KR102108600B1 - 변형된 tgf-베타2 올리고뉴클레오타이드 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및/또는 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는, TGF-베타2 핵산 서열의 선택된 영역의 10 내지 18 뉴클레오타이드로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기와 같은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이며, 여기에서 상기 조성물 또는 상기 올리고뉴클레오타이드는 악성 및/또는 양성 종양, 면역학적 질환, 섬유증, 또는 안과 질환, 예를 들어 안구 건조증, 녹내장 또는 후낭 혼탁(PCO)의 예방 및/또는 치료에 사용된다.
Description
본 발명은 TGF-베타2 핵산 서열, TGF-베타1 또는 TGF-베타3 핵산 서열과 하이브리드화할 수 있는 10 내지 18 뉴클레오타이드들로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것으로, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및/또는 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다.
형질전환 성장 인자 베타(TGF-베타)는 대부분의 세포에서 증식, 세포 분화, 및 다른 기능들을 조절하는 단백질이다. 상기 TGF-베타는 무엇보다도 면역성, 암, 심장병, 당뇨병, 마르팡 증후군, 로이-디에츠 증후군, 파킨슨병, 및 AIDS에서 한 역할을 하는 사이토킨의 한 유형이다.
TGF-베타는, 상이한 유전자들에 의해 암호화되지만 강한 서열 및 구조 상동성을 공유하는 적어도 3개의 동형(TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3)으로 존재하는 분비 단백질이다. TGF-베타는 정상적인 상피 세포 및 발암 초기 단계에서 증식억제 인자로서 작용한다. 그러나, 종양 발생의 말기에서 TGF-베타는, 종양 진행, 침습 및 전이에 기여하는 것으로 생각되는 과정인 상피에서 중간엽으로의 변이(EMT)의 유도를 포함하는 기전을 통해 종양 촉진성으로 될 수 있다(문헌[ "Glycoproteomic analysis of two mouse mammary cell lines during transforming growth factor (TGF)-beta induced epithelial to mesenchymal transition" 7th space. com.2009-01-08. Retrieved: 2009-01-29]을 참조하시오).
정상(상피) 세포에서, TGF-베타는 G1 단계에서 세포 주기를 정지(및 세포 증식을 정지)시키거나, 분화를 유도하거나, 또는 세포사멸을 촉진한다. 세포가 암세포로 형질전환되는 경우, TGF-베타는 더 이상 세포 증식을 억제하지 않으며(이는 종종 신호전달 경로의 돌연변이의 결과이다), 암세포가 증식한다.
기질 섬유아세포의 증식이 또한 TGF-베타에 의해 유도된다. 상기 세포들은 모두 TGF-베타의 생산을 증가시킨다. 상기 TGF-베타는 주변 기질 세포, 면역 세포, 내피, 평활근 세포, 및 종양 미세환경상에서 작용한다(문헌[Pickupet al., "The roles of TGF6 in the tumour microenvironment", Nature Reviews Cancer (2013), 13: 788-799]을 참조하시오). 이에 의해, 상기 TGF-베타는 혈관형성을 촉진하며, 면역세포의 증식 및 활성화를 억제함으로써 면역억제를 유발한다.
TGF-베타1-결핍 마우스는 심장, 폐 및 위 염증으로 죽으며, 이는 TGF-베타가 염증 세포의 활성화 및 증식을 억제함에 있어서 지극히 중요한 역할을 함을 암시한다. Smad3은 TGF-베타 의존성 하류 신호전달 경로에 핵심 요소들 중 하나이다. Smad3-결핍 마우스는 T-세포 활성화 및 점막 면역성의 손상으로 인해 만성적인 점막 감염을 나타내며, 이는 상기 과정에서 TGF-베타의 핵심 역할을 암시한다. 암에 관하여, 몇몇 암세포에 의한 TGF-베타의 생산 및 분비는 침윤성 면역 세포의 활성을 억제하여, 상기 종양이 숙주 면역감시를 이탈하는 것을 돕는다. 이러한 면역억제 효과는 TGF-베타가 말기 종양의 성장을 자극하는 또 다른 중요한 기전일 수 있다(문헌[Blobe GC et al., May 2000, "Role of transforming growth factor beta in human disease", N. Engl. J. Med. 342 (18), 1350-1358]을 참조하시오). TGF-베타는 또한, 통상적으로 염증(면역) 반응으로 암을 공격하는 효과기 T-세포를, 염증 반응을 꺼버리는 조절성(억제) T-세포로 전환시킨다.
더욱이, TGF-베타는 세포외 기질의 생산 및 침착의 가장 효능 있는 조절제 중 하나이다. 상기 TGF-베타는 2개의 주요 기전에 의해 상기 세포외 기질의 생산을 자극하고 부착 성질에 영향을 미친다. 첫 번째, TGF-베타는 세포외-기질 단백질 및 세포-부착 단백질(콜라겐, 피브로넥틴 및 인테그린 포함)을 생산하도록 섬유아세포 및 다른 세포를 자극한다. 두 번째, TGF-베타는 상기 세포외 기질을 분해하는 효소(콜라게나제, 헤파리나제 및 스트로멜리신 포함)의 생산을 감소시키고, 상기 세포외 기질을 분해하는 효소를 억제하는 단백질(1형 플라스미노겐-활성제 억제제 및 메탈로프로테아제의 조직 억제제 포함)의 생산을 증가시킨다. 이러한 변화의 순 효과는, 세포외-기질 단백질의 생산을 증가시키고 세포-특이적인 방식으로 세포의 부착 성질을 증가시키거나 감소시키는 것이다. 많은 암세포들에서 TGF-베타의 생산이 증가하며, 이는 상기 TGF-베타의 단백질분해 활성을 증가시키고 세포-부착 분자에의 그의 결합을 촉진함으로써 상기 세포의 침습성을 증가시킨다(문헌[Blobe GC et al., May 2000, "Role of transforming growth factor beta in human disease", N. Engl. J. Med. 342 (18), 1350-1358]을 참조하시오).
따라서, TGF-베타 발현 및 활성에 각각 영향을 미칠 수 있는 치료제들은 특히 TGF-베타 관련된 질병의 예방 및/또는 치료에의 사용에 필수적이다. 예를 들어 EP 1008649 및 EP 0695354는, TGF-베타1 및/또는 TGF-베타2의 mRNA와 하이브리드화하고 예를 들어 암의 예방 및/또는 치료를 위한 약학 조성물의 제조에 사용하기에 적합한 올리고뉴클레오타이드를 개시한다. 이들 올리고뉴클레오타이드 중 어느 것도 LNA, ENA 등과 같은 변형을 포함하지 않는다.
WO 2003/85110, WO 2005/061710, 및 WO 2008/138904는 예를 들어 각각 HIF-1A, Bcl-2 및 HER3의 억제에 대한 뉴클레오타이드의 변형을 포함하고 암 치료에 유용할 수 있는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다.
올리고뉴클레오타이드의 선택 기준은 주로 상기 올리고뉴클레오타이드의 길이, GC-백분율, 헤어핀 형성 경향, 이량체화, 및 용융 온도(Tm)이다. 일반적으로 높은 Tm(용융 온도)이 바람직하다. 더욱 또한, 상기 올리고뉴클레오타이드는 잠재적인 표적-외 효과를 감소시키기 위해서 표적 mRNA에 특이적이어야 하며 비-표적 mRNA와는 하이브리드화하지 않을 것이다.
따라서, TGF-베타 발현 및/또는 활성을 감소시키거나 억제하는 치료제에 대한 과학적 및 의학적 필요성이 크게 존재한다. 특히, 어떠한 (심한) 부작용도 유발하지 않으면서, 특이적으로 상호작용하고 따라서 TGF-베타1, TGF-베타2, 및/또는 TGF-베타3의 발현을 감소시키거나 억제하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드뿐만 아니라, TGF-베타1 및 TGF-베타2, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타2 및 TGF-베타3을 특이적으로 억제하는 올리고뉴클레오타이드와 같은 올리고뉴클레오타이드들이 오랫동안 필요했다.
본 발명은 서열번호 1의 TGF-베타2 핵산 서열(도 1 참조)의 10 내지 18 뉴클레오타이드들로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이며, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)가 변형된다. 서열번호 2 내지 20 중 하나를 포함하거나 또는 상기로 이루어지는 바람직한 올리고뉴클레오타이드를 표 1에 나타낸다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타2 발현 및 활성의 감소 및 억제에 매우 유효하다.
본 발명의 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 각각 ASPH47, ASPH190, ASPH191, ASPH192, ASPH193, ASPH194, ASPH195, ASPH196, ASPH197, ASPH198, ASPH199, ASPH200, ASPH201, 및 ASPH202, ASPH203, ASPH204, ASPH205, ASPH206, ASPH207, ASPH208, ASPH209, ASPH210, ASPH211, ASPH212, ASPH213, ASPH214, ASPH215, ASPH216, ASPH217, ASPH218, ASPH219, ASPH220, ASPH221, ASPH222, 및 ASPH223이다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드의 변형은 LNA, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드, 예를 들어 트라이에틸렌 글리콜(TEG), 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및 2'-O-메틸로 이루어지는 군 중에서 선택된다. 상기 변형은 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및/또는 3'-단부에 위치한다. 상기와 같은 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다.
변형된 뉴클레오타이드들은 예를 들어 일렬로, 하나를 다른 하나의 바로 옆에, 또는 상이한 패턴(여기에서 하나 이상의 변형되지 않은 뉴클레오타이드가 변형된 뉴클레오타이드 다음에 온다)으로 배열된다. 예를 들어 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드로 시작한 다음, 하나 이상, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4개의 변형되지 않은 또는 잠기지 않은(unlocked) 뉴클레오타이드가 오고, 다시 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드가 온다. 하나의 실시태양에서 상기 올리고뉴클레오타이드의 양쪽 단부는 동일한 패턴의 변형된 및 변형되지 않거나 잠기지 않은 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 3'- 및 5'-단부에서의 변형 패턴은, 하나의 단부가 변형된 뉴클레오타이드를 포함하지 않음을 포함하여 상이하다. 바람직하게 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 일련의 8 또는 9개의 잠기지 않은 뉴클레오타이드를 포함한다.
한편으로, 상기 올리고뉴클레오타이드 중 임의의 다른 위치에서 뉴클레오타이드가 변형되거나, 또는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및/또는 3'-단부 및 상기 올리고뉴클레오타이드 중 임의의 다른 위치에서 하나 이상의 뉴클레오타이드가 변형된다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 어느 한 유형의 변형, 또는 하나 이상의 상이한 변형들을 포함한다. 임의로, 상기 올리고뉴클레오타이드의 2개의 연속적인 뉴클레오타이드(변형되거나 변형되지 않은) 간의 하나 이상의 포스페이트 결합은 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트이다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 포스포로티오에이트이다.
상기 상이한 실시태양들의 올리고뉴클레오타이드는 모두 악성 또는 양성 종양, 면역학적 질환, 섬유증(예를 들어 특발성 폐 섬유증, 신섬유증, 신장 섬유증), 경화증(예를 들어 간경화증), 경피증 또는 관련된 피부 질환, 눈병, 예를 들어 녹내장 또는 후낭 혼탁(PCO), CNS 질병, 탈모 등의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 것이다.
도 1은 인간 TGF-베타2 mRNA(NM_003238.3)의 핵산 서열을 나타낸다.
도 2는 뉴클레오타이드 변형의 예들을 나타낸다.
도 3은 인간 Panc-1 췌장암 세포 및 마우스 RenCa 신세포 암종 세포에서 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포 및 RenCa 세포는 임의의 형질감염 시약의 부재하에서(짐노틱(gymnotic) 형질감염 또는 무지원 형질감염 또는 짐노틱 전달) 1.1 μM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리되었고, TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA 발현의 억제가 72시간 후에 측정되었다. 도 3은 각각 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH190, ASPH191, ASPH192, ASPH193, ASPH194, ASPH195, ASPH196, ASPH197, ASPH198, ASPH199, ASPH200, ASPH201, ASPH202, ASPH203, ASPH204, ASPH205, ASPH206, ASPH207, ASPH208, ASPH209, ASPH210, ASPH211, ASPH212, ASPH213, ASPH214, ASPH215, ASPH216, ASPH217, ASPH218, ASPH219, ASPH220, ASPH221, ASPH222, 및 ASPH223에 대한 결과에 관한 것이다. 도 3a는 Panc-1 세포에서 이들 TGF-베타 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타내고 도 3b는 RenCa 세포에서의 효과를 나타낸다.
도 4는 TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질의 발현에 대한 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타낸다. 인간 Panc-1 세포는 20, 6.67, 2.22, 0.74, 0.25, 0.08 또는 0.009 μΜ의 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH47로 형질감염되었다(도 4a). 음성 대조군은 40, 13.33, 4.44, 1.48, 0.49, 0.16, 0.05, 또는 0.02 μΜ 농도의 서열번호 22의 스크램블드 올리고뉴클레오타이드(scrLNA)(도 4b)이다. 세포 상등액 중의 TGF-베타1(다이아몬드 모양) 및 TGF-베타2(사각형) 단백질 수준이 ELISA에 의해 측정되었다.
도 2는 뉴클레오타이드 변형의 예들을 나타낸다.
도 3은 인간 Panc-1 췌장암 세포 및 마우스 RenCa 신세포 암종 세포에서 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포 및 RenCa 세포는 임의의 형질감염 시약의 부재하에서(짐노틱(gymnotic) 형질감염 또는 무지원 형질감염 또는 짐노틱 전달) 1.1 μM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리되었고, TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA 발현의 억제가 72시간 후에 측정되었다. 도 3은 각각 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH190, ASPH191, ASPH192, ASPH193, ASPH194, ASPH195, ASPH196, ASPH197, ASPH198, ASPH199, ASPH200, ASPH201, ASPH202, ASPH203, ASPH204, ASPH205, ASPH206, ASPH207, ASPH208, ASPH209, ASPH210, ASPH211, ASPH212, ASPH213, ASPH214, ASPH215, ASPH216, ASPH217, ASPH218, ASPH219, ASPH220, ASPH221, ASPH222, 및 ASPH223에 대한 결과에 관한 것이다. 도 3a는 Panc-1 세포에서 이들 TGF-베타 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타내고 도 3b는 RenCa 세포에서의 효과를 나타낸다.
도 4는 TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질의 발현에 대한 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타낸다. 인간 Panc-1 세포는 20, 6.67, 2.22, 0.74, 0.25, 0.08 또는 0.009 μΜ의 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH47로 형질감염되었다(도 4a). 음성 대조군은 40, 13.33, 4.44, 1.48, 0.49, 0.16, 0.05, 또는 0.02 μΜ 농도의 서열번호 22의 스크램블드 올리고뉴클레오타이드(scrLNA)(도 4b)이다. 세포 상등액 중의 TGF-베타1(다이아몬드 모양) 및 TGF-베타2(사각형) 단백질 수준이 ELISA에 의해 측정되었다.
본 발명은 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고 TGF-베타 mRNA, 바람직하게는 TGF-베타1, TGF-베타2 및/또는 TGF-베타3과 상호작용하기에 적합한 올리고뉴클레오타이드, 특히 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 1에 따른 TGF-베타2 핵산의 10 내지 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어진다. 가장 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오타이드는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 이들로 이루어진다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 siRNA, 미세RNA, 앱타머 또는 스피겔머(spiegelmer)를 포함한 단일 또는 이중 가닥 RNA 또는 DNA이다. 바람직하게, 상기 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
본 발명의 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 각각 ASPH47, ASPH190, ASPH191, ASPH192, ASPH193, ASPH194, ASPH195, ASPH196, ASPH197, ASPH198, ASPH199, ASPH200, ASPH201, 및 ASPH202, ASPH203, ASPH204, ASPH205, ASPH206, ASPH207, ASPH208, ASPH209, ASPH210, ASPH211, ASPH212, ASPH213, ASPH214, ASPH215, ASPH216, ASPH217, ASPH218, ASPH219, ASPH220, ASPH221, ASPH222, 및 ASPH223이다. 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 상이하게 개시될 수 있다, 예를 들어 ASPH47, ASPH0047, ASPH_47 또는 ASPH_0047은 동일한 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다.
뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오타이드의 구성 블록을 형성하며, 예를 들어 핵염기(질소 염기, 예를 들어 퓨린 또는 피리미딘), 5-탄당(예를 들어 리보스, 2-데옥시리보스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스, 알로스, 알토스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스 또는 이들 당의 안정화된 변형), 및 하나 이상의 포스페이트 기로 구성된다. 변형된 포스페이트 기의 예는 포스포티오에이트 또는 메틸포스포네이트이다. 상기 뉴클레오타이드의 각 화합물은 변형가능하며, 천연 또는 비천연이다. 상기 비천연 화합물은 예를 들어 잠금 핵산(LNA), 2'-O,4'-C-에틸렌-가교 핵산(ENA), 폴리알킬렌 옥사이드-(예를 들어 트라이에틸렌 글리콜(TEG)), 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드(예를 들어 문헌[Freier & Altmann, Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443] 및 문헌[Uhlmann, Curr. Opinion in Drug & Development (2000, 3 (2): 293-213)]에 개시되어 있다)(이들을 도 2에 나타낸다)이다.
LNA는 변형된 RNA 뉴클레오타이드이며, 여기에서 리보스 부분이 2' 산소와 4' 탄소를 연결하는 여분의 가교로 변형된다(2'-4' 리보뉴클레오사이드). 상기 가교는 상기 리보스를, 종종 A형 듀플렉스에서 발견되는 3'-엔도(노쓰) 배치로 "잠근다". LNA 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 각각 예를 들어 알파-D- 또는 베타-L-배열의 티오-LNA, 옥시-LNA, 또는 아미노-LNA의 형태를 포함하며, 각각 상기 올리고뉴클레오타이드 중의 DNA 또는 RNA 잔기와 혼합가능하고 조합가능하다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드, 즉 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및/또는 3'-단부에 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드, 바람직하게는 LNA 및/또는 ENA를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 5'-단부에 1, 2, 3 또는 4개의 LNA 또는 ENA, 및 3'-단부에 1, 2, 3 또는 4개의 LNA 또는 ENA를 포함한다. 또 다른 바람직한 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 5'-단부 또는 3'-단부에 1, 2, 3 또는 4개의 LNA 또는 ENA, 및 3'- 또는 5'-단부에 폴리알킬렌 옥사이드, 예를 들어 TEG를 포함한다. 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타 발현 및 활성에 대해 현저하게 증가된 억제를 나타내며, 그 결과 악성 또는 양성 종양, 면역학적 질환, 섬유증, 눈병, 예를 들어 안구 건조증, 녹내장 또는 후낭 혼탁(PCO), CNS 질병, 탈모 등의 개선된 예방 및/또는 치료를 생성시킨다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타 mRNA, 바람직하게는 TGF-베타1, TGF-베타2, 또는 TGF-베타3과의 하이브리드화에 의해서 TGF-베타 관련된 질병을 표적화한다.
바람직하게 2개 이상의 올리고뉴클레오타이드를 병용하며, 여기에서 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하거나, 또는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3을 특이적으로 억제하거나, 또는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3을 특이적으로 억제하거나, 또는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하며, 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3을 특이적으로 억제한다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 가장 바람직하게는 TGF-베타2 mRNA의 발현 및/또는 활성을 억제한다.
또 다른 실시태양에서, 하나의 올리고뉴클레오타이드는 2개의 TGF-베타 동형들, 예를 들어 TGF-베타1 및 TGF-베타2, TGF-베타2 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타3을 억제한다. TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 중 2개 또는 3개의 동형 모두의 발현을 억제하는 올리고뉴클레오타이드를 범-특이성 올리고뉴클레오타이드로서 정의한다.
추가의 실시태양에서, 3개 이상의 올리고뉴클레오타이드를 병용하며, 여기에서 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고, 또 다른 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하며, 추가의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3을 특이적으로 억제하고, 임의로 하나 이상의 추가적인 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1, TGF-베타2 또는 TGF-베타3을 억제한다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 0.1 내지 20 μM 범위, 바람직하게는 0.2 내지 15 μM 범위, 보다 바람직하게는 0.4 내지 10 μM 범위, 및 훨씬 더 바람직하게는 0.5 내지 5 μM 범위의 IC50을 갖는다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 본 발명의 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드 및 임의로 추가로 안티센스 화합물, 항체, 화학요법 화합물, 소염 화합물, 항바이러스 화합물 및/또는 면역-조절 화합물을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 결합제 및 보조제가 임의로 상기 약학 조성물에 의해 포함된다.
하나의 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드 및 약학 조성물은 각각 결합제, 부형제, 안정제 등을 포함하는 용액 형태의 투여 단위로서 제형화된다.
상기 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물을 상이한 경로를 통해 투여할 수 있다. 이들 투여 경로는 비제한적으로 일렉트로포레이션, 표피, 피부내로의 압인, 동맥내, 관절내, 두개내, 피내, 병변내, 근육내, 비내, 안내, 척추강내, 전방내, 복강내, 전립선내, 폐내, 척수내, 기관내, 종양내, 정맥내, 방광내, 신체 강내 배치, 코 흡입, 경구, 폐 흡입(예를 들어 분무기를 포함하여, 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 흡취에 의해), 피하, 피부아래, 국소(눈 및 질 및 직장 전달을 포함한 점막 포함), 또는 경피를 포함한다.
비경구, 피하, 경피 또는 국소 투여의 경우, 상기 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물은 예를 들어 멸균 희석제, 완충제, 독성 조절제 및 항균제를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물을 신체로부터의 분해 또는 즉시 제거에 대해 보호하는 담체, 예를 들어 조절된 방출 성질을 갖는 이식물 또는 미세캡슐로 제조한다. 정맥내 투여의 경우, 바람직한 담체는 예를 들어 생리식염수 또는 포스페이트 완충된 염수이다. 경구 투여용으로 올리고뉴클레오타이드 및/또는 상기와 같은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 조성물은 예를 들어 분말 또는 과립, 미립자, 나노입자, 수중 또는 비수성 매질 중 현탁액 또는 용액, 캡슐, 젤 캡슐, 사쉐, 정제 또는 미니정제를 포함한다. 비경구, 척추강내, 전방내 또는 심실내 투여용 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물은 예를 들어 완충제, 희석제 및 다른 적합한 첨가제, 예를 들어 침투 증진제, 담체 화합물 및 다른 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 임의로 함유하는 멸균 수용액을 포함한다.
약학적으로 허용 가능한 담체는 예를 들어 액체 또는 고체이며, 핵산 및 주어진 약학 조성물의 다른 성분들과 병용시 목적하는 벌크, 점조도 등을 제공할 것을 고려하여 계획된 투여 방식으로 선택한다. 전형적인 약학적으로 허용 가능한 담체는 비제한적으로 결합제(예를 들어 예비젤라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 등); 충전제(예를 들어 락토스 및 다른 당, 미정질 셀룰로스, 펙틴, 젤라틴, 칼슘 설페이트, 에틸 셀룰로스, 폴리아크릴레이트 또는 칼슘 수소 포스페이트 등); 윤활제(예를 들어 마그네슘 스테아레이트, 탤컴, 실리카, 콜로이드성 이산화 규소, 스테아르산, 금속 스테아레이트, 수소화된 식물성 오일, 옥수수 전분, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 아세테이트 등); 붕해제(예를 들어 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트 등); 또는 습윤제(예를 들어 나트륨 라우릴 설페이트 등)를 포함한다. 경구 투여형을 위한 서방성 경구 전달 시스템 및/또는 장용 코팅제가 미국특허 제 4,704,295 호; 미국특허 제 4,556,552 호; 미국특허 제 4,309,406 호; 및 미국특허 제 4,309,404 호에 개시되어 있다. 보조제는 상기 구절하에 포함되어 있다.
인간 질병 예방 및/또는 치료 방법에 사용되는 것과 함께, 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물을 또한 수의학적 동물, 파충류, 조류, 외래 동물 및 농장 동물, 예를 들어 포유동물, 설치류 등을 포함한 다른 환자들의 예방 및/또는 치료 방법에 사용한다. 포유동물은 예를 들어 말, 개, 돼지, 고양이, 또는 영장류(예를 들어 원숭이, 침팬지, 또는 여우원숭이)를 포함한다. 설치류는 예를 들어 래트, 토끼, 마우스, 다람쥐 또는 기니피그를 포함한다.
본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물을 다수의 상이한 질병들, 바람직하게는 악성 또는 양성 종양, 면역학적 질환, 기관지 천식, 심장병, 섬유증(예를 들어 간 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 간경화증, 신장 경화증, 경피증), 당뇨병, 상처 치유, 결합 조직의 질환(예를 들어 심장, 혈관, 뼈, 관절, 눈, 예를 들어 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군), 건선, 눈병(예를 들어 녹내장, 후낭 혼탁(PCO), 망막모세포종, 맥락막암종, 황반변성, 예를 들어 나이-관련된 황반변성, 당뇨성 황반부종 또는 백내장), CNS 질병(예를 들어 알쯔하이머병, 파킨슨병), 관상 죽상동맥경화증(관상동맥 중재 또는 관상동맥 중재술 또는 관상동맥 우회 이식(CABG)술 또는 탈모의 예방 및/또는 치료 방법에 사용한다. 종양은 예를 들어 고형 종양, 혈액성 종양, 백혈병, 종양 전이, 혈관종, 청신경종, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 성상세포종, 예를 들어 역행성 성상세포종, 아세포종, 유잉종양, 두개인두종, 상의세포종, 수모세포종, 신경교종, 교모세포종, 혈관모세포종, 호지킨-림프종, 흑색종, 예를 들어 원발성 및/또는 전이성 흑색종, 중피종, 골수종, 신경모세포종, 신경섬유종, 비호지킨 림프종, 송과체종, 망막모세포종, 육종, 정상피종, 윌름종양, 담관암, 방광암종, 뇌종양, 유방암, 기관지원성 암종, 신장의 암종, 경부암, 융모암, 낭선암종, 태생기암, 상피암종, 식도암, 경부암종, 결장암종, 결장직장암종, 내막암, 담낭암, 위암, 두부암, 간암종, 폐암종, 수질암종, 목암, 비소세포 기관지원성/폐 암종, 난소암, 췌장암종, 유두암종, 유두선암종, 전립선암, 소장암종, 전립선암종, 직장암, 신세포암종(RCC, 예를 들어 투명세포 RCC, 유두 RCC, 혐색소성 RCC), 호산성세포종 신장암, 이행세포 신장암, 피부암, 소세포 기관지원성/폐암종, 편평세포 암종, 피지선암종, 고환암종, 및 자궁암 중에서 선택된다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물은 종양의 예방 및/또는 치료 방법에 사용될 뿐만 아니라 전이에 대해서도 마찬가지로 사용된다.
본 발명은 바람직하게는 안과 질환, 예를 들어 비제한적으로 망막모세포종, 맥락막암종, 녹내장, 후낭 혼탁, 안구 건조증, 황반변성, 예를 들어 나이-관련된 황반변성, 당뇨성 황반부종, 백내장, 증식성 유리체망막병증, 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다.
본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 뜻밖의 낮은 독성을 나타내고 따라서 상이한 유기체들에 의해 잘 허용됨을 특징으로 한다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 유기체에서 적합한 분배를 보이며, 여기에서 최고의 농도는 신장, 간, 피부 및 비장에서 측정된다.
본 발명은 올리고뉴클레오타이드의 서열의 특정한 선택 및 상기 뉴클레오타이드의 변형에 기인하여 각각 TGF-베타, 특히 TGF-베타2 mRNA 발현의 감소 및 억제에 매우 효율적인 다수의 올리고뉴클레오타이드를 제공한다. 하기 표 1은 본 발명에 따른 다수의 바람직한 변형된 올리고뉴클레오타이드들을 나타낸다(진한 글자는 변형된 뉴클레오사이드를 가리킨다). 각각의 올리고뉴클레오타이드를 ASPH 및 숫자(상기 뉴클레오사이드의 특정한 서열 및 변형에 의해 한정된다)로 한정한다:
[표 1]
표 1은 본 발명의 선택된 올리고뉴클레오타이드의 핵산 서열뿐만 아니라 상기 뉴클레오타이드의 변형을 나타내며, 여기에서 LNA 4+4는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및 3'-단부에서 4 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 4+3은 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 4 x LNA 및 3'-단부에서 3 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 3+4는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 3 x LNA 및 3'-단부에서 4 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 3+3은 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 3 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 3+2는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 3 x LNA 및 3'-단부에서 2 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 2+3은 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 2 x LNA 및 3'-단부에서 3 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 2+2는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 2 x LNA가 변형됨을 의미한다. 한편으로, 일부 올리고뉴클레오타이드는 ENA 4+4(즉 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 4 x ENA가 변형된다) 또는 ENA 3+3(즉 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 3 x ENA가 변형된다)을 포함한다. 추가의 올리고뉴클레오타이드는 2'O-메트 4+4(여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 4 x 2'O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다), 또는 2'플루오로 4+4(여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 5'-단부 및 3'-단부에서 4 x 2'플루오로 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다)를 포함한다. LNA 3+TEG를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 3 x LNA 및 3'-단부에서 하나의 트라이에틸렌 글리콜(TEG)을 포함한다. 일부 올리고뉴클레오타이드는 일렬로 배열되지 않고 예를 들어 서열 1LNA+1N+1LNA+8N+3LNA, 3LNA+8N+1LNA+1N+1LNA, 3LNA+8N+ 1LNA+ 1N+2LNA, 3LNA+8N+2LNA+ 1N+ 1LNA, 2LNA+1N+1LNA+8N+3LNA, 1LNA+1N+2LNA+8N+3LNA, 1LNA+2N+2LNA+8N+3LNA, 1LNA+3N+1LNA+8N+3LNA, 1LNA+2N+2LNA+8N+4LNA, 1LNA+2N+2LNA+8N+1LNA+1N+2LNA, 1LNA+1N+3LNA+8N+3LNA, 1LNA+1N+2LNA+8N+3LNA, 1LNA+2N+3LNA+8N+2LNA, 또는 1LNA+2N+3LNA+8N+1LNA+1N+1LNA를 갖는 잠기지 않은(변형되지 않은) 뉴클레오사이드에 의해 분리된 LNA를 포함하며, 여기에서 "N"은 잠금 변형이 없는 뉴클레오사이드이다. 상기 표에서 LNA 뉴클레오사이드는 진한 글자의 서열로 나타내며, 트라이에틸렌 글리콜은 TEG로서 약기된다. 숫자와 병용된 "ASPH"는 표 1에 개시된 바와 같이 상이한 올리고뉴클레오타이드 및 그들의 상이한 변형을 지칭한다. 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 상이하게, 예를 들어 ASPH47, ASPH0047, ASPH_47 또는 ASPH_0047(동일한 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다)로 개시할 수 있다. 이들 변형된 올리고뉴클레오타이드를 예를 들어 하기 실시예에 나타낸 실험에서 시험하였다.
명확하고 간결한 기술을 위해서, 특징들을 본 발명에서 동일하거나 별도의 실시태양의 부분으로서 개시하지만, 본 발명의 범위가 개시된 특징들 중 일부 또는 전부의 조합을 갖는 실시태양들을 포함할 수 있음을 알 것이다.
하기의 실시예들은 본 발명을 추가로 예시하기 위해서, 그러나 동시에 본 발명에 대한 어떠한 제한도 구성하지 않으면서 제공될 것이다. 반대로, 본 발명의 범위는 본 발명의 설명을 읽은 후에 본 발명의 진의로부터 이탈됨 없이 당해 분야의 숙련가들에게 암시될 수 있는 다양한 다른 실시태양, 변형 및 이들의 등가물을 지칭함을 명확히 이해해야 한다.
실시예
하기의 실시예들에서, 표 1에 나열된 올리고뉴클레오타이드들의 효과를 각각 TGF-베타1 및/또는 TGF-베타2 발현의 감소 및 억제에 비추어 시험하였다. 서열번호 21(T-LNA: CGGCATGTCTATTTTGTA, 여기에서 5'- 및 3'-단부의 3 x 뉴클레오타이드는 LNA이다) 및 서열번호 22(scr-LNA: CGTTTAGGCTATGTACTT, 여기에서 5'- 및 3'-단부의 3 x 뉴클레오타이드는 LNA이다)를 대조용 올리고뉴클레오타이드로서 사용하며, 여기에서 서열번호 22(음성 대조군)는 서열번호 21(양성 대조군)의 스크램블드 형태이다. 상기 세포를 형질감염제(예를 들어 리포펙타민)의 존재하에서 또는 어떠한 형질감염제도 없이(이를 짐노틱 형질감염 또는 무지원 형질감염 또는 짐노틱 전달로서 정의한다) 형질감염시켰다. 짐노틱 전달의 경우에 상기 올리고뉴클레오타이드의 상기 세포내로의 진입은 전적으로 상기 올리고뉴클레오타이드와 상기 세포의 상호작용에 따른다(작용제가 상기 진입을 지원하지 않는다). 따라서, 짐노틱 전달은 생체내 환경의 보다 양호한 조건을 반영하는 것으로 생각된다.
실시예 1
인간 Panc-1 췌장암 세포(도 3a) 또는 마우스 RenCa 신세포 암종 세포(도 3b)를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 각각 1.1 μM의 ASPH190, ASPH191, ASPH192, ASPH193, ASPH194, ASPH195, ASPH196, ASPH197, ASPH198, ASPH199, ASPH200, ASPH201, ASPH202, ASPH203, ASPH204, ASPH205, ASPH206, ASPH207, ASPH208, ASPH209, ASPH210, ASPH211, ASPH212, ASPH213, ASPH214, ASPH215, ASPH216, ASPH217, ASPH218, ASPH219, ASPH220, ASPH221, ASPH222, 및 ASPH223으로 처리하였다. 형질감염 후 72시간째에 TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현을 측정하였다. TGF-베타2 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 3a 및 3b에 나타낸다. 음성 대조군은 서열번호 22의 스크램블드 LNA(scr LNA)이다.
실시예 2
인간 Panc-1 췌장암 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 각각 10 μΜ, 3.3 μΜ, 1.1 μΜ, 0.37 μΜ, 및 0.12 μΜ의 ASPH47, M1-ASPH47, M2-ASPH47, M3-ASPH47, M4-ASPH47, M5-ASPH47, Μ6-ASPH47, M7-ASPH47, M8-ASPH47, M9-ASPH47, M10-ASPH47, M11-ASPH47, M12-ASPH47, M13-ASPH47, M14-ASPH47, 또는 M15-ASPH47로 처리하였다. TGF-베타2 mRNA의 발현에 대한 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드들의 억제 효과를 처리 시작후 72시간째에 측정하였다. TGF-베타2 값을 GAPDH에 대해 표준화하고 TGF-베타2 mRNA의 50% 감소를 생성시키는 올리고뉴클레오타이드 농도(=IC50)를 계산하였다. 짐노틱 형질감염 실험 조건하에서 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 세포에 진입하며 TGF-베타2 mRNA의 발현을 강하게 억제한다. 상기 실험의 결과를 표 2에 나타낸다:
[표 2]
상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 모두 서브마이크로몰 내지 더 낮은 서브마이크로몰 범위의 IC50을 나타내며, 상기 범위는 상기 올리고뉴클레오타이드가 심지어 형질감염제의 요구 없이도 대단히 높은 효능을 가짐을 나타낸다.
실시예 3
인간 Panc-1 췌장암 세포를 20, 6.67, 2.22, 0.74, 0.25, 0.08 또는 0.009 μΜ의 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH47로 형질감염시켰으며; 결과를 도 4a에 나타낸다. 음성 대조군은 서열번호 22의 스크램블드 올리고뉴클레오타이드(scrLNA)(도 4b)이다. 세포를 형질감염제의 부재하에서 형질감염시켰다(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달). 상기 올리고뉴클레오타이드를 3일 동안 상기 세포에 가하고, 이를 37 ℃에서 배양하였다. 그 후에 배지를 새로운 올리고뉴클레오타이드 함유 배지로 교환하고 세포를 37 ℃에서 추가로 4일 동안 배양하였다. 세포 상등액 중의 TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질 수준을 ELISA에 의해 측정하였다. ASPH47은 TGF-베타2의 발현을 용량-의존적인 방식으로 특이적으로 억제하며 TGF-베타1에 대해서는 표적 억제 효과를 나타내지 않는다(도 4a). 서열번호 22의 scrLNA는, 농도를 ASPH47의 개별적인 농도에 비해 배가시켰다 하더라도(40, 13.33, 4.44, 1.48, 0.49, 0.16, 0.05, 또는 0.02 μΜ), TGF-베타1 또는 TGF-베타2의 발현 중 어느 것에도 어떠한 억제 효과도 나타내지 않는다. TGF-베타1에 대한 결과를 다이아몬드모양으로 나타내고, TGF-베타2에 대한 결과는 사각형으로 나타낸다(도 4a 내지 4b).
SEQUENCE LISTING
<110> ISARNA Therapeutics GmbH
<120> Modified TGF-beta2 oligonucleotides
<130> P101116PC20
<140> PCT/EP2014/056232
<141> 2014-03-27
<150> EP 13161474.5
<151> 2013-03-27
<150> EP 13173078.0
<151> 2013-06-20
<150> EP 13199838.7
<151> 2013-12-30
<160> 20
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
gtgatgttat ctgctggcag cagaaggttc gctccgagcg gagctccaga agctcctgac 60
aagagaaaga cagattgaga tagagataga aagagaaaga gagaaagaga cagcagagcg 120
agagcgcaag tgaaagaggc aggggagggg gatggagaat attagcctga cggtctaggg 180
agtcatccag gaacaaactg aggggctgcc cggctgcaga caggaggaga cagagaggat 240
ctattttagg gtggcaagtg cctacctacc ctaagcgagc aattccacgt tggggagaag 300
ccagcagagg ttgggaaagg gtgggagtcc aagggagccc ctgcgcaacc ccctcaggaa 360
taaaactccc cagccagggt gtcgcaaggg ctgccgttgt gatccgcagg gggtgaacgc 420
aaccgcgacg gctgatcgtc tgtggctggg ttggcgtttg gagcaagaga aggaggagca 480
ggagaaggag ggagctggag gctggaagcg tttgcaagcg gcggcggcag caacgtggag 540
taaccaagcg ggtcagcgcg cgcccgccag ggtgtaggcc acggagcgca gctcccagag 600
caggatccgc gccgcctcag cagcctctgc ggcccctgcg gcacccgacc gagtaccgag 660
cgccctgcga agcgcaccct cctccccgcg gtgcgctggg ctcgccccca gcgcgcgcac 720
acgcacacac acacacacac acacacacgc acgcacacac gtgtgcgctt ctctgctccg 780
gagctgctgc tgctcctgct ctcagcgccg cagtggaagg caggaccgaa ccgctccttc 840
tttaaatata taaatttcag cccaggtcag cctcggcggc ccccctcacc gcgctcccgg 900
cgcccctccc gtcagttcgc cagctgccag ccccgggacc ttttcatctc ttcccttttg 960
gccggaggag ccgagttcag atccgccact ccgcacccga gactgacaca ctgaactcca 1020
cttcctcctc ttaaatttat ttctacttaa tagccactcg tctctttttt tccccatctc 1080
attgctccaa gaattttttt cttcttactc gccaaagtca gggttccctc tgcccgtccc 1140
gtattaatat ttccactttt ggaactactg gccttttctt tttaaaggaa ttcaagcagg 1200
atacgttttt ctgttgggca ttgactagat tgtttgcaaa agtttcgcat caaaaacaac 1260
aacaacaaaa aaccaaacaa ctctccttga tctatacttt gagaattgtt gatttctttt 1320
ttttattctg acttttaaaa acaacttttt tttccacttt tttaaaaaat gcactactgt 1380
gtgctgagcg cttttctgat cctgcatctg gtcacggtcg cgctcagcct gtctacctgc 1440
agcacactcg atatggacca gttcatgcgc aagaggatcg aggcgatccg cgggcagatc 1500
ctgagcaagc tgaagctcac cagtccccca gaagactatc ctgagcccga ggaagtcccc 1560
ccggaggtga tttccatcta caacagcacc agggacttgc tccaggagaa ggcgagccgg 1620
agggcggccg cctgcgagcg cgagaggagc gacgaagagt actacgccaa ggaggtttac 1680
aaaatagaca tgccgccctt cttcccctcc gaaaatgcca tcccgcccac tttctacaga 1740
ccctacttca gaattgttcg atttgacgtc tcagcaatgg agaagaatgc ttccaatttg 1800
gtgaaagcag agttcagagt ctttcgtttg cagaacccaa aagccagagt gcctgaacaa 1860
cggattgagc tatatcagat tctcaagtcc aaagatttaa catctccaac ccagcgctac 1920
atcgacagca aagttgtgaa aacaagagca gaaggcgaat ggctctcctt cgatgtaact 1980
gatgctgttc atgaatggct tcaccataaa gacaggaacc tgggatttaa aataagctta 2040
cactgtccct gctgcacttt tgtaccatct aataattaca tcatcccaaa taaaagtgaa 2100
gaactagaag caagatttgc aggtattgat ggcacctcca catataccag tggtgatcag 2160
aaaactataa agtccactag gaaaaaaaac agtgggaaga ccccacatct cctgctaatg 2220
ttattgccct cctacagact tgagtcacaa cagaccaacc ggcggaagaa gcgtgctttg 2280
gatgcggcct attgctttag aaatgtgcag gataattgct gcctacgtcc actttacatt 2340
gatttcaaga gggatctagg gtggaaatgg atacacgaac ccaaagggta caatgccaac 2400
ttctgtgctg gagcatgccc gtatttatgg agttcagaca ctcagcacag cagggtcctg 2460
agcttatata ataccataaa tccagaagca tctgcttctc cttgctgcgt gtcccaagat 2520
ttagaacctc taaccattct ctactacatt ggcaaaacac ccaagattga acagctttct 2580
aatatgattg taaagtcttg caaatgcagc taaaattctt ggaaaagtgg caagaccaaa 2640
atgacaatga tgatgataat gatgatgacg acgacaacga tgatgcttgt aacaagaaaa 2700
cataagagag ccttggttca tcagtgttaa aaaatttttg aaaaggcggt actagttcag 2760
acactttgga agtttgtgtt ctgtttgtta aaactggcat ctgacacaaa aaaagttgaa 2820
ggccttattc tacatttcac ctactttgta agtgagagag acaagaagca aatttttttt 2880
aaagaaaaaa ataaacactg gaagaattta ttagtgttaa ttatgtgaac aacgacaaca 2940
acaacaacaa caacaaacag gaaaatccca ttaagtggag ttgctgtacg taccgttcct 3000
atcccgcgcc tcacttgatt tttctgtatt gctatgcaat aggcaccctt cccattctta 3060
ctcttagagt taacagtgag ttatttattg tgtgttacta tataatgaac gtttcattgc 3120
ccttggaaaa taaaacaggt gtataaagtg gagaccaaat actttgccag aaactcatgg 3180
atggcttaag gaacttgaac tcaaacgagc cagaaaaaaa gaggtcatat taatgggatg 3240
aaaacccaag tgagttatta tatgaccgag aaagtctgca ttaagataaa gaccctgaaa 3300
acacatgtta tgtatcagct gcctaaggaa gcttcttgta aggtccaaaa actaaaaaga 3360
ctgttaataa aagaaacttt cagtcagaat aagtctgtaa gttttttttt ttctttttaa 3420
ttgtaaatgg ttctttgtca gtttagtaaa ccagtgaaat gttgaaatgt tttgacatgt 3480
actggtcaaa cttcagacct taaaatattg ctgtatagct atgctatagg ttttttcctt 3540
tgttttggta tatgtaacca tacctatatt attaaaatag atggatatag aagccagcat 3600
aattgaaaac acatctgcag atctcttttg caaactatta aatcaaaaca ttaactactt 3660
tatgtgtaat gtgtaaattt ttaccatatt ttttatattc tgtaataatg tcaactatga 3720
tttagattga cttaaatttg ggctcttttt aatgatcact cacaaatgta tgtttctttt 3780
agctggccag tacttttgag taaagcccct atagtttgac ttgcactaca aatgcatttt 3840
ttttttaata acatttgccc tacttgtgct ttgtgtttct ttcattatta tgacataagc 3900
tacctgggtc cacttgtctt ttcttttttt tgtttcacag aaaagatggg ttcgagttca 3960
gtggtcttca tcttccaagc atcattacta accaagtcag acgttaacaa atttttatgt 4020
taggaaaagg aggaatgtta tagatacata gaaaattgaa gtaaaatgtt ttcattttag 4080
caaggattta gggttctaac taaaactcag aatctttatt gagttaagaa aagtttctct 4140
accttggttt aatcaatatt tttgtaaaat cctattgtta ttacaaagag gacacttcat 4200
aggaaacatc tttttcttta gtcaggtttt taatattcag ggggaaattg aaagatatat 4260
attttagtcg atttttcaaa aggggaaaaa agtccaggtc agcataagtc attttgtgta 4320
tttcactgaa gttataaggt ttttataaat gttctttgaa ggggaaaagg cacaagccaa 4380
tttttcctat gatcaaaaaa ttctttcttt cctctgagtg agagttatct atatctgagg 4440
ctaaagttta ccttgcttta ataaataatt tgccacatca ttgcagaaga ggtatcctca 4500
tgctggggtt aatagaatat gtcagtttat cacttgtcgc ttatttagct ttaaaataaa 4560
aattaatagg caaagcaatg gaatatttgc agtttcacct aaagagcagc ataaggaggc 4620
gggaatccaa agtgaagttg tttgatatgg tctacttctt ttttggaatt tcctgaccat 4680
taattaaaga attggatttg caagtttgaa aactggaaaa gcaagagatg ggatgccata 4740
atagtaaaca gcccttgtgt tggatgtaac ccaatcccag atttgagtgt gtgttgatta 4800
tttttttgtc ttccactttt ctattatgtg taaatcactt ttatttctgc agacattttc 4860
ctctcagata ggatgacatt ttgttttgta ttattttgtc tttcctcatg aatgcactga 4920
taatatttta aatgctctat tttaagatct cttgaatctg tttttttttt ttttaatttg 4980
ggggttctgt aaggtcttta tttcccataa gtaaatattg ccatgggagg ggggtggagg 5040
tggcaaggaa ggggtgaagt gctagtatgc aagtgggcag caattatttt tgtgttaatc 5100
agcagtacaa tttgatcgtt ggcatggtta aaaaatggaa tataagatta gctgttttgt 5160
attttgatga ccaattacgc tgtattttaa cacgatgtat gtctgttttt gtggtgctct 5220
agtggtaaat aaattatttc gatgatatgt ggatgtcttt ttcctatcag taccatcatc 5280
gagtctagaa aacacctgtg atgcaataag actatctcaa gctggaaaag tcataccacc 5340
tttccgattg ccctctgtgc tttctccctt aaggacagtc acttcagaag tcatgcttta 5400
aagcacaaga gtcaggccat atccatcaag gatagaagaa atccctgtgc cgtcttttta 5460
ttcccttatt tattgctatt tggtaattgt ttgagattta gtttccatcc agcttgactg 5520
ccgaccagaa aaaatgcaga gagatgtttg caccatgctt tggctttctg gttctatgtt 5580
ctgccaacgc cagggccaaa agaactggtc tagacagtat cccctgtagc cccataactt 5640
ggatagttgc tgagccagcc agatataaca agagccacgt gctttctggg gttggttgtt 5700
tgggatcagc tacttgcctg tcagtttcac tggtaccact gcaccacaaa caaaaaaacc 5760
caccctattt cctccaattt ttttggctgc tacctacaag accagactcc tcaaacgagt 5820
tgccaatctc ttaataaata ggattaataa aaaaagtaat tgtgactcaa aaaaaaaaaa 5880
aa 5882
<210> 2
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified TGF-beta2 oligonucleotide
<400> 2
caaagtattt ggtctcc 17
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<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified TGF-beta2 oligonucleotide
<400> 3
agtatttggt ctcc 14
<210> 4
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified TGF-beta2 oligonucleotide
<400> 4
aagtatttgg tctc 14
<210> 5
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified TGF-beta2 oligonucleotide
<400> 5
aagtatttgg tctcc 15
<210> 6
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> modified TGF-beta2 oligonucleotide
<400> 6
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified TGF-beta2 oligonucleotide
<400> 7
agtatttggt ctcca 15
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<211> 15
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 10
caaagtattt ggtct 15
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<400> 19
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<211> 11
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified TGF-beta2 oligonucleotide
<400> 20
agtatttggt c 11
Claims (8)
- 서열번호 2(CAAAGTATTTGGTCTCC), 서열번호 3(AGTATTTGGTCTCC), 서열번호 4(AAGTATTTGGTCTC), 서열번호 5(AAGTATTTGGTCTCC), 서열번호 6(AGTATTTGGTCTCC), 서열번호 7(AGTATTTGGTCTCCA), 서열번호 8(AAGTATTTGGTCTCC), 서열번호 9(CAAAGTATTTGGTCTC), 서열번호 10(CAAAGTATTTGGTCT), 서열번호 11(CAAAGTATTTGGTC), 서열번호 12(AAAGTATTTGGTCTCC), 서열번호 13(AAAGTATTTGGTCTC), 서열번호 14(AAAGTATTTGGTCT), 서열번호 15(AAAGTATTTGGTC), 서열번호 16(AAGTATTTGGTCT), 서열번호 17(AAGTATTTGGTC), 서열번호 18(AGTATTTGGTCTC), 서열번호 19(AGTATTTGGTCT) 및 서열번호 20(AGTATTTGGTC)로 이루어진 군에서 선택되는 서열로 이루어지는 안티센스 올리고뉴클레오타이드로서,
상기 올리고뉴클레오타이드의 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)가 변형되고, 상기 변형된 뉴클레오타이드는 LNA, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로-, 2'-O-메톡시-, 및 2'-O-메틸-변형된 뉴클레오타이드로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이고,
상기 변형된 뉴클레오티드가 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 또는 3'-단부 또는 5'-단부 및 3'-단부에 위치하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드. - 삭제
- 제 1 항에 있어서,
올리고뉴클레오타이드가 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 및 서열번호 18로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열로 이루어지는 안티센스 올리고뉴클레오타이드. - 제 1 항에 있어서,
올리고뉴클레오타이드가 AGTATTTGGTCTCC (서열번호 3), AAGTATTTGGTCTC (서열번호 4), AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 5), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), AGTATTTGGTCTCC (서열번호 6), AGTATTTGGTCTCC (서열번호 6), AGTATTTGGTCTCC (서열번호 6), AGTATTTGGTCTCC (서열번호 6), AAGTATTTGGTCTC (서열번호 4), AGTATTTGGTCTCCA (서열번호 7), AGTATTTGGTCTCCA (서열번호 7), AGTATTTGGTCTCCA (서열번호 7), AGTATTTGGTCTCCA (서열번호 7), AGTATTTGGTCTCCA (서열번호 7), AGTATTTGGTCTCCA (서열번호 7), AGTATTTGGTCTCCA (서열번호 7),AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 8), AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 8), AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 8), AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 8), AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 8), AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 8), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 2), CAAAGTATTTGGTCTC (서열번호 9), CAAAGTATTTGGTCT (서열번호 10), CAAAGTATTTGGTC (서열번호 11), AAAGTATTTGGTCTCC (서열번호 12), AAAGTATTTGGTCTC (서열번호 13), AAAGTATTTGGTCT (서열번호 14), AAAGTATTTGGTC (서열번호 15), AAGTATTTGGTCTCC (서열번호 5), AAGTATTTGGTCTC (서열번호 4), AAGTATTTGGTCT (서열번호 16), AAGTATTTGGTC (서열번호 17), AGTATTTGGTCTCC (서열번호 3), AGTATTTGGTCTC (서열번호 18), AGTATTTGGTCT (서열번호 19) 및 AGTATTTGGTC (서열번호 20)로 이루어지는 군 중에서 선택되는 서열로서, 상기 진한 글씨체로 기재된 뉴클레오타이드는 LNA 변형된 뉴클레오타이드인, 안티센스 올리고뉴클레오타이드. - 제 1 항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하고, 악성 종양, 양성 종양, 면역학적 질환, 섬유증 및 안과 질환에서 선택되는 질환의 예방 방법 또는 치료 방법 또는 예방 방법 및 치료 방법에 사용하기 위한 약학 조성물로서,
상기 면역학적 질환은 TGF-베타2 과발현과 관련되며,
상기 안과 질환은 녹내장, 후낭 혼탁, 안구 건조증, 황반변성, 당뇨성 황반부종, 백내장, 증식성 유리체망막병증 및 마르팡 및 로이-디에츠 증후군으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 약학 조성물. - 제 1 항에 있어서,
악성 종양, 양성 종양, 면역학적 질환, 섬유증 및 안과 질환에서 선택되는 질환의 예방 방법 또는 치료 방법 또는 예방 방법 및 치료 방법에 사용하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오타이드로서,
상기 면역학적 질환은 TGF-베타2 과발현과 관련되며,
상기 안과 질환은 녹내장, 후낭 혼탁, 안구 건조증, 황반변성, 당뇨성 황반부종, 백내장, 증식성 유리체망막병증 및 마르팡 및 로이-디에츠 증후군으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 안티센스 올리고뉴클레오타이드. - 제 6 항에 있어서,
종양이 고형 종양, 혈액성 종양, 백혈병, 종양 전이, 혈관종, 청신경종, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 건선, 성상세포종, 아세포종, 유잉종양, 두개인두종, 상의세포종, 수모세포종, 신경교종, 혈관모세포종, 호지킨-림프종, 중피종, 신경모세포종, 비호지킨 림프종, 송과체종, 망막모세포종, 육종, 정상피종, 및 윌름종양으로 이루어지는 군 중에서 선택되거나, 또는 담관암, 방광암종, 뇌종양, 유방암, 기관지원성 암종, 신장의 암종, 경부암, 융모암, 낭선암종, 태생기암, 상피암종, 식도암, 경부암종, 결장암종, 결장직장암종, 내막암, 담낭암, 위암, 두부암, 간암종, 폐암종, 수질암종, 목암, 비소세포 기관지원성/폐 암종, 난소암, 췌장암종, 유두암종, 유두선암종, 전립선암, 소장암종, 전립선암종, 직장암, 신세포암종, 피부암, 소세포 기관지원성/폐암종, 편평세포 암종, 피지선암종, 고환암종, 및 자궁암으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 안티센스 올리고뉴클레오타이드. - 제 5 항에 있어서,
종양이 고형 종양, 혈액성 종양, 백혈병, 종양 전이, 혈관종, 청신경종, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 건선, 성상세포종, 아세포종, 유잉종양, 두개인두종, 상의세포종, 수모세포종, 신경교종, 혈관모세포종, 호지킨-림프종, 중피종, 신경모세포종, 비호지킨 림프종, 송과체종, 망막모세포종, 육종, 정상피종, 및 윌름종양으로 이루어지는 군 중에서 선택되거나, 또는 담관암, 방광암종, 뇌종양, 유방암, 기관지원성 암종, 신장의 암종, 경부암, 융모암, 낭선암종, 태생기암, 상피암종, 식도암, 경부암종, 결장암종, 결장직장암종, 내막암, 담낭암, 위암, 두부암, 간암종, 폐암종, 수질암종, 목암, 비소세포 기관지원성/폐 암종, 난소암, 췌장암종, 유두암종, 유두선암종, 전립선암, 소장암종, 전립선암종, 직장암, 신세포암종, 피부암, 소세포 기관지원성/폐암종, 편평세포 암종, 피지선암종, 고환암종, 및 자궁암으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 약학 조성물.
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004005552A1 (en) * | 2002-07-02 | 2004-01-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of tfg-beta 2 expression |
WO2011154542A1 (en) * | 2010-06-11 | 2011-12-15 | Artisense Pharma Gmbh | Method for selective oligonucleotide modification |
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