KR102115878B1 - 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법 - Google Patents

3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR102115878B1
KR102115878B1 KR1020180097285A KR20180097285A KR102115878B1 KR 102115878 B1 KR102115878 B1 KR 102115878B1 KR 1020180097285 A KR1020180097285 A KR 1020180097285A KR 20180097285 A KR20180097285 A KR 20180097285A KR 102115878 B1 KR102115878 B1 KR 102115878B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
culture
culture vessel
pillar
support
well
Prior art date
Application number
KR1020180097285A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20190021179A (ko
Inventor
이동목
이우종
김우진
박현숙
이순례
배준혁
김기영
박성범
김광록
고범석
강덕진
Original Assignee
한국생산기술연구원
(주)세포바이오
한국화학연구원
한국표준과학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국생산기술연구원, (주)세포바이오, 한국화학연구원, 한국표준과학연구원 filed Critical 한국생산기술연구원
Priority to PCT/KR2018/009688 priority Critical patent/WO2019039875A2/ko
Priority to US16/640,849 priority patent/US11802263B2/en
Priority to JP2020511163A priority patent/JP7046160B2/ja
Publication of KR20190021179A publication Critical patent/KR20190021179A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102115878B1 publication Critical patent/KR102115878B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/26—Inoculator or sampler
    • C12M1/32—Inoculator or sampler multiple field or continuous type
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/14—Scaffolds; Matrices
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/12—Well or multiwell plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
    • C12M35/08—Chemical, biochemical or biological means, e.g. plasma jet, co-culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0062—General methods for three-dimensional culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
    • C12N2502/1157—Monocytes, macrophages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
    • C12N2502/1352—Mesenchymal stem cells
    • C12N2502/1382—Adipose-derived stem cells [ADSC], adipose stromal stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2513/00—3D culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/30—Synthetic polymers
    • C12N2533/40—Polyhydroxyacids, e.g. polymers of glycolic or lactic acid (PGA, PLA, PLGA); Bioresorbable polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2535/00—Supports or coatings for cell culture characterised by topography

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법에 관한 것으로서, 상기 배양용기 상에 위치한 기둥에 의하여 웰(well)이 형성되며, 상기 웰 내부에는 상기 기둥으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함한다.
본 발명에 따르면, 종래와 달리, 배양용기와 이격된 위치에서 세포가 배양됨으로써, 3차원 세포배양 구조물에 필요한 산소 공급이 원활한 장점이 있다.

Description

3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법 {CULTURE DEVICE FOR THREE DIMENSIONAL CELL CULTURE AND CO-CULTURE METHOD OF THREE DIMENSIONAL CELL USING THE SAME}
본 발명은 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 종래와 달리, 배양용기의 바닥면과 이격된 위치에서 세포가 배양됨으로써, 3차원 세포배양 구조물에 필요한 공기의 공급이 원활한 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법에 관한 것이다.
세포의 배양은 바이오 분야 연구에서 가장 기본이 되는 연구 방법으로서 생명체의 기능 연구뿐만 아니라 인체 질환을 연구하는 데에도 매우 광범위하게 이용되고 있다. 일반적인 진핵세포(eukaryotic cell)의 세포배양 방법이 개발 및 확립된지도 40 여년이 경과되었지만, 부착성 세포(adherent cell)의 성장을 지지하기 위해 현재까지 가장 흔히 사용되고 있는 방법은 폴리스티렌(polystyrene), 폴리프로필렌(polypropylene), 폴리에틸렌(polyethylene), 폴리카보네이트(PC)과 같은 합성 폴리머 수지 혹은 유리(glass)로 된 기질로 이루어진 2차원 표면에서 세포를 배양하는 것이다.
그러나, 단층 세포배양 방법인 2차원적 세포배양법에 의해 성장하는 세포는 세포가 잘 부착될 수 있도록 처리된 배양용기 표면에 부착되어 자라므로 3차원적 생체조직 환경에서 성장하는 세포와 많은 차이점을 나타낸다. 따라서, 2차원적 및 3차원적 세포배양은 전반적인 형태학적 차이를 나타내며, 또한 통상적인 2차원적 세포배양을 통하여 일어나는 수용체의 발현, 유전자의 전사조절, 세포의 이동 및 세포자멸사(apoptosis) 등 많은 복잡한 생명 현상이 실제 생체 조직환경에서 일어나는 현상과 크게 다르기 때문에, 2차원적 세포배양 방법은 3차원 상에서 세포가 성장하는 생체의 생리적 환경을 정확히 반영할 수 없다는 문제점을 가지고 있다.
실제로, 비만, 당뇨, 동맥경화 등과 같은 대사성 질환(metabolic disease)의 치료제 개발 시에, 초기 시험관 내(in vitro) 실험에서는 우수한 약효를 보였던 약물들이 생체 내(in vivo) 동물 실험에서는 약효가 현저히 떨어지는 등 신약 개발에 많은 어려움이 따르고 있다. 이러한 문제를 해결하기 위해서는, 치료제 개발의 초기 단계에서부터 약물의 정확한 효능 및 독성을 예측할 수 있는 생체 내 모델과 유사한 시험관 내 모델이 필요하다.
종래의 세포배양 용기는 3차원 세포배양시 공간적 한계로 공기의 공급과 순환이 원활하지 않아 3차원 세포의 성장과 조직형성이 충분히 이루어지기 어려워, 약물 스크리닝이나 독성 시험에 적용하기에 어려움이 있었다.
따라서, 이와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 3차원 세포의 빠른 성장에 적합하면서도, 2차원과 3차원 공배양도 가능한 세포배양 용기에 대한 기술개발이 요구되고 있다.
일본공개특허 제2013-215152호
본 발명은 상기 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 종래와 달리, 배양용기의 바닥면과 이격된 위치에서 세포가 배양됨으로써, 3차원 세포배양 구조물에 필요한 공기 순환과 공급이 원활한 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법을 제공하는 것으로 목적으로 한다.
배양용기 상에 3차원 구조체를 별도로 지지하는 지지부 구조를 구현함으로써, 3차원 구조체의 삽입과 획득 및 제거가 용이한 것을 목적으로 한다.
또한, 3차원 배양에 최적화된 지지부 구조로 인하여, 공기 순환과 배양액 내 영양 성분의 원활한 공급으로 3차원 세포 배양뿐만 아니라 2가지 이상의 세포를 공배양하는 경우 이를 효율적으로 유지할 수 있는 것을 목적으로 한다.
본 발명에 따른 3차원 세포 배양방법은 세포의 성장이 빠르고 다양한 크기 조절이 가능하며, 3차원 배양 분화된 세포는 동물대체시험에 적용하여 약물 스크리닝이나 독성 시험 등에 효과적으로 이용할 수 있다.
또한, 지지부 영역이 안으로 파인 형태로 설계함으로써, 기둥으로 돌출된 지지부로 인한 외관 수축현상을 방지하여 내구성이 높은 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법을 제공하는 것으로 목적으로 한다.
또한, 손상된 인체조직 기능을 복원하기 위한 3차원 세포배양 및 분화 혹은 조직배양 용기로 활용 가능한 것을 목적으로 한다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 배양용기는, 상기 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의하여 웰(well)이 형성되며, 상기 웰 내부에는 상기 기둥으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함할 수 있다.
상기 지지부는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 이격되어 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치할 수 있다.
또는 상기 지지부는 상기 배양용기의 바닥면에 접하는 형태로서, 상기 기둥의 측면을 따라 지지부가 형성될 수 있다. 여기서, 상기 지지부의 최상단은 상기 배양용기로부터 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치할 수 있다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 배양용기에서, 상기 웰의 단면부를 기준으로, 상기 기둥으로부터 상기 지지부 끝단까지의 거리는 상기 웰의 지름 대비 15 내지 30%일 수 있다.
또한, 상기 지지부와 접하는 상기 기둥 영역 중 적어도 일부와 상기 기둥 영역에 접하는 상기 지지부 영역 중 적어도 일부가 제거될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 배양용기는, 상기 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의하여 웰(well)이 형성되며, 상기 웰 내부에는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함하고, 상기 지지부의 상단은 곡면 형태로 구성되고, 상기 지지부의 최상단은 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 배양용기는, 상기 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의하여 웰(well)이 형성되며, 상기 웰 내부에는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함하고, 상기 지지부의 상단 표면 중 적어도 일부가 오목하게 파인 형태로 구성될 수 있다. 상기 지지부의 상단 표면은 가장자리 영역과 중앙부 영역으로 구분되며, 상기 중앙부 영역은 오목하게 파인 형태이고, 상기 가장자리 영역은 플랫하거나 돌출방향으로 볼록하게 돌출된 형태이며, 상기 지지부의 상단 표면에서, 상기 가장자리 영역은 10 내지 30%, 상기 중앙부 영역은 70 내지 90% 면적을 차지할 수 있다.
다음으로, 본 발명에 따른 3차원 세포 배양 방법은, 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의해 형성된 웰(well) 내부에 상기 기둥 또는 상기 바닥면으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함하는 3차원 세포배양을 위한 배양용기를 준비하는 준비단계; 및 세포가 접종된 3차원 구조체를 상기 지지부 상에 위치시켜 배양하는 배양단계;를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 3차원 세포 공배양 방법은, 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의해 형성된 웰(well) 내부에 상기 기둥 또는 상기 바닥면으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함하는 3차원 세포배양을 위한 배양용기를 준비하는 준비단계; 제 1세포를 상기 웰 내부에 접종하는 접종단계; 상기 제 1세포를 배양한 후 상층액을 제거하고 배양액을 적어도 일부 교환하는 교환단계; 및 제 2세포가 접종된 3차원 구조체를 상기 지지부 상에 위치시켜 공배양하는 공배양단계;를 포함할 수 있다.
상기 공배양단계 이후, 1 내지 5일 간격으로 상기 배양액을 교체하는 교체단계;를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법에 따르면, 종래와 달리, 배양용기의 바닥면과 이격된 위치에서 세포가 배양됨으로써, 3차원 세포배양 구조물에 필요한 산소 공급이 원활한 장점이 있다.
배양용기 상에 3차원 구조체를 별도로 지지하는 지지부 구조를 구현함으로써, 3차원 구조체의 삽입과 획득 및 제거가 용이한 장점이 있다.
또한, 3차원 배양에 최적화된 지지부 구조로 인하여, 3차원 세포배양뿐만 아니라, 2종류 이상의 세포 공배양을 효율적으로 진행할 수 있는 장점이 있다.
본 발명에 따른 3차원 세포 배양방법은 세포의 성장이 빠르고 다양한 크기 조절이 가능하며, 생체 모사 모델 혹은 동물대체시험법으로 약물 스크리닝이나 약효 확인, 독성 시험 등에 보다 효과적인 장점이 있다.
또한, 지지부 영역이 안으로 파인 형태로 설계함으로써, 기둥으로 돌출된 지지부로 인한 외관 수축현상을 방지하여 내구성이 높은 장점이 있다.
또한, 손상된 인체조직 기능을 복원하기 위한 3차원 세포배양 및 조직배양 용기로 활용 가능한 장점이 있다.
도 1은 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제1실시예를 나타낸 사시도
도 2는 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제1실시예를 나타낸 평면도
도 3은 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제2실시예를 나타낸 사시도
도 4는 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 16웰 형태를 나타낸 사시도
도 5는 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제3실시예를 나타낸 사시도
도 6은 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제3실시예를 나타낸 외면도
도 7은 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제4실시예를 나타낸 사시도
도 8은 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제4실시예를 나타낸 평면도
도 9는 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제5실시예를 나타낸 평면도
도 10은 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기의 제6실시예를 나타낸 평면도
도 11은 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기로 3차원 세포배양을 실시한 실험결과를 나타낸 그래프
도 12는 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기를 구현한 구현예로서, (a)는 구현된 배양용기에서 세포가 포함된 비드를 배양하는 이미지, 및 (b)는 세포가 포함된 비드를 배양용기에서 획득하는 단계를 보여주는 이미지
이하, 본 발명에 의한 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법에 대하여 본 발명의 바람직한 하나의 실시형태를 첨부된 도면을 참조하여 상세히 설명한다. 본 발명은 하기의 실시예에 의하여 보다 더 잘 이해될 수 있으며, 하기의 실시예는 본 발명의 예시목적을 위한 것이고, 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
도 1 및 도 2 에 나타난 바와 같이, 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기(100)의 제 1실시예는, 배양용기의 바닥면(110) 상에 위치한 기둥(120)에 의하여 웰(well)(140)이 형성되며, 상기 웰(140) 내부에는 상기 기둥(120)으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부(130)를 포함할 수 있다.
먼저, 배양용기의 바닥면(110)은 기초를 형성하는 면으로, 폴리스티렌(PS), 폴리프로필렌(PP), 폴리에틸렌(PE), 폴리카보네이트(PC), 유리 등 세포배양에 적용되는 어떠한 소재로 구성되어도 무방하다.
상기 기둥(120)은 배양용기의 바닥면(110)에 접하여 형성되며, 바닥면(11)과 동일한 소재로 구성되는 것이 바람직하며, 일체로 사출될 수 있다. 기둥(120)은 하나의 배양용기의 바닥면(110) 상에 복수로 위치할 수 있으며, 각 기둥(120)마다 웰(140)이 형성될 수 있다. 도 4에 나타난 바와 같이, 16웰, 96웰처럼 다양한 숫자의 웰을 갖도록 구성될 수 있다.
기둥(120)의 단면 형태는, 원형 또는 다각형일 수 있으며, 바람직하게는, 타원형 또는 원형, 가장 바람직하게는, 원형일 수 있다.
상기 지지부(130)는 상기 배양용기의 바닥면(110)로부터 이격되어 상기 다박면(110)로부터 상기 기둥(120)의 20 내지 60%의 높이에 위치하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는, 25 내지 50%의 높이에 위치하고, 가장 바람직하게는, 30 내지 35%의 높이에 위치하는 것이 효과적이다. 20% 미만의 높이에 위치하는 경우에는 하부에서의 세포에의 원활한 공기 순환 및 공급이 어려우며, 60%를 초과하는 높이에 위치하는 경우에는 지지부(130) 상에 올려지는 3차원 세포 구조체와 웰(140)에 담긴 타 세포간의 공배양이 이루어지기 어려운 문제가 있다.
또한, 도 2에 나타난 바와 같이, 상기 웰(140)의 단면부를 기준으로, 상기 기둥(120)으로부터 상기 지지부(130) 끝단까지의 거리는 웰(140)의 지름 대비 15 내지 30%인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는, 20 내지 25%, 가장 바람직하게는, 22 내지 23%인 것이 효과적이다. 15% 미만인 경우에는 3차원 세포 구조체를 안정적으로 지지하기 어려우며, 30%를 초과하는 경우에는 지지부(130)의 바닥면(110)로부터의 이격 효과가 떨어지며, 즉, 원활한 공기 순환 및 공급이 어려워 세포 성장에 악영향을 주는 문제가 있다.
상기 지지부(130)의 개수는 2 내지 5개인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는, 3 내지 4개, 가장 바람직하게는, 3개인 것이 효과적이다. 2개 미만인 경우에는 사실상 3차원 세포 구조체의 지지가 불가능하며, 5개를 초과하는 경우에는 지지부(130)와 배양용기의 바닥면(110)간의 오픈 공간이 과도하게 좁아 공기 순환 및 공급, 2종 이상의 세포 공배양 등의 효율이 현저히 저하되는 문제가 있다.
도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기(100)의 제 2실시예는, 상기 지지부(130)는 상기 배양용기의 바닥면(110)에 접하는 형태로서, 상기 기둥(120)의 측면을 따라 지지부(130)가 형성될 수 있다.
이와 같이, 상기 배양용기의 바닥면(110)로부터 기둥(120)의 측면을 따라 지지부(130)가 형성되므로, 일체로 사출이 용이하여 제조공정이 단순해지고 경제성이 높아지는 장점이 있다. 뿐만 아니라, 지지부(130)가 기둥(120)의 측면을 따라 기둥형태로 형성되므로, 보다 높은 안정성과 내구성을 갖는다.
여기서, 상기 지지부(130)의 최상단은 상기 배양용기의 바닥면(110)로부터 상기 기둥(120)의 20 내지 60%의 높이에 위치하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는, 25 내지 50%의 높이에 위치하고, 가장 바람직하게는, 30 내지 35%의 높이에 위치하는 것이 효과적이다. 20% 미만의 높이에 위치하는 경우에는 하부에서의 세포에의 원활한 산소 공급이 어려우며, 60%를 초과하는 높이에 위치하는 경우에는 지지부(130) 상에 올려지는 3차원 세포 구조체와 웰(140)에 담긴 타 세포간의 공배양이 이루어지기 어려운 문제가 있다.
도 5 및 도 6에 나타난 바와 같이, 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기(100)의 제 3실시예는, 상기 지지부(130)와 접하는 상기 기둥(120) 영역 중 적어도 일부와 상기 기둥(120) 영역에 접하는 상기 지지부(130) 영역 중 적어도 일부가 제거될 수 있다.
여기서, 지지부(130) 영역 중 제거된 일부 영역과 지지부(130)와 접하는 기둥(120) 영역 중 제거된 일부는 도 5 및 도 6에 나타난 언더컷 영역(150)으로, 웰(140) 내부에 형성된 지지부(130)의 표면을 제외한 나머지 영역은 모두 제거되는 것이 바람직하다.
또한, 도 7 및 도 8에 나타난 바와 같이, 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기(100)의 제 4실시예는, 배양용기의 바닥면(110) 상에 위치한 기둥(120)에 의하여 웰(well)(140)이 형성되며, 웰(140) 내부에는 상기 배양용기의 바닥면(110)로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부(130)를 포함할 수 있다. 이는 기둥(120)이 아닌 배양용기의 바닥면(110) 상에 지지부(130)가 돌출됨으로써, 배양용기의 바닥면(110)와의 3차원 세포 구조체를 이격시키는 역할을 한다.
상기 지지부(130)의 최상단은 상기 배양용기의 바닥면(110)로부터 상기 기둥(120)의 20 내지 60%의 높이에 위치하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는, 25 내지 50%의 높이에 위치하고, 가장 바람직하게는, 30 내지 35%의 높이에 위치하는 것이 효과적이다. 20% 미만의 높이에 위치하는 경우에는 하부에서의 세포에의 원활한 산소 공급이 어려우며, 60%를 초과하는 높이에 위치하는 경우에는 지지부(130) 상에 올려지는 3차원 세포 구조체와 웰(140)에 담긴 타 세포간의 공배양이 이루어지기 어려운 문제가 있다.
도 8에 나타난 바와 같이, 상기 웰(140)의 단면부를 기준으로, 상기 지지부(130)의 지름은 웰(140)의 지름 대비 2 내지 10%인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는, 4 내지 8%, 가장 바람직하게는, 5 내지 6%인 것이 효과적이다. 2% 미만인 경우에는 3차원 세포 구조체를 안정적으로 지지하기 어려우며, 10%를 초과하는 경우에는 지지부(130)의 배양용기의 바닥면(110)으로부터의 이격 효과가 떨어지며, 즉, 원활한 공기 순환과 영양성분의 공급이 어려워 세포 성장에 악영향을 주는 문제가 있다.
또한, 도 9에 나타난 바와 같이, 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기(100)의 제 5실시예는, 상기 지지부(130)의 상단이 곡면 형태(131)로 구성될 수 있다. 곡면으로 형성됨으로써, 각이 진 영역으로 인한 세포 손상을 방지할 수 있을 뿐만 아니라, 세포가 접종된 3차원 구조체가 더 안정적으로 지지될 수 있어서 생존율이 높아지는 장점이 있다.
도 10에 나타난 바와 같이, 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기(100)의 제 6실시예는, 상기 지지부(130)의 상단 표면 중 적어도 일부가 오목하게 파인 형태로 구성될 수 있다. 지지부(130) 상단의 중앙부위가 가장 깊도록 오목하게 파여 있으므로, 세포 지지가 더욱 안정적이여서 공배양의 효율과 생존율을 현저히 향상시킬 수 있다. 또한, 세포가 지지부(130)에 접촉되는 면이 최소화되고 오목하게 파인 면은 원활한 공기 순환 효과를 극대화시킬 수 있어서 세포 성장에 효과적이다.
상기 지지부(130)의 상단 표면은 가장자리 영역과 중앙부 영역(132)으로 구분되며, 상기 중앙부 영역(132)은 오목하게 파인 형태이고, 상기 가장자리 영역은 플랫하거나 돌출방향으로 볼록하게 돌출된 형태일 수 있다. 세포가 가장자리 영역에만 접촉하게 되어 손상을 최소화하면서도 원활한 공기 순환으로 생존율이 크게 높아지는 장점이 있다.
상기 지지부(130)의 상단 표면에서, 상기 가장자리 영역은 10 내지 30%, 상기 중앙부 영역은 70 내지 90% 면적을 차지할 수 있으며, 더 바람직하게는, 상기 가장자리 영역은 15 내지 20%, 상기 중앙부 영역은 80 내지 85% 면적을 차지하는 것이 효과적이다. 이는 세포가 안정적으로 지지되기 위한 최적의 면적을 제공하면서도 세포 성장 및 생존율을 최대한 높일 수 있도록 수차례 실험을 통하여 최적화된 면적 범위이다. 추가적으로, 제5실시예처럼 상기 지지부(130)의 상단은 곡면 형태(131)로 구성될 수 있다.
다음으로, 본 발명의 3차원 세포 배양 방법은, 준비단계(S10); 및 배양단계(S11)를 포함할 수 있다. 이는 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기 구조를 이용하여 효과적으로 세포를 배양할 수 있는 방법이다.
먼저, 준비단계(S10)는 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의해 형성된 웰(well) 내부에 상기 기둥으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부 또는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함하는 3차원 세포배양을 위한 배양용기를 준비하는 단계이다. 상기 준비단계(S10)에서, 상기 지지부의 최상단은 상기 기둥 또는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치할 수 있다.
배양단계(S11)는 세포가 접종된 3차원 구조체를 상기 지지부 상에 위치시켜 배양하는 단계이다. 3차원 배양에 최적화된 지지부 구조로 인하여, 3차원 세포배양이 효율적으로 진행된다.
다음으로, 본 발명의 3차원 세포 공배양 방법은, 준비단계(S20); 접종단계(S21); 교환단계(S22); 및 공배양단계(S23)를 포함할 수 있다. 이는 제 1세포와 제 2세포를 본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기 구조를 이용하여 효과적으로 공배양할 수 있는 방법이다.
먼저, 준비단계(S20)는 배양용기 상에 위치한 기둥에 의해 형성된 웰(well) 내부에 상기 기둥으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부 또는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 돌출된 적어도 하나의 지지부를 포함하는 3차원 세포배양을 위한 배양용기를 준비하는 단계이다. 상기 준비단계(S20)에서, 상기 지지부의 최상단은 상기 기둥 또는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치할 수 있다.
접종단계(S21)는 제 1세포를 상기 웰 내부에 접종하는 단계이다. 즉, 제 1세포와 배양액을 웰 내부에 접종할 수 있다.
여기서, 제 1세포는 제 2세포와 공배양이 가능한 어떠한 세포이든 무방하나, 정확히는 부착세포일 수 있으며, 간엽세포 혹은 간엽줄기세포, 지방전구세포, 지방세포, 평활근 세포(Smooth Muscle Cell, SMC) 또는 마크로파지(macrophage) 중 적어도 하나일 수 있다.
교환단계(S22)는 상기 제 1세포를 배양한 후 상층액을 제거하고 배양액을 적어도 일부 교환하는 단계이다. 웰 내의 배양액에서 제 1세포 배양으로 인해 발생한 상층액을 제거하고 배양액의 일부 또는 전부를 교환함으로써, 공배양 효율을 높일 수 있다.
공배양단계(S23)는 제 2세포가 접종된 3차원 구조체를 상기 지지부 상에 위치시켜 공배양하는 단계이다. 여기서, 3차원 구조체는 비드 또는 지지체 형태인 것이 바람직하다.
여기서, 상기 제 2세포는, 배양 가능한 진핵세포일 수 있으며, 더 상세하게는 상피세포, 섬유아세포, 골아세포, 연골세포, 간세포, 제대혈세포, 탯줄 유래 간엽줄기세포(Umbilical cord mesenchymal stem cell, UCMSC), 지방 유래 간엽줄기세포(Adipose derived mesenchymal stem cell, ADMSC) 또는 골수 유래 간엽줄기세포(Bone marrow-derived mesenchymal stem cell, BMMSC) 중 적어도 하나일 수 있다.
마지막으로, 교체단계(S24)는 상기 공배양단계(S23) 이후, 1 내지 5일 간격으로 상기 배양액을 교체하는 단계이다. 더 바람직하게는, 2 내지 3일 간격으로 교체하는 것이 효과적이다. 이는 세포배양에 필요한 영양성분의 공급과 배양 중 생성되는 세포 생존 저해 물질을 제거함으로써 세포 또는 조직이 지속적으로 성장하도록 하기 위함이다.
실시예 1) 배양용기 제작 및 멸균
본 개발의 실시예로 쾌속 조형(RP;rapid prototyping) 장비를 이용한 임의형상제작 (SFF;solid freeform fabrication) 방식으로 한층, 한층 적층하여 형상을 제작하는 3D 프린팅 기술을 이용하여 배양용기를 제작하고 멸균은 전자빔 가속기를 사용하여 수행하였다.
실시예 2) 제 1세포 배양
본 발명의 3차원 세포배양을 위한 배양용기를 이용한 3차원 세포배양의 효과를 측정하기 위한 실험으로 다음과 같은 조건으로 실험을 실시하였다.
- 세포: 3T3-L1(지방전구세포)(2.45x106cells/5mL/Tube), 지방 유래 간엽줄기세포(ADMSC)
- 배양기간: 7일간 배양
- 세포계수: 0, 3, 7일째 세포계수
- 알지네이트 혼합: 1.3% 농도
제 1세포는 3T3-L1(지방전구세포)로, 구체적으로, 냉동 보관된 제 1세포를 37℃ 항온수조에서 해동하여 15ml tube로 옮기 뒤, 기본배지(DMEM + 1% antibiotics)를 추가하여 1,500RPM에서 5분간 원심분리하여 상등액을 제거하고 다시 한번 기본배지를 추가하여 앞의 방법을 반복함으로써 동결보존액 성분을 완전히 제거한 후 100mm 배양접시에 DMEM + 1% antibiotics + 10% FBS 포함한 배지와 함께 세포를 접종하여 37℃, 5% 이산화탄소 배양기에서 배양하고, 4 내지 5일 후 충분히 세포가 증식되면 0.05% trypsin-EDTA를 처리하여 배양용기의 웰당 세포를 1x103 농도로 접종하였다.
실시예 3) 제 2세포가 포함된 비드 제작
제 2세포는 지방 유래 간엽줄기세포(Adipose derived mesenchymal stem cell, ADMSC)로, 제 2세포가 접종된 3차원 구조체를 비드 형태로 제작하였다.
비드는, 배양액, 알지네이트 및 젤라틴을 튜브에 투입하여 65℃ 하에서 녹이는 멜팅단계; 상기 튜브의 온도를 37℃로 낮추고, 상기 튜브에 상기 제 2세포(2.45x106cells/5mL/Tube)를 투입하여 500RPM으로 2분간 교반하는 교반단계; 및 상기 튜브 내의 혼합물을 비드 형태로 만들고, 염화칼슘용액에 넣어 가교시켜 제조하는 제조단계;를 포함하여 제조되었다.
교반 이후에는, 원심분리를 통하여 1500RPM으로 버블을 제거한다. 상기 제조단계에서, 염화칼슘용액의 농도는 5%로 하였다.
상기 가교된 비드는 인산완충식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척하고, 10% 우태아 혈청이 함유된 배양액에 넣어 37℃, 5% 이산화탄소 배양기에서 배양함으로써, 상기 제 2세포가 접종된 비드 형태의 3차원 구조체를 제조하였다(도 10의 (b)).
실시예 4) 지지체 제작과 멸균공정
지지체는, 폴리카프롤락톤을 이용하여 제작하였다. 우선 폴리카프롤락톤을 튜브에 투입하여 90℃ 하에서 650 내지 730kPa의 압력을 가한 이후에는 에어컨트롤러의 흡입기능을 이용하여 3차원 지지체를 제작하고 전자빔 가속도를 이용하여 멸균공정을 처리하였다.
실시예 5) 제2세포가 포함된 지지체를 이용한 3차원 세포 배양
제2세포가 포함된 지지체를 이용한 3차원 세포배양은, 제 2세포를 25㎕씩 4개의 drop 지지체 위에 접종한 후 1시간 동안 배양하고 1ml 배지 첨가하고 37℃, 5% 이산화탄소 조건하에서 배양함으로써, 상기 제 2세포가 접종된 지지체 형태의 3차원 구조체를 제조하였다.
도 11 및 도 12에 나타난 바와 같이, 본 발명에 의한 배양용기를 사용하여 실시한 3차원 세포배양은 일반적인 배양용기를 이용한 2차원 세포배양과 달리, 배양시간이 지날수록 세포수가 감소하지 않고 증가하는 것을 알 수 있다. 즉, 본 발명의 배양용기로 3차원 세포배양이 보다 지속적으로 이루어질 수 있음을 실제 실험에서 확인할 수 있었다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예를 설명하였으나, 본 발명은 다양한 변화와 변경 및 균등물을 사용할 수 있다. 본 발명은 상기 실시예를 적절히 변형하여 동일하게 응용할 수 있음이 명확하다. 따라서 상기 기재 내용은 하기 특허청구범위의 한계에 의해 정해지는 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.
100: 3차원 세포배양을 위한 배양용기
110: 배양용기
120: 기둥
130: 지지부
140: 웰(well)
150: 언더컷 영역

Claims (12)

  1. 3차원 세포배양을 위한 배양용기에 있어서,
    상기 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의하여 형성된 웰(well); 및
    상기 웰 내부에 3개 또는 4개가 서로 이격되게 형성되고 상기 기둥으로부터 돌출된 복수의 지지부;를 포함하며,
    상기 각 지지부는 그 최상단이 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치하여 세포가 접종된 3차원 구조체에 대한 지지가 가능한 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 지지부는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 이격되게 위치하는 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 지지부는 상기 배양용기의 바닥면에 접하는 형태로서, 상기 기둥의 측면을 따라 지지부가 형성되는 것을 특징으로 하는 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  4. 삭제
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 웰의 단면부를 기준으로, 상기 기둥으로부터 상기 지지부 끝단까지의 거리는 상기 웰의 지름 대비 15 내지 30%인 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  6. 제 3항에 있어서,
    상기 지지부와 접하는 상기 기둥 영역 중 적어도 일부와 상기 기둥 영역에 접하는 상기 지지부 영역 중 적어도 일부가 제거된 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  7. 3차원 세포배양을 위한 배양용기에 있어서,
    상기 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의하여 형성된 웰(well); 및
    상기 웰 내부에 3개 또는 4개가 서로 이격되게 형성되고 상기 배양용기의 바닥면으로부터 돌출된 복수의 지지부;를 포함하며,
    상기 각 지지부는 그 상단이 곡면 형태로 구성되고, 그 최상단이 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치하여 세포가 접종된 3차원 구조체에 대한 지지가 가능한 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  8. 3차원 세포배양을 위한 배양용기에 있어서,
    상기 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의하여 형성된 웰(well); 및
    상기 웰 내부에 3개 또는 4개가 서로 이격되게 형성되고 상기 배양용기의 바닥면으로부터 돌출된 복수의 지지부;를 포함하며,
    상기 각 지지부는 그 상단 표면 중 적어도 일부가 오목하게 파인 형태로 구성되고, 그 최상단이 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치하여 세포가 접종된 3차원 구조체에 대한 지지가 가능한 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 지지부의 상단 표면은 가장자리 영역과 중앙부 영역으로 구분되며, 상기 중앙부 영역은 오목하게 파인 형태이고, 상기 가장자리 영역은 플랫하거나 돌출방향으로 볼록하게 돌출된 형태이며,
    상기 지지부의 상단 표면에서, 상기 가장자리 영역은 10 내지 30%, 상기 중앙부 영역은 70 내지 90% 면적을 차지하는 3차원 세포배양을 위한 배양용기.
  10. 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의해 형성된 웰(well)과, 상기 웰 내부에 3개 또는 4개가 상기 기둥 또는 상기 바닥면으로부터 돌출되어 서로 이격되게 형성된 복수의 지지부를 각각 포함하는 배양용기를 이용한 3차원 세포 배양 방법으로서,
    상기 배양용기를 준비하는 준비단계; 및
    세포가 접종된 3차원 구조체를 상기 지지부 상에 위치시켜 배양하는 배양단계;를 포함하며,
    상기 준비단계에서, 상기 각 지지부의 최상단은 상기 기둥 또는 상기 배양용기의 바닥면으로부터 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치하는 3차원 세포 배양 방법.
  11. 배양용기의 바닥면 상에 위치한 기둥에 의해 형성된 웰(well)과, 상기 웰 내부에 3개 또는 4개가 상기 기둥 또는 상기 바닥면으로부터 돌출되어 서로 이격되게 형성된 복수의 지지부를 각각 포함하는 배양용기를 이용한 3차원 세포 공배양 방법으로서,
    상기 배양용기를 준비하는 준비단계;
    제 1세포를 상기 웰 내부에 접종하는 접종단계;
    상기 제 1세포를 배양한 후 상층액을 제거하고 배양액을 적어도 일부 교환하는 교환단계; 및
    제 2세포가 접종된 3차원 구조체를 상기 지지부 상에 위치시켜 공배양하는 공배양단계;를 포함하며,
    상기 준비단계에서, 상기 각 지지부의 최상단은 상기 기둥의 20 내지 60%의 높이에 위치하는 3차원 세포 공배양 방법.
  12. 제 11항에 있어서,
    상기 공배양단계 이후,
    1 내지 5일 간격으로 상기 배양액을 교체하는 교체단계;를 더 포함하는 3차원 세포 공배양 방법.
KR1020180097285A 2017-08-22 2018-08-21 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법 KR102115878B1 (ko)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2018/009688 WO2019039875A2 (ko) 2017-08-22 2018-08-22 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법
US16/640,849 US11802263B2 (en) 2017-08-22 2018-08-22 Culture vessel for three-dimensional cell cultivation and three-dimensional cell co-cultivation method using same
JP2020511163A JP7046160B2 (ja) 2017-08-22 2018-08-22 ３次元細胞培養のための培養容器およびこれを利用した３次元細胞共培養方法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170106348 2017-08-22
KR20170106348 2017-08-22

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190021179A KR20190021179A (ko) 2019-03-05
KR102115878B1 true KR102115878B1 (ko) 2020-05-27

Family

ID=65760424

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020180097285A KR102115878B1 (ko) 2017-08-22 2018-08-21 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법

Country Status (3)

Country Link
US (1) US11802263B2 (ko)
JP (1) JP7046160B2 (ko)
KR (1) KR102115878B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230059725A (ko) 2021-10-26 2023-05-03 (의료)길의료재단 3차원 세포 배양을 위한 구형 구조체 및 구형 구조체의 제조 방법

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102328931B1 (ko) * 2019-11-26 2021-11-23 한국생산기술연구원 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법
KR102379490B1 (ko) * 2020-04-24 2022-03-28 재단법인대구경북과학기술원 세포 배양 장치

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005176630A (ja) * 2003-12-16 2005-07-07 Canon Inc 細胞培養用基板、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法
WO2007049576A1 (ja) 2005-10-28 2007-05-03 Kuraray Co., Ltd. 細胞培養容器及び細胞培養方法
JP2012509663A (ja) * 2008-11-21 2012-04-26 コーニング インコーポレイテッド 細胞培養のための、突起間隔を開けた基板および装置

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0751215A3 (en) * 1995-06-29 1997-03-05 Becton Dickinson Co Culture container for use with culture plates
JP4665589B2 (ja) 2005-04-01 2011-04-06 ニプロ株式会社 細胞培養用容器
JP2013215152A (ja) 2012-04-11 2013-10-24 Vessel Inc ３次元細胞培養プレートとその製造方法
KR101703988B1 (ko) 2014-04-11 2017-02-08 중앙대학교 산학협력단 폴리디메틸실록산 기반 3차원 세포 배양 장치
JP6421473B2 (ja) 2014-06-25 2018-11-14 大日本印刷株式会社 細胞培養容器

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005176630A (ja) * 2003-12-16 2005-07-07 Canon Inc 細胞培養用基板、その製造方法、それを用いた細胞スクリーニング法
WO2007049576A1 (ja) 2005-10-28 2007-05-03 Kuraray Co., Ltd. 細胞培養容器及び細胞培養方法
JP2012509663A (ja) * 2008-11-21 2012-04-26 コーニング インコーポレイテッド 細胞培養のための、突起間隔を開けた基板および装置

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230059725A (ko) 2021-10-26 2023-05-03 (의료)길의료재단 3차원 세포 배양을 위한 구형 구조체 및 구형 구조체의 제조 방법

Also Published As

Publication number Publication date
JP2020531019A (ja) 2020-11-05
US20210040425A1 (en) 2021-02-11
JP7046160B2 (ja) 2022-04-01
US11802263B2 (en) 2023-10-31
KR20190021179A (ko) 2019-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240093134A1 (en) Culture chamber and culture method
KR101678796B1 (ko) 세포 배양 장치 및 방법
KR102115878B1 (ko) 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법
US10752879B2 (en) Culture method and cell cluster
JP6987080B2 (ja) 細胞増殖のための三次元バイオリアクター及び関連用途
CN111139213B (zh) 多层次结构支架及其制备方法与应用
JP5676265B2 (ja) 細胞保存方法、及び細胞輸送方法
US20100297233A1 (en) Oscillating cell culture bioreactor
CN106554937B (zh) 一种肝细胞的体外三维培养方法
WO2018061846A1 (ja) 細胞組織の製造方法、及び多孔フィルム
US11634675B2 (en) Insertable culture container and kit for three-dimensional cell culture, and three-dimensional cell co-culture method using same
Dermenoudis et al. Bioreactors in tissue engineering
Zhang et al. Bioreactor technology for cell therapy manufacturing in regenerative medicine
KR101896834B1 (ko) 세포배양 기판 및 이의 제조방법
Bennet et al. Airway-on-a-Chip: Development and in Vitro Validation of a Microfluidic Cell Culture Model for Chronic Obstructive Pulmonary Disease
Kreß et al. Application of Scaffold-Free 3D Models
WO2019039875A2 (ko) 3차원 세포배양을 위한 배양용기 및 이를 이용한 3차원 세포 공배양 방법
US8945924B2 (en) Process and culturing unit for culturing biological cells
KR20230151722A (ko) 세포의 3차원 배양을 이용한 3차원 세포 집합체 제조 방법
CN115605575A (zh) 细胞培养装置
Masuda et al. Formation of toroidal multicellular aggregate of cardiomyocytes

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant