CN108676094B - 人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体及制备方法与应用 - Google Patents

人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体及制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体及制备方法与应用。本发明以IgG抗体的CH2片段为对象，对其羧基端氨基酸进行修饰改造，得到新的CH2骨架。相对于野生型的CH2，其稳定性更好，有利于开发更稳定的C‑型单域抗体，可降低单克隆抗体或者Fc融合蛋白的生产、纯化、保存成本；其抗聚集能力更好，可降低因为蛋白的聚集而导致临床使用风险。

Description

人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体及制备方法与应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地指一种人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体及制备方法与应用。
背景技术
抗体以其特异性强、灵敏度高，广泛应用于各个领域，尤其是生命科学研究和临床治疗如ELISA、Western blot、免疫荧光分析、疾病快速诊断以及作为生物制剂治疗各种疾病。因此，进入21世纪以来，人们也开始越来越关注治疗性抗体药物的研发与临床应用，这是因为它对人体毒副作用小、具有天然和高度特异性的疗效，并且创造出了巨大的社会效益和经济效益。同时，基于CH2片段开发的小型化抗体以其分子量相对较小而具有很好的组织渗透性，可以识别全长抗体难以识别的表位。
然而，以野生型CH2片段为骨架开发的抗体存在自身局限性，如如稳定性差、抗聚集能力弱，在其表达、纯化、贮存等过程中，会倾向于聚集或者降解。而蛋白聚集所导致的免疫原性，不仅降低了药效，同时也给临床应用带来很大的风险。因此，提高抗体热稳定性与抗聚集能力是该领域亟待解决的问题之一。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中Fc片段稳定性差、抗聚集能力弱的缺陷，提供一种人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体及制备方法与应用，与野生型Fc相比，其稳定性与抗聚集能力均有提高，在小型化抗体的研发、生产、临床应用上具有重要意义。
为实现上述目的，本发明提供了一种人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体，它是通过在野生型人源IgG的CH2片段的C端的4个氨基酸进行突变，然后针对利用特异性抗CH2抗体和抗聚集实验筛选获得。
上述方案中，能够实现抗原筛选的多肽及蛋白质文库都可以用于本发明，如酵母展示文库等，优选地，所述在野生型人源IgG的CH2片段的C端的4个氨基酸进行突变，是通过噬菌体展示文库技术进行。
上述方案中，所述筛选获得的人IgG的CH2片段的C端的4个氨基酸序列为KIKK或SIKS。
上述方案中，优选地，所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体的氨基酸全长序列为Seq ID No.1，命名为KIKK。
可选地，所述KIKK的编码基因序列为Seq ID No.2。
上述方案中，优选地，所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体的氨基酸全长序列为Seq ID No.3，命名为IKS。
可选地，所述IKS的编码基因序列为Seq ID No.4。
本发明还提供了上述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体的制备方法，其步骤如下：
(1)构建人源IgG抗体Fc段CH2的C末端氨基酸随机突变文库；
(2)利用特异性抗CH2抗体对所述文库进行筛选，得到候选突变体；
(3)利用抗聚集实验筛选候选突变体获得人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体。
本发明还揭示了上述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体在制备Fc融合蛋白中的应用以及在制备单克隆抗体中的应用。
本发明还提供了一种人IgG抗体Fc段突变体，是通过在野生型人源IgG的Fc片段的氨基酸序列中第242位、第334位、第343位和第431位(氨基酸位置编号参见http://www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html中的Eu numbering，以下同)的氨基酸突变为半胱氨酸，且CH2片段的C端的4个氨基酸(从337位到340位)突变KIKK的氨基酸序列。
上述方案中人IgG的Fc片段的氨基酸序列中第242位亮氨酸、第334位赖氨酸、第343位脯氨酸、第431位丙氨酸的氨基酸突变为半胱氨酸。
本发明还提供了一种人IgG抗体Fc段突变体，是通过在野生型人源IgG的Fc片段的氨基酸序列中第242位、第334位、第343位和第431位(氨基酸位置编号参见http://www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html中的Eu numbering，以下同)的氨基酸突变为半胱氨酸，且CH2片段的C端的3个氨基酸(从338位到340位)突变IKS的氨基酸序列。
上述方案中人IgG的Fc片段的氨基酸序列中第242位亮氨酸、第334位赖氨酸、第343位脯氨酸、第431位丙氨酸的氨基酸突变为半胱氨酸。
本发明以IgG抗体的CH2片段为对象，对其羧基端氨基酸进行修饰改造，得到新的CH2骨架。将该CH2骨架表达纯化之后，对其存在形式与分子结果进行了分子筛、圆二色谱分析，通过紫外分光光度计与荧光光谱仪测定其稳定性、抗聚集能力；随后，利用可识别CH2结构域的单抗Anti-CH2对其构象变化进行了分析，表明定向修饰改造后的CH2骨架空间构象变化后提高了其稳定性。
本发明的有益效果：
1)相对于野生型的CH2，其稳定性更好，有利于开发更稳定的C-型单域抗体，可降低单克隆抗体或者Fc融合蛋白的生产、纯化、保存成本。
2)相对于野生型的CH2，其抗聚集能力更好，可降低因为蛋白的聚集而导致临床使用风险。
附图说明
图1为KIKK蛋白与CH2蛋白的存在形式分析图(单体、二聚体等)。
图2为圆二色谱分析KIKK与CH2蛋白分子构象的分析图。
图3为KIKK与CH2蛋白在变性剂条件下的稳定性比较图。
图4为KIKK与CH2蛋白的热稳定性比较图。
图5为KIKK与CH2蛋白的抗聚集性比较图。
图6为KIKK、CH2蛋白与识别CH2结构域的anti-CH2单抗的亲和力比较图。
图7为IKS蛋白与CH2蛋白的存在形式分析图(单体、二聚体等)。
图8为圆二色谱分析IKS与CH2蛋白分子构象的分析图。
图9为IKS与CH2蛋白在变性剂条件下的稳定性比较图。
图10为IKS与CH2蛋白的热稳定性比较图。
图11为IKS与CH2蛋白的抗聚集性比较图。
图12为IKS、CH2蛋白与识别CH2结构域的anti-CH2单抗的亲和力比较图。
图13为CH2、KIKK、IKS蛋白的热稳定性比较图。
图14为CH2、KIKK、IKS蛋白在变性剂条件下的稳定性比较图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述。以下实施例是在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1：构建CH2的C末端噬菌体展示文库
根据IgG的CH2的基因序列(GenBank:AAC82527.1)，分析其氨基酸序列，设计CH2基因的正、反向引物扩增目的片段(横线标注为Sfi I酶切位点)：
正向引物(5`端到3`端)：
GTG GCC CAG GCGGCCGCACCTGAA CTC CTGGGGGGA CCG TCA GTCTTC CTCTTC-
反向引物(5`端到3`端)：
Figure BDA0001675760780000051
扩增得到的片段经SfiI酶酶切后连接入载体pComb3xSS，构建噬菌体展示文库。
实施例2:候选克隆筛选
1、Panning实验
1)接TG1菌5管，各2ml。约4h可摇到OD600＝0.6。
2)噬菌体库先经过80度加热10min，然后在室温放置20min。
3)封闭Panning孔板
a.吸出包被的蛋白，用PBS洗一遍孔板。
b.在BSA孔中加入噬菌体，5个孔共1012个，牛奶终浓度为2％，每孔100μl。在anti-CH2孔加入3％牛奶，每孔200μl。
c.封闭1h，37℃。
4)结合
BSA孔噬菌体转移到anti-CH2孔，2h，37℃。
5)洗脱
弃噬菌体液，PBST洗10遍(每进行一轮加5遍洗涤次数，共筛选4轮)。
6)感染
在超净台中，Panning孔板每孔加入100μl的TG1菌液，共5个孔，放37℃，15min，吸出菌液转移到新的管中，共4轮，2ml菌液。
7)涂平板
将感染后的2ml菌液混匀，从中取出20μl菌液，加入到480μl培养基中，得到103稀释菌液，再从中取50μl到450μl培养基中，得到104稀释菌液，以此类推，稀释104、105、106和107，涂105、106和107平板。
8)37℃活化30min
9)扩增
将感染后，取过样的菌液加入100μl的40％葡萄糖使菌液葡萄糖终浓度为2％，加入2μl氨苄抗生素，37℃摇菌3h。
10)加入M13K07辅助噬菌体20μl，37℃放置45min，每15min摇一摇。
11)5000rpm，10min收菌，10ml的2×YT重悬，加入10μl的氨苄和卡纳抗生素，30℃摇过夜。
12)第二天沉淀噬菌体，确定浓度，供下一轮Panning实验使用。
13)筛选完成后，挑取单克隆用于单克隆Phage ELISA实验。
2、单克隆Phage ELISA
1)包被anti-CH2抗体4℃夜
2)配3％牛奶。
3)包被的平板将包被蛋白甩干，用PBS洗一遍，加入100μl 3％牛奶封闭1h。
4)甩掉封闭液，拍干。
5)加入一抗，每孔加入50μl，37度温育1h。
6)甩干一抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
7)二抗为anti-M13抗体，1:5000稀释，15ml，牛奶浓度为1％(但是这一次没有加入牛奶)，37度温育1h。
8)甩干二抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
9)每孔加入50μl HRP显色液。
10)显色。
11)读数较高为我们筛选到的候选克隆，随后送测序。
测序结果显示，突变体的基因序列为Seq ID No.2，氨基酸序列为Seq ID No.1，本实施例中筛选出的突变体和野生型人源IgG抗体相比，其Fc段CH2结构域的C端的4个氨基酸为KIKK，命名该突变体为KIKK。
实施例3：CH2与KIKK分子构象与存在形式(单体、二聚体等)
AKTA分析CH2与KIKK存在形式：将纯化后的CH2、KIKK蛋白浓缩到1mg/ml，PBS(pH7.4)为洗脱缓冲液，过Column Superdex 75Increase 10/300GL，其中，流速为1ml/min，进而对其存在形式进行检测，如图1，对照标准曲线可以发现，这两者蛋白分子量约为14kDa，结果表明它们以单聚体形式存在。
CD检测蛋白分子构象：将CH2与KIKK蛋白稀释到0.3mg/ml，PBS(pH7.4)为对照，在近紫外端(波长λ＝190nm～260nm)不同波长条件下检测其圆二色性，进而分析蛋白二级结构。如图2所示，在λ＝218nm处有一个明显波谷，表明上述蛋白二级结构为β-折叠。
实施例4：CH2与KIKK稳定性与抗聚集性比较
变性剂条件下稳定性分析：配置浓度为0M到10M的尿素溶液，浓度梯度为0.5M，共21个样品；然后将CH2与KIKK蛋白加入不同浓度梯度的尿素溶液中4℃过夜处理，体积为180μl，CH2与KIKK蛋白终浓度均为0.1mg/ml。随后，用荧光检测仪器在280nm激发，340nm处检测各个样品荧光强度，比较KIKK和CH2蛋白的稳定性，从图3中可以发现相比CH2，KIKK的荧光信号下降趋势更缓慢，KIKK相比CH2其抗尿素变性能力提高了0.9M。
热稳定性分析：利用圆二色谱仪比较CH2与KIKK蛋白(0.3mg/ml)热稳定性，PBS溶液为空白对照，设置温度梯度条件为每2min升高1℃，终止反应温度为85℃，每30s在波长λ＝218nm处检测其左右圆偏振光的摩尔吸光系数之差，进而比较其热稳定性差异，如图4，可以发现改造后的KIKK的热稳定性比CH2高3.5℃。
抗聚集性分析：将CH2与KIKK蛋白终浓度调整为1mg/ml，在50℃水浴锅处理，每隔一定时间取样，在λ＝320nm处检测吸光度并记录数据，其中，PBS溶液为空白对照，比较KIKK与CH2蛋白的抗聚集性强弱，从图5中可以发现KIKK信号上升趋势较缓，表明其抗聚集能力更好。
实施例5：ELISA测定CH2和KIKK与anti-CH2的结合力
1)包被anti-CH2抗体，4℃过夜。
2)配3％牛奶。
3)包被的平板将包被蛋白甩干，用PBS洗一遍，加入100μl 3％牛奶封闭1h。
4)甩掉封闭液，拍干。
5)KIKK和CH2以1μmol为起点，三倍倍比稀释，稀释6个稀释度，作为一抗。
6)加入一抗，每孔加入50μl，37度温育1h。
7)甩干一抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
8)二抗为HRP-anti-His抗体，1:5000稀释，15ml，牛奶浓度为1％，37度温育1h。
9)甩干二抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
10)每孔加入50μlHRP显色液。
11)显色。
通过ELISA分析anti-CH2单抗分别与KIKK、CH2亲和力，在λ＝405nm处检测不同浓度的KIKK和CH2的吸光度并记录分析数据，从图6中可以发现经过改造后的KIKK与anti-CH2单抗亲和力与CH2几乎相同，证明其构象未发生改变。
实施例6：候选克隆筛选
1、Panning实验
1)接TG1菌5管，各2ml。约4h可摇到OD600＝0.6。
2)噬菌体库(还是实施例1的噬菌体文库)先经过80度加热10min，然后在室温放置20min。
3)封闭Panning孔板
a.吸出包被的蛋白，用PBS洗一遍孔板。
b.在BSA孔中加入噬菌体，5个孔共1012个，牛奶终浓度为2％，每孔100μl。在anti-CH2孔加入3％牛奶，每孔200μl。
c.封闭1h，37℃。
4)结合
BSA孔噬菌体转移到anti-CH2孔，2h，37℃。
5)洗脱
弃噬菌体液，PBST洗10遍(每进行一轮加5遍洗涤次数，共筛选4轮)。
6)感染
在超净台中，Panning孔板每孔加入100μl的TG1菌液，共5个孔，放37℃，15min，吸出菌液转移到新的管中，共4轮，2ml菌液。
7)涂平板
将感染后的2ml菌液混匀，从中取出20μl菌液，加入到480μl培养基中，得到103稀释菌液，再从中取50μl到450μl培养基中，得到104稀释菌液，以此类推，稀释104、105、106和107，涂105、106和107平板。
8)37℃活化30min
9)扩增
将感染后，取过样的菌液加入100μl的40％葡萄糖使菌液葡萄糖终浓度为2％，加入2μl氨苄抗生素，37℃摇菌3h。
10)加入M13K07辅助噬菌体20μl，37℃放置45min，每15min摇一摇。
11)5000rpm，10min收菌，10ml的2×YT重悬，加入10μl的氨苄和卡纳抗生素，30℃摇过夜。
12)第二天沉淀噬菌体，确定浓度，供下一轮Panning实验使用。
13)筛选完成后，挑取单克隆用于单克隆Phage ELISA实验。
2、单克隆Phage ELISA
1)包被anti-CH2抗体4℃夜
2)配3％牛奶。
3)包被的平板将包被蛋白甩干，用PBS洗一遍，加入100μl 3％牛奶封闭1h。
4)甩掉封闭液，拍干。
5)加入一抗，每孔加入50μl，37度温育1h。
6)甩干一抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
7)二抗为anti-M13抗体，1:5000稀释，15ml，牛奶浓度为1％(但是这一次没有加入牛奶)，37度温育1h。
8)甩干二抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
9)每孔加入50μlHRP显色液。
10)显色。
11)读数较高为我们筛选到的候选克隆，随后送测序。
测序结果显示，突变体的基因序列为Seq ID No.4，氨基酸序列为Seq ID No.3，本实施例中筛选出的突变体和野生型人源IgG抗体相比，其Fc段CH2结构域的C端的3个氨基酸为IKS，命名该突变体为IKS。
实施例7：CH2与IKS分子构象与存在形式(单体、二聚体等)
AKTA分析CH2与IKS存在形式：将纯化后的CH2、IKS蛋白浓缩到1mg/ml，PBS(pH7.4)为洗脱缓冲液，过Column Superdex75Increase 10/300GL，其中，流速为1ml/min，进而对其存在形式进行检测。如图7，对照标准曲线可以发现，这两者蛋白分子量约为14kDa，结果表明它们以单聚体形式存在。
CD检测蛋白分子构象：将CH2与IKS蛋白稀释到0.3mg/ml，PBS(pH7.4)为对照，在近紫外端(波长λ＝190nm～260nm)不同波长条件下检测其圆二色性，进而分析蛋白二级结构。如图8示，在λ＝218nm处有一个明显波谷，表明上述蛋白二级结构为β-折叠。
实施例8：CH2与IKS稳定性与抗聚集性比较
变性剂条件下稳定性分析：配置浓度为0M到10M的尿素溶液，浓度梯度为0.5M，共21个样品；然后将CH2与IKS蛋白加入不同浓度梯度的尿素溶液中4℃过夜处理，体积为180μl，CH2与IKS蛋白终浓度均为0.1mg/ml。随后，用荧光检测仪器在280nm激发，340nm处检测各个样品荧光强度，比较IKS和CH2蛋白的稳定性，从图9可以发现相比CH2，IKS的荧光信号下降趋势更缓慢，IKS相比CH2其抗尿素变性能力提高了约1M。
热稳定性分析：利用圆二色谱仪比较CH2与IKS蛋白(0.3mg/ml)热稳定性，PBS溶液为空白对照，设置温度梯度条件为每2min升高1℃，终止反应温度为85℃，每30s在波长λ＝218nm处检测其左右圆偏振光的摩尔吸光系数之差，进而比较其热稳定性差异，如图10，可以发现改造后的IKS的热稳定性比CH2高，Tm值提高了约8℃。
抗聚集性分析：将CH2与IKS蛋白终浓度调整为1mg/ml，在50℃水浴锅处理，每隔一定时间取样，在λ＝320nm处检测吸光度并记录数据，其中，PBS溶液为空白对照，比较IKS与CH2蛋白的抗聚集性强弱，从图11中可以发现IKS信号上升趋势较缓，表明其抗聚集能力更好。
实施例9：ELISA测定CH2和IKS与anti-CH2的结合力
1)包被anti-CH2抗体，4℃过夜。
2)配3％牛奶。
3)包被的平板将包被蛋白甩干，用PBS洗一遍，加入100μl 3％牛奶封闭1h。
4)甩掉封闭液，拍干。
5)IKS和CH2以1μmol为起点，三倍倍比稀释，稀释6个稀释度，作为一抗。
6)加入一抗，每孔加入50μl，37度温育1h。
7)甩干一抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
8)二抗为HRP-anti-His抗体，1:5000稀释，15ml，牛奶浓度为1％，37度温育1h。
9)甩干二抗，PBST手洗一遍，每孔100μl；机洗8遍；PBS洗一遍；拍干。
10)每孔加入50μlHRP显色液。
11)显色。
通过ELISA分析anti-CH2单抗分别与IKS、CH2亲和力，在λ＝405nm处检测不同浓度的IKS和CH2的吸光度并记录分析数据，从图12中可以发现经过改造后的IKS与anti-CH2单抗亲和力与CH2几乎相同，证明其构象未发生改变。
实施例10：CH2、KIKK、IKS稳定性比较
热稳定性分析：利用圆二色谱仪比较CH2、KIKK和IKS蛋白(0.3mg/ml)热稳定性，PBS溶液为空白对照，设置温度梯度条件为每2min升高1℃，终止反应温度为85℃，每30s在波长λ＝218nm处检测并记录数据，供分析使用。结果如图13，显示IKS具有最强的热稳定性。Tm值：IKS(62.99℃)＞KIKK(58.16℃)＞CH2(54.68℃)。
变性剂条件下稳定性分析：配置浓度为0M到10M的尿素溶液，浓度梯度为0.5M，共21个样品；然后将CH2、KIKK和IKS蛋白加入不同浓度梯度的尿素溶液中4℃过夜处理，体积为180μl，CH2与IKS蛋白终浓度均为0.1mg/ml。随后，用荧光检测仪器在280nm激发，340nm处检测各个样品荧光强度。结果如图14，显示IKS具有最强的抗尿素变性能力。抗尿素变性能力：IKS(5.02M)＞KIKK(4.45M)＞CH2(4.06M)。
序列表
<110> 武汉班科生物技术股份有限公司
<120> 人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体及制备方法与应用
<130> 2018
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> KIKK
<400> 1
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<212> DNA
<213> KIKK
<400> 2
caccatcacc atcaccatgg cgcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 60
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 120
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 180
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 240
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 300
tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatca aaatcaaaaa a 351
<210> 3
<211> 117
<212> PRT
<213> IKS
<400> 3
His His His His His His Gly Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Ile Lys Ser
115
<210> 4
<211> 351
<212> DNA
<213> IKS
<400> 4
caccatcacc atcaccatgg cgcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 60
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 120
gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 180
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 240
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 300
tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccatcaaatc c 351

Claims (5)

1.一种人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体，其特征在于：所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体是通过在野生型人源IgG的CH2片段的C端的4个氨基酸进行突变，然后针对利用特异性抗CH2抗体和抗聚集实验筛选获得；所述筛选获得的人IgG1的CH2片段的C端的4个氨基酸序列为KIKK或SIKS。
2.根据权利要求1所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体，其特征在于：所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体的氨基酸全长序列为Seq ID No.1。
3.根据权利要求2所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体，其特征在于：所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体的编码基因序列为Seq ID No.2。
4.根据权利要求1所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体，其特征在于：所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体的氨基酸全长序列为Seq ID No.3。
5.根据权利要求4所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体，其特征在于：所述人IgG抗体Fc段CH2结构域突变体的氨基酸全长序列为Seq ID No.4。
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