BR112015002357B1 - Compostos e composições ativadores de enzimas - Google Patents

Abstract

COMPOSTOS E COMPOSIÇÕES ATIVADORES DE ENZIMAS. A invenção proporciona compostos e composições úteis para a modulação de certas enzimas. Os compostos e as composições podem induzir a morte celular, particularmente a morte de células de câncer. A invenção também proporciona métodos para a síntese e o uso dos compostos e das composições, incluindo o uso dos compostos e das composições em terapia para o tratamento de câncer e a indução seletiva de apoptose nas células.

Description

PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica prioridade sob 35 U.S.C. §119(e) ao Pedido de Patente Provisório U.S. No. 61/679.129, depositado em 3 de agosto de 2012, que é incorporado neste documento, por referência, em sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] A apoptose é um processo usado pelos organismos superiores para manter a homeostasia por remoção das células que estiverem em excesso, danificadas, ou forem potencialmente perigosas. As enzimas caspases são uma classe de cisteína proteases que clivam os substratos celulares após o reconhecimento das sequências com resíduos de aspartato C-terminais. A ativação das enzimas caspases é crítica para a apoptose. Existem duas vias apoptóticas principais, diferindo pelo fato de que o estímulo iniciador da apoptose é intracelular (via intrínseca) ou extracelular (via extrínseca). Estas vias convergem na clivagem da procaspase-3 para formar a caspase-3 ativa, a caspase- chave "executora" que catalisa a hidrólise de centenas de substratos proteicos, levando à morte celular.

[0003] Uma das características do câncer é a capacidade das células de câncer de escaparem da apoptose, permitindo a proliferação incontrolada. Como tal, a reativação da apoptose nas células com vias apoptóticas defeituosas é uma estratégia anticâncer promissora. Os compostos, tais como os agentes de interrupção p53-MDM2 (Nutlinas), os inibidores de Bcl-2 (ABT-737), e os inibidores de XIAP (SM-164), atuam, todos, diretamente sobre as proteínas da cascata apoptótica, induzindo a apoptose e levando à morte das células de câncer.

[0004] Complementar às estratégias descritas acima, a ativação direta da procaspase-3 com uma pequena molécula tem potencial para personalizar a terapia do câncer. Os níveis de procaspase-3 são elevados em certos cânceres, incluindo os linfomas, as leucemias, os melanomas, o câncer pancreático, os cânceres do fígado, os cânceres do pulmão, os cânceres de mama, e os cânceres do cólon. Devido aos níveis elevados de procaspase-3 nas células de câncer, a exigência da ativação da caspase-3 para a apoptose, e a posição à jusante relativa da procaspase-3 na cascata apoptótica, a indução da apoptose pela ativação direta da procaspase-3 está sendo ativamente explorada como uma estratégia anticâncer personalizada. Consequentemente, há uma necessidade por novos compostos que modulem a atividade da procaspase-3, particularmente compostos que ativem a procaspase-3 e que sejam metabolicamente estáveis o suficiente para serem terapias clínicas efetivas.

SUMÁRIO

[0005] O Composto Ativador de Procaspase 1 (PAC-1) é uma orto- hidróxi N-acil hidrazona que aumenta a atividade enzimática da procaspase-3 in vitro e induz a apoptose nas células de câncer. Um análogo do PAC-1, chamado S-PAC-1, foi avaliado em um ensaio clínico veterinário em cães de estimação com linfoma e verificado ter potencial considerável como um agente anticâncer. Com o objetivo de identificar compostos mais potentes nesta classe promissora de substâncias terapêuticas experimentais, criou-se uma biblioteca combinatória baseada no PAC-1, e os compostos foram avaliados quanto à sua capacidade de induzir a morte das células de câncer na cultura. Os compostos foram avaliados quanto à sua capacidade de induzir a apoptose nas células de câncer e quanto à sua estabilidade metabólica. Os compostos recentemente identificados podem proporcionar substâncias terapêuticas para o tratamento dos muitos cânceres que têm níveis elevados de expressão de procaspase-3.

hidrazidas aldeídos análogos de PAC-1

[0006] Foram descobertos compostos capazes de ativar as enzimas que são frequentemente superexpressas em sua forma inativa nas células de câncer. Os compostos podem induzir a morte celular programada (apoptose) nas células de câncer, incluindo as que tenham a procaspase-3 superregulada. Muitos cânceres resistem à quimioterapia padrão. Os compostos descritos neste documento podem tirar proveito dos alvos biológicos que podem ser superregulados nas células de câncer e, desse modo, podem ser efetivos mesmo nas células com defeitos em seu mecanismo apoptótico. Estes compostos podem também ser bem-sucedidos na terapia de câncer direcionada, matando seletivamente as células de câncer com reações adversas comparavelmente reduzidas nas células não cancerosas tendo níveis menores de procaspase-3. Estas reações adversas podem incluir toxicidade, particularmente neurotoxicidade.

[0007] Consequentemente, a invenção proporciona compostos do composto de Fórmula I:

em que R1 é uma benzoíla opcionalmente substituída, fenila, (aril)metileno, ou (aril)metino, em que o carbono do metino é opcionalmente substituído com fenila; n é 1, 2, 3, ou 4; e cada R2 é independentemente H, alquila, alcóxi, hidróxi, carbóxi, halo, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluormetila, trifluormetóxi, benzila, benzilóxi, nitro, ciano (-CN), sulfonamida (-SO2NH2), 2-propenila, acetileno, N-alquil-triazol, ou N-benzil-triazol; ou dois grupos R2 formam um grupo benzo orto-fundido; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou solvato.

[0008] Em algumas modalidades, R1 é benzoíla (Ph(C=O)-). Em outras modalidades, R1 é uma benzoíla substituída. O grupo benzoíla pode ser substituído com 1, 2, 3, ou 4 grupos R2. As variáveis R2 podem ser orto, meta, ou para, ou uma combinação deles, com a carbonila do grupo benzoíla.

[0009] Em algumas modalidades, n é 1 ou 2. Em outras modalidades, n é 3 ou 4. As variáveis R2 podem ser orto, meta, ou para com o grupo hidroxila da Fórmula I, ou uma combinação deles.

[00010] Em algumas modalidades, R2 é metila, t-butila, metóxi, hidróxi, flúor, cloro, bromo, iodo, amino, etilamino, dietilamino, trifluormetila, trifluormetóxi, benzila, benzilóxi, nitro, ciano, sulfonamida, 2-propenila, acetileno, N-metil-triazol, ou N-benzil-triazol. Em diversas modalidades, n é 2 e dois grupos R2 formam um grupo benzo orto- fundido. Em algumas modalidades, um substituinte sobre um grupo R1 fenila pode ser um substituinte R2. Em diversas modalidades, R2 pode independentemente ser um substituinte sobre um grupo R1 arila, incluindo um grupo benzoíla, e tais grupos podem ter um a cinco substituintes R2.

[00011] Em algumas modalidades, n é 2 e cada R2 é t-butila.

[00012] Em algumas modalidades, n é 1 e R2 é 2-propenila.

[00013] Em algumas modalidades, R1 é uma metóxi-benzila; dimetóxi-benzila; benzilóxi-benzila; t-butil-benzila; naftilmetileno; ou etil- benzila.

[00014] Em certas modalidades específicas, R1 é 4-metóxi-benzila; 2,5-dimetóxi-benzila; 4-benzilóxi-benzila; 4-t-butil-benzila; 2- naftilmetileno; ou 4-etil-benzila.

[00015] Em certas outras modalidades específicas, R1 é:

[00016] Em diversas modalidades específicas, o composto é um ou mais dos compostos 1-45 do Exemplo 4, um composto da Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou solvato. Em outras modalidades, o composto é um composto descrito aqui, em que o carbono do metileno unido ao nitrogênio da piperazina distal é substituído com um grupo oxo, por exemplo:

e similar, para cada composto descrito ou ilustrado neste documento sem um grupo oxo no carbono do metileno unido ao nitrogênio da piperazina distal. Por exemplo, em uma modalidade, o composto é um composto de Fórmula (X):

em que R10 é H, F, Cl, Br, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, ou -SO2NH2; R20 é H, F, Cl, Br, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, ou -SO2NH2; e R30 é H, (C1-C6)alquila, (C1-C6)alquenila, ou (C1-C6)alcóxi; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou solvato.

[00017] Em algumas modalidades, R10 é H.

[00018] Em algumas modalidades, R10 é F, Cl, ou Br.

[00019] Em algumas modalidades, R10 é -NO2 ou -CN.

[00020] Em algumas modalidades, R10 é -CF3, -OCF3, ou -SO2NH2.

[00021] Em algumas modalidades, R20 é H. Em algumas modalidades, R20 é F. Em algumas modalidades, R20 é H ou F.

[00022] Em algumas modalidades, R20 é F, Cl, ou Br.

[00023] Em algumas modalidades, R20 é -NO2 ou -CN.

[00024] Em algumas modalidades, R20 é -CF3, -OCF3, ou -SO2NH2.

[00025] Em algumas modalidades, R30 é H.

[00026] Em algumas modalidades, R30 é n-propila.

[00027] Em algumas modalidades, R30 é 2-propenila (alila).

[00028] Em algumas modalidades, R10 pode ser R1 conforme descrito acima, e vice-versa.

[00029] Em algumas modalidades, R20 pode ser R2 conforme descrito acima, e vice-versa.

[00030] Em algumas modalidades, R30 pode ser R3 conforme descrito acima, e vice-versa.

[00031] A invenção também proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto descrito neste documento e um diluente, excipiente, ou veículo farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o composto induz a morte das células de câncer em cultura.

[00032] A invenção adicionalmente proporciona um método de tratar uma célula de câncer compreendendo (a) identificar uma suscetibilidade ao tratamento de uma célula de câncer com um composto ativador de procaspase; e (b) expor uma célula de câncer a uma quantidade efetiva do composto ativador de procaspase; em que o composto ativador de procaspase é um composto descrito neste documento.

[00033] A invenção adicionalmente proporciona um método de induzir a apoptose em uma célula, compreendendo administrar a uma célula uma quantidade efetiva de um composto descrito neste documento.

[00034] Em algumas modalidades, a invenção proporciona compostos e métodos envolvendo concentrações efetivas, tais como cerca de 10 nM a cerca de 100 μM do composto ou fórmula. Em algumas modalidades, as concentrações efetivas são de cerca de 200 nM a cerca de 5 μM. Em outra modalidade, a concentração efetiva é um valor tal como uma concentração de atividade de 50% em um ensaio de ativação de procaspase direto, em um ensaio de indução da apoptose da célula, ou em uma avaliação terapêutica clínica de animal. Em outra modalidade, tal valor é menos do que cerca de 200 μM. Em diversas modalidades, o valor é menos do que cerca de 10 μM. Em diversas modalidades, um composto pode ter estabilidade metabólica significativa. Por exemplo, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90%, ou pelo menos cerca de 95% de uma amostra do composto podem permanecer após uma incubação de 3 horas em um ensaio da estabilidade dos microssomos de fígado.

[00035] A invenção, portanto, proporciona compostos, composições, e métodos de tratamento terapêutico. Em algumas modalidades, as invenções são aplicáveis no contexto de uma variedade de doenças de câncer e tipos de células de câncer, tais como mama, linfoma, adrenal, renal, melanoma, leucemia, neuroblastoma, pulmão, cérebro, entre outros.

[00036] A invenção proporciona os novos compostos descritos neste documento e os compostos das Fórmulas descritas neste documento, os intermediários para a síntese de tais compostos, bem como os métodos de preparar os compostos. A invenção também proporciona compostos que são úteis como intermediários para a síntese de outros compostos úteis.

[00037] A invenção também proporciona o uso das composições descritas neste documento para uso em terapia médica. A terapia médica pode ser tratar o câncer, por exemplo, linfomas, leucemias, melanomas, câncer pancreático, cânceres de fígado, cânceres de pulmão, cânceres de mama, e cânceres de cólon. A invenção também proporciona o uso de uma composição como descrita neste documento para a fabricação de um medicamento para tratar uma doença em um mamífero, por exemplo, câncer em um ser humano. O medicamento pode incluir um diluente, excipiente, ou veículo farmaceuticamente aceitável.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[00038] Os desenhos a seguir formam parte do relatório descritivo e estão incluídos para demonstrar adicionalmente certas modalidades ou diversos aspectos da invenção. Em algumas situações, as modalidades da invenção podem ser mais bem entendidas por referência aos desenhos em anexo em combinação com a descrição detalhada apresentada neste documento. A descrição e os desenhos em anexo podem destacar certo exemplo específico, ou certo aspecto da invenção. Entretanto, alguém versado na técnica entenderá que partes do exemplo ou do aspecto podem ser usadas em combinação com outros exemplos ou aspectos da invenção.

[00039] Figura 1. Hidrazidas usadas para construir uma biblioteca combinatória de análogos de PAC-1. Cada precursor de hidrazida de R1 benzila pode também ser um composto precursor de hidrazida de R1 benzoíla, em diversas modalidades.

[00040] Figura 2. Aldeídos usados para uma biblioteca combinatória de análogos de PAC-1, de acordo com certas modalidades.

[00041] Figura 3. Atividade da célula em cultura. Células U-937 (linfoma humano) tratadas com os compostos a 25 μM por 24 horas. Viabilidade celular avaliada pelo ensaio de azul Alamar. As barras de erros representam o erro padrão a partir da média (n = 3).

[00042] Figura 4. Ensaio da Estabilidade dos Microssomos de Fígado. Compostos (10 μM) incubados com microssomos de fígado por 3 h e finalizados com padrão interno contendo MeCN, analisados por LC/MS (280 nm).

DESCRIÇÃO DETALHADA

[00043] Em 2006, foi descrita a descoberta do Composto Ativador de Procaspase 1 (PAC-1, Esquema A) (Putt et al., Nat Chem Biol 2006, 2, 543-550). O PAC-1 aumenta a atividade enzimática da procaspase-3 in vitro, induz a morte celular apoptótica nas células de câncer e mostra eficácia em múltiplos modelos de tumores de camundongos. Os estudos da relação entre estrutura-atividade revelaram que a atividade do PAC- 1 in vitro e na cultura de células é dependente da presença da porção de orto-hidróxi N-acil hidrazona (Esquema A), um grupo funcional que se sabe participar na quelação de metal. De fato, o zinco é um inibidor poderoso da atividade enzimática da procaspase-3, e o mecanismo pelo qual o PAC-1 ativa a procaspase-3 in vitro é através da quelação do zinco inibitório da procaspase-3, o que permite que a procaspase-3 se processe até a forma ativa. Este mesmo mecanismo básico parece ser operacional em cultura de células também: aproximadamente 10% do zinco celular não estão ligados firmemente, porém existem como a "fonte de zinco instável". Uma vez que o zinco da fonte instável mostrou localizar-se em conjunto com a procaspase-3, parece que a quelação do PAC-1 deste zinco instável dentro das células aumenta a atividade da procaspase-3, levando à apoptose. Esquema A: PAC-1 e S-PAC-1, com o motivo de orto-hidróxi N-acil hidrazona, e derivados de benzoíla (Bz) correspondentes.

[00044] O PAC-1 pode ser seguramente administrado aos camundongos e cães de pesquisa em doses que dão concentrações no soro de ~10 μM por 48 horas. Um derivado contendo sulfonamida do PAC-1, chamado S-PAC-1 (Esquema A), pode ser seguramente administrado em doses que proporcionam concentrações muito altas no soro em camundongos (~3,5 mM). Animadoramente, um ensaio clínico veterinário do S-PAC-1 (administrado como uma infusão IV contínua por 24 ou 72 horas) em cães de estimação com linfoma que ocorre espontaneamente revelou que este composto é seguro em todos os pacientes veterinários e efetivo na redução ou na estabilização do crescimento do tumor em 4 de 6 pacientes. Este resultado proporciona prova de conceito para a ideia que a ativação da procaspase-3 por meio da quelação de molécula pequena do zinco instável pode ser uma estratégia anticâncer segura e efetiva. Na pesquisa continuada por derivados mais potentes de PAC-1, nós relatamos neste documento a síntese de novos análogos de PAC-1, a avaliação destes compostos quanto à sua capacidade de induzir a morte das células de câncer em cultura, e a caracterização adicional de diversos compostos com estabilidade metabólica elevada.

[00045] Projeto e síntese da Biblioteca Combinatória baseada em PAC-1. Uma biblioteca de análogos de PAC-1 foi projetada com o objetivo de identificar compostos capazes de provocar a morte potente de células de câncer em cultura. Como a citotoxicidade máxima do S- PAC-1 não é atingida até pelo menos 24 horas, e tanto o PAC-1 quanto o S-PAC-1 exibem meias-vidas curtas de 1-2 horas in vivo, um objetivo secundário deste estudo foi identificar análogos de PAC-1 que pudessem induzir a apoptose mais rapidamente. As rotas sintéticas descritas para o PAC-1 e o S-PAC-1, bem como outros análogos de PAC-1, utilizam a condensação de uma hidrazida e um aldeído como a etapa final no esquema sintético (Publicação de Patente U.S. No. 2007/0049602) (WO 2008/134474 (Hergenrother et al.)). Esta natureza modular da síntese do PAC-1 permite um arranjo variado de grupos funcionais a ser convenientemente incorporado no esqueleto do PAC- 1, sem alterar o motivo-núcleo de orto-hidróxi N-acil hidrazona, essencial para a ativação da procaspase-3 e a indução da apoptose.

[00046] Conforme mostrado nas Figuras 1 e 2, 31 hidrazidas (1{1- 31}) e 27 aldeídos (2{1-27}) foram selecionados para a construção da biblioteca de 837 análogos de PAC-1. As hidrazidas foram construídas a partir de materiais de partida de halogeneto de benzila comercialmente disponíveis. As sínteses das hidrazidas 1{1-6} foram descritas anteriormente (Putt et al., Nat Chem Biol 2006, 2, 543-550; Peterson et al., J Med Chem 2009, 52, 5721-5731; Peterson et al., Cancer Res 2010, 70, 7232-41). As hidrazidas 1{7-27} foram sintetizadas de acordo com o Esquema 1. Os halogenetos de benzila substituídos 4{7-27} primeiramente reagiram com a piperazina para formar as benzilpiperazinas substituídas 5{7-27}. Uma segunda alquilação do anel de piperazina com o cloroacetato de etila deu as piperazinas dissubstituídas 6{7-27}, e os ésteres foram então convertidos em hidrazidas 1{7-27} por reação com a hidrazina.

[00047] As rotas sintéticas detalhadas no Esquema 2. A síntese da hidrazida 1{28} começou pela alquilação da piperazina com o cloreto de 4-vinilbenzila (7) para formar a piperazina monossubstituída 8 (Esquema 2, equação 1). Uma segunda alquilação com o cloroacetato de etila formou o éster 9, e a reação com a hidrazina formou a hidrazida e reduziu a olefina, dando a hidrazida 1{28}. A redução das olefinas com a hidrazina tipicamente envolve a adição de um agente oxidante (Miller, C. E., Hydrogenation with Diimide. J Chem Educ 1965, 42, 254), porém a presença de oxigênio atmosférico foi suficiente para obter esta transformação. Esquema 2: Síntese das hidrazidas 1{28-31}.

[00048] A síntese da hidrazida 1{29} (Esquema 2, equação 2) começou com a reação do 2-(piperazin-1-il)acetato de etila (10) com o brometo de benzila 4{29} para formar o intermediário 6{29}. A reação de 6{29} com a hidrazina então formou a hidrazida 1{29}. A hidrazida 1{30} (Esquema 2, equação 3) foi sintetizada começando com a reação da 1-fenilpiperazina (5{30}) com o cloroacetato de etila para dar a piperazina dissubstituída 6{30}, e a reação com a hidrazina formou a hidrazida 1{30}. A hidrazida 1{31} foi sintetizada primeiramente protegendo a 4-metilbenzofenona (11) como o etileno acetal (12), conforme mostrado no Esquema 2, equação 4. Este composto foi bromado sob condições de radical para dar o brometo de benzila 13. A reação com a piperazina monossubstituída 10 deu o intermediário 14, e a reação com a hidrazina deu a hidrazida 15. A desproteção do acetal com o ácido aquoso deu a hidrazida 1{31}.

[00049] A relação entre estrutura-atividade do PAC-1 derivado da síntese e a avaliação de ~30 compostos demonstraram a necessidade do grupo orto-hidroxila, de modo que 27 blocos de construção de salicilaldeído foram selecionados para a construção da biblioteca. Os aldeídos 2{1-23} foram obtidos de fontes comerciais, e as sínteses dos aldeídos 2{24-26} foram descritas anteriormente (Peterson et al., J Med Chem 2009, 52, 5721-5731; Peterson et al., Cancer Res 2010, 70, 723241; Chang et al., Dalton Trans 2004, 1731-8). O aldeído 2{27} foi sintetizado por meio da cicloadição catalisada por cobre do aldeído 2{26} com a benzil azida, conforme mostrado no Esquema 3. Esquema 3: Síntese do aldeído 2{27}.

[00050] Usando um sintetizar paralelo Büchi Syncore, cada hidrazida foi condensada com cada aldeído, com mais de 80 reações efetuadas simultaneamente. Cada aldeído (5-15 mg) foi deixado reagir com a hidrazida em excesso (1,7 equiv), e a espectrometria de massa foi usada para monitorar o desaparecimento do aldeído da mistura de reação. Quando o aldeído reagiu completamente, o benzaldeído ligado ao poliestireno foi adicionado como uma resina expulsadora, para reagir com, e remover, a hidrazida em excesso. Quando a espectrometria de massa não mostrou nenhuma hidrazida permanecendo, os glóbulos foram filtrados, e as soluções foram secadas sob alto vácuo. Cada um dos 837 compostos foi avaliado por HPLC/MS. A pureza de cada composto era cerca de 74-100%, com uma pureza média de 91%.

[00051] Avaliação da Biblioteca Combinatória de PAC-1. Com 837 análogos de PAC-1 à mão, os compostos foram avaliados quanto à sua capacidade de induzir a apoptose em cultura de células. As células de linfomas humanos U-937 foram expostas aos compostos por 24 horas, em uma concentração de 20 μM. Tanto o PAC-1 quanto o S-PAC-1 mostram potência moderada (~50% de morte celular) versus esta linhagem celular sob estas condições. A morte celular apoptótica foi avaliada por citometria de fluxo, usando coloração com Anexina V- FITC/iodeto de propídio. Através deste processo de exame, seis compostos foram identificados e confirmados induzirem >80% de morte celular sob estas condições. Tabela A. Seis compostos da biblioteca induzem a morte celular potente das células U-937 (linfoma humano) nos experimentos tanto de 24 quanto de 72 horas, com a biomassa quantificada usando o ensaio de sulforrodamina B. 72 horas % de Citotoxicidade Procaspase-3 IC!0 (μM) (24 horas a 7.5 μM) (% de Atividade a 3,5 μM)

[00052] Indução da morte celular e redução da inibição mediada pelo zinco da procaspase-3 pelos compostos de sucesso. Após a síntese novamente dos compostos de sucesso (3{2,7}, 3{4,7}, 3{18,7}, 3{20,24}, 3{25,7}, e 3{28,7}), as amostras analiticamente puras dos compostos foram avaliadas em ensaios biológicos adicionais. Estas estruturas e os resultados biológicos são mostrados na Tabela A, acima. Os compostos foram avaliados, em uma faixa de concentrações, quanto à sua capacidade de induzir a morte celular nas células U-937, bem como sua capacidade de ativar a procaspase-3 in vitro. Todos os seis destes compostos de sucesso foram verificados serem 2-4 vezes mais potentes na cultura de células do que o PAC-1 e o S-PAC-1 em um tratamento por 72 horas.

[00053] Em um segundo experimento, a análise por citometria de fluxo com Anexina V-FITC/iodeto de propídio foi efetuada sobre as células U-937 que foram expostas aos compostos em uma única concentração (7,5 μM), por 24 horas (Tabela A). Dentro de 24 horas, a maior parte das células tratadas com os compostos estava sofrendo apoptose (células no quadrante direito inferior do histograma - Anexina V positiva, iodeto de propídio negativo), ou estava em um estágio apoptótico/necrótico final (quadrante direito superior - Anexina V positiva, iodeto de propídio positivo). Os novos análogos foram verificados serem mais potentes do que o PAC-1 sob estas condições de 24 horas.

[00054] Os seis compostos de sucesso confirmados foram então avaliados in vitro quanto à sua capacidade de reduzir a inibição mediada pelo zinco da procaspase-3 (Tabela A). Neste experimento, a procaspase-3 foi incubada com o ZnSO4, condições nas quais a procaspase-3 não tem nenhuma atividade enzimática. Todos os compostos foram capazes de aumentar a atividade enzimática da procaspase-3 sob estas condições (como avaliado pela clivagem do substrato de caspase-3 colorimétrico Ac-DEVD-pNA, sintetizado como anteriormente descrito (Peterson et al., Nat Protoc 2010, 5, 294-302)), e cinco dos seis compostos de sucesso mostraram maior atividade do que o PAC-1 neste ensaio. Estes dados indicam que os compostos aumentam a atividade da procaspase-3 in vitro através da quelação do zinco inibitório, e sugerem que, na célula, os compostos formam um quelato com o zinco da fonte instável, permitindo que a procaspase-3 seja processada para ativar a caspase-3, resultando na morte celular apoptótica.

[00055] A modulação direta das proteínas apoptóticas é uma estratégia anticâncer prática. O PAC-1 e o seu derivado S-PAC-1, que formam um quelato com o zinco celular instável e induzem a apoptose nas células de câncer, têm sido efetivos em diversos modelos antitumores pré-clínicos. Entretanto, os derivados que induzem a morte celular mais rápida e mais potentemente seriam ainda mais atraentes como substâncias terapêuticas. Usando a síntese paralela e guiados pela SAR conhecida, nós construímos 837 análogos de PAC-1 e os avaliamos quanto às propriedades indutoras da morte celular. Os seis compostos mostrados na Tabela A surgiram a partir deste esforço. Estes compostos são duas a quatro vezes mais potentes do que o PAC- 1 na indução da morte das células de câncer em ambos os ensaios de 24 horas e de 72 horas.

[00056] Dada a hidrofobicidade geral dos compostos de sucesso em relação ao PAC-1, a potência aumentada e a taxa aumentada de morte celular podem ser promovidas pela permeabilidade aumentada da célula. Estas qualidades são prováveis de serem vantajosas à medida que os compostos progridem in vivo. Além disso, outros membros desta biblioteca provavelmente surgirão como candidatos in vivo viáveis, uma vez que são examinadas propriedades alternativas (tais como propensão a cruzar a barreira hematoencefálica, estabilidade metabólica aperfeiçoada, solubilidade/formulação aperfeiçoadas para estudos in vivo, etc.). Deste modo, esta biblioteca de 837 compostos será uma fonte rica para desenvolver a partir dela compostos ativadores de procaspase-3 da geração seguinte. Compostos Adicionais e Análise

[00057] Um exame de alto rendimento de aproximadamente 20.000 compostos identificou o PAC-1 (1, Esquema A1) como um composto que aumentava a clivagem da procaspase-3 in vitro. O composto induz a morte celular apoptótica em um amplo arranjo de linhagens celulares de câncer em cultura e mostra eficácia anticâncer em múltiplos modelos de tumores de camundongos.1 Um estudo adicional da relação entre estrutura-atividade (SAR) identificou a orto-hidróxi-N-acil-hidrazona como o farmacóforo-chave.2-3. Diversos derivados de PAC-1 contendo este motivo têm atividade comparável in vitro e em cultura de células, porém os derivados com um núcleo modificado perdem a atividade.3. A orto-hidróxi-N-acil-hidrazona é sabida quelar os metais4, muitos dos quais são também sabidos inibir as enzimas procaspase e caspase.2, 57 Em particular, o zinco da fonte de zinco instável, que está ligado frouxamente e não desempenha uma função essencial na atividade destas proteínas, mostrou localizar-se em conjunto com a procaspase- 3 e inibir a sua atividade enzimática. O mecanismo de ação do PAC-1 provavelmente envolve a quelação do zinco da fonte instável, reduzindo a inibição mediada pelo zinco da procaspase-3 e permitindo que a enzima se processe até a forma ativa.2-3 Esquema A1. Estruturas do PAC-1 (1) e do S-PAC-1 (2).

[00058] Os estudos farmacocinéticos com o PAC-1 revelaram que concentrações no soro de aproximadamente 10 μM podem ser obtidas com efeito colaterais mínimos.8 Um derivado contendo sulfonamida do PAC-1, chamado S-PAC-1 (2, Esquema A1), pode ser seguramente administrado em doses de 350 mg/kg ou maiores, dando uma concentração plasmática de pico de 3,5 mM.9. O perfil de segurança aperfeiçoado é devido em grande parte à sua capacidade diminuída de cruzar a barreira hematoencefálica (BBB), em comparação com o PAC- 1.10 Animadoramente, o S-PAC-1 foi efetivo na redução ou na estabilização do crescimento do tumor em quatro dos seis pacientes caninos com linfoma ocorrendo espontaneamente, e o composto foi bem tolerado em todos os seis cães.9 Este resultado demonstra o potencial para a ativação da procaspase como uma estratégia anticâncer segura e efetiva.

[00059] Resultados e Discussão. Síntese do Composto. As sínteses anteriores de PAC-1 e outros derivados envolveu a condensação de último estágio de uma hidrazida e um aldeído para formar a orto-hidróxi-N-acil-hidrazona-chave. 1,3,9,11 Esta reação tem sido útil para a geração de grandes números de derivados a partir de um número comparativamente pequeno de materiais de partida.11 Neste trabalho, os análogos do PAC-1 1-45 foram sintetizados pela condensação de nove hidrazidas (46a-i) com cinco aldeídos (47a-e), conforme mostrado no Esquema A2. Esquema A2. Construção dos blocos usados para construir a biblioteca.

[00060] As hidrazidas foram sintetizadas de acordo com o Esquema A3a-c. A síntese começou com a alquilação da piperazina (48) com o cloroacetato de etila (49) para formar a piperazina monossubstituída 50. O composto 50 foi então reagido com um halogeneto de benzila ou benzoíla substituído, para dar as piperazinas dissubstituídas 51a-1 com altos rendimentos. A reação dos ésteres com a hidrazina então deu as hidrazidas 46a-1. Esquema A3. Síntese dos análogos de PAC-1. (a) Síntese das hidrazidas (46a-1). (b) Síntese dos aldeídos (47a-e). (c) Condensação das hidrazidas e dos aldeídos para formar os análogos de PAC-1 (1-45).

[00061] A síntese dos aldeídos é mostrada no Esquema A3b. Tanto o salicilaldeído (52) quanto o 5-fluorsalicilaldeído (47c) foram alquilados com o brometo de alila para dar os aliloxibenzaldeídos 53a-b em altos rendimentos. O aquecimento destes compostos a 200°C permitiu que estes substratos sofressem rearranjos de Claisen para dar os aldeídos 47a e 47d em aproximadamente 50% de rendimento. Finalmente, a hidrogenação quimiosseletiva com o sulfeto de difenila como um veneno de catalisador12 deu os aldeídos 47b e 47e em alto rendimento. Conforme mostrado no Esquema A3c, cada uma das hidrazidas (46a- i) foi condensada com cada um dos aldeídos (47a-e) na presença do HCl catalítico para dar os derivados de PAC-1 1-45, cujas estruturas são dadas na Tabela 1 (ver também as Figuras 3 e 4). Tabela 1. Estruturas, dados experimentais, e valores de logBB preditos dos análogos de PAC-1.

[00062] Avaliação dos análogos de PAC-1. Após a síntese estar completa, foi avaliada a atividade biológica dos compostos. Primeiro, foram determinados os valores de IC50 em 72 horas dos compostos contra as células U-937 na cultura (Tabela 1). Animadoramente, cada um dos compostos foi verificado reduzir a morte celular dependente da dose sob estas condições, e a maior parte dos compostos era aproximadamente tão potente quanto o PAC-1 e o S-PAC-1.

[00063] A seguir, foi avaliada a estabilidade metabólica dos compostos nos microssomos de fígados de ratos. Os compostos foram avaliados por 3 horas a 10 μM, e os metabólitos foram observados por LC/MS. Os resultados deste ensaio são mostrados na Tabela 1. Os compostos que continham os substituintes de benzoíla eram significativamente mais estáveis do que os compostos análogos contendo grupos benzila. Inesperadamente, os compostos contendo propila eram menos estáveis do que os compostos contendo alila, embora os metabólitos di-hidroxilados não fossem observados com os compostos de propila. Além disso, o S-PAC-1 era razoavelmente estável nos microssomos de fígados, apesar da meia-vida in vivo curta do composto, sugerindo que outros mecanismos de depuração desempenham um papel maior na eliminação do S-PAC-1 do corpo.

[00064] Finalmente, o valor de logBB predito foi calculado para cada composto. Este algoritmo, que envolve a área superficial polar e o ClogP, é usado para predizer a permeabilidade das pequenas moléculas através da barreira hematoencefálica (BBB).13 Os compostos com valores de logBB mais positivos terão concentrações maiores no cérebro, enquanto os compostos com valores de logBB mais negativos terão concentrações maiores no sangue. Os valores são mostrados na Tabela 1. Conforme esperado, os compostos contendo substituintes mais hidrofóbicos são preditos cruzarem a BBB até um grau maior do que os contendo substituintes mais polares.

[00065] Avaliação da toxicidade in vivo. Com o objetivo de identificar um composto com tolerabilidade aperfeiçoada, 32 dos 45 análogos de PAC-1 foram avaliados em camundongos. Os resultados do estudo da toxicidade são mostrados na Tabela 1. O nível de toxicidade foi calculado em uma escala de 0 (nenhum efeito adverso observável) a 3 (toxicidade grave, quase fatal). Muitos dos compostos eram letais para os camundongos, visto que os camundongos morreram dentro de 24 horas de tratamento ou mais do que 72 horas após o tratamento; estes resultados são também observados. Citações

[00066] 1. Putt, K. S.; Chen, G. W.; Pearson, J. M.; Sandhorst, J. S.; Hoagland, M. S.; Kwon, J. T.; Hwang, S. K.; Jin, H.; Churchwell, M. I.; Cho, M. H.; Doerge, D. R.; Helferich, W. G.; Hergenrother, P. J., Smallmolecule activation of procaspase-3 to caspase-3 as a personalized anticancer strategy. Nat. Chem. Biol. 2006, 2, 543-550.

[00067] 2. Peterson, Q. P.; Goode, D. R.; West, D. C.; Ramsey, K. N.; Lee, J. J. Y.; Hergenrother, P. J., PAC-1 Activates Procaspase-3 in Vitro through Relief of Zinc-Mediated Inhibition. J. Mol. Biol. 2009, 388, 144-158.

[00068] 3. Peterson, Q. P.; Hsu, D. C.; Goode, D. R.; Novotny, C. J.; Totten, R. K.; Hergenrother, P. J., Procaspase-3 Activation as an AntiCancer Strategy: Structure-Activity Relationship of ProcaspaseActivating Compound 1 (PAC-1) and Its Cellular Co-Localization with Caspase-3. J. Med. Chem. 2009, 52, 5721-5731

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[00073] 8. Lucas, P. W.; Schmit, J. M.; Peterson, Q. P.; West, D. C.; Hsu, D. C.; Novotny, C. J.; Dirikolu, L.; Churchwell, M. I.; Doerge, D. R.; Garrett, L. D.; Hergenrother, P. J.; Fan, T. M., Pharmacokinetics and derivation of an anticancer dosing regimen for PAC-1, a preferential small molecule activator of procaspase-3, in healthy dogs. Invest. New Drugs 2011, 29, 901-911.

[00074] 9. Peterson, Q. P.; Hsu, D. C.; Novotny, C. J.; West, D. C.; Kim, D.; Schmit, J. M.; Dirikolu, L.; Hergenrother, P. J.; Fan, T. M., Discovery and canine preclinical assessment of a nontoxic procaspase- 3-activating compound. Cancer Res. 2010, 70, 7232-7241.

[00075] 10. West, D. C.; Qin, Y.; Peterson, Q. P.; Thomas, D. L.; Palchaudhuri, R.; Morrison, K. C.; Lucas, P. W.; Palmer, A. E.; Fan, T. M.; Hergenrother, P. J., Differential effects of procaspase-3 activating compounds in the induction of cancer cell death. Mol. Pharmaceutics 2012, 9, 1425-1434.

[00076] 11. Hsu, D. C.; Roth, H. S.; West, D. C.; Botham, R. C.; Novotny, C. J.; Schmid, S. C.; Hergenrother, P. J., Parallel Synthesis and Biological Evaluation of 837 Analogues of Procaspase-Activating Compound 1 (PAC-1). ACS Comb. Sci. 2012, 14, 44-50.

[00077] 12. Mori, A.; Miyakawa, Y.; Ohashi, E.; Haga, T.; Maegawa, T.; Sajiki, H., Pd/C-catalyzed chemoselective hydrogenation in the presence of diphenylsulfide. Org. Lett. 2006, 8, 3279-3281.

[00078] 13. Clark, D. E., Rapid calculation of polar molecular surface area and its application to the prediction of transport phenomena. 2. Prediction of blood-brain barrier penetration. J. Pharm. Sci. 1999, 88, 815-821. Definições

[00079] Conforme usados neste documento, os termos descritos têm os significados a seguir. Todos os outros termos e expressões usados neste relatório descritivo têm seus significados comuns, conforme alguém de habilidade na técnica entenderia. Tais significados comuns podem ser obtidos por referência a dicionários técnicos, tais como Hawley’s Condensed Chemical Dictionary 14a Edição, por R.J. Lewis, John Wiley & Sons, New York, N.Y., 2001.

[00080] As referências no relatório descritivo a "uma modalidade", etc. indicam que a modalidade descrita pode incluir um aspecto, propriedade, estrutura, parte, ou característica particular, porém não cada modalidade necessariamente inclui aquele aspecto, propriedade, estrutura, parte ou característica. Além disso, tais expressões podem referir-se, porém não necessariamente, à mesma modalidade referida em outras partes do relatório descritivo. Ademais, quando um aspecto, propriedade, estrutura parte ou característica particular for descrita em relação a uma modalidade, está dentro do conhecimento de alguém versado na técnica efetuar ou associar tal aspecto, propriedade, estrutura, parte, ou característica com outras modalidades, quer esteja, quer não esteja explicitamente descrito.

[00081] As formas singulares "um", "uma", "o" e "a" incluem a referência plural, a não ser que o contexto claramente indique de outro modo. Assim, por exemplo, uma referência a "um composto" inclui uma pluralidade de tais compostos, de modo que um composto X inclua uma pluralidade de compostos X. Observa-se adicionalmente que as reivindicações podem ser redigidas para excluir qualquer elemento opcional. Como tal, pretende-se que esta afirmação atue como base antecedente para o uso de terminologia exclusiva, tal como "unicamente", "somente", e similar, em relação à descrição dos elementos da reivindicação ou ao uso de uma limitação "negativa".

[00082] O termo "e/ou" significa qualquer um dos itens, qualquer combinação dos itens, ou todos os itens com os quais este termo esteja associado. A expressão "um ou mais" é prontamente entendida por alguém de habilidade na técnica, particularmente quando lida no contexto de seu uso. Por exemplo, um ou mais substituintes sobre um anel de fenila refere-se a um a cinco, ou um a quatro, por exemplo, se o anel de fenila for dissubstituído.

[00083] O termo "cerca de" pode referir-se a uma variação de ± 5%, ± 10%, ± 20%, ou ± 25% do valor especificado. Por exemplo, "cerca de 50" por cento pode, em algumas modalidades, carregar uma variação de 45 a 55 por cento. Para as faixas de números inteiros, o termo "cerca de" pode incluir um ou dois inteiros maiores do que, e/ou menores do que, um número inteiro descrito em cada extremidade da faixa. Salvo indicação em contrário neste documento, pretende-se que o termo "cerca de" inclua valores, por exemplo, porcentagens em peso, próximos à faixa descrita que sejam equivalentes em termos da funcionalidade do ingrediente individual, da composição, ou da modalidade.

[00084] Conforme será entendido pelo técnico versado, todos os números, incluindo os que expressam quantidades de ingredientes, propriedades, tais como peso molecular, condições de reação, e assim por diante, são aproximações e são entendidos como sendo opcionalmente modificados em todas as situações pelo termo "cerca de". Estes valores podem variar dependendo das propriedades desejadas, buscadas serem obtidas por aqueles versados na técnica utilizando os ensinamentos das descrições aqui contidas. Entende-se também que tais valores inerentemente contêm variabilidade que resulta necessariamente dos desvios padrões verificados em suas respectivas medições de teste.

[00085] Conforme será entendido por alguém versado na técnica, para todos os propósitos, particularmente em termos de proporcionar uma descrição escrita, todas as faixas descritas neste documento também incluem todas as subfaixas possíveis e as combinações de suas subfaixas, bem como os valores individuais que constituem a faixa, particularmente os valores de números inteiros. Uma faixa descrita (por exemplo, porcentagens em peso ou grupos carbono) inclui cada valor específico, número inteiro, decimal, ou identidade dentro da faixa. Qualquer faixa listada pode ser facilmente reconhecida como descrevendo suficientemente e capacitando que a mesma faixa seja dividida em pelo menos metades, terças partes, quartas partes, quintas partes, ou décimas partes iguais. Como um exemplo não limitativo, cada faixa discutida neste documento pode ser prontamente dividida em uma terça parte inferior, terça parte do meio e terça parte superior, etc. Conforme também será entendido por alguém versado na técnica, toda a linguagem "até", "pelo menos", "maior do que", "menor do que", "mais do que", "ou mais", e similar inclui o número descrito e tais termos referem-se às faixas que podem ser subsequentemente divididas em subfaixas, conforme acima discutido. No mesmo modo, todas as razões descritas neste documento também incluem todas as sub-razões que incidam na razão mais ampla. Consequentemente, os valores específicos descritos para radicais, substituintes, e faixas são para ilustração somente; eles não excluem outros valores definidos ou outros valores dentro das faixas definidas para os radicais e os substituintes.

[00086] Alguém versado na técnica também prontamente reconhecerá que em que os membros forem agrupados conjuntamente em um modo comum, tal como em um grupo de Markush, a invenção inclui não somente o grupo inteiro listado como um todo, como cada membro do grupo individualmente e todos os subgrupos possíveis do grupo principal. Adicionalmente, para todos os propósitos, a invenção inclui não somente o grupo principal, como também o grupo principal ausente um ou mais dos membros do grupo. A invenção, portanto, considera a exclusão explícita de qualquer um ou mais dos membros de um grupo descrito. Consequentemente, as condições podem ser aplicar a quaisquer das categorias ou modalidades divulgadas, pelo que qualquer um ou mais dos elementos, espécies, ou modalidades descritas podem ser excluídas de tais categorias ou modalidades, por exemplo, conforme usado em uma limitação negativa explícita.

[00087] O termo "contatar" refere-se ao ato de tocar, fazer contato, ou de levar para proximidade imediata ou próxima, incluindo no nível celular ou molecular, por exemplo, ocasionar uma reação fisiológica, uma reação química, ou uma mudança física, por exemplo, em uma solução, em uma mistura de reação, in vitro, ou in vivo.

[00088] Uma "quantidade efetiva" refere-se a uma quantidade efetiva para tratar uma doença, distúrbio, e/ou condição, ou ocasionar um efeito descrito, tal como a ativação ou a inibição. Por exemplo, uma quantidade efetiva pode ser uma quantidade efetiva para reduzir a progressão ou a gravidade da condição ou dos sintomas que estão sendo tratados. A determinação de uma quantidade terapeuticamente efetiva está bem dentro da capacidade das pessoas versadas na técnica. Pretende-se que o termo "quantidade efetiva" inclua uma quantidade de um composto descrito neste documento, ou uma quantidade de uma combinação de compostos descritos neste documento, por exemplo, que seja efetiva para tratar ou impedir uma doença ou distúrbio, ou tratar os sintomas da doença ou do distúrbio, em um hospedeiro. Desse modo, uma "quantidade efetiva" em geral significa uma quantidade que proporciona o efeito desejado. Em uma modalidade, uma quantidade efetiva refere-se a uma quantidade do agente ativo descrito neste documento que é efetivo, sozinho ou em combinação com um veículo farmacêutico, com a administração de uma única dose ou de doses múltiplas a uma célula ou um paciente, por exemplo, uma cobaia, na inibição do crescimento ou da proliferação, induzindo a morte, ou impedindo o crescimento das células hiperproliferativas. Tal inibição do crescimento ou morte pode ser refletida como um prolongamento da sobrevivência do paciente, por exemplo, uma cobaia, mais além daquela esperada na ausência de tal tratamento, ou qualquer aperfeiçoamento no prognóstico do paciente em relação à ausência de tal tratamento.

[00089] Os termos "tratando", "tratar" e "tratamento" incluem (i) impedir que uma doença, uma condição patológica ou médica de ocorra (por exemplo, profilaxia); (ii) inibir a doença, a condição patológica ou medica ou interromper o seu desenvolvimento; (iii) mitigar a doença, a condição patológica ou médica; e/ou (iv) diminuir os sintomas associados com a doença, a condição patológica ou médica. Desse modo, os termos "tratar", "tratamento", e "tratando" podem se estender para a profilaxia e podem incluir prevenir, prevenção, prevenindo, diminuindo, interrompendo ou revertendo a progressão ou a gravidade da condição ou dos sintomas que está sendo tratados. Como tal, o termo "tratamento" pode incluir a administração médica, terapêutica, e/ou profilática, conforme apropriado. Em algumas modalidades, os termos "tratamento", "tratar" ou "tratado" podem referir-se à (i) prevenção do crescimento do tumor ou do crescimento novamente do tumor (profilaxia), (ii) a uma redução ou eliminação dos sintomas ou da doença de interesse (terapia) ou (iii) à eliminação ou à destruição do tumor (cura).

[00090] Os termos "inibir", "inibindo" e "inibição" referem-se à diminuição, interrupção, ou reversão do crescimento ou da progressão de uma doença, infecção, condição, ou grupo de células. A inibição pode ser maior do que cerca de 20%, 40%, 60%, 80%, 90%, 95%, ou 99%, por exemplo, comparada ao crescimento ou à progressão que ocorre na ausência do tratamento ou do contato. Adicionalmente, os termos "induzir", "inibir", "potencializar", "elevar", "aumentar", "diminuir", ou similar significam diferenças quantitativas entre dois estados, e podem referir-se a diferenças pelo menos estatisticamente significativas entre os dois estados. Por exemplo, "uma quantidade efetiva para inibir o crescimento de células hiperproliferativas" significa que a taxa de crescimento das células pode ser, em algumas modalidades, pelo menos estatística e significativamente diferente das células não tratadas. Tais termos podem ser aplicados neste documento, por exemplo, às taxas de proliferação.

[00091] A expressão "inibir o crescimento ou a proliferação" da célula hiperproliferativa, por exemplo, da célula neoplástica, refere-se à diminuir, interromper, parar, ou cessar o seu crescimento e metástase, e não necessariamente indica uma eliminação total do crescimento neoplástico.

[00092] O termo "célula de câncer" inclui as definições como amplamente entendidas na técnica. Em uma modalidade, o termo refere-se a uma célula anormalmente regulada que pode contribuir para uma condição clínica de câncer em um ser humano ou animal. Em algumas modalidades, o termo pode referir-se a uma linhagem celular cultivada ou uma célula dentro ou derivada de um corpo humano ou animal. Uma célula de câncer pode ser de uma ampla variedade de tipos diferenciados de células, tecidos, ou órgãos, conforme é entendido na técnica, e também conforme descrito neste documento.

[00093] Desse modo, o termo "câncer" em geral refere-se a qualquer de um grupo de mais do que 100 doenças causadas pelo crescimento descontrolado de células anormais. O câncer pode tomar a forma de tumores sólidos e linfomas, e cânceres não sólidos, tais como a leucemia. Ao contrário das células normais, que se reproduzem até a maturação e então somente conforme necessário para substituir as células feridas, as células de câncer podem se desenvolver e se dividir infinitamente, expulsando as células próximas e, no fim, espalhando-se para outras partes do corpo.

[00094] A invenção proporciona métodos para tratar o câncer e as condições cancerosas. O termo "condição cancerosa" refere-se a qualquer condição em que as células estejam em um estado ou condição anormal que seja caracterizado por proliferação rápida ou neoplasia. Uma condição cancerosa pode ser de natureza maligna ou não maligna (por exemplo, condição pré-cancerosa). Para descrever mais uma "condição cancerosa", podem ser usados os termos "hiperproliferativo(a)", "hiperplástico", "hiperplasia", "maligno(a)", "neoplástico(a)" e "neoplasia". Estes termos podem ser usados de modo intercambiável e são pretendidos para incluir todos os tipos de crescimento hiperproliferativo, crescimento hiperplástico, crescimentos cancerosos ou processos oncogênicos, tecidos metastáticos ou células, tecidos ou órgãos malignamente transformados, independente do tipo histopatológico, do estágio de invasão, ou da determinação cancerosa (por exemplo, maligna e não maligna).

[00095] O termo "neoplasia" refere-se ao crescimento de novas células que resulta em uma perda de reação aos controles normais do crescimento, por exemplo, crescimento de células neoplásticas. Uma "hiperplasia" refere-se às células que sofrem uma taxa anormalmente alta de crescimento. Entretanto, estes termos podem ser usados de modo intercambiável, conforme seu contexto revelará, referindo-se em geral às células que sofrem taxas de crescimento celular anormais. As "neoplasias" e as "hiperplasias" incluem os tumores que podem ser benignos, pré-malignos, carcinoma in situ, malignos, sólidos ou não sólidos.

[00096] Os compostos descritos neste documento foram verificados serem particularmente efetivos para tratar cânceres do cérebro. Os cânceres do cérebro incluem, porém não estão limitados aos oligodendrogliomas e glioblastomas, incluindo glioblastoma multiforme (GBM). Os tecidos afetados pelas células cancerosas podem estar no cérebro propriamente dito (por exemplo, crânio ou o canal vertebral central) ou no tecido linfático, nos vasos sanguíneos, nos nervos cranianos, nas membranas do cérebro (meninges), cabeça, glândula pituitária, ou glândula pineal. As formas específicas de câncer do cérebro que podem ser tratadas incluem astrocitomas, condromas, condrossarcomas, cordomas, linfomas do SNC (sistema nervoso central), craniofaringiomas, ependimomas, gangliogliomas, ganglioneuromas (também chamados gangliocitomas), gliomas, incluindo astrocitomas, oligodendrogliomas, e ependimomas, hemangioblastomas (também chamados tumores vasculares), tumores neuroectodérmicos primitivos (PNET), tais como meduloblastomas, meningiomas, e schwanomas vestibulares (antigamente conhecidos como neuroma acústico / schwanoma).

[00097] Os compostos descritos neste documento podem também ser usados para tratar tumores metastáticos que invadem a esfera intracraniana de cânceres que se originam em outros órgãos do corpo. Estas condições são tipicamente referidas como tumores secundários do cérebro. Os tumores secundários do cérebro que podem ser tratados com um composto descrito neste documento incluem os tumores metastáticos do cérebro que se originam de câncer de pulmão, câncer de mama, melanoma maligno, câncer de rim, câncer de cólon, e outros carcinomas.

[00098] Outros exemplos de condições cancerosas que estão dentro do escopo da invenção incluem, porém não estão limitados aos neuroblastomas e carcinomas osteogênicos (por exemplo, câncer do osso ou crescimento neoplástico de tecido no osso). Os exemplos de tumores ósseos primários malignos que podem ser tratados com um composto descrito neste documento incluem osteossarcomas, condrossarcomas, sarcoma de Ewing, fibrossarcomas, e similares, e tumores ósseos secundários, tais como lesões metastáticas que se espalharam de outros órgãos, incluindo os carcinomas da mama, pulmão, e próstata.

[00099] Os termos alquila, cicloalquila, alquenila, alquenila, arila, grupos amino, alcóxi, halo, haloalquila, heteroarila, heterociclo, e éster são bastante conhecidos na técnica e têm suas definições reconhecidas na técnica, tal como descrito na Publicação de Patente U.S. No. 2012/0040995 (Hergenrother et al.).

[000100] Por exemplo, o termo "alquila" refere-se a uma cadeia de hidrocarbonetos de monorradical, ramificada ou não ramificada, saturada, preferivelmente tendo de 1 a 22 átomos de carbono, e aos grupos cicloalquila tendo um ou mais anéis tendo 3 a 22 átomos de carbono. Os grupos alquila curtos são aqueles tendo 1 a 6 átomos de carbono, incluindo os grupos metila, etila, propila, butila, pentila e hexila, incluindo todos os seus isômeros. Os grupos alquila longos são aqueles tendo 8-22 átomos de carbono e preferivelmente aqueles tendo 12-22 átomos de carbono, bem como aqueles tendo 12-20 e aqueles tendo 16-18 átomos de carbono.

[000101] Desse modo, o termo "alquila" pode referir-se a uma cadeia de hidrocarboneto de monorradical, ramificada ou não ramificada, saturada, preferivelmente tendo de 1 a 22 átomos de carbono. Os grupos alquila curtos são aqueles tendo 1 a 12 átomos de carbono, incluindo os grupos metila, etila, propila, butila, pentila e hexila, incluindo todos os seus isômeros. Os grupos alquila longos são aqueles tendo 12-22 átomos de carbono. O grupo pode ser um grupo terminal ou um grupo de união.

[000102] Os grupos alquila, heteroalquila, arila, heteroarila, e heterociclo, e as suas versões cíclicas e/ou insaturadas, podem ser grupos R de Fórmula I, e cada grupo pode ser opcionalmente substituído. Desse modo, em diversas modalidades, qualquer um ou mais dos substituintes abaixo podem ser um grupo R (por exemplo, R1, R2, R2, R10, R20, R30, etc.) de um grupo ou fórmula descrita neste documento. O termo "substituído" indica que um ou mais átomos de hidrogênio sobre o grupo indicado na expressão usando "substituído" são substituídos com um "substituinte". O número referido por 'um ou mais' pode estar aparente a partir da porção na qual os substituintes consistem. Por exemplo, um ou mais pode referir-se a, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6; em algumas modalidades 1, 2, ou 3; e em outras modalidades 1 ou 2. O substituinte pode ser um de uma seleção de grupos indicados, ou ele pode ser um grupo adequado, conhecido para aqueles de habilidade na técnica, desde que a valência normal do átomo substituído não seja excedida, e que a substituição resulte em um composto estável. Os grupos substituintes adequados incluem, por exemplo, alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, halo, haloalquila, hidróxi, hidroxialquila, arila, aroíla, (aril)alquila (por exemplo, benzila ou feniletila), heteroarila, heterociclo, cicloalquila, alcanoíla, alcoxicarbonila, amino, alquilamino, dialquilamino, trifluormetila, trifluormetóxi, trifluormetiltio, difluormetila, acilamino, nitro, carbóxi, carboxialquila, ceto, tioxo, alquiltio, alquilsulfinila, alquilsulfonila, arilsulfinila, arilsulfonila, heteroarilsulfinila, heteroarilsulfonila, heterociclosulfinila, heterociclosulfonila, fosfato, sulfato, hidroxil amina, hidroxila (alquil)amina, e ciano. Adicionalmente, os grupos substituintes adequados podem ser, por exemplo, -X, -R, -O-, -OR, -SR, -S-, -NR2, - NR3, =NR, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N2, - N3, -NC(=O)R, -C(=O)R, -C(=O)NRR, -S(=O)2O-, -S(=O)2OH, -S(=O)2R, -OS(=O)2OR, -S(=O)2NR, -S(=O)R, -OP(=O)O2RR, -P(=O)O2RR, - P(=O)(O-)2, -P(=O)(OH)2, -C(=O)R, -C(=O)X, -C(S)R, -C(O)OR, -C(O)O- , -C(S)OR, -C(O)SR, -C(S)SR, -C(O)NRR, -C(S)NRR, ou -C(NR)NRR, em que cada X é independentemente um halogênio ("halo"): F, Cl, Br, ou I; e cada R é independentemente H, alquila, arila, (aril)alquila (por exemplo, benzila), heteroarila, (heteroaril)alquila, heterociclo, heterociclo(alquila), ou um grupo protetor. Conforme será prontamente entendido por alguém versado na técnica, quando um substituinte for ceto ( =O) ou tioxo ( =S), ou similar, então dois átomos de hidrogênio sobre o átomo substituído são substituídos. Em algumas modalidades, um ou mais dos substituintes acima mencionados podem ser excluídos do grupo de valores potenciais para substituintes sobre um grupo substituído, tal como um grupo R (por exemplo, R1, R2, R2, R10, R20, R30, etc.) de um grupo ou fórmula descrita neste documento.

[000103] O termo "cicloalquila" refere-se a grupos alquila cíclicos de 3 a 22 átomos de carbono tendo um único anel cíclico ou múltiplos anéis condensados. Os grupos cicloalquila incluem aqueles tendo anéis de 38 elementos e aqueles tendo anéis de 5 e 6 elementos. Os grupos cicloalquila incluem, a título de exemplo, as estruturas de anéis individuais, tais como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-octila, e similares, ou as estruturas de múltiplos anéis, tais como adamantanila, e similares.

[000104] O termo "alquenila" refere-se a um monorradical de um grupo hidrocarboneto ramificado ou não ramificado, insaturado, preferivelmente tendo de 2 a 22 átomos de carbono, e aos grupos cicloalquenila tendo um ou mais anéis tendo 3 a 22 átomos de carbono, em que pelo menos um anel contém uma ligação dupla. Os grupos alquenila podem conter uma ou mais ligações duplas (C=C), as quais podem ser conjugadas. Os grupos alquenila preferidos são aqueles tendo 1 ou 2 ligações duplas. Os grupos alquenila curtos são aqueles tendo 2 a 6 átomos de carbono, incluindo os grupos etileno (vinila), propileno, butileno, pentileno e hexileno, incluindo todos os seus isômeros. Os grupos alquenila longos são aqueles tendo 8-22 átomos de carbono e preferivelmente aqueles tendo 12-22 átomos de carbono, bem como aqueles tendo 12-20 átomos de carbono e aqueles tendo 1618 átomos de carbono. O termo "cicloalquenila" refere-se aos grupos alquenila cíclicos de 3 a 22 átomos de carbono tendo um único anel cíclico ou múltiplos anéis condensados, em que pelo menos um anel contém uma ligação dupla (C=C). Os grupos cicloalquenila incluem, a título de exemplo, as estruturas de um único anel, tais como ciclopropenila, ciclobutenila, ciclopentenila, ciclo-octenila, ciclo- octadienila e ciclooctatrienila. O termo alila refere-se ao grupo alquenila -CH2-CH=CH2.

[000105] O termo "alquinila" refere-se a um monorradical de um hidrocarboneto insaturado preferivelmente tendo de 2 a 22 átomos de carbono e tendo uma ou mais ligações triplas (C=C). Os grupos alquinila incluem a etinila, a propargila, e similar. Os grupos alquinila curtos são aqueles tendo 2 a 6 átomos de carbono, incluindo todos os seus isômeros. Os grupos alquinila longos são aqueles tendo 8-22 átomos de carbono e preferivelmente aqueles tendo 12-22 átomos de carbono, bem como aqueles tendo 12-20 átomos de carbono e aqueles tendo 1618 átomos de carbono.

[000106] O termo "arila" refere-se a um grupo contendo um grupo carbocíclico aromático insaturado de 6 a 22 átomos de carbono tendo um único anel (por exemplo, fenila), um ou mais anéis (por exemplo, bifenila) ou múltiplos anéis condensados (fundidos), em que pelo menos um anel é aromático (por exemplo, naftila, di-hidrofenantrenila, fluorenila ou antrila). As arilas incluem a fenila, a naftila e similares. Os grupos arila podem conter porções que sejam alquila, alquenila ou alquinila, além do(s) anel(éis) aromático(s) insaturado(s). O termo "alcarila" refere-se aos grupos arila contendo porções alquila, isto é, -alquileno- arila e -alquileno substituído-arila. Tais grupos alcarila são exemplificados por benzila (-CH2-fenila), fenetila e similares.

[000107] Os grupos alquila, alquenila, alquinila e arila são opcionalmente substituídos conforme descrito neste documento (o(s) termo(s) pode(m) incluir variações substituídas) e podem conter 1-8 substituintes que não o hidrogênio, dependentes do número de átomos de carbono no grupo e do grau de insaturação do grupo. Toda tal variável conforme descrita neste documento pode ser não substituída (em que quaisquer grupos variáveis que possam ser o hidrogênio são o hidrogênio) ou substituída com um ou mais substituintes que não o hidrogênio, selecionados a partir de halogênio, incluindo o flúor, o cloro, o bromo ou o iodo, C1-C3 haloalquila, hidroxila (OH), tiol (HS-), C1-C6 alquila, C1-C3 alquila, C1-C6 alcóxi, C1-C3 alcóxi, fenila, benzila, alquenila, C2-C4 alquenila, alquinila, C2-C4 alquinila, -NH2, -NR’H, - NR’R”, R’CO-, R’R”NCO-, R’CO-NH-, ou R’CO-NR’-, em que R’ e R” são C1-C6 alquila, C1-C3 alquila ou fenila.

[000108] O termo "amino" refere-se ao grupo -NH2 ou ao grupo - NR’R”, em que cada R’ e R” é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, grupos alquila ou arila.

[000109] A "haloalquila" refere-se à alquila como definida neste documento substituída por um ou mais grupos halo como definidos neste documento, que podem ser iguais ou diferentes. Os grupos haloalquila representativos incluem, a título de exemplo, a trifluormetila, a 3-fluordodecila, a 12,12,12-trifluordodecila, a 2-bromo-octila, a 3- bromo-6-cloro-heptila, e similares.

[000110] O termo "heteroarila" refere-se a um grupo aromático de 2 a 22 átomos de carbono tendo 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de oxigênio, nitrogênio e enxofre dentro de pelo menos um anel (se houver mais do que um anel). Os grupos heteroarila podem ser opcionalmente substituídos. Os grupos heteroarila incluem, entre outros, aqueles tendo anéis de 5 e 6 elementos e aqueles tendo um ou dois nitrogênios no anel, aqueles tendo um ou dois oxigênios no anel, bem como aqueles tendo um ou dois enxofres no anel.

[000111] O termo "heterociclo" ou "heterocíclico" refere-se a um grupo saturado ou insaturado, de monorradical, tendo um único anel ou múltiplos anéis condensados, de 2-22 átomos de carbono e de 1 a 6 heteroátomos, preferivelmente 1 a 4 heteroátomos, selecionados a partir de nitrogênio, enxofre, fósforo, e/ou oxigênio dentro de pelo menos um anel. Os grupos heterocíclicos podem ser substituídos. Os anéis preferivelmente têm 3-10 elementos e mais especificamente têm 5 ou 6 elementos.

[000112] O termo "éster" refere-se às entidades químicas, como entendidas na técnica, e, em particular, pode incluir os grupos da forma (RCO-).

[000113] Os compostos desta invenção incluem todos os novos isômeros estereoquímicos que surgem a partir da substituição dos compostos divulgados. Formulações Farmacêuticas

[000114] Os compostos descritos neste documento podem ser usados para preparar composições farmacêuticas terapêuticas. Os compostos podem ser adicionados às composições na forma de um sal ou solvato. Por exemplo, nos casos em que os compostos forem suficientemente básicos ou ácidos para formarem sais de ácidos ou de bases não tóxicos, estáveis, pode ser apropriada a administração dos compostos como sais. Os exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são os sais de adição de ácidos orgânicos, formados com ácidos que formam um ânion fisiológico aceitável, por exemplo, tosilato, metanossulfonato, acetato, citrato, malonato, tartarato, succinato, benzoato, ascorbato, α- cetoglutarato, e β-glicerofosfato. Os sais inorgânicos adequados podem também ser formados, incluindo os sais de cloridrato, halogeneto, sulfato, nitrato, bicarbonato e carbonato.

[000115] Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser obtidos usando procedimentos padrões, bastante conhecidos na técnica, por exemplo, reagindo um composto suficientemente básico, tal como uma amina, com um ácido adequado, para proporcionar um composto iônico fisiologicamente aceitável. Os sais de metais alcalinos (por exemplo, sódio, potássio ou lítio) ou de metais alcalino-terrosos (por exemplo, cálcio) de ácidos carboxílicos podem também ser preparados por métodos análogos.

[000116] Os compostos das fórmulas descritas neste documento podem ser formulados como composições farmacêuticas e administrados a um hospedeiro mamífero, tal como um paciente humano, em uma variedade de formas. As formas podem ser especificamente adaptadas a uma rota de administração escolhida, por exemplo, administração oral ou parenteral, por rotas intravenosas, intramusculares, tópicas ou subcutâneas.

[000117] Os compostos descritos neste documento podem ser sistemicamente administrados em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um diluente inerte ou um veículo comestível assimilável. Para a administração oral, os compostos podem ser encerrados em cápsulas gelatinosas de revestimentos duros ou moles, prensados em comprimidos, ou incorporados diretamente no alimento da dieta de um paciente. Os compostos podem também ser combinados com um ou mais excipientes e usados na forma de comprimidos ingeríveis, comprimidos bucais, trociscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, pastilhas e similares. Tais composições e preparações tipicamente contêm pelo menos 0,1% de composto ativo. A porcentagem das composições e das preparações pode variar e pode convenientemente ser de cerca de 2% a cerca de 60% do peso de uma dada forma de dosagem de unidade. A quantidade de composto ativo em tais composições terapeuticamente úteis é tal que pode ser obtido um nível efetivo de dosagem.

[000118] Os comprimidos, os trociscos, as pílulas, as cápsulas e similares podem também conter um ou mais dos que seguem: aglutinantes, tais como a goma tragacanto, a acácia, o amido de milho ou a gelatina; excipientes, tais como o fosfato de dicálcio; um agente desintegrante, tal como o amido de milho, o amido de batata, o ácido algínico e similar; e um lubrificante, tal como o estearato de magnésio. Pode ser adicionado um agente adoçante, tal como a sacarose, a frutose, a lactose ou o aspartame; ou um agente aromatizante, tal como a hortelã-pimenta, o óleo de gaultéria, ou a essência de cereja. Quando a forma de dosagem de unidade for uma cápsula, ela pode conter, além dos materiais do tipo acima mencionado, um veículo líquido, tal como um óleo vegetal ou um polietileno glicol. Diversos outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou para, de outro modo, modificar a forma física da forma de dosagem de unidade sólida. Por exemplo, os comprimidos, as pílulas, ou as cápsulas podem ser revestidas com gelatina, cera, goma-laca ou açúcar e similar. Um xarope ou elixir pode conter o composto ativo, a sacarose ou a frutose como um agente adoçante, o metil e o propil parabenos como conservantes, um corante e um agente aromatizante, tal como essência de cereja ou laranja. Qualquer material usado na preparação de qualquer forma de dosagem de unidade deve ser farmaceuticamente aceitável e substancialmente não tóxico nas quantidades empregadas. Além disso, o composto ativo pode ser incorporado em preparações e dispositivos de liberação contínua.

[000119] O composto ativo pode ser administrado de modo intravenoso ou intraperitoneal por infusão ou injeção. As soluções do composto ativo ou de seus sais podem ser preparadas em água, opcionalmente misturada com um tensoativo não tóxico. As dispersões podem ser preparadas em glicerol, polietileno glicóis líquidos, triacetina, ou suas misturas, ou em um óleo farmaceuticamente aceitável. Sob as condições comuns de armazenagem e uso, as preparações podem conter um conservante para impedir o crescimento de microorganismos.

[000120] As formas de dosagens farmacêuticas, adequadas para a injeção ou a infusão, podem incluir as soluções aquosas estéreis, as dispersões, ou os pós estéreis compreendendo o ingrediente ativo adaptado para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis ou infusíveis estéreis, opcionalmente encapsuladas em lipossomos. A forma de dosagem final deve ser estéril, fluida e estável sob as condições de fabricação e armazenagem. O transportador ou veículo líquido pode ser um solvente ou meio de dispersão líquido compreendendo, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicóis líquidos, e similares), óleos vegetais, ésteres de glicerila não tóxicos, e suas misturas adequadas. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pela formação de lipossomos, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersões, ou pelo uso de tensoativos. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser promovida por diversos agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, tiomersal e similares. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, tampões, ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser provocada por agentes que retardem a absorção, por exemplo, o monoestearato de alumínio e/ou a gelatina.

[000121] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas por incorporação do composto ativo, na quantidade requerida, no solvente apropriado com os diversos outros ingredientes enumerados acima, conforme requeridos, seguida por esterilização em filtro. No caso dos pós estéreis para a preparação das soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação podem incluir as técnicas de secagem a vácuo e de liofilização, que produzem um pó do ingrediente ativo, mais qualquer ingrediente desejado adicional presente nas soluções filtradas estéreis previamente.

[000122] Para a administração tópica, os compostos podem ser aplicados na forma pura, por exemplo, quando eles forem líquidos. Entretanto, em geral, será desejável administrar o agente ativo na pele como uma composição ou formulação, por exemplo, em combinação com um veículo dermatologicamente aceitável, que podem ser um sólido ou um líquido.

[000123] Os veículos sólidos úteis incluem os sólidos finamente divididos, tais como o talco, a argila, a celulose microcristalina, a sílica, a alumina, e similares. Os veículos líquidos úteis incluem a água, o sulfóxido de dimetila (DMSO), os álcoois, os glicóis, ou as combinações de água-álcool/glicol, em que um composto pode ser dissolvido ou disperso em níveis efetivos, opcionalmente com o auxílio de tensoativos não tóxicos. Os adjuvantes, tais como as fragrâncias e os agentes antimicrobianos adicionais, podem ser adicionados para otimizar as propriedades para um dado uso. As composições líquidas resultantes podem ser aplicadas a partir de emplastros absorventes, usados para impregnar as bandagens e os outros curativos, ou pulverizadas sobre a área afetada usando um pulverizador tipo bomba ou aerossol.

[000124] Os espessantes, tais como os polímeros sintéticos, os ácidos graxos, os sais e os ésteres de ácidos graxos, os álcoois graxos, as celuloses modificadas, ou os materiais minerais modificados, podem também ser empregados com os veículos líquidos, para formar pastas, géis, unguentos, sabões espalháveis, e similares, para a aplicação diretamente à pele do usuário.

[000125] Os exemplos de composições dermatológicas para a liberação dos agentes ativos na pele são conhecidos na técnica, por exemplo, ver as Patentes U.S. Nos. 4.992.478 (Geria), 4.820.508 (Wortzman), 4.608.392 (Jacquet et al.), e 4.559.157 (Smith et al.). Tais composições dermatológicas podem ser usadas em combinações com os compostos descritos neste documento, em que um ingrediente de tais composições pode opcionalmente ser substituído por um composto descrito neste documento, ou um composto descrito neste documento pode ser adicionado à composição.

[000126] As dosagens úteis dos compostos descritos neste documento podem ser determinadas comparando-se sua atividade in vitro, e a atividade in vivo em modelos de animais. Os métodos para a extrapolação das dosagens efetivas em camundongos, e em outros animais, para os seres humanos são conhecidos na técnica; por exemplo, ver a Patente U.S. No. 4.938.949 (Borch et al.). A quantidade de um composto ou um sal ou derivado ativo dele, requerida para uso no tratamento, variará não somente com o composto ou o sal particular selecionado, como também com a rota de administração, a natureza da condição que está sendo tratada, e a idade e a condição do paciente, e será, no final, a critério de um médico ou clínico assistente.

[000127] O composto pode ser convenientemente administrado em uma forma de dosagem de unidade, por exemplo, 5 a 1000 mg/m2, convenientemente 10 a 750 mg/m2, mais convenientemente, 50 a 500 mg/m2 de ingrediente ativo por forma de dosagem de unidade. A dose desejada pode convenientemente ser apresentada em uma única dose ou como doses divididas, administradas em intervalos apropriados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. A subdose propriamente dita pode ser adicionalmente dividida, por exemplo, em diversas administrações distintas, imprecisamente espaçadas.

[000128] Os compostos descritos neste documento podem ser agentes antitumor efetivos e ter potência maior e/ou toxicidade reduzida em comparação com o PAC-1. Os compostos da invenção podem ser mais potentes e menos tóxicos do que o PAC-1, e/ou evitar um local potencial de metabolismo catabólico encontrado com o PAC-1, isto é, eles têm um perfil metabólico diferente do PAC-1.

[000129] A invenção proporciona métodos terapêuticos de tratar o câncer em um mamífero, o qual envolve administrar a um mamífero tendo câncer uma quantidade efetiva de um composto ou composição descrita neste documento. Um mamífero inclui um primata, ser humano, roedor, cão, felino, bovino, ovino, equino, suíno, caprino bovino e similar. O câncer refere-se a qualquer tipo variado de neoplasma maligno, por exemplo, câncer do cólon, câncer de mama, melanoma e leucemia, e, em geral, é caracterizado por uma proliferação celular indesejável, por exemplo, crescimento desregulado, ausência de diferenciação, invasão local do tecido, e metástase.

[000130] A capacidade de um composto da invenção de tratar o câncer pode ser determinada usando ensaios bastante conhecidos na técnica. Por exemplo, conhecem-se o projeto de protocolos de tratamento, a avaliação da toxicidade, a análise de dados, a quantificação da morte da célula de tumor, e o significado biológico do uso de exames de tumores transplantados. Além disso, a capacidade de um composto de tratar o câncer pode ser determinada usando os testes como descritos abaixo.

[000131] Pretende-se que os Exemplos a seguir ilustrem a invenção acima mencionada e não devem ser interpretados como para limitar o seu escopo. Alguém versado na técnica prontamente reconhecerá que os Exemplos sugerem muitos outros modos nos quais a invenção poderia ser praticada. Deve ser entendido que podem ser feitas diversas variações e modificações, ao mesmo tempo permanecendo dentro do escopo da invenção. EXEMPLOS Exemplo 1. Procedimento Geral para a Síntese dos Análogos de PAC- 1

[000132] A um tubo de teste de 16 x 150 mm foram adicionados a hidrazida (1,7 equiv), o aldeído (1,0 equiv), o 2-etoxietanol (1 mL) e o HCl a 1,2 M (10 moles%). Os tubos foram agitados sobre um sintetizador paralelo Büchi Syncore, a 110 °C, até que todo o aldeído tivesse reagido (conforme monitorado por ESI-MS). A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente (~23°C), e o o poliestireno- benzaldeído (3,5 equiv) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 25-80°C até que nenhuma hidrazida permanecesse (conforme monitorado por ESI-MS). A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente, e a resina foi filtrada e lavada com o 2- etoxietanol. O filtrado foi secado sob alto vácuo para proporcionar o análogo de PAC-1. Exemplo 2. Síntese Paralela dos Análogos de PAC-1

[000133] As reações que requeriam condições anidras foram conduzidas sob uma atmosfera positiva de nitrogênio ou argônio em artigos de vidro secados em forno. As técnicas padrões de seringas foram usadas para a adição anidra dos líquidos. Salvo observação em contrário, todos os materiais de partida, solventes, e reagentes foram adquiridos de fornecedores comerciais e usados sem purificação adicional. A cromatografia flash foi efetuada usando sílica-gel de malha 230-400. Os compostos 1{1}, 1{2}, 1{3}, 1{4}, 1{5}, 1{6}, 2{24}, 2{25}, 2{26}, e PAC-1 foram sintetizados como anteriormente descrito.

[000134] Análise do Composto. Os experimentos de RMN foram registrados em CDCl3 (Sigma), CD3OD (Sigma) ou (CD3)2CO (Sigma) sobre um espectrômetro Varian Unity de 400 MHz ou 500 MHz com solvente não deuterado residual como a referência interna para os experimentos de RMN-1H e RMN-13C e 1% de CFCl3/CDCl3 como a referência externa para os experimentos de RMN-19F. O deslocamento químico, δ (ppm); as constantes de acoplamento, J (Hz); a multiplicidade (s = singlete, d = dublete, t = triplete, q = quarteto, m = multiplete, br = amplo); e a integração são descritos. O dado espectral de massa de alta resolução foi registrado sobre um espectrômetro de massa ESI quadrupolo/tempo de voo, híbrido, Micromass Q-Tof Ultima na University of Illinois Mass Spectrometry Laboratory.

[000135] Procedimento Geral A: Síntese das 1-benzilpiperazinas. A piperazina anidra (6,0 equiv.) foi suspensa em THF (halogeneto de benzila a 0,45 M). A mistura foi aquecida ao refluxo até que a piperazina se dissolvesse completamente. Com a dissolução, o halogeneto de benzila substituído (1,0 equiv.) foi adicionado à mistura de reação. Um sólido branco imediatamente se formou. A mistura de reação foi agitada ao refluxo por 2,5 horas. A mistura foi esfriada até a temperatura ambiente. O sólido foi filtrado e lavado com THF e EtOAc. Os filtrados combinados foram concentrados até 10% do volume original. O concentrado foi vertido em um funil separador com 5% de salmoura/H2O tornada básica (pH > 12) com KOH. A camada aquosa foi extraída com DCM e EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4, e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel para produzir a 1- benzilpiperazina pura.

[000136] Procedimento Geral B: Síntese dos ésteres etílicos. A 1- benzilpiperazina substituída (1,0 equiv.) foi dissolvida em acetona (0,5 M), e o clorofórmio foi adicionado a algumas misturas de reação, conforme necessário, para dissolver completamente a 1- benzilpiperazina. O NaHCO3 (1,25 equiv.) foi adicionado, e a mistura foi agitada na temperatura ambiente. O cloroacetato de etila (1,1 equiv.) foi então adicionado, gota a gota. A mistura de reação foi agitada durante a noite, ao refluxo. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente. O sólido foi filtrado e lavado com acetona. O filtrado foi concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel para produzir o éster etílico puro.

[000137] Procedimento Geral C: Síntese das hidrazidas. O 2-(4- benzilpiperazin-1-il)acetato de etila substituído (1,0 equiv.) foi dissolvido em EtOH (0,5 M). A solução foi agitada, e a hidrazina anidra (3,0-4,0 equiv.) foi adicionada, gota a gota. A mistura de reação foi agitada ao refluxo, durante a noite. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e concentrada. O concentrado foi transferido para um funil separador contendo salmoura:H2O a 1:1 tornada básica (pH > 12) com KOH. A camada aquosa foi extraída com DCM (3x) e EtOAc (1x). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4 e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel ou recristalização para produzir a hidrazida pura.

[000138] As 1-benzoilpiperazinas correspondentes podem ser preparadas por métodos análogos, por exemplo, conforme descrito e ilustrado neste documento, usando halogenetos de benzoília ou ácidos benzoicos opcionalmente substituídos, apropriados, e condições de formação de amidas, tais como uma base de amina (por exemplo, Et3N) ou EDC-HCl e DMAP.

[000139] Diversos métodos preparatórios úteis são descritos nas Publicações de Patentes U.S. Nos. 2011/0257398 (Hergenrother et al.), 2012/0040995 (Hergenrother et al.), e 2013/0096133 (Hergenrother et al.). A invenção é também dirigida aos compostos descritos nas publicações antes mencionadas, em que o nitrogênio da piperazina distal à porção de hidrazida é unido a uma carbonila em oposição a um metileno. Esquema B. Materiais de partida usados para a síntese de hidrazidas.

[000140] Um exemplo de um procedimento sintético geral é descrito abaixo. 1-(4-(terc-butil)benzil)piperazina (5{20})

[000141] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral A: brometo de 4-terc-butilbenzila (4{20}, 4,05 mL, 22,0 mmoles, 1 equiv.), piperazina (11,4 g, 132,1 mmoles, 6 equiv.), THF (48,1 mL). A purificação com cromatografia em coluna flash sobre sílica-gel (4:1 EtOAc:MeOH) proporcionou 5{ 20} (3,75 g, 73%) como um sólido bege. RMN-1H (500 MHz, CDCl3): δ 7,30 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,22 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,44 (s, 2H), 2,85 (t, 4H, J = 5,0 Hz), 2,38 (br s, 4H), 1,54 (br s, 1H), 1,29 (s, 9H). RMN-i3C (125 MHz, CDCh): δ 149,6, 134,7, 128,7, 124,8, 63,1, 54,3, 45,9, 34,2, 31,2. 2-(4-(4-(terc-Butil)benzil)piperazin-1-il)acetato de etila (6{20})

[000142] Sintetizado de acordo com o Procedimento Geral B: 5{20} (3,46 g, 14,9 mmoles, 1 equiv.), cloroacetato de etila (1,8 mL, 16,4 mmoles, 1,1 equiv.), NaHCO3 (1,56 g, 18,6 mmoles, 1,25 equiv.), acetona (29,8 mL), clorofórmio (10 mL). A purificação com cromatografia em coluna flash sobre sílica-gel (1:1 hexanos:EtOAc) proporcionou 6{20} (4,25 g, 90%) como um óleo laranja. RMN-1H (500 MHz, CDCl3): δ 7,31 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,21 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,16 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,48 (s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,58 (br s, 4H), 2,51 (br s, 4H), 1,29 (s, 9H), 1,24 (t, 3H, J = 7,0 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3): δ 170,1, 149,7, 134,7, 128,8, 124,9, 62,5, 60,4, 59,4, 53,0, 52,6, 34,3, 31,3, 14,1. 2-(4-(4-(terc-butil)benzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (1{20})

[000143] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral C: 6{20} (4,12 g, 12,9 mmoles, 1 equiv.), hidrazina anidra (1,2 mL, 38,8 mmoles, 3 equiv.), etanol (26,0 mL). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (4:1 EtOAc:MeOH) proporcionou 1{20} (3,36 g, 84%) como um sólido bege. RMN-1H (500 MHz, CDCh): δ 8,17 (br s, 1H), 7,31 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,85 (br s, 2H), 3,46 (s, 2H), 3,05 (s, 2H), 2,52 (br s, 4H), 2,45 (br s, 4H), 1,30 (s, 9H). RMN-i3C (125 MHz, CDCl3): δ 170,4, 149,9, 134,5, 128,7, 125,0, 62,4, 60,5, 53,5, 52,9, 34,3, 31,3. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-(terc-butil)benzil)piperazin- 1-il)aceto-hidrazida (3{20,24})

[000144] A uma solução agitada de hidrazida 1{20} (100 mg, 0,33 mmol, 1,0 equiv.) e aldeído 2{24} (53,5 mg, 0,33 mmol, 1,0 equiv.) em EtOH (2,2 mL, 0,15 M) foi adicionado o HCl a 1,2 M (7 mol%). A mistura de reação foi agitada ao refluxo durante a noite. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 010% de MeOH/EtOAc) para produzir3{20,24} (102,0 mg, 0,23 mmol, 68,9%) como um sólido marrom claro. RMN-1H (500 MHz, CDCl3): δ 11,31 (br s, 1H), 10,09 (br s, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,36 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,25 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,19 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,85 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,04 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,12-5,06 (m, 2H), 3,52 (s, 2H), 3,47 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,20 (s, 2H), 2,63 (br s, 4H), 2,54 (br s, 4H), 1,33 (s, 9H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3): δ 165,8, 156,3, 151,1, 150,0, 136,4, 134,6, 132,2, 129,1, 128,7, 128,1, 125,1, 118,9, 116,8, 115,6, 62,5, 60,9, 53,6, 53,0, 34,4, 33,8, 31,3. HRMS (ESI): 449,2915 (M+1); calc. para C27H37N4O2: 449,2917. Exemplo 3: Avaliação Biológica dos Análogos de PAC-1

[000145] Materiais. Todos os reagentes foram obtidos da Fisher, salvo indicação em contrário. Todos os tampões foram preparados com água purificada MilliQ. O Ac-DEVD-pNA foi sintetizado conforme anteriormente descrito.5 O caldo Luria (LB) foi obtido da EMD. A doxorrubicina foi obtida da Sigma. O Tampão de Atividade da Caspase contém HEPES a 50 mM, NaCl a 300 mM, TCEP a 1,5 mM, 0,01% de TritonX-100 e é tratado com Chelex®. O Tampão de Ligação de Ni NTA contém Tris a 50 mM (pH 8,0), NaCl a 300 mM, e imidazol a 10 mM. O Tampão de Lavagem de Ni NTA contém Tris a 50 mM (pH 8,0), NaCl a 300 mM, e imidazol a 50 mM. O Tampão de Eluição de Ni NTA contém Tris a 50 mM (pH 8,0), NaCl a 300 mM, e imidazol a 500 mM. O Tampão de Ligação de Anexina V contém HEPES a 10 mM pH 7,4, NaCl a 140 mM, CaCl2 a 2,5 mM, 0.1% de BSA. As proteínas de procaspase-3 marcadas com 6xHis C terminais foram expressas conforme abaixo descrito.

[000146] Cultura das Células. As células U-937 foram obtidas da American Type Culture Collection é mantidas em baixo número de passagem. As culturas foram mantidas em RPMI 1640, suplementado com 10% de soro bovino fetal e 1% de penicilina-estreptomicina, e desenvolvidas a 37 °C e 5% de CO2.

[000147] Ensaio da Morte Celular para o Exame Inicial. O composto (2 μL de uma solução de DMSO a 10 mM) foi adicionado em singlete por adição direta a um poço contendo 998 μL de células U-937 (1x106), em meio RPMI 1640 (10% de FBS), em uma concentração final do composto de 20 μM. Após incubação a 37 °C por 24 h, as células foram transferidas para os tubos de citometria de fluxo, lavadas, e suspensas novamente em tampão de ligação de Anexina V. As células foram duplamente tingidas com FITC-Anexina V e iodeto de propídio e uma população de células de pelo menos 10.000 eventos foi coletada pelo citômetro de fluxo LSR II. A porcentagem de células viáveis (Anexina V - negativas, iodeto de propídio - negativas) foi determinada usando o software FCS Express.

[000148] Ensaio da Morte Celular em IC50 por 72 Horas. As células de linfoma humano U-937 foram preparadas nos poços de uma placa de 96 poços, em uma densidade de 15.000 células por poço, em 99 μL de meio de crescimento RPMI 1640 com 10% de FBS e 1% de pen- estrep. A cada poço foi adicionado 1 μL das soluções de estoque dos compostos em DMSO, em concentrações variadas, de modo tal que as células fossem tratadas com concentrações entre 0 μM e 100 μM de composto. Cada concentração foi testada em quíntuplo por placa. Em cada placa, 5 poços receberam 20 μM de doxorrubicina como um controle de morte positivo e 5 poços receberam 1 μL de DMSO como um controle negativo. As placas foram então incubadas a 37 °C e 5% de CO2, por 72 horas.

[000149] Após o período de incubação de 72 horas, as placas foram analisadas usando um ensaio de Sulforrodamina B (Vichai e Kirtikara, Nat Protoc 2006, 1, 1112-1116). Especificamente, a cada poço da placa foram adicionados 25 μL de uma solução a 50% (p/v) de ácido tricloroacético em H2O e as placas foram incubadas por 4 horas, a 4°C. As placas foram então lavadas suavemente com água, cinco vezes. As placas foram deixadas secar ao ar, após o que 100 μL de uma Sulforrodamina B a 0,057% (p/v) em uma solução de ácido acético a 1% (v/v) foram adicionados a cada poço, por 30 minutos, na temperatura ambiente. As placas foram suavemente lavadas 5 vezes com 1% (v/v) de ácido acético e secadas ao ar. 200 μL de base Tris a 10 mM (pH 10,4) foram adicionados a cada poço e as placas foram colocadas sobre um agitador orbital por trinta minutos. O nível de SRB foi quantificado de modo fluorimétrico, em comprimentos de excitação e de emissão de 488 e 585 nm, respectivamente, sobre uma leitora de placas da Molecular Devices, e a porcentagem de morte celular calculada e normalizada para o controle positivo (100% de morte celular) e o controle negativo (0% de morte celular). Calculou-se a média da porcentagem de morte celular para cada concentração de composto e representou-se graficamente como uma função da concentração do composto. Os dados foram adaptados para uma curva de resposta à dose logística usando a curva da Tabela 2D e o valor de IC50 foi calculado. O experimento foi repetido três vezes e foi descrita a média dos valores de IC50 calculados. O erro padrão da média (SEM) foi determinado e descrito para os experimentos em triplicata.

[000150] Indução da Apoptose pelos Compostos de Sucesso. As células U-937 (1 mL de 6 x 105 células/mL) foram tratadas com 10 μL de soluções dos compostos em DMSO a 750 μM, para obter uma concentração final de 7,5 μM. As células foram incubadas a 37 °C por 24 horas. As células foram coletadas por meio de centrifugação (200g por 5 minutos), lavadas com PBS (2 mL), e suspensas novamente em 450 μL de Tampão de Ligação de Anexina V. A cada amostra foram adicionados 3,5 μL de corante de Anexina V conjugado ao FITC (Southern Biotech) e 3,5 μL de iodeto de propídio (Sigma) até uma concentração final de 50 μg/mL. As populações de células foram analisadas sobre um citômetro de fluxo de células LSR II da Benton Dickinson.

[000151] Expressão Recombinante e Purificação da Procaspase- 3. Técnicas adaptadas de Hergenrother e colaboradores (Putt et al., Nat Chem Biol 2006, 2, 543-550). Um volume de 20 mL de uma cultura da noite para o dia de Rosetta E. coli contendo o plasmídeo de expressão de procaspase-3 (tipo selvagem) foi semeado em 2 L de meio LB contendo ampicilina. A cultura foi desenvolvida até uma DO600 = 1,0, em cujo ponto a expressão da proteína foi induzida por meio da adição de IPTG (até 1 mM); a cultura foi deixada se desenvolver por 30 minutos adicionais. As células foram então coletadas (rotações de 10 minutos a 10.000xg e suspensas novamente em tampão de ligação de NTA (NaCl a 300 mM, Tris a 50 mM, imidazol a 10 mM, pH 8,0). As células foram lisadas sobre gelo por meio de sonicação. O lisado de células foi então girado a 35.000xg por 35 min. O sobrenadante foi decantado e 1 mL de resina de níquel-NTA foi adicionado. O lisado de células foi incubado por 45 minutos a 4°C. A resina foi carregada sobre uma coluna, lavada com 10 mL de tampão de ligação de NTA, seguidos por 10 mL de tampão de lavagem de NTA (NaCl a 300 mM, Tris a 50 mM, imidazol a 50 mM, pH 8,0). As proteínas foram eluídas em frações de 0,5 mL com 10 mL de tampão de eluição de NTA (NaCl a 300 mM, Tris a 50 mM, imidazol a 500 mM, pH 8,0). As frações contendo a proteína foram reunidas e adicionalmente purificadas para remover qualquer zinco contaminante, por aplicação da proteína a uma coluna PD-10 (GE Healthcare) carregada com Tampão de Atividade da Caspase que tinha sido tratado com a resina Chelex®. A concentração resultante foi determinada usando o método de Edelhock e a absortividade molar da procaspase-3 de 26150 M-1 cm-1. Os estoques de proteínas foram congelados instantaneamente em nitrogênio líquido e armazenados a - 80°C.

[000152] Ensaio da Atividade da Procaspase-3. Em uma placa de 384 poços expressa de modo recombinante, a procaspase-3 isenta de zinco (tipo selvagem, a 1 μM) em Tampão de Atividade da Caspase (HEPES a 50 mM, NaCl a 300 mM, TCEP a 1,5 mM, 0,01% de TritonX- 100) foi incubada a 37 °C na presença de ZnSO4 a 3,5 μM e a atividade basal foi avaliada por meio da adição de Ac-DEVD-pNA (concentração final no poço de 200 μM). A absorbância a 405 nm foi monitorada com uma leitora de placas SpectraMax (Molecular Devices). Após a atividade basal ser determinada, o DMSO, o PAC-1 e os análogos foram adicionados a cada amostra, até uma concentração final de 25 μM. A atividade de cada tratamento foi avaliada em 5, 20, 40 e 60 minutos por meio das leituras cinéticas por 5 minutos. A inclinação de cada conjunto de dados foi usada para determinar a atividade da proteína. A atividade foi normalizada para uma porcentagem de atividade em cada ponto de tempo usando uma amostra isenta de zinco e uma amostra com o zinco inibido tratada com DMSO. Exemplo 4. Preparação do Composto

[000153] Materiais e Métodos. Geral Todas as reações que requereram condições anidras foram conduzidas sob uma atmosfera positiva de nitrogênio ou argônio em artigos de vidro secados em forno. As técnicas padrões de seringas foram usadas para a adição anidra dos líquidos. Salvo observação em contrário, todos os materiais de partida, solventes, e reagentes foram adquiridos de fornecedores comerciais e usados sem purificação adicional. A cromatografia flash foi efetuada usando sílica-gel de malha 230-400. As sínteses de 46a,1 46b,2 46h,3 47a,2 50,2 PAC-1 (1),1 e S-PAC-1 (2)2 foram descritas anteriormente.

[000154] Análise do Composto. Os experimentos de RMN foram registrados em CDCl3 (Sigma ou Cambridge), CD3OD (Sigma) ou (CD3)2CO (Sigma ou Cambridge) sobre um espectrômetro Varian Unity de 500 MHz com solvente não deuterado residual como a referência interna para a RMN-1H e a RMN-13C, e C6F6 como a referência interna para a RMN-19F. O deslocamento químico, δ (ppm); as constantes de acoplamento, J (Hz); a multiplicidade (s = singlete, d = dublete, t = triplete, q = quarteto, quint = quinteto, sext = sexteto, m = multiplete, br = amplo); e a integração são descritos. O dado espectral de massa de alta resolução foi registrado sobre um espectrômetro de massa ESI quadrupolo/tempo de voo, híbrido, Micromass Q-Tof Ultima ou um Micromass 70-VSE na University of Illinois Mass Spectrometry Laboratory.

[000155] Procedimento Geral A: Síntese de piperazinas dialquiladas. A um frasco de fundo redondo foram adicionados o halogeneto de benzila (1,0 equiv.), o K2CO3 (3,0 equiv.), e a acetona (0,2 M). A mistura foi agitada, e 50 (1,5 equiv.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada ao refluxo durante a noite. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente. O sólido foi filtrado e lavado com acetona. O filtrado foi concentrado, e o produto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel.

[000156] Procedimento Geral B: Síntese das amidas. A um frasco de fundo redondo secado em forno foram adicionados 50 (1,0 equiv.), o tetraidrofurano anidro (0,2 M), e a Et3N recentemente destilada (2,0 equiv.). A solução foi agitada a 0°C sob N2, e o cloreto de benzoíla (1,0 equiv.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite, na temperatura ambiente, sob N2. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e lavada com NaHCO3 sat. (2x), H2O, e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel.

[000157] Procedimento Geral C: Síntese das hidrazidas. A um frasco de fundo redondo foram adicionados o éster etílico (1,0 equiv.) e o EtOH ou EtOH:MeOH a 2:1 (0,5 M). A solução foi agitada, e a hidrazina anidra (4,0 equiv.) foi adicionada, gota a gota. A mistura de reação foi agitada ao refluxo durante a noite. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada. O resíduo resultante foi dividido entre CH2Cl2/salmoura:KOH a 0,1 M a 1:1. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (2x). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas. A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel ou a recristalização produziram a hidrazida pura. 2-(4-Benzoilpiperazin-1-il)acetato de etila (51c)

[000158] Sintetizado de acordo com o Procedimento Geral B: 50 (2,45 g, 14,2 mmoles, 1,0 equiv.), tetraidrofurano anidro (70 mL, 0,2 M), Et3N recentemente destilada (4,0 mL, 28,4 mmoles, 2,0 equiv.), cloreto de benzoíla (54c, 2,0 g, 1,7 mL, 1,0 equiv.). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (50-100% de EtOAc/hexanos) proporcionou 51c (2,87 g, 73,1%) como um óleo amarelo claro. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 7,41-7,38 (m, 5H), 4,19 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,85 (br s, 2H), 3,48 (br s, 2H), 3,25 (s, 2H), 2,68 (br s), 2,54 (br s, 2H), 1,27 (t, 3H, J = 7,0 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCh)δ 170,5, 170,2, 135,9, 129,9, 128,7, 127,3, 61,0, 59,4, 53,3 (br), 52,8 (br), 47,8 (br), 42,1 (br), 14,4. HRMS (ESI): 277,1552 (M+1); calc. para C15H21N2O3: 277,1552. 2-(4-benzoilpiperazin-1-il)aceto-hidrazida (46c) o

[000159] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral C: 51c (2,87 g, 10,4 mmoles, 1,0 equiv.), hidrazina anidra (1,31 mL, 41,6 mmoles, 4,0 equiv.), EtOH (20 mL, 0,5 M). 46c (1,41 g, 51,5%) foi obtida como um sólido branco após extração, sem purificação adicional. RMN- 1H (500 MHz, CDCl3) δ 8,10 (s, 1H), 7,39-7,34 (m, 5H), 3,84 (br s, 2H), 3,77 (br s, 2H), 3,43 (br s, 2H), 3,08 (s, 2H), 2,56 (br s, 2H), 2,44 (br s, 2H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 170,5, 169,9, 135,5, 130,0, 128,7, 127,1, 60,6, 53,9 (br), 53,4 (br), 47,7 (br), 42,2 (br). HRMS (ESI): 263,1513 (M+1); calc. para C13H19N4O2: 263,1508. 2-(4-(4-Cianobenzil)piperazin-1-il)acetato de etila (51d)

[000160] Sintetizado de acordo com o Procedimento Geral A: 4- (bromometil)benzonitrila (54d, 2,0 g, 10,2 mmoles, 1,0 equiv.), 50 (2,64 g, 15,3 mmoles, 1,5 equiv.), K2CO3 (4,22 g, 30,6 mmoles, 3,0 equiv.), acetona (50 mL, 0,2 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (50-100% de EtOAc/hexanos) proporcionou 51d (2,71 g, 92,3%) como um sólido amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 7,60 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 4,18 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,55 (s, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,61 (br s, 4H), 2,51 (br s, 4H), 1,26 (t, 3H, J = 7,0 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 170,4, 144,4, 132,3, 129,7, 119,2, 111,0, 62,5, 60,8, 59,6, 53,1, 53,1, 14,4. HRMS (ESI): 288,1718 (M+1); calc. para C16H22N3O2: 288,1712. 2-(4-(4-cianobenzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (46d)

[000161] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral C: 51d (2,71 g, 9,43 mmoles, 1,0 equiv.), hidrazina anidra (1,18 mL, 37,7 mmoles, 4,0 equiv.), EtOH (19 mL, 0,5 M). A 46d (1,73 g, 67,1%) foi obtida como um sólido não totalmente branco após extração sem purificação adicional. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 8,10 (br s, 1H), 7,60 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,84 (br d, 2H, J = 5,0 Hz), 3,55 (s, 2H), 3,08 (s, 2H), 2,55 (br s, 4H), 2,46 (br s, 4H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 170,6, 144,1, 132,4, 129,6, 119,1, 111,2, 62,5, 60,8, 53,8, 53,3. HRMS (ESI): 274,1673 (M+1); calc. para C14H20N5O: 274,1668. 2-(4-(4-Cianobenzoil)piperazin-1-il)acetato de etila (51e) O

[000162] Sintetizado de acordo com o Procedimento Geral B: 50 (5,20 g, 30,2 mmoles, 1,0 equiv.), tetraidrofurano anidro (150 mL, 0,2 M), Et3N recentemente destilada (8,4 mL, 60,4 mmoles, 2,0 equiv.), cloreto de 4- cianobenzoíla (54e, 5,0 g, 30,2 mmoles, 1,0 equiv.). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (0-10% de MeOH/EtOAc) proporcionou 51e (5,95 g, 65,4%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 7,68 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,47 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 4,14 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,80 (br s, 2H), 3,37 (br s, 2H), 3,23 (s, 2H), 2,67 (br s, 2H), 2,53 (br s, 2H), 1,23 (t, 3H, J = 7,0 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCh) δ 170,0, 168,3, 140,1, 132,5, 127,9, 118,2, 113,6, 60,9, 59,0, 52,9, 52,3, 47,5, 42,1, 14,3. HRMS (ESI): 302,1501 (M+1); calc. para C16H20N3O3: 302,1505. 2-(4-(4-cianobenzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (46e) o

[000163] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral C com a modificação conforme observada: 51e (5,59 g, 18,6 mmoles, 1,0 equiv.), hidrazina anidra (2,4 mL, 74,4 mmoles, 4,0 equiv.), EtOH (35 mL, 0,5 M). Após extração com CH2Cl2, a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x). A 46e (2,98 g, 55,8%) foi obtida como um sólido não totalmente branco após a extração, sem purificação adicional. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 8,02 (br s, 1H), 7,70 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,86 (br d, 2H, J = 3,5 Hz), 3,78 (br s, 2H), 3,37 (br s, 2H), 3,11 (s, 2H), 2,60 (br s, 2H), 2,46 (br s, 2H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 169,8, 168,4, 139,8, 132,6, 127,9, 118,1, 113,8, 60,6, 53,8 (br), 53,3 (br), 47,6 (br), 42,2 (br). HRMS (ESI): 288,1464 (M+1); calc. para C14H18N5O2: 288,1461. 2-(4-(4-Fluorbenzil)piperazin-1-il)acetato de etila (51f)

[000164] Sintetizado de acordo com o Procedimento Geral A: cloreto de 4-fluorbenzila (54f, 2,5 g, 2,1 mL, 17,3 mmoles, 1,0 equiv.), 50 (4,48 g, 26,0 mmoles, 1,5 equiv.), K2CO3 (7,19 g, 52,0 mmoles, 3,0 equiv.), acetona (90 mL, 0,2 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 50-100% de EtOAc/hexanos) proporcionou o 51f (3,66 g, 75,4%) como um óleo amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 7,24-7,20 (m, 2H), 6,95-6,91 (m, 2H), 4,13 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,42 (s, 2H), 3,15 (s, 2H), 2,55 (br s, 4H), 2,46 (br s, 4H), 1,21 (t, 3H, J = 7,0 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCI3) δ 170,3, 162,0 (d, JC-F = 243,5 Hz), 133,9, 130,6 (d, JC-F = 8,0 Hz), 115,0 (d, JC-F = 21,0 Hz), 62,2, 60,6, 59,6, 53,1, 52,8, 14,3. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -119,1. HRMS (ESI): 281,1659 (M+1); calc. para c15H22FN2O2: 281,1665. 2-(4-(4-fluorbenzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (46f)

[000165] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral c: 51f (3,0 g, 10,7 mmoles, 1,0 equiv.), hidrazina anidra (1,4 mL, 42,8 mmoles, 4,0 equiv.), EtOH (20 mL, 0,5 M). A 46f (2,59 g, 91,1%) foi obtida como um sólido branco após extração, sem purificação adicional. RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ 8,15 (br s, 1H), 7,22-7,19 (m, 2H), 6,95-6,91 (m, 2H), 3,84 (br s, 2H), 3,40 (s, 2H), 3,01 (s, 2H), 2,47 (br s, 4H), 2,39 (br s, 4H). RMN-13c (125 MHz, cDcl3) δ 170,5, 162,0 (d, Jc-F = 243,6 Hz), 133,7 (d, Jc-F = 2,8 Hz), 130,6 (d, Jc-F = 8,3 Hz), 115,1 (d, Jc-F = 21,1 Hz), 62,0, 60,6, 53,7, 53,0. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -118,9. HRMS (ESI): 267,1630 (M+1); calc. para c13H20FN4O: 267,1621. 2-(4-(4-Fluorbenzoil)piperazin-1-il)acetato de etila (51g)

[000166] Sintetizado de acordo com o Procedimento Geral B: 50 (2,58 g, 15,0 mmoles, 1,0 equiv.), tetraidrofurano anidro (30 mL, 0,5 M), Et3N recentemente destilada (4,2 mL, 30,0 mmoles, 2,0 equiv.), cloreto de 4- fluorbenzoíla (54g, 1,8 mL, 15,0 mmoles, 1,0 equiv.). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (50-100% de EtOAc/hexanos) proporcionou o 51g (3,74 g, 84,7%) como um óleo amarelo claro. RMN- 1H (500 MHz, cDcl3) δ RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ 7,38-7,34 (m, 2H), 7,06-7,01 (m, 2H), 4,13 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,77 (br s, 2H), 3,43 (br s, 2H), 3,21 (s, 2H), 2,61 (br s, 2H), 2,52 (br s, 2H), 1,22 (t, 3H, J = 7,0 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCI3) δ 170,0, 169,4, 163,5 (d, JC-F = 248,1 Hz), 131,8, 129,5 (d, JC-F = 8,3 Hz), 115,6 (d, JC-F = 22,0 Hz), 60,8, 59,1, 52,8 (br), 47,8 (br), 42,2 (br), 14,3. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -113,4. HRMS (ESI): 295,1457 (M+1); calc. para c15H20FN2O3: 295,1458. 2-(4-(4-fluorbenzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (46g)

[000167] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral c: 51g (3,73 g, 12,7 mmoles, 1,0 equiv.), hidrazina anidra (1,6 mL, 50,8 mmoles, 4,0 equiv.), EtOH (25 mL, 0,5 M). A 46g (2,28 g, 64,1%) foi obtida como um sólido branco após extração, sem purificação adicional. RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ 8,09 (br s, 1H), 7,37-7,33 (m, 2H), 7,06-7,02 (m, 2H), 3,85 (br s, 2H), 3,70 (br s, 2H), 3,42 (br s, 2H), 3,06 (s, 2H), 2,48 (br s, 4H). RMN-13c (125 MHz, cDcl3) δ 169,8, 169,5, 163,5 (d, Jc-F = 249,1 Hz), 131,5 (d, Jc-F = 2,8 Hz), 129,4 (d, Jc-F = 9,1 Hz), 115,7 (d, Jc-F = 22,0 Hz), 60,6, 53,5 (br), 47,7 (br), 42,3 (br). RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -113,1. HRMS (ESI): 281,1409 (M+1); calc. para c13H18FN4O2: 281,1414. 2-(4-(4-(trifluormetil)benzoil)piperazin-1-il)acetato de etila (51i) O

[000168] Sintetizado de acordo com o Procedimento Geral B: 50 (2,58 g, 15,0 mmoles, 1,0 equiv.), tetraidrofurano anidro (30 mL, 0,5 M), Et3N recentemente destilada (4,2 mL, 30,0 mmoles, 2,0 equiv.), cloreto de 4- (trifluormetil)benzoíla (54i, 2,2 mL, 15,0 mmoles, 1,0 equiv.). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (50-100% de EtOAc/hexanos) proporcionou o 51i (4,01 g, 77,5%) como um óleo amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 7,65 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 4,16 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,82 (br s, 2H), 3,41 (br s, 2H), 3,24 (s, 2H), 2,68 (br s, 2H), 2,54 (br s, 2H), 1,24 (t, 3H, J = 7,0 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCh)δ 170,1, 168,9, 139,4 131,8 (q, JC-F = 32,6 Hz), 127,6, 125,7 (q, JC-F = 3,8 Hz), 123,8 (q, JC-F = 271,0 Hz), 60,9, 59,1, 53,0 (br), 52,5 (br), 47,6 (br), 42,2 (br), 14,3. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -66,0. HRMS (ESI): 345,1430 (M+1); calc. para c16H20F3N2O3: 345,1426. 2-(4-(4-(trifluormetil)benzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (46i) o

[000169] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral c: 51i (4,00 g, 11,6 mmoles, 1,0 equiv.), hidrazina anidra (1,5 mL, 46,4 mmoles, 4,0 equiv.), EtOH (25 mL, 0,5 M). A 46i (2,35 g, 61,4%) foi obtida como um sólido branco após extração, sem purificação adicional. RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ 8,09 (br s, 1H), 7,62 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,45 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 3,88 (br s, 2H) 3,75 (br s, 2H), 3,35 (br s, 2H), 3,07 (s, 2H), 2,56 (br s, 2H), 2,42 (br s, 2H). RMN-13c (125 MHz, cDcl3)δ 169,8, 168,9, 139,1 131,8 (q, Jc-F = 32,1 Hz), 127,5, 125,7 (q, Jc-F = 3,6 Hz), 123,7 (q, Jc-F = 271,1 Hz), 60,5, 53,7 (br), 53,2 (br), 47,6 (br), 42,2 (br). RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -66,0. HRMS (ESI): 331,1374 (M+1); calc. para c14H18F3N4O2: 331,1382. 3-propilsalicilaldeído (47b)

[000170] A um frasco de fundo redondo foram adicionados o aldeído 47a (1,62 g, 10,0 mmoles, 1,0 equiv.), 5% de Pd/c (324 mg, 20 % em peso de 47a), o sulfeto de difenila (17 μL, 0,10 mmol, 0,010 equiv.), e o EtOAc (40 mL, 0,25 M). A mistura de reação foi agitada durante a noite, na temperatura ambiente, sob uma atmosfera de H2 (pressão de balão). A mistura de reação foi filtrada através de Celite e lavada completamente com EtOAc. O filtrado foi concentrado para proporcionar o aldeído 47b (1,50 g, 91,7%) como um óleo amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,27 (s, 1H), 9,88 (s, 1H), 7,41-7,38 (m, 2H), 6,95 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 2,64 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 1,65 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,96 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 197,0, 160,0, 137,4, 131,7, 131,4, 120,4, 119,6, 31,3, 22,7, 14,1. HRMS (EI): 164,08383 (M+); calc. para C10H12O2: 164,08373. 2-(alilóxi)-5-fluorbenzaldeído (53b)

[000171] A um frasco de fundo redondo foram adicionados o 5- fluorsalicilaldeído (47c, 4,0 g, 28,5 mmoles, 1,0 equiv.), o carbonato de potássio (4,92 g, 35,6 mmoles, 1,25 equiv.), e a DMF (20 mL). O brometo de alila (3,7 mL, 42,8 mmoles, 1,5 equiv.) foi adicionado lentamente à mistura. A mistura de reação foi agitada durante a noite, na temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 25 mL), KOH a 0,1M (2 x 25 mL), água (2 x 25 mL), e salmoura (2 x 25 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, e concentradas para produzir o 53b (4,64 g, 90,2%) como um líquido amarelo claro. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 10,47 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 7,50 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 7,23 (ddd, 1H, J = 3,0, 7,5, 11,0 Hz), 6,95 (dd, 1H, J = 4,0, 9,0 Hz), 6,06 (tdd, 1H, J = 5,0, 10,5, 17,5 Hz), 5,44 (qd, 1H, J = 1,5, 17,0 Hz), 5,34 (ddd, 1H, J = 1,5, 2,5, 10,5 Hz), 4,64 (td, 2H, J = 1,5, 5,0 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 188,8, 157,4 (d, JC-F = 1,9 Hz), 157,2 (d, JC-F = 240,5 Hz), 132,4, 126,1 (d, JC-F = 5,9 Hz), 122,6 (d, JC-F = 23,8 Hz), 118,5, 114,8 (d, JC-F = 7,1 Hz), 114,2 (d, JC-F = 23,1 Hz), 70,1. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -125,5. HRMS (EI): 180,05789 (M+); calc. para C10H9FO2: 180,05866. 3-alil-5-fluorsalicilaldeído (47d)

[000172] O 53b (4,64 g, 25,8 mmol) foi aquecido puro durante a noite, a 200°C. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (hexanos) para produzir o 47d (2,24 g, 48,3%) como um óleo amarelo brilhante. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 11,10 (s, 1H), 9,83 (s, 1H), 7,17 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 7,11 (dd, 1H, J = 3,0, 7,5 Hz) 5,96 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 17,0 Hz), 5,16-5,14 (m, 1H), 5,12 (qd, 1H, J = 1,5, 11,0 Hz), 3,42 (d, 2H, J = 6,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 195,9 (d, JC-F = 2,5 Hz), 156,0 (d, JC-F = 1,0 Hz), 155,7 (d, JC-F = 238,8 Hz), 135,1, 131,6 (d, JC-F = 6,4 Hz), 124,8 (d, JC-F = 23,6 Hz), 119,8 (d, JC-F = 6,4 Hz), 117,3, 116,0 (d, JC-F = 22,3 Hz), 33,2. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -126,9. HRMS (EI): 180,05761 (M+); calc. para C10H9FO2: 180,05866. 5-flúor-2-hidróxi-3-propilbenzaldeído (47e)

[000173] A um frasco de fundo redondo foram adicionados o aldeído 47d (1,10 g, 6,11 mmoles, 1,0 equiv.), 5% de Pd/C (220 mg, 20 % em peso de 47d), o sulfeto de difenila (10 μL, 0,061 mmol, 0,010 equiv.), e o EtOAc (25 mL, 0,25 M). A mistura de reação foi agitada durante a noite, na temperatura ambiente, sob uma atmosfera de H2 (pressão de balão). A mistura de reação foi filtrada através de Celite e lavada completamente com EtOAc. O filtrado foi concentrado para proporcionar o aldeído 47e (991 mg, 89,3%) como um óleo amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,06 (br s, 1H), 9,80 (s, 1H), 7,12 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 7,06 (dd, 1H, J = 3,0, 7,5 Hz), 2,62 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 1,63 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,96 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 195,9 (d, JC-F = 2,5 Hz), 156,3 (d, JC-F = 1,0 Hz), 155,5 (d, JC-F = 238,1 Hz), 133,9 (d, JC-F = 6,3 Hz), 124,7 (d, JC-F = 23,1 Hz), 119,6 (d, JC-F = 6,5 Hz), 115,4 (d, JC-F = 22,4 Hz), 31,2, 22,4, 14,0. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -127,3. HRMS (EI): 182,07392 (M+); calc. para C10H11FO2: 182,07431. Procedimento Geral D: Síntese dos análogos de PAC-1

[000174] A um tubo de teste de 16 x 150 mm foram adicionados a hidrazida (1,0 equiv), o aldeído (1,0 equiv), o EtOH ou MeOH:MeCN a 2:1 (0,15 M), e o HCl a 1,2 M (7 moles%). A mistura de reação foi agitada durante a noite, ao refluxo, sobre um sintetizador paralelo Büchi Syncore. A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente, concentrada, e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel ou recristalização para produzir o análogo de PAC-1 puro. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-benzoilpiperazin-1-il)aceto- hidrazida (3)

[000175] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D, porém em um frasco de fundo redondo: 46c (262 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), 47a (162 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (58 μL, 0,070 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (7 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-10% de MeOH/EtOAc) produziu 3 (284 mg, 69,8%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,19 (s, 1H), 9,94 (br s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,46-7,41 (m, 5H), 7,20 (d, 1H, J = 6,5 Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,85 (t, 1H, J = 7,0 Hz), 6,03 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,10-5,05 (m, 2H), 3,88 (br s, 2H), 3,58 (s, 2H), 3,52 (br s, 2H), 3,45 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,25 (s, 2H), 2,68 (br s, 2H), 2,61 (br s, 2H). RMN-13C (125 MHz, CDCI3) δ 170,6, 165,4, 156,4, 151,6, 136,5, 135,4, 132,5, 130,2, 129,3, 128,8, 128,3, 127,1, 119,2, 116,9, 115,8, 61,0, 53,7, 53,1, 47,6, 42,1, 33,9. HRMS (ESI): 407,2077 (M+1); calc. para C23H27N4O3: 407,2083. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-cianobenzil)piperazin-1- il)aceto-hidrazida (4)

[000176] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: 46d (273 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), 47a (162 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (58 μL, 0,070 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (7 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 4 (367 mg, 87,7%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,25 (br s, 1H), 9,99 (br s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,61 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,18 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 7,07 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,84 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,02 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,11-5,04 (m, 2H), 3,58 (s, 2H), 3,44 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 3,19 (s, 2H), 2,63 (br s, 4H), 2,53 (br s, 4H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 165,9, 156,5, 151,5, 144,0, 136,6, 132,5, 132,4, 129,6, 129,3, 128,4, 119,2, 119,1, 117,0, 115,8, 111,2, 62,4, 61,1, 53,8, 53,2, 34,0. HRMS (ESI): 418,2242 (M+1); calc. para C24H28N5O2: 418,2243. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-cianobenzoil)piperazin-1- il)aceto-hidrazida (5)

[000177] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: 46e (287 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), 47a (162 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (58 μL, 0,070 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (7 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 010% de MeOH/EtOAc) produziu 5 (378 mg, 87,6%) como um sólido amarelo claro. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 11,23 (br s, 1H), 9,98 (br s, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,69 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,17 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 6,99 (dd, 1H, J = 1,5, 8,0 Hz), 6,81 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 5,98 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 17,0), 5,08-5,02 (m, 2H), 3,85 (br s, 2H), 3,42-3,39 (m, 4H), 3,23 (s, 2H), 2,68 (br s, 2H), 2,86 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 168,4, 165,3, 156,4, 151,7, 139,7, 136,5, 132,6, 132,6, 129,4, 128,2, 127,9, 119,3, 118,1, 116,8, 115,9, 113,8, 60,9, 53,7 (br), 53,3 (br), 47,5 (br), 42,1 (br), 33,9. HRMS (ESI): 432,2034 (M+1); calc. para C24H26N5O3: 432,2036. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-fluorbenzil)piperazin-1- il)aceto-hidrazida (6)

[000178] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H11 (133 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47a (81 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 010% de MeOH/EtOAc), seguida por precipitação a partir de Et2O, produziu 6 (182 mg, 89,0%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,26 (br s, 1H), 10,02 (br s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,29-7,26 (m, 2H), 7,19 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 7,08 (dd, 1H, J = 1,5, 8,0 Hz), 7,02- 6,99 (m, 2H), 6,85 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,03 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,11-5,04 (m, 2H), 3,50 (s, 2H), 3,45 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,19 (s, 2H), 2,62 (br s, 4H), 2,51 (br s, 4H). RMN-13C (125 MHz, CDCh) δ 166,0, 162,2 (d, JC-F = 243,9 Hz), 156,6, 151,5, 136,7, 133,7 (d, JC-F = 3,1 Hz), 132,5, 130,7 (d, JC-F = 7,8 Hz), 129,3, 128,4, 119,2, 117,0, 115,8, 115,3 (d, JC-F = 21,0 Hz), 62,2, 61,2, 53,9, 53,1, 34,0. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -118,8. HRMS (ESI): 411,2203 (M+1); calc. para C23H28FN4O2: 411,2196. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-fluorbenzoil)piperazin-1- il)aceto-hidrazida (7)

[000179] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H12 (140 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47a (81 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 010% de MeOH/EtOAc) produziu 7 (171 mg, 80,5%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,19 (br s, 1H), 9,91 (br s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,43-7,40 (m, 2H), 7,19 (dd, 1H, J = 1,0, 7,5 Hz), 7,12-7,09 (m, 2H), 7,06 (dd, 1H, J = 1,5, 8,0 Hz), 6,85 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,02 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,10-5,04 (m, 2H), 3,69 (br s, 4H), 3,44 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,24 (s, 2H), 2,64 (br s, 4H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 169,6, 165,4, 163,6 (d, JC-F = 249,1 Hz), 156,4, 151,6, 136,5, 132,5, 131,4 (d, JC-F = 3,4 Hz), 129,5 (d, JC-F = 8,4 Hz), 129,3, 128,2, 119,2, 116,8, 115,8, 115,8 (d, JC-F = 21,5 Hz), 60,9, 53,6 (br), 47,7 (br), 42,3 (br), 33,9. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -112,8. HRMS (ESI): 425,1989 (M+1); calc. para C23H26FN4O3: 425,1989. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (8)

[000180] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H13 (158 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47a (81 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 8 (125 mg, 54,4%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,32 (br s, 1H), 10,11 (br s, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,17 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 7,04 (dd, 1H, J = 1,5, 8,0 Hz), 6,83 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,02 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,10-5,04 (m, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,44 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 3,19 (s, 2H), 2,63 (br s, 4H), 2,53 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCh) δ 166,0, 156,4, 151,2, 142,4, 136,6, 132,4, 129,5 (q, JC-F = 32,0 Hz), 129,3, 129,3, 128,3, 125,3 (q, JC-F = 3,8 Hz), 123,9 (q, JC-F = 270,6 Hz), 119,2, 117,0, 115,8, 62,3, 61,0, 53,7, 53,1, 34,0. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -65,4. HRMS (ESI): 461,2160 (M+1); calc. para C24H28F3N4O2: 461,2164. N'-(3-alil-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (9)

[000181] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H14 (165 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47a (81 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 9 (211 mg, 89,1%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,28 (br s, 1H), 10,13 (br s, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,65 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,15 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,94 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 6,79 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 5,97 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 17,0 Hz), 5,05-5,00 (m, 2H), 3,86 (br s, 2H), 3,43 (br s, 2H), 3,39 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,21 (s, 2H), 2,66 (br s, 2H), 2,58 (br s, 2H). RMN-13C (125 MHz, CDCI3) δ 169,0, 165,4, 156,3, 151,5, 139,0, 136,4, 132,5, 131,9 (q, JC-F = 32,6 Hz), 129,3, 128,2, 127,5, 125,8 (q, JC- F = 3,5 Hz), 123,7 (q, JC-F = 271,1 Hz), 119,3, 116,8, 115,8, 60,8, 53,5 (br), 47,5 (br), 42,0 (br), 33,8. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -66,0. HRMS (ESI): 475,1964 (M+1); calc. para C24H26F3N4O3: 475,1957. 2-(4-benzilpiperazin-1-il)-N'-(2-hidróxi-3-propilbenzilideno)aceto- hidrazida (10)

[000182] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D, porém em um frasco de fundo redondo: 46a (248 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), 47b (164 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (58 μL, 0,070 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (7 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 10 (345 mg, 87,3%) como um sólido não totalmente branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,30 (s, 1H), 10,12 (br s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,35-7,30 (m, 4H), 7,30-7,25 (m, 1H), 7,17 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,03 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 6,82 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,54 (s, 2H), 3,19 (s, 2H), 2,67 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,62 (br s, 4H), 2,54 (br s, 4H), 1,67 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,97 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 165,9, 156,7, 151,2, 137,9, 132,5, 130,7, 129,2, 128,8, 128,4, 127,3, 118,9, 116,8, 62,9, 61,0, 53,7, 53,0, 32,0, 22,7, 14,2. HRMS (ESI): 395,2436 (M+1); calc. para C23H31N4O2: 395,2447. 4-((4-(2-(2-(2-hidróxi-3-propilbenzilideno)hydrazinil)-2- oxoetil)piperazin-1-il)metil)benzenossulfonamida (11)

[000183] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H2 (164 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47b (82 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), MeOH:MeCN a 2:1 (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 11 (211 mg, 89,0%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, (CD3)2CO) δ 11,78 (s, 1H), 10,76 (br s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,84 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,51 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,17 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 7,14 (dd, 1H, J = 1,5, 8,0 Hz), 6,82 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,54 (br s, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,17 (s, 2H), 2,64-2,59 (m, 6H), 2,52 (br s, 4H), 1,63 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,93 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN- i3C (125 MHz, (CD3)2CO) δ 166,3, 157,3, 150,9, 144,0, 143,8, 132,7, 130,8, 129,9, 129,6, 126,9, 119,6, 118,3, 62,6, 61,7, 54,3, 53,6, 32,5, 23,4, 14,2. HRMS (ESI): 474,2175 (M+1); calc. para C23H32N5O4S: 474,2175. 2-(4-benzoilpiperazin-1-il)-N'-(2-hidróxi-3-propilbenzilideno)aceto- hidrazida (12)

[000184] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H3 (131 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47b (82 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 50100% de EtOAc/hexanos, então 5% de MeOH/EtOAc) produziu 12 (174 mg, 85,5%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,29 (s, 1H), 10,29 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,41-7,34 (m, 5H), 7,13 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,90 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,76 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,80 (br s, 2H), 3,47 (br s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,71-2,52 (m, 6H, Ar-CH2- CH), 1,61 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,91 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 170,5, 165,5, 156,6, 151,5, 135,3, 132,5, 130,6, 130,1, 128,8, 128,7, 127,0, 118,9, 116,7, 60,8, 53,6 (br), 53,0 (br), 47,5 (br), 42,0 (br), 31,9, 22,7, 14,1. HRMS (ESI): 409,2238 (M+1); calc. para C23H29N4O3: 409,2240. 2-(4-(4-cianobenzil)piperazin-1-il)-N'-(2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (13)

[000185] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H9 (273 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), 47b (164 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (58 μL, 0,070 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (7 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-15% fr MeOH/EtOAc) produziu 13 (373 mg, 88,8%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,19 (br s, 1H), 9,99 (br s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,60 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,16 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 7,04 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,82 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,58 (s, 2H), 3,19 (s, 2H), 2,66-2,63 (m, 6H), 2,52 (br s, 4H), 1,64 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,95 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 165,8, 156,8, 151,6, 144,0, 132,7, 132,3, 130,8, 129,6, 128,9, 119,1, 119,0, 116,8, 111,2, 62,4, 61,1, 53,8, 53,2, 32,0, 22,8, 14,2. HRMS (ESI): 420,2396 (M+1); calc. para C24H30N5O2: 420,2400. 2-(4-(4-cianobenzoil)piperazin-1-il)-N'-(2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (14)

[000186] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H10 (287 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), 47b (164 mg, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (58 μL, 0,070 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (7 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 14 (377 mg, 86,9%) como um sólido amarelo claro. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 11,15 (br s, 1H), 9,92 (br s, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,71 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,16 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 6,98 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,80 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,86 (br s, 2H), 3,44 (br s, 2H), 3,24 (s, 2H), 2,70 (br s, 2H), 2,642,57 (m, 4H), 1,62 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,93 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN- i3C (125 MHz, CDCI3) δ 168,5, 165,2, 156,7, 152,0, 139,8, 132,9, 132,7, 130,8, 129,0, 127,9, 119,1, 118,1, 116,7, 113,9, 61,0, 53,5 (br), 47,5 (br), 42,1 (br), 32,0, 22,8, 14,2. HRMS (ESI): 434,2188 (M+1); calc. para C24H28N5O3: 434,2192. 2-(4-(4-fluorbenzil)piperazin-1-il)-N'-(2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (15)

[000187] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H11 (133 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47b (82 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 020% de MeOH/EtOAc), seguida por precipitação a partir de Et2O, produziu 15 (137 mg, 66,4%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,26 (br s, 1H), 10,09 (br s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,26 (dd, 2H, J = 6,0, 8,0 Hz), 7,16 (dd, 1H, J = 1,5, 6,5 Hz), 7,02-6,97 (m, 3H), 6,80 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,48 (s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,65 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,61 (br s, 4H), 2,50 (br s, 4H), 1,65 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,95 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 165,9, 162,1 (d, JC-F = 243,6 Hz), 156,7, 151,3, 133,7 (d, JC-F = 3,0 Hz), 132,5, 130,7, 130,6 (d, JC-F = 7,8 Hz), 128,9, 118,9, 116,8, 115,2 (d, JC-F = 21,0 Hz), 62,1, 61,0, 53,8, 53,0, 32,0, 22,8, 14,2. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -118,8. HRMS (ESI): 413,2361 (M+1); calc. para C23H30FN4O2: 413,2353. 2-(4-(4-fluorbenzoil)piperazin-1-il)-N'-(2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (16)

[000188] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H12 (140 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47b (82 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 16 (133 mg, 62,4%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,24 (br s, 1H), 10,17 (br s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,37 (dd, 2H, J = 5,5, 8,5 Hz), 7,13 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 7,06 (t, 2H, J = 8,5 Hz), 6,91 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,77 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,83 (br s, 2H), 3,49 (br s, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,62-2,58 (m, 6H), 1,60 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,91 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCl3) δ 169,6, 165,4, 163,6 (d, JC-F = 249,3 Hz), 156,6, 151,7, 132,6, 131,4 (d, JC-F = 3,4 Hz), 129,5 (d, JC-F = 8,5 Hz), 128,9, 119,0, 116,7, 115,8 (d, JC-F = 21,8 Hz), 60,9, 53,5 (br), 47,7 (br), 42,2 (br), 31,9, 22,7, 14,1. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -112,8. HRMS (ESI): 427,2141 (M+1); calc. para C23H28FN4O3: 427,2145. N'-(2-hidróxi-3-propilbenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (17)

[000189] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H13 (158 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47b (82 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 17 (93,9 mg, 40,6%) como um sólido amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 11,23 (br s, 1H), 10,05 (br s, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,16 (dd, 1H, J = 1,5, 7,5 Hz), 7,02 (dd, 2H, J = 1,5, 7,5 Hz), 6,81 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,58 (s, 2H), 3,19 (s, 2H), 2,67-2,62 (m, 6H), 2,53 (br s, 4H), 1,65 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,95 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCl3) δ 165,9, 156,8, 151,5, 142,4, 132,6, 130,8, 129,6 (q, JC-F = 32,0 Hz), 129,3, 128,9, 125,4 (q, JC-F = 3,6 Hz), 124,4 (q, JC-F = 270,5 Hz), 119,0, 116,9, 62,4, 61,1, 53,8, 53,2, 32,0, 22,8, 14,2. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -65,5. HRMS (ESI): 463,2321 (M+1); calc. para C24H30F3N4O2: 463,2321. N'-(2-hidróxi-3-propilbenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (18)

[000190] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H14 (165 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47b (82 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 18 (216 mg, 90,8%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,24 (br s, 1H), 10,14 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,47 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,13 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 6,76 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 3,85 (br s, 2H), 3,43 (br s, 2H), 3,21 (s, 2H), 2,73-2,58 (m, 6H), 1,60 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,90 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 169,0, 165,4, 156,5, 151,6, 139,0, 132,7, 131,9 (q, JC-F = 32,5 Hz), 130,6, 128,8, 127,5, 125,8 (q, JC-F = 3,5 Hz), 123,7 (q, JC-F = 271,3 Hz), 119,0, 116,7, 60,8, 53,5 (br), 47,5 (br), 42,0 (br), 31,9, 22,7, 14,1. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -66,0. HRMS (ESI): 477,2108 (M+1); calc. para C24H28F3N4O3: 477,2114. 2-(4-benzilpiperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2-hidroxibenzilideno)aceto- hidrazida (19)

[000191] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H1 (124 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 020% de MeOH/EtOAc) produziu 19 (173 mg, 93,7%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 10,81 (br s, 1H), 10,13 (br s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,33-7,30 (m, 4H), 7,28-7,25 (m, 1H), 7,00 (dt, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,94-6,89 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,19 (s, 2H), 2,63 (br s, 4H), 2,53 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 166,3, 155,9 (d, JC-F = 235,8 Hz), 154,8, 150,0, 137,9, 129,3, 128,5, 127,4, 118,9 (d, JC-F = 23,1 Hz), 118,4 (d, Jc-F = 7,6 Hz), 117,6 (d, Jc-F = 7,5 Hz), 116,1 (d, Jc-F = 23,8 Hz), 63,0, 61,1, 53,9, 53,1. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -128,5. HRMS (ESI): 371,1877 (M+1); calc. para c20H24FN4O2: 371,1883. 4-((4-(2-(2-(5-flúor-2-hidroxibenzilideno)hidrazinil)-2- oxoetil)piperazin-1-il)metil)benzenossulfonamida (20) ....X^ox-Xk o'"o H

[000192] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H2 (164 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), Hcl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), MeOH:MeCN a 2:1 (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 20 (172 mg, 82,1%) como um sólido amarelo. RMN-1H (500 MHz, (CD3)2CO) δ 11,33 (br s, 1H), 10,95 (br s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,85 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,12 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 7,07 (dt, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 6,91 (dd, 1H, J = 5,0, 9,0 Hz), 6,62 (br s, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,19 (s, 2H), 2,59 (br s, 4H), 2,49 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, (CD3)2CO) δ 166,8, 156,4 (d, JC-F = 233,5 Hz), 155,4, 155,1 (d, JC-F = 2,8 Hz), 143,9, 143,6, 129,9, 126,7, 119,2 (d, J C-F = 7,6 Hz), 118,7 (d, JC-F = 17,8 Hz), 118,6, 116,6 (d, JC-F = 23,9 Hz), 62,5, 61,5, 54,1, 53,4. RMN-9F (470 MHz, (CD3)2CO) δ -127,3. HRMS (ESI): 450,1609 (M+1); calc. para C20H25FN5O4S: 450,1611. 2-(4-benzoilpiperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2-hidroxibenzilideno)aceto- hidrazida (21)

[000193] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H3 (131 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 020% de MeOH/EtOAc) produziu 21 (157 mg, 81,6%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 10,89 (br s, 1H), 10,50 (br s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,40-7,33 (m, 5H), 6,93 (dt, 1H, J = 2,5, 8,5 Hz), 6,84 (dd, 1H, J = 4,5, 9,0 Hz), 6,74 (dd, 1H, J = 2,5, 8,5 Hz), 3,79 (br s, 2H), 3,48 (br s, 2H), 3,17 (s, 2H), 2,60 (br s, 2H), 2,53 (br s, 2H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 170,5, 165,8, 155,7 (d, JC-F = 235,8 Hz), 154,5, 149,7, 135,3, 130,1, 128,7, 127,0, 118,8 (d, JC-F = 23,1 Hz), 118,2 (d, JC-F = 7,5 Hz), 117,6 (d, JC-F = 7,4 Hz), 116,0 (d, JC-F = 23,6 Hz), 60,7, 53,6 (br), 53,4 (br), 47,6 (br), 42,0 (br). RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -128,3. HRMS (ESI): 385,1674 (M+1); calc. para C20H22FN4O3: 385,1676. 2-(4-(4-cianobenzil)piperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2- hidroxibenzilideno)aceto-hidrazida (22)

[000194] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H9 (137 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 22 (169 mg, 85,5%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 10,84 (br s, 1H), 10,20 (br s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,41 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,95 (dt, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,88-6,85 (m, 2H), 3,54 (s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,60 (br s, 4H), 2,50 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCh) δ 166,2, 155,7 (d, JC-F = 235,9 Hz), 154,6, 149,6, 144,0, 132,2, 129,5, 118,9 (d, JC-F = 22,6 Hz), 118,6, 118,2 (d, JC-F = 7,6 Hz), 117,5 (d, JC-F = 7,5 Hz), 116,0 (d, JC- F = 23,8 Hz), 110,9, 62,2, 61,0, 53,6, 53,0. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -128,4. HRMS (ESI): 396,1838 (M+1); calc. para C21H23FN5O2: 396,1836. 2-(4-(4-cianobenzoil)piperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2- hidroxibenzilideno)aceto-hidrazida (23)

[000195] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H10 (144 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 23 (144 mg, 70,1%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 10,79 (br s, 1H), 10,16 (br s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,67 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,47 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,95 (dt, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 6,85 (dd, 1H, J = 4,5, 9,0 Hz), 6,79 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 3,82 (br s, 2H), 3,41 (br s, 2H), 3,22 (s, 2H), 2,67 (br s, 2H), 2,54 (br s, 2H). RMN-13C (125 MHz, CDCI3) δ 168,4, 165,5, 155,7 (d, JC-F = 236,1 Hz), 154,5, 149,9, 139,7, 132,6, 127,8, 119,0 (d, JC-F = 23,1 Hz), 118,2 (d, Jc-F = 7,6 Hz), 118,1, 117,4 (d, Jc-F = 7,5 Hz), 116,0 (d, Jc-F = 23,6 Hz), 113,7, 60,8, 53,4 (br), 52,7 (br), 47,4 (br), 42,0 (br). RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -128,1. HRMS (ESI): 410,1623 (M+1); calc. para c21H21FN5O3: 410,1628. N'-(5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-fluorbenzil)piperazin-1- il)aceto-hidrazida (24)

[000196] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H11 (133 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 24 (152 mg, 78,2%) como um sólido amarelo claro. RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ 10,83 (br s, 1H), 10,19 (br s, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,25 (dd, 2H, J = 5,5, 8,5 Hz), 6,99-6,95 (m, 3H), 6,90-6,86 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,60 (br s, 4H), 2,49 (br s, 4H). RMN-13c (125 MHz, cDcl3) δ 166,3, 162,1 (d, Jc-F = 243,9 Hz), 155,8 (d, Jc-F = 236,0 Hz), 154,7 (d, Jc-F = 1,4 Hz), 149,7 (d, Jc-F = 2,6 Hz), 133,7 (d, Jc-F = 3,0 Hz), 130,6 (d, Jc-F = 7,9 Hz), 118,8 (d, Jc-F = 23,3 Hz), 118,3 (d, Jc-F = 7,6 Hz), 117,6 (d, Jc-F = 7,5 Hz), 116,0 (d, Jc-F = 23,8 Hz), 115,2 (d, Jc-F = 21,1 Hz), 62,1, 61,0, 53,8, 52,9. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -118,8, -128,4. HRMS (ESI): 389,1787 (M+1); calc. para c20H23F2N4O2: 389,1789. N'-(5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-fluorbenzoil)piperazin-1- il)aceto-hidrazida (25)

[000197] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H12 (140 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 25 (101 mg, 50,1%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 10,81 (br s, 1H), 10,25 (br s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,38 (dd, 2H, J = 5,5, 8,5 Hz), 7,07 (t, 2H, J = 8,5 Hz), 6,98-6,94 (m, 1H), 6,86 (dd, 1H, J = 4,0, 9,0 Hz), 6,79 (dd, 1H, J = 2,0, 8,0 Hz), 3,63 (br s, 4H), 3,21 (s, 2H), 2,59 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCl3) δ 169,7, 165,7, 163,6 (d, JC-F = 249,4 Hz), 155,8 (d, JC-F = 236,3 Hz), 154,6 (d, JC-F = 0,9 Hz), 150,0 (d, JC-F = 2,3 Hz), 131,3 (d, JC-F = 3,4 Hz), 129,5 (d, JC-F = 8,4 Hz), 119,0 (d, JC-F = 23,1 Hz), 118,3 (d, JC-F = 7,5 Hz), 117,5 (d, JC-F = 7,3 Hz), 116,0 (d, JC-F = 24,6 Hz), 115,8 (d, JC-F = 21,9 Hz), 60,9, 53,5, 47,7, 42,2. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -112,6, -128,2. HRMS (ESI): 403,1573 (M+1);_calc. para C20H21F2N4O3: 403,1582. N'-(5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (26)

[000198] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H13 (158 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 26 (194 mg, 88,6%) como um sólido amarelo claro. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 10,83 (br s, 1H), 10,17 (br s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,98 (dt, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 6,91-6,86 (m, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,19 (s, 2H), 2,62 (br s, 4H), 2,52 (br s, 4H). RMN-13C (125 MHz, CDCh) δ 166,3, 155,8 (d, JC-F = 236,0 Hz), 154,7 (d, JC-F = 1,5 Hz), 149,8 (d, JC-F = 2,4 Hz), 142,4 (d, JC-F = 0,8 Hz), 129,5 (q, JC-F = 32,1 Hz), 129,3, 125,3 (q, JC-F = 3,8 Hz), 124,4 (q, JC-F = 270,6 Hz), 118,9 (d, JC-F = 23,0 Hz), 118,3 (d, JC-F = 7,6 Hz), 117,6 (d, JC-F = 7,5 Hz), 116,1 (d, JC-F = 23,6 Hz), 62,3, 61,0, 53,8, 53,1. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -65,4, -128,4. HRMS (ESI): 439,1765 (M+1); calc. para C21H23F4N4O2: 439,1757. N'-(5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (27)

[000199] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H14 (165 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47c (70 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 27 (173 mg, 76,5%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 10,80 (br s, 1H), 10,20 (br s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,65 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 6,96 (dt, 1H, J = 2,5, 8,0 Hz), 6,87 (dd, 1H, J = 4,5, 8,5 Hz), 6,79 (dd, 1H, J = 2,5, 8,0 Hz), 3,84 (br s, 2H), 3,44 (br s, 2H), 3,22 (s, 2H), 2,70 (br s, 2H), 2,55 (br s, 2H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 169,1, 165,6, 155,8 (d, JC-F = 236,3 Hz), 154,6 (d, JC-F = 1,3 Hz), 150,0 (d, JC-F = 1,9 Hz), 138,9, 132,0 (q, JC-F = 32,6 Hz), 127,5, 125,8 (q, JC-F = 3,6 Hz), 123,7 (q, JC-F = 271,3 Hz), 119,0 (d, JC-F = 23,1 Hz), 118,3 (d, JC-F = 7,6 Hz), 117,4 (d, JC-F = 7,5 Hz), 116,0 (d, JC-F = 23,8 Hz), 60,8, 53,5 (br), 47,5 (br), 42,0 (br). RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -66,0, -128,1. HRMS (ESI): 453,1552 (M+1); calc. para C21H21F4N4O3: 453,1550. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-benzilpiperazin-1- il)aceto-hidrazida (28)

[000200] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H1 (124 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 28 (186 mg, 90,8%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,16 (s, 1H), 10,20 (br s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,34-7,30 (m, 4H), 7,28-7,25 (m, 1H), 6,91 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,74 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 5,98 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,13-5,08 (m, 2H), 3,54 (s, 2H), 3,42 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 3,20 (s, 2H), 2,63 (br s, 4H), 2,53 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCh) δ 166,2, 155,5 (d, JC-F = 235,8 Hz), 152,5 (d, JC-F = 1,4 Hz), 149,8 (d, JC-F = 2,5 Hz), 137,9, 135,7, 130,2 (d, JC-F = 6,8 Hz), 129,2, 128,4, 127,3, 119,0 (d, JC-F = 23,1 Hz), 116,8 (d, JC-F = 7,9 Hz), 116,6, 113,9 (d, JC-F = 23,5 Hz), 62,9, 61,0, 53,8, 53,0, 33,8. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -128,6. HRMS (ESI): 411,2191 (M+1); calc. para C23H28FN4O2: 411,2196. 4-((4-(2-(2-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)hidrazinil)-2- oxoetil)piperazin-1-il)metil)benzenossulfonamida (29)

[000201] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H2 (164 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 29 (214 mg, 87,2%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, (CD3)2CO) δ 11,73 (br s, 1H), 10,94 (br s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,85 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,96 (d, 2H, J = 9,0 Hz), 6,62 (br s, 2H), 5,99 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 16,5 Hz), 5,10 (qd, 1H, J = 1,5, 17,0 Hz), 5,04 (qd, 2H, J = 1,5, 10,0 Hz), 3,55 (s, 2H), 3,40 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 3,19 (s, 2H), 2,59 (br s, 4H), 2,49 (br s, 4H)._RMN-13C (125 MHz, (CD3)2CO) δ 166,8, 156,1 (d, JC-F = 233,6 Hz), 153,1 (d, JC-F = 1,3 Hz), 149,6, 143,9, 143,5, 136,6, 130,5 (d, JC-F = 7,0 Hz), 129,8, 126,7, 118,7 (d, Jc-F = 23,1 Hz), 118,4 (d, Jc-F = 8,0 Hz), 116,5, 114,6 (d, Jc-F = 23,6 Hz), 62,5, 61,5, 54,1, 53,4, 34,2. RMN-19F (470 MHz, (cD3)2CO) δ -127,4. HRMS (ESI): 490,1930 (M+1); calc. para c23H29FN5O4S: 490,1924. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-benzoilpiperazin-1- il)aceto-hidrazida (30)

[000202] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H3 (131 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), Hcl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc)_produziu 30 (186 mg, 87,8%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ 11,17 (s, 1H), 10,45 (br s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,40-7,33 (m, 5H), 6,86 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,60 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 5,91 (tdd, 1H, J = 6,5, 9,5, 18,0 Hz), 5,09-5,03 (m, 2H), 3,80 (br s, 2H), 3,47 (br s, 2H), 3,35 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,19 (s, 2H), 2,56 (br s, 4H). RMN-13c (125 MHz, cDcl3) δ 170,5, 165,6, 155,4 (d, Jc-F = 235,5 Hz), 152,4 (d, Jc-F = 1,4 Hz), 150,1 (d, Jc-F = 1,8 Hz), 135,6, 135,3, 130,1, 130,1, 128,7, 127,0, 119,0 (d, Jc-F = 23,0 Hz), 116,8 (d, Jc-F = 7,9 Hz), 116,5, 113,9 (d, Jc-F = 23,5 Hz), 60,7, 53,6 (br), 47,6 (br), 42,0 (br), 33,7. RMN-19F (470 MHz, CDCI3) δ -128,5._HRMS (ESI): 425,1991 (M+1); calc. para c23H26FN4O3: 425,1989. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- cianobenzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (31)

[000203] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H9 (137 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-15% de MeOH/EtOAc) produziu 31 (164 mg, 75,3%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,12 (br s, 1H), 10,16 (br s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,88 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,72 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 5,94 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 17,0 Hz), 5,09-5,05 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,38 (d, 2H, J = 7,0 Hz), 3,19 (s, 2H), 2,62 (br s, 4H), 2,51 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCh) δ 166,0, 155,5 (d, JC-F = 235,5 Hz), 152,5 (d, JC-F = 1,4 Hz), 149,9, 144,0, 135,7, 132,2, 130,1 (d, JC-F = 6,8 Hz), 129,5, 119,0 (d, JC-F = 23,0 Hz), 119,0, 116,8 (d, JC-F = 7,8 Hz), 116,5, 113,9 (d, JC-F = 23,5 Hz), 111,0, 62,3, 60,9, 53,8, 53,1, 33,8. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -128,6. HRMS (ESI): 436,2144 (M+1); calc. para C24H27FN5O2: 436,2149. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- cianobenzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (32)

[000204] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H10 (144 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-15% de MeOH/EtOAc) produziu 32 (196 mg, 87,2%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 11,10 (br s, 1H), 10,21 (br s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,65 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,45 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,84 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,61 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 5,88 (tdd, 1H, J = 7,0, 10,0, 16,5 Hz), 5,03-5,00 (m, 2H), 3,81 (br s, 2H), 3,40 (br s, 2H), 3,31 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,21 (s, 2H), 2,66 (br s, 2H), 2,54 (br s, 2H). RMN- i3C (125 MHz, CDCI3) δ 168,3, 165,4, 155,4 (d, JC-F = 235,9 Hz), 152,3, 150,1, 139,7, 135,4, 132,5, 130,0 (d, JC-F = 6,8 Hz), 127,7, 119,1 (d, JC- F = 23,1 Hz), 118,0, 116,6 (d, Jc-F = 7,9 Hz), 116,5, 113,8 (d, Jc-F = 23,5 Hz), 113,6, 60,7, 53,3 (br), 47,3 (br), 42,0 (br), 33,6. RMN-19F (470 MHz, CDCI3) δ -128,3. HRMS (ESI): 450,1931 (M+1);_calc. para C24H25FN5O3: 450,1941. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4-fluorbenzil)piperazin- 1-il)aceto-hidrazida (33)

[000205] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H11 (133 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 33 (176 mg, 82,0%) como um sólido amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,15 (br s, 1H), 10,22 (br s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,25 (dd, 2H, J = 5,5, 8,5 Hz), 6,98 (t, 2H, J = 8,5 Hz), 6,89 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,72 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 5,95 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 17,0 Hz), 5,10-5,06 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,39 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,18 (s, 2H), 2,61 (br s, 4H), 2,49 (br s, 4H). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 166,2, 162,1 (d, JC-F = 243,8 Hz), 155,5 (d, JC-F = 235,5 Hz), 152,5 (d, JC-F = 0,9 Hz), 149,8, 135,7, 133,6 (d, JC-F = 3,0 Hz), 130,6 (d, JC-F = 7,8 Hz), 130,1 (d, JC-F = 6,8 Hz), 119,0 (d, JC-F = 23,0 Hz), 116,8 (d, JC-F = 7,8 Hz), 116,5, 115,1 (d, JC-F = 21,0 Hz), 113,9 (d, JC-F = 23,5 Hz), 62,1, 61,0, 53,7, 52,9, 33,8. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -118,8, - 128,6. HRMS (ESI): 429,2095 (M+1); calc. para C23H27F2N4O2: 429,2102. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- fluorbenzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (34)

[000206] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H12 (140 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-15% de MeOH/EtOAc) produziu 34 (163 mg, 73,8%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,10 (br s, 1H), 10,23 (br s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,38 (dd, 2H, J = 5,5, 8,5 Hz), 7,07 (t, 2H, J = 8,5 Hz), 6,88 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,65 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 5,92 (tdd, 1H, J = 6,5, 9,5, 17,0 Hz), 5,10-5,04 (m, 2H), 3,82 (br s, 2H), 3,50 (br s, 2H), 3,36 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,21 (s, 2H), 2,59 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCl3) δ 169,7, 165,6, 163,6 (d, JC-F = 249,8 Hz), 155,5 (d, JC-F = 235,6 Hz), 152,5 (d, JC-F = 1,4 Hz), 150,3 (d, JC-F = 2,5 Hz), 135,6, 131,3 (d, JC- F = 3,5 Hz), 130,2 (d, JC-F = 6,9 Hz), 129,5 (d, JC-F = 8,4 Hz), 119,2 (d, JC-F = 23,1 Hz), 116,7 (d, JC-F = 7,8 Hz), 116,6, 115,9 (d, JC-F = 21,8 Hz), 113,9 (d, JC-F = 23,5 Hz), 60,9, 53,6 (br), 47,7 (br), 42,2 (br), 33,8. RMN- 19F (470 MHz, CDCl3) δ -112,6, -128,4. HRMS (ESI): 443,1886 (M+1); calc. para C23H25F2N4O3: 443,1895. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (35)

[000207] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H13 (158 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 35 (176 mg, 73,7%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,14 (br s, 1H), 10,19 (br s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,90 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,72 (dd, 2H, J = 3,0, 8,0 Hz), 5,96 (tdd, 1H, J = 6,5, 10,0, 17,0 Hz), 5,11-5,08 (m, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,40 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,20 (s, 2H), 2,63 (br s, 4H), 2,53 (br s, 4H). RMN-i3C (125 MHz, CDCh) δ 166,1, 155,6 (d, JC-F = 235,5 Hz), 152,5 (d, JC-F = 1,3 Hz), 149,9 (d, JC- F = 2,4 Hz), 142,4, 135,7, 130,2 (d, JC-F = 6,8 Hz), 129,5 (q, JC-F = 32,0 Hz), 129,3, 125,3 (q, JC-F = 3,8 Hz), 124,4 (q, JC-F = 270,5 Hz), 119,1 (d, JC-F = 23,1 Hz), 116,9 (d, JC-F = 7,8 Hz), 116,6, 114,0 (d, JC-F = 23,5 Hz), 62,3, 61,0, 53,8, 53,1, 33,8. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -65,4, -128,5. HRMS (ESI): 479,2066 (M+1); calc. para C24H27F4N4O2: 479,2070. N'-(3-alil-5-flúor-2-hidroxibenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (36)

[000208] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H14 (165 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47d (90 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-15% de MeOH/EtOAc) produziu 36 (139 mg, 56,3%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,07 (br s, 1H), 10,14 (br s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,66 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,50 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,89 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,66 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 5,93 (tdd, 1H, J = 7,0, 10,0, 16,5 Hz), 5,10-5,04 (m, 2H), 3,86 (br s, 2H), 3,45 (br s, 2H), 3,37 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 3,23 (s, 2H), 2,69 (br s, 2H), 2,57 (br s, 2H). RMN- 13C (125 MHz, CDCI3) δ 169,1, 165,5, 155,6 (d, JC-F = 235,9 Hz), 152,5, 150,4 (d, JC-F = 2,1 Hz), 138,9, 135,6, 132,0 (q, JC-F = 32,6 Hz), 130,3 (d, Jc-F = 6,8 Hz), 127,5, 125,9 (q, Jc-F = 3,8 Hz), 123,7 (q, Jc-F = 271,1 Hz), 119,3 (d, Jc-F = 23,0 Hz), 116,7 (d, Jc-F = 4,6 Hz), 116,7, 114,0 (d, Jc-F = 23,5 Hz), 60,9, 53,6 (br), 47,5 (br), 42,2 (br), 33,8. RMN-19F (470 MHz, CDCI3) δ -66,0, -128,4. HRMS (ESI): 493,1868 (M+1);_calc. para c24H25F4N4O3: 493,1863. 2-(4-benzilpiperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (37)

[000209] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H1 (124 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-15% de MeOH/EtOAc) produziu 37 (174 mg, 84,6%) como um sólido não totalmente branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,10 (s, 1H), 10,19 (br s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,32-7,30 (m, 4H), 7,28-7,25 (m, 1H), 6,89 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,71 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 3,54 (s, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,66-2,59 (m, 6H), 2,53 (br s, 4H), 1,64 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,95 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 166,1, 155,4 (d, JC-F = 235,1 Hz), 152,8, 150,0, 137,9, 132,7 (d, JC-F = 6,6 Hz), 129,2, 128,4, 127,3, 119,1 (d, JC-F = 22,5 Hz), 116,7 (d, JC-F = 7,9 Hz), 113,4 (d, JC-F = 23,4 Hz), 63,0, 61,0, 53,8, 53,1, 31,9, 22,5, 14,0. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -129,1. HRMS (ESI): 413,2345 (M+1); calc. para C23H30FN4O2: 413,2353. 4-((4-(2-(2-(5-flúor-2-hidróxi-3-propilbenzilideno)hidrazinil)-2- oxoetil)piperazin-1-il)metil)benzenossulfonamida (38)

[000210] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H2 (164 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 38 (221 mg, 89,9%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, (CD3)2CO) δ 11,68 (br s, 1H), 10,92 (br s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,84 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,98 (dd, 1H, J = 3,0, 9,5 Hz), 6,93 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 6,59 (br s, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,64-2,59 (m, 6H), 2,50 (br s, 4H), 1,63 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,93 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, (CD3)2CO) δ 166,6, 156,1 (d, JC-F = 233,1 Hz), 153,4 (d, JC-F = 1,4 Hz), 149,7 (d, JC- F = 2,9 Hz), 143,9, 143,6, 132,8 (d, JC-F = 6,9 Hz), 129,9, 126,8, 119,0 (d, JC-F = 22,8 Hz), 118,3 (d, JC-F = 8,1 Hz), 114,2 (d, JC-F = 23,6 Hz), 62,5, 61,6, 54,2, 53,4, 32,3, 23,1, 14,1. RMN-19F (470 MHz, (CD3)2CO) δ -127,7. HRMS (ESI): 492,2074 (M+1); calc. para C23H31FN5O4S: 492,2081. 2-(4-benzoilpiperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (39)

[000211] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H3 (131 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-10% de MeOH/EtOAc) produziu 39 (189 mg, 88,9%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,13 (s, 1H), 10,48 (br s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,38-7,32 (m, 5H), 6,83 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,55 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 3,80 (br s, 2H), 3,46 (br s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,59-2,54 (m, 6H), 1,57 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,88 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN- 13C (125 MHz, CDCI3) δ 170,5, 165,6, 155,3 (d, JC-F = 235,1 Hz), 152,6 (d, JC-F = 1,4 Hz), 150,2 (d, JC-F = 2,5 Hz), 135,3, 132,5 (d, JC-F = 6,8 Hz), 130,1, 128,7, 126,9, 119,1 (d, Jc-F = 22,6 Hz), 116,6 (d, Jc-F = 7,9 Hz), 113,4 (d, Jc-F = 23,4 Hz), 60,7, 53,5 (br), 47,5 (br), 42,0 (br), 31,8, 22,4, 13,9. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ -129,0. HRMS (ESI): 427,2144 (M+1); calc. para c23H28FN4O3: 427,2145. 2-(4-(4-cianobenzil)piperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (40)

[000212] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H9 (137 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), Hcl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 015% de MeOH/EtOAc) produziu 40 (180 mg, 82,1%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, cDcl3) δ 11,07 (br s, 1H), 10,16 (br s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,57 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,86 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,68 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 3,55 (s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,70-2,57 (m, 6H), 2,51 (br s, 4H). RMN-13c (125 MHz, cDcl3) δ 166,0, 155,4 (d, Jc-F = 235,1 Hz), 152,7 (d, Jc-F = 1,4 Hz), 150,0 (d, Jc-F = 2,5 Hz), 144,0, 132,6 (d, Jc-F = 6,8 Hz), 132,2, 129,5, 119,1 (d, Jc-F = 22,6 Hz), 119,0, 116,6 (d, Jc-F = 8,0 Hz), 113,4 (d, Jc-F = 23,5 Hz), 110,9, 62,3, 60,9, 53,7, 53,1, 31,9, 22,4, 14,0. RMN-19F (470 MHz, cDcl3) δ - 129,0. HRMS (ESI): 438,2301 (M+1); calc. para C24H29FN5O2: 438,2305. 2-(4-(4-cianobenzoil)piperazin-1-il)-N'-(5-flúor-2-hidróxi-3- propilbenzilideno)aceto-hidrazida (41)

[000213] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H10 (144 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-10% de MeOH/EtOAc) produziu_41 (196 mg, 86,5%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,03 (br s, 1H), 10,17 (br s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,66 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,46 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,84 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,59 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 3,82 (br s, 2H), 3,41 (br s, 2H), 3,22 (s, 2H), 2,66 (br s, 2H), 2,57-2,52 (m, 2H), 1,55 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,87 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 168,3, 165,4, 155,3 (d, JC-F = 235,5 Hz), 152,6 (d, JC-F = 1,1 Hz), 150,3 (d, JC-F = 2,0 Hz), 139,7, 132,6 (d, JC-F = 6,8 Hz), 132,5, 127,7, 119,2 (d, JC-F = 22,6 Hz), 118,0, 116,4 (d, JC-F = 7,9 Hz), 113,6, 113,4 (d, JC-F = 23,3 Hz), 60,7, 53,4 (br), 47,4 (br), 42,0 (br), 31,7, 22,3, 13,9. RMN-19F (470 MHz, CDCI3) δ -128,7. HRMS (ESI): 452,2098 (M+1);_calc. para C24H27FN5O3: 452,2098. N'-(5-flúor-2-hidróxi-3-propilbenzilideno)-2-(4-(4- fluorbenzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (42)

[000214] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H11 (133 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 42 (202 mg, 93,8%) como um sólido amarelo. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,07 (br s, 1H), 10,16 (br s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,26 (dd, 2H, J = 5,5, 8,5 Hz), 6,99 (t, 2H, J = 8,5 Hz), 6,88 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,70 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 3,48 (s, 2H), 3,18 (s, 2H), 2,66-2,58 (m, 6H), 2,50 (br s, 4H), 1,62 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,94 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCI3) δ 166,1, 162,1 (d, JC-F = 243,8 Hz), 155,5 (d, JC-F = 235,0 Hz), 152,8 (d, JC-F = 0,9 Hz), 150,1 (d, JC-F = 2,0 Hz), 133,7, 132,7 (d, JC-F = 6,8 Hz), 130,7 (d, JC-F = 7,9 Hz), 119,2 (d, JC-F = 22,5 Hz), 116,7 (d, JC-F = 7,9 Hz), 115,2 (d, JC-F = 21,0 Hz), 113,5 (d, JC-F = 23,4 Hz), 62,1, 61,0, 53,8, 53,0, 31,9, 22,5, 14,1. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -118,8, -129,0. HRMS (ESI): 431,2250 (M+1); calc. para C23H29F2N4O2: 431,2259. N'-(5-flúor-2-hidróxi-3-propilbenzilideno)-2-(4-(4- fluorbenzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (43)

[000215] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H12 (140 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-10% de MeOH/EtOAc) produziu 43 (195 mg, 87,7%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCl3) δ 11,07 (br s, 1H), 10,32 (br s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,36 (dd, 2H, J = 5,0, 8,5 Hz), 7,05 (t, 2H, J = 8,5 Hz), 6,84 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,57 (dd, 1H, J = 3,0, 8,5 Hz), 3,81 (br s, 2H), 3,48 (br s, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,62-2,50 (m, 6H), 1,56 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,88 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-13C (125 MHz, CDCl3) δ 169,6, 165,6, 163,5 (d, JC-F = 249,3 Hz), 155,4 (d, JC-F = 235,4 Hz), 152,7 (d, JC-F = 0,9 Hz), 150,3, 132,6 (d, JC-F = 6,8 Hz), 131,3 (d, JC-F = 3,4 Hz), 129,4 (d, JC- F = 8,4 Hz), 119,2 (d, JC-F = 22,6 Hz), 116,5 (d, JC-F = 7,9 Hz), 115,8 (d, JC-F = 21,6 Hz), 113,4 (d, JC-F = 23,4 Hz), 60,7, 53,5 (br), 47,7 (br), 42,1 (br), 31,8, 22,4, 13,9. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -112,6, -128,8. HRMS (ESI): 445,2049 (M+1); calc. para C23H27F2N4O3: 445,2051. N'-(5-flúor-2-hidróxi-3-propilbenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (44)

[000216] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H13 (158 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-20% de MeOH/EtOAc) produziu 44 (184 mg, 76,5%) como um sólido amarelo claro. RMN-1H (500 MHz, CDCI3) δ 11,08 (br s, 1H), 10,18 (br s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,88 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,69 (dd, 2H, J = 3,0, 8,5 Hz), 3,56 (s, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,64-2,58 (m, 6H), 2,52 (br s, 4H), 1,62 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,93 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCI3) δ 166,1, 155,5 (d, JC-F = 235,1 Hz), 152,8 (d, JC-F = 1,2 Hz), 150,0 (d, JC-F = 2,6 Hz), 142,4, 132,7 (d, JC-F = 6,8 Hz), 129,5 (q, JC-F = 32,1 Hz), 129,3, 125,3 (q, JC-F = 3,8 Hz), 124,4 (q, JC-F = 270,5 Hz), 119,2 (d, JC-F = 22,6 Hz), 116,7 (d, JC-F = 7,9 Hz), 113,5 (d, JC-F = 23,5 Hz), 62,3, 61,0, 53,8, 53,1, 31,9, 22,5, 14,0. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -65,4, -128,9. HRMS (ESI): 481,2216 (M+1); calc. para C24H29F4N4O2: 481,2227. N'-(5-flúor-2-hidróxi-3-propilbenzilideno)-2-(4-(4- (trifluormetil)benzoil)piperazin-1-il)aceto-hidrazida (45)

[000217] Sintetizada de acordo com o Procedimento Geral D: H14 (165 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), 47e (91 mg, 0,50 mmol, 1,0 equiv.), HCl a 1,2 M (29 μL, 0,035 mmol, 0,070 equiv.), EtOH (3 mL, 0,15 M). A purificação por cromatografia em coluna sobre sílica-gel (gradiente, 0-10% de MeOH/EtOAc) produziu 45 (140 mg, 56,7%) como um sólido branco. RMN-1H (500 MHz, CDCh) δ 11,04 (br s, 1H), 10,19 (br s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,65 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 6,86 (dd, 1H, J = 3,0, 9,0 Hz), 6,60 (dd, 1H, J = 3,0, 8,0 Hz), 3,85 (br s, 2H), 3,44 (br s, 2H), 3,22 (s, 2H), 2,67 (br s, 2H), 2,60-2,51 (m, 4H), 1,58 (sext, 2H, J = 7,5 Hz), 0,90 (t, 3H, J = 7,5 Hz). RMN-i3C (125 MHz, CDCh) δ 169,0, 165,5, 155,4 (d, JC-F = 235,4 Hz), 152,7 (d, JC-F = 0,9 Hz), 150,4 (d, JC-F = 2,4 Hz), 138,9, 132,7 (d, JC-F = 6,8 Hz), 132,0 (q, JC-F = 32,6 Hz), 127,5, 125,8 (q, JC-F = 3,6 Hz), 123,7 (q, JC-F = 271,0 Hz), 119,3 (d, JC-F = 22,6 Hz), 116,5 (d, JC-F = 7,9 Hz), 113,4 (d, JC-F = 23,4 Hz), 60,8, 53,5 (br), 47,5 (br), 42,0 (br), 31,8, 22,4, 14,0. RMN-19F (470 MHz, CDCl3) δ -66,0, -128,7. HRMS (ESI): 495,2008 (M+1); calc. para C24H27F4N4O3: 495,2019. Esquema 3.1: Exemplos de materiais de partida usados para a síntese das diversas hidrazidas.

Exemplo 3 Citações

[000218] 1. Putt, K. S.; Chen, G. W.; Pearson, J. M.; Sandhorst, J. S.; Hoagland, M. S.; Kwon, J. T.; Hwang, S. K.; Jin, H.; Churchwell, M. I.; Cho, M. H.; Doerge, D. R.; Helferich, W. G.; Hergenrother, P. J., Small- molecule activation of procaspase-3 to caspase-3 as a personalized anticancer strategy. Nat. Chem. Biol. 2006, 2, 543-550.

[000219] 2. Peterson, Q. P.; Hsu, D. C.; Goode, D. R.; Novotny, C. J.; Totten, R. K.; Hergenrother, P. J., Procaspase-3 Activation as an Anti-Cancer Strategy: Structure-Activity Relationship of ProcaspaseActivating Compound 1 (PAC-1) and Its Cellular Co-Localization with Caspase-3. J. Med. Chem. 2009, 52, 5721-5731.

[000220] 3. Hsu, D. C.; Roth, H. S.; West, D. C.; Botham, R. C.; Novotny, C. J.; Schmid, S. C.; Hergenrother, P. J., Parallel Synthesis and Biological Evaluation of 837 Analogues of Procaspase-Activating Compound 1 (PAC-1). ACS Comb. Sci. 2012, 14, 44-50.

[000221] 4. Vichai, V.; Kirtikara, K., Sulforhodamina B colorimetric assay for cytotoxicity screening. Nat. Protoc. 2006, 1, 1112-1116. Exemplo 5. Formas de Dosagens Farmacêuticas

[000222] As formulações a seguir ilustram as formas de dosagens farmacêuticas representativas que podem ser usadas para a administração terapêutica ou profilática de um composto de uma fórmula descrita neste documento, um composto especificamente divulgado neste documento, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dele (a seguir, referido como 'Composto X'):

[000223] Estas formulações podem ser preparadas por procedimentos convencionais, bastante conhecidos na técnica farmacêutica. Será apreciado que as composições farmacêuticas acima descritas podem ser variadas de acordo com técnicas farmacêuticas bem conhecidas, para conciliar quantidades e tipos diferentes de ingrediente ativo 'Composto X'. A formulação de aerossol (vi) pode ser usada em combinação com distribuidor de aerossol de dose medida, padrão. Adicionalmente, os ingredientes e as proporções específicos são para propósitos ilustrativos. Os ingredientes podem ser trocados por equivalentes adequados e as proporções podem ser variadas, de acordo com as propriedades desejadas da forma de dosagem de interesse.

[000224] Embora modalidades específicas tenham sido descritas acima com referência às modalidades e aos exemplos divulgados, tais modalidades são somente ilustrativas e não limitam o escopo da invenção. Podem ser feitas alterações e modificações de acordo com a habilidade comum na técnica, sem sair da invenção em seus aspectos mais amplos, como definidos nas reivindicações a seguir.

[000225] Todas as publicações, patentes, e documentos de patentes são incorporados por referência neste documento, como se individualmente incorporados por referência. Nenhuma limitação inconsistente com esta divulgação é para ser entendida a partir dela. A invenção foi descrita com referência a diversas modalidades e técnicas específicas e preferidas. Entretanto, deve ser entendido que podem ser feitas muitas variações e modificações, ao mesmo tempo permanecendo dentro do espírito e do escopo da invenção.

Claims (7)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que o composto é o composto de Fórmula (X):

em que R10 é H, F, Cl, Br, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, ou -SO2NH2; R20 é H, F, Cl, Br, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, ou -SO2NH2; e R30 é H, (C1-C6)alquila, (C1-C6)alquenila, ou (C1-C6)alcóxi; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado de:

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto induz a morte das células de câncer em cultura.

4. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de câncer.

6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que é para uso para tratar uma célula de câncer compreendendo (a) identificar uma suscetibilidade ao tratamento de uma célula de câncer com um composto ativador de procaspase; e (b) expor uma célula de câncer ao composto ativador de procaspase, em que o composto ativador de procaspase é um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que é para uso para induzir a apoptose em uma célula compreendendo administrar o composto a uma célula.

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