KR102094572B1 - 안과 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 tgf-베타 올리고뉴클레오타이드 - Google Patents

안과 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 tgf-베타 올리고뉴클레오타이드 Download PDF

Info

Publication number
KR102094572B1
KR102094572B1 KR1020157030781A KR20157030781A KR102094572B1 KR 102094572 B1 KR102094572 B1 KR 102094572B1 KR 1020157030781 A KR1020157030781 A KR 1020157030781A KR 20157030781 A KR20157030781 A KR 20157030781A KR 102094572 B1 KR102094572 B1 KR 102094572B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
tgf
oligonucleotide
dna
modified
artificial sequence
Prior art date
Application number
KR1020157030781A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20150140702A (ko
Inventor
프랑크 야신스키
미첼 자니코트
에우겐 울만
에우겐 레오
Original Assignee
이사르나 테라퓨틱스 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이사르나 테라퓨틱스 게엠베하 filed Critical 이사르나 테라퓨틱스 게엠베하
Publication of KR20150140702A publication Critical patent/KR20150140702A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102094572B1 publication Critical patent/KR102094572B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 LNA, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및/또는 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는, TGF-베타1, TGF-베타2 또는 TGF-베타3 핵산 서열의 선택된 영역의 10 내지 20 뉴클레오타이드로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기와 같은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이며, 여기에서 상기 조성물 또는 상기 올리고뉴클레오타이드는 녹내장, 후낭 혼탁, 안구 건조증, 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군, 리보블라스토마(riboblastoma), 황반변성, 예를 들어 나이-관련 황반변성, 당뇨성 망막부종 또는 백내장의 예방 및/또는 치료 방법에 사용된다.

Description

안과 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 TGF-베타 올리고뉴클레오타이드{MODIFIED TGF-BETA OLIGONUCLEOTIDE FOR USE IN A METHOD OF PREVENTING AND/OR TREATING AN OPHTHALMIC DISEASE}
본 발명은 안과 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한, 가교된 뉴클레오타이드, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및/또는 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는 TGF-베타 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다.
예를 들어 증식 또는 세포 분화를 조절하는 다기능성 성장 인자인 형질전환 성장 인자 베타(TGF-베타)는, 다양한 다른 성장 인자들도 또한 관련되지만, 생리학적 또는 병리학적 발생 과정 또는 조직 수복에서 눈 조직의 세포 양상의 조절에 관련된 가장 중요한 리간드들 중 하나이다. 상기 리간드의 증가된 활성은 불리한 염증 반응 및 조직 섬유증을 유도할 수 있다. 포유동물에서, TGF-베타의 3가지 동형, 즉 베타1, 베타2 및 베타3가 공지되어 있다. 대부분의 경우에, TGF-베타는 세포외 기질 생산을 증대시키고 세포 증식을 억제한다. 더욱이, TGF-베타는 다수의 성장 인자들, 즉 결합조직 성장 인자(CTGF), 혈소판-유래된 성장 인자(PDGF), 섬유아세포 성장 인자(FGF), 및 혈관내피 성장 인자(VEGF)뿐만 아니라 TGF-베타1 자체를 유도할 수 있다. 이들 인자는 모두 손상에 따른 정상 조직의 복원에 중요한 역할을 한다.
내부 눈 구조(각막 내피, 홍채, 수정체, 섬유주, 및 망막)를 감싸고 있는 수성 체액은 다양한 사이토킨 및 성장 인자를 함유한다. TGF-베타, 특히 TGF-베타2가 우세한 사이토킨이다. 생리학적으로, TGF-베타는 주로 모양체 상피 및 수정체 상피에서, 성숙한 TGF-베타, 잠복성-관련된 펩타이드(LAP)(작은 잠복 형태), 및 잠복-TGF-베타-결합 단백질(LTBP)로 이루어지는 잠복성의 비활성 형태로서 생산된다. 상기 수정체에서 각 TGF-베타 동형의 이종 발현 패턴들이 인간 및 동물에서 보고되었다. 다양한 눈 질환의 임상 과정 중에, 수성 체액 중의 TGF-베타2의 농도가 변한다. 예를 들어, 망막 분리후 질환인 증식성 유리체망막병증(PVR) 및 망막 섬유증이 있는 눈에서, 상기 유리체액 중의 TGF-베타2의 농도는 망막 섬유증의 진행과 관련하여 증가한다. 전체 및 활성 TGF-베타2의 농도도 또한 정상 피실험자에서보다 당뇨성 망막병증 및 개방각녹내장이 있는 환자에서 더 높다. 당뇨성 망막병증에서, 망막 미세혈관의 만성적인 폐쇄는 VEGF의 상향조절 및 TGF-베타의 효능 있는 공급원인 대식세포의 화학주성을 유발한다. VEGF 및 TGF-베타는 협력하여 망막 혈관신생 및 상기 새로운 혈관 주변의 섬유증을 모두 유발시키며, 이는 잠재적으로 망막 분리 또는 출혈을 야기할 수 있다. 증가된 TGF-베타2 수준은 섬유주 세포에서 기질 발현 및 침착을 유도하여, 녹내장의 눈에서 수성 배액 경로의 폐쇄 및 안내압의 증가를 도출한다. 이들 각각의 예에서, TGF-베타는 질병 병인에 한 역할을 한다. 수정체, 홍채 또는 섬유주상에 박리 물질의 침착을 갖는 일종의 녹내장인 거짓비늘증후군이 있는 눈에서, TGF-베타1의 수준이 증가하지만, 상기 질병의 병인에서 TGF-베타1의 정확한 역할은 알려져 있지 않다(문헌[Shizuya Saika, Laborartory Investigation (2006), 86, 106-115]).
TGF-베타는 세포외 기질의 생산 및 침착의 가장 효능 있는 조절제 중 하나이다. 상기 TGF-베타는 2개의 주요 기전에 의해 상기 세포외 기질의 생산을 자극하고 부착 성질에 영향을 미친다. 첫 번째, TGF-베타는 세포외-기질 단백질 및 세포-부착 단백질(콜라겐, 피브로넥틴 및 인테그린 포함)을 생산하도록 섬유아세포 및 다른 세포를 자극한다. 두 번째, TGF-베타는 상기 세포외 기질을 분해하는 효소(콜라게나제, 헤파리나제 및 스트로멜리신 포함)의 생산을 감소시키고, 상기 세포외 기질을 분해하는 효소를 억제하는 단백질(1형 플라스미노겐-활성제 억제제 및 메탈로프로테아제의 조직 억제제 포함)의 생산을 증가시킨다. 이러한 변화의 순 효과는, 세포외-기질 단백질의 생산을 증가시키고 세포-특이적인 방식으로 세포의 부착 성질을 증가시키거나 감소시키는 것이다(문헌[Blobe GC et al., May 2000, "Role of transforming growth factor beta in human disease", N. Engl. J. Med. 342 (18), 1350-1358]을 참조하시오).
TGF-베타의 표적화가 예를 들어 녹내장에서 잠재적인 치료 수단으로서 제안되었다. 녹내장의 병인에서 TGF-베타의 다양한 태양에 관하여, 치료법들은 그의 생산, 활성화, 수용체와의 상호작용, 하류 세포내 조절 기전 및/또는 최종 구조 및 ECM 변화를 지향해야 한다(문헌[Prendes MA et al., Br J Ophthalmol (2013), 97, 680-686]을 참조하시오).
만성적으로 증가된 안내압을 기본으로 하는 녹내장(GCM)은 망막 신경절 세포의 점진적인 상실을 특징으로 하는 진행성 시 신경병증이며, 임상적으로 시신경 원반 신경망막테 조직의 상실, 망막신경섬유층의 결함, 및 기능성 시야 시험에서의 결손을 나타낸다(문헌[Danesh-Meyer et al., Ophthalmol. 2006, 113: 603-611]을 참조하시오). 녹내장은 미국에서 성인 실명의 두 번째 선도 원인이다. 난치성 환자에서의 수술적 시술을 포함한 다수의 치료 선택권에도 불구하고, 실명은 여전히 주된 우려로 남아있다. 원발성 개방각녹내장(POAG)은 미국에서 가장 흔한 형태의 녹내장이다. 전세계적으로, 2000년도에 POAG 환자의 수는 거의 6680만 명으로 추정되었으며 이 중 670만명이 양쪽 실명을 가졌다(문헌[Quingley, Br J Ophthalmol. 1996 May; 80(5): 389-393]을 참조하시오).
백내장 수술은 가장 흔한 안과 수술적 시술이다. 미국에서만, 3,000,000건 이하의 백내장 수술이 매년 시행되고 있다. 미국 정부는 현재 매년 미화 3조 이상을 백내장의 치료에 쓰고 있다(의료보험 환자만). 눈의 수정체가 상기 시술에 의해 제거되고, 인공수정체가 이식된다. 상기 수정체낭은 원위치에 남아있으며, 상기 낭의 후방 부분은 기계적 파열 및 수정체 교체와 관련된 다른 인자들로 인해 후낭혼탁(PCO)을 빈번히 나타낸다. 이러한 상태는 PCO 환자의 20 내지 40%에서 발생하며, 상기 혼탁을 제거하기 위해서 처음 2년 내에 YAG-레이저 후부피막절제술(비율은 나라, 사용되는 수정체 유형, 및 수술 숙련도에 따라 변한다)이 수행된다(문헌[Johansson B et al., Br J Ophthalmol (2010), 94, 450-455]; 문헌[Mathew RG et al., Ophthalmic Surg Lasers Imaging (2010), 41, 651-655]을 참조하시오). 상기 YAG-레이저의 사용은 망막 분리(1-3%), 포낭황반부종(5% 이하) 및 2차 녹내장을 포함한 명백한 위험성과 관련된다(문헌[Billotte C and Berdeaux G, J Cataract Refract Surg (2004), 30(10), 2064-2071]을 참조하시오).
TGF-베타는 GCM 및 PCO 모두의 병태생리학과 밀접하게 관련되었으며; 지금까지, 상기 TGF-베타 단백질의 영향을, 예를 들어 WO 2009/146408에 개시된 바와 같이 ALK5 억제제에 의해서, 또는 TGF-베타에 대한 항체들, 즉 그의 동형들 중 하나에 의해서(예를 들어 WO 2012/167143에 개시되어 있다) 억제하여 왔다. 지금까지 이들 화합물 중 어느 것도 눈에서 TGF-베타의 유효한 억제에 성공하지 못했으며, 따라서 GCM 또는 PCO와 같은 안과 질환의 예방 및/또는 치료에 성공적이지 못했다.
본 발명의 목적은 어떠한 (심한) 부작용도 유발하지 않으면서 TGF-베타1, TGF-베타2, 및/또는 TGF-베타3 mRNA, TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타3 mRNA, 또는 TGF-베타2 및 TGF-베타3 mRNA의 발현을 특이적으로 억제하고 결과적으로 안과 질환의 예방 및/또는 치료에 사용하기에 매우 효율적인 올리고뉴클레오타이드, 바람직하게는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 제공하는 것이다.
본 발명은 안과 질환, 예를 들어 안구 건조증, 녹내장 또는 후낭 혼탁의 치료 방법에 사용하기 위한 TGF-베타 올리고뉴클레오타이드, 바람직하게는 TGF-베타1, TGF-베타2, 및/또는 TGF-베타3 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도에 관한 것이다.
TGF-베타 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 1의 TGF-베타1 핵산 서열(도 1 참조), 또는 서열번호 2의 TGF-베타2 핵산 서열(도 2 참조), 또는 서열번호 3의 TGF-베타3 핵산 서열(도 3 참조)의 10 내지 20, 바람직하게는 12 내지 18 뉴클레오타이드들로 이루어지며, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)가 변형된다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 중 일부는 TGF-베타1, TGF-베타2, 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타2, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타2 및 TGF-베타3에 상응하며, 이들 서열 중 하나 이상과 하이브리드화한다.
특히, 본 발명에 사용하기 위한 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 2의 1380 내지 1510번 핵산 영역의 10 내지 20, 보다 바람직하게는 12 내지 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어지며, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)는 변형된다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타2 발현 및 활성의 감소 및 억제에 매우 유효하다. 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 5 (예를 들어 ASPH36: GACCAGATGCAGGA) , 서열번호 6 (예를 들어 ASPH80: GCGACCGTGACCAGAT), 서열번호 7 (예를 들어 ASPH98: GCGCGACCGTGACC), 서열번호 8 (예를 들어 ASPH111: AGCGCGACCGTGA), 또는 서열번호 9 (예를 들어 ASPH121 또는 ASPH153: GACCGTGACCAGAT) , 서열번호 10 (예를 들어 ASPH15: CTGCCCGCGGAT), 서열번호 11 (예를 들어 ASPH17: TCTGCCCGCGGAT), 서열번호 12 (예를 들어 ASPH26 또는 ASPH27: GGATCTGCCCGCGGA), 서열번호 13 (예를 들어 ASPH37: CTTGCTCAGGATCTGCC), 서열번호 14 (예를 들어 ASPH52 또는 53: GCTCAGGATCTGCCCGCGGA), 서열번호 15 (예를 들어 ASPH112: GGATCGCCTCGAT), 서열번호 16 (예를 들어 ASPH119: CCGCGGATCGCC), 또는 서열번호 34 (예를 들어 ASPH30: CGATCCTCTTGCGCAT)를 포함하거나 또는 이들로 이루어진다.
또 다른 실시태양에서 본 발명은 서열번호 2의 TGF-베타2 핵산 서열의 2740 내지 2810번 핵산 영역의 10 내지 20, 보다 바람직하게는 12 내지 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이며, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)는 변형된다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타2 발현 및 활성의 감소 및 억제에 매우 유효하다. 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 60 (예를 들어 ASPH65: TCTGAACTAGTACCGCC), 서열번호 76 (예를 들어 ASPH82: AACTAGTACCGCCTTT), 또는 서열번호 106 (예를 들어 ASPH115: CTAGTACCGCCTT)을 포함하거나 또는 이들로 이루어진다.
추가의 실시태양에서 본 발명은 서열번호 2의 TGF-베타2 핵산 서열의 1660 내지 1680번 핵산 영역의 10 내지 20, 보다 바람직하게는 12 내지 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이며, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)는 변형된다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타1 및/또는 TGF-베타2 발현 및 활성의 감소 및 억제에 매우 유효하다. 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 17 (예를 들어 ASHP01 또는 ASPH02: ACCTCCTTGGCGTAGTA), 서열번호 18 (예를 들어 ASPH03 또는 ASPH04: CCTCCTTGGCGTAGTA), 서열번호 19 (예를 들어 ASPH05, ASPH06, 또는 ASPH07: CTCCTTGGCGTAGTA), 또는 서열번호 20 (예를 들어 ASPH08: TCCTTGGCGTAGTA)을 포함하거나 또는 이들로 이루어진다.
또 다른 실시태양에서 본 발명은 서열번호 2의 TGF-베타2 핵산 서열의 2390 내지 2410번 핵산 영역의 10 내지 20, 보다 바람직하게는 12 내지 18 뉴클레오타이드, 가장 바람직하게는 13 뉴클레오타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이며, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)는 변형된다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타1, TGF-베타2 및/또는 TGF-베타3 발현 및 활성의 감소 및 억제에 매우 유효하다. 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 21(예를 들어 ASPH9 또는 ASPH10: CAGAAGTTGGCAT)을 포함하거나 또는 상기로 이루어진다.
또 다른 실시태양에서 본 발명은 서열번호 2의 TGF-베타2 핵산 서열의 10 내지 20, 보다 바람직하게는 12 내지 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어지는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이며, 여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)는 변형된다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타1, TGF-베타2 및/또는 TGF-베타3, 가장 바람직하게는 TGF-베타2 발현 및 활성의 감소 및 억제에 매우 유효하다. 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 22 내지 59, 61 내지 75, 77 내지 105, 107 내지 140 중 하나(예를 들어 ASHP11-ASPH14, ASPH16, ASPH18-ASPH25, ASPH28-ASPH35, ASPH38-ASPH51, ASPH60-ASPH64, ASPH66-ASPH79, ASPH81, ASPH83-ASPH97, ASPH99-ASPH110, ASPH113, ASPH114, ASPH116-ASPH118, ASPH120, ASPH122-ASPH152, ASPH154-ASPH183, 또는 T-LNA (서열번호 144))를 포함하거나 또는 상기로 이루어진다.
본 발명의 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 각각 ASPH01, ASPH03, ASPH05, ASPH17, ASPH22, ASPH26, ASPH27, ASPH35, ASPH36, ASPH37, ASPH45, ASPH47, ASPH48, ASPH65, ASPH69, ASPH71, ASPH80, ASPH82, ASPH98, ASPH105, ASPH115, ASPH190, ASPH191, ASPH192, 및 ASPH193이다.
본 발명의 추가의 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 표 1에 나타낸 바와 같은 ASPH1000 내지 ASPH1132이며, 이들은 바람직하게는 TGF베타1 mRNA의 발현 및/또는 활성을 억제한다. 상기 군의 바람직한 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 각각 ASPH1047, ASPH1051, ASPH1059, ASPH1106, ASPH1139, ASPH1150, ASPH1162, ASPH1163, ASPH1175, ASPH1178, 및 ASPH1181이다.
또 다른 실시태양에서 올리고뉴클레오타이드는 바람직하게는 TGF-베타3 mRNA의 발현 및/또는 활성을 억제한다. 상기와 같은 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 각각 ASPH2000, ASPH2001, ASPH2002, ASPH2003, ASPH2004, ASPH2005, ASPH2006, ASPH2007, ASPH2008, ASPH2009, ASPH2010, ASPH2011, ASPH2012, ASPH2013, ASPH2014, ASPH2015, ASPH2016, ASPH2017, ASPH2018, ASPH2019, ASPH2020, ASPH2021, ASPH2022, ASPH2023, ASPH2024, ASPH2025, ASPH2026, ASPH2027, ASPH2028, ASPH2029, ASPH2030, ASPH2031, ASPH2032, ASPH2033, ASPH2034, ASPH2035, ASPH2036, ASPH2037, ASPH2038, ASPH2039, ASPH2040, ASPH2041, ASPH2042, ASPH2043, ASPH2044, ASPH2045, ASPH2046, ASPH2047, ASPH2048, ASPH2049, ASPH2050, ASPH2051, ASPH2052, ASPH2053, ASPH2054, ASPH2055, ASPH2056, ASPH2057, ASPH2058, ASPH2059, ASPH2060, ASPH2061, ASPH2062, ASPH2063, ASPH2064, ASPH2065, 및 ASPH2066이다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1, TGF-베타2, 또는 TGF-베타3, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타2의 뜻밖의 강하고 특이적인 억제를 나타낸다. 한편으로, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타2, 또는 TGF-베타2 및 TGF-베타3, 및 추가로 또 다른 TGF-베타1, TGF-베타2, 또는 TGF-베타3의 강하고 특이적인 억제를 나타낸다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드 중 하나 이상의 뉴클레오타이드의 변형은 LNA, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드, 예를 들어 트라이에틸렌 글리콜(TEG), 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및 2'-O-메틸로 이루어지는 군 중에서 선택된다. 상기 변형은 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및/또는 3'-단부에 위치한다. 상기와 같은 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다.
변형된 뉴클레오타이드들은 예를 들어 일렬로, 하나를 다른 하나의 바로 옆에, 또는 상이한 패턴(여기에서 하나 이상의 변형되지 않은 뉴클레오타이드가 변형된 뉴클레오타이드 다음에 온다)으로 배열된다. 예를 들어 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드로 시작한 다음, 하나 이상, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4개의 변형되지 않은 또는 잠기지 않은(unlocked) 뉴클레오타이드가 오고, 다시 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드가 온다. 하나의 실시태양에서 상기 올리고뉴클레오타이드의 양쪽 단부는 동일한 패턴의 변형된 및 변형되지 않거나 잠기지 않은 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 3'- 및 5'-단부에서의 변형 패턴은, 하나의 단부가 변형된 뉴클레오타이드를 포함하지 않음을 포함하여 상이하다. 바람직하게 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 일련의 8 또는 9개의 잠기지 않은 뉴클레오타이드를 포함한다.
한편으로, 상기 올리고뉴클레오타이드 중 임의의 다른 위치에서 뉴클레오타이드가 변형되거나, 또는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및/또는 3'-단부 및 상기 올리고뉴클레오타이드 중 임의의 다른 위치에서 하나 이상의 뉴클레오타이드가 변형된다. 예를 들어 ASPH1071, ASPH1100, ASPH1109, ASPH 1110, ASPHllll, ASPH1115, ASPH1126, ASPH1127 및 ASPH1128은 TGF-베타 올리고뉴클레오타이드의 한 군, 예를 들어 LNA, ENA 등과 같은 변형된 뉴클레오사이드를 상이한 패턴으로, 예를 들어 잠기지 않은 뉴클레오타이드에 의해 서로 분리된 패턴으로 포함하는 TGF-베타1 올리고뉴클레오타이드에 속한다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 어느 한 유형의 변형, 또는 하나 이상의 상이한 변형들을 포함한다. 임의로, 상기 올리고뉴클레오타이드의 2개의 연속적인 뉴클레오타이드(변형되거나 변형되지 않은) 간의 하나 이상의 포스페이트 결합은 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트이다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 포스포로티오에이트이다.
더욱이, 본 발명은 하나 초과의 TGF-베타 동형(비록 올리고뉴클레오타이드가 TGF-베타1, TGF-베타2 및/또는 TGF-베타3 서열에 100% 상동성은 아니라 하더라도)과 상호작용하고 그들의 발현을 억제하는 TGF-베타 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 상기와 같은 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 각각 ASPH1024, ASPH1096, ASPH1131 및 ASPH1132이다. 이들 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 각각 ASPH1131 및 ASPH1132로서 바람직하게는 동일하거나 또는 상이한 종들, 예를 들어 인간, 원숭이, 래트 및 마우스의 TGF-베타 서열과 상호작용한다.
상기 상이한 실시태양들의 올리고뉴클레오타이드는 모두 안과 질환, 예를 들어 안구 건조증, 녹내장, 후낭 혼탁(PCO), 망막모세포종, 맥락막암종, 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군, 황반변성, 예를 들어 나이-관련 황반변성, 당뇨성 황반부종 또는 백내장의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 것이다.
도 1은 인간 TGF-베타1 mRNA(NM_000660.4)의 핵산 서열을 나타낸다.
도 2는 인간 TGF-베타2 mRNA(NM_003238.3)의 핵산 서열을 나타낸다.
도 3은 인간 TGF-베타3 mRNA(NM_003239.2)의 핵산 서열을 나타낸다.
도 4는 뉴클레오타이드 변형들의 예를 나타낸다.
도 5a) 내지 5c)는 인간 A172 신경교종 세포에서 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. A172 세포는 10 nM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었으며(형질감염제의 존재하에서) TGF-베타1(흰색 컬럼) 및 TGF-베타2(검은색 컬럼) mRNA 발현의 억제가 형질감염 후 24시간째에 측정되었다. 도 5a)는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH01, ASPH02, ASPH03, ASPH04, ASPH05, ASPH06, ASPH07, ASPH08, ASPH09, ASPH10, ASPH11, ASPH12, ASPH13, ASPH14, ASPH15, ASPH16, ASPH17, ASPH18, ASPH19, ASPH20, ASPH21, ASPH22, ASPH24, ASPH25, ASPH26, ASPH27, ASPH29, ASPH30, ASPH31, ASPH32, ASPH33, ASPH34, ASPH35, ASPH36, ASPH37, ASPH38, ASPH39, ASPH40, ASPH41, ASPH42, ASPH43, ASPH44, ASPH45, ASPH46, ASPH47, ASPH48, ASPH49, ASPH50, ASPH51, ASPH52, ASPH53, 및 ASPH54에 대한 결과에 관한 것이고; 도 5b)는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH36, ASPH60, ASPH61, ASPH62, ASPH63, ASPH64, ASPH65, ASPH66, ASPH67, ASPH68, ASPH69, ASPH70, ASPH71, ASPH72, ASPH73, ASPH74, ASPH75, ASPH76, ASPH77, ASPH78, ASPH79, ASPH80, ASPH81, ASPH82, ASPH83, ASPH84, ASPH85, ASPH86, ASPH87, ASPH88, ASPH89, ASPH90, ASPH91, ASPH92, ASPH93, ASPH94, ASPH95, ASPH96, ASPH97, ASPH98, ASPH99, ASPH100, ASPH101, ASPH102, ASPH103, ASPH104, ASPH105, ASPH106, ASPH107, ASPH108, ASPH109, ASPH110, ASPH111, ASPH112, ASPH113, ASPH114, ASPH115, ASPH116, ASPH117, ASPH118, 및 ASPH119에 대한 결과에 관한 것이며; 도 5c)는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH36, ASPH71, ASPH73, ASPH120, ASPH121, ASPH122, ASPH123, ASPH124, ASPH125, ASPH126, ASPH127, ASPH128, ASPH129, ASPH130, ASPH131, ASPH132, ASPH133, ASPH134, ASPH135, ASPH136, ASPH137, ASPH138, ASPH139, ASPH140, ASPH141, ASPH142, ASPH143, ASPH145, ASPH146, ASPH147, ASPH148, ASPH149, ASPH150, ASPH151, ASPH152, ASPH153, ASPH154, ASPH155, ASPH157, ASPH158, ASPH160, ASPH161, ASPH162, ASPH163, ASPH164, ASPH165, ASPH166, ASPH167, ASPH168, ASPH169, ASPH170, ASPH171, ASPH172, ASPH173, ASPH174, ASPH175, ASPH176, ASPH177, ASPH178, ASPH179, ASPH180, ASPH181, ASPH182, 및 ASPH183에 대한 결과에 관한 것이다. 실험들은 실시예 1에 개시되어 있다.
도 6a) 내지 6c)는 인간 Panc-1 췌장암 세포에서 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포는 10 nM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었으며(형질감염제의 존재하에서) TGF-베타1(흰색 컬럼) 및 TGF-베타2(검은색 컬럼) mRNA 발현의 억제가 형질감염 후 24시간째에 측정되었다. 도 6a)는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH01, ASPH02, ASPH03, ASPH04, ASPH05, ASPH06, ASPH07, ASPH08, ASPH12, ASPH14, ASPH17, ASPH18, ASPH20, ASPH21, ASPH22, ASPH24, ASPH25, ASPH26, ASPH27, ASPH29, ASPH30, ASPH31, ASPH32, ASPH33, ASPH35, ASPH36, ASPH37, ASPH38, ASPH39, ASPH40, ASPH41, ASPH42, ASPH43, ASPH44, ASPH45, ASPH46, ASPH47, ASPH48, ASPH49, ASPH50, ASPH51, 및 ASPH52에 대한 결과에 관한 것이고; 도 6b)는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH36, ASPH60, ASPH61, ASPH62, ASPH63, ASPH64, ASPH65, ASPH66, ASPH67, ASPH68, ASPH69, ASPH70, ASPH71, ASPH72, ASPH73, ASPH74, ASPH75, ASPH76, ASPH77, ASPH78, ASPH79, ASPH80, ASPH81, ASPH82, ASPH83, ASPH84, ASPH85, ASPH86, ASPH87, ASPH88, ASPH89, ASPH90, ASPH91, ASPH92, ASPH93, ASPH94, ASPH96, ASPH97, ASPH98, ASPH99, ASPH100, ASPH101, ASPH102, ASPH103, ASPH104, ASPH105, ASPH106, ASPH107, ASPH108, ASPH109, ASPH110, ASPHlll, ASPH112, ASPH113, ASPH114, ASPH115, ASPH116, ASPH117, ASPH118, 및 ASPH119에 대한 결과에 관한 것이고; 도 6c)는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH36, ASPH71, ASPH73, ASPH120, ASPH121, ASPH122, ASPH127, ASPH128, ASPH129, ASPH130, ASPH131, ASPH132, ASPH133, ASPH135, ASPH136, ASPH137, ASPH139, ASPH141, ASPH142, ASPH143, ASPH145, ASPH146, ASPH147, ASPH149, ASPH150, ASPH151, ASPH152, ASPH153, ASPH154, ASPH155, ASPH157, ASPH160, ASPH161, ASPH162, ASPH163, ASPH164, ASPH165, ASPH166, ASPH167, ASPH168, ASPH169, ASPH170, ASPH171, ASPH172, ASPH173, ASPH174, ASPH175, ASPH176, ASPH177, ASPH178, ASPH179, ASPH180, ASPH181, ASPH182, 및 ASPH183에 대한 결과에 관한 것이다. 실험들은 실시예 2에 개시되어 있다.
도 7은 Panc-1 세포에서 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포는 임의의 형질감염 시약의 부재하에서(짐노틱(gymnotic) 형질감염 또는 무지원 형질감염) 3.3 μM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리되었으며, TGF-베타1(흰색 컬럼) 및 TGF-베타2(검은색 컬럼) mRNA 발현의 억제가 72시간 후에 측정되었다. 도 7은 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH17, ASPH18, ASPH22, ASPH25, ASPH33, ASPH35, ASPH36, ASPH41, ASPH42, ASPH45, ASPH46, ASPH47, ASPH48, ASPH49, ASPH65, ASPH66, ASPH67, ASPH69, ASPH71, ASPH79, ASPH80, ASPH82, ASPH88, ASPH89, ASPH90, ASPH91, ASPH98, ASPH99, ASPH102, ASPH105, ASPHlll, ASPH115, ASPH119, ASPH121, ASPH139, ASPH140, ASPH146, ASPH151, ASPH153, ASPH165, ASPH171, ASPH172, ASPH176, ASPH178, ASPH180, 및 ASPH183에 대한 결과를 나타낸다. 실험들은 실시예 4에 개시되어 있다.
도 8 및 9는 Panc-1 세포에서 TGF-베타1(도 8a) 및 TGF-베타2(도 8b) mRNA의 발현의 억제뿐만 아니라 TGF-베타1(도 9a) 및 TGF-베타2(도 9b) 단백질의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포는 짐노틱 형질감염을 통해, 즉 임의의 형질감염 시약의 부재하에서 10 μM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리되었으며, TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 발현 및 단백질의 억제가 형질감염 후 4일째에 측정되었다. 도 8a) 및 도 8b)는 mRNA 수준(도 9a) 및 단백질(도 9b) 수준에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPHOl, ASPH03, ASPH05, ASPH09, ASPH17, ASPH18, ASPH22, ASPH35, ASPH36, ASPH37, ASPH41, ASPH45, ASPH46, ASPH47, 및 ASPH48의 결과를 나타낸다. 실험들은 실시예 5에 개시되어 있다.
도 10은 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 발현에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH05 및 ASPH36의 용량-의존적인 효과를 나타낸다. Panc-1 세포는 형질감염 시약의 부재하에서 15 μΜ, 10 μΜ, 7.5 μΜ, 5 μΜ, 2.5 μΜ, 1.25 μΜ, 또는 0.625 μΜ의 ASPH05(이중 TGF-베타1 및 TGF-베타2 올리고뉴클레오타이드) 또는 ASPH36(선택성 TGF-베타2 올리고뉴클레오타이드) 변형된 올리고뉴클레오타이드로 4일 동안 처리되었다. 남아있는 TGF-베타1(도 10a) 또는 TGF-베타2 mRNA(도 10b)가 4일 후에 측정되었다. 실험들은 실시예 6에 개시되어 있다.
도 11은 마우스 SMA-560 신경교종 세포에서 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. SMA-560 세포는 10 nM 용량의 ASPHOl, ASPH03, ASPH05, ASPH09, ASPH17, ASPH18, ASPH22, ASPH26, ASPH36, ASPH37, ASPH41, ASPH42, ASPH45, ASPH46, ASPH47, 또는 ASPH48로 형질감염되었다(형질감염제의 존재하에서). 마우스 TGF-베타1(흰색 컬럼) 및 TGF-베타2(검은색 컬럼) mRNA 발현의 억제가 형질감염 후 24시간째에 측정되었다. 실험들은 실시예 7에 개시되어 있다.
도 12는 5일 연속해서 피하 주사에 의해 14 ㎎/㎏ 체중의 ASPHOl, ASPH03, ASPH05, ASPH17, ASPH22, ASPH37, ASPH41, ASPH45, ASPH46, ASPH47, 또는 ASPH48로 처리한 암컷 흉선제거 누드 마우스에 관한 생체내 데이터를 나타낸다. 최종 처리 후 24시간째에, 마우스를 죽이고 마우스 TGF-베타2 mRNA가 신장 조직 용해물 중에서 정량분석되었다. 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를, ASPH46 군 n=3을 제외하고, n=4로서 나타내었다). 실험들은 실시예 8에 개시되어 있다.
도 13은 Panc-1 세포에서 TGF-베타3 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포는 임의의 형질감염 시약의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 무지원 형질감염) 10 μM의 용량의 ASPH09로 처리되었으며, TGF-베타3 mRNA 발현의 억제가 4일 후에 측정되었다. ASPH09는 TGF-베타3뿐만 아니라 TGF-베타1 및 TGF-베타2(도 8a 및 8b)의 발현을 억제하는 범특이성 올리고뉴클레오타이드이다. 실험들은 실시예 9에 개시되어 있다.
도 14는 인간 Panc-1 췌장암 세포에서 TGF-베타1 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포는 10 nM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었으며(형질감염제의 존재하에서) TGF-베타1 mRNA 발현의 억제를 형질감염 후 24시간째에 측정하였다. 도 14는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH05, ASPH09, ASPH1000, ASPH1001, ASPH1002, ASPH1003, ASPH1004, ASPH1005, ASPH1006, ASPH 1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPHIOIO, ASPHlOll, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1016, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1023, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1030, ASPH1031, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035,ASPH1036, ASPH 1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1048, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1054, ASPH1055, ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, 및 ASPH1061에 대한 결과에 관한 것이다. 실험들은 실시예 12에 개시되어 있다.
도 15는 마우스 SMA-560 신경교종 세포에서 TGF-베타1 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. 상기 세포는 10 nM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었으며(형질감염제의 존재하에서) TGF-베타1 mRNA 발현의 억제가 형질감염 후 24시간째에 측정되었다. 도 15는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH09, ASPH1000, ASPH1001, ASPH1002, ASPH1003, ASPH1004, ASPH1005, ASPH1006, ASPH1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPH1010, ASPH1011, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1016, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH 1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1023, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1030, ASPH1031, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035, ASPH1036, ASPH1037, ASPH1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1048, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1053, ASPH1054, ASPH1055, ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, ASPH1061, 및 ASPH1062에 대한 결과에 관한 것이다. 실험들은 실시예 13에 개시되어 있다.
도 16은 인간 A172 세포에서 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. 상기 세포는 10 nM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었으며(형질감염제의 존재하에서) 상기 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 발현의 억제가 형질감염 후 24시간째에 측정되었다. 도 16은 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH05, ASPH09, ASPH1000, ASPH1001, ASPH1002, ASPH1004, ASPH1005, ASPH1006, ASPH1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPH1010, ASPH1011, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1016, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1023, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1030, ASPH1031, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035, ASPH1036, ASPH1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1048, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1053, ASPH1054, ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, ASPH1061, 및 ASPH1062에 대한 결과에 관한 것이다. 실험들은 실시예 14에 개시되어 있다.
도 17은 Panc-1 세포에서 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 세포는 임의의 형질감염 시약의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 무지원 형질감염 또는 짐노틱 전달) 3.3 μM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리되었으며, 상기 TGF-베타1(검은색 컬럼) 및 TGF-베타2(흰색 컬럼) mRNA 발현의 억제가 72시간 후에 측정되었다. 도 17은 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH05, ASPH09, ASPH1000, ASPH1001, ASPH1002, ASPH1004, ASPH1006, ASPH1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPH1010, ASPH1011, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035, ASPH1036, ASPH1037, ASPH1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1053, ASPH1054, ASPH1055, ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, ASPH1061, 및 ASPH1062에 대한 결과에 관한 것이다. 실험들은 실시예 15에 개시되어 있다.
도 18은 인간 A172 세포에서 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. 상기 세포는 10 nM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었으며(형질감염제의 존재하에서) 상기 TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA 발현의 억제가 형질감염 후 24시간째에 측정되었다. 도 18은 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH09, ASPH1047, ASPH1051, ASPH1059, ASPH1063, ASPH1064, ASPH1065, ASPH1066, ASPH1067, ASPH1068, ASPH1069, ASPH1070, ASPH1071, ASPH1072, ASPH1073, ASPH1074, ASPH1075, ASPH1076, ASPH1077, ASPH1078, ASPH1079, ASPH1080, ASPH1081, ASPH1082, ASPH1083, ASPH1084, ASPH1085, ASPH1086, ASPH1087, ASPH1088, ASPH1089, ASPH1090, ASPH1091, ASPH1092, ASPH1093, ASPH1094, ASPH1095, ASPH1097, ASPH1098, ASPH1099,ASPH1100, ASPH1101, ASPH1102, ASPH1103, ASPH1104, ASPH1105, ASPH1106, ASPH1107, ASPH1108, ASPH1109, ASPH1110, ASPH1111, ASPH1112, ASPH1113, ASPH114, ASPH1115, ASPH1116, ASPH1117, ASPH1118, ASPH1119, ASPH1120, ASPH1121, ASPH1122, ASPH1123, ASPH1124, ASPH1125, ASPH1126, ASPH1127, ASPH1128, ASPH1129, ASPH1130, ASPH1131, 및 ASPH1132에 대한 결과에 관한 것이다. 실험들은 실시예 16에 개시되어 있다.
도 19a는 인간 Panc-1 및 RenCa 세포에서 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. 상기 세포들은 임의의 형질감염 시약의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 무지원 형질감염 또는 짐노틱 전달) 3.3 μM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리되었으며, 상기 TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA 발현의 억제가 형질감염 후 72시간째에 측정되었다. 도 19a는 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH1063, ASPH1064, ASPH1065, ASPH1066, ASPH1067, ASPH1068, ASPH1069, ASPH1070, ASPH1071, ASPH1072, ASPH1073, ASPH1074, ASPH1075, ASPH1076, ASPH1077, ASPH1078, ASPH1079, ASPH1080, ASPH1081, ASPH1082, ASPH1083, ASPH1084, ASPH1085, ASPH1086, ASPH1087, ASPH1088, ASPH1089, ASPH1090, ASPH1091, ASPH1092, ASPH1093, ASPH1094, ASPH1095, ASPH1097, ASPH1098, ASPH1099,ASPH1100, ASPH1101, ASPH1102, ASPH1103, ASPH1104, ASPH1105, ASPH1106, ASPH1107, ASPH1108, ASPH1109, ASPH1110, ASPH1111, ASPH1112, ASPH1113, ASPH114, ASPH1115, ASPH1116, ASPH1117, ASPH1118, ASPH1119, ASPH1120, ASPH1121, ASPH1122, ASPH1123, ASPH1124, ASPH1125, ASPH1126, ASPH1127, ASPH1128, ASPH1129, ASPH1130, ASPH1131, 및 ASPH1132에 대한 결과에 관한 것이다. 도 19b는 RenCa 세포에서 이들 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타낸다.
도 20은 TGF-베타2 및 TGF-베타3 각각의 인간 서열과, TGF-베타1의 인간 서열에 100% 상동성인 ASPH1024 및 ASPH1096의 서열 정렬을 나타낸다. ASPH1024는 TGF-베타2의 인간 서열과 3개의 불합치(도 20a) 및 TGF-베타3의 인간 서열과 2개의 불합치(도 20b)를 갖는다. ASPH1096은 TGF-베타2의 인간 서열과 하나의 불합치(도 20a) 및 TGF-베타3의 인간 서열과 하나의 불합치(도 20b)를 갖는다. 상기 두 올리고뉴클레오타이드는 모두 상이한 인간 TGF-베타 동형들(TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3)의 억제를 나타낸다. 예를 들어 ASPH1024는 TGF-베타1 및 TGF-베타2의 발현 및 활성을 억제하고(도 17을 참조하시오) ASPH1096은 예를 들어 도 18에 나타낸 바와 같이 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3의 발현 및 활성을 억제한다. TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3의 인간 서열과 100% 상동성인 ASPH009가 대조군으로서 사용되었다.
도 21은 TGF-베타2의 인간 서열과, TGF-베타1 및 TGFβ베타3의 인간 서열에 100% 상동성인 ASPH1131 및 ASPH1132의 서열 정렬을 나타낸다. ASPH1131 및 ASPH1132는 각각 TGF-베타2의 인간 서열과 하나의 불합치를 갖는다. 상기 두 올리고뉴클레오타이드는 모두 예를 들어 도 18에 나타낸 바와 같이 3개의 인간 동형 모두의 발현을 강하게 억제한다.
도 22는 TGF-베타2의 쥐 서열과, TGF-베타1 및 TGF베타3의 쥐 서열에 100% 상동성인 ASPH1131 및 ASPH1132의 서열 정렬을 나타낸다. ASPH1131 및 ASPH1132는 각각 TGF-베타2의 쥐 서열과 2개의 불합치를 갖는다. ASPH1131은 예를 들어 도 19b에 나타낸 바와 같이 쥐 TGF-베타2 및 TGF-베타3을 효능 있게 억제하는 반면, ASPH1132는 모든 쥐 TGF-베타 동형들을 매우 효능 있게 억제한다.
도 23은 피하 인간 췌장 암종 Panc-1 종양을 갖는 마우스의 신장에서 TGF-베타2 mRNA 발현을 나타낸다. 마우스는 5일 동안 지시된 처리 스케줄: Q1Dx1-d6(단일 SC 주사, 5일 후에 종료), Q1Dx5-d6(5일 동안 매일 SC 주사, 24시간 후에 종료), 및 Q1Dx5-d10(5일 동안 매일 SC 주사, 5일 후에 종료) 후에 1, 3, 10 및 30 ㎎/㎏의 ASPH47로 처리되었다. TGF-베타2 및 하우스-키핑 유전자 GAPDH mRNA 발현이 bDNA 분석에 의해 검출되었다. 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에서 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를 비히클 및 3 ㎎/㎏ Q1Dx1 d6 군에 대한 n=9를 제외하고 n=10으로서 나타낸다).
도 24는 인간 췌장 암종 Panc-1 종양을 갖는 마우스의 신장에서 TGF-베타2 mRNA 발현을 나타낸다. 마우스는 5일 동안 연속해서 지시된 처리 용량: 5일 동안 연속해서 1, 5, 15 또는 50 ㎎/㎏ 올리고뉴클레오타이드의 매일 주사를 사용하여 다양한 올리고뉴클레오타이드의 피하 주사로 처리되었다. TGF-베타2 및 하우스-키핑 유전자 GAPDH mRNA 발현이 bDNA에 의해 검출되었다. 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에서 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를 n=5로서 나타낸다).
도 25는 피하 인간 신세포 암종 786-O 종양에서 TGF-베타2 mRNA 발현을 나타낸다. 마우스는 5일 동안 연속해서 50 ㎎/㎏ 올리고뉴클레오타이드의 매일 주사로 처리되었다. 상기 종양을 최종 처리후 24시간째에 수거하고 급속 동결시켰다. TGF-베타2 및 하우스-키핑 유전자 GAPDH mRNA 발현이 bDNA 분석에 의해 검출되었다. 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에서 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를, ASPH71 군의 경우 n=9를 제외하고, n=10으로서 나타낸다).
도 26은 TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질의 발현에 대한 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타낸다. Panc-1 세포는 20, 6.67, 2.22, 0.74, 0.25, 0.08 또는 0.009 μΜ의 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH47(도 26a), ASPH1047(도 26b), ASPH1106(도 26c), ASPH1132(도 26d), 또는 ASPH1047과 함께 ASPH47(도 26e)로 형질감염되었다. 음성 대조군은 40, 13.33, 4.44, 1.48, 0.49, 0.16, 0.05, 또는 0.02 μΜ 농도의 서열번호 145의 스크램블드(scrambled) 올리고뉴클레오타이드(scrLNA)(도 26f)이다. 세포 상등액 중의 TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질 수준이 ELISA에 의해 측정되었으며, 여기에서 TGF-베타1에 대한 결과를 다이아몬드 모양으로 나타내고, TGF-베타2에 대한 결과는 사각형으로 나타낸다.
도 27은 인간 Panc-1 세포 및 마우스 RenCa 세포에서 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 mRNA의 발현의 억제를 나타낸다. Panc-1 및 RenCa 세포는 임의의 형질감염 시약의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 무지원 형질감염 또는 짐노틱 전달) 1.1 μM 용량의 상이한 변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리되었으며, TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA 발현의 억제가 72시간 후에 측정되었다. 도 27은 각각 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH190, ASPH191, ASPH192, ASPH193, ASPH194, ASPH195, ASPH196, ASPH197, ASPH198, ASPH199, ASPH200, ASPH201, ASPH202, ASPH203, ASPH204, ASPH205, ASPH206, ASPH207, ASPH208, ASPH209, ASPH210, ASPH211, ASPH212, ASPH213, ASPH214, ASPH215, ASPH216, ASPH217, ASPH218, ASPH219, ASPH220, ASPH221, ASPH222, 및 ASPH223에 대한 결과에 관한 것이다. 도 27a는 Panc-1 세포에서 상기 TGF-베타 올리고뉴클레오타이드들의 억제 효과를 나타내고 도 27b는 RenCa 세포에서의 효과를 나타낸다.
도 28은 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3의 발현에 대한 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타낸다. Panc-1 세포(도 28a) 또는 RenCa 세포(도 28b)는 형질감염제의 부재하에서 3.3 μM의 상이한 TGF-베타 특이성 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었다. TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현이 형질감염 후 72시간째에 측정되었다.
도 29는 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3의 발현에 대한 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 나타낸다. A172 신경교종 세포는 형질감염제의 존재하에서 10 nM의 상이한 TGF-베타 특이성 올리고뉴클레오타이드로 형질감염되었다. TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현이 형질감염 후 24시간째에 측정되었다.
도 30a 및 30b는 Balb/c 마우스에게 50 ㎎/㎏의 ASPH_0047의 1회 피하 일시주사 투여에 따른 시간-의존적인 혈장(30a) 및 신장(30b) 농도(PK 프로파일; ㎍/㎖ 또는 ㎍/g으로 나타낸 값)의 비교 분석 및 신장에서의 TGF-β2 mRNA(PD 프로파일)의 하향조절을 나타낸다.
도 31은 ASPH_0047 또는 대조용 올리고뉴클레오타이드의 피하 반복 투여에 따른 면역결핍 마우스의 확립된 피하 종양(도 31A-D) 또는 신장(도 31E-F)에서의 TFG-β2 mRNA 하향조절을 나타낸다. TGF-베타2 및 GAPDH mRNA 발현이 bDNA에 의해 검출되었다. 결과를 TGF-베타2/GAPDH mRNA 비로서 나타내며, 각각의 개별적인 시험 샘플을 중간값을 가리키는 라인으로 나타낸다.
도 32는 동소(orthotopic) 및 i.v. 마우스 Renca 신장 암종 모델에서 폐 전이에 대한 ASPH_0047(선택성 TGF-b2 안티센스 올리고뉴클레오타이드)에 의한 Balb/c 마우스의 전신 처리의 효과를 나타낸다. 폐 전이의 수준이 전이의 수 또는 폐 중량을 근거로 측정되었다. 결과를 박스 플롯으로 나타내며 여기에서 중간값, 상한 사분위수 및 하한 사분위수, 및 90번째 및 10번째 백분위수를 나타낸다.
도 33은 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 3.3 μM의 지시된 올리고뉴클레오타이드로 처리된 인간 Panc-1 췌장 암세포를 나타낸다. TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현이 형질감염 후 72시간째에 측정되었다.
도 34는 동소 마우스 4T1 유방 암종 모델에서 폐 전이에 대한 ASPH_0047에 의한 Balb/c 마우스의 전신 처리 효과를 나타낸다. 각 개별적인 동물에 대한 데이터를 진한 검은선으로 나타낸 중간값으로 나타낸다.
본 발명은 안과 질환, 예를 들어 안구 건조증, 녹내장, 후낭 혼탁, 망막모세포종 또는 맥락막암종의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한, 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고 TGF-베타 mRNA와 상호작용하기에 적합한 올리고뉴클레오타이드, 특히 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 2에 따른 TGF-베타2 핵산, 또는 서열번호 1에 따른 TGF-베타1 핵산, 또는 서열번호 3에 따른 TGF-베타3 핵산의 핵산 서열의 10 내지 20, 보다 바람직하게는 12 내지 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 또는 이들로 이루어진다. 가장 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오타이드는 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18 뉴클레오타이드를 포함하거나 이들로 이루어진다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 바람직하게는 서열번호 2의 1380 내지 1510번(바람직하게는 1380 내지 1450번 및/또는 1480 내지 1510번), 1660 내지 1680번, 및 2390 내지 2410번 핵산 영역 중에서 선택된다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 siRNA, 미세RNA, 앱타머 또는 스피겔머(spiegelmer)를 포함한 단일 또는 이중 가닥 RNA 또는 DNA이다. 바람직하게, 상기 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오타이드의 구성 블록을 형성하며, 예를 들어 핵염기(질소 염기, 예를 들어 퓨린 또는 피리미딘), 5-탄당(예를 들어 리보스, 2-데옥시리보스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스, 알로스, 알토스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스 또는 이들 당의 안정화된 변형), 및 하나 이상의 포스페이트 기로 구성된다. 변형된 포스페이트 기의 예는 포스포티오에이트 또는 메틸포스포네이트이다. 상기 뉴클레오타이드의 각 화합물은 변형가능하며, 천연 또는 비천연이다. 상기 비천연 화합물은 예를 들어 잠금 핵산(LNA), 2'-O,4'-C-에틸렌-가교 핵산(ENA), 폴리알킬렌 옥사이드-(예를 들어 트라이에틸렌 글리콜(TEG)), 2'-플루오로, 2'-O-메톡시 및 2'-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드(예를 들어 문헌[Freier & Altmann, Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443] 및 문헌[Uhlmann, Curr. Opinion in Drug & Development (2000, 3 (2): 293-213)]에 개시되어 있다)(이들을 도 4에 나타낸다)이다.
LNA는 변형된 RNA 뉴클레오타이드이며, 여기에서 리보스 부분이 2' 산소와 4' 탄소를 연결하는 여분의 가교로 변형된다(2'-4' 리보뉴클레오사이드). 상기 가교는 상기 리보스를, 종종 A형 듀플렉스에서 발견되는 3'-엔도(노쓰) 배치로 "잠근다". LNA 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 각각 예를 들어 알파-D- 또는 베타-L-배열의 티오-LNA, 옥시-LNA, 또는 아미노-LNA의 형태를 포함하며, 각각 상기 올리고뉴클레오타이드 중의 (변형되지 않은) DNA 또는 RNA 잔기와 혼합가능하고 조합가능하다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드, 즉 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및/또는 3'-단부에 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드, 바람직하게는 LNA 및/또는 ENA를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 5'-단부에 1, 2, 3 또는 4개의 LNA 또는 ENA, 및 3'-단부에 1, 2, 3 또는 4개의 LNA 또는 ENA를 포함한다. 또 다른 바람직한 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 5'-단부 또는 3'-단부에 1, 2, 3 또는 4개의 LNA 또는 ENA, 및 3'- 또는 5'-단부에 폴리알킬렌 옥사이드, 예를 들어 TEG를 포함한다. 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 각각 TGF-베타 발현 및 활성에 대해 현저하게 증가된 억제를 나타내며, 그 결과 악성 또는 양성 종양, 면역학적 질환, 섬유증, 눈병, 예를 들어 녹내장 또는 후낭 혼탁(PCO), CNS 질병, 탈모 등의 개선된 예방 및/또는 치료를 생성시킨다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타 mRNA, 바람직하게는 TGF-베타1, TGF-베타2, 또는 TGF-베타3, 한편으로, TGF-베타1, TGF-베타2 및/또는 TGF-베타3 mRNA, 즉 TGF-베타1 및 TGF-베타2, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타2 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 mRNA와의 하이브리드화에 의해서, 또는 상기 TGF-베타 시스템에 대한 임의의 다른 직접적인 또는 간접적인 영향에 의해서 TGF-베타 관련된 질병을 표적화한다. TGF-베타1, TGF-베타2, 및 TGF-베타3의 발현을 억제하는 올리고뉴클레오타이드를 범-특이성 올리고뉴클레오타이드라 정의한다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 안과 질환, 예를 들어 안구 건조증, 녹내장 또는 후낭 혼탁의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 것이다.
바람직하게 2개 이상의 올리고뉴클레오타이드를 병용하며, 여기에서 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하거나, 또는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3를 특이적으로 억제하거나, 또는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3을 특이적으로 억제하거나, 또는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하며, 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3을 특이적으로 억제한다.
또 다른 실시태양에서, 하나의 올리고뉴클레오타이드는 2개의 TGF-베타 동형들, 예를 들어 TGF-베타1 및 TGF-베타2, TGF-베타2 및 TGF-베타3, 또는 TGF-베타1 및 TGF-베타3를 억제한다. 3개의 동형, 즉 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 모두의 발현을 억제하는 올리고뉴클레오타이드를 범-특이성 올리고뉴클레오타이드로서 정의한다.
추가의 실시태양에서, 3개 이상의 올리고뉴클레오타이드를 병용하며, 여기에서 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1을 특이적으로 억제하고, 또 다른 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2를 특이적으로 억제하며, 추가의 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타3을 특이적으로 억제하고, 임의로 하나 이상의 추가적인 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1, TGF-베타2 또는 TGF-베타3, 및/또는 임의로 임의의 다른 인자를 억제한다.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 0.1 내지 20 μM 범위, 바람직하게는 0.2 내지 15 μM 범위, 보다 바람직하게는 0.4 내지 10 μM 범위, 및 훨씬 더 바람직하게는 0.5 내지 5 μM 범위의 IC50을 갖는다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 본 발명의 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드 및 임의로 추가로 안티센스 화합물, 항체, 화학요법 화합물, 소염 화합물, 항바이러스 화합물 및/또는 면역-조절 화합물을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 결합제 및 보조제는 임의로 상기 약학 조성물의 부분을 차지한다.
하나의 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드 및 약학 조성물을 각각 캡슐, 정제 및 환제 등의 형태의 투여량 단위로서 제형화하며, 이들은 각각 예를 들어 하기의 화합물들을 함유한다: 결합제로서 미정질 셀룰로스, 검 또는 젤라틴; 부형제로서 전분 또는 락토스; 윤활제로서 스테아레이트, 다양한 감미제 또는 풍미제. 캡슐의 경우 상기 투여량 단위는 지방 오일과 같은 액체 담체를 함유한다. 마찬가지로 당 코팅제 또는 장용 코팅제가 상기 투여량 단위의 부분일 수 있다.
바람직한 실시태양에서 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 상기와 같은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약학 조성물을 점안제 또는 안연고로서 제형화하며, 이들은 임의로 염료, 예를 들어 BBG, BBR, 또는 트리판블루, 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌글리콜(PEG), 바람직하게는 PEG200, PGE400 또는 PEG1000, 칼륨 또는 나트륨의 수소포스페이트를 포함한다.
상기 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물을 상이한 경로를 통해 투여할 수 있다. 이들 투여 경로는 비제한적으로 일렉트로포레이션, 표피, 피부내로의 압인, 동맥내, 관절내, 두개내, 피내, 병변내, 근육내, 비내, 안내, 전방내, 척추강내, 복강내, 전립선내, 폐내, 척수내, 기관내, 종양내, 정맥내, 방광내, 신체 강내 배치, 코 흡입, 경구, 폐 흡입(예를 들어 분무기를 포함하여, 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 흡취에 의해), 피하, 피부아래, 국소(눈 및 질 및 직장 전달을 포함한 점막 포함), 또는 경피를 포함한다.
비경구, 피하, 경피 또는 국소 투여의 경우, 상기 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물은 예를 들어 멸균 희석제, 완충제, 독성 조절제 및 항균제를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물을 신체로부터의 분해 또는 즉시 제거에 대해 보호하는 담체, 예를 들어 조절된 방출 성질을 갖는 이식물 또는 미세캡슐로 제조한다. 정맥내 투여의 경우, 바람직한 담체는 예를 들어 생리식염수 또는 포스페이트 완충된 염수이다. 경구 투여용으로 올리고뉴클레오타이드 및/또는 상기와 같은 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 조성물은 예를 들어 분말 또는 과립, 미립자, 나노입자, 수중 또는 비수성 매질 중 현탁액 또는 용액, 캡슐, 젤 캡슐, 사쉐, 정제 또는 미니정제를 포함한다. 비경구, 척추강내, 전방내 또는 심실내 투여용 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물은 예를 들어 완충제, 희석제 및 다른 적합한 첨가제, 예를 들어 침투 증진제, 담체 화합물 및 다른 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 임의로 함유하는 멸균 수용액을 포함한다.
약학적으로 허용 가능한 담체는 예를 들어 액체 또는 고체이며, 핵산 및 주어진 약학 조성물의 다른 성분들과 병용시 목적하는 벌크, 점조도 등을 제공할 것을 고려하여 계획된 투여 방식으로 선택한다. 전형적인 약학적으로 허용 가능한 담체는 비제한적으로 결합제(예를 들어 예비젤라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 등); 충전제(예를 들어 락토스 및 다른 당, 미정질 셀룰로스, 펙틴, 젤라틴, 칼슘 설페이트, 에틸 셀룰로스, 폴리아크릴레이트 또는 칼슘 수소 포스페이트 등); 윤활제(예를 들어 마그네슘 스테아레이트, 탤컴, 실리카, 콜로이드성 이산화 규소, 스테아르산, 금속 스테아레이트, 수소화된 식물성 오일, 옥수수 전분, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 아세테이트 등); 붕해제(예를 들어 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트 등); 또는 습윤제(예를 들어 나트륨 라우릴 설페이트 등)를 포함한다. 경구 투여형을 위한 서방성 경구 전달 시스템 및/또는 장용 코팅제가 미국특허 제 4,704,295 호; 미국특허 제 4,556,552 호; 미국특허 제 4,309,406 호; 및 미국특허 제 4,309,404 호에 개시되어 있다. 보조제는 상기 구절하에 포함되어 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물을 의료 장치, 바람직하게는 작은 펌프, 예를 들어 미니-펌프(예를 들어 눈안에 또는 눈위에 직접 이식된다)를 통해 투여한다. 상기와 같은 장치를 예를 들어 눈의 운동 근육에 연결시켜 치료학적 로드, 즉 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물을 눈안으로 전달한다.
인간 질병 예방 및/또는 치료 방법에 사용되는 것 외에, 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드 및/또는 약학 조성물을 또한 수의학적 동물, 파충류, 조류, 외래 동물 및 농장 동물, 예를 들어 포유동물, 설치류 등을 포함한 다른 환자들의 예방 및/또는 치료 방법에 사용한다. 포유동물은 예를 들어 말, 개, 돼지, 고양이, 또는 영장류(예를 들어 원숭이, 침팬지, 또는 여우원숭이)를 포함한다. 설치류는 예를 들어 래트, 토끼, 마우스, 다람쥐 또는 기니피그를 포함한다.
본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물을 다수의 상이한 질병들, 바람직하게는 악성 또는 양성 종양, 면역학적 질환, 기관지 천식, 심장병, 섬유증(예를 들어 간 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 간경화증, 신장 경화증, 경피증), 당뇨병, 상처 치유, 결합 조직의 질환(예를 들어 심장, 혈관, 뼈, 관절, 눈, 예를 들어 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군), 건선, 눈병(예를 들어 녹내장, 후낭 혼탁(PCO)(또한 2차 백내장으로 알려짐)), 망막모세포종, 맥락막암종, 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군, 황반변성, 예를 들어 나이-관련된 황반변성, 당뇨성 황반부종, 또는 백내장), CNS 질병(예를 들어 알쯔하이머병, 파킨슨병), 관상 죽상동맥경화증(관상동맥 중재 또는 관상동맥 중재술 또는 관상동맥 우회 이식(CABG)술 또는 탈모의 예방 및/또는 치료 방법에 사용한다. 종양은 예를 들어 고형 종양, 혈액성 종양, 백혈병, 종양 전이, 혈관종, 청신경종, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 성상세포종, 예를 들어 역행성 성상세포종, 청신경종, 아세포종, 유잉종양, 두개인두종, 상의세포종, 수모세포종, 신경교종, 교모세포종, 혈관모세포종, 호지킨-림프종, 수모세포종, 백혈병, 흑색종, 예를 들어 원발성 및/또는 전이성 흑색종, 중피종, 골수종, 신경모세포종, 신경섬유종, 비호지킨 림프종, 송과체종, 망막모세포종, 육종, 정상피종, 트라코마, 윌름종양, 담관암, 방광암종, 뇌종양, 유방암, 기관지원성 암종, 신장의 암종, 경부암, 융모암, 낭선암종, 태생기암, 상피암종, 식도암, 경부암종, 결장암종, 결장직장암종, 내막암, 담낭암, 위암, 두부암, 간암종, 폐암종, 수질암종, 목암, 비소세포 기관지원성/폐 암종, 난소암, 췌장암종, 유두암종, 유두선암종, 전립선암, 소장암종, 전립선암종, 직장암, 신세포암종(RCC, 예를 들어 투명세포 RCC, 유두 RCC, 혐색소성 RCC), 호산성세포종 신장암, 이행세포 신장암, 피부암, 소세포 기관지원성/폐암종, 편평세포 암종, 피지선암종, 고환암종, 및 자궁암 중에서 선택된다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약학 조성물은 종양의 예방 및/또는 치료 방법에 사용될 뿐만 아니라 전이에 대해서도 마찬가지로 사용된다.
본 발명은 바람직하게는 안과 질환, 예를 들어 비제한적으로 녹내장, 후낭 혼탁, 안구 건조증, 황반변성, 예를 들어 나이-관련된 황반변성, 당뇨성 황반부종, 백내장, 증식성 유리체망막병증, 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군, 및 TGF-베타, 특히 TGF-베타1, TGF-베타2 및/또는 TGF-베타3과 관련될 수 있고/있거나 섬유증, 염증, 퇴행, 노화 등과 관련되는 임의의 다른 눈 질환의 예방 및/또는 치료에 관한 것이다.
본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 뜻밖의 낮은 독성(예를 들어 표 7을 참조하시오)을 나타내고 따라서 상이한 유기체들에 의해 잘 허용됨을 특징으로 한다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 유기체에서 적합한 분배를 보이며, 여기에서 최고의 농도는 신장, 간, 피부 및 비장에서 측정된다.
본 발명은 올리고뉴클레오타이드의 서열의 특정한 선택 및 상기 뉴클레오타이드의 변형에 기인하여 각각 TGF-베타, 특히 TGF-베타1, TGF-베타2 및/또는 TGF-베타3 발현의 감소 및 억제에 매우 효율적인 다수의 올리고뉴클레오타이드를 제공한다. 하기 표 1은 본 발명에 따른 다수의 바람직한 변형된 올리고뉴클레오타이드들을 나타낸다(진한 글자는 변형된 뉴클레오사이드를 가리킨다). 각각의 올리고뉴클레오타이드를 ASPH 및 숫자(상기 뉴클레오사이드의 특정한 서열 및 변형에 의해 한정된다)로 한정한다:
[표 1]
Figure 112015103590211-pct00001
Figure 112015103590211-pct00002
Figure 112015103590211-pct00003
Figure 112015103590211-pct00004
Figure 112015103590211-pct00005
Figure 112015103590211-pct00006
Figure 112015103590211-pct00007
Figure 112015103590211-pct00008
Figure 112015103590211-pct00009
Figure 112015103590211-pct00010
Figure 112015103590211-pct00011
표 1은 본 발명의 선택된 올리고뉴클레오타이드의 핵산 서열뿐만 아니라 상기 뉴클레오타이드의 변형을 나타내며, 여기에서 LNA 4+4는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 및 3'-단부에서 4 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 4+3은 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 4 x LNA 및 3'-단부에서 3 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 3+4는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 3 x LNA 및 3'-단부에서 4 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 3+3은 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 3 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 3+2는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 3 x LNA 및 3'-단부에서 2 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 2+3은 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 2 x LNA 및 3'-단부에서 3 x LNA가 변형됨을 의미하고, LNA 2+2는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 2 x LNA가 변형됨을 의미한다. 한편으로, 일부 올리고뉴클레오타이드는 ENA 4+4(즉 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 4 x ENA가 변형된다) 또는 ENA 3+3(즉 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 3 x ENA가 변형된다)을 포함한다. 추가의 올리고뉴클레오타이드는 2'O-메트 4+4(여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 및 3'-단부에서 4 x 2'O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다), 또는 2'플루오로 4+4(여기에서 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 5'-단부 및 3'-단부에서 4 x 2'플루오로 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다)를 포함한다. LNA 3+TEG를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부에서 3 x LNA 및 3'-단부에서 하나의 트라이에틸렌 글리콜(TEG)을 포함한다. 일부 올리고뉴클레오타이드는 일렬로 배열되지 않고 예를 들어 서열 3LNA+9N+1LNA+1N+2LNA, 1LNA+1N+2LNA+8N+1LNA+1N+1LNA, 2LNA+8N+2LNA+1N+1LNA, 2LNA+9N+1LNA+1N+1LNA, 2LNA+8N+1LNA+2N+1LNA, 3LNA+8N+1LNA+1N+1LNA, 3LNA+8N+1LNA+1N+1LNA, 2LNA+9N+1LNA+1N+1LNA, 또는 2LNA+8N+2LNA+1N+1LNA를 갖는 잠기지 않은 뉴클레오사이드에 의해 분리된 LNA를 포함하며, 여기에서 "N"은 잠금 변형이 없는 뉴클레오사이드이다. 숫자와 병용된 "ASPH"는 표 1에 개시된 바와 같이 상이한 올리고뉴클레오타이드 및 그들의 상이한 변형을 지칭한다. 이들 변형된 올리고뉴클레오타이드를, 예를 들어 하기의 실시예들에 나타낸 실험들에서 시험하였다. 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 상이하게, 예를 들어 ASPH47, ASPH0047, ASPH_47 또는 ASPH_0047(동일한 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다)로 개시할 수 있다.
표 2에서 ASPH47(서열번호 49)의 서열 및/또는 LNA 패턴의 변형들인 본 발명의 추가의 바람직한 올리고뉴클레오타이드들을 나타낸다.
[표 2]
Figure 112015103590211-pct00012
Figure 112015103590211-pct00013
표 2의 변형들에 대한 기술은 표 1에 제공된 기술에 상응하며; 또한, 표 2에서 LNA 뉴클레오사이드는 진한 글자의 서열로 나타내고 트라이에틸렌 글리콜은 TEG로서 약기한다.
명확하고 간결한 기술을 위해서, 특징들을 본 발명에서 동일하거나 별도의 실시태양의 부분으로서 개시하지만, 본 발명의 범위가 개시된 특징들 중 일부 또는 전부의 조합을 갖는 실시태양들을 포함할 수 있음을 알 것이다.
하기의 실시예들은 본 발명을 추가로 예시하기 위해서, 그러나 동시에 본 발명에 대한 어떠한 제한도 구성하지 않으면서 제공될 것이다. 반대로, 본 발명의 범위는 본 발명의 설명을 읽은 후에 본 발명의 진의로부터 이탈됨 없이 당해 분야의 숙련가들에게 암시될 수 있는 다양한 다른 실시태양, 변형 및 이들의 등가물을 지칭함을 명확히 이해해야 한다.
실시예
하기의 실시예들에서, 표 1 및 2에 나열된 올리고뉴클레오타이드들의 효과를 각각 TGF-베타1 및/또는 TGF-베타2 발현의 감소 및 억제에 비추어 시험하였다. 서열번호 144(T-LNA: CGGCATGTCTATTTTGTA, 여기에서 5'- 및 3'-단부의 3 x 뉴클레오타이드는 LNA이다) 및 서열번호 145(scr-LNA: CGTTTAGGCTATGTACTT, 여기에서 5'- 및 3'-단부의 3 x 뉴클레오타이드는 LNA이다)를 대조용 올리고뉴클레오타이드로서 사용하며, 여기에서 서열번호 145(음성 대조군)는 서열번호 144(양성 대조군)의 스크램블드 형태이다. 상기 세포를 형질감염제(예를 들어 리포펙타민)의 존재하에서 또는 어떠한 형질감염제도 없이(짐노틱 형질감염 또는 무지원 형질감염 또는 짐노틱 전달) 형질감염시켰다. 짐노틱 형질감염의 경우에서와 같이 상기 올리고뉴클레오타이드의 상기 세포내로의 진입은 전적으로 상기 올리고뉴클레오타이드와 상기 세포의 상호작용에 따르며, 화합물이 상기 진입을 지원하지 않고, 짐노틱 형질감염은 생체내 실험 환경의 보다 양호한 조건을 반영한다.
실시예 1
인간 A172 신경교종 세포를 형질감염제의 존재하에서 각각 10 nM의 ASPH01, ASPH02, ASPH03, ASPH04, ASPH05, ASPH06, ASPH07, ASPH08, ASPH09, ASPH10, ASPH11, ASPH12, ASPH13, ASPH14, ASPH15, ASPH16, ASPH17, ASPH18, ASPH19, ASPH20, ASPH21, ASPH22, ASPH24, ASPH25, ASPH26, ASPH27, ASPH29, ASPH30, ASPH31, ASPH32, ASPH33, ASPH34, ASPH35, ASPH36, ASPH37, ASPH38, ASPH39, ASPH40, ASPH41, ASPH42, ASPH43, ASPH44, ASPH45, ASPH46, ASPH47, ASPH48, ASPH49, ASPH50, ASPH51, ASPH52, ASPH53, 및 ASPH54(도 5a를 참조하시오); ASPH36, ASPH60, ASPH61, ASPH62, ASPH63, ASPH64, ASPH65, ASPH66, ASPH67, ASPH68, ASPH69, ASPH70, ASPH71, ASPH72, ASPH73, ASPH74, ASPH75, ASPH76, ASPH77, ASPH78, ASPH79, ASPH80, ASPH81, ASPH82, ASPH83, ASPH84, ASPH85, ASPH86, ASPH87, ASPH88, ASPH89, ASPH90, ASPH91, ASPH92, ASPH93, ASPH94, ASPH95, ASPH96, ASPH97, ASPH98, ASPH99, ASPH100, ASPH101, ASPH102, ASPH103, ASPH104, ASPH105, ASPH106, ASPH107, ASPH108, ASPH109, ASPH110, ASPH111, ASPH112, ASPH113, ASPH114, ASPH115, ASPH116, ASPH117, ASPH118, 및 ASPH119(도 5b를 참조하시오), 또는 ASPH36, ASPH71, ASPH73, ASPH120, ASPH121, ASPH122, ASPH123, ASPH124, ASPH125, ASPH126, ASPH127, ASPH128, ASPH129, ASPH130, ASPH131, ASPH132, ASPH133, ASPH134, ASPH135, ASPH136, ASPH137, ASPH138, ASPH139, ASPH140, ASPH141, ASPH142, ASPH143, ASPH145, ASPH146, ASPH147, ASPH148, ASPH149, ASPH150, ASPH151, ASPH152, ASPH153, ASPH154, ASPH155, ASPH157, ASPH158, ASPH160, ASPH161, ASPH162, ASPH163, ASPH164, ASPH165, ASPH166, ASPH167, ASPH168, ASPH169, ASPH170, ASPH171, ASPH172, ASPH173, ASPH174, ASPH175, ASPH176, ASPH177, ASPH178, ASPH179, ASPH180, ASPH181, ASPH182, 및 ASPH183(도 5c를 참조하시오), 및 서열번호 144 및 145의 대조군으로 형질감염시켰다. TGF-베타1 및 TGF-베타2 mNRA의 발현을 형질감염 후 24시간째에 측정하였다. TGF-베타1 및 TGF-베타2 mNRA의 발현의 현저한 감소가 도 5a) 내지 5c)에서 입증된다. 이중 TGF-베타1 및 TGF-베타2 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPHOl, ASPH02, ASPH03, ASPH04, ASPH05, ASPH06, ASPH07, ASPH08 및 ASPH09는 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 모두의 발현의 현저한 감소를 나타내는 반면, 선택적인 TGF-베타2 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 2
인간 Panc-1 췌장암 세포를 형질감염제의 존재하에서 각각 10 nM의 ASPHOl, ASPH02, ASPH03, ASPH04, ASPH05, ASPH06, ASPH07, ASPH08, ASPH12, ASPH14, ASPH17, ASPH18, ASPH20, ASPH21, ASPH22, ASPH24, ASPH25, ASPH26, ASPH27, ASPH29, ASPH30, ASPH31, ASPH32, ASPH33, ASPH35, ASPH36, ASPH37, ASPH38, ASPH39, ASPH40, ASPH41, ASPH42, ASPH43, ASPH44, ASPH45, ASPH46, ASPH47, ASPH48, ASPH49, ASPH50, ASPH51, 및 ASPH52(도 6a를 참조하시오); ASPH36, ASPH60, ASPH61, ASPH62, ASPH63, ASPH64, ASPH65, ASPH66, ASPH67, ASPH68, ASPH69, ASPH70, ASPH71, ASPH72, ASPH73, ASPH74, ASPH75, ASPH76, ASPH77, ASPH78, ASPH79, ASPH80, ASPH81, ASPH82, ASPH83, ASPH84, ASPH85, ASPH86, ASPH87, ASPH88, ASPH89, ASPH90, ASPH91, ASPH92, ASPH93, ASPH94, ASPH96, ASPH97, ASPH98, ASPH99, ASPHIOO, ASPHlOl, ASPH102, ASPH103, ASPH104, ASPH105, ASPH106, ASPH107, ASPH108, ASPH109, ASPH110, ASPH111, ASPH112, ASPH113, ASPH114, ASPH115, ASPH116, ASPH117, ASPH118, 및 ASPH119(도 6b를 참조하시오), 또는 ASPH36, ASPH71, ASPH73, ASPH120, ASPH121, ASPH122, ASPH127, ASPH128, ASPH129, ASPH130, ASPH131, ASPH132, ASPH133, ASPH135, ASPH136, ASPH137, ASPH139, ASPH141, ASPH142, ASPH143, ASPH145, ASPH146, ASPH147, ASPH149, ASPH150, ASPH151, ASPH152, ASPH153, ASPH154, ASPH155, ASPH157, ASPH160, ASPH161, ASPH162, ASPH163, ASPH164, ASPH165, ASPH166, ASPH167, ASPH168, ASPH169, ASPH170, ASPH171, ASPH172, ASPH173, ASPH174, ASPH175, ASPH176, ASPH177, ASPH178, ASPH179, ASPH180, ASPH181, ASPH182, 및 ASPH183(도 6c를 참조하시오), 및 서열번호 144 및 145의 대조군으로 형질감염시켰다. TGF-베타1 및 TGF-베타2 mNRA의 발현을 형질감염 후 24시간째에 측정하였다. TGF-베타1 및 TGF-베타2 mNRA의 발현의 현저한 감소가 도 6a) 내지 6c)에서 입증된다. 이중 TGF-베타1 및 TGF-베타2 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPHOl, ASPH02, ASPH03, ASPH04, ASPH05, ASPH06, ASPH07 및 ASPH08은 다시 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 모두의 발현의 현저한 감소를 나타내는 반면, 선택적인 TGF-베타2 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타2 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 3
추가의 실험에서 ASPH01, ASPH03, ASPH05, ASPH17, ASPH18, ASPH22, ASPH26, ASPH27, ASPH33, ASPH36, ASPH37, ASPH41, ASPH42, ASPH45, ASPH46, ASPH47, ASPH48, ASPH49, ASPH64, ASPH65, ASPH66, ASPH69, ASPH71, ASPH80, ASPH82, ASPH88, ASPH89, ASPH90, ASPH98, ASPH99, ASPH102, ASPH105, ASPH115, ASPH121, ASPH140, ASPH153, ASPH165, ASPH171, ASPH178, ASPH181, ASPH184, ASPH185, ASPH186, ASPH187, ASPH188, ASPH189, 및 서열번호 144 및 서열번호 145의 대조군들 각각의 억제 효과를 A172 세포에서 시험하였다. A172 세포를 형질감염제의 존재하에서 각각 20 nM, 4 nM, 0.8 nM, 0.16 nM 및 0.04 nM 용량의 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드로 형질감염시켰다. 남아있는 TGF-베타2 mRNA를 형질감염후 24시간째에 측정하였다. TGF-베타2 값을 GAPDH에 대해 표준화하고 TGF-베타2 mRNA의 50% 감소를 생성시키는 올리고뉴클레오타이드 농도(=IC50 값)를 계산하였다. 모든 IC50 값들은 0.33 nM인 ASPH_036(ASPH36)의 IC50 값을 기준으로 하였으며 결과를 ASPH_036의 IC50 값의 차이-배수로 나타낸다.
[표 3]
Figure 112015103590211-pct00014
Figure 112015103590211-pct00015
상기 변형된 올리고뉴클레오타이드들은 모두 낮은 나노몰 내지 피코몰 범위의 IC50을 나타내며, 상기 범위는 서열번호 144의 대조용 올리고뉴클레오타이드의 IC50보다 현저하게 더 낮고; 서열번호 145의 대조군의 IC50은 산정할 수 없었다.
실시예 4
Panc-1 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염) 각각 3.3 μM의 ASPH17, ASPH18, ASPH22, ASPH25, ASPH33, ASPH35, ASPH36, ASPH41, ASPH42, ASPH45, ASPH46, ASPH47, ASPH48, ASPH49, ASPH65, ASPH66, ASPH67, ASPH69, ASPH71, ASPH79, ASPH80, ASPH82, ASPH88, ASPH89, ASPH90, ASPH91, ASPH98, ASPH99, ASPH102, ASPH105, ASPHlll, ASPH115, ASPH119, ASPH121, ASPH139, ASPH140, ASPH146, ASPH151, ASPH153, ASPH165, ASPH171, ASPH172, ASPH176, ASPH178, ASPH180, 및 ASPH183, 또는 서열번호 144 및 145의 대조군으로 처리하였다. TGF-베타1 및 TGF-베타2 mNRA 각각의 발현에 대한 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 처리 시작 후 72시간째에 측정하였다. 짐노틱 형질감염 실험 조건하에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 세포에 진입하고 TGF-베타2 mRNA의 발현을 강하게 억제한다. 상기 실험들의 결과를 도 7에 나타낸다.
실시예 5
추가의 실험에서 Panc-1 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 각각 10 μM의 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPHOl, ASPH03, ASPH05, ASPH09, ASPH17, ASPH18, ASPH22, ASPH35, ASPH36, ASPH37, ASPH41, ASPH45, ASPH46, ASPH47, 및 ASPH48, 또는 서열번호 144 및 145의 대조군으로 형질감염시켰다. 상기 올리고뉴클레오타이드를 상기 세포에 2일 동안 가하고, 그 후에 올리고뉴클레오타이드 함유 배양 배지를 교환하고, 2일 동안 추가의 배양을 수행하였다. 이어서 TGF-베타1 mRNA(도 8a 참조) 및 TGF-베타2 mRNA(도 8b 참조)의 발현을 측정하고 HPRT1(하이포잔틴-포스포리보실-트랜스퍼라제1)에 대해 표준화하였다. 세포 상등액을 ELISA에 의해 TGF-베타1(도 9a 참조) 및 TGF-베타2(도 9b 참조) 단백질에 대해 분석하였다. 짐노틱 전달 실험 조건하에서, 상기 이중 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH01, ASPH03, ASPH05, 및 ASPH09는 mRNA 상의 TGF-베타1 및 TGF-베타2, 및 마찬가지로 단백질 수준 상의 발현을 현저하게 억제한다. 다른 올리고뉴클레오타이드들은 모두 mRNA 및 단백질 수준 상의 TGF-베타2의 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 6
또 다른 실험에서 본 발명의 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과의 용량 의존성을 시험하였다. Panc-1 세포를 형질감염 시약을 사용하지 않고 각각 15 μΜ, 10 μΜ, 7.5 μΜ, 5 μΜ, 2.5 μΜ, 1.25 μΜ, 또는 0.625 μΜ ASPH05 또는 ASPH36, 또는 서열번호 144 및 145의 대조군으로 처리하였다. 상기 올리고뉴클레오타이드를 2일 동안 상기 세포에 가하였다. 그 후에 상기 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 배양 배지를 교환하고 세포를 추가로 2일 동안 배양하였다. 그 후에(전체 처리 시간: 4일) 올리고뉴클레오타이드 농도에 따른 TGF-베타1(도 10a) 및 TGF-베타2(도 10b) mRNA의 발현을 측정하였다. 이중 TGF-베타1 및 TGF-베타2 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH05는 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 발현 모두의 현저한 용량 의존적인 억제를 나타내며, ASPH36은 TGF-베타2 mRNA의 발현을 용량-의존적인 방식으로 특이적으로 억제한다.
실시예 7
마우스 SMA-560 신경교종 세포를 형질감염제의 존재하에서 각각 10nM ASPH01, ASPH03, ASPH05, ASPH09, ASPH17, ASPH18, ASPH22, ASPH26, ASPH36, ASPH37, ASPH41, ASPH42, ASPH45, ASPH46, ASPH47, 또는 ASPH48, 또는 서열번호 144 및 145의 대조군으로 형질감염시켰다. 형질감염 후 24시간 째에, TGF-베타1(흰색 컬럼) 및 TGF-베타2(검은색 컬럼) mRNA의 발현의 억제를 측정하였다. 이중 TGF-베타1 및 TGF-베타2 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH09는 마우스 TGF-베타1 mRNA의 발현을 억제하고, 시험된 다른 올리고뉴클레오타이드들은 상기 마우스 TGF-베타2 mRNA의 발현을 강하게 억제한다. 결과를 도 11에 나타낸다.
실시예 8
암컷 흉선제거 누드 마우스(Hsd:흉선제거 누드-Foxn1nu)를 5일 동안 연속해서 피하 주사에 의해 각각 14 ㎎/㎏ 또는 50 ㎎/㎏의 올리고뉴클레오타이드 ASPH01, ASPH03, ASPH05, ASPH17, ASPH22, ASPH37, ASPH41, ASPH45, ASPH46, ASPH47, 또는 ASPH48, 및 서열번호 145의 대조군으로 처리하였다. 최종 처리 후 당일에, 상기 마우스를 죽였다. 마우스 TGF-베타2 mRNA를 신장 조직 용해물 중에서 정량분석하였다. 도 12에서, 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에서 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를, ASPH 46 군 n=3을 제외하고, n=4로 나타낸다). 상기 시험된 올리고뉴클레오타이드는 모두 상기 마우스의 신장에서 TGF-베타2 mRNA의 발현을 억제하였다.
실시예 9
또 다른 실험에서 Panc-1 세포를 어떠한 형질감염제도 없이(짐노틱 형질감염) 10 μM의 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH09 또는 서열번호 145의 대조군으로 형질감염시켰다. 상기 올리고뉴클레오타이드를 2일 동안 상기 세포에 가하고, 올리고뉴클레오타이드 함유 배양 배지를 교환한 후에, 2일 동안 추가의 배양을 수행하였다. 이어서 TGF-베타3 mRNA의 발현(도 13을 참조하시오)을 측정하고 HPRT1(하이포잔틴-포스포리보실-트랜스퍼라제1)에 대해 표준화하였다. 짐노틱 형질감염 실험 조건하에서, 상기 3중 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH09는 TGF-베타3 mRNA의 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 10
Panc-1 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염) 각각 10 μM, 3.3 μM, 1.1 μM, 0.37 μM 및 0.12 μM의 ASPH03, ASPH36, ASPH45, ASPH47, ASPH65, ASPH69, AASPH71, ASPH80, ASPH115, ASPH 121, ASPH153, ASPH185, 및 ASPH189로 처리하였다. TGF-베타2 mNRA의 발현에 대한 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 처리 시작 후 72시간째에 측정하였다. TGF-베타2 값을 GAPDH에 대해 표준화하고 TGF-베타2 mRNA의 50% 감소를 생성시키는 올리고뉴클레오타이드 농도(=IC50 값)를 계산하였다. 짐노틱 형질감염 실험 조건하에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 세포에 진입하고 TGF-베타2 mRNA의 발현을 강하게 억제한다. 상기 실험들의 결과를 표 4에 나타낸다.
[표 4]
Figure 112015103590211-pct00016
상기 변형된 올리고뉴클레오타이드들은 모두 낮은 마이크로몰 또는 심지어 서브마이크로몰 범위의 IC50을 나타내며, 상기 범위는 상기 올리고뉴클레오타이드가 형질감염 시약의 요구 없이 매우 높은 효능을 가짐을 나타낸다.
실시예 11
Panc-1 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염) 각각 10 μM, 3.3 μM, 1.1 μM, 0.37 μM 및 0.12 μM의 ASPH47, ASPH190, ASPH191, AASPH192 및 ASPH193으로 처리하였다. TGF-베타2 mNRA의 발현에 대한 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 처리 시작 후 72시간째에 측정하였다. TGF-베타2 값을 GAPDH에 대해 표준화하고 TGF-베타2 mRNA의 50% 감소를 생성시키는 올리고뉴클레오타이드 농도(=IC50 값)를 계산하였다. 짐노틱 형질감염 실험 조건하에서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 세포에 진입하고 TGF-베타2 mRNA의 발현을 강하게 억제한다. 상기 실험들의 결과를 표 5에 나타낸다.
[표 5]
Figure 112015103590211-pct00017
상기 변형된 올리고뉴클레오타이드들은 모두 서브마이크로몰 내지 보다 낮은 서브마이크로몰 범위의 IC50을 나타내며, 상기 범위는 상기 올리고뉴클레오타이드가 심지어 형질감염 시약의 요구 없이도 대단히 높은 효능을 가짐을 나타낸다.
실시예 12
인간 Panc-1 췌장암 세포를 형질감염제의 존재하에서 각각 10 nM의 ASPH05, ASPH09, ASPH1000, ASPH1001, ASPH1002, ASPH1003, ASPH1004, ASPH1005, ASPH1006, ASPH 1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPHIOIO, ASPHlOll, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1016, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1023, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1030, ASPH1031, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035,ASPH1036, ASPH 1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1048, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1054, ASPH1055,ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, 또는 ASPH1061(도 14 참조) 및 서열번호 145의 대조군으로 형질감염시켰다. TGF-베타1 mRNA의 발현을 형질감염 후 24시간 째에 측정하였다. Panc-1 세포에서 TGF-베타1의 발현의 현저한 감소를 도 14에 나타낸다.
실시예 13
마우스 SMA-560 신경교종 세포를 형질감염제의 존재하에서 각각 10 nM의 ASPH09, ASPH 1000, ASPHIOOI, ASPH1002, ASPH1003, ASPH1004, ASPH1005, ASPH1006, ASPH1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPH1010, ASPH1011, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1016, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH 1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1023, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1030, ASPH1031, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035, ASPH1036, ASPH1037, ASPH1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1048, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1053, ASPH1054, ASPH1055, ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, ASPH1061, 또는 ASPH1062(도 15 참조) 및 서열번호 145의 대조군으로 형질감염시켰다. TGF-베타1 mRNA의 발현을 형질감염 후 24시간 째에 측정하였다. SMA-560 세포에서 TGF-베타1의 발현의 현저한 감소를 도 15에 나타낸다.
실시예 14
본 실험에서, 인간 A172 신경교종 세포를 형질감염제의 존재하에서 각각 10 nM의 ASPH05, ASPH09, ASPH1000, ASPHIOOI, ASPH1002, ASPH1004, ASPH1005, ASPH1006, ASPH1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPH1010, ASPH1011, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1016, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1023, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1030, ASPH1031, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035, ASPH1036, ASPH1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1048, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1053, ASPH1054, ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, ASPH1061, 또는 ASPH1062(도 16 참조) 및 서열번호 145의 대조군으로 형질감염시켰다. TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현을 형질감염 후 24시간 째에 측정하였다. TGF-베타1 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 16에 나타낸다. 이중 TGF-베타1 및 TGF-베타2 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH05는 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 모두의 발현의 현저한 감소를 나타내는 반면, 선택적인 TGF-베타1 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 15
Panc-1 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 3.3 μM의 ASPH05, ASPH09, ASPH1000, ASPH1001, ASPH1002, ASPH1004, ASPH1006, ASPH1007, ASPH1008, ASPH1009, ASPH1010, ASPH1011, ASPH1012, ASPH1013, ASPH1014, ASPH1015, ASPH1017, ASPH1018, ASPH1019, ASPH1020, ASPH1021, ASPH1022, ASPH1024, ASPH1026, ASPH1027, ASPH1028, ASPH1029, ASPH1032, ASPH1033, ASPH1034, ASPH1035, ASPH1036, ASPH1037, ASPH1038, ASPH1039, ASPH1040, ASPH1041, ASPH1042, ASPH1043, ASPH1044, ASPH1045, ASPH1046, ASPH1047, ASPH1049, ASPH1050, ASPH1051, ASPH1052, ASPH1053, ASPH1054, ASPH1055, ASPH1056, ASPH1057, ASPH1058, ASPH1059, ASPH1060, ASPH1061, 또는 ASPH1062, 또는 서열번호 145의 대조군으로 처리하였다. TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 각각의 발현에 대한 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 억제 효과를 처리 시작 후 72시간째에 측정하였다. TGF-베타1 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 17에 나타낸다. 이중 TGF-베타1 및 TGF-베타2 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH05는 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA 모두의 발현의 현저한 감소를 나타내는 반면, 선택적인 TGF-베타1 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 16
인간 A172 세포를 각각 10 nM(형질감염제의 존재하에서)의 ASPH09, ASPH1047, ASPH1051, ASPH1059, ASPH1063, ASPH1064, ASPH1065, ASPH1066, ASPH1067, ASPH1068, ASPH1069, ASPH1070, ASPH1071, ASPH1072, ASPH1073, ASPH1074, ASPH1075, ASPH1076, ASPH1077, ASPH1078, ASPH1079, ASPH1080, ASPH1081, ASPH1082, ASPH1083, ASPH1084, ASPH1085, ASPH1086, ASPH1087, ASPH1088, ASPH1089, ASPH1090, ASPH1091, ASPH1092, ASPH1093, ASPH1094, ASPH1095, ASPH1097, ASPH1098, ASPH1099,ASPH1100, ASPH1101, ASPH1102, ASPH1103, ASPH1104, ASPH1105, ASPH1106, ASPH1107, ASPH1108, ASPH1109, ASPHlllO, ASPH1111, ASPH1112, ASPH1113, ASPH114, ASPH1115, ASPH1116, ASPH1117, ASPH1118, ASPH1119, ASPH1120, ASPH1121, ASPH1122, ASPH1123, ASPH1124, ASPH1125, ASPH1126, ASPH1127, ASPH1128, ASPH1129, ASPH1130, ASPH1131, 및 ASPH1132, 또는 양성 대조군 ASPH1047로 처리하였다. TGF-베타1(검은색 컬럼), TGFβ베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현을 형질감염 후 24시간 째에 측정하였다. TGF-베타1 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 18에 나타낸다. 범-특이성 TGF-베타1, TGF-베타2, 및 TGF-베타3 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH0009, ASPH1096, ASPH1131 및 ASPH1132는 3개의 동형 모두의 발현의 현저한 감소를 나타내는 반면, 선택적인 TGF-베타1 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 17
Panc-1 세포(도 19a) 또는 RenCa 세포(도 19b)를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 각각 3.3 μM의 ASPH09, ASPH1047, ASPH1051, ASPH1059, ASPH1063, ASPH1064, ASPH1065, ASPH1066, ASPH1067, ASPH1068, ASPH1069, ASPH1070, ASPH1071, ASPH1072, ASPH1073, ASPH1074, ASPH1075, ASPH1076, ASPH1077, ASPH1078, ASPH1079, ASPH1080, ASPH1081, ASPH1082, ASPH1083, ASPH1084, ASPH1085, ASPH1086, ASPH1087, ASPH1088, ASPH1089, ASPH1090, ASPH1091, ASPH1092, ASPH1093, ASPH1094, ASPH1095, ASPH1097, ASPH1098, ASPH1099,ASPH1100, ASPH1101, ASPH1102, ASPH1103, ASPH1104, ASPH1105, ASPH1106, ASPH1107, ASPH1108, ASPH1109, ASPHlllO, ASPH1111, ASPH1112, ASPH1113, ASPH114, ASPH1115, ASPH1116, ASPH1117, ASPH1118, ASPH1119, ASPH1120, ASPH1121, ASPH1122, ASPH1123, ASPH1124, ASPH1125, ASPH1126, ASPH1127, ASPH1128, ASPH1129, ASPH1130, ASPH1131, 및 ASPH1132, 또는 양성 대조군 ASPH1047로 처리하였다. TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현을 형질감염 후 72시간째에 측정하였다. TGF-베타1 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 18에 나타낸다. 범-특이성 TGF-베타1, TGF-베타2 및 TGF-베타3 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH09, ASPH1096, ASPH1131 및 ASPH1132는 3개의 동형 모두의 발현의 현저한 감소를 나타내는 반면, 선택적인 TGF-베타1 올리고뉴클레오타이드는 TGF-베타1 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 18
피하 인간 췌장 암종 Panc-1 종양을 갖는 마우스를 다양한 처리 스케줄: Q1Dx1-d6(단일 SC 주사, 5일 후에 종료), Q1Dx5-d6(5일 동안 매일 SC 주사, 24시간 후에 종료), 및 Q1Dx5-d10(5일 동안 매일 SC 주사, 5일 후에 종료) 하에서 1, 3, 10 및 30 ㎎/㎏의 ASPH47로 처리하였다. 상기 동물의 신장에서 TGF-베타2 mRNA의 용량 독립적인 하향조절이 존재하였다. TGF-베타2 하향조절은 ASPH47에 의한 최종 처리후, 심지어 단지 1회 투여후에 조차, 5일까지 지속되었다. TGF-베타2 발현을 bDNA 분석(분지된 DNA 분석으로, 포획된 표적 RNA로부터의 신호를 증폭시키기 위해 bDNA 분자를 사용하는 샌드위치 핵산 하이브리드화 방법이다)에 의해 검출하고 이를 GAPDH에 대해 표준화하였다. 도 23에 나타낸 바와 같이, 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에서 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를 비히클 및 3 ㎎/㎏ Q1Dx1 d6 군에 대한 n=9를 제외하고 n=10으로서 나타낸다).
실시예 19
좌우 측 옆구리에 피하 인간 췌장 암종 Panc-1 종양을 갖는 마우스를 5일 동안 연속해서 1, 5, 15 또는 50 ㎎/㎏ 올리고뉴클레오타이드의 매일 주사로 처리하였다. 상기 종양을 상기 최종 처리후 24시간째에 수거하고 급속 동결시켰다. 종양 중 TGF-베타 mRNA 발현을 bDNA 분석에 의해 검출하였다. 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에서 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를 n=5로서 나타낸다). TGF-베타2 mRNA는 다양한 올리고뉴클레오타이드로 처리된 종양에서 하향조절되었다(도 24). 상기 군에서 현저한 TGF-베타1 mRNA 하향조절은 존재하지 않았다(데이터 도시 안 됨).
실시예 20
좌우 측 옆구리에 피하 인간 신세포 암종 786-O 종양을 갖는 마우스를 5일 동안 연속해서 50 ㎎/㎏ 올리고뉴클레오타이드의 매일 주사로 처리하였다. 상기 종양을 상기 최종 처리후 24시간째에 수거하고 급속 동결시켰다. 종양 중 TGF-베타 mRNA 발현을 bDNA 분석에 의해 검출하였다. 각각 ASPH05, ASPH17, ASPH26, ASPH36, ASPH45, ASPH47, ASPH71, ASPH82, ASPH98, 및 ASPH105로 처리된 종양에서 TGF-베타2 mRNA의 현저한 하향조절이 존재하였다(도 25). 데이터(TGF-베타2 대 GAPDH mRNA 비를 나타낸다)를 박스 플롯으로 나타내며, 여기에서 중간값 및 최소 및 최대값을 나타낸다(데이터를, ASPH71 군의 경우 n=9를 제외하고, n=10으로서 나타낸다).
실시예 21
인간 Panc-1 세포를 20, 6.67, 2.22, 0.74, 0.25, 0.08 또는 0.009 μΜ의 변형된 올리고뉴클레오타이드 ASPH47, ASPH1047, ASPH1106, ASPH1132, 또는 ASPH1047과 함께 ASPH47로 형질감염시키고; 결과를 도 26a 내지 26e에 나타낸다. 음성 대조군은 서열번호 145의 스크램블드 올리고뉴클레오타이드(scrLNA)(도 26f)이다. 모든 세포를 형질감염제의 부재하에서 형질감염시켰다(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달). 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드를 3일 동안 상기 세포에 가하고, 이를 37 ℃에서 배양하였다. 그 후에 상기 올리고뉴클레오타이드 함유 배지를 새로운 올리고뉴클레오타이드 함유 배지로 교환하고 세포를 37 ℃에서 추가로 4일 동안 배양하였다. 세포 상등액 중의 TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질 수준을 ELISA에 의해 측정하였다. ASPH47은 TGF-베타2의 발현을 용량-의존적인 방식으로 특이적으로 억제하며 TGF-베타1에 대해서는 어떠한 표적 억제 효과도 갖지 않는다(도 26a). ASPH1047은 TGF-베타1의 발현을 특이적으로 억제하며 TGF-베타2에 대해서는 어떠한 표적 억제 효과도 갖지 않거나(도 26b), 또는 보다 높은 농도에서 단지 약간의 TGF-베타2 억제 효과만을 갖는다. 또한 ASPH1106은 TGF-베타1 발현을 용량 의존적인 방식으로 억제한다(도 26c). 다중특이성 ASPH1132는 TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질의 발현의 용량-의존적인 억제를 나타낸다(도 26d). ASPH47 및 ASPH1047을 병용하는 경우, TGF-베타1 및 TGF-베타2 단백질 모두의 발현이 용량 의존적인 방식으로 억제된다(도 26e). 서열번호 145의 scrLNA는, 농도를 ASPH47, ASPH1047, ASPH1106, 또는 ASPH1132의 개별적인 농도에 비해 배가시켰다 하더라도(40, 13.33, 4.44, 1.48, 0.49, 0.16, 0.05, 또는 0.02 μΜ), TGF-베타1이나 TGF-베타2의 발현 중 어느 것에도 어떠한 억제 효과도 나타내지 않는다. TGF-베타1에 대한 결과를 다이아몬드모양으로 나타내고, TGF-베타2에 대한 결과는 사각형으로 나타낸다(도 26a 내지 26f).
실시예 22
Panc-1 세포(도 27a) 또는 RenCa 세포(도 27b)를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 각각 1.1 μM의 ASPH190, ASPH191, ASPH192, ASPH193, ASPH194, ASPH195, ASPH196, ASPH197, ASPH198, ASPH199, ASPH200, ASPH201, ASPH202, ASPH203, ASPH204, ASPH205, ASPH206, ASPH207, ASPH208, ASPH209, ASPH210, ASPH211, ASPH212, ASPH213, ASPH214, ASPH215, ASPH216, ASPH217, ASPH218, ASPH219, ASPH220, ASPH221, ASPH222, 및 ASPH223으로 처리하였다. 형질감염 후 72시간째에 TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현을 측정하였다. TGF-베타2 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 27a 및 27b에 나타낸다. 음성 대조군은 서열번호 145의 스크램블드 LNA(scr LNA)이다.
실시예 23
Panc-1 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 각각 10 μΜ, 3.3 μΜ, 1.1 μΜ, 0.37 μΜ, 및 0.12 μΜ의 ASPH47, M1-ASPH47, M2-ASPH47, M3-ASPH47, M4-ASPH47, M5-ASPH47, Μ6-ASPH47, M7-ASPH47, M8-ASPH47, M9-ASPH47, M10-ASPH47, M11-ASPH47, M12-ASPH47, M13-ASPH47, M14-ASPH47, 또는 M15-ASPH47로 처리하였다. TGF-베타2 mRNA의 발현에 대한 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드들의 억제 효과를 처리 시작후 72시간째에 측정하였다. TGF-베타2 값을 GAPDH에 대해 표준화하고 TGF-베타2 mRNA의 50% 감소를 생성시키는 올리고뉴클레오타이드 농도(=IC50)를 계산하였다. 짐노틱 형질감염 실험 조건하에서 상기 올리고뉴클레오타이드는 상기 세포에 진입하며 TGF-베타2 mRNA의 발현을 강하게 억제한다. 상기 실험의 결과를 표 6에 나타낸다:
[표 6]
Figure 112015103590211-pct00018
상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 대부분은 서브마이크로몰 내지 더 낮은 서브마이크로몰 범위의 IC50을 나타내며, 상기 범위는 상기 올리고뉴클레오타이드가 심지어 형질감염제의 요구 없이도 대단히 높은 효능을 가짐을 나타낸다.
실시예 24
인간 Panc-1 췌장암 세포(도 28a) 또는 마우스 RenCa 신세포 암종 세포(도 28b)를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 3.3 μM의 ASPH0009, ASPH1132, ASPH2000, ASPH2001, ASPH2002, ASPH2003, ASPH2004, ASPH2005, ASPH2006, ASPH2007, ASPH2009, ASPH2010, ASPH2012, ASPH2013, ASPH2014 ASPH2015, ASPH2016, ASPH2017, ASPH2018, ASPH2019, ASPH2020, ASPH2021, ASPH2023, ASPH2024, ASPH2025, ASPH23026, ASPH2027, ASPH2028, ASPH2029, ASPH2030, ASPH2031, ASPH2032, ASPH2033, ASPH2034, ASPH2035, ASPH2036, ASPH2037, ASPH2038, ASPH2039, ASPH2040, ASPH2041, ASPH2043, ASPH2044, ASPH2045, ASPH2046, ASPH2047, ASPH2048, ASPH2049, ASPH2050, ASPH2052, ASPH2053, ASPH2054, ASPH2055, ASPH2056, ASPH2057, ASPH2060, ASPH2061, ASPH2062, ASPH2063, ASPH2064, ASPH2065, 또는 ASPH2066으로 처리하였다. TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현을 형질감염 후 72시간 째에 측정하였다. TGF-베타3 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 28a 및 28b에 나타낸다. 상기 서열들로부터 예상되는 바와 같이, 인간 TGF-베타1 및 -베타3의 mRNA에 대해 100% 상동성을 갖지만 TGF-베타2에 대해서는 불합치를 갖는 TGF-베타1, -베타2 및 -베타3 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH_0009(범-선택성) 및 ASPH_1132는 3개의 동형 모두의 발현의 현저한 감소를 나타낸다. 상기 선택성 TGF-베타3 올리고뉴클레오타이드만이 TGF-베타3 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 25
인간 A172 신경교종 세포를 24시간 동안 10 nM(형질감염제의 존재하에서)의 ASPH0009, ASPH1132, ASPH2000, ASPH2001, ASPH2002, ASPH2003, ASPH2004, ASPH2006, ASPH2007, ASPH2008, ASPH2009, ASPH2010, ASPH2011, ASPH2012, ASPH2013, ASPH2014, ASPH2016, ASPH2017, ASPH2018, ASPH2020, ASPH2021, ASPH2022, ASPH2023, ASPH2024, ASPH2025, ASPH2026, ASPH2027, ASPH2028, ASPH2029, ASPH2030, ASPH2031, ASPH2032, ASPH2033, ASPH2034, ASPH2035, ASPH2036, ASPH2037, ASPH2038, ASPH2039, ASPH2040, ASPH2041, ASPH2042, ASPH2043, ASPH2044, ASPH2045, ASPH2047, ASPH2049, ASPH2050, ASPH2051, ASPH2052, ASPH2053, ASPH2054, ASPH2056, ASPH2057, ASPH2058, ASPH2059, ASPH2060, ASPH2061, ASPH2062, ASPH2063, 또는 ASPH2066으로 처리하였다. 이어서 TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현을 세포 추출물로부터 bDNA 분석에 의해 측정하였다. TGF-베타3 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 29에 나타낸다. 상기 서열들로부터 예상되는 바와 같이, 인간 TGF-베타1 및 -베타3의 mRNA에 대해 100% 상동성을 갖지만 TGF-베타2에 대해서는 불합치를 갖는 TGF-베타1, -베타2 및 -베타3 반응성 올리고뉴클레오타이드 ASPH_0009(범-선택성) 및 ASPH_1132는 3개의 동형 모두의 발현의 현저한 감소를 나타낸다. 상기 선택성 TGF-베타3 올리고뉴클레오타이드만이 TGF-베타3 mRNA 발현을 현저하게 억제한다.
실시예 26: 토끼 세포에서 표적 mRNA 하향조절
선택된 올리고뉴클레오타이드의 서열들을 TGF-베타1 및 2의 토끼 mRNA 서열과 정렬시켰다. ASPH_0036(TGF-베타2 선택성 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 인간 mRNA 서열 기본)은 토끼 TGF-베타2 mRNA와 100% 상동성을 나타낸 반면, ASPH_1059(TGF-베타1 선택성 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 인간 mRNA 서열 기본)는 토끼 TGF-베타1 mRNA와 100% 상동성을 나타내었다.
토끼 Rab-9 피부 섬유아세포를 24시간 동안 형질감염제의 존재하에서 5 nM 또는 20 nM의 ASPH_0036 및 ASPH_1059로 처리하였다. 이어서 TGF-베타1 및 TGF-베타2 mRNA의 발현을 bDNA 분석에 의해 세포 추출물 중에서 측정하였다. TGF-베타1 mRNA의 발현의 현저한 감소(5 및 20 nM에서 각각 51 및 77%)가 ASPH_1059에 의해 성취되었다. TGF-베타2 mRNA의 현저한 감소(5 및 20 nM에서 각각 79 및 80%)가 ASPH_0036에 의해 성취되었다.
실시예 27: Balb/c 마우스에서 ASPH_0047의 전신 투여에 따른 조직 생체분포 및 표적 mRNA 하향조절
Balb/C 마우스를 5, 20 및 50 ㎎/㎏ 동물 체중의 ASPH_0047(멸균 생리식염수 중에서 제형화됨)의 단일 피하 주사로 처리하였다. 혈장 및 조직을 지시된 시간(3마리의 개별적인 동물로부터)에서 수거하고, 바로 급속-동결시키고 AEX-HPLC 방법(혈장/조직 PK)에 의한 분석시까지 또는 bDNA 분석에 의한 TGF-β2 및 GAPDH mRNA 수준의 측정을 위해서 -80 ℃에서 보관하였다. TGF-β2 mRNA 수준을 상응하는 샘플에서 GAPDH mRNA 발현 수준에 대해 나타내었다.
상기 데이터는 50 ㎎/㎏ ASPH_0047의 1회 피하 일시주사 투여가 상기 약물의 피하에서부터 순환하는 혈액 구획까지의 빠른 전달(약 5 내지 30분의 TMAX), 빠른 초기 제거 상(처음 24시간 이내)에 이어서 긴 말단 반감기를 갖는 혈장 중 2상 약동학 프로파일을 생성시켰다(도 30a). 다양한 선택된 조직에서 상기 약물의 현저한 장시간 지속 축적이 추가로 입증된다. 주요 표적 기관(최고 노출/CMAX)은 신장, 이어서 간, 피부 및 비장이고, 최저는 뇌이다(데이터 도시 안 됨). 또한 도 30b에 나타낸 바와 같이, ASPH_0047이 24시간 내지 14일까지 약물학적으로 적합한 용량(약 50 ㎍/g, 10 μM과 동등함)으로 신장 조직 중에 남아있었으며, 결과적으로 상기 신장 조직에서 TGF-β2 mRNA 발현의 오랜 지속 및 현저한 억제가 생성되었고, 유효한 약 80% 표적 mRNA 하향조절이 14일 이상 관찰되었다.
실시예 28
면역결핍 마우스를 인간 786-O 신세포 암종 세포(도 30A), 췌장 Panc1 암세포(도 30B,C) 또는 마우스 SMA-560 신경교종 세포(도 30D)로 피하 주사하였다. 피하 종양이 100 내지 300 ㎣의 크기에 도달했을 때(확립된 종양), 동물을 염수(모의), 대조용 올리고뉴클레오타이드(대조군; 50 ㎎/㎏), 이와 관련된 불활성 올리고뉴클레오타이드(예를 들어 ASPH_0065 및 ASPH_0071; 50 ㎎/㎏) 또는 ASPH_0047 50 ㎎/㎏, 또는 지시된 용량으로 피하 처리하였다. 종양(도 30A 내지 D) 및 신장(도 30E 내지 F)을 최종 투여 후 24시간 째에 수거하였다. 이어서 종양/신장을 bDNA 분석에 의한 TGF-□2 및 GAPDH mRNA 수준의 측정을 위해 추가로 처리하였다. 이들 실험에서, 대조용 올리고뉴클레오타이드는 18-머, 3+3 LNA 갭머 스크램블드 서열이었다. 결과를 TGF-베타2/GAPDH mRNA 비로서 나타내며, 각각의 개별적인 시험된 샘플을 붉은 선으로 표시된 중간값과 함께 나타낸다. 개시된 실험 조건하에서(투여 스케줄 및 경로), Balb/c 마우스의 ASPH_0047의 전신 반복 투여는 확립된 피하 종양 및 신장에서 TGF-베타2 mRNA의 서열-특이적인 하향조절을 도출하였다.
실시예 29
Balb/c 마우스를 0일째에 마우스 Renca 세포로 신장 피막하(도 32A,B) 또는 i.v.(도 32C,D)에 주사하였다. 비히클 또는 지시된 올리고뉴클레오타이드에 의한 전신 처리를 7일째(도 32A; 50 ㎎/㎏, s.c. 매주 2회), 2주 연속해서 1일째(도 32B; 12.5 ㎎/㎏, s.c., 매주 2회), 또는 26 내지 27일 동안 7일째(도 32C 및 32D; 지시된 용량, s.c., 매주 2회)에 시작하였다. 폐 전이의 수를 거시적으로 평가하고, 폐 전이의 수준을 전이의 수(도 32A,C) 또는 폐 중량을 근거로(도 32B,D) 측정하였다. 결과를 중간값, 상한 사분위수 및 하한 사분위수, 및 90번째 및 10번째 백분위수와 함께 박스 플롯으로 나타낸다. 개시된 실험 설계하에서, ASPH_0047로 처리된 Balb/c 마우스는 마우스 Renca RCC 모델에서 감소된 폐 전이의 수 또는 감소된 폐 중량(폐 중량은 폐 전이의 정도와 상관이 있다)을 나타내었다.
실시예 30
인간 Panc-1 췌장암 세포를 형질감염제의 부재하에서(짐노틱 형질감염 또는 짐노틱 전달) 3.3 μM의 지시된 올리고뉴클레오타이드로 처리하였다. TGF-베타1(검은색 컬럼), TGF-베타2(흰색 컬럼) 및 TGF-베타3(빗줄 컬럼) mRNA의 발현을 형질감염 후 72시간째에 측정하였다. TGF-베타1 mRNA의 발현의 현저한 감소를 도 32에 나타낸다. 선택성 TGF-베타1 올리고뉴클레오타이드만이 TGF-베타1 mRNA 발현을 현저하게 억제하는 반면, 대조용 올리고뉴클레오타이드 LNA-scr은 어떠한 TGF-베타 동형의 발현에도 영향을 미치지 않는다.
실시예 31
Balb/c 마우스를 0일째에 유방 지방층에 마우스 4T1 세포로 주사하였다. 염수(모의), 범-TGF-베타 항체(1D11), 대조용 올리고뉴클레오타이드(LNA-scr), 또는 ASPH_0047에 의한 전신 처리를 3일째(30 ㎎/㎏, s.c. 매주 2회)에 시작하고 D28까지 계속하였으며, 이때 동물을 죽였다. 폐 전이의 수를 거시적으로 평가하고, 폐 전이의 수준을 전이의 수(좌측 패널) 또는 폐 중량을 근거로(우측 패널) 측정하였다. 개시된 실험 설계하에서, ASPH_0047에 의한 처리는 폐로의 전이를 감소시킨 반면, 양성 대조군, 단클론 TGF-베타 항체 1D11은 상기 모델에서 폐 전이에 영향을 미치지 않았다.
실시예 32
CB17 SCID 또는 Balb/c 누드 마우스(ASPH_0018 n=1 및 ASPH_0037 n=2를 제외하고, n=3-5)를 4일 또는 5일 연속해서(Q1Dx4-5) 14 내지 15 ㎎/㎏의 지시된 LNA-변형된 올리고뉴클레오타이드로 처리하였다. 혈장을 최종 처리후 24시간째에 수거하고 ALT 수준을 혈장에서 측정하였다. 결과를 중간값으로서 나타낸다. 상기 실험 조건하에서, 시험된 올리고뉴클레오타이드의 단지 6/48(12.5%)만이 혈장 ALT(간독성을 가리킨다)의 현저한 증가(>300 단위/l)를 유도하였다. 하기의 표 7은 전신 투여된 LNA-변형된 올리고뉴클레오타이드의 간 독성을 나타낸다.
Figure 112015103590211-pct00019
SEQUENCE LISTING <110> ISARNA Therapeutics GmbH <120> Modified TGF-beta oligonucleotide for use in a method of preventing and/or treating an ophthalmic disease <130> P101116PC10 <140> PCT/EP2014/056222 <141> 2014-03-27 <150> EP 13161474.5 <151> 2013-03-27 <150> EP 13173078.0 <151> 2013-06-20 <150> EP 13199826.2 <151> 2013-12-30 <150> EP 13199831.2 <151> 2013-12-30 <150> EP 13199838.7 <151> 2013-12-30 <160> 417 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2217 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ccccgccgcc gccgcccttc gcgccctggg ccatctccct cccacctccc tccgcggagc 60 agccagacag cgagggcccc ggccgggggc aggggggacg ccccgtccgg ggcacccccc 120 cggctctgag ccgcccgcgg ggccggcctc ggcccggagc ggaggaagga gtcgccgagg 180 agcagcctga ggccccagag tctgagacga gccgccgccg cccccgccac tgcggggagg 240 agggggagga ggagcgggag gagggacgag ctggtcggga gaagaggaaa aaaacttttg 300 agacttttcc gttgccgctg ggagccggag gcgcggggac ctcttggcgc gacgctgccc 360 cgcgaggagg caggacttgg ggaccccaga ccgcctccct ttgccgccgg ggacgcttgc 420 tccctccctg ccccctacac ggcgtccctc aggcgccccc attccggacc agccctcggg 480 agtcgccgac ccggcctccc gcaaagactt ttccccagac ctcgggcgca ccccctgcac 540 gccgccttca tccccggcct gtctcctgag cccccgcgca tcctagaccc tttctcctcc 600 aggagacgga tctctctccg acctgccaca gatcccctat tcaagaccac ccaccttctg 660 gtaccagatc gcgcccatct aggttatttc cgtgggatac tgagacaccc ccggtccaag 720 cctcccctcc accactgcgc ccttctccct gaggacctca gctttccctc gaggccctcc 780 taccttttgc cgggagaccc ccagcccctg caggggcggg gcctccccac cacaccagcc 840 ctgttcgcgc tctcggcagt gccggggggc gccgcctccc ccatgccgcc ctccgggctg 900 cggctgctgc cgctgctgct accgctgctg tggctactgg tgctgacgcc tggccggccg 960 gccgcgggac tatccacctg caagactatc gacatggagc tggtgaagcg gaagcgcatc 1020 gaggccatcc gcggccagat cctgtccaag ctgcggctcg ccagcccccc gagccagggg 1080 gaggtgccgc ccggcccgct gcccgaggcc gtgctcgccc tgtacaacag cacccgcgac 1140 cgggtggccg gggagagtgc agaaccggag cccgagcctg aggccgacta ctacgccaag 1200 gaggtcaccc gcgtgctaat ggtggaaacc cacaacgaaa tctatgacaa gttcaagcag 1260 agtacacaca gcatatatat gttcttcaac acatcagagc tccgagaagc ggtacctgaa 1320 cccgtgttgc tctcccgggc agagctgcgt ctgctgaggc tcaagttaaa agtggagcag 1380 cacgtggagc tgtaccagaa atacagcaac aattcctggc gatacctcag caaccggctg 1440 ctggcaccca gcgactcgcc agagtggtta tcttttgatg tcaccggagt tgtgcggcag 1500 tggttgagcc gtggagggga aattgagggc tttcgcctta gcgcccactg ctcctgtgac 1560 agcagggata acacactgca agtggacatc aacgggttca ctaccggccg ccgaggtgac 1620 ctggccacca ttcatggcat gaaccggcct ttcctgcttc tcatggccac cccgctggag 1680 agggcccagc atctgcaaag ctcccggcac cgccgagccc tggacaccaa ctattgcttc 1740 agctccacgg agaagaactg ctgcgtgcgg cagctgtaca ttgacttccg caaggacctc 1800 ggctggaagt ggatccacga gcccaagggc taccatgcca acttctgcct cgggccctgc 1860 ccctacattt ggagcctgga cacgcagtac agcaaggtcc tggccctgta caaccagcat 1920 aacccgggcg cctcggcggc gccgtgctgc gtgccgcagg cgctggagcc gctgcccatc 1980 gtgtactacg tgggccgcaa gcccaaggtg gagcagctgt ccaacatgat cgtgcgctcc 2040 tgcaagtgca gctgaggtcc cgccccgccc cgccccgccc cggcaggccc ggccccaccc 2100 cgccccgccc ccgctgcctt gcccatgggg gctgtattta aggacacccg tgccccaagc 2160 ccacctgggg ccccattaaa gatggagaga ggactgcgga aaaaaaaaaa aaaaaaa 2217 <210> 2 <211> 5882 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 gtgatgttat ctgctggcag cagaaggttc gctccgagcg gagctccaga agctcctgac 60 aagagaaaga cagattgaga tagagataga aagagaaaga gagaaagaga cagcagagcg 120 agagcgcaag tgaaagaggc aggggagggg gatggagaat attagcctga cggtctaggg 180 agtcatccag gaacaaactg aggggctgcc cggctgcaga caggaggaga cagagaggat 240 ctattttagg gtggcaagtg cctacctacc ctaagcgagc aattccacgt tggggagaag 300 ccagcagagg ttgggaaagg gtgggagtcc aagggagccc ctgcgcaacc ccctcaggaa 360 taaaactccc cagccagggt gtcgcaaggg ctgccgttgt gatccgcagg gggtgaacgc 420 aaccgcgacg gctgatcgtc tgtggctggg ttggcgtttg gagcaagaga aggaggagca 480 ggagaaggag ggagctggag gctggaagcg tttgcaagcg gcggcggcag caacgtggag 540 taaccaagcg ggtcagcgcg cgcccgccag ggtgtaggcc acggagcgca gctcccagag 600 caggatccgc gccgcctcag cagcctctgc ggcccctgcg gcacccgacc gagtaccgag 660 cgccctgcga agcgcaccct cctccccgcg gtgcgctggg ctcgccccca gcgcgcgcac 720 acgcacacac acacacacac acacacacgc acgcacacac gtgtgcgctt ctctgctccg 780 gagctgctgc tgctcctgct ctcagcgccg cagtggaagg caggaccgaa ccgctccttc 840 tttaaatata taaatttcag cccaggtcag cctcggcggc ccccctcacc gcgctcccgg 900 cgcccctccc gtcagttcgc cagctgccag ccccgggacc ttttcatctc ttcccttttg 960 gccggaggag ccgagttcag atccgccact ccgcacccga gactgacaca ctgaactcca 1020 cttcctcctc ttaaatttat ttctacttaa tagccactcg tctctttttt tccccatctc 1080 attgctccaa gaattttttt cttcttactc gccaaagtca gggttccctc tgcccgtccc 1140 gtattaatat ttccactttt ggaactactg gccttttctt tttaaaggaa ttcaagcagg 1200 atacgttttt ctgttgggca ttgactagat tgtttgcaaa agtttcgcat caaaaacaac 1260 aacaacaaaa aaccaaacaa ctctccttga tctatacttt gagaattgtt gatttctttt 1320 ttttattctg acttttaaaa acaacttttt tttccacttt tttaaaaaat gcactactgt 1380 gtgctgagcg cttttctgat cctgcatctg gtcacggtcg cgctcagcct gtctacctgc 1440 agcacactcg atatggacca gttcatgcgc aagaggatcg aggcgatccg cgggcagatc 1500 ctgagcaagc tgaagctcac cagtccccca gaagactatc ctgagcccga ggaagtcccc 1560 ccggaggtga tttccatcta caacagcacc agggacttgc tccaggagaa ggcgagccgg 1620 agggcggccg cctgcgagcg cgagaggagc gacgaagagt actacgccaa ggaggtttac 1680 aaaatagaca tgccgccctt cttcccctcc gaaaatgcca tcccgcccac tttctacaga 1740 ccctacttca gaattgttcg atttgacgtc tcagcaatgg agaagaatgc ttccaatttg 1800 gtgaaagcag agttcagagt ctttcgtttg cagaacccaa aagccagagt gcctgaacaa 1860 cggattgagc tatatcagat tctcaagtcc aaagatttaa catctccaac ccagcgctac 1920 atcgacagca aagttgtgaa aacaagagca gaaggcgaat ggctctcctt cgatgtaact 1980 gatgctgttc atgaatggct tcaccataaa gacaggaacc tgggatttaa aataagctta 2040 cactgtccct gctgcacttt tgtaccatct aataattaca tcatcccaaa taaaagtgaa 2100 gaactagaag caagatttgc aggtattgat ggcacctcca catataccag tggtgatcag 2160 aaaactataa agtccactag gaaaaaaaac agtgggaaga ccccacatct cctgctaatg 2220 ttattgccct cctacagact tgagtcacaa cagaccaacc ggcggaagaa gcgtgctttg 2280 gatgcggcct attgctttag aaatgtgcag gataattgct gcctacgtcc actttacatt 2340 gatttcaaga gggatctagg gtggaaatgg atacacgaac ccaaagggta caatgccaac 2400 ttctgtgctg gagcatgccc gtatttatgg agttcagaca ctcagcacag cagggtcctg 2460 agcttatata ataccataaa tccagaagca tctgcttctc cttgctgcgt gtcccaagat 2520 ttagaacctc taaccattct ctactacatt ggcaaaacac ccaagattga acagctttct 2580 aatatgattg taaagtcttg caaatgcagc taaaattctt ggaaaagtgg caagaccaaa 2640 atgacaatga tgatgataat gatgatgacg acgacaacga tgatgcttgt aacaagaaaa 2700 cataagagag ccttggttca tcagtgttaa aaaatttttg aaaaggcggt actagttcag 2760 acactttgga agtttgtgtt ctgtttgtta aaactggcat ctgacacaaa aaaagttgaa 2820 ggccttattc tacatttcac ctactttgta agtgagagag acaagaagca aatttttttt 2880 aaagaaaaaa ataaacactg gaagaattta ttagtgttaa ttatgtgaac aacgacaaca 2940 acaacaacaa caacaaacag gaaaatccca ttaagtggag ttgctgtacg taccgttcct 3000 atcccgcgcc tcacttgatt tttctgtatt gctatgcaat aggcaccctt cccattctta 3060 ctcttagagt taacagtgag ttatttattg tgtgttacta tataatgaac gtttcattgc 3120 ccttggaaaa taaaacaggt gtataaagtg gagaccaaat actttgccag aaactcatgg 3180 atggcttaag gaacttgaac tcaaacgagc cagaaaaaaa gaggtcatat taatgggatg 3240 aaaacccaag tgagttatta tatgaccgag aaagtctgca ttaagataaa gaccctgaaa 3300 acacatgtta tgtatcagct gcctaaggaa gcttcttgta aggtccaaaa actaaaaaga 3360 ctgttaataa aagaaacttt cagtcagaat aagtctgtaa gttttttttt ttctttttaa 3420 ttgtaaatgg ttctttgtca gtttagtaaa ccagtgaaat gttgaaatgt tttgacatgt 3480 actggtcaaa cttcagacct taaaatattg ctgtatagct atgctatagg ttttttcctt 3540 tgttttggta tatgtaacca tacctatatt attaaaatag atggatatag aagccagcat 3600 aattgaaaac acatctgcag atctcttttg caaactatta aatcaaaaca ttaactactt 3660 tatgtgtaat gtgtaaattt ttaccatatt ttttatattc tgtaataatg tcaactatga 3720 tttagattga cttaaatttg ggctcttttt aatgatcact cacaaatgta tgtttctttt 3780 agctggccag tacttttgag taaagcccct atagtttgac ttgcactaca aatgcatttt 3840 ttttttaata acatttgccc tacttgtgct ttgtgtttct ttcattatta tgacataagc 3900 tacctgggtc cacttgtctt ttcttttttt tgtttcacag aaaagatggg ttcgagttca 3960 gtggtcttca tcttccaagc atcattacta accaagtcag acgttaacaa atttttatgt 4020 taggaaaagg aggaatgtta tagatacata gaaaattgaa gtaaaatgtt ttcattttag 4080 caaggattta gggttctaac taaaactcag aatctttatt gagttaagaa aagtttctct 4140 accttggttt aatcaatatt tttgtaaaat cctattgtta ttacaaagag gacacttcat 4200 aggaaacatc tttttcttta gtcaggtttt taatattcag ggggaaattg aaagatatat 4260 attttagtcg atttttcaaa aggggaaaaa agtccaggtc agcataagtc attttgtgta 4320 tttcactgaa gttataaggt ttttataaat gttctttgaa ggggaaaagg cacaagccaa 4380 tttttcctat gatcaaaaaa ttctttcttt cctctgagtg agagttatct atatctgagg 4440 ctaaagttta ccttgcttta ataaataatt tgccacatca ttgcagaaga ggtatcctca 4500 tgctggggtt aatagaatat gtcagtttat cacttgtcgc ttatttagct ttaaaataaa 4560 aattaatagg caaagcaatg gaatatttgc agtttcacct aaagagcagc ataaggaggc 4620 gggaatccaa agtgaagttg tttgatatgg tctacttctt ttttggaatt tcctgaccat 4680 taattaaaga attggatttg caagtttgaa aactggaaaa gcaagagatg ggatgccata 4740 atagtaaaca gcccttgtgt tggatgtaac ccaatcccag atttgagtgt gtgttgatta 4800 tttttttgtc ttccactttt ctattatgtg taaatcactt ttatttctgc agacattttc 4860 ctctcagata ggatgacatt ttgttttgta ttattttgtc tttcctcatg aatgcactga 4920 taatatttta aatgctctat tttaagatct cttgaatctg tttttttttt ttttaatttg 4980 ggggttctgt aaggtcttta tttcccataa gtaaatattg ccatgggagg ggggtggagg 5040 tggcaaggaa ggggtgaagt gctagtatgc aagtgggcag caattatttt tgtgttaatc 5100 agcagtacaa tttgatcgtt ggcatggtta aaaaatggaa tataagatta gctgttttgt 5160 attttgatga ccaattacgc tgtattttaa cacgatgtat gtctgttttt gtggtgctct 5220 agtggtaaat aaattatttc gatgatatgt ggatgtcttt ttcctatcag taccatcatc 5280 gagtctagaa aacacctgtg atgcaataag actatctcaa gctggaaaag tcataccacc 5340 tttccgattg ccctctgtgc tttctccctt aaggacagtc acttcagaag tcatgcttta 5400 aagcacaaga gtcaggccat atccatcaag gatagaagaa atccctgtgc cgtcttttta 5460 ttcccttatt tattgctatt tggtaattgt ttgagattta gtttccatcc agcttgactg 5520 ccgaccagaa aaaatgcaga gagatgtttg caccatgctt tggctttctg gttctatgtt 5580 ctgccaacgc cagggccaaa agaactggtc tagacagtat cccctgtagc cccataactt 5640 ggatagttgc tgagccagcc agatataaca agagccacgt gctttctggg gttggttgtt 5700 tgggatcagc tacttgcctg tcagtttcac tggtaccact gcaccacaaa caaaaaaacc 5760 caccctattt cctccaattt ttttggctgc tacctacaag accagactcc tcaaacgagt 5820 tgccaatctc ttaataaata ggattaataa aaaaagtaat tgtgactcaa aaaaaaaaaa 5880 aa 5882 <210> 3 <211> 3183 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 gacagaagca atggccgagg cagaagacaa gccgaggtgc tggtgaccct gggcgtctga 60 gtggatgatt ggggctgctg cgctcagagg cctgcctccc tgccttccaa tgcatataac 120 cccacacccc agccaatgaa gacgagaggc agcgtgaaca aagtcattta gaaagccccc 180 gaggaagtgt aaacaaaaga gaaagcatga atggagtgcc tgagagacaa gtgtgtcctg 240 tactgccccc acctttagct gggccagcaa ctgcccggcc ctgcttctcc ccacctactc 300 actggtgatc tttttttttt tacttttttt tcccttttct tttccattct cttttcttat 360 tttctttcaa ggcaaggcaa ggattttgat tttgggaccc agccatggtc cttctgcttc 420 ttctttaaaa tacccacttt ctccccatcg ccaagcggcg tttggcaata tcagatatcc 480 actctattta tttttaccta aggaaaaact ccagctccct tcccactccc agctgccttg 540 ccacccctcc cagccctctg cttgccctcc acctggcctg ctgggagtca gagcccagca 600 aaacctgttt agacacatgg acaagaatcc cagcgctaca aggcacacag tccgcttctt 660 cgtcctcagg gttgccagcg cttcctggaa gtcctgaagc tctcgcagtg cagtgagttc 720 atgcaccttc ttgccaagcc tcagtctttg ggatctgggg aggccgcctg gttttcctcc 780 ctccttctgc acgtctgctg gggtctcttc ctctccaggc cttgccgtcc ccctggcctc 840 tcttcccagc tcacacatga agatgcactt gcaaagggct ctggtggtcc tggccctgct 900 gaactttgcc acggtcagcc tctctctgtc cacttgcacc accttggact tcggccacat 960 caagaagaag agggtggaag ccattagggg acagatcttg agcaagctca ggctcaccag 1020 cccccctgag ccaacggtga tgacccacgt cccctatcag gtcctggccc tttacaacag 1080 cacccgggag ctgctggagg agatgcatgg ggagagggag gaaggctgca cccaggaaaa 1140 caccgagtcg gaatactatg ccaaagaaat ccataaattc gacatgatcc aggggctggc 1200 ggagcacaac gaactggctg tctgccctaa aggaattacc tccaaggttt tccgcttcaa 1260 tgtgtcctca gtggagaaaa atagaaccaa cctattccga gcagaattcc gggtcttgcg 1320 ggtgcccaac cccagctcta agcggaatga gcagaggatc gagctcttcc agatccttcg 1380 gccagatgag cacattgcca aacagcgcta tatcggtggc aagaatctgc ccacacgggg 1440 cactgccgag tggctgtcct ttgatgtcac tgacactgtg cgtgagtggc tgttgagaag 1500 agagtccaac ttaggtctag aaatcagcat tcactgtcca tgtcacacct ttcagcccaa 1560 tggagatatc ctggaaaaca ttcacgaggt gatggaaatc aaattcaaag gcgtggacaa 1620 tgaggatgac catggccgtg gagatctggg gcgcctcaag aagcagaagg atcaccacaa 1680 ccctcatcta atcctcatga tgattccccc acaccggctc gacaacccgg gccagggggg 1740 tcagaggaag aagcgggctt tggacaccaa ttactgcttc cgcaacttgg aggagaactg 1800 ctgtgtgcgc cccctctaca ttgacttccg acaggatctg ggctggaagt gggtccatga 1860 acctaagggc tactatgcca acttctgctc aggcccttgc ccatacctcc gcagtgcaga 1920 cacaacccac agcacggtgc tgggactgta caacactctg aaccctgaag catctgcctc 1980 gccttgctgc gtgccccagg acctggagcc cctgaccatc ctgtactatg ttgggaggac 2040 ccccaaagtg gagcagctct ccaacatggt ggtgaagtct tgtaaatgta gctgagaccc 2100 cacgtgcgac agagagaggg gagagagaac caccactgcc tgactgcccg ctcctcggga 2160 aacacacaag caacaaacct cactgagagg cctggagccc acaaccttcg gctccgggca 2220 aatggctgag atggaggttt ccttttggaa catttctttc ttgctggctc tgagaatcac 2280 ggtggtaaag aaagtgtggg tttggttaga ggaaggctga actcttcaga acacacagac 2340 tttctgtgac gcagacagag gggatgggga tagaggaaag ggatggtaag ttgagatgtt 2400 gtgtggcaat gggatttggg ctaccctaaa gggagaagga agggcagaga atggctgggt 2460 cagggccaga ctggaagaca cttcagatct gaggttggat ttgctcattg ctgtaccaca 2520 tctgctctag ggaatctgga ttatgttata caaggcaagc attttttttt tttttttaaa 2580 gacaggttac gaagacaaag tcccagaatt gtatctcata ctgtctggga ttaagggcaa 2640 atctattact tttgcaaact gtcctctaca tcaattaaca tcgtgggtca ctacagggag 2700 aaaatccagg tcatgcagtt cctggcccat caactgtatt gggccttttg gatatgctga 2760 acgcagaaga aagggtggaa atcaaccctc tcctgtctgc cctctgggtc cctcctctca 2820 cctctccctc gatcatattt ccccttggac acttggttag acgccttcca ggtcaggatg 2880 cacatttctg gattgtggtt ccatgcagcc ttggggcatt atgggttctt cccccacttc 2940 ccctccaaga ccctgtgttc atttggtgtt cctggaagca ggtgctacaa catgtgaggc 3000 attcggggaa gctgcacatg tgccacacag tgacttggcc ccagacgcat agactgaggt 3060 ataaagacaa gtatgaatat tactctcaaa atctttgtat aaataaatat ttttggggca 3120 tcctggatga tttcatcttc tggaatattg tttctagaac agtaaaagcc ttattctaag 3180 gtg 3183 <210> 4 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> filler to provide correct SEQ ID numbering <400> 4 aaaaaaaaaa 10 <210> 5 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 5 gaccagatgc agga 14 <210> 6 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 6 gcgaccgtga ccagat 16 <210> 7 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 7 gcgcgaccgt gacc 14 <210> 8 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 8 agcgcgaccg tga 13 <210> 9 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 9 gaccgtgacc agat 14 <210> 10 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 10 ctgcccgcgg at 12 <210> 11 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 11 tctgcccgcg gat 13 <210> 12 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 12 ggatctgccc gcgga 15 <210> 13 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 13 cttgctcagg atctgcc 17 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 14 gctcaggatc tgcccgcgga 20 <210> 15 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 15 ggatcgcctc gat 13 <210> 16 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 16 ccgcggatcg cc 12 <210> 17 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 17 acctccttgg cgtagta 17 <210> 18 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 18 cctccttggc gtagta 16 <210> 19 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 19 ctccttggcg tagta 15 <210> 20 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 20 tccttggcgt agta 14 <210> 21 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 21 cagaagttgg cat 13 <210> 22 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 22 aagtgggcgg gat 13 <210> 23 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 23 gcgggatggc at 12 <210> 24 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 24 gaaatcacct ccg 13 <210> 25 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 25 aagtgggcgg gat 13 <210> 26 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 26 tgtagcgctg ggt 13 <210> 27 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 27 cgaaggagag cca 13 <210> 28 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 28 tcgcgctcgc aggc 14 <210> 29 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 29 aagtgggcgg gatg 14 <210> 30 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 30 atgtagcgct gggt 14 <210> 31 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 31 cgaaggagag ccat 14 <210> 32 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 32 gaaagtgggc gggat 15 <210> 33 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 33 cgaaggagag ccatt 15 <210> 34 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 34 cgatcctctt gcgcat 16 <210> 35 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 35 aagtgggcgg gatggc 16 <210> 36 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 36 gatggaaatc acctccg 17 <210> 37 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 37 aaacctcctt ggcgtag 17 <210> 38 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 38 tagaaagtgg gcgggat 17 <210> 39 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 39 ggcgggatgg cat 13 <210> 40 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 40 gggtctgtag aaagtg 16 <210> 41 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 41 gaaggagagc cattc 15 <210> 42 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 42 ccaggttcct gtctt 15 <210> 43 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 43 tctgatcacc actgg 15 <210> 44 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 44 tttctgatca ccactgg 17 <210> 45 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 45 gtctgtagga gggca 15 <210> 46 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 46 agtctgtagg agggca 16 <210> 47 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 47 tctgtaggag ggc 13 <210> 48 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 48 cagatgccag ttttaac 17 <210> 49 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 49 caaagtattt ggtctcc 17 <210> 50 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 50 ccttaagcca tccatga 17 <210> 51 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 51 gtactggcca gctaa 15 <210> 52 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 52 gcctcgatcc tcttgcgcat 20 <210> 53 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 53 aaacctcctt ggcgtagtac 20 <210> 54 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 54 gaaagtgggc gggatggcat 20 <210> 55 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 55 gaattgctcg cttaggg 17 <210> 56 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 56 cgtcgcggtt gcgttca 17 <210> 57 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 57 cgtggcctac accctgg 17 <210> 58 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 58 ttctaaagca ataggcc 17 <210> 59 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 59 agaatggtta gaggttc 17 <210> 60 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 60 tctgaactag taccgcc 17 <210> 61 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 61 cccattaata tgacctc 17 <210> 62 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 62 tttagttaga accctaa 17 <210> 63 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 63 cctcagatat agataac 17 <210> 64 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 64 tactattatg gcatccc 17 <210> 65 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 65 tgcccacttg catacta 17 <210> 66 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 66 agcgtaattg gtcatca 17 <210> 67 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 67 cgttggcaga acataga 17 <210> 68 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 68 gggatactgt ctagacc 17 <210> 69 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 69 attggcaact cgtttga 17 <210> 70 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 70 cgtcaggcta atattc 16 <210> 71 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 71 ggatgactcc ctagac 16 <210> 72 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 72 gtcgcggttg cgttca 16 <210> 73 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 73 ctcggtactc ggtcgg 16 <210> 74 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 74 ggttcggtcc tgcctt 16 <210> 75 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 75 aataggccgc atccaa 16 <210> 76 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 76 aactagtacc gccttt 16 <210> 77 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 77 tcggtcatat aataac 16 <210> 78 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 78 agaccgtcag gctaa 15 <210> 79 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 79 gtcgcggttg cgttc 15 <210> 80 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 80 ttccactgcg gcgct 15 <210> 81 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 81 aaggagcggt tcggt 15 <210> 82 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 82 ctcgggtgcg gagtg 15 <210> 83 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 83 ctgactttgg cgagt 15 <210> 84 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 84 gataggaacg gtacg 15 <210> 85 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 85 cactttggat tcccg 15 <210> 86 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 86 gtcgcggttg cgtt 14 <210> 87 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 87 tacaccctgg cggg 14 <210> 88 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 88 ctcggtactc ggtc 14 <210> 89 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 89 aggagcggtt cggt 14 <210> 90 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 90 gtctcgggtg cgga 14 <210> 91 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 91 tacgggacgg gcag 14 <210> 92 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 92 cgtcgctcct ctcg 14 <210> 93 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 93 tagcgctggg ttgg 14 <210> 94 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 94 aagcaatagg ccgc 14 <210> 95 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 95 tacgggcatg ctcc 14 <210> 96 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 96 aggcgcggga tagg 14 <210> 97 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 97 tttggattcc cgcc 14 <210> 98 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 98 accactagag cacc 14 <210> 99 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 99 gcgttggcag aaca 14 <210> 100 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 100 ttgctcgctt agg 13 <210> 101 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 101 gtcgcggttg cgt 13 <210> 102 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 102 ggcgctcggt act 13 <210> 103 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 103 atctgaactc ggc 13 <210> 104 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 104 cggttggtct gtt 13 <210> 105 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 105 tccaccctag atc 13 <210> 106 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 106 ctagtaccgc ctt 13 <210> 107 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 107 ggtcggcagt caa 13 <210> 108 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 108 cttgcgacac cc 12 <210> 109 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 109 gagcggttcg gt 12 <210> 110 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 110 acacagtagt gcat 14 <210> 111 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 111 gggtctgtag aaag 14 <210> 112 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 112 ggttggagat gtta 14 <210> 113 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 113 tgggttggag atgt 14 <210> 114 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 114 gctgggttgg agat 14 <210> 115 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 115 gcgctgggtt ggag 14 <210> 116 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 116 agcgctgggt tgga 14 <210> 117 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 117 tagcgctggg ttgg 14 <210> 118 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 118 gtagcgctgg gttg 14 <210> 119 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 119 gatgtagcgc tggg 14 <210> 120 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 120 ccattcgcct tctg 14 <210> 121 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 121 gagagccatt cgcc 14 <210> 122 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 122 agcagggaca gtgt 14 <210> 123 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 123 gcaggagatg tggg 14 <210> 124 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 124 cggttggtct gttg 14 <210> 125 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 125 ccggttggtc tgtt 14 <210> 126 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 126 gccggttggt ctgt 14 <210> 127 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 127 agttggcatt gtac 14 <210> 128 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 128 ggttagaggt tcta 14 <210> 129 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 129 atggttagag gttc 14 <210> 130 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 130 agaatggtta gagg 14 <210> 131 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 131 agagaatggt taga 14 <210> 132 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 132 cgttgtcgtc gtca 14 <210> 133 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 133 accaaggctc tctt 14 <210> 134 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 134 gcttcttgtc tctc 14 <210> 135 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 135 ggaacggtac gtac 14 <210> 136 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 136 taggaacggt acgt 14 <210> 137 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 137 gggataggaa cggt 14 <210> 138 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 138 cgcgggatag gaac 14 <210> 139 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 139 aggcgcggga tagg 14 <210> 140 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 140 gtcaagctgg atgg 14 <210> 141 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 141 tctgtaggag ggc 13 <210> 142 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 142 gaccagatgc agga 14 <210> 143 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 143 ctccttggcg tagta 15 <210> 144 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 144 cctccttggc gtagta 16 <210> 145 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 145 cagatgccag ttttaac 17 <210> 146 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 146 agcgtaattg gtcatca 17 <210> 147 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 147 agtatttggt ctcc 14 <210> 148 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 148 aagtatttgg tctc 14 <210> 149 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 149 caaagtattt ggtctcc 17 <210> 150 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 150 aagtatttgg tctcc 15 <210> 151 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 151 agctcgtccc tcctccc 17 <210> 152 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 152 gagggctggt ccggaat 17 <210> 153 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 153 cgagggctgg tccggaa 17 <210> 154 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 154 gagggcggca tggggga 17 <210> 155 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 155 gcgggtgctg ttgtaca 17 <210> 156 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 156 cgcgggtgct gttgtac 17 <210> 157 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 157 gtcgcgggtg ctgttgt 17 <210> 158 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 158 ggtcgcgggt gctgttg 17 <210> 159 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 159 ccggtcgcgg gtgctgt 17 <210> 160 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 160 cccggtcgcg ggtgctg 17 <210> 161 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 161 agcacgcggg tgacctc 17 <210> 162 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 162 ttagcacgcg ggtgacc 17 <210> 163 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 163 gggctcgtgg atccact 17 <210> 164 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 164 ccttgggctc gtggatc 17 <210> 165 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 165 tggcatggta gcccttg 17 <210> 166 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 166 cgagggctgg tccgga 16 <210> 167 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 167 gcgggtgctg ttgtac 16 <210> 168 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 168 gcacgcgggt gacctc 16 <210> 169 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 169 ccttgggctc gtggat 16 <210> 170 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 170 ggcatggtag cccttg 16 <210> 171 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 171 gggtgctgtt gtac 14 <210> 172 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 172 tcgcgggtgc tgtt 14 <210> 173 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 173 gtcgcgggtg ctgt 14 <210> 174 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 174 ctcgtggatc cact 14 <210> 175 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 175 atggtagccc ttgg 14 <210> 176 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 176 tggcatggta gccc 14 <210> 177 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 177 gaagttggca tggt 14 <210> 178 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 178 tcgcgggtgc tgt 13 <210> 179 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 179 cacccggtcg cgg 13 <210> 180 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 180 ccacccggtc gcg 13 <210> 181 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 181 cgccaggaat tgt 13 <210> 182 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 182 ggctcgtgga tcc 13 <210> 183 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 183 tgggctcgtg gat 13 <210> 184 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 184 gcatggtagc cct 13 <210> 185 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 185 agttggcatg gta 13 <210> 186 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 186 ttgcaggagc gca 13 <210> 187 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 187 attagcacgc gggtgac 17 <210> 188 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 188 accattagca cgcgggt 17 <210> 189 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 189 caccattagc acgcggg 17 <210> 190 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 190 ccaccattag cacgcgg 17 <210> 191 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 191 tccaccatta gcacgcg 17 <210> 192 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 192 tccaccttgg gcttgcg 17 <210> 193 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 193 ttagcacgcg ggtgac 16 <210> 194 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 194 accattagca cgcggg 16 <210> 195 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 195 caccattagc acgcgg 16 <210> 196 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 196 caccattagc acgcg 15 <210> 197 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 197 gcggcacgca gcacg 15 <210> 198 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 198 tcgatgcgct tccg 14 <210> 199 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 199 tagcacgcgg gtga 14 <210> 200 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 200 attagcacgc gggt 14 <210> 201 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 201 cattagcacg cggg 14 <210> 202 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 202 accattagca cgcg 14 <210> 203 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 203 caccattagc acgc 14 <210> 204 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 204 ccaccattag cacg 14 <210> 205 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 205 tccaccatta gcac 14 <210> 206 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 206 gaccttgctg tact 14 <210> 207 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 207 ggaccttgct gtac 14 <210> 208 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 208 aggaccttgc tgta 14 <210> 209 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 209 cggcacgcag cacg 14 <210> 210 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 210 accttgggct tgcg 14 <210> 211 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 211 ttagcacgcg ggt 13 <210> 212 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 212 accattagca cgc 13 <210> 213 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 213 cggcacgcag cac 13 <210> 214 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 214 caccagctcc atgtcga 17 <210> 215 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 215 tcgcgggtgc tgttgta 17 <210> 216 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 216 gtgtccaggc tccaaat 17 <210> 217 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 217 gctcgtccct cctccc 16 <210> 218 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 218 accagctcgt ccctcc 16 <210> 219 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 219 ggaggccccg cccctg 16 <210> 220 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 220 catgggggag gcggcg 16 <210> 221 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 221 accagctcca tgtcga 16 <210> 222 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 222 ggtcgcgggt gctgtt 16 <210> 223 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 223 ggaccttgct gtactg 16 <210> 224 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 224 tccaccttgg gcttgc 16 <210> 225 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 225 agctcgtccc tcctc 15 <210> 226 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 226 ccagctcgtc cctcc 15 <210> 227 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 227 gagggctggt ccgga 15 <210> 228 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 228 tcccgagggc tggtc 15 <210> 229 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 229 cggcatgggg gaggc 15 <210> 230 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 230 cagctccatg tcgat 15 <210> 231 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 231 accagctcca tgtcg 15 <210> 232 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 232 tcgcgggtgc tgttg 15 <210> 233 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 233 gtcgcgggtg ctgtt 15 <210> 234 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 234 ggtcgcgggt gctgt 15 <210> 235 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 235 agcacgcggg tgacc 15 <210> 236 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 236 tagcacgcgg gtgac 15 <210> 237 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 237 cattagcacg cgggt 15 <210> 238 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 238 tccaccatta gcacg 15 <210> 239 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 239 ccaggaattg ttgct 15 <210> 240 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 240 ttgggctcgt ggatc 15 <210> 241 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 241 cttgggctcg tggat 15 <210> 242 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 242 ttggcatggt agccc 15 <210> 243 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 243 gaagttggca tggta 15 <210> 244 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 244 agaagttggc atggt 15 <210> 245 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 245 tgtccaggct ccaaa 15 <210> 246 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 246 aggaccttgc tgtac 15 <210> 247 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 247 caccttgggc ttgcg 15 <210> 248 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 248 agctcgtccc tcct 14 <210> 249 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 249 cagctcgtcc ctcc 14 <210> 250 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 250 accagctcgt ccct 14 <210> 251 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 251 cccgagggct ggtc 14 <210> 252 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 252 gcggcatggg ggag 14 <210> 253 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 253 gtcttgcagg tgga 14 <210> 254 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 254 tcgatgcgct tccg 14 <210> 255 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 255 ggacaggatc tggc 14 <210> 256 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 256 acctccccct ggct 14 <210> 257 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 257 accattagca cgcg 14 <210> 258 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 258 cagcagttct tctc 14 <210> 259 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 259 tacagctgcc gcac 14 <210> 260 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 260 agttggcatg gtag 14 <210> 261 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 261 aagttggcat ggta 14 <210> 262 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 262 gaagttggca tggt 14 <210> 263 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 263 tccaggctcc aaat 14 <210> 264 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 264 accttgctgt actg 14 <210> 265 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 265 ttgcaggagc gcac 14 <210> 266 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 266 gcagaagttg gcat 14 <210> 267 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta1 oligonucleotide <400> 267 cgggtgctgt tgta 14 <210> 268 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 268 cccagcggca acggaaa 17 <210> 269 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 269 caagaggtcc ccgcgcc 17 <210> 270 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 270 gcgtccccgg cggcaaa 17 <210> 271 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 271 ggtcggcgac tcccgag 17 <210> 272 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 272 tcggagagag atccgtc 17 <210> 273 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 273 atcccacgga aataacc 17 <210> 274 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 274 ctcagtatcc cacggaa 17 <210> 275 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 275 actgccgaga gcgcgaa 17 <210> 276 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 276 ctgatgtgtt gaagaac 17 <210> 277 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 277 tgaggtatcg ccaggaa 17 <210> 278 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 278 actgccgcac aactccg 17 <210> 279 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 279 cggcccacgt agtacac 17 <210> 280 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 280 cccagcggca acggaa 16 <210> 281 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 281 tcgcgccaag aggtcc 16 <210> 282 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 282 ggtcggcgac tcccga 16 <210> 283 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 283 gtcggagaga gatccg 16 <210> 284 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 284 tcagtatccc acggaa 16 <210> 285 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 285 cgagagcgcg aacagg 16 <210> 286 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 286 actgccgaga gcgcga 16 <210> 287 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 287 ggcgtcagca ccagta 16 <210> 288 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 288 ggtttccacc attagc 16 <210> 289 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 289 gaggtatcgc caggaa 16 <210> 290 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 290 aaccactgcc gcacaa 16 <210> 291 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 291 cggcccacgt agtaca 16 <210> 292 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 292 cggcggctcg tctca 15 <210> 293 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 293 cccagcggca acgga 15 <210> 294 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 294 tcgcgccaag aggtc 15 <210> 295 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 295 cgtcgcgcca agagg 15 <210> 296 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 296 ggagcaagcg tcccc 15 <210> 297 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 297 gtgcgcccga ggtct 15 <210> 298 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 298 gtctaggatg cgcgg 15 <210> 299 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 299 cagtatccca cggaa 15 <210> 300 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 300 ccgagagcgc gaaca 15 <210> 301 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 301 ggcgtcagca ccagt 15 <210> 302 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 302 gttgctgagg tatcg 15 <210> 303 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 303 accactgccg cacaa 15 <210> 304 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 304 cggcccacgt agtac 15 <210> 305 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 305 ctcggcgact cctt 14 <210> 306 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 306 agcggcaacg gaaa 14 <210> 307 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 307 tcgcgccaag aggt 14 <210> 308 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 308 tccccggcgg caaa 14 <210> 309 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 309 tgcgcccgag gtct 14 <210> 310 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 310 gtctaggatg cgcg 14 <210> 311 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 311 ggtcggagag agat 14 <210> 312 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 312 cacggaaata acct 14 <210> 313 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 313 agagcgcgaa cagg 14 <210> 314 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 314 atagtcccgc ggcc 14 <210> 315 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 315 tagtagtcgg cctc 14 <210> 316 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 316 atagatttcg ttgt 14 <210> 317 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 317 gaggtatcgc cagg 14 <210> 318 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 318 gccgcacaac tccg 14 <210> 319 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 319 tcgcgccaag agg 13 <210> 320 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 320 aagcgtcccc ggc 13 <210> 321 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 321 gacgccgtgt agg 13 <210> 322 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 322 gtcggcgact ccc 13 <210> 323 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 323 tgcgcccgag gtc 13 <210> 324 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 324 gtcggagaga gat 13 <210> 325 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 325 tcccacggaa ata 13 <210> 326 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 326 tgccgagagc gcg 13 <210> 327 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 327 tagtcccgcg gcc 13 <210> 328 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 328 tagtagtcgg cct 13 <210> 329 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 329 catagatttc gtt 13 <210> 330 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 330 tttaacttga gcc 13 <210> 331 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 331 gaggtatcgc cag 13 <210> 332 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 332 actccggtga cat 13 <210> 333 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 333 gcccacgtag tac 13 <210> 334 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 334 tcggcgactc cc 12 <210> 335 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta oligonucleotide <400> 335 gtcggcgact cc 12 <210> 336 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 336 caggaagcgc tggcaac 17 <210> 337 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 337 ggtgcatgaa ctcactg 17 <210> 338 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 338 gtcccctaat ggcttcc 17 <210> 339 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 339 atctgtcccc taatggc 17 <210> 340 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 340 ccgggtgctg ttgtaaa 17 <210> 341 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 341 cctggatcat gtcgaat 17 <210> 342 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 342 ccctggatca tgtcgaa 17 <210> 343 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 343 gtagcacctg cttccag 17 <210> 344 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 344 gggctttcta aatgac 16 <210> 345 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 345 tgactcccag caggcc 16 <210> 346 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 346 gtgcatgaac tcactg 16 <210> 347 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 347 ggtgcatgaa ctcact 16 <210> 348 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 348 atctgtcccc taatgg 16 <210> 349 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 349 cgggtgctgt tgtaaa 16 <210> 350 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 350 ccgggtgctg ttgtaa 16 <210> 351 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 351 cctggatcat gtcgaa 16 <210> 352 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 352 ccctggatca tgtcga 16 <210> 353 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 353 tttgaatttg atttcc 16 <210> 354 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 354 gggcctgagc agaagt 16 <210> 355 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 355 gggggctttc taaat 15 <210> 356 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 356 tttgtttaca cttcc 15 <210> 357 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 357 ccagctaaag gtggg 15 <210> 358 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 358 atggctgggt cccaa 15 <210> 359 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 359 gagtttttcc ttagg 15 <210> 360 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 360 aggggtggca aggca 15 <210> 361 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 361 tgactcccag caggc 15 <210> 362 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 362 gaagcgctgg caacc 15 <210> 363 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 363 gtgcatgaac tcact 15 <210> 364 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 364 gtggtgcaag tggac 15 <210> 365 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 365 ctaatggctt ccacc 15 <210> 366 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 366 cccctaatgg cttcc 15 <210> 367 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 367 atctgtcccc taatg 15 <210> 368 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 368 gatctgtccc ctaat 15 <210> 369 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 369 agatctgtcc cctaa 15 <210> 370 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 370 ggtgctgttg taaag 15 <210> 371 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 371 ccgggtgctg ttgta 15 <210> 372 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 372 gatcatgtcg aattt 15 <210> 373 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 373 cctggatcat gtcga 15 <210> 374 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 374 ccctggatca tgtcg 15 <210> 375 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 375 gatttccatc acctc 15 <210> 376 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 376 ttgaatttga tttcc 15 <210> 377 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 377 agcagttctc ctcca 15 <210> 378 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 378 gcctgagcag aagtt 15 <210> 379 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 379 gggcaagggc ctgag 15 <210> 380 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 380 cccacacttt cttta 15 <210> 381 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 381 tagcacctgc ttcca 15 <210> 382 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 382 cgggggcttt ctaa 14 <210> 383 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 383 ccattcatgc tttc 14 <210> 384 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 384 aagcgctggc aacc 14 <210> 385 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 385 accagagccc tttg 14 <210> 386 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 386 cccctaatgg cttc 14 <210> 387 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 387 gtcccctaat ggct 14 <210> 388 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 388 atctgcccct aat 13 <210> 389 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 389 agatctgtcc ccta 14 <210> 390 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 390 cgggtgctgt tgta 14 <210> 391 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 391 atcatgtcga attt 14 <210> 392 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 392 ccctggatca tgtc 14 <210> 393 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 393 cctttgaatt tgat 14 <210> 394 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 394 ttgcggaagc agta 14 <210> 395 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 395 gcctgagcag aagt 14 <210> 396 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 396 gggggctttc taa 13 <210> 397 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 397 agcgctggca acc 13 <210> 398 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 398 cccctaatgg ctt 13 <210> 399 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 399 tcccctaatg gct 13 <210> 400 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 400 tcatgtcgaa ttt 13 <210> 401 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta3 oligonucleotide <400> 401 atcatgtcga att 13 <210> 402 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 402 agtatttggt ctcc 14 <210> 403 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 403 agtatttggt ctcca 15 <210> 404 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 404 aagtatttgg tctcc 15 <210> 405 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 405 caaagtattt ggtctc 16 <210> 406 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 406 caaagtattt ggtct 15 <210> 407 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 407 caaagtattt ggtc 14 <210> 408 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 408 aaagtatttg gtctcc 16 <210> 409 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 409 aaagtatttg gtctc 15 <210> 410 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 410 aaagtatttg gtct 14 <210> 411 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 411 aaagtatttg gtc 13 <210> 412 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 412 aagtatttgg tct 13 <210> 413 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 413 aagtatttgg tc 12 <210> 414 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 414 agtatttggt ctc 13 <210> 415 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 415 agtatttggt ct 12 <210> 416 <211> 11 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 416 agtatttggt c 11 <210> 417 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified TGF-beta2 oligonucleotide <400> 417 aagtatttgg tctc 14

Claims (6)

  1. 안과 질환의 예방 방법 또는 치료 방법 또는 예방 및 치료 방법에 사용하기 위한, 서열번호 5로 이루어지는 안티센스 올리고뉴클레오타이드로서,
    상기 올리고뉴클레오타이드의 하나 이상의 뉴클레오타이드(들)가 변형되고,
    상기 변형된 뉴클레오타이드가 LNA, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로-, 2'-O-메톡시-, 및 2'-O-메틸-변형된 뉴클레오타이드로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이며,
    상기 변형된 뉴클레오타이드가 올리고뉴클레오타이드의 5'-단부 또는 3'-단부 또는 5'-단부 및 3'-단부에 위치하고,
    상기 안과 질환이 녹내장, 후낭 혼탁, 안구 건조증, 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군, 황반변성, 망막모세포종 및 맥락막암종으로 이루어지는 군 중에서 선택되는, 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 안과 질환의 예방 방법 또는 치료 방법 또는 예방 및 치료 방법에 사용하기 위한 제 1 항에 따른 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물로서,
    상기 안과 질환이 녹내장, 후낭 혼탁, 안구 건조증, 마르팡 또는 로이-디에츠 증후군, 황반변성, 망막모세포종 및 맥락막암종으로 이루어지는 군 중에서 선택되는, 약학 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 황반변성이 나이-관련된 황반변성, 당뇨성 황반부종 또는 백내장인, 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  6. 제 4 항에 있어서,
    황반변성이 나이-관련된 황반변성, 당뇨성 황반부종 또는 백내장인, 약학 조성물.
KR1020157030781A 2013-03-27 2014-03-27 안과 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 tgf-베타 올리고뉴클레오타이드 KR102094572B1 (ko)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13161474 2013-03-27
EP13161474.5 2013-03-27
EP13173078.0 2013-06-20
EP13173078 2013-06-20
EP13199826.2 2013-12-30
EP13199838.7 2013-12-30
EP13199831 2013-12-30
EP13199831.2 2013-12-30
EP13199826 2013-12-30
EP13199838 2013-12-30
PCT/EP2014/056222 WO2014154836A2 (en) 2013-03-27 2014-03-27 Modified tgf-beta oligonucleotide for use in a method of preventing and/or treating an ophthalmic disease

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150140702A KR20150140702A (ko) 2015-12-16
KR102094572B1 true KR102094572B1 (ko) 2020-03-30

Family

ID=50440642

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157030781A KR102094572B1 (ko) 2013-03-27 2014-03-27 안과 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 tgf-베타 올리고뉴클레오타이드

Country Status (17)

Country Link
US (3) US9688988B2 (ko)
EP (1) EP2978846B1 (ko)
JP (1) JP6475226B2 (ko)
KR (1) KR102094572B1 (ko)
CN (1) CN105283551B (ko)
BR (1) BR112015024760B8 (ko)
CA (1) CA2908101C (ko)
DK (1) DK2978846T3 (ko)
EA (1) EA201591594A1 (ko)
ES (1) ES2784213T3 (ko)
HK (1) HK1221254A1 (ko)
HU (1) HUE049246T2 (ko)
LT (1) LT2978846T (ko)
PL (1) PL2978846T4 (ko)
PT (1) PT2978846T (ko)
SI (1) SI2978846T1 (ko)
WO (1) WO2014154836A2 (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018009895A1 (en) * 2016-07-08 2018-01-11 Autotelic Llc Methods for trabedersen dosing by auc
EP3538655A1 (en) * 2016-11-11 2019-09-18 ISARNA Therapeutics GmbH Tgf-beta oligonucleotide for use in treatment of ophthalmic diseases
EP3596117A4 (en) 2017-03-17 2021-01-13 The Johns Hopkins University TARGETED EPIGENETIC THERAPY AGAINST THE DISTAL EXPRESSION REGULATORY ELEMENT OF TGFB2
CN113018508A (zh) * 2021-03-15 2021-06-25 西安交通大学医学院第一附属医院 一种表面修饰的人工晶状体及其制备方法
KR102549208B1 (ko) * 2021-04-08 2023-06-30 연세대학교 산학협력단 심혈관 질환과 관련된 LncRNA 및 이의 용도

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005084712A3 (en) 2004-02-27 2006-12-28 Antisense Pharma Gmbh Use of an oligonucleotide or its active derivative for the preparation of a pharmaceutical composition for inhibiting the formation of metastases in cancer treatment
WO2011154542A1 (en) * 2010-06-11 2011-12-15 Artisense Pharma Gmbh Method for selective oligonucleotide modification
EP2453017A1 (en) 2010-11-12 2012-05-16 Antisense Pharma GmbH Oligonucleotides for use in prophylaxis and/or treatment of TGF-beta1 and TGF-beta2, TGF-beta2 and TGF-beta3, TGF-beta1 and TGF-beta3, or TGF-beta1, TGF-beta2, and TGF-beta3 mRNA overexpressing diseases

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0695354B1 (en) 1993-04-30 2002-01-09 BIOGNOSTIK GESELLSCHAFT FÜR BIOMOLEKULARE DIAGNOSTIK mbH Antisense-oligonucleotides for the treatment of immunosuppressive effects of transforming growth factor-beta1 (tgf-beta1)
DE69432375T2 (de) 1993-04-30 2004-02-12 Biognostik Gesellschaft für Biomolekulare Diagnostik mbH Antisense Oligonukleotide zur Behandlung von immunsuppressiven Wirkungen von TGF-beta2
US20040006030A1 (en) 2002-07-02 2004-01-08 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of TGF-beta 2 expression
EP1568383A3 (en) 2004-02-27 2005-11-16 Antisense Pharma GmbH Use of an oligonucleotide or its active derivative for the preparation of a pharmaceutical composition for inhibiting the formation of metastases in cancer treatment
EP1935428A1 (en) 2006-12-22 2008-06-25 Antisense Pharma GmbH Oligonucleotide-polymer conjugates
CN104540946A (zh) 2012-05-16 2015-04-22 Rana医疗有限公司 用于调节utrn表达的组合物和方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005084712A3 (en) 2004-02-27 2006-12-28 Antisense Pharma Gmbh Use of an oligonucleotide or its active derivative for the preparation of a pharmaceutical composition for inhibiting the formation of metastases in cancer treatment
JP2007523943A (ja) * 2004-02-27 2007-08-23 アンティセンス ファルマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 医薬組成物
WO2011154542A1 (en) * 2010-06-11 2011-12-15 Artisense Pharma Gmbh Method for selective oligonucleotide modification
EP2453017A1 (en) 2010-11-12 2012-05-16 Antisense Pharma GmbH Oligonucleotides for use in prophylaxis and/or treatment of TGF-beta1 and TGF-beta2, TGF-beta2 and TGF-beta3, TGF-beta1 and TGF-beta3, or TGF-beta1, TGF-beta2, and TGF-beta3 mRNA overexpressing diseases

Also Published As

Publication number Publication date
PT2978846T (pt) 2020-04-21
PL2978846T3 (pl) 2020-09-21
US9688988B2 (en) 2017-06-27
KR20150140702A (ko) 2015-12-16
DK2978846T3 (da) 2020-04-06
HK1221254A1 (zh) 2017-05-26
US20170314025A1 (en) 2017-11-02
CN105283551A (zh) 2016-01-27
JP6475226B2 (ja) 2019-02-27
CN105283551B (zh) 2018-11-06
EA201591594A1 (ru) 2016-05-31
PL2978846T4 (pl) 2020-09-21
WO2014154836A3 (en) 2014-11-20
EP2978846A2 (en) 2016-02-03
US20190144865A1 (en) 2019-05-16
CA2908101A1 (en) 2014-10-02
BR112015024760B1 (pt) 2021-09-21
ES2784213T3 (es) 2020-09-23
JP2016519573A (ja) 2016-07-07
BR112015024760B8 (pt) 2022-06-21
US10125368B2 (en) 2018-11-13
CA2908101C (en) 2021-06-22
WO2014154836A2 (en) 2014-10-02
EP2978846B1 (en) 2019-12-25
HUE049246T2 (hu) 2020-09-28
US20160040167A1 (en) 2016-02-11
BR112015024760A2 (pt) 2017-10-24
SI2978846T1 (sl) 2020-07-31
LT2978846T (lt) 2020-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102108599B1 (ko) 변형된 tgf-베타 올리고뉴클레오타이드
KR101218889B1 (ko) 안구의 혈관신생성 장애를 치료하기 위한 조합 치료법
KR102108600B1 (ko) 변형된 tgf-베타2 올리고뉴클레오타이드
KR102094572B1 (ko) 안과 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 변형된 tgf-베타 올리고뉴클레오타이드
JPH11501508A (ja) ヒトｖｅｇｆ−特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド
JPH11500426A (ja) Ｖｅｇｆ特異的オリゴヌクレオチドを用いた血管新生の抑制
CA2803882A1 (en) Treatment of sodium channel, voltage-gated, alpha subunit (scna) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to scna
KR20230152151A (ko) 안과적 질환을 치료하거나 예방하기 위한 방법
US20210163950A1 (en) Treatment of angiopoietin like 7 (angptl7) related diseases
EP1981520A2 (en) Combination therapy for the treatment of neovascular disorders
RU2663100C2 (ru) Ми-рнк и их применение в способах и композициях для лечения и/или профилактики глазных состояний
JP2000501941A (ja) 修飾ｖｅｇｆアンチセンスオリゴヌクレオチド
WO2017173327A1 (en) Endomucin inhibitor as an anti-angiogenic agent
JP6516196B2 (ja) マイクロｒｎａ‐３２８アンチセンス組成物及び治療用途
CN110106248B (zh) 环状RNA hsa_circ_0001543在制备视网膜变性疾病诊断试剂中的应用
RU2653766C2 (ru) КиРНК И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СПОСОБАХ И КОМПОЗИЦИЯХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И/ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ ГЛАЗНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
CN102727513B (zh) 靶向于组织因子基因的小核酸及其用途
EP3040084A1 (en) Therapeutic agent for ectocornea injury

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant