KR102097775B1 - 플라즈마 처리를 통해 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 플라즈마 처리를 통해 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 플라즈마가 처리된 단풍취 추출물은 UV 조사로 인해 감소된 피부 재생능을 증가시키는 효과가 우수하고, 천연 유래로 독성 및 부작용이 거의 없어 장기간 피부에 사용할 수 있으므로, 플라즈마가 처리된 단풍취 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 피부 자극을 일으키지 않는 피부재생용 기능성 화장품 또는 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

플라즈마 처리를 통해 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물 및 이의 용도{Ainsliaea acerifolia extract with improved skin regeneration effect through plasma treatment and uses thereof}

본 발명은 플라즈마 처리를 통해 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물 및 이의 용도에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 온도와 습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 체내의 기관들을 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다. 이런 피부의 맨 바깥에 있는 각질은 피부의 세포가 변화되어 생긴 조직이며 각질층은 완전히 죽은 세포로 구성되어있다. 진피층에서 피부 결합조직 안에 성기게 형성된 세포층은 표피층으로 올라가면서 세포의 생명력이 없어지고 견고하고 규칙적인 세포층으로 변한다. 핵과 세포질이 빠져나가서 벽돌과 같이 단단한 각질층을 형성하게 된다. 이러한 각질층은 피부를 견고하게 하면서 피부조직 가장 외부에서 우리 몸의 수분을 지켜주고 밖에서 들어오는 여러 가지 물질들을 방어하는 방어선과 같은 역할을 한다.

피부 세포의 생성과 각질화 과정은 피부 건강을 유지하는 중요한 사이클이다. 피부 세포의 재생 능력이 좋을 경우에는 피부 세포가 진피층에서 빨리 생성되어 빨리 각질화되게 되고 외부 자극에 의해 손상되고 노화된 각질이 빨리 새롭게 생성된 각질로 대체되어 건강한 피부를 유지할 수 있도록 도와주게 된다. 피부 역시 인체의 다른 장기와 마찬가지로 나이가 들어감에 따라 재생 능력이 떨어지게 되고 점차 노화가 진행되게 되어서, 그 결과로서 피부의 탄력이 손실되고, 오래된 각질이 교체되지 않아 피부가 각질화되며, 탄력을 유지해주는 구조와 섬유가 줄어들어 주름이 생성되며, 피부가 위축되는 등의 현상이 나타나게 된다.

따라서, 이러한 피부 재생 능력을 높여 건강한 피부를 유지시키고 건강하고 탄력 있는 피부를 유지하기 위하여 피부 재생 촉진 효과가 있는 생리활성물질을 개발하고자 하는 노력이 꾸준히 있어 왔다. 트레티노인(tretinoin, trans-retinoic acid)이나 레티놀이 화장품 원료에 사용되기 시작하였고 그 이후로 여성 호르몬 유사 물질, 각종 식물에서 추출한 항산화제 등이 이러한 효능의 원료로서 화장품에 도입되었다. 그러나 이러한 화장품 원료들은 대부분 효능이 미진하거나 피부 자극 같은 부작용을 유발하는 등 여러 가지 문제점을 가지고 있었다. 이에, 피부 부작용을 유발하지 않으면서도 피부 재생 증진 효과를 갖는 원료에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.

한편, 단풍취(Ainsliaea acerifolia)는 우리나라 각처의 산에서 자라는 국화과의 다년생 초본이다. 생육환경은 습기가 많은 반그늘에서 자란다. 주로 어린순을 식용하며 한국, 중국 및 일본에 분포되어 자생한다. 민간요법이나 식용으로 단풍취 어린순를 이용하는 것 이외에 단풍취의 생리 기능성에 대한 연구는 현재까지 거의 알려진 바가 없다.

한편, 플라즈마란 초고온에서 음전하를 가진 전자와 양전하를 띤 이온으로 분리된 기체 상태를 말하며, 가장 저렴하게 플라즈마를 발생시킬 수 있는 방법은 전자파의 방전이다. 두 전극 사이에 전압을 걸어 전기장을 형성시킴으로써 플라즈마를 발생시키는 방식인데, 이때 발생된 플라즈마를 저온 플라즈마라고 한다. 플라즈마에는 전자, 양이온, 음이온, 자유라디칼 및 광자 등을 포함하는 활성산소종이 존재하며, 식품분야에서 주로 살균을 위해 사용되고 있지만, 본 발명자들은 이들이 물질의 구조를 변경시키고, 활성물질의 기능을 증진시킬 수 있다는 점에 착안하여 플라즈마 처리를 통해 우수한 효능소재인 단풍취 추출물의 활성성분에 의한 효과를 더욱 증진시키고자 하였다.

한편, 한국공개특허 제2018-0107438호에는 단풍취 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 플라즈마 처리를 통해 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물 및 이의 용도에 관해 개시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 플라즈마 처리를 통해 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물의 제조방법 및 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부재생용 조성물을 제공하고, 상기 플라즈마 처리된 단풍취 추출물이 플라즈마가 처리되지 않은 단풍취 추출물에 비해 UV 조사로 인해 감소된 피부 재생능을 증가시키는 효과가 현저한 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 플라즈마 처리된 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부재생용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 플라즈마 처리된 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 플라즈마 처리된 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료용 의약외품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은

1) 단풍취 건조 분말에 용매를 첨가하여 단풍취 추출물을 획득한 후 동결건조하는 단계; 및

2) 상기 단계 1)의 동결건조된 단풍취 추출물 1 중량부에 대하여, 80~120 부피부의 물을 첨가한 후 플라즈마를 처리하는 단계;를 포함하는 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물을 제공한다.

본 발명은 플라즈마 처리를 통해 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 플라즈마가 처리된 단풍취 추출물은 UV 조사로 인해 감소된 피부 재생능을 증가시키는 효과가 우수하고, 천연 유래로 독성 및 부작용이 거의 없어 장기간 피부에 사용할 수 있으므로, 플라즈마가 처리된 단풍취 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 피부재생용 화장료 조성물, 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료용 약학 조성물로 사용할 수 있다.

도 1은 각각의 시간별로 플라즈마 처리된 단풍취 추출물의 세포독성을 확인한 결과이다. CON은 무처리군이고, 도면 내 문자 a~d는 서로 유의미한 차이가 있다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 2는 각각의 시간별 및 농도별 플라즈마 처리된 단풍취 추출물 처리에 의한 UV 조사로 인해 감소된 피부 재생능 증진효과를 확인한 결과이다. CON은 UV 및 추출물 무처리군이다. ###은 CON에 비해 UV 단독 처리군에서 세포 재생능이 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. *, **, ***은 플라즈마 무처리 단풍취 추출물(0분) 처리군에 비해 플라즈마 처리군의 세포 재생능이 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05, **은 p<0.01, ***은 p<0.001이다.

본 발명은 플라즈마 처리된 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부재생용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 단풍취 추출물은 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 이용하여 추출한 것일 수 있고, 바람직하게는 에탄올을 용매로 이용하여 추출한 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 플라즈마 처리는 펄스 코로나 방전, 유전체 장벽 방전, 마이크로웨이브 방전 또는 아크 방전 방식을 이용하여 생성된 플라즈마를 처리하는 것일 수 있고, 바람직하게는 펄스 코로나 방전 방식을 이용하여 처리하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 330~390W 전력을 이용하여 펄스 코로나 방전방식으로 생성된 플라즈마를 단풍취 추출물에 처리하는 것이며, 더욱더 바람직하게는 330~390W 전력으로, 텅스턴 전극 사이에 사인파 펄스형 고전압을 가하여 생성된 플라즈마를 단풍취 추출물에 처리하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 고전압은 출력전압이 180~350V이고, 전류는 3~6A인 것이지만, 이에 한정하지 않는다.

상기 플라즈마 처리 시간은 80분 이상일 수 있으며, 바람직하게는 140~200분일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 플라즈마가 처리된 단풍취 추출물은 80㎍/㎖ 이상의 농도로 처리되는 것일 수 있고, 바람직하게는 80~220㎍/㎖의 농도로 처리되는 것이지만, 이에 한정하지 않는다.

상기 화장료 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 로션, 클렌징 크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누 및 파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 중에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 플라즈마 처리된 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 약학 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있으며, 이러한 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여의 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 농도는 치료 목적, 환자의 상태, 필요기간 등을 고려하여 결정할 수 있으며, 특정 범위의 농도로 한정되지 않는다.

또한, 본 발명은 플라즈마 처리된 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료용 의약외품 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다. 본 발명의 의약외품 조성물은 피부 상처 치료를 목적으로 사용되는 것으로, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 일례로, 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피투여용 제형일 수 있다.

또한, 각 제형에 있어서 의약외품 조성물은 다른 성분들을 기타 의약외품의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(억제 또는 완화)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 점증제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체 등을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은

1) 단풍취 건조 분말에 용매를 첨가하여 단풍취 추출물을 획득한 후 동결건조하는 단계; 및

2) 상기 단계 1)의 동결건조된 단풍취 추출물 1 중량부에 대하여, 80~120 부피부의 물을 첨가한 후 플라즈마를 처리하는 단계;를 포함하는 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물은

1) 단풍취 건조 분말 1 중량부에 대하여 8~12 부피부의 70%(v/v) 에탄올을 첨가한 후, 상온에서 8~15시간 동안 교반하여 단풍취 추출물을 획득한 후 원심분리한 다음 상등액을 여과한 후 동결건조하는 단계; 및

2) 상기 단계 1)의 동결건조된 단풍취 추출물 1 중량부에 대하여, 80~120 부피부의 물을 첨가한 후 330~390W의 전력으로, 텅스턴 전극 사이에 사인파 펄스형 고전압을 가하여 생성된 플라즈마를 80분 이상 처리하는 단계;를 포함하여 제조할 수 있다. 상기 상온은 15~25℃이다.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 피부재생 효과가 증진된 단풍취 추출물을 제공한다. 본 발명의 제조방법으로 제조된 단풍취 추출물의 총 폴리페놀 함량은 플라즈마를 처리하지 않은 단풍취 추출물에 비해 증가하고, 항산화 활성이 증진된다.

이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

제조예 1. 플라즈마 처리된 단풍취 추출물의 제조

(1) 단풍취 추출물의 제조

단풍취 분말 시료 1g에 70%(v/v) 에탄올을 10㎖ 넣고, 상온에서 10시간 동안 180rpm으로 교반하며 추출하였다. 그 후 원심분리하여 얻은 상등액을 0.45㎛ 눈금의 여과지에 통과시켜 여과한 뒤 동결건조하였다.

(2) 플라즈마 처리된 단풍취 추출물의 제조

상기 동결건조한 단풍취 에탄올 추출물 1g에 증류수 100㎖를 첨가하여 1%(w/v) 용액을 만든 후, 상기 용액을 플라즈마 발생기에 넣고, 일정시간(60, 90, 120, 150 또는 180분) 동안 플라즈마를 처리하여 플라즈마 처리된 단풍취 추출물을 제조하였다.

본 발명에 사용한 플라즈마는 360W 전력으로, 두 개의 텅스텐 전극 사이에 사인파 펄스형 고전압을 가하여 생성하였으며, 플라즈마 발생기는 전압/고주파 전원장치, 플라즈마 방전부, 처리 테이블의 3부분으로 구성된다. 플라즈마 방전부는 두께 5mm의 테프론 실드에 지름 3mm, 길이 20mm의 텅스텐 리드를 평행 배치한 후 매립하였다. 220V AC의 전원을 사용하였고, 출력전압은 300V, 전류는 5A로 고정하여 플라즈마를 생성하여 단풍취 추출물에 처리하였다.

플라즈마 처리가 완료된 추출물은 동결건조한 후 50%(v/v) 에탄올에 용해한 다음 시험에 사용하였다.

본 발명의 비교예로는 상기 단풍취 추출물의 제조와 동일한 방법으로 동결건조한 단풍취 에탄올 추출물 1g을 50%(v/v) 에탄올에 용해한 다음 시험에 사용하였다.

실시예 1. 총 폴리페놀 함량 및 항산화능 측정

본 발명의 제조방법으로 제조된 플라즈마 처리된 단풍취 추출물의 총 폴리페놀 함량 및 항산화능을 측정하였다.

총 폴리페놀 함량은 Gutfiger(1981)의 방법을 변형하여 측정하였으며, 제조예 1의 단풍취 추출물의 희석액 100㎕에 폴린-시오칼투(Folin-Ciocalteau) 용액 100㎕를 가하고 3분간 정치한 다음 1㎖의 0.7M Na₂CO₃ 용액을 가하고, 1시간 동안 반응시킨 후 분광광도계를 사용하여 750nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 총 폴리페놀 함량은 탄닌산(tannic acid)을 이용하여 표준곡선을 작성한 후 계산하였다.

ABTS 라디칼 소거활성은 Blois(1958)의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉 7mM ABTS와 2.45mM 과황산칼륨(potassium persulfate) 용액을 혼합하여 하루 동안 암소에 방치하여 ABTS+^·를 형성시킨 후, 상기 용액을 734nm에서 흡광도가 0.7~0.9가 되도록 몰 흡광계수를 이용하여 증류수로 희석하였다. 그 후, 제조예 1의 각각의 단풍취 추출물 50㎕에 희석된 ABTS 용액을 100㎕ 가한 후 5분간 반응시킨 다음 흡광도의 변화를 측정하였다. ABTS의 항산화능은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 계산하였다.

플라즈마 처리에 의한 단풍취 추출물의 총 폴리페놀 함량 및 ABTS 라디칼 소거능 변화는 표 1에 개시하였다.

총 폴리페놀 함량은 플라즈마 처리 시간에 비례하여 증가하였고, ABTS 라디칼 소거능은 플라즈마를 60분 동안 처리한 경우 증가하였으나, 90~120분 동안 플라즈마를 처리하면 감소하였고, 150분 이상 플라즈마를 처리하면 다시 증가하는 경향을 나타냈다.

플라즈마 처리 (분)	총 폴리페놀 함량 (mg/추출물 1g)	ABTS 라디칼 소거능(%) (RC50, ㎍/㎖)
0	167.83±7.90	207.27
60	171.67±7.55	184.25
90	172.65±0.28	382.15
120	209.28±4.40	252.60
150	233.79±2.11	143.90
180	284.85±5.27	125.66

실시예 2. 세포생존율( cell viability ) 측정

본 발명에 사용한 세포는 사람의 정상 섬유아세포(HS68)로 ATCC(American Type Culture Collection, CRL-1635)에서 구입하였다. 세포배양은 10%(v/v) FBS(fetal bovine serum)과 1%(v/v) 페니실린/스트렙토마이신(100U/㎖)을 첨가한 DMEM(Dulbeco's modified eagle's medium, Gibco Co, Gaithersburg, MD, USA) 배지를 사용하였으며, CO₂ 배양기(37℃, 5% CO₂, Sanyo, Japan)에서 배양하였다.

또한, 제조예 1의 플라즈마 처리된 단풍취 추출물이 세포독성에 미치는 농도범위를 조사하기 위해, 모스만(Mosmann, T., 1983, Journal of Immunological Methods, 65, 55-63)의 방법을 이용하여 MTT(3-(4,5-dimeth-ylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석을 수행하였다. HS68 세포를 96-웰 플레이트에 1×10⁵ cells/㎖ 농도로 100㎕ 접종하여 24시간 배양한 후 여러 농도의 플라즈마 처리된 단풍취 추출물을 각각 처리하여 24시간 동안 더 배양하였다. 각 웰에 5mg/㎖의 MTT 용액을 10㎕ 넣고 3시간 동안 반응시키면서 환원반응을 유도하였고, 상등액 제거 후 100㎕의 DMSO(dimethyl sulfoxide) 용액을 첨가하여 보라색의 포르마잔(formazan) 결정을 완전히 용해하였다. 분광광도계를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였으며, 세포독성은 아무것도 처리하지 않은 무처리군의 생존율(100%)을 기준으로 본 발명의 플라즈마 처리된 단풍취 추출물 처리군의 상대적인 세포 생존율을 계산하였다.

그 결과, 도 1에 개시된 바와 같이 본 발명의 플라즈마 처리된 단풍취 추출물은 플라즈마 처리되지 않은 단풍취 추출물에 비해 세포독성이 나타나지 않는 안전한 물질이라는 것을 확인하였다.

실시예 3. 피부세포 재생능 측정

HS68 세포를 1×10⁵ cells/㎖ 농도로 24-웰 플레이트에 접종한 후, CO₂ 배양기에서 24시간 배양한 후에 배지를 제거하고 PBS를 500㎕ 넣고 UVC(254nm)를 650mm 거리에서 1분 20초 동안 뚜껑을 열고 조사하였다. UVC 조사 후 무혈청 DMEM 배지, 플라즈마 처리된 단풍취 추출물을 농도별로 각각 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 배양이 끝나면 MTT 시약을 50㎕씩 넣고 3시간 동안 방치한 후 상등액을 제거하고 형성된 포르마잔(formazan)을 DMSO(dimethyl sulfoxide) 100㎕를 첨가하여 30분 후 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 2에 개시된 바와 같이 플라즈마를 처리하지 않은 단풍취 추출물은 UV에 의해 손상된 피부 세포의 재생 효과가 거의 없었으나, 단풍취 추출물이 플라즈마와 반응한 시간이 길어질수록 피부재생 효과가 증진되는 것을 확인하였다. 특히 100㎍/㎖ 이상의 농도로 90분 이상 플라즈마 처리한 단풍취 추출물을 처리한 경우 플라즈마를 처리하지 않은 단풍취 추출물에 비해 피부재생 효과가 현저하였다.

Claims (8)

1. 330~390W의 전력으로, 텅스턴 전극 사이에 사인파 펄스형 고전압을 가하여 생성된 플라즈마를 90~180분 동안 처리한 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물 80~220㎍/㎖을 유효성분으로 함유하는 피부재생용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 단풍취 추출물의 추출 용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 피부재생용 화장료 조성물.
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4. 330~390W의 전력으로, 텅스턴 전극 사이에 사인파 펄스형 고전압을 가하여 생성된 플라즈마를 90~180분 동안 처리한 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물 80~220㎍/㎖을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료용 약학 조성물.
5. 330~390W의 전력으로, 텅스턴 전극 사이에 사인파 펄스형 고전압을 가하여 생성된 플라즈마를 90~180분 동안 처리한 단풍취(Ainsliaea acerifolia) 추출물 80~220㎍/㎖을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의해 유발된 피부 상처 치료용 의약외품 조성물.
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