KR102156720B1

KR102156720B1 - 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법 및 이에 의해 제조된 매생이 유래 항보체 활성물질

Info

Publication number: KR102156720B1
Application number: KR1020200046165A
Authority: KR
Inventors: 이원경; 민진기; 정우영; 강동욱
Original assignee: 주식회사 씨웰
Priority date: 2020-04-16
Filing date: 2020-04-16
Publication date: 2020-09-16

Abstract

본 발명은 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법 및 이에 의해 제조된 매생이 유래 항보체 활성물질에 관한 것이다.
본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법은 매생이를 세척하여 이물질을 제거한 후 동결 건조하는 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100); 상기 동결 건조된 매생이를 분쇄하여 매생이 분말을 제조한 후, 상기 매생이 분말을 추출하여 매생이 열수 추출물을 제조하는 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200); 상기 매생이 열수 추출물을 동결 건조하는 열수 추출물 동결 건조 단계(S300); 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물을 메탄올로 환류 추출하여 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물에 포함되어 있는 메탄올 가용성 물질과 메탄올 불용성 물질을 분리하는 환류 추출 단계(S400); 상기 분리된 메탄올 불용성 물질을 증류수에 용해시키고, 상기 증류수에 용해된 메탄올 불용성 물질에 에탄올을 가하여 에탄올 침전물을 수득하고 상기 에탄올 침전물을 동결 건조함으로써 동결 건조된 에탄올 침전물을 제조하는 침전물 동결 건조 단계(S500); 상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 증류수에 용해시킨 후 제1 원심분리하여 제1 상층액을 수득하는 제1 원심분리 단계(S600); 상기 제1 상층액에 붕산(H₃BO₃₎을 첨가한 후 제2 원심분리하여 제2 상층액을 수득하는 제2 원심분리 단계(S700); 상기 제2 상층액에 구연산 및 에탄올을 첨가한 후 생성된 침전물을 수득하는 침전물 수득 단계(S800); 및 상기 에탄올을 첨가하여 생성된 침전물을 투석한 후 동결 건조하여 항보체 활성물질을 얻는 항보체 활성물질 제조 단계(S900)를 포함한다.
상기한 구성에 의해 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법은 해조류의 하나인 매생이로부터 인체 면역계에서 독소 생성을 억제시키는 항보체 활성물질을 제조할 수 있다.

Description

매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법 및 이에 의해 제조된 매생이 유래 항보체 활성물질{MANUFACTURING METHOD FOR ACTIVE MATERIALS OF ANTI-COMPLEMENT FROM SEAWEED FULVESCENS AND ACTIVE MATERIALS OF ANTI-COMPLEMENT FROM SEAWEED FULVESCENS MANUFACTURED BY THE SAME}

본 발명은 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법 및 이에 의해 제조된 매생이 유래 항보체 활성물질에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 해조류의 하나인 매생이로부터 인체 면역계에서 독소 생성을 억제시키는 항보체 활성물질을 제조할 수 있는 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법 및 이에 의해 제조된 매생이 유래 항보체 활성물질에 관한 것이다.

인체 면역계는 자연면역과 획득면역으로 구분할 수 있으며 보체계(complement system)는 자연면역, 즉 대식세포와 같이 본래부터 인체가 가지고 있는 면역계이다. 이들 면역계는 외부로부터 병원균이 침입할 시 방어를 위해 작용한다.

그러나 보체계가 작용할 때 complement 3a, complement 5a 등과 같은 anaplylatoxin(독소)이 생성되어 주변 정상 세포를 공격하는 부작용이 있다. 이들 보체계가 병원균이 침입될 경우 작동하여야 하는 것이 정상적이나 비정상적으로 외부의 병원균이 침입되지 않은 경우에도 활성화되어 주변세포를 공격하는 경우가 있다.

항보체 활성물질은 이들 보체계의 활성을 저해시켜 anaplylatoxin과 같은 독성물질을 생성하지 못하게 하는 물질로 주로 다당류들이 그 작용을 한다.

한편, 매생이는 갈파래과로서 크기는 15cm 정도이고 굵기는 2~5mm이다. 몸은 짙은 녹색을 띠고 관상 또는 편압된 관상으로 부드럽다. 매생이는 주로 우리나라의 남해안에 분포하며, 국을 끓이면 연하고 부드러우며 달고 향기로우며 굴 등의 기타 재료와 함께 국으로 끓여 먹곤 한다.

이러한 매생이는 5대 영양소가 골고루 들어 있는 식물성 고단백 식품으로, 수분, 단백질, 탄수화물, 회분이 많이 포함되어 있어 지질을 제외하고는 영양성분이 고루 함유된 해조류이다.

또한, 매생이에는 비타민 A와 C를 함유하고 있으며, 철분, 칼슘, 요오드 등 각종 무기염류가 함유되어 있어 어린이의 발육을 위한 골격형성, 골다공증 예방에 효과가 있을 뿐만 아니라 조혈기능도 있어 빈혈을 예방할 수 있는 영양상 좋은 식품이다.

효능으로는 콜레스테롤 함량저하, 고혈압 예방 및 성인병 발병 인자인 나트륨이온의 배출 등에 효과가 있는 칼륨이 많이 함유되어 있어 매생이의 섭취에 의한 칼륨 생리효과를 기대할 수 있다. 민간에서는 위궤양이나 십이지장 궤양을 예방, 진정시키는 효과가 뛰어나 술 마실 때 안주로도 좋고 술 마신 후 숙취해소 작용도 뛰어나다.

이에 본 발명자는 항보체 활성물질을 제조하기 위해 연구하던 중, 해조류의 하나인 매생이로부터 인체 면역계에서 독소 생성을 억제시키는 항보체 활성물질인 다당류를 제조할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

국내등록특허 제10-0468649호(2005년 01월 19일 등록) 국내등록특허 제10-0857249호(2008년 09월 01일 등록) 국내공개특허 제10-2011-0014820호(2011년 02월 14일 공개)

본 발명은 해조류의 하나인 매생이로부터 인체 면역계에서 독소 생성을 억제시키는 항보체 활성물질을 제조할 수 있는 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법 및 이에 의해 제조된 매생이 유래 항보체 활성물질을 제공하는데 있다.

본 발명이 해결하고자 하는 다양한 과제들은 이상에서 언급한 과제들에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법은 매생이를 세척하여 이물질을 제거한 후 동결 건조하는 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100); 상기 동결 건조된 매생이를 분쇄하여 매생이 분말을 제조한 후, 상기 매생이 분말을 추출하여 매생이 열수 추출물을 제조하는 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200); 상기 매생이 열수 추출물을 동결 건조하는 열수 추출물 동결 건조 단계(S300); 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물을 메탄올로 환류 추출하여 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물에 포함되어 있는 메탄올 가용성 물질과 메탄올 불용성 물질을 분리하는 환류 추출 단계(S400); 상기 분리된 메탄올 불용성 물질을 증류수에 용해시키고, 상기 증류수에 용해된 메탄올 불용성 물질에 에탄올을 가하여 에탄올 침전물을 수득하고 상기 에탄올 침전물을 동결 건조함으로써 동결 건조된 에탄올 침전물을 제조하는 침전물 동결 건조 단계(S500); 상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 증류수에 용해시킨 후 제1 원심분리하여 제1 상층액을 수득하는 제1 원심분리 단계(S600); 상기 제1 상층액에 붕산(H₃BO₃₎을 첨가한 후 제2 원심분리하여 제2 상층액을 수득하는 제2 원심분리 단계(S700); 상기 제2 상층액에 구연산 및 에탄올을 첨가한 후 생성된 침전물을 수득하는 침전물 수득 단계(S800); 및 상기 에탄올을 첨가하여 생성된 침전물을 투석한 후 동결 건조하여 항보체 활성물질을 얻는 항보체 활성물질 제조 단계(S900)를 포함한다.

상기 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)는 상기 매생이를 15 내지 25℃ 온도의 정제수로 세척하한 후 -20 내지 -30℃의 온도에서 동결 건조할 수 있다.

상기 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200)에서는 상기 동결 건조된 매생이를 분쇄하여 매생이 분말을 제조한 후, 상기 매생이 분말 100 중량부에 대해 정제수 1500 내지 2000 중량부의 중량 비율로 혼합하고, 97 내지 100℃의 온도에서 4 내지 6시간 동안 열수 추출함으로써 매생이 열수 추출물을 제조할 수 있다.

상기 열수 추출물 동결 건조 단계(S300)에서는 상기 매생이 열수 추출물을 -40 내지 -50℃의 온도에서 동결 건조함으로써 동결 건조된 매생이 열수 추출물을 제조할 수 있다.

상기 환류 추출 단계(S400)에서는 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물 100 중량부에 대해 메탄올 500 내지 1000 중량부의 중량 비율로 혼합한 후 2 내지 3시간 동안 환류 추출함으로써 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물에 포함되어 있는 메탄올 가용성 물질과 메탄올 불용성 물질을 분리할 수 있다.

상기 침전물 동결 건조 단계(S500)에서는 상기 분리된 메탄올 불용성 물질을 증류수에 용해시키고, 상기 메탄올 불용성 물질이 용해된 증류수 100 중량부에 대해 500 내지 700 중량부의 중량 비율로 에탄올을 가하여 에탄올 침전물을 수득하며, 상기 에탄올 침전물을 -20 내지 -30℃의 온도에서 동결 건조함으로써 동결 건조된 에탄올 침전물을 제조할 수 있다.

상기 제1 원심분리 단계(S600)에서는 상기 동결 건조된 에탄올 침전물 100 중량부에 대해 증류수 3500 내지 4500 중량부의 중량 비율로 혼합하여 상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 용해시킨 후, 15 내지 25℃의 온도에서 15 내지 25시간 동안 방치하고, 이후 원심분리하여 침전물을 제거하고 상층액을 수득함으로써 진행될 수 있다.

상기 제2 원심분리 단계(S700)에서는 상기 제1 상층액에 붕산(H₃BO₃₎을 첨가하여 pH를 8로 조절한 후, 제2 원심분리하여 침전물을 제거하고 상층액을 수득함으로써 진행될 수 있다.

상기 침전물 수득 단계(S800)에서는 상기 제2 상층액에 구연산을 첨가하여 pH를 4.5로 조절하고, 이후 구연산이 첨가된 제2 상층액 100 중량부에 대해 에탄올 400 내지 600 중량부의 중량 비율로 첨가하여 생성되는 침전물을 수득할 수 있다.

상기 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)는 매생이를 준비한 후 상기 매생이를 15 내지 25℃ 온도의 정제수로 제1 세척하고, 상기 제1 세척된 매생이를 숙성액에 침지시켜 제2 세척하되, 상기 숙성액은 녹차 잎, 월계수 잎 및 정제수를 0.5:1.5:8의 중량 비율로 혼합하고, 상기 녹차 잎 및 월계수 잎이 혼합된 정제수를 70 내지 75℃의 온도에서 20 내지 60분 동안 가열한 후 녹차 잎 및 월계수 잎을 제거하고 여과하여 여과액을 제조하며, 상기 여과액에 오징어 먹물을 9.5:0.5의 중량비로 혼합하고 10 내지 15℃의 온도에서 3 내지 6시간 동안 숙성시켜 숙성액을 제조하며, 상기 정제수로 세척된 매생이를 상기 숙성액에 침지시킨 후 5 내지 7℃의 온도에서 10 내지 20분 동안 보관하고, 상기 숙성액에 침지된 매생이를 분리한 후 15 내지 20℃ 온도의 정제수로 제2 세척하며, 상기 제2 세척된 매생이를 45 내지 50℃의 온도에서 20 내지 40시간 동안 보관하여 건조하고, 상기 건조된 매생이 100 중량부에 대해 진피 발효액 1 내지 5 중량부의 중량 비율로 혼합한 후 8 내지 12℃의 온도에서 20 내지 40시간 동안 보관함으로써 상기 매생이를 숙성 발효시키고, 상기 숙성 발효된 매생이를 -20 내지 -30℃의 온도에서 동결 건조하는 과정으로 진행될 수 있다.

상기 진피 발효액은, 진피를 준비한 후 세척하고, 상기 진피를 효소 분해하되, 상기 효소로는 알파아밀라아제(α-Amylase), 펙티나제(Pectinase), 자일라나제(Xylanase) 및 셀룰라제(Cellulase)가 이용되고, 상기 진피 전체 100 중량부에 대해 상기 알파아밀라아제(α-Amylase) 0.01 내지 0.03 중량부, 펙티나제(Pectinase) 0.02 내지 0.04 중량부, 자일라나제(Xylanase) 0.03 내지 0.05 중량부 및 셀룰라제(Cellulase) 0.02 내지 0.04 중량부의 중량 비율로 혼합되고, 38 내지 42℃의 온도에서 상기 효소가 혼합된 진피를 10 내지 50시간 동안 보관함으로써 수행되며, 상기 효소 분해된 진피를 8 내지 12℃의 온도에서 20 내지 40일 동안 보관하여 숙성시키며, 상기 숙성된 진피를 여과기를 이용하여 여과함으로써, 여과된 진피액을 제조하고, 상기 여과된 진피액을 농축하여 진피 농축액을 제조하고, 상기 진피 농축액 100 중량부에 대해 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus Plantarum) 0.1 내지 0.2 중량부의 중량 비율로 혼합한 후, 10 내지 15℃의 온도에서 3 내지 6일 동안 발효시키는 과정을 거쳐 제조될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기한 제조방법으로 제조된 매생이 유래 항보체 활성물질을 포함한다.

기타 실시 예들의 구체적인 사항들은 상세한 설명에 포함되어 있다.

본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법은 해조류의 하나인 매생이로부터 인체 면역계에서 독소 생성을 억제시키는 항보체 활성물질을 제조할 수 있다.

본 발명의 기술적 사상의 실시예는, 구체적으로 언급되지 않은 다양한 효과를 제공할 수 있다는 것이 충분히 이해될 수 있을 것이다.

도 1은 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법을 설명하기 위한 순서도이다.
도 2는 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질을 증류수에 녹인 다음, 100 및 500㎍/㎖의 농도로 항보체 활성 실험을 수행한 결과를 보여주는 그래프이다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예를 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 실시예들은 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미가 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미가 있는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법에 대하여 바람직한 실시예를 들어 상세하게 설명한다.

도 1은 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법을 설명하기 위한 순서도이다.

도 1을 참조하면, 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법은 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100), 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200), 열수 추출물 동결 건조 단계(S300), 환류 추출 단계(S400), 침전물 동결 건조 단계(S500), 제1 원심분리 단계(S600), 제2 원심분리 단계(S700), 침전물 수득 단계(S800) 및 항보체 활성물질 제조 단계(S900)를 포함한다.

1. 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)

상기 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)는 매생이를 세척하여 이물질을 제거한 후 동결 건조하는 단계이다.

상기 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)는 상기 매생이를 15 내지 25℃ 온도의 정제수로 세척하여 상기 매생이에 잔류하는 이물질이나 염분을 제거한 후 -20 내지 -30℃의 온도에서 동결 건조할 수 있다.

한편, 상기 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)에서는 동결 건조된 매생이의 물성을 향상시키기 위하여 하기의 과정으로 상기 매생이를 세척한 후 동결 건조할 수 있다.

먼저, 매생이를 준비한 후 정제수로 제1 세척할 수 있다.

상기 매생이는 5대 영양소가 골고루 들어 있는 식물성 고단백 식품으로, 수분, 단백질, 탄수화물, 회분이 많이 포함되어 있어 지질을 제외하고는 영양성분이 고루 함유된 해조류이다.

또한, 상기 매생이에는 비타민 A와 C를 함유하고 있으며, 철분, 칼슘, 요오드 등 각종무기염류가 함유되어 있어 어린이의 발육을 위한 골격형성, 골다공증 예방에 효과가 있을 뿐만 아니라 조혈기능도 있어 빈혈을 예방할 수 있는 영양상 좋은 식품이다.

예를 들어, 상기 단계에서는 상기 매생이를 준비한 후 상기 매생이를 15 내지 25℃ 온도의 정제수로 세척할 수 있는데, 상기 정제수를 이용하여 매생이를 세척함으로써 상기 매생이에 부착되어 있는 이물질을 제거할 수 있다.

다음으로, 상기 제1 세척된 매생이를 숙성액에 침지시켜 제2 세척할 수 있다.

상기 단계에서는 상기 정제수로 세척된 매생이를 숙성액에 침지시켜 상기 매생이에 존재하는 일반 세균을 제거함으로써 매생이의 저장 안정성을 향상시키고 상기 매생이로부터 발생할 수 있는 비린내를 제거할 수 있다.

예를 들어, 상기 단계에서는, 먼저, 녹차 잎, 월계수 잎 및 정제수를 0.5:1.5:8의 중량 비율로 혼합하고, 상기 녹차 잎 및 월계수 잎이 혼합된 정제수를 70 내지 75℃의 온도에서 20 내지 60분 동안 가열한 후 녹차 잎 및 월계수 잎을 제거하고 여과하여 여과액을 제조할 수 있다. 다음으로, 상기 여과액에 오징어 먹물을 9.5:0.5의 중량비로 혼합하고 10 내지 15℃의 온도에서 3 내지 6시간 동안 숙성시켜 숙성액을 제조할 수 있다. 다음으로, 상기 정제수로 세척된 매생이를 상기 숙성액에 침지시킨 후 5 내지 7℃의 온도에서 10 내지 20분 동안 보관함으로써, 상기 매생이의 저장 안정성을 향상시키고 상기 매생이로부터 발생할 수 있는 비린내를 제거할 수 있다. 이어서, 상기 숙성액에 침지된 매생이를 분리한 후 15 내지 20℃ 온도의 정제수로 제2 세척할 수 있다.

상기 오징어 먹물은 오징어 묵즙낭의 내용물을 뜻하는 것으로, 주로 검은색이나 짙은 갈색을 띠고 있는데, 상기 오징어 먹물은 항종양 활성이 강한 일렉신 등의 뮤코다당류가 포함되어 항암 효과 외에도 방부작용 및 위액분비 촉진작용을 돕는 역할을 할 수 있다.

그 다음으로, 상기 제2 세척된 매생이를 건조시켜 상기 매생이에 함유되어 있는 수분을 제거할 수 있다.

상기 단계에서는 상기 제2 세척된 매생이를 45 내지 50℃의 온도에서 20 내지 40시간 동안 보관하여 건조할 수 있는데, 상기 단계가 상기한 하한 범위 미만으로 수행되는 경우에는 상기 매생이에 함유되어 있는 수분이 충분히 제거되지 않는 문제가 발생할 수 있고, 상기한 상한 범위를 초과하여 수행되는 경우에는 상기 매생이에 함유되어 있는 수분의 함량이 너무 적어 물성이 저하되고, 추후 공정에서 상기 매생이의 숙성 발효가 충분히 진행되지 않는 문제가 발생할 수 있다.

이어서, 상기 건조된 매생이를 숙성 발효할 수 있다.

상기 단계에서는 상기 건조된 매생이에 진피 발효액을 혼합한 후 일정 시간 동안 숙성 발효시킴으로써 수행될 수 있는데, 구체적으로, 상기 단계에서는 상기 건조된 매생이 100 중량부에 대해 진피 발효액 1 내지 5 중량부의 중량 비율로 혼합한 후 8 내지 12℃의 온도에서 20 내지 40시간 동안 보관함으로써 상기 매생이를 숙성 발효시킬 수 있다.

상기 진피 발효액은 진피(감귤의 과피)를 숙성 발효하여 제조될 수 있는데, 상기 진피는 폴리페놀류, 비타민류, 리모노이드류 같은 다양한 화합물, 특히 카로티노이드류, 바이오-플라보노이드류, 펙틴 및 테르펜(terpene)류 등의 페놀성 화합물과 같은 유용성분이 풍부하고 최근에는 진피 부산물에서 항산화물질인 헤스페리딘을 분리하여 돼지사료에 먹인 결과 질병저항성을 향상시킨다는 보고가 있다.

상기 단계에서 상기 진피 발효액은 하기와 같이 제조된 진피 발효액이 사용될 수 있다.

먼저, 진피 발효액을 제조하기 위하여, 진피를 준비한 후 세척할 수 있다.

상기 단계에서 세척은 탄산수소나트륨이 용해된 정제수를 이용하여 수행할 수 있다. 즉, 상기 탄산수소나트륨(NaHCO₃)은 식품첨가물로도 이용되는 것으로, 독성이 없으며 침투, 확산, 팽창 등의 기능을 가질 수 있는데, 상기 단계에서는 1 내지 3(w/w)% 농도 범위를 가지는 탄산수소나트륨 용액을 사용함으로써 진피의 표면을 살균 및 세척할 수 있다. 이때, 상기 진피는 감귤의 꼭지 부분이 제거된 감귤 껍질 부분일 수 있다.

다음으로, 상기 진피를 효소 분해할 수 있다.

상기 단계에서 상기 효소 분해는 진피에 존재하는 면역활성 다당체를 분리해낼 수 있는 효소를 사용하여 분해할 수 있는데, 바람직하게는 상기 효소로 알파아밀라아제(α-Amylase), 펙티나제(Pectinase), 자일라나제(Xylanase) 및 셀룰라제(Cellulase)가 이용되고, 상기 진피 전체 100 중량부에 대해 상기 알파아밀라아제(α-Amylase) 0.01 내지 0.03 중량부, 펙티나제(Pectinase) 0.02 내지 0.04 중량부, 자일라나제(Xylanase) 0.03 내지 0.05 중량부 및 셀룰라제(Cellulase) 0.02 내지 0.04 중량부의 중량 비율로 혼합되고, 38 내지 42℃의 온도에서 상기 효소가 혼합된 진피를 10 내지 50시간 동안 보관함으로써 수행될 수 있다.

그 다음으로, 상기 효소 분해된 진피를 저장하여 숙성시킬 수 있다.

상기 단계에서는 상기 효소 분해된 진피를 8 내지 12℃의 온도에서 20 내지 40일 동안 보관하여 수행될 수 있는데, 상기 단계가 상기한 하한 범위 미만으로 수행되는 경우에는 상기 진피가 충분히 숙성되지 않는 문제가 발생할 수 있고, 상기한 상한 범위를 초과하여 수행되는 경우에는 진피의 물성이 저하되는 문제가 발생할 수 있다.

이어서, 상기 숙성된 진피를 여과기를 이용하여 여과함으로써, 여과된 진피액을 제조할 수 있다.

상기 단계에서는 상기 숙성된 진피를 여과하여 여과된 진피액을 제조함으로써, 상기 진피에 포함되어 있는 미세한 이물질들을 제거할 수 있는데, 예를 들어, 상기 여과는 판형 가압 여과기 또는 카트리지 여과기 등과 같은 공지된 다양한 여과기가 사용될 수 있다.

다음으로, 상기 여과된 진피액을 농축하고 살균하여 진피 농축액을 제조하고, 상기 진피 농축액을 발효하여 진피 발효액을 제조할 수 있다.

상기 단계에서는 당해 기술분야에서 공지된 감압농축기를 이용하여 진피 농축액을 제조하고, 상기 진피 농축액 100 중량부에 대해 식물성 유산균을 0.1 내지 0.2 중량부의 중량 비율로 혼합한 후, 10 내지 15℃의 온도에서 3 내지 6일 동안 발효시킴으로써 진피 발효액을 제조할 수 있다.

상기 단계에서 식물성 유산균은 상기 진피 농축액을 발효시키기 위하여 사용되는데, 상기 식물성 유산균으로는 진피 농축액을 발효시킬 수 있는 공지된 유산균이 사용될 수 있고, 예를 들어, 상기 식물성 유산균으로는 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus Plantarum, 400 × 10⁹CFU/g)이 이용될 수 있다.

다음으로, 상기 숙성 발효된 매생이를 동결 건조할 수 있다.

상기 단계에서 상기 숙성 발효된 매생이의 동결 건조는 -20 내지 -30℃의 온도에서 수행될 수 있다.

2. 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200)

상기 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200)는 상기 동결 건조된 매생이를 분쇄하여 매생이 분말을 제조한 후, 상기 매생이 분말을 추출하여 매생이 열수 추출물을 제조하는 단계이다.

3. 열수 추출물 동결 건조 단계(S300)

상기 열수 추출물 동결 건조 단계(S300)는 상기 매생이 열수 추출물을 동결 건조하는 단계이다.

4. 환류 추출 단계(S400)

상기 환류 추출 단계(S400)는 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물을 메탄올로 환류 추출하여 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물에 포함되어 있는 메탄올 가용성 물질과 메탄올 불용성 물질을 분리하는 단계이다.

상기 환류 추출 단계(S400)는 공지의 환류추출기를 이용하여 수행될 수 있는데, 상기 환류추출기를 이용하여 추출은 공지의 기술인 바, 설명의 편의 및 본 발명의 기술적 사상의 명확성을 위하여 이에 대한 구체적인 설명은 생략하기로 한다.

5. 침전물 동결 건조 단계(S500)

상기 침전물 동결 건조 단계(S500)는 상기 분리된 메탄올 불용성 물질을 증류수에 용해시키고, 상기 증류수에 용해된 메탄올 불용성 물질에 에탄올을 가하여 에탄올 침전물을 수득하고 상기 에탄올 침전물을 동결 건조함으로써 동결 건조된 에탄올 침전물을 제조하는 단계이다.

6. 제1 원심분리 단계(S600)

상기 제1 원심분리 단계(S600)는 상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 증류수에 용해시킨 후 제1 원심분리하여 제1 상층액을 수득하는 단계이다.

상기 제1 원심분리 단계(S600)에서는 상기 동결 건조된 에탄올 침전물 100 중량부에 대해 증류수 3500 내지 4500 중량부의 중량 비율로 혼합하여 상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 용해시킨 후, 공지의 양이온 계면활성제를 첨가하여 15 내지 25℃의 온도에서 15 내지 25시간 동안 방치하고, 이후 원심분리하여 침전물을 제거하고 상층액을 수득함으로써 진행될 수 있다.

7. 제2 원심분리 단계(S700)

상기 제2 원심분리 단계(S700)는 상기 제1 상층액에 붕산(H₃BO₃₎을 첨가한 후 제2 원심분리하여 제2 상층액을 수득하는 단계이다.

8. 침전물 수득 단계(S800)

상기 침전물 수득 단계(S800)는 상기 제2 상층액에 구연산 및 에탄올을 첨가한 후 생성된 침전물을 수득하는 단계이다.

9. 항보체 활성물질 제조 단계(S900)

상기 항보체 활성물질 제조 단계(S900)는 상기 에탄올을 첨가하여 생성된 침전물을 투석한 후 동결 건조하여 항보체 활성물질을 얻는 단계이다.

상기 항보체 활성물질 제조 단계(S900)에서는 상기 에탄올을 첨가하여 생성된 침전물을 증류수에 녹인 후 투석막(예를 들어, 10,000 MWCO)에 투입하여 증류수로 45 내지 55시간 동안 투석하고, 상기 투석한 후 투석막 내용물을 동결 건조함으로써 항보체 활성물질을 얻을 수 있다.

이하, 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법에 대한 실시예를 들어 더욱 구체적으로 설명하기로 한다.

< 실시예 >

먼저, 매생이를 정제수로 세척하여 상기 매생이에 잔류하는 이물질이나 염분을 제거한 후 -25℃의 온도에서 동결 건조하였다.

다음으로, 상기 동결 건조된 매생이를 분쇄하여 매생이 분말을 제조한 후, 상기 매생이 분말 100 중량부에 대해 정제수 1800 중량부의 중량 비율로 혼합하고, 100℃의 온도에서 5시간 동안 열수 추출함으로써 매생이 열수 추출물을 제조하였다.

그 다음으로, 상기 매생이 열수 추출물을 -45℃의 온도에서 동결 건조함으로써 동결 건조된 매생이 열수 추출물을 제조하였고, 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물 100 중량부에 대해 메탄올 800 중량부의 중량 비율로 혼합한 후 2시간 30분 동안 환류 추출함으로써 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물에 포함되어 있는 메탄올 가용성 물질과 메탄올 불용성 물질을 분리하였다.

이어서, 상기 분리된 메탄올 불용성 물질을 증류수에 용해시키고, 상기 메탄올 불용성 물질이 용해된 증류수 100 중량부에 대해 600 중량부의 중량 비율로 에탄올을 가하여 에탄올 침전물을 수득하였며, 상기 에탄올 침전물을 -25℃의 온도에서 동결 건조함으로써 동결 건조된 에탄올 침전물을 제조하였다.

다음으로, 상기 동결 건조된 에탄올 침전물 100 중량부에 대해 증류수 4000 중량부의 중량 비율로 혼합하여 상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 용해시킨 후, 20 내지 21℃의 온도에서 20시간 동안 방치하고, 이후 원심분리하여 침전물을 제거하고 제1 상층액을 수득하였다.

그 다음으로, 상기 제1 상층액에 붕산(H₃BO₃₎을 첨가하여 pH를 8로 조절한 후, 제2 원심분리하여 침전물을 제거하고 제2 상층액을 수득하였고, 상기 제2 상층액에 구연산을 첨가하여 pH를 4.5로 조절하고, 이후 구연산이 첨가된 제2 상층액 100 중량부에 대해 에탄올 500 중량부의 중량 비율로 첨가하여 생성되는 침전물을 수득하였다.

이어서, 상기 에탄올을 첨가하여 생성된 침전물을 증류수에 녹인 후 10,000 MWCO의 투석막에 투입하여 증류수로 48시간 동안 투석하고, 상기 투석한 후 투석막 내용물을 동결 건조함으로써 항보체 활성물질(MS-2)을 제조하였다.

항보체 활성 실험

상기 실시예에서 제조된 항보체 활성물질(MS-2)을 증류수에 녹인 다음, 100 및 500㎍/㎖의 농도로 항보체 활성 실험을 수행하였다.

도 2는 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질을 증류수에 녹인 다음, 100 및 500㎍/㎖의 농도로 항보체 활성 실험을 수행한 결과를 보여주는 그래프이다.

도 2를 참조하면, 본 발명에 따른 매생이 유래 항보체 활성물질(MS-2)을 증류수에 녹인 다음, 100 및 500㎍/㎖의 농도로 항보체 활성 실험을 수행한 결과, 각각 76 및 94%의 항보체 활성을 나타냄을 확인하였는데, 상기 결과를 토대로 해조류의 하나인 매생이로부터 인체 면역계에서 독소 생성을 억제시키는 항보체 활성물질을 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.

이상, 본 발명의 바람직한 일 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 일 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

매생이를 세척하여 이물질을 제거한 후 동결 건조하는 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100);
상기 동결 건조된 매생이를 분쇄하여 매생이 분말을 제조한 후, 상기 매생이 분말을 추출하여 매생이 열수 추출물을 제조하는 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200);
상기 매생이 열수 추출물을 동결 건조하는 열수 추출물 동결 건조 단계(S300);
상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물을 메탄올로 환류 추출하여 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물에 포함되어 있는 메탄올 가용성 물질과 메탄올 불용성 물질을 분리하는 환류 추출 단계(S400);
상기 분리된 메탄올 불용성 물질을 증류수에 용해시키고, 상기 증류수에 용해된 메탄올 불용성 물질에 에탄올을 가하여 에탄올 침전물을 수득하고 상기 에탄올 침전물을 동결 건조함으로써 동결 건조된 에탄올 침전물을 제조하는 침전물 동결 건조 단계(S500);
상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 증류수에 용해시킨 후 제1 원심분리하여 제1 상층액을 수득하는 제1 원심분리 단계(S600);
상기 제1 상층액에 붕산(H₃BO₃₎을 첨가한 후 제2 원심분리하여 제2 상층액을 수득하는 제2 원심분리 단계(S700);
상기 제2 상층액에 구연산 및 에탄올을 첨가한 후 생성된 침전물을 수득하는 침전물 수득 단계(S800); 및
상기 에탄올을 첨가하여 생성된 침전물을 투석한 후 동결 건조하여 항보체 활성물질을 얻는 항보체 활성물질 제조 단계(S900)를 포함하는 것을 특징으로 하는 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법.
제 1항에 있어서,
상기 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)는 상기 매생이를 15 내지 25℃ 온도의 정제수로 세척하한 후 -20 내지 -30℃의 온도에서 동결 건조하고,
상기 매생이 분쇄 및 열수 추출 단계(S200)에서는 상기 동결 건조된 매생이를 분쇄하여 매생이 분말을 제조한 후, 상기 매생이 분말 100 중량부에 대해 정제수 1500 내지 2000 중량부의 중량 비율로 혼합하고, 97 내지 100℃의 온도에서 4 내지 6시간 동안 열수 추출함으로써 매생이 열수 추출물을 제조하며,
상기 열수 추출물 동결 건조 단계(S300)에서는 상기 매생이 열수 추출물을 -40 내지 -50℃의 온도에서 동결 건조함으로써 동결 건조된 매생이 열수 추출물을 제조하고,
상기 환류 추출 단계(S400)에서는 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물 100 중량부에 대해 메탄올 500 내지 1000 중량부의 중량 비율로 혼합한 후 2 내지 3시간 동안 환류 추출함으로써 상기 동결 건조된 매생이 열수 추출물에 포함되어 있는 메탄올 가용성 물질과 메탄올 불용성 물질을 분리하는 것을 특징으로 하는 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법.
제 2항에 있어서,
상기 침전물 동결 건조 단계(S500)에서는 상기 분리된 메탄올 불용성 물질을 증류수에 용해시키고, 상기 메탄올 불용성 물질이 용해된 증류수 100 중량부에 대해 500 내지 700 중량부의 중량 비율로 에탄올을 가하여 에탄올 침전물을 수득하며, 상기 에탄올 침전물을 -20 내지 -30℃의 온도에서 동결 건조함으로써 동결 건조된 에탄올 침전물을 제조하고,
상기 제1 원심분리 단계(S600)에서는 상기 동결 건조된 에탄올 침전물 100 중량부에 대해 증류수 3500 내지 4500 중량부의 중량 비율로 혼합하여 상기 동결 건조된 에탄올 침전물을 용해시킨 후, 15 내지 25℃의 온도에서 15 내지 25시간 동안 방치하고, 이후 원심분리하여 침전물을 제거하고 상층액을 수득함으로써 진행되며,
상기 제2 원심분리 단계(S700)에서는 상기 제1 상층액에 붕산(H₃BO₃₎을 첨가하여 pH를 8로 조절한 후, 제2 원심분리하여 침전물을 제거하고 상층액을 수득함으로써 진행되는 것을 특징으로 하는 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법.
제 3항에 있어서,
상기 침전물 수득 단계(S800)에서는 상기 제2 상층액에 구연산을 첨가하여 pH를 4.5로 조절하고, 이후 구연산이 첨가된 제2 상층액 100 중량부에 대해 에탄올 400 내지 600 중량부의 중량 비율로 첨가하여 생성되는 침전물을 수득하는 것을 특징으로 하는 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법.
제 4항에 있어서,
상기 매생이 세척 및 동결 건조 단계(S100)는 매생이를 준비한 후 상기 매생이를 15 내지 25℃ 온도의 정제수로 제1 세척하고, 상기 제1 세척된 매생이를 숙성액에 침지시켜 제2 세척하되, 상기 숙성액은 녹차 잎, 월계수 잎 및 정제수를 0.5:1.5:8의 중량 비율로 혼합하고, 상기 녹차 잎 및 월계수 잎이 혼합된 정제수를 70 내지 75℃의 온도에서 20 내지 60분 동안 가열한 후 녹차 잎 및 월계수 잎을 제거하고 여과하여 여과액을 제조하며, 상기 여과액에 오징어 먹물을 9.5:0.5의 중량비로 혼합하고 10 내지 15℃의 온도에서 3 내지 6시간 동안 숙성시켜 숙성액을 제조하며, 상기 정제수로 세척된 매생이를 상기 숙성액에 침지시킨 후 5 내지 7℃의 온도에서 10 내지 20분 동안 보관하고, 상기 숙성액에 침지된 매생이를 분리한 후 15 내지 20℃ 온도의 정제수로 제2 세척하며, 상기 제2 세척된 매생이를 45 내지 50℃의 온도에서 20 내지 40시간 동안 보관하여 건조하고, 상기 건조된 매생이 100 중량부에 대해 진피 발효액 1 내지 5 중량부의 중량 비율로 혼합한 후 8 내지 12℃의 온도에서 20 내지 40시간 동안 보관함으로써 상기 매생이를 숙성 발효시키고, 상기 숙성 발효된 매생이를 -20 내지 -30℃의 온도에서 동결 건조하는 과정으로 진행되며,
상기 진피 발효액은, 진피를 준비한 후 세척하고, 상기 진피를 효소 분해하되, 상기 효소로는 알파아밀라아제(α-Amylase), 펙티나제(Pectinase), 자일라나제(Xylanase) 및 셀룰라제(Cellulase)가 이용되고, 상기 진피 전체 100 중량부에 대해 상기 알파아밀라아제(α-Amylase) 0.01 내지 0.03 중량부, 펙티나제(Pectinase) 0.02 내지 0.04 중량부, 자일라나제(Xylanase) 0.03 내지 0.05 중량부 및 셀룰라제(Cellulase) 0.02 내지 0.04 중량부의 중량 비율로 혼합되고, 38 내지 42℃의 온도에서 상기 효소가 혼합된 진피를 10 내지 50시간 동안 보관함으로써 수행되며, 상기 효소 분해된 진피를 8 내지 12℃의 온도에서 20 내지 40일 동안 보관하여 숙성시키며, 상기 숙성된 진피를 여과기를 이용하여 여과함으로써, 여과된 진피액을 제조하고, 상기 여과된 진피액을 농축하여 진피 농축액을 제조하고, 상기 진피 농축액 100 중량부에 대해 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus Plantarum) 0.1 내지 0.2 중량부의 중량 비율로 혼합한 후, 10 내지 15℃의 온도에서 3 내지 6일 동안 발효시키는 과정을 거쳐 제조된 것을 특징으로 하는 매생이 유래 항보체 활성물질의 제조방법.
제 1항 내지 제 5항 중에서 어느 하나의 방법으로 제조된 것을 특징으로 하는 매생이 유래 항보체 활성물질.