KR102121121B1

KR102121121B1 - 알킬 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드

Info

Publication number: KR102121121B1
Application number: KR1020180133188A
Authority: KR
Inventors: 민지호; 이재웅; 윤지희
Original assignee: 전북대학교산학협력단
Priority date: 2018-11-01
Filing date: 2018-11-01
Publication date: 2020-06-09
Also published as: KR20200050300A

Abstract

본 발명은 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드에 관한 것으로, 자세하게는 파지 디스플레이 라이브러리를 이용하여 환경호르몬 중에 하나인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 스크리닝하여, 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드, 이를 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 발현벡터, 상기 재조합 발현벡터로 형질전환된 형질전환체, 이를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 조성물, 이를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트 및 이를 포함하는 중금속 제거용 흡착제에 관한 것이다.

Description

알킬 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드 {A peptide that specifically binds to alkyl paraben}

본 발명은 알킬 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드에 관한 것으로, 자세하게는 파지 디스플레이 라이브러리를 이용하여 환경호르몬 중에 하나인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 스크리닝하여, 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드, 이를 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 발현벡터, 상기 재조합 발현벡터로 형질전환된 형질전환체, 이를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 조성물, 이를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트 및 이를 포함하는 중금속 제거용 흡착제에 관한 것이다.

파라벤으로 알려진 4-하이드록시 벤조산의 알킬 에스테르는 개인 위생 용품, 화장품, 의약품, 식품의 방부제로써 사용되고 있다. 하지만 많은 연구에 따르면 파라벤에는 포유류 종에 대한 시험 관내 및 생체 내에서 에스트로겐 모방 활성이 있으며, 이들의 인체 유해성은 오랫동안 이슈가 되고 있다 (Terasaki and Makino 2008). 이러한 문제에도 불구하고 파라벤에는 여러 가지 넓은 범위의 항균 활성, 넓은 pH 범위에 걸친 안정성, 물에 대한 용해성은 물론 가격까지 저렴하기 때문에 아직도 많은 제품에 사용되고 있습니다. 아직도 파라벤에 대한 논란이 많지만 여러 논문에서 유방세포조직에서 파라벤이 지속적으로 검출되고, 유방암 등의 질병과 성조숙증 같은 인체에 악영향을 끼친다고 보고하고 있다. 이러한 파라벤의 유출은 위의 제품의 공장 폐수 대부분이며, 이러한 파라벤을 제거하기 위해 흡착 또는 광분해로써 분해하여 폐수를 배출하게 된다. 하지만 처리과정의 비용이 비쌈은 물론이고 파라벤이 완전하게 분해되지 않고 퇴적물과 수생물에 축적되고 결국은 사람에게 까지 영향을 미치게 된다.

신속하고 효율적이며 상대적으로 저렴한 방법을 제공하는 가장 효과적인 분자 다양성 기술인 파지 디스플레이(phage display, Ph.D;)는 파지 표현형과 파지 표면에 분자 라이브러리를 제공하는 캡슐화 된 유전자형 사이의 직접적인 연결에 기초하며 파지 디스플레이 라이브러리로부터 분리한 특정 리간드나 펩타이드는 약물 설계 및 백신 개발에 사용될 수 있으며, 새로운 아미노산 서열을 가지는 신규 펩타이드를 발굴하고, 개량화하여 질병조기진단용으로 사용하고자 많은 연구들이 이루어지고 있다. 예를 들어 한국공개특허번호 제 10-2018-0075214호에는 파지 디스플레이를 이용하여 노로바이러스에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 선별하여, 노로바이러스 검출 또는 제고용 조성물을 개시하고 있고, 한국등록특허번호 제 10-1828794호에는 파지 디스플레이를 이용하여 중동호흡기 증후군 코로나바이러스에 중화활성을 갖는 항체를 개시하고 있다.

본 발명자들은 수질 오염 및 인간에게 해로운 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 제거하기 위해 실험한 결과 상기 파지 디스플레이 기술을 이용하여 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 표적으로 하여 선택적인 결합력을 보여주는 펩타이드를 선별하였고, 상기 펩타이드는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

상기의 문제를 해결하고자, 본 발명자들은 파지 디스플레이 기술을 이용하여 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 표적으로 하여 특이적으로 결합력을 보이는 펩타이드를 선별하였고, 상기 선별된 펩타이드는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤과 결합하여 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 검출 및 제거하는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 C1 내지 C4 알킬 파라벤 (alkyl paraben)에 특이적으로 결합하는 서열번호 1의 아미노산으로 이루어진 펩타이드를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 C1 내지 C4 알킬 파라벤 (alkyl paraben)에 특이적으로 결합하는 서열번호 2의 아미노산으로 이루어진 펩타이드를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 서술한 펩타이드를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 제거용 바이오 흡착제를 제공하는 것이다.

상기의 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 C1 내지 C4 알킬 파라벤 (alkyl paraben)에 특이적으로 결합하는 서열번호 1의 아미노산으로 이루어진 펩타이드를 제공할 수 있고, 바람직하게는 부틸 파라벤(butyl paraben), 프로필파라벤(propyl paraben), 에틸 파라벤(ethyl paraben), 메틸파라벤(methyl paraben)일 수 있으며, 더 바람직하게는 메틸 파라벤(methyl paraben)일 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 다르면, C1 내지 C4 알킬 파라벤 (alkyl paraben) 에 특이적으로 결합하는 서열번호 2의 아미노산으로 이루어진 펩타이드를 제공할 수 있고, 바람직하게는 부틸 파라벤(butyl paraben), 프로필 파라벤(propyl paraben), 에틸 파라벤(ethyl paraben), 메틸 파라벤(methyl paraben)일 수 있으며, 더 바람직하게는 프로필 파라벤(propyl paraben)일 수 있다.

본 발명자들은 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 신규한 펩타이드를 개발하고자 연구하였다. 그 결과 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 확인하였고, 상기 펩타이드를 이용하여 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 특이적으로 검출할 수 있다는 것을 확인하였다 (도 4).

본 발명의 서열번호 제 1 또는 제 2의 아미노산 서열은 랜덤 파지 펩타이드 라이브러리 (Ph.D-12 파지 도데카 펩티드 라이브러리는 New England Biolabs (Beverly, MA, USA)로부터 구입, 복잡성이 2 Х10¹¹이고 E. coli ER2738이 숙주 균주인 구조적으로 구속된 12-mer 무작위 펩타이드 라이브러리)를 이용하여 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드 서열을 찾은 것이다.

펩타이드는 일반적으로 대략 아미노산 10개 전 후로 이루어지는 비교적 작은 펩타이드를 의미하고, 보다 구체적으로 본 발명에서는 상술한 펩타이드 라이브러리를 구성하는 12개의 아미노산으로 구성된 펩타이드를 의미한다. 본 발명에 따른 펩타이드는 항체에 비해 상대적으로 대량 생산이 용이하고, 독성이 거의 없는 장점이 있다. 또한 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 대한 결합력이 높은 장점이 있으며, 열/화학 처리시에도 변성이 일어나지 않는다. 또한 분자 크기가 작기 때문에 다른 단백질에 결합시켜 융합 단백질로의 이용이 가능하다. 본 발명의 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성에 의해 제조될 수 있다. 대표적인 방법으로는 액체 또는 고체상 합성, 단편 응축, F-MOC 또는 T-BOC 화학법이 포함되나, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 본 발명의 펩타이드는 유전공학적 방법에 의해 제조될 수 있다. 우선, 통상적인 방법에 따라 상기 펩타이드를 코딩하는 DNA 서열을 제작한다. DNA 서열은 적절한 프라이머를 사용하여 PCR 증폭함으로써 제작할 수 있다. 다른 방법으로 당업계에 공지된 표준 방법에 의해, 예컨대, 자동 DNA 합성기(예: Biosearch 또는 Applied Biosystems사에서 판매하는 것)를 사용하여 DNA 서열을 합성할 수도 있다. 제작된 DNA 서열은 이 DNA 서열에 작동 가능하게 연결되어(operatively linked) 그 DNA 서열의 발현을 조절하는 하나 또는 그 이상의 발현 조절 서열(expression control sequence)(예: 프로모터, 인핸서 등)을 포함하는 벡터에 삽입시키고, 이로부터 형성된 재조합 발현 벡터로 숙주세포를 형질 전환 시킨다. 생성된 형질 전환체를 상기 DNA 서열이 발현되도록 적절한 배지 및 조건 하에서 배양하여, 배양 물로부터 상기 DNA 서열에 의해 코딩된 실질적으로 순수한 펩타이드를 회수한다. 상기 회수는 이 기술분야에서 공지된 방법(예컨대, 크로마토그래피)을 이용하여 수행할 수 있다. 상기에서 '실질적으로 순수한 펩타이드'라 함은 본 발명에 따른 펩타이드가 숙주로부터 유래된 어떠한 다른 단백질도 실질적으로 포함하지 않는 것을 의미한다. 본 발명의 펩타이드 합성을 위한 유전공학적 방법은 다음의 문헌을 참고할 수 있다: Maniatis et al., Molecular Cloning; A laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory, 1982; Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N.Y., Second(1998) and Third(2000) Edition; Gene Expression Technology, Method in Enzymology, Genetics and Molecular Biology, Method in Enzymology, Guthrie & Fink (eds.), Academic Press, San Diego, Calif,1991; 및 Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255:12073-12080, 1990. 본 발명의 펩타이드는 N-말단의 아미노 말단의 반응성 제거를 위한 공지된 변성이 가능하고, 예를 들어 아세틸화(Acetylation)가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명인 펩타이드 타겟인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤은 Sigma-Aldrich (Saint Quentin, Fallaviers, France)에서 구입하여, 에틸 알코올에 용해시켜 0.1M 메틸 또는 프로필 파라벤 용액일 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상기 펩타이드의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자를 제공 할 수 있다. 본 명세서에서 용어 "핵산 분자"는 DNA(gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 가지며, 핵산 분자에서 기본 구성 단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)).

뉴클레오타이드에서의 변이는 단백질에서 변화를 가져오지 않는 것도 있다. 이러한 핵산은 기능적으로 균등한 코돈 또는 동일한 아미노산을 코딩하는 코돈 (예를 들어, 코돈의 축퇴성에 의해, 아르기닌 또는 세린에 대한 코돈은 여섯 개이다), 또는 생물학적으로 균등한 아미노산을 코딩하는 코돈을 포함하는 핵산분자를 포함한다. 또한, 뉴클레오타이드에서의 변이가 본 발명인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 표적용 펩타이드의 변화를 가져올 수도 있다. 본 발명인 펩타이드의 아미노산에 변화를 가져오는 변이인 경우에도 본 발명인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드와 거의 동일한 활성을 나타내는 것이 얻어질 수 있다. 본 발명인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드 범위에 포함될 수 있는 생물학적 기능 균등물은 본 발명의 펩타이드와 균등한 생물학적 활성을 발휘하는 아미노산 서열의 변이에 한정될 것이라는 것은 당업자에게 명확하다. 이러한 아미노산 변이는 아미노산 곁사슬 치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 잔기이고; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 크기를 가지며; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 유사한 모양을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다. 변이를 도입하는 데 있어서, 아미노산의 소수성 인덱스 (hydropathic idex)가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 소수성과 전하에 따라 소수성 인덱스가 부여되어 있다: 아이소루이신 (+4.5); 발린 (+4.2); 루이신 (+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스타인 (+2.5); 메티오닌 (+1.9); 알라닌 (+1.8); 글라이신 (-0.4); 쓰레오닌 (-0.7); 세린 (-0.8); 트립토판 (-0.9); 타이로신 (-1.3); 프롤린 (-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트 (-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트 (-3.5); 아스파라긴 (-3.5); 라이신 (-3.9); 및 아르기닌 (-4.5). 펩타이드의 상호적인 생물학적 기능(interactive biological function)을 부여하는 데 있어서 소수성 아미노산 인덱스는 매우 중요하다. 유사한 소수성 인덱스를 가지는 아미노산으로 치환하여야 유사한 생물학적 활성을 보유할 수 있다는 것은 공지된 사실이다. 소수성 인덱스를 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 소수성 인덱스 차이를 나타내는 아미노산 사이에 치환을 한다. 한편, 유사한 친수성 값(hydrophilicity value)을 가지는 아미노산 사이의 치환이 균등한 생물학적 활성을 갖는 펩타이드를 초래한다는 것도 잘 알려져 있다. 미국 특허 제4,554,101호에 개시된 바와 같이, 다음의 친수성 값이 각각의 아미노산 잔기에 부여되어 있다: 아르기닌 (+3.0); 라이신 (+3.0); 아스팔테이트(+3.0± 1); 글루타메이트 (+3.0± 1); 세린 (+0.3); 아스파라긴 (+0.2); 글루타민 (+0.2); 글라이신 (0); 쓰레오닌 (-0.4); 프롤린 (-0.5 ± 1); 알라닌 (-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌 (-1.3); 발린 (-1.5); 루이신 (-1.8); 아이소루이신 (-1.8); 타이로신 (-2.3); 페닐알라닌 (-2.5); 트립토판 (-3.4). 친수성 값을 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 친수성 값 차이를 나타내는 아미노산 사이에 치환을 한다. 분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 펩타이드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다 (H. Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.

상술한 생물학적 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 본 발명인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드 코딩용 핵산 분자는 서열목록에 기재된 서열과 실질적인 동일성 (substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 80%의 상동성, 보다 바람직하게는 90%의 상동성, 가장 바람직하게는 98%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다. 서열비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다. 얼라인먼트에 대한 다양한 방법 및 알고리즘은 Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482(1981)Needleman and Wunsch, J. Mol. Bio. 48:443(1970); Pearson and Lipman, Methods in Mol. Biol. 24: 307-31(1988); Higgins and Sharp, Gene 73:237-44(1988); Higgins and Sharp, CABIOS 5:151-3(1989); Corpet et al., Nuc. Acids Res. 16:10881-90(1988); Huang et al., Comp. Appl. BioSci. 8:155-65(1992) and Pearson et al., Meth. Mol. Biol. 24:307-31(1994)에 개시되어 있다. NCBI Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10(1990))은 NBCI (National Center for Biological Information) 등에서 접근 가능하며, 인터넷 상에서 blastp, blasm, blastx, tblastn and tblastx와 같은 서열 분석 프로그램과 연동되어 이용할 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 핵산 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터를 제공할 수 있다. 본 발명의 벡터 시스템은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있으며, 이에 대한 구체적인 방법은 Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)에 개시되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다. 본 발명의 벡터는 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 본 발명의 핵산 분자가 원핵 세포 유래이고, 배양의 편의성 등을 고려하여, 원핵 세포를 숙주로 하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터 (예컨대, tac 프로모터, lac 프로모터, lacUV5 프로모터, lpp 프로모터, pL

프로모터, pR

프로모터, rac5 프로모터, amp 프로모터, recA 프로모터, SP6 프로머터, trp 프로모터 및 T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 숙주 세포로서 E. coli가 이용되는 경우, E. coli 트립토판 생합성 경로의 프로모터 및 오퍼레이터 부위 (Yanofsky, C., J. Bacteriol., 158:1018-1024(1984)) 그리고 파아지

의 좌향 프로모터 (pL

프로모터, Herskowitz, I. and Hagen, D., Ann. Rev. Genet., 14:399-445(1980))가 조절 부위로서 이용될 수 있다. 한편, 본 발명에 이용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드(예: pSC101, ColE1, pBR322, pUC8/9, pHC79, pUC19 및 pET 등), 파지(예:

gt4·

B,

-Charon,

z1 및 M13 등) 또는 바이러스(예: SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다. 한편, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 지놈으로부터 유래된 프로모터(예: 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 tk 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다. 본 발명의 벡터는 그로부터 발현되는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드의 정제를 용이하게 하기 위하여, 다른 서열과 융합될 수도 있다. 융합되는 서열은 예컨대, 글루타티온 S-트랜스퍼라제 (Pharmacia, USA), 말토스 결합 단백질 (NEB, USA), FLAG (IBI, USA) 및 6x His (hexahistidine; Quiagen, USA) 등이 있고, 가장 바람직하게는 6x His이다. 상기 정제를 위한 추가적인 서열 때문에, 숙주에서 발현된 단백질은 친화성 크로마토그래피를 통하여 신속하고, 용이하게 정제된다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 융합 서열이 포함되어 있는 벡터에 의해 발현된 융합 단백질은 친화성 크로마토그래피에 의해 정제된다. 예컨대, 글루타티온-S-트랜스퍼라제가 융합된 경우에는 이 효소의 기질인 글루타티온을 이용할 수 있고, 6x His이 이용된 경우에는 Ni-NTA His-결합 레진 컬럼 (Novagen, USA)을 이용하여 소망하는 퍼옥시레독신를 신속하고 용이하게 얻을 수 있다. 한편, 본 발명의 발현 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함하며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 발현벡터로 형질 전환된 것을 특징으로 하는 형질전환체를 제공할 수 있다. 본 발명의 벡터를 안정하게 연속적으로 클로닝 및 발현시킬 수 있는 숙주 세포는 당업계에 공지되어있는 어떠한 숙주 세포도 이용할 수 있으며, 예컨대, E. coli Origami2, E. coli JM109, E. coli BL21(DE3), E. coli RR1, E. coli LE392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110와 같은 E.coli 균주, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 츄린겐시스와 같은 바실러스 속 균주, 그리고 살모넬라 티피무리움, 세라티아 마르세슨스 및 다양한 슈도모나스 종과 같은 장내균과 균주 등이 있다. 또한, 본 발명의 벡터를 진핵 세포에 형질전환시키는 경우에는 숙주 세포로서, 이스트(Saccharomyce cerevisiae), 곤충 세포 및 사람 세포(예컨대, CHO 세포주(Chinese hamster ovary), W138, BHK, COS-7, 293, HepG2, 3T3, RIN 및 MDCK 세포주) 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 벡터를 숙주 세포 내로 운반하는 방법은, 숙주 세포가 원핵 세포인 경우, CaCl2 방법(Cohen, S.N. et al., Proc. Natl. Acac. Sci. USA, 9:2110-2114(1973)), 하나한 방법(Cohen, S.N. et al., Proc. Natl. Acac. Sci. USA, 9:2110-2114(1973); 및 Hanahan, D., J. Mol. Biol., 166:557-580(1983)) 및 전기 천공 방법(Dower, W.J. et al., Nucleic. Acids Res., 16:6127-6145(1988)) 등에 의해 실시될 수 있다. 또한, 숙주 세포가 진핵 세포인 경우에는, 미세 주입법(Capecchi, M.R., Cell, 22:479(1980)), 칼슘 포스페이트 침전법(Graham, F.L. et al., Virology, 52:456(1973)), 전기 천공법(Neumann, E. et al., EMBO J., 1:841(1982)), 리포좀-매개 형질감염법(Wong, T.K. et al., Gene, 10:87(1980)), DEAE-덱스트란 처리법(Gopal, Mol. Cell Biol., 5:1188-1190(1985)), 및 유전자 밤바드먼트(Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 87:9568-9572(1990)) 등에 의해 벡터를 숙주 세포 내로 주입할 수 있다. 숙주 세포 내로 주입된 벡터는 숙주 세포 내에서 발현될 수 있으며, 이러한 경우에는 다량의 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 얻게 된다. 예를 들어, 상기 발현 벡터가 lac 프로모터를 포함하는 경우에는 숙주 세포에 IPTG를 처리하여 유전자 발현을 유도할 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 펩타이드를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라겐 검출 또는 제거용 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 펩타이드가 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤과 결합을 형성하였는지 여부를 용이하게 확인, 검출 및 정량하기 위하여, 본 발명의 펩타이드는 표지된 상태로 제공될 수 있다. 즉 검출 가능한 표지에 링크(예: 공유 결합 또는 가교)되어 제공될 수 있다. 상기 링크는 본 발명의 펩타이드와 검출 가능한 표지 사이에 직접 형성되는 것도 가능하지만, 링크를 통해서도 형성 가능하다. 상기 링커는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용 가능하며, 적합한 펩타이드 링커의 서열은 다음과 같은 요소를 고려하여 선택될 수 있다: (a) 유연한 연장된 컨포메이션에 적용될 수 있는 능력; (b) 에피토프와 상호작용 하는 이차구조를 생성하지 않는 능력; 및 (c) 에피토프와 반응할 수 있는 소수성 잔기 또는 전하를 갖는 잔기의 부재.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 발색효소, 방사성 동위원소, 크로모포어(chromopore), 발광물질 및 형광물질로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나로 표지될 수 있다.

상기 표지는 구체적으로 예를 들면, 발색효소에 해당하는 퍼옥시다제(peroxidase), 알칼라인 포스파타제(alkaline phosphatase)); 방사성 동위원소에 해당하는 124I, 125I, 111In, 99mTc, 32P,35S; 크로모포어(chromophore); 발광물질 또는 형광물질에 해당하는 FITC, RITC, 로다민(rhodamine), 텍사스레드(Texas Red), 플로레신(fluorescein), 피코에리트린(phycoerythrin), 퀀텀닷(quantum dots)일 수 있고, 이에 제한되지 않는다. 유사하게, 상기 검출 가능한 표지는 항체 에피토프(epitope), 기질(substrate), 보조인자(cofactor), 저해제 또는 친화 리간드일 수 있다. 이러한 표지는 본 발명의 펩타이드를 합성하는 과정 중에 수행할 수도 있고, 이미 합성된 펩타이드에 추가로 수행될 수도 있다. 상기 검출 가능한 표지를 포함하는 펩타이드는 각각의 표지에 대하여 종래 공지된 검출 방법을 이용하여 검출하는 것이 가능하다. 구체적으로 예를 들어 형광 신호 FITC를 표지로 이용하는 경우, 형광광도계(Fluorometer)를 이용하여 펩타이드에 연결되어진 FITC의 최대 파장(Excitation: 495 nm, Emission: 520 nm)에서 각 펩타이드 농도에 대한 형광세기를 측정하는 방법을 이용할 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 펩타이드를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 진단 키트를 제공할 수 있다. 본 발명인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트는 메틸 파라벤 에 특이적으로 결합하는 서열번호 1의 아미노산으로 이루어진 펩타이드 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 서열번호 2의 아미노산으로 이루어진 펩타이드 또는 이를 암호화하는 핵산분자를 포함할 수 있으며, 상기 펩타이드 또는 핵산분자는 앞서 기재한 바와 같이 화학적 또는 유전공학적 방법에 의해 수득된 것일 수 있다. 상기 펩타이드에 관해서는 본 발명의 다른 일 양태들에 대한 설명을 위해 상술한 바와 동일하다. 본 발명의 키트에는 펩타이드의 구조 또는 생리 활성을 안정하게 유지시키는 완충액 또는 반응액이 추가로 포함될 수 있다. 또한, 안정성을 유지하기 위해, 분말 상태 또는 적절한 완충액에 용해된 상태 또는 4℃ 유지된 상태로 제공될 수 있다. 본 발명인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트는 기존 PCR 방법에 비하여 빠르고 편리하게 현장에서 진단이 가능하고, 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤의 형광 검출 키트 형태로 제공될 수 있다. 종래 공지된 다른 프로브들에 대하여 본 발명의 펩타이드를 연결하여 히스타민 대한 민감도를 증가시킬 수 있고, 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤만을 특이적으로 검출이 가능하며, 형광현미경을 통하여 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 이미지화하여 검출 할 수 있는 시스템의 형태로 제공될 수 있다. 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤의 검출 또는 제거를 용이하게 하기 위하여, 발명의 검출 키트에 포함되는 펩타이드는 상술한 바와 같이 표지된 상태로 제공될 수 있다. 한편, 본 발명의 펩타이드가 표지 되지 않은 채로 제공되는 경우에는, 본 발명인 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트는 본 발명의 펩타이드의 시험관 내 또는 검출 대상에 포함된 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤과의 결합여부 또는 그 위치를 탐색하기 위한 성분을 추가로 포함할 수 있다. 상기 성분은 본 발명의 펩타이드의 표지를 위한 공지의 화합물이거나, 항원-항체반응을 통한 탐색을 위하여 본 발명의 펩타이드 또는 본 발명의 펩타이드와 결합하는 특정 수용체에 대한 항체 또는 이들에 대한 2차 항체 및 이의 검출을 위한 시약일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 진단은 종래의 면역분석(immunoassay) 방식 또는 프로토콜을 변형하여 실시될 수 있다. 예컨대, 종래 면역분석에서 항체 대신에, 본 발명의 펩타이드를 사용하고, 프로세스는 동일하게 하여 본 발명의 진단을 실시할 수 있다. 예를 들어, ELISA(enzyme-linked immunosorbant assay)는 ELONA(enzyme-linked oligonucleotide assay)로 조금 변형하여 실시될 수 있다. 또한 본 발명인 진단용 키트의 펩타이드는 플레이트의 표면에 코팅된 형태로 제공될 수도 있다. 이 경우에는 상기 플레이트에 직접 대상 시료를 접종하여 적당한 조건에서 반응시킨 후, 플레이트의 표면상에서의 대상 시료에 포함된 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤의 결합을 관찰함으로써 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 검출할 수 있다. 본 발명의 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트는 병, 통(tub), 작은 봉지(sachet), 봉투(envelope), 튜브, 앰플(ampoule) 등과 같은 형태를 취할 수 있으며, 이들은 부분적으로 또는 전체적으로 플라스틱, 유리, 종이, 호일, 왁스 등으로부터 형성될 수 있다. 용기는 그 일부이거나 또는 기계적, 접착성 또는 기타 수단에 의해 용기에 부착될 수 있는 완전히 또는 부분적으로 분리가 가능한 마개를 장착할 수 있다. 또한 용기는 주사바늘에 의해 내용물에 접근할 수 있는 스토퍼가 장착될 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태는 상기 서술한 펩타이드를 포함하는 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 제거용 바이오 흡착제를 제공 할 수 있다.

본 발명의 다른 일 양태는 상기 서술한 펩타이드를 이용하여 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤을 검출 또는 제거하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명은 파지 디스플레이 기술을 이용하여 메틸 파라벤과 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드를 선별하였고, 상기 펩타이드는 메틸 파라벤과 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 효과가 있다. 상기 펩타이드를 이용하여, 수생태 독성화학물질인 메틸 파라벤과 프로필 파라벤을 선택적으로 결합하여, 화학물질 검출 및 저감을 위한 바이오 흡착제 또는 디텍터로 사용될 수 있으며 이는 기존의 물리적 분해방법이 아닌 생물학적으로 생물소재를 사용하여 흡착하는 방법으로, 펩타이드를 활용한 다양한 화학물질 검출 기술 개발에서도 활용 범위를 넓힐 수 있는 효과가 있다.

도 1은 파지 디스플레이 라이브러리를 이용한 펩타이드 선별을 위한 biopanning 과정의 모식도이다.
도 2는 PCR을 통해 분석 된 메틸 파라벤 특이적으로 결합하는 서열(MP4) 및 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 서열(PP3)의 DNA의 서열이다.
도 3은 상기 펩타이드의 시간에 따른 흡착능에 대한 실험결과이다. NLP는 2-nonenal에 특이적으로 결합하는 펩타이드이고, TUP는 타겟과 관련 없이 결합한 펩타이드이며, MP4는 메틸 파라벤에 특이적 결합한 펩타이드이다.
도 4는 선택된 펩타이드의 각각에 대한 선택성 평가에 대한 결과이다.

이하에서 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 재료 및 방법

메틸 파라벤 (순도: =99.0)과 n-프로필 파라벤 (=99.0 %)은 Sigma-Aldrich (Saint Quentin, Fallaviers, France)에서 구입하였다. Ph.D-12 파지 도데 카 펩티드 라이브러리는 New England Biolabs (Beverly, MA, USA)로부터 구입하였다. 여기에는 복잡성이 2 Х10¹¹이고 E. coli ER2738이 숙주 균주인 구조적으로 구속 된 12-mer 무작위 펩티드 라이브러리가 들어있다. 항 -M13 항체 [B62-FE2] (HRP) - (ab50307)는 Abcam (Cambridge, MA, USA)에서 구입하였다. 표면 활성화 된 Dynabeads®M-270 카르복실산과 Dynabeads®M-270 Amine은 Life Technologies (Carlsbad, California, USA)에서 구입하였다. 메틸 파라벤 (methyl paraben; MP)과 프로필 파라벤 (propyl paraben; pp) (=99.0 %)은 Sigma-Aldrich (Saint Quentin, Fallaviers, France)에서 구입하였고, 에틸 알코올에 용해시켜 0.1M 파라벤 용액을 준비하였다.

실시예 2. Biopanning에 의한 랜덤 파지 라이브러리 선택

Biopanning에는 많은 단계가 있으며, 일반적으로 각 단계의 biopanning은 3 일이 걸렸다. 0.1M의 MP 및 PP용액 500uL 를 60pi petri dish에 뿌린 후 실온에서 3 시간 이상 에틸 알코올을 증발시켜 파라벤을 재결정화 하였다. 0.1 % (v/v) Tween-20을 함유 한 1ml의 TBS(=TBST)로 2 회 세척 한 후, 1 Х10^{8 ~ 9}pfu/ml Ph.D.-12 파지 라이브러리를 각 파라벤이 코팅 된 플레이트에 뿌린 뒤 각 플레이트의 파라벤 결정이 녹지 않도록 10 ℃에서 1 시간 동안 배양하였다. 결합되지 않은 파지를 제거하기 위해 TBST로 3 회 세척한 후, 결합 파지를 elution buffer (0.2M Glycine-HCl, pH2.2) 1ml를 뿌려 용출시키고 150 μL의 1M Tris-HCl (pH 9.1)로 즉시 중화시켰다. 10μl의 용출 파지는 titering에 사용하고 500μl의 용출파지는 증폭을 위해 대장균 (ER2738) 숙주 균주를 감염시켜 증폭시켜 다음 단계를 위해 파지만을 정제하였다. titering 위해, 용출파지 10μl를 200μl ER2738 세포 배양액에 약 5분동안 감염시킨 후 약 45 ℃ agar LB medium에 넣어 섞은 후 예열 된 LB/IPTG/X-gal 플레이트에 즉시 부었다. 플레이트를 37 ℃에서 밤새 항온 배양 한 후, 청색 플라크를 세어, 플라크 형성 단위 (pfu)로서 파지 역가를 계산 하였다. MP 코팅 플레이트 및 PP 코팅 플레이트로부터의 용출된 파지를 37 ℃에서 4.5 내지 5 시간 동안 격렬한 진탕 (180rpm)으로 초기 대류 상 (OD600 0.01-0.05)에서 20 mL ER2738에서 증폭시켰다. 배양액을 12,000xg에서 10 분간 4 ℃에서 원심 분리 하였다. 상층 액을 1/6 부피의 20 % (w/v) PEG-8000 / 2.5M NaCl를 사용하여 4 ℃에서 하룻밤 동안 침전시켰다. 다음날, PEG 침전을 위해 파지를 12,000xg에서 15 분 동안 4 ℃에서 원심 분리 하였다. 상층 액을 버린 후, 잔류 상층 액을 피펫으로 완전히 제거 하였다. 파지 펠렛은 흰 지문 크기의 얼룩처럼 보일 수 있다. 펠렛을 재현 탁한 후 4 ℃에서 5 분간 최대 (14,000 rpm)로 원심 분리하여 잔류 세포를 펠렛화 하였다. 상층 액을 옮긴 후, 200㎕의 PEG / NaCl을 첨가하고 상층 액을 냉동온도에서 최대 1 시간 동안 반응시켰다. 4 ℃에서 10 분간 최대 (14,000 rpm)에서 원심 분리한 후 TBS 200 μl에 펠렛을 재 현탁 시킨 후 증폭 된 파지를 적정하여 플라크 형성 단위 (pfu)를 계산 하였다.

실시예 3. 파지 DNA 분리 및 서열 분석

파지 DNA 염기 서열 분석을 위해 실시예 2에서 MP와 PP에 결합한 20 개 이상의 개별 파지를 취하여 개별 증폭을 위해 초기 로그 단계 (OD600 0.01-0.05)에서 1 ml ER2738에 감염시켜 증폭하였다. 증폭은 37 ℃에서 4.5 내지 5 시간 동안 180rpm에서 수행되었다. 배양액은 실온에서 1 분간 14,000 rpm으로 원심 분리하고, 파지가 현탁 되어있는 상층 액을 취하였다. 500μl의 상층 액을 DNA 분리에 사용하고 상층 액 300㎕를 글리세롤과 혼합하고 결합 친 화성 시험을 위해 -70 ℃에서 저장 하였다. DNA를 분리하기 위해 상층 액에 PEG / NaCl 200μl를 첨가하고 상등 액을 실온에서 15 분간 배양 하였다. 4 ℃에서 14,000 rpm으로 10 분간 원심 분리하고 상등 액을 버리고 피펫으로 잔여 상층 액을 완전히 제거 하였다. 파지 펠렛이 보이지 않을 수 있다. 펠렛은 튜브를 격렬하게 두드려 100μl의 Iodide용액에 재현탁시켰다. 100 % 에탄올 250μl를 첨가하고 상온에서 10-20 분간 반응시킨 후 4 ℃에서 10 분간 14,000 rpm으로 원심 분리하고 상층 액을 버리고 70 % 에탄올 (-20 ℃) 0.5 ml로 펠릿을 씻은 다음 다시 원심 분리하여 상층 액을 버리고 37 °에서 펠렛을 건조시켰다. 그 후, 3 °DW 30μl에 펠렛을 현탁시켰다. 아가로 오스 겔 전기 영동으로 DNA를 확인하였다. 분리된 파지 DNA를 사용하여 PCR을 수행하고, GeneAll Biotechnology (Seoul, Korea)가 제공 한 Expin PCR SV 정제 키트로 정제 하였다. 모든 DNA 염기 서열은 Cosmo genetech (Daejoen, Korea)에 의해 분석되었다. 도 2와 같이 메틸 파라벤 및 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드의 아미노산 서열을 확인하였다.

실시예 4. 선택된 펩타이드를 이용한 시간에 따른 메틸 파라벤의 농도 감소 실험

실시예 3에서 선택된 특이적으로 결합하는 펩타이드 시퀀스의 결합 특이성 확인하기 위해 3가지 펩타이드를 합성 의뢰한 뒤 Dynabeads®M-270 Amine 과 결합시켰다. 합성한 펩타이드는 타겟과 관련 없이 결합하는 시퀀스(VFHWDRQWWQPS)인 TUP, 본 실험과 연관이 없는 2-nonanal에 특이적으로 결합하는 시퀀스(AHKSKLHQHVMF)인 NLP 및 실시예 3에서 확인된 MP에 특이적으로 결합하는 펩타이드 총 세가지를 합성함. 1ml의 100ppm의 MP용액을 포함하는 유리 바이알에 펩타이드가 결합된 자기비드를 첨가한 후 실온에서 0분, 10분, 60분, 120분, 240분 및 360분 동안 각각 결합시켰다. 이어서 자기비드를 자석으로 제거한 후 MP 및 PP용액을 새로운 튜브에 옮겼다. 또한 실험이 완료된 메틸 파라벤 시료의 농도는 전북 대학교 공동실험실습관에서 고속 액체 크로마토 그래피 (HPLC)로 분석 하였다. 도 3과 같이, 실시예 3의 메틸 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드는 시간이 지날수록 이의 메틸 파라벤과 특이적으로 결합하여 메틸 파라벤의 농도를 낮추는 것으로 확인되었다. 하지만 2시간 이후의 감소량이 큰 차이가 없어 실시예 5에서는 최대 2시간동안 반응을 진행하였다. 타겟과 관련 없이 결합한 펩타이드인 TUP은 메틸 파라벤과 결합되어 제거된 메틸 파라벤의 농도가 한시적으로 감소하지만 시간이 갈수록 그 농도가 비슷한 것을 확인할 수 있었다.

실시예 5. 합성된 펩타이드를 이용한 파라벤 농도 감소 시험

실시예 3의 메틸 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드 시퀀스의 결합 특이성 확인하기 위해 4가지 펩타이드를 합성 의뢰한 뒤 Dynabeads®M-270 Amine 과 결합시켰다. 실시예 3에서 합성한 세 가지 펩타이드와 추가적으로 PP에 특이적으로 결합하는 펩타이드 한 가지를 합성함. 1ml의 100ppm의 MP와 PP용액을 포함하는 유리 바이알에 펩타이드가 결합된 자기비드를 첨가한 후 실온에서 2 시간 동안 반응시켰다. 이어서 자기비드를 자석으로 제거한 후 MP 및 PP용액을 새로운 튜브에 옮겼다. 실험이 완료된 후 메틸 또는 프로필 파라벤 시료의 농도는 전북 대학교 공동실험실습관에서 고속 액체 크로마토 그래피 (HPLC)로 분석 하였다. 도 4과 같이, 실시예 3의 메틸 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드 및 프로필 파라벤에 특이적으로 결합하는 펩타이드는 메틸 또는 프로필 파라벤에 특이적으로 결합한다는 것을 확인하였다. 또한 타겟 교차 실험을 통해 MP4 펩타이드는 프로필 파라벤과 특이적으로 결합하는 경향을 볼 수 없었으며 PP3 펩타이드 또한 메틸 파라벤과 특이적으로 결합하지 않았다. TUP는 메틸 또는 프로필 파라벤를 동시적으로 결합하는 능력을 가지고 있지만 그 효율이 MP4와 PP3에 비해 낮은 결과를 보였으며 NLP는 본 연구에서 연관 지을 수 없는 타겟 특이성을 지니고 있어 어떠한 파라벤에도 결합 특이성을 볼 수 없었다.

<110> INDUSTRIAL COOPERATION FOUNDATION CHONBUK NATIONAL UNIVERSITY <120> A peptide that specifically binds to alkyl paraben <130> 1064393 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Methyl paraben specific peptide <400> 1 Asp Ser Gln Phe Asn Lys Tyr Ser Ile Ala Thr Val 1 5 10 <210> 2 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Propyl paraben specific peptide <400> 2 Ser Trp Phe Ser Asp Trp Asp Leu Glu Leu His Ala 1 5 10

Claims

삭제
C1 내지 C4 알킬 파라벤(alkyl paraben)에 특이적으로 결합하는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드.
제 2항의 펩타이드의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자.
제 3항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 발현벡터.
제 4항의 발현벡터로 형질전환된, 인간을 제외한 형질 전환체.
제 2 항의 펩타이드를 포함하는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 조성물.
제 2 항의 펩타이드를 포함하는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트.
제 7항에 있어서, 상기 펩타이드는 방사성 동위원소, 크로모포어(chromopore), 비오틴, 발광물질, 형광물질(fluorescer)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상으로 표지된 것인, 메틸 파라벤 또는 프로필 파라벤 검출 또는 제거용 키트.
제 2 항의 펩타이드를 포함하는 프로필 파라벤 제거용 바이오 흡착제.