KR20160050527A - 구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 구멍갈파래 (Ulva pertusa Kjellman) 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 콜라겐 분해 촉진 억제 및 콜라겐 생성 촉진에 관여함으로서 주름개선에 효과가 우수하여 화장료 조성물 또는 미용제품으로 사용이 용이하며, 세포 독성 실험을 통해 안전한 것이 확인되어 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있다.

Description

구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물{Composition of cosmetics for anti-wrinkle containing Ulva pertusa Kjellman extracts}

본 발명은 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 자세하게는 구멍갈파래 (Ulva pertusa Kjellman) 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 주름개선용 화장료 조성물은 항산화활성이 우수하고 사람 각질세포주인 Haca T에 H₂O₂처리 후 증가한 콜라게나이제(MMP-1) 활성 저해 효과가 우수하고 콜라겐 합성 촉진 효과가 우수하며 독성 및 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있는 주름개선 화장료 조성물에 관한 것이다.

해조(marine algae, 海藻)란 바다에 사는 조류(藻類)를 통틀어 일컫는 말로, 녹조식물, 갈조식물, 홍조식물과 남조식물 중 바다에 사는 종류가 포함된다. 이들은 보통 520m까지 분포하며, 50m 깊이까지도 생육하고 있는 것을 볼 수 있다. 녹조류, 갈조류, 홍조류 중에서도 종류에 따라서 난해성, 온해성, 한해성 등이 구분되고, 각각의 종이 생육할 수 있는 온도범위 내에서만 살고 있는 것을 볼 수 있다. 난해성 해조류로는 바다선인장, 삿갓말 등이 있고, 온해성 해조류로는 미역, 톳, 모자반, 우뭇가사리, 불등가사리 등이, 한해성 해조류로는 다시마, 빨간검둥이, 티코카르푸스 등이 있다.

해조류의 일종인 구멍갈파래는 녹조류 갈파랫과에 속하고 길이는 10~50cm이고 얇은 잎 모양으로 녹색을 띈다. 식물체의 기부는 물결모양으로 꾸불꾸불하게 위었지만 위로 갈수록 넓게 펼쳐진다. 식물체의 가장자리는 매끈하며 식물의 표면에서 볼 때 세포는 모서리가 없는 다각형으로 둘씩 짝을 이루고 엽록체는 짝을 이룬 세포의 반대쪽에 있다. 단면에서 세포는 네모꼴이며 엽록체는 보통 세포의 허리부분에 있고 드물게 식물체의 표면 쪽에 있는 것이 있다.

구멍갈파래의 분포 및 서식지로는 일본에 분포하며 우리나라에서는 전 연안의 각지에 분포한다. 조간대 하부에 큰 군락을 이루는데 유리된 후에도 계속 자라며 담수가 유입되는 반함수 지역에도 많이 번무하고 특히 내만에는 1m 이상의 크기를 가지기도 한다.

최근 구멍갈파래는 기후변화로 해안 표층수온이 상승해 이상 증식한 녹조식물로 그 동안 환경 생태학적 문제를 야기한 바 있다. 최근 제주지역에서는 이 문제를 해결하기 위해 넙치와 전복 사료로 활용해 자원화 시키고 있으며 구멍갈파래의 기능성에 관한 연구도 지속적으로 추진 중이다.

연간 약 3000톤 이상 자원화가 가능하며 구멍갈파래 내 황산기를 함유한 다당체는 항바이러스, 면역증강 등 다양한 기능성을 보유하고 있는 것으로 보고되고 있다.

한편, 화장료의 목표는 피부를 청결하게 하고, 아름다우며 건강하게 유지하는 것이다. 표피, 진피, 피하지방으로 구성되어 있는 피부는 인체를 이루고 있는 가장 큰 기관으로 보호기능과 장벽기능, 온도조절기능, 배설기능, 호흡기능 등 다양한 역할을 담당하고 있는 아주 중요한 기관이다. 그러나, 피부는 나이가 들면서 그 기능이 급격하게 저하되고, 이로 인한 다양한 변화가 오면서 노화되어 가게 된다. 노화에 따른 피부의 생리적 변화로는 피부의 구성 성분인 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지는 현상, 피부장벽의 기능을 맡고 있는 지방막 조성과 함량이 변화하면서 그 기능이 급격하게 저하됨으로써 피부의 수분함량이 떨어지고 피부가 건조해지는 현상, 기미, 주근깨, 색소침착 또는 다양한 피부 병변이 유발되는 현상 등이 있다.

특히, 자외선량의 증가와 대기오염 및 현대인의 과도한 피로와 스트레스 등으로 인해 생성되는 반응성이 높은 활성산소와 자유라디칼은 생체성분을 산화시키거나 변성시킴으로써 피부노화의 주원인으로 작용한다. 따라서 피부노화에 따른 주름형성, 피부 탄력감소, 색소침착, 기미, 주근깨 등은 화장료 분야에서 피부 보호 및 미용 차원의 중요한 과제로 가장 많이 연구되어 지고 있는 영역중 하나이다.

본 발명은 천연원료인 구멍갈파래의 추출물을 유효성분으로 이용하여 독성 및 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있으며, 콜라겐 합성 촉진 효과가 우수하여 주름개선이 가능한 구멍갈파래 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

국내 특허등록공고 제10-2008-009025호는 구멍갈파래 추출물과 그것의 항염증제로서의 용도에 관한 것으로, 추출대상으로서 구멍갈파래를 사용하고 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 5의 알콜, 아세톤, 에틸아세테이트, 에테르, 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 탄소수 6 내지 n-알칸, 또는 이들의 혼합 용매를 사용하며 활성으로서는 항염증 활성을 가지는 구성을 개시하고 있다. 국내 특허공개공보 제10-2012-0145545호는 가는개도박을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 미아베모자반, 모자반 추출물, 가느개도박, 톳추출물, 감태추출물, 구멍갈파래추출물 또는 이들의 혼합조성물을 이용하여 피부보습이 뛰어난 화장료 조성물을 제공하는 것을 개시하고 있다. 국내 특허등록공보 제10-2011-0057817호는 팩조성물에 관한 것으로, 제주도의 천연자원 중 해조류를 이용하여 모공을 수축할 뿐만 아니라, 피부보습이 뛰어나고 항염 및 면역력을 높일 수 있는 천연팩 조성물을 제공하는 것을 개시하고 있다. 국내 특허등록공보 제10-2007-0120398호는 피부 외용제에 관한 것으로, 쪽풀 추출물을 유효 성분으로 함유하는 멜라닌 생성 억제, 엘라스타아제 활성 억제 또는 노화 방지용의 피부 의용제에 있어서 쪽풀 추출물이 물 혹은 물을 함유하는 용매로써 추출된 것을 특징으로 하는 피부 의용제를 제공하는 것을 개시하고 있다. 그러나 이와 같은 선행기술에서는 본 발명에서와 같이 천연원료인 구멍갈파래 추출물을 유효성분으로 이용하여 독성 및 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있으며, 구멍갈파래 추출물은 콜라겐 합성 촉진 효과가 우수하여 주름개선이 가능하도록 한 주름개선용 화장용 조성물과는 차이를 보인다.

본 발명은 주름개선용 화장료 조성물에 유효하게 작용하는 구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 우리나라 천연자원인 구멍갈파래 추출물을 유효성분으로 하는 주름개선에 효과를 갖는 기능성 화장료 조성물을 제조할 수 있으며, 장기간 사용하여도 안전한 구멍갈파래 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 구멍갈파래 조추출물 또는 비극성가용추출물을 유효성분으로 포함하는 주름개선용 화장료조성물을 제공한다.

구멍갈파래를 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로메탄 및 이의 혼합물로 이루어 진 군 중에서 선택된 1종 이상을 추출용매로 추출할 수 있다.

또한, 상기 추출용매를 사용하여 추출한 구멍갈파래 조추출물에 비극성용매로서 헥산, 클로로포름, 디클로메탄 및 에틸아세테이트 중 어느 하나를 분획용매로 사용하여 분획할 수 있다.

상기 조성물을 0.1 내지 10.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부외용제 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 구멍갈파래 추출물을 주름개선용 화장료 조성물에 유효성분으로 사용함으로써 환경오염물질로 분리되던 구멍갈파래를 고품질 고부가가치 소재로 표준화할 수 있는 화장품 원료로 자원화하여 대량생산 및 어촌의 신소득원 창출의 가능성을 열어주는 효과를 가진다.

또한 장기간 사용하여도 부작용이 없이 안전하게 사용할 수 있으므로 이를 이용하여 화장품 등 다양한 소재로 유용하게 사용될 수 있는 효과가 있다.

도 1은 구멍갈파래 추출모식도를 나타낸 것이다.
도 2는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 세포 독성실험결과를 나타낸 것이다.
도 3은 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물과 과산화수소 동시 처리에 의한 세포 독성실험결과를 나타낸 것이다.
도 4는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 효과를 나타낸 것이다.
도 5는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타낸 것이다.

본 발명은 구멍갈파래 조추출물 또는 비극성가용추출물을 유효성분으로 포함하는 주름개선용 화장료조성물을 제공한다.

구멍갈파래를 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이의 혼합물로 이루어 진 군 중에서 선택된 1종 이상을 추출용매로 추출할 수 있다.

또한, 상기 추출용매를 사용하여 추출한 구멍갈파래 조추출물에 비극성용매로서 헥산, 클로로포름, 디클로메탄 및 에틸아세테이트 중 어느 하나를 분획용매로 사용하여 분획할 수 있다.

상기 조성물을 0.1 내지 10.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부외용제 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세히 설명한다. 하기에서 본 발명을 설명함에 있어서, 공지기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략하였다.

1. 구멍갈파래 추출물 및 분획물 제조

1.1. 구멍갈파래 열수 추출물 제조

도 1은 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 제조 모식도를 나타낸 것이다. 구멍갈파래 3.8g을 30% 에탄올을 이용하여 121℃에서 reflux 환류 냉각 추출하여 추출물을 제조하였다.

구체적으로 증류수로 수세한 구멍갈파래 10g을 30%에탄올 200ml을 가한 후, 121℃에서 3시간 가열하면서 reflux 환류 냉각 추출하였다. 상기 추출을 수행한 후 400 메쉬 필터페이퍼에 여과한 다음, 수득한 여액을 감압회전농축기를 이용하여 농축하였다. 상기 과정을 통해 제조된 농축액을 동결건조기(Freeze dryer)에서 동결 건조하여 구멍갈파래 30% 에탄올추출물 1.14g을 수득하였으며, 이로 인해 상기 30% 에탄올 추출법에 의한 수율이 29.94%인 것으로 확인되었다.

구멍갈파래를 열수 추출할 때 사용되는 용매는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 추출용매로 사용할 수 있다.

1.2. 구멍갈파래 극성용매, 비극성용매 가용 분획물의 제조

상기와 같이 제조된 구멍갈파래 열수 추출물을 유기 용매를 이용하여 분획물을 제조할 수도 있다. 구멍갈파래의 극성용매, 비극성용매 가용 분획물의 제조는 일정량의 구멍갈파래 열수 추출물을 증류수에 완전히 용해시킨 후 분획 여두 깔대기에 넣고 헥산을 첨가하여 water층과 hexane층을 분리하고 이와 같은 공정을 여러번 반복하여 제조할 수 있다.

동일한 과정을 통해 클로로포롬, 에틸아세테이트 및 디클로메탄 중 어느 하나를 분획용매로 사용하여 분획물을 얻고 얻어진 각각의 분획물을 감압여과 장치로 여과하여 농축한 후 동결 건조하여 용매를 완전히 제거한 뒤 사용할 수도 있다.

2. 구멍갈파래 실험

2.1. 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 세포 독성 실험결과

본 발명의 구멍갈파래 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 화장 조성물의 피부에 대한 세포독성 및 안정성을 확인하였다. 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 세포독성을 위한 실험으로 Mouse immortalized fibroblast(NIH3T3)를 96well plate에 1x104 cells/well되게 접종하고 24시간 배양하였다. 여기에 구멍갈파래 추출물을 각각의 well에 첨가하여 24시간 배양 후 배지를 버리고 새로운 배지와 함께 MTT 용액을 10μL씩 첨가하였다. 4시간 후 배지를 제거하고 DMSO를 넣어 formazan을 용해시키고 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

구체적으로는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물에 대한 NIH3T3세포의 세포생존률을 측정하기 위해 MTT assay를 수행하였다. 우선, 세포배양 배지를 제거한 후 MTT를 1 ㎎/㎖로 포함하는 DMEM 배지를 웰 당 1 ㎖씩 처리하고, 37℃ 습윤한 CO₂배양기에서 4시간 더 배양하였다. 이후 배지를 제거한 후, tetrazolium bromide salt를 제거하고, DMSO 200 ㎕를 분주하여 각 웰에 생성된 포르마잔 크리스탈을 용해시키고, 마이크로 플레이트리더(microplate reader)에서 570 ㎚파장으로 흡광도를 측정하여 세포생존율을 확인하였다.

도 2는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 세포 독성실험결과를 나타낸 것이다. 상기 도 2에 나타낸 바와 같이, 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물을 다양한 농도(10, 20, 30, 40, 60 80 그리고 100㎍/㎖)별로 처리하고 24시간을 처리한 결과 각각 99.4, 100.5, 98.4, 94.2, 95.5, 93.2 그리고 91.2%의 세포증식능을 확인하였다. 이는 시료를 처리하지 않은 정상군과 비교한 결과, 모두 세포독성에 별다른 영향을 나타내지 않는 것으로 확인되었다.

2.2. 과산화수소 및 구멍갈파래 추출물 동시 처리에 대한 세포의 독성실험결과

도 3은 과산화수소 단독 처리, 구멍갈파래 열수, 30% 에탄올 추출물과 10uM 과산화수소에 동시처리에 대한 Haca T세포의 세포생존률을 나타낸 것이다.

아무것도 처리하지 않는 정상군의 세포생존률을 100% 기준으로 했을 때, 대조군인 10uM 과산화수소를 단독처리의 경우, 98.4%의 세포 생존률을확인하였다. 10uM 과산화수소와 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물 (10ug/ml)을 동시에 처리한 실험군의 경우, 95.1%의 세포 생존률을 확인하였다 또한 구멍갈파래 열수 추출물 실험군도 88.8%로 확인되었다.

이는 시료를 처리하지 않은 정상군과 비교한 결과, 모두 세포독성에 별다른 영향을 나타내지 않는 것으로 확인되었다.

2.3. 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 효과

도 4는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 효과를 나타낸 것이다. 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 항산화효과를 평가하기 위하여 DPPH 자유라디칼 소거활성 실험을 수행하였다.

시료 10㎕에 10mM DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액 30㎕를 넣고 10초간 진탕 후 30분간 정치시킨 후 증류수와 DMSO를 각각 1mL씩 첨가 후 진탕시켜 10~30분간 방치하고 517㎚에서 시료를 가하지 않은 대조군에 대한 흡광도 감소를 수소공여능 활성으로 나타내었으며 비교를 위하여 ascorbic acid를 사용하였다.

구체적으로는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물이 DPPH 라디칼에 전자를 공여함으로써 라디칼을 소거하는 효과를 517nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 즉, 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물을 DPPH용액과 혼합하여 각각 50, 100 그리고 200㎍/ml의 농도가 되도록 하고 실온에서 30분동안 정치시킨 다음 증류수로 반응을 정지시켰다. 반응물에 대한 흡광도를 측정하여 대조군에 대한 흡광도 감소치를 DPPH 라디칼 소거활성으로 하여 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 항산화 활성도를 나타내었다.

대조군인 DPPH용액의 흡광도 값을 100% 기준으로 했을 때, 실험군인 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물 50, 100 그리고 200㎍/ml의 농도에서의 DPPH 흡광도 값을 구한 결과 각각 73.5, 70 그리고 60.5% 값을 얻었다.

따라서, 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물은 농도 의존적으로 각각 26.5, 30 그리고 39.5%의 DPPH 라디칼 소거능을 보임으로서 우수한 항산화 효과를 확인하였다.

2.4. 구멍갈파래 열수, 30% 에탄올 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과

도 5는 구멍갈파래 열수, 30% 에탄올 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 나타낸 것이다. 구멍갈파래 열수, 30% 에탄올 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 평가하기 위해 Procollagen Type I C-PeptideEnzyme Immuno Assay 실험을 수행하였다.

인간 각질세포인 Haca T세포를 24-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 5× 10⁴세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 구멍갈파래 추출물을 최종 농도 10 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지에서 0.5시간 동안 전처리한 후, 10μM H₂O₂처리하여, 24시간 배양하였다. 각 웰의 상층액을 모아 생합성된 콜라겐 측정은 PIP EIA kit(Procollagen Type I C-PeptideEnzyme Immuno Assay KIT)를 이용하여 정량하였다.

구체적으로는 인간 각질세포인 Haca T세포를 24-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 5× 10⁴세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 대조군으로 10μM 과산화수소(H₂O₂)를 처리하여 콜라겐 분해를 유발하였다. 실험군으로 10μM 과산화수소(H₂O₂)와 구멍갈파래 열수, 30% 에탄올 추출물 10 ㎍/㎖로 처리한 다음 24시간 동안 무혈청 배지에서 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 Procollagen Type I C-PeptideEnzyme Immuno Assay KIT를 사용하여 450nm에서 PIP(rocollagen Type I C-Peptide) 생성량을 측정하였다.

대조군인 10μM 과산화수소(H₂O₂)를 처리한 경우, PIP 생성량(187.1ng/ml)이 정상군의 PIP 생성량(259.0ng/ml)에 비해 감소했음을 확인하였다. 반면에 10μM 과산화수소(H2O2)와 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물 10㎍/ml을 동시에 처리한 실험군의 경우, PIP 생성량(268.3ng/ml)이 대조군(187.1ng/ml)에 비해 증가하였음을 확인하였다.

그러나 구멍갈파래 열수 추출물 10ug/ml 처리한 실험군은 PIP 생성량(27.1ng/ml)이 현저하게 낮아 30% 에탄올 추출물의 효과가 더 큰 것을 확인할 수 있었다.

따라서, 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물은 과산화수소에 의해 증가된 MMP-1 활성 억제에 관여하고 콜라겐 분해 촉진 억제 및 콜라겐 생성 촉진에 관여함으로서 주름개선에 효과가 있음을 확인하였다.

5. 추출물을 이용한 주름개선 효과를 갖는 기능성 화장품제조

구멍갈파래 30% 에탄올 추출물에 대한 PIP 생성량 실험결과로부터 항산화, 주름개선 효과에 뛰어난 기능성 화장품의 원료로 사용할 수 있는 것이 확인됨에 따라 본 발명의 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물을 이용하여 주름개선 효과에 뛰어난 기능성 화장품을 제조하였다.

주름개선 기능을 갖는 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물의 기능성 화장품 함유량은 본 발명의 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물을 0.1 내지 10중량% 함유하도록 하였다. 기타 포함되는 화장품 원료로는 일반적으로 화장품제조에 사용되는 원료로서 유상, 수상 성분, 계면활성제, 비타민류 등을 혼합하여 제조한다.

본 발명에 따라 제조된 기능성 화장품은 클렌징 폼, 스킨로션, 에멀젼, 영양크림, 에센스, 앰플, 아이크림, 클렌징 로션, 마사지 크림, 필링젤, 남성용 스킨로션, 필링젤, 남성용 에멀젼, 비비크림, 슬리밍 젤, 고주파 젤, 고주파 크림, 손 소독제 등으로 제조될 수 있으며, 사용방법은 일반적으로 환부에 도포하는 방법이 사용될 수 있고, 제형에 따라 바람직한 투여방법을 선택할 수 있다.

본 발명의 조성물의 일일 투여량은 투여대상, 투여방법, 증상에 따라 결정되며, 투여회수는 1일 2회 이상이 바람직하나 정도에 따라 투여회수 또한 조절될 수 있다.

주름개선용 화장료 조성물로써 구멍갈파래 추출물은 DPPH 라디칼 소거능 효과가 뛰어나며 콜라겐 분해 촉진 억제 및 콜라겐 생성 촉진에 관여함으로서 주름개선에 효과가 우수하기 때문에 화장료 조성물 또는 미용제품으로 사용이 용이하며, 세포 독성 실험을 통해 안전하다는 것이 확인되어 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있고, 주름개선용 화장료 조성물의 원료로 자연에 서식하는 해조류로 대체함으로 제조생산단가 절감과 산업화를 통한 수입대체 및 수출효과를 기대할 수 있다.

Claims (5)

1. 구멍갈파래 (Ulva pertusa Kjellman) 조추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 구멍갈파래를 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이의 혼합물로 이루어 진 군 중에서 선택된 1종 이상을 추출용매로 추출한 것을 특징으로 하는 구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물.
   
3. 제2항에 있어서, 상기 추출용매를 사용하여 추출한 구멍갈파래 조추출물에 비극성용매로서 헥산, 클로로포름, 디클로메탄 및 에틸아세테이트 중 어느 하나를 분획용매로 사용하여 분획한 것을 특징으로 하는 구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물.
   
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물을 0.1 내지 10.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부외용제 제형인 것을 특징으로 하는 구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물.
   
5. 1) 증류수로 수세한 구멍갈파래에 30% 에탄올을 가한 후, 121℃에서 3시간 동안 가열하여 reflux 환류 냉각 추출하는 단계;
   2) 상기 추출단계로부터 얻어진 추출물을 400 메쉬 필터페이퍼에 여과한 다음, 수득한 여액을 감압회전농축기를 이용하여 농축단계
   3) 상기 여과 후 남은 잔사에 동일 과정으로 2번 더 추출 여과 및 감압 농축하는 단계;
   4) 상기 여과,농축단계를 통해 제조된 농축액을 동결건조기에서 동결 건조하여 수득한 구멍갈파래 30% 에탄올 추출물을 0.1 내지 10중량%의 농도로 포함되도록하는 것을 특징으로 하는 구멍갈파래 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물 제조방법

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