KR102130149B1 - 복사나무 검 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

복사나무 검 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부에 대한 유효성을 높인 저분자화된 복사나무 검을 제조하고 이를 화장료로 이용하는 기술에 관한 것으로서, 본 발명에 따르면 고온 가수분해 및 고압 균질화 공정에 의해 제조되는 복사나무 검 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리하여 제조되는 본 발명의 복사나무 검 추출물은 두피를 포함하는 피부의 자극완화, 진정효과가 우수하며, 피부장벽강화에 따른 피부보습효과도 우수할 뿐만 아니라, 두피의 각질개선효과가 우수하므로 각종 외부 스트레스에 노출된 현대인의 피부를 개선하는 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

복사나무 검 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing peach gum extract}
본 발명은 복사나무 검 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리에 의한 저분자화된 복사나무 검(gum) 추출물을 함유하여 피부 자극완화 및 진정효과, 피부염증개선효과, 피부 보습효과, 피부장벽 강화 효과 및 두피각질개선효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부의 각질층은 피부와 외부환경 사이의 첫 번째 장벽으로서 피부 상태를 결정짓는 중요한 요소이다. 건강한 피부의 각질층은 15~20%의 수분을 함유하고 있고, 수분이 10% 이하로 떨어지면 건조해지고 윤기와 탄력이 감소하여 주름이 증가한다. 자극물의 침투와 같은 외인성 요인이나 노화, 호르몬, 스트레스 등의 내인성 요인에 의해 결함이 발생하면 저항력이 떨어지게 되어 표피 이중 지질막의 기능저하를 가져오고 자극물에 대한 예민도를 증가시켜 민감 피부 및 건조 피부가 된다.
사람의 피부는 일반적으로 화장품, 스트레스, 대기오염 등 외부적 영향에 대해 지속적으로 장기간 자극을 받음으로써, 민감도가 증가하고 피부염을 일으키는 민감성 피부가 되는 것이다. 민감성 피부의 주된 증상은 붉은기, 피부 건조감, 피부염 및 여드름 등이 대표적이다. 이 중 붉은기는 피부가 붉게 달아오르는 현상으로 혈관의 확장에 의해 피부가 붉어지고 충혈되는 것으로서, 여러 가지 내부 혹은 외부의 자극에 의해서 발생하는 가장 흔한 피부 반응이다. 또한, 자극에 의해 피부 장벽 기능이 약화됨에 따라 자극 유발 물질이 각질층 내로 침입하여 자극을 유발시켜 피부 염증을 유발하며, 피부 내 수분 유지력이 약화됨에 따라 피부가 쉽게 건조해진다.
두피 또한 피부와 마찬가지로 스트레스, 대기오염에 의해 자극을 받는다. 파마, 염색, 헤어 드라이어 등의 사용으로 인해 모발뿐만 아니라 두피가 자극을 받고 건조해지면서 두피의 붉은기, 각질이 생성된다. 두피의 각질은 더 나아가 비듬의 원인이 되며, 가려움 및 염증을 유발하게 된다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 피부 및 두피 진정효과를 가지는 화장료 개발을 위하여 연구하였으며, 종래 화장료로 사용되던 복사나무 검을 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리하여 추출물을 제조하는 경우에 피부 자극완화 및 진정 효과뿐만 아니라 피부 보습, 피부장벽강화, 두피 각질개선효과가 우수하다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
(001) 대한민국 등록특허 제10-1473940호(2014.12.22.) (002) 대한민국 공개특허 제10-2011-0034150호 (2011.04.05.)
본 발명은 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리하여 제조된 복사나무 검 추출물을 유효성분으로 함유하여 우수한 피부 자극완화 및 진정 효과, 피부 보습효과, 피부장벽 강화 효과, 두피의 각질개선효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 복사나무 검 추출물의 제조방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리하여 제조된 복사나무 검 추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 ~ 50 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
상기 고온 가수분해는 복사나무 검 분산액을 120~150℃에서 1.5~3시간 가열하여 이루어지는 것임을 특징으로 한다.
상기 고압 균질화는 100~120MPa의 압력하에서 이루어지는 것임을 특징으로 한다.
상기 화장료 조성물은 피부자극완화 및 피부진정용인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 화장료 조성물은 두피자극완화 및 두피진정용인 것을 특징으로 한다.
상기 화장료 조성물은 피부보습용 또는 피부장벽강화용인 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 화장료 조성물은 두피각질개선용인 것을 특징으로 한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A) 복사나무 검을 분쇄하여 분말을 제조하는 단계; (B) 상기 복사나무 검 분말에 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매를 첨가하여 분산용액을 제조하는 단계; (C) 상기 분산용액을 120~150℃의 고온에서 1.5~3시간 가열하여 가수분해하는 단계; (D) 가수분해 된 용액을 100~120MPa의 고압조건에서 균질화하는 단계; (E) 상기 균질화된 용액을 원심 분리 또는 감압 여과하여 각각의 상등액 또는 여과액을 수득하는 단계; 및 (F) 상기 수득한 상등액 또는 여과액을 감압 농축하는 단계를 포함하는 복사나무 검 추출물의 제조방법이 제공된다.
고온 가수분해 및 고압 균질화 공정을 통해 제조된 본 발명의 복사나무 검 추출물은 피부 자극완화 및 진정 효과가 증진되며, 우수한 피부 보습 및 피부장벽 강화 효과를 가지고, 두피의 각질개선효과가 우수하므로 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 복사나무 검 추출물의 입도 분석을 통해 입자 사이즈 및 균일도를 나타내는 사진도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 복사나무 검 추출물의 두피 붉은기 완화를 통한 두피 진정 효과를 나타내는 사진도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 복사나무 검 추출물의 두피 각질 개선 효과를 나타내는 사진도이다.
이하 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.
복사나무(Prunus persica (L.) Batsch)는 중국 황허강(黃河) 유역의 고원지대에 그 근원을 두고 있으며, 현재는 한국을 포함하여 미국, 이탈리아, 에스파냐 등지에서 재배되는 식물로 중국, 한국의 전통의학에서 나무껍질, 나뭇잎, 꽃, 열매, 복숭아씨, 복숭아 진까지 모두 약재로 쓰이는 것으로 알려져 있다. 복숭아 진(복사나무 검)은 복숭아나무가 물리적 및 화학적 상처, 수분 스트레스, 미생물 공격에 의해 스스로를 보호하기 위해 분비되는 삼출액으로써, 100,000Da 이상의 고분자형 폴리사카라이드로 구성된다. 복사나무 검의 폴리사카라이드는 갈락토스(galactose)와 아라비노스(arabinose), 자일란(xylan), 우론산(uronic acids)으로 구성된 산성다당체로서 면역기능에 유용한 생리활성을 갖는 물질로 알려져 있다.
본 발명은 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리를 이용하여 저분자화된 복사나무 검 추출물을 제조하고, 이를 화장료로 이용하는 것을 기술적 특징으로 한다.
본 발명에 따르면, 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리하여 제조된 복사나무 검 추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 ~ 20 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 상기 고온 가수분해는 복사나무 검 분산액을 120~150℃에서 1.5~3시간 가열하여 이루어지는 것임을 특징으로 한다. 또한, 상기 고압 균질화는 100~120MPa의 압력하에서 이루어지는 것임을 특징으로 한다.
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 복사나무 검 추출물은 다음과 같은 제조방법에 의하여 제조된다.
(A) 복사나무 검을 분쇄하여 분말을 제조하는 단계; (B) 상기 복사나무 검 분말에 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매를 첨가하여 분산용액을 제조하는 단계; (C) 상기 분산용액을 120~150℃의 고온에서 1.5~3시간 가열하여 가수분해하는 단계; (D) 가수분해 된 용액을 100~120MPa의 고압조건에서 균질화하는 단계; (E) 상기 균질화된 용액을 원심 분리 또는 감압 여과하여 각각의 상등액 또는 여과액을 수득하는 단계; 및 (F) 상기 수득한 상등액 또는 여과액을 감압 농축하는 단계를 통하여 복사나무 검 추출물이 제조된다.
상기 분산용액은 복사나무 검 중량 대비 10~40배의 용매를, 바람직하게는 정제수를 첨가하여 분산시킴으로써 제조된다.
본 발명의 복사나무 검 추출물의 제조에 있어서, 상기 고온 가수분해공정은 120~150℃의 고온에서 가수분해를 수행하는 단계로 상기 가수분해공정을 통하여 복사나무 검의 고분자 결합이 분해된다.
또한, 상기 고압 균질화 처리는 분산용액 내 분산물들의 미립화(deagglomeration) 또는 저분자화(depolymerization)를 통해 분산용액을 균일한 상으로 전환시켜 활성성분의 추출 및 가용화를 용이하게 하는 공정으로써, 100~120MPa 압력하에서 이루어진다. 본 발명의 일 구체예에 따르면 100MPa 압력조건에서 고압균질기(Microfludizer)를 1~5회 통과시켜 균질화한다. 다만 통과횟수가 증가할수록 수득량이 감소하고, 3회 이상에서 효과의 차이가 크지 않아 효율성을 고려하여 바람직하게는 3회 통과시켜 수행한다.
이어서, 상기 고온 가수분해 및 고압 균질화 공정을 거친 용액을 원심 분리 또는 감압 여과하여 각각의 상등액 또는 여과액을 수득한다. 상기 수득한 상등액 또는 여과액을 감압 농축함으로써 복사나무 검 추출물이 제조된다. 입도분석결과, 상기 제조방법에 의하여 제조되는 본 발명의 복사나무 검 추출물은 균일한 입자 사이즈 분포를 나타내었다(도 1).
상기 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리를 거치는 제조방법에 의하여 제조된 복사나무 검 추출물은 열수 추출물이나 고온 가수분해 추출물과 비교해 볼 때, 더욱 우수한 피부 및 두피의 자극 완화 및 진정 효과, 보습 효과 및 피부 장벽 강화효과, 두피 각질 제거 효과를 나타내는 것이 확인되었다.
상기 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리에 의해 제조된 복사나무 검 추출물은 활성성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~50 중량% 함유된다.
본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 및 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 및 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 화장료 조성물의 제형은 제한되지는 않으나 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 트리트먼트, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.
[실시예]
이하, 본 발명을 하기 실시예 및 시험예에 의거하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니다.
제조예 1: 복사나무 검 열수 추출물의 제조
복사나무 검을 중량 대비 10배의 정제수에 넣고 교반하면서 90℃에서 2시간동안 추출하고, 냉각 후 원심분리 하여 상등액을 얻었다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후, 동결건조기로 동결 건조하여 복사나무 검 열수추출물을 제조하였다.
제조예 2: 복사나무 검 고온 가수분해 추출물의 제조
복사나무 검을 중량 대비 10배의 정제수에 넣고 교반하여 30분간 분산시킨 후, 121℃에서 2시간 동안 가열하면서 추출하였다. 냉각 후 원심분리하여 얻은 상등액을 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후, 동결건조기로 동결 건조하여 복사나무 검 고온 가수분해 추출물을 제조하였다.
제조예 3: 복사나무 검 고압 균질화 추출물의 제조
복사나무 검을 중량 대비 10배의 정제수에 넣고 교반하여 30분간 분산시킨 후, 100MPa의 압력으로 고압균질기를 3회 통과 시킨 후 원심분리 하였다. 원심분리하여 얻은 상등액을 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 복사나무 검 고압 균질화 추출물을 제조하였다.
실시예 1~7 : 복사나무 검 고온 가수분해 및 고압 균질화 추출물의 제조
복사나무 검을 중량 대비 10배의 정제수에 넣고 교반하여 30분간 분산시킨 후, 121℃에서 2시간 동안 가열하면서 추출하였다. 추출된 추출액을 고압균질기를 통해 하기 표 1의 압력과 통과 횟수별로 균질화 한 후, 원심분리하여 상등액을 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 추출분말을 제조하였다.
구분 압력 통과 횟수
실시예 1 50 2
실시예 2 50 3
실시예 3 50 4
실시예 4 100 1
실시예 5 100 2
실시예 6 100 3
실시예 7 100 4
시험예 1: 세포독성 확인 시험
상기 제조예 및 실시예에서 제조된 복사나무 검 추출물 시료 처리에 의한 피부 세포의 세포독성을 확인하였다. 사람 유래 섬유아세포 1×106 cells/well 의 농도로 96 well plate에 배양하고 10% FBS를 함유하는 IMDM 배지 0.2㎖를 공급한 후 24시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 여기에 DMSO에 녹인 시료용액을 처리 한 다음 24시간 동안 배양하였다. 이후, 세포의 생존력을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하였다. MTT assay는 배양한 세포에 MTT 용액 0.1㎖을 가한 후, 4시간 동안 배양한 다음 배지는 제거하고 DMSO 0.5㎖를 넣어 형성된 포마잔을 ELISA를 사용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율(%)은 하기 식에 의해 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
세포 생존율(%) = [(St-Bo/(Bt-Bo)] ×100
Bo : 세포배양 배지만을 발색 반응한 웰의 570nm 흡광도
Bt : 시료를 처리하지 않고 발색 반응한 웰의 570nm 흡광도
St : 시료를 처리하고 발색 반응한 웰의 570nm 흡광도
구분 세포 생존율(%)
0.1% 0.5% 1.0%
제조예 1 100 99 91
제조예 2 100 100 94
제조예 3 100 100 95
실시예 1 100 100 94
실시예 2 100 100 95
실시예 3 100 100 97
실시예 4 100 100 95
실시예 5 100 100 99
실시예 6 100 100 100
실시예 7 100 100 100
상기 표 2에서 알 수 있듯이 상기 제조예 및 실시예 추출물을 적용한 시료 모두 90% 세포 생존률이 확인되었으며, 이는 세포 독성에 미치는 영향이 낮아 상대적으로 피부 자극 유발 가능성이 낮고 안전한 것으로 확인되었다.
시험예 2: 자극에 의한 COX-2 및 PGE-2 발현 감소 효과
Human Epidermal Keratinocyte(HaCaT)의 cytokine 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 96 well plate에 5×105cells/ml의 cell을 100 ul씩 넣은 후, CO2배양기에서 48시간 배양한 뒤 배지를 버린 다음, 표면을 PBS 용액으로 세척 한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 자극요인 PMs (25ppm), UV-B(100mJ/cm2), SLS (10ppm), LPS (10ng/ml), Formaldehyde (10ppm)를 각각 처리하여 세포에 자극을 준 후, 상기 제조예 및 실시예의 각 시료 1.0% 씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 mRNA 발현량을 조사하였다.
상기 각각의 자극요인에 의해 증가된 mRNA 발현량을 대조군으로 하여 하기 식에 의해 발현감소율이 산출되었고, 그 결과는 표 3에 나타내었다.
발현 감소율(%)=[1-(시료 mRNA 발현양/대조군 mRNA 발현양)]×100
구분 COX-2 발현 감소율 PGE2 발현 감소율
PMs UVB LPS SLS Formaldehyde PMs UVB LPS SLS Formaldehyde
제조예 1 6.7 7.2 5.5 4.8 6.3 5.2 4.8 3.9 4.4 5.0
제조예 2 9.3 10.1 8.4 9.5 11.0 8.6 9.3 5.2 6.3 7.1
제조예 3 10.0 11.8 9.9 11.4 12.3 9.9 10.0 7.0 8.8 9.2
실시예 1 11.3 13.4 12.3 12.8 14.0 12.7 13.6 8.8 9.7 10.3
실시예 2 16.8 21.8 16.2 16.5 17.2 16.0 15.9 10.8 13.2 14.1
실시예 3 28.3 25.7 21.7 22.3 23.4 21.2 18.8 14.1 15.9 16.8
실시예 4 26.8 24.2 20.4 20.1 21.1 19.7 17.6 12.0 14.5 15.0
실시예 5 29.7 27.9 22.6 23.9 24.1 22.8 20.0 13.9 16.4 17.6
실시예 6 36.1 32.3 25.6 27.4 28.7 26.8 23.7 16.5 19.8 21.0
실시예 7 36.8 33.4 26.1 28.0 29.5 28.3 24.4 16.7 21.0 23.2
Dexamethasone 27.3 25.5 16.7 20.8 21.2 19.6 17.0 13.7 13.4 14.5
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리하여 제조된 복사나무 검 추출물은 일반 열수추출물(제조예 1), 고온 가수분해 추출물(제조예 2) 및 고압 균질화 추출물(제조예 3)들에 비하여 상기 자극요인에 의해 유도된 염증인자 COX-2 및 PGE-2 의 발현을 감소시켰으며, 실시예 3 내지 7에서 높은 발현감소율을 나타내었으며, 효율성을 고려하면 실시예 4 내지 7에서 보다 우수한 효과를 나타내었으며, 실시예 6과 7에서 더욱 우수한 효과를 나타내었다.
시험예 3: 자극에 의한 NF-kB 및 TNF-a 발현감소 효과
Human Epidermal Keratinocyte(HaCaT)의 cytokine 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 96 well plate에 5×105cells/ml의 cell을 100 ul씩 넣은 후, CO2배양기에서 48시간 배양한 뒤 배지를 버린 다음, 표면을 PBS 용액으로 세척 한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 자극요인 PMs(25ppm) , UV-B(100mJ/cm2), SLS (10ppm), LPS (10ng/ml), Formaldehyde (10ppm) 를 각각 처리하여 세포에 자극을 준 후, 상기 제조예 및 실시예의 각 시료 1.0% 씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 mRNA 발현량을 조사하였다.
상기 각각의 자극요인에 의해 증가된 mRNA 발현량을 대조군으로 하여 하기 식에 의해 발현감소율이 산출되었고, 그 결과는 표 4에 나타내었다.
발현 감소율(%)=[1-(시료 mRNA 발현양/대조군 mRNA 발현양)]×100
구분 NF-kB 발현 감소율 TNF-a 발현 감소율
PMs UVB LPS SLS Formaldehyde PMs UVB LPS SLS Formaldehyde
제조예 1 8.8 9.3 4.3 6.5 7.0 6.7 6.2 3.1 4.3 3.5
제조예 2 16.8 15.3 7.6 10.0 14.7 8.9 7.1 4.7 7.2 7.0
제조예 3 21.7 21.0 13.7 13.0 16.6 12.1 11.4 6.5 10.6 9.4
실시예 1 23.7 22.2 16.5 14.7 19.8 17.0 15.7 8.2 13.0 11.3
실시예 2 28.0 27.6 18.4 18.8 21.9 21.2 18.6 10.1 15.2 12.0
실시예 3 34.2 30.7 21.8 23.6 25.2 23.3 22.0 13.8 17.1 14.9
실시예 4 31.3 28.8 19.9 21.4 24.3 22.5 20.8 12.2 16.7 13.8
실시예 5 35.5 32.2 22.2 24.8 27.6 24.5 23.2 13.6 17.6 16.2
실시예 6 38.7 35.2 23.9 27.6 30.0 27.0 25.4 16.5 20.3 18.7
실시예 7 39.3 36.1 24.0 28.4 31.5 28.3 26.0 17.1 20.9 20.0
Dexamethasone 30.9 29.8 19.0 24.2 28.3 22.1 24.7 44.1 20.6 31.2
상기 표 4에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리 복사나무 검 추출물은 일반 열수추출물이나 단일 고온 가수분해추출물, 단일 고압 균질화 처리 추출물에 비하여 상기 자극요인에 의해 유도된 염증인자 NF-kB 및 TNF-a의 발현을 크게 감소시켰음을 알 수 있다.
시험예 4: 자극에 의한 IL-1a 및 1b 발현 억제 효과 시험
Human Epidermal Keratinocyte(HaCaT)의 cytokine 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 96 well plate에 5×105cells/ml의 cell을 100 ul씩 넣은 후, CO2배양기에서 48시간 배양한 뒤 배지를 버린 다음, 표면을 PBS 용액으로 세척 한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 자극요인 PMs(25ppm), UV-B(100mJ/cm2), SLS (10ppm), LPS (10ng/ml), Formaldehyde (10ppm) 를 각각 처리하여 세포에 자극을 준 후, 상기 제조예 및 실시예의 각 시료 1.0% 씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 mRNA 발현량을 조사하였다.
상기 각각의 자극요인에 의해 증가된 mRNA 발현량을 대조군으로 하여 하기 식에 의해 발현감소율이 산출되었고, 그 결과는 표 5에 나타내었다.
발현 감소율(%)=[1-(시료 mRNA 발현양/대조군 mRNA 발현양)]×100
구분 IL-1a 발현 감소율 IL-1b 발현 감소율
PMs UVB LPS SLS Formaldehyde PMs UVB LPS SLS Formaldehyde
제조예 1 12.1 10.4 10.1 9.2 12.7 12.6 11.6 11.0 8.8 10.8
제조예 2 18.4 15.8 14.2 13.0 15.1 14.0 14.2 13.8 12.5 14.0
제조예 3 22.7 17.5 15.4 17.8 19.4 17.2 18.0 15.7 14.3 16.7
실시예 1 25.8 20.3 18.1 20.0 23.8 19.7 23.4 18.3 16.7 17.2
실시예 2 28.0 23.7 20.8 22.6 27.6 22.3 27.3 21.4 18.8 19.3
실시예 3 35.0 28.8 24.3 27.7 33.3 27.8 32.0 25.9 23.7 24.2
실시예 4 33.3 27.0 22.6 25.5 29.6 24.7 29.3 23.8 20.3 21.9
실시예 5 35.5 30.0 28.7 29.6 34.5 30.7 33.1 26.2 24.2 25.4
실시예 6 39.8 33.2 31.2 33.5 37.0 34.2 37.5 28.1 27.0 30.6
실시예 7 41.1 34.4 33.7 34.0 38.6 36.0 38.2 29.3 28.1 31.4
Dexamethasone 35.2 30.8 27.6 31.1 32.7 30.2 32.6 24.5 25.8 27.5
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리 복사나무 검 추출물은 제조예의 추출물들에 비하여 상기 자극요인에 의해 유도된 염증인자 IL-1a 및 1b의 발현을 감소시켰다. 실시예 4 내지 실시예 7에서 더욱 우수한 효과를 나타내었다.
시험예 5: Hyaluronic acid 생성량 측정
상기 제조예 및 실시예에서 제조된 복사나무 검 추출물 시료 처리에 의한 Hyaluronic acid 생성량을 측정하였다. HaCaT 세포를 96 well plate에 1×106cells/well의 농도로 분주하여 배양한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. HaCaT 세포에 각 시료 1.0% 씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 회수한 배양액은 ELISA kit를 이용하여 hyaluronic acid(HA)의 생성량을 측정하였다. 그 결과는 표 6에 나타내었다.
시료명 처리 농도 (%) HA 생성량(ug/ml)
비교예 1 1.0 31.2
비교예 2 1.0 35.7
비교예 3 1.0 36.1
실시예 1 1.0 37.5
실시예 2 1.0 40.9
실시예 3 1.0 49.4
실시예 4 1.0 42.1
실시예 5 1.0 50.3
실시예 6 1.0 56.8
실시예 7 1.0 57.3
히알루론산 1.0 53.7
상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 동일 농도 처리시, 실시예의 복사나무 검 추출물에서 더욱 우수한 Hyaluronic acid 생성량을 보였으며, 그 중에서도 실시예 6, 7에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.
실시예 8: 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리 복사나무 검 추출물을 함유하는 크림 제조
상기 실시예 6의 추출물을 포함하는 크림을 하기 표 7의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
성 분 함량(중량%)
대조예 1 실시예 8
복사나무 검 추출물(실시예 6) - 2.0
친유형 모노스테아린산글리세린 2.0 2.0
스테아릴알콜 2.2 2.2
스테아린산 1.5 1.5
밀납 1.0 1.0
폴리솔베이트 60 1.5 1.5
솔비탄스테아레이트 0.6 0.6
정화식물유 1.0 1.0
스쿠알란 3.0 3.0
광물유 5.0 5.0
트리옥타노인 5.0 5.0
디메치콘 1.0 1.0
소듐마그네슘실리케이트 0.1 0.1
글리세린 5.0 5.0
베타인 3.0 3.0
트리에탄올아민 1.0 1.0
소듐히아루로네이트 4.0 4.0
방부제, 향, 색소 미량 미량
정제수 잔량 잔량
합계 100 100
시험예 6: 피부 붉은기 완화 효과 확인
피부 붉은기 완화 효과를 확인하기 위해, 상기 실시예 8과 대조예 1의 제형을 이용하여 실험 대상자 선정기준에 부합하는 20명의 여성을 대상으로 피부 붉은기 완화에 의한 진정 효과를 평가하였다. 실험 대상자는 실험 결과에 영향을 미칠 수 있는 기능성 케어 제품 사용을 일체 금하였다.
실험이 시작되기 전, 측정하고자 하는 피부의 붉은기를 촬영한 후 2주간 매일 아침, 저녁 세안 후 (2회/일)사용 한 후 비교 평가하였다. 평가는 분광광도계(Spectrophotomoter CR-2600D, Konica Minolta, Japan)를 사용하였다.
붉은기 완화에 의한 진정 효과를 측정하는 값으로 피부의 붉은기를 나타내는 a* value를 분석에 사용하였으며, 사용 전과 비교하여 측정값이 감소할수록 붉은기 완화에 의한 진정효과가 있음을 의미한다. 붉은기 완화에 의한 진정 효과의 개선 평가는 하기의 식을 이용하여 측정한 후, 표 8에 나타내었다.
Figure 112019127877871-pat00001
구분 초기(D0) 평균 2주(D14) 평균 개선율(%)
대조예 1 11.84 11.27 4.81
실시예 8 12.36 11.09 10.27
분광광도계를 이용하여 붉은기 완화에 의한 진정 효과 개선도를 분석한 결과, 피부의 붉은기를 나타내는 a* value가 본 발명의 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리 복사나무 검 추출물을 함유한 실시예 8의 화장료 조성물이 대조예 1에 비해 붉은기 완화에 대한 개선율이 우수함을 확인하였다.
시험예 7: 피부 장벽 기능 강화 효과
피부 장벽기능 강화 효과를 확인하기 위해, 사람의 상박에 테이핑 스트리핑 방법(Taping stripping Method)을 이용하여 피부의 장벽을 손상시킨 후, 상기 실시예 8 및 대조예 1에서 제조한 크림 각각을 5 ㎠ 면적에 도포한 후, 표피 수분 손실량(TEWL, transdermal water loss)을 2시간, 4시간, 6시간, 8시간 경과 후에 측정하여 감소하는 정도를 평가함으로써 장벽기능이 강화되는 정도를 평가하였다. 표피 수분 손실량(TEWL, transdermal water loss)은 Cortex Technology사(덴마크) DermaLab Combo로 측정하였다. 결과는 초기 손상된 장벽 상태에서의 표피 수분 손실량을 기준(100%)으로 하여 시간에 따른 변화를 비교한 후, 하기 표 9에 나타내었다.
시료 0시간 2시간 4시간 6시간 8시간
대조예 1 100 43 59 73 84
실시예 8 100 22 34 40 51
상기 표 9에서 확인되는 바와 같이, 피부 장벽기능 강화 시험 결과 본 발명의 복사나무 검 추출물을 함유한 실시예 8의 크림 조성물은 이를 함유하지 않은 대조예 1의 크림에 비해 우수한 피부 장벽기능 강화를 보였다.
실시예 9: 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리 복사나무 검 추출물을 함유하는 샴푸의 제조
상기 실시예 6의 추출물을 포함하는 샴푸를 하기 표 10의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
성 분 함량(중량%)
대조예 2 실시예 9
복사나무 검 추출물(실시예 6) - 2.0
폴리쿼터늄-10 0.45 0.45
다이소듐이디티에이 0.07 0.07
코카미도프로필베타인 5.0 5.0
라우릴글루코사이드 35.0 35.0
소듐코코일애플아미노산 2.5 2.5
시트릭애씨드 0.2 0.2
글리세린 2.0 2.0
향, 방부제 미량 미량
정제수 잔량 잔량
합계 100 100
시험예 8: 두피 붉은기 완화에 따른 진정효과 시험
두피 붉은기 완화 효과를 확인하기 위해, 상기 실시예 9와 대조예 2의 제형을 이용하여 실험 대상자 선정기준에 부합하는 20명의 여성을 대상으로 두피 붉은기 완화에 의한 진정 효과를 평가하였다. 실험 대상자는 실험 결과에 영향을 미칠 수 있는 두피케어 제품 사용을 일체 금하였다.
실험이 시작되기 전, 측정하고자 하는 두피의 붉은기를 촬영한 후 2주간 샴푸(1회/일)사용 한 후 비교 평가하였다. 평가는 Aram 300 렌즈 카메라를 이용하여 실내온도 22±2℃, 습도 50±10% RH의 항온항습 조건에서 측정하였다. 두피 붉은기 측정 결과를 도 2에 도시하였다.
도 2에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리 복사나무 검 추출물을 함유한 실시예 9의 화장료 조성물이 대조예 2의 화장료 조성물보다 우수한 두피 붉은기 완화 효과를 나타내었다.
시험예 9: 두피 각질 개선 효과 확인
두피 각질 효과를 확인하기 위해, 각 10명씩 나누어 상기 실시예 9와 대조예 2의 제형을 이용하여 하루 1회씩 2주간 샴푸하였다. 2주 후 각질의 개선 정도를 영상 분석을 통해 평가하였다.
실험이 시작되기 전, 측정하고자 하는 두피의 각질을 측정한 후 2주간 도포(1회/일) 한 후, Aram 300 렌즈 카메라를 이용하여 각질 상태를 측정하였다. 두피 각질 상태의 측정 결과를 도 3에 도시하였다.
도 3에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 고온 가수분해 및 고압 균질화 처리 복사나무 검 추출물을 함유한 실시예 9의 샴푸에서 우수한 두피 각질 개선 효과를 나타내었다.

Claims (9)

  1. 복사나무 검 분산액을 120~150℃에서 1.5~3시간 가열하여 이루어지는 고온가수분해 및 가수분해 된 용액을 100~120MPa의 고압조건에서 균질화하는 고압 균질화 처리하여 제조되는 복사나무 검 추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 ~ 50 중량% 함유하는 피부자극완화 및 피부진정용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 두피자극완화 및 두피진정용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 삭제
  7. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부장벽강화효과를 가지는 것을 특징으로 하는 피부자극완화 및 피부진정용 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 두피각질개선효과를 가지는 것을 특징으로 하는 피부자극완화 및 피부진정용 화장료 조성물.
  9. 삭제
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