후 Et₂O로부터 침전시켜 6 (182 mg, 89.0%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N' -(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤조일 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (7)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H12 (140 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47a (81 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 7 (171 mg, 80.5%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤질 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (8)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H13 (158 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47a (81 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 8 (125 mg, 54.4%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (9)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H14 (165 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47a (81 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 9 (211 mg, 89.1%)를 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4- 벤질피페라진 -1-일)- N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 아세토히드라지 드 (10)

둥근-바닥 플라스크에서를 제외하고는, 일반 절차 D에 따라 합성하였다: 46a (248 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 47b (164 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (58 μL, 0.070 mmol, 0.070 당량), EtOH (7 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 10 (345 mg, 87.3%)을 회백색 고체로서 수득하였다.

4-((4-(2-(2-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 히드라지닐 )-2- 옥소에틸 )피페라진-1-일)메틸)벤젠술폰아미드 (11)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H2 (164 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47b (82 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), 2:1 MeOH:MeCN (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 11 (211 mg, 89.0%)을 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4- 벤조일피페라진 -1-일)- N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 아세토히드라 지드 (12)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H3 (131 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47b (82 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 50-100% EtOAc/헥산, 그 다음 5% MeOH/EtOAc)하여 12 (174 mg, 85.5%)를 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤질 )피페라진-1-일)- N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (13)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H9 (273 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 47b (164 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (58 μL, 0.070 mmol, 0.070 당량), EtOH (7 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 13 (373 mg, 88.8%)을 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤조일 )피페라진-1-일)- N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (14)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H10 (287 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 47b (164 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (58 μL, 0.070 mmol, 0.070 당량), EtOH (7 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 14 (377 mg, 86.9%)를 담황색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 플루오로벤질 )피페라진-1-일)- N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (15)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H11 (133 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47b (82 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)한 후 Et₂O로부터 침전시켜 15 (137 mg, 66.4%)를 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 플루오로벤조일 )피페라진-1-일)- N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )아세토히드라지드 (16)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H12 (140 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47b (82 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 16 (133 mg, 62.4%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤질 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (17)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H13 (158 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47b (82 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 17 (93.9 mg, 40.6%)을 황색 고체로서 수득하였다.

N '-(2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (18)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H14 (165 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47b (82 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 18 (216 mg, 90.8%)을 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4- 벤질피페라진 -1-일)- N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (19)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H1 (124 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 19 (173 mg, 93.7%)를 백색 고체로서 수득하였다.

4-((4-(2-(2-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 ) 히드라지닐 )-2- 옥소에틸 )피페라진-1-일)메틸)벤젠술폰아미드 (20)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H2 (164 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), 2:1 MeOH:MeCN (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 20 (172 mg, 82.1%)을 황색 고체로서 수득하였다.

2-(4- 벤조일피페라진 -1-일)- N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (21)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H3 (131 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 21 (157 mg, 81.6%)을 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤질 )피페라진-1-일)- N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (22)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H9 (137 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 22 (169 mg, 85.5%)를 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤조일 )피페라진-1-일)- N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )아세토히드라지드 (23)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H10 (144 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 23 (144 mg, 70.1%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤질 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (24)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H11 (133 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 24 (152 mg, 78.2%)를 담황색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (25)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H12 (140 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 25 (101 mg, 50.1%)를 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤질 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (26)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H13 (158 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 26 (194 mg, 88.6%)을 담황색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (27)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H14 (165 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47c (70 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 27 (173 mg, 76.5%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4- 벤질피페라진 -1-일) 아세토히드라지드 (28)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H1 (124 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 28 (186 mg, 90.8%)을 백색 고체로서 수득하였다.

4-((4-(2-(2-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 ) 히드라지닐 )-2- 옥소에틸 )피페라진-1-일)메틸)벤젠술폰아미드 (29)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H2 (164 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 29 (214 mg, 87.2%)를 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4- 벤조일피페라진 -1-일) 아세토히드라지드 (30)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H3 (131 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 30 (186 mg, 87.8%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 시아노벤질 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (31)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H9 (137 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 31 (164 mg, 75.3%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 시아노벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (32)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H10 (144 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 32 (196 mg, 87.2%)를 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤질 )피페라진-1-일) 아세토히드라지드 (33)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H11 (133 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 33 (176 mg, 82.0%)을 황색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (34)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H12 (140 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 34 (163 mg, 73.8%)를 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤질 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (35)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H13 (158 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 35 (176 mg, 73.7%)를 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(3-알릴-5- 플루오로 -2- 히드록시벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 ) 벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (36)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H14 (165 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47d (90 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 36 (139 mg, 56.3%)을 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4- 벤질피페라진 -1-일)- N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (37)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H1 (124 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 37 (174 mg, 84.6%)을 회백색 고체로서 수득하였다.

4-((4-(2-(2-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 히드라지닐 )-2- 옥소에틸 )피페라진-1-일)메틸)벤젠술폰아미드 (38)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H2 (164 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 38 (221 mg, 89.9%)을 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4- 벤조일피페라진 -1-일)- N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 ) 아세토히드라지드 (39)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H3 (131 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 39 (189 mg, 88.9%)를 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤질 )피페라진-1-일)- N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )아세토히드라지드 (40)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H9 (137 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-15% MeOH/EtOAc)하여 40 (180 mg, 82.1%)을 백색 고체로서 수득하였다.

2-(4-(4- 시아노벤조일 )피페라진-1-일)- N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )아세토히드라지드 (41)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H10 (144 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 41 (196 mg, 86.5%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤질 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (42)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H11 (133 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 42 (202 mg, 93.8%)를 황색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )-2-(4-(4- 플루오로벤조일 )피페라진-1-일)아세토히드라지드 (43)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H12 (140 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 43 (195 mg, 87.7%)을 백색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 )벤질)피페라진-1-일)아세토히드라지드 (44)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H13 (158 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-20% MeOH/EtOAc)하여 44 (184 mg, 76.5%)를 담황색 고체로서 수득하였다.

N '-(5- 플루오로 -2-히드록시-3- 프로필벤질리덴 )-2-(4-(4-( 트리플루오로메틸 )벤조일)피페라진-1-일)아세토히드라지드 (45)

일반 절차 D에 따라 합성하였다: H14 (165 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 47e (91 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량), 1.2 M HCl (29 μL, 0.035 mmol, 0.070 당량), EtOH (3 mL, 0.15 M). 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제 (구배, 0-10% MeOH/EtOAc)하여 45 (140 mg, 56.7%)를 백색 고체로서 수득하였다.

반응식 3.1: 다양한 히드라지드의 합성을 위해 사용된 출발 물질의 예.

실시예 3 인용문헌

실시예 5. 제약 투여 형태

다음 제제는 본원에 기재된 화학식의 화합물, 본원에 구체적으로 개시된 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물 (이하, '화합물 X'로 칭함)의 치료적 또는 예방적 투여를 위해 사용될 수 있는 대표적인 제약 투여 형태를 예시한다:

(i) 정제 1 mg /정제

'화합물 X' 100.0

락토오스 77.5

포비돈 15.0

크로스카르멜로스 소듐 12.0

미세결정질 셀룰로스 92.5

스테아르산마그네슘 3.0

300.0

(ii) 정제 2 mg /정제

'화합물 X' 20.0

미세결정질 셀룰로스 410.0

전분 50.0

소듐 전분 글리콜레이트 15.0

스테아르산마그네슘 5.0

500.0

(iii) 캡슐 mg /캡슐

'화합물 X' 10.0

콜로이드성 이산화규소 1.5

락토오스 465.5

예비젤라틴화 전분 120.0

스테아르산마그네슘 3.0

600.0

( iv) 주사제 1 ( 1 mg / mL) mg /mL

'화합물 X' (유리산 형태) 1.0

이염기성 인산나트륨 12.0

일염기성 인산나트륨 0.7

염화나트륨 4.5

1.0 N 수산화나트륨 용액 충분량

(7.0-7.5로 pH 조정)

주사용수 1 mL가 될 때까지 첨가되는 충분량

(v) 주사제 2 ( 10 mg / mL) mg /mL

'화합물 X' (유리산 형태) 10.0

일염기성 인산나트륨 0.3

이염기성 인산나트륨 1.1

폴리에틸렌 글리콜 400 200.0

0.1 N 수산화나트륨 용액 충분량

(7.0-7.5로 pH 조정)

주사용수 1 mL가 될 때까지 첨가되는 충분량

(vi) 에어로졸 mg /캔

'화합물 X' 20

올레산 10

트리클로로모노플루오로메탄 5,000

디클로로디플루오로메탄 10,000

디클로로테트라플루오로에탄 5,000

(vii) 국소 겔 1 wt . %

'화합물 X' 5%

카르보머 934 1.25%

트리에탄올아민 충분량

(5-7로 pH 조정)

메틸 파라벤 0.2%

정제수 100 g이 될 때까지의 충분량

(viii) 국소 겔 2 wt . %

'화합물 X' 5%

메틸셀룰로스 2%

메틸 파라벤 0.2%

프로필 파라벤 0.02%

정제수 100 g이 될 때까지의 충분량

(ix) 국소 연고 wt . %

'화합물 X' 5%

프로필렌 글리콜 1%

무수 연고 기재 40%

폴리소르베이트 80 2%

메틸 파라벤 0.2%

정제수 100 g이 될 때까지의 충분량

(x) 국소 크림 1 wt . %

'화합물 X' 5%

백랍 10%

액체 파라핀 30%

벤질 알콜 5%

정제수 100 g이 될 때까지의 충분량

(xi) 국소 크림 2 wt . %

'화합물 X' 5%

스테아르산 10%

글리세릴 모노스테아레이트 3%

폴리옥시에틸렌 스테아릴 에테르 3%

소르비톨 5%

이소프로필 팔미테이트 2%

메틸 파라벤 0.2%

정제수 100 g이 될 때까지의 충분량

이들 제제는 제약업계에 잘 알려진 통상적인 절차에 의해 제조될 수 있다. 상기 제약 조성물은 활성 성분 '화합물 X'의 상이한 양 및 유형을 수용하기 위해 주지된 제약 기술에 따라 변화될 수 있음이 이해될 것이다. 에어로졸 제제 (vi)은 계량된 용량 에어로졸 분배기와 함께 사용될 수 있다. 추가로, 구체적 성분 및 비율은 예시를 위한 것이다. 성분은 적합한 등가물로 교체될 수 있고 비율은 투여 형태의 목적하는 특성에 따라 변할 수 있다.

구체적 실시양태를 개시된 실시양태 및 실시예를 참조하여 설명하였지만, 이러한 실시양태는 단지 예시적인 것이고 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 아래 청구항에서 규정되는 바와 같이 그의 보다 넓은 측면에서 본 발명으로부터 벗어나지 않는 변화 및 변형이 관련 기술분야의 통상의 기술에 따라 이루어질 수 있다.

모든 간행물, 특허, 및 특허 문헌은 마치 개별적으로 참조로 포함되는 것처럼 본원에 참조로 포함된다. 본 개시내용과 모순되는 어떠한 제한도 그로부터 이해되지 않는다. 본 발명은 다양한 구체적이고 바람직한 실시양태 및 기술을 참조하여 설명되었다. 그러나, 본 발명의 취지 및 범위 내에 계속 포함되는 많은 변이 및 변형이 이루어질 수 있음이 이해되어야 한다.

Claims (16)

1. 하기 화학식 X의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물.
   <화학식 X>
   

   

   
   상기 식에서,
   R¹⁰은 H, F, Cl, Br, -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, 또는 -SO₂NH₂이고;
   R²⁰은 H, F, Cl, Br, -NO₂, -CN, -CF₃, -OCF₃, 또는 -SO₂NH₂이고;
   R³⁰은 H, (C₁-C₆)알킬, (C₂-C₆)알케닐, 또는 (C₁-C₆)알콕시이다.
2. 제1항에 있어서, R³⁰이 H, 프로필, 또는 2-프로페닐인 화합물.
3. 제1항에 있어서,
   

   

   인 화합물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 및 제약상 허용되는 희석제, 부형제, 또는 담체를 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물.
5. 제4항에 있어서, 상기 화합물이 암 세포의 사멸을 유도하는 것인 제약 조성물.
6. 유효량의 프로카스파제 활성화제 화합물을 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물이며, 여기서 상기 암은 프로카스파제 활성화제 화합물을 사용한 치료에 대한 감수성이 확인된 것이고, 상기 프로카스파제 활성화제 화합물은 제1항의 화합물인 제약 조성물.
7. 유효량의 제1항의 화합물을 포함하는, 암 세포에서 아폽토시스(apoptosis)를 유도하기 위한 제약 조성물.
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