KR102082991B1 - 녹용 고압 추출물의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 녹용 고압 추출물의 제조 방법에 관한 것으로, 녹용 추출시에 압력을 가하여 추출물을 제조하면, 압력 처리를 하지 않은 추출법에 따른 추출물보다 프로-콜라겐 합성능이 우수하다. 따라서, 본 발명의 녹용 고압 추출물의 제조 방법, 및 이에 따른 녹용 고압 추출물을 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 피부 재생을 목적으로 하는 화장료 조성물에 유효성분으로 사용할 수 있다.

Description

녹용 고압 추출물의 제조 방법{Method for Producing Extracts of Deer Antler Under Pressure}

본 발명은 녹용 고압 추출물의 제조 방법에 관한 것이다.

피부는 연령이 높아짐에 따라 노화 현상이 심화된다. 피부가 오랜 기간에 걸쳐 햇빛에 노출되면 표피와 진피 조직에 변화가 일어나게 되어 주름살이 증가하고 피부가 두꺼워지며 탄력이 없어지고, 또한 거칠어져 반점이 된다. 이와 같은 피부 노화는 콜라겐의 합성을 증진시킴으로써 지연시킬 수 있으므로, 콜라겐의 합성을 증진시키면서도 생체에 안전한 물질을 개발하는 연구가 활발히 진행되고 있다.

콜라겐은 세포외 기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분이며, 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질이다. 콜라겐은 피부 섬유아세포에서 만들어지는 프로-콜라겐으로부터 형성된다. 또한, 생체 단백질 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선 구조로 되어있다. 콜라겐은 피부, 건(tendon), 뼈 및 치아의 유기물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부에 함량이 높다. 대부분의 다른 체내 구조물에서는 섬유상 봉입체로서 존재한다.

콜라겐의 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포 분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유시)의 유도 등이 알려져 있다. 또한 근래에 들어 피부 노화에 대한 광범위한 연구가 이루어지면서 피부에서 콜라겐의 중요한 기능이 밝혀지고 있다. 예를 들면, 콜라겐은 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다. 또한 콜라겐은 상처 치유에 있어서 중요한 역할을 담당하며, 손상된 상피에서 콜라겐의 합성을 촉진시켜서 상처를 신속하고 흉터 없이 회복시킬 수 있다. 상기한 바와 같이 콜라겐 합성 촉진에 의해 콜라겐 대사가 활발해지면 진피 매트릭스의 성분이 증가되어 주름개선, 탄력증진, 피부강화 및 상처치유의 효과를 기대할 수 있다.

이러한 효과를 얻기 위하여 종래에는 콜라겐의 피부 주름 개선 효과를 이용하기 위하여 콜라겐 합성을 촉진할 수 있는 물질에 대한 관심이 높아졌으며, 종래에 콜라겐 합성을 촉진할 수 있는 물질로는 레티노산(retinoic acid), TGF(transforming growth factor), 클로렐라 추출물 등이 알려져 있다. 그러나, 레티노산은 불안정하고 피부 적용시 자극, 발적 등의 안정성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성 촉진에 의한 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다. 따라서, 생체에 안전하고 기존의 콜라겐 합성 촉진 물질보다 효과가 높은 새로운 콜라겐 합성 촉진제의 개발이 요구되고 있다.

이와 같은 피부 주름을 억제하거나, 진행 속도를 완화시키기 위하여, 레티놀, 레티노이드, 비타민 C, 플라보노이드, 토코페롤 등의 여러 가지 피부 보호 성분이 함유된 화장료 또는 피부 보호제가 개발되고 있으나, 이와 같은 화장료 또는 피부 보호제는 최종적인 제형에 있어서 역가가 떨어져 그 효능이 경미하고, 피부 자극이 심한 문제점을 지니고 있다. 따라서, 피부 주름을 감소시킴으로써 피부 노화를 개선할 수 있는 효능을 나타내는 물질의 개발이 필요한 실정이다.

녹용은 숫사슴의 갓 자란 뿔을 채취 가공하여 건조한 것을 일컫는다. 사슴은 매년 3월 중순경부터 늙은 뿔이 떨어지고, 새 뿔이 돋아나기 시작하는데 이때 골질화되지 않은 어린 뿔을 녹용이라 한다. 녹용의 지용성 성분 중 당지질의 일종인 갱글리오사이드(Ganglioside)는 신장, 간, 지라, 뇌의 회백질에 축적되어 있는 고분자의 당지질로서 임상실험 결과 신경세포의 전달 장애에 관련된 당뇨병 및 신경독증에 유효한 것으로 알려져 있다(특허문헌 1).

상기와 같은 동물 및 임상실험 결과에서 알 수 있듯이, 녹용은 인체에 유효한 각종 성분을 다량 함유하고 있는 치료제로서의 가치가 높은 동물 생약재이다. 본 발명자들은 기존에 알려진 녹용의 생리 효과 외에 녹용에서 유래한 추출물이 피부 주름을 개선할 수 있는지에 대해서 검토하였다.

한국 공개특허공보 특1994-0013381

본 발명의 목적은 안정성, 유효성 등이 확보된 천연 한방 원료 중에서 피부 주름을 개선할 수 있는 원료를 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 녹용을 가압 조건에서 추출하는 단계;를 포함하는 녹용 고압 추출물의 제조 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 녹용 고압 추출물의 제조 방법에 의해 제조된 녹용 고압 추출물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 상기 녹용 고압 추출물을 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 상기 녹용 고압 추출물을 포함하는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물, 및 상기 녹용 고압 추출물을 포함하는 피부 재생용 화장료 조성물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 녹용 고압 추출물은 섬유아세포에서 프로-콜라겐(pro-collagen) 합성을 증가시키므로 피부 주름 개선을 목적으로 사용할 수 있다.

도 1은 녹용 또는 녹용을 에탄올 추출한 후 얻어지는 잔사(이하, '녹용 에탄올 추출 잔사'로 기재함)를 가압 처리하여 추출하거나, 가압 처리하지 않고 추출하였을 때, 추출물들의 프로-콜라겐 생합성량을 나타낸다.
도 2는 녹용 또는 녹용을 에탄올 추출한 후 얻어지는 잔사를 가압 처리하여 추출하거나, 가압 처리하지 않고 추출하여 얻어진 추출물의 처리 농도별 프로-콜라겐 생합성량을 나타낸다.
도 3은 녹용 또는 녹용을 에탄올 추출한 후 얻어지는 잔사를 가압 처리하여 추출하거나, 가압 처리하지 않고 추출하여 얻어진 추출물에 포함된 콜라겐 함량을 나타낸다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 녹용을 가압 조건에서 추출하는 단계;를 포함하는 녹용 고압 추출물의 제조 방법을 제공한다.

상기 가압 조건은 1.5기압 이상 내지 5기압 이하일 수 있고, 바람직하게는 1.5기압 이상 내지 4기압 이하일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1.7기압 내지 3기압일 수 있고, 보다 더 바람직하게는 2기압 내지 3기압일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 가압 조건이 하한값 미만일 경우에는 수득한 녹용 고압 추출물의 콜라겐 합성능이 감소된다. 가압 조건이 상한값을 초과할 경우에는 녹용 고압 추출물의 콜라겐 합성능이 압력에 비례하여 증가하지 않고 유효성분의 파괴가 발생할 수 있으며 불필요한 고압으로 생산비 증가를 초래할 수 있다.

상기 추출시 추출 온도는 100℃ 내지 150℃일 수 있고, 바람직하게는 105℃ 내지 140℃일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 110℃ 내지 130℃일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 추출 온도가 하한값 미만일 경우에는 수득한 녹용 고압 추출물의 프로-콜라겐 합성능이 감소된다. 추출 온도가 상한값을 초과하는 경우에는 녹용 내에 포함된 유효성분이 파괴될 수 있고, 수득한 녹용 고압 추출물의 색도가 낮아져 화장료 조성물에 배합하여도 여전히 진한 색으로 남아있어 사용시 기호성이 낮아지므로, 화장료 조성물에 적용하는 것이 어려워진다.

상기 추출시 추출 시간은 30분 이상 내지 10시간 이하일 수 있고, 바람직하게는 40분 내지 7시간일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1시간 내지 5시간일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 추출 시간이 하한값 미만일 경우에는 가압하여도 얻어진 녹용 고압 추출물의 피부 주름 개선 효과가 저하된다. 추출 시간이 상한값을 초과할 경우, 즉 추출 시간이 길어져도 피부 주름 개선 효과 정도는 유사하기 때문에 불필요하게 추출 시간이 길어지므로 생산비 증가를 초래할 수 있다.

상기 녹용은 녹용 원물이거나, 녹용을 유기 용매로 추출한 후 얻어지는 잔사일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.

상기 유기 용매는 알코올, 바람직하게는 C₁-C₄의 저급 알코올, 헥산(n-헥산), 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이트, 벤젠 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 에탄올일 수 있다. 물 및 유기용매의 혼합물을 추출 용매로 사용하는 경우, 물 및 유기용매의 혼합물은 바람직하게는 물 및 C₁-C₄의 저급 알코올의 혼합물일 수 있고, 더욱 바람직하게는 물 및 에탄올의 혼합물일 수 있다.

상기 물 및 에탄올의 혼합물은 10%(v/v) 내지 60%(v/v) 에탄올 수용액일 수 있고, 바람직하게는 20%(v/v) 내지 50%(v/v) 에탄올 수용액일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 25%(v/v) 내지 45%(v/v) 에탄올 수용액일 수 있으나, 이에 한정하지 아니한다. 상기 에탄올 수용액이 하한값 미만이거나, 상한값을 초과하는 농도일 경우에는 에탄올 추출 후 얻어진 잔사를 가압 추출하여 녹용 고압 추출물을 수득하여도, 녹용 고압 추출물의 주름 개선 효과가 나타나지 않는다.

상기 녹용 고압 추출물은 주름 개선 효과를 높이기 위해서 추가로 통상의 정제 공정을 수행할 수 있으며, 추가 정제 공정을 통해서 얻어진 정제물도 본 발명에 포함된다. 본 발명에 따른 녹용 고압 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 통과시켜 얻은 정제물, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등으로 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획물도 본 발명의 추출물에 포함된다. 여러 성분이 혼합되어 있는 분획물을 농도구배 컬럼 크로마토그래피 등을 통하여 활성 성분의 성질에 따라 분리하여서 보다 주름 개선 효과가 높은 특정 활성 분획물을 제조할 수 있다.

상기 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔, 세파덱스, LH-20, ODS 겔, RP-18, 폴리아미드, 도요펄(Toyopearl) 및 XAD 수지로 이루어진 군으로부터 선택된 충진제를 이용할 수 있다. 컬럼 크로마토그래피는 필요에 따라 적절한 충진제를 선택하여 수차례 실시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 크로마토그래피를 사용함에 있어 용출 용매, 용출 속도 및 용출 시간은 본 기술 분야에서 일반적으로 사용하는 용매, 속도 또는 시간을 적용할 수 있다

또한, 본 발명은 상기 녹용 고압 추출물의 제조 방법에 의해 제조된 녹용 고압 추출물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 녹용 고압 추출물을 포함하는 피부의 주름 개선용 화장료 조성물, 녹용 고압 추출물을 포함하는 피부의 탄력 증진용 화장료 조성물, 녹용 고압 추출물을 포함하는 피부 재생용 화장료 조성물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 제공한다.

피부 섬유아세포의 주된 기능으로 세포외기질 합성과 증식을 통한 손상된 피부 조직 재생 등을 들 수 있다. 광노화와 같은 외인성 노화 요인, 또는 유리 산소에 의한 손상 누적, 텔로미어 단절로 인한 세포 노화 등에 따른 내인성 노화 요인들은 진피층 내에 있는 피부 섬유아세포의 생리 활성 기능을 저하시키게 된다. 콜라겐은 피부 세포외 기질 중 95% 이상을 차지하고, 세포의 부착분자(adhesion molecule) 및 세포 골격(cytoskeleton) 등과의 상호 작용과 신호 교류를 통해 섬유아세포의 생리 활성에 매우 주요한 부분을 담당한다. 콜라겐의 합성이 저하될 경우, 피부 조직 내 콜라겐 양이 감소되고, 이에 따라 표면 장력이 감소되어 피부 탄력이 저하되고 피부 주름이 형성될 뿐만 아니라, 세포의 증식 및 재생 기능을 포함하는 생리 활성 기능이 감소하는 악순환의 원인이 된다.

따라서, 피부 섬유아세포의 콜라겐 합성능은 피부 재생, 피부 탄력, 피부 주름 형성 및 피부 손상시 조직의 수복 또는 재생과 직접적인 관련이 있다고 볼 수 있다. 즉, 피부 섬유아세포의 프로콜라겐의 합성이 촉진되면, 콜라겐 합성량이 증가하고, 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 손상된 피부 조직의 수복 및 재생; 및 피부 노화 방지 등의 효과를 얻을 수 있다. 본 발명의 녹용 고압 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 피부 섬유아세포의 프로-콜라겐 합성을 촉진하므로 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 손상된 피부 조직의 수복 및 재생; 및 피부 노화 방지 등의 효과를 가질 수 있다.

본 발명의 한 실시예에서는 녹용 고압 추출물을 피부 섬유아세포에 처리시, 가압하지 않은 녹용 열수 추출물에 비해서 프로-콜라겐 합성 효과가 현저히 우수하였고, 세포 독성이 낮았다. 본 발명의 녹용 고압 추출물은 프로-콜라겐 합성은 촉진시키므로, 녹용 고압 추출물을 피부 기능 개선 용도로 사용할 수 있다.

본 발명의 녹용 고압 추출물의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001-20중량%이며, 바람직하게는 0.5-20%이며, 보다 바람직하게는 1.0-20중량%이다. 녹용 고압 추출물의 함량이 0.0001중량% 미만이면 녹용 고압 추출물에 의한 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 증진 효과, 손상된 피부 조직의 수복 및 재생 효과들이 크게 감소되고, 20중량%를 초과하는 경우에는 피부 자극을 초래할 수 있으며, 제형상의 문제점이 발생할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제를 사용하여 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 액체 또는 고체 형태의 화장품으로는, 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 화장수, 크림제, 로션제, 입욕제 등의 형태를 포함할 수 있다.

화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올, 유동 파라핀 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 녹용 고압 추출물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 본 기술 분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 화장료 조성물은 통상적인 사용 방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명을 제조예 및 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 제조예, 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예 및 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 녹용 원물의 고압 추출물 제조

녹용을 건조하고 절각한 후 파쇄하였다. 파쇄된 녹용 원물 100g 중량 대비 10배수의 물(1L)을 가하고, 2.5 기압 및 120℃ 온도 조건; 또는 1.5 기압 및 120℃의 온도 조건;에서 각각 30분, 1시간, 2시간, 4시간 동안 추출하여 추출물 700ml을 수득하였다. 압력은 물을 가열할 때 발생하는 증기를 가두어서 조절하였다. 수득한 추출물을 동량의 증류수로 희석한 후 여과하여 추출물을 제조하였으며, 녹용 원물의 고압 추출물 1400ml을 수득하였다.

제조예 2. 녹용 에탄올 추출 후 얻어지는 잔사의 고압 추출물 제조

녹용을 건조하고 절각한 후 파쇄하였다. 파쇄된 녹용 원물 중량 대비 10배수의 35%(v/v) 에탄올을 가하여 5일 동안 1차로 냉침 추출하였다. 냉침 추출 완료 후, 잔사만을 분리하여, 2일간 열풍 건조하였다. 건조된 잔사물(이하, '녹용 에탄올 추출 잔사'로 기재함)은 고압 처리하여 2차 추출하였다. 추출시 원료로서 녹용 원물을 사용한 것 대신에 추출시 원료로서 녹용 에탄올 추출 잔사를 사용한 것 외에는 제조예 1의 방법과 동일하게 추출하였다. 건조된 녹용 에탄올 추출 잔사 100g 중량 대비 10배수의 물(1L)을 가하고, 2.5 기압 및 120℃ 온도 조건; 또는 1.5 기압 및 120℃의 온도 조건;에서 각각 30분, 1시간, 2시간, 4시간 동안 추출하여 추출물물 700ml을 수득하였다. 수득한 추출물을 동량의 증류수로 희석한 후 여과하여 추출물을 제조하였으며, 녹용 에탄올 추출 잔사의 고압 추출물 1400ml을 수득하였다.

제조예 3. 녹용 열수 추출물의 제조

제조예 1에서 추출 원료로서 사용된 녹용 원물 100g과, 제조예 2에서 추출 원료로서 사용된 녹용 에탄올 추출 잔사 100g에 각각 중량 대비 10배수의 물(1L)을 가하고 80℃ 조건에서 30분, 1시간, 2시간, 4시간 동안 추출하여 각 원료에 대한 추출물을 각각 700ml씩 수득하였다. 위 온도 조건에서는 물이 끓지 않아 증기가 발생하지 않으므로 압력이 증가하지 않았다. 수득한 추출물을 동량의 증류수로 희석한 후 여과하여 추출물을 제조하였으며, 녹용 원물의 열수 추출물 1400ml을 수득하였고, 녹용 에탄올 추출 잔사의 열수 추출물 1400ml을 수득하였다.

실험예 1. 녹용 고압 추출물의 주름 개선 정도 평가

섬유아세포(Human dermal fibroblast)를 24-웰 플레이트에 각 5×10⁵ 세포/웰로 접종하였다. 접종 24시간 후 녹용 원물과, 녹용 에탄올 추출 잔사의 각각 고압 추출물, 열수 추출물(추출 30분, 1시간, 2시간, 4시간 진행)을 최종 50 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 12.5 ㎍/㎖ 농도로 세포에 처리하였다. 도 1의 추출시간별 프로-콜라겐(pro-collagen) 생합성량 비교시에는 제조예 1 내지 3에서 얻은 추출물들을 각각 50㎍/㎖ 농도로 처리한 군에서 확인하였다. 도 2의 추출물은 녹용 원물 또는 녹용 에탄올 추출 잔사를 각각 1시간 동안 추출하여 얻은 추출물을 대상으로 하였다. 처리 24시간 후 배양액을 취하여 pro-collagen assay kit를 이용하여 프로-콜라겐(pro-collagen)을 검출하였다. 음성대조군(배양액 처리), 양성대조군(TGF-β), 시료 처리군의 흡광도(OD₄₅₀)를 측정하고 음성대조군의 프로-콜라겐 생성량을 100으로 하여 각 군의 프로-콜라겐 양을 비교하였다.

도 1 및 도 2에서 알 수 있듯이, 녹용 또는 녹용 에탄올 추출 잔사에 압력을 가하여 추출하면, 압력을 가하지 않고 단순 용매 추출한 경우에 비해서, 추출물의 처리 농도에 비례하여 우수한 주름 개선 효과를 나타내었다. 또한, 압력 조건은 2.5기압 처리 조건이 1.5기압 처리 조건보다 주름 개선 효과가 현저히 높았다. 한편, 도 1은 제조예 1 내지 3의 시료를 추출 시간별로 비교한 것이며, 30분 동안 추출한 경우에는 가압하여 추출한 군과 단순 열수 추출한 군 사이의 주름 개선 효과 차이는 없고, 1시간을 초과하여 추출한 경우에 가압하여 추출한 군과 단순 열수 추출한 군 사이의 주름 개선 효과 차이가 크고, 가압하여 추출한 군의 주름 개선 효과가 현저히 우수하였다.

위 결과로부터, 녹용으로부터 주름 개선에 효과가 있는 성분 추출시에는 단순 추출보다 가압 추출 방법을 적용해야 하는 것을 알 수 있었고, 단시간 동안 추출하는 것보다 30분을 초과하는 시간 동안 추출하여야, 수득한 추출물의 주름 개선 효능이 우수한 것을 알 수 있었다.

실험예 2. 녹용 고압 추출물의 콜라겐 함량 측정

제조예 1 내지 3에서 얻어진 녹용 원물 추출물 또는 녹용 에탄올 추출 잔사 추출물에 포함된 콜라겐 함량을 측정하였다. 녹용 원물과 녹용 에탄올 추출 잔사 각각의 고압 추출물, 열수 추출물(추출 30분, 1시간, 2시간, 4시간 진행)을 50%, 25%, 12.5%로 물로 희석한 후 35% 염산을 가하여 120℃에서 8시간 동안 산가수분해하였다. 시료의 산가수분해물과 하이드록시프롤린(hydroxyproline) 표준 용액을 시트레이트/아세테이트(citrate/acetate) 완충 용액, 클로라민 T(Chloramine T) 용액과 혼합한 후 상온에서 20분간 방치하였다. Ehrlich's 용액을 넣고 65℃에서 20분간 방치하였다. 하이드록시프롤린 표준 용액의 농도별 흡광도 값으로 표준 정량 곡선을 만들고 고압 추출물, 열수 추출물의 흡광도를 이용하여 추출물 내 하이드록시프롤린 함량을 계산하였다. 추출물 내 하이드록시프롤린 함량을 콜라겐 함량으로 환산하여 비교하였다.

도 3에서 알 수 있듯이, 녹용 또는 녹용 에탄올 추출 잔사에 압력을 가하여 추출하면, 압력을 가하지 않고 단순 용매 추출한 경우에 비해서, 콜라겐 함량이 높은 것을 알 수 있었다.

위 결과로부터, 녹용으로부터 콜라겐 추출시에는 단순 추출보다 가압 추출 방법을 적용해야 하는 것을 알 수 있다.

제조예 4. 화장품 제형의 제조

4-1. 에센스의 제조

녹용 고압 추출물을 이용하여 하기 표 1에 기재된 함량(중량부)에 따라 에센스를 제조하였다.

조성	함량(중량부)
트리에탄올아민	0.25
카르복시비닐폴리머	0.22
글리세린	4
부틸렌글리콜	2
녹용 고압 추출물	1.5
밀납	0.5
세토스테아릴알코올	1
글리세릴모노스테아레이트	1
스쿠알렌	4
정제수	적량

4-2. 유연화장수의 제조

녹용 고압 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연화장수는 하기 표 2와 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
PEG-40 수소화 캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
녹용 고압 추출물	0.5
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

4-3. 영양 크림의 제조

녹용 고압 추출물을 유효성분으로 함유하는 영양크림은 하기 표 3의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
1,3-부틸렌글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알렌	3.8
녹용 고압 추출물	1.5
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
착향제	적량
정제수	잔량

4-4. 로션의 제조

녹용 고압 추출물을 유효성분으로 함유한 로션을 하기 표 4의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
세토스테아릴알코올	1.6
스테아린산	1.4
친유형모노스테아린산글리세린	1.8
PEG-100 스테아레이트	2.6
세스퀴올레인산소르비탈	0.6
스쿠알렌	4.8
마카다이아오일	2
호호바오일	2
초산토코페롤	0.4
메틸폴리실록산	0.2
초산토코페롤	0.4
1,3-부틸렌글리콜	4
산탄검	0.1
글리세린	4
d-판데놀	0.15
녹용 고압 추출물	1.0
알란토인	0.1
카르보머(2% aq. Sol)	4
트리에탄올아민	0.15
에탄올	3
정제수	적량

Claims (13)

1. 녹용을 1.5기압 이상 내지 5기압 이하의 가압 조건에서 추출하는 단계;를 포함하는 제조 방법에 의해 제조된 녹용 고압 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 청구항 1에 있어서,
   상기 가압 조건은 1.5기압 이상 내지 4기압 이하인 화장료 조성물.
4. 청구항 1에 있어서,
   상기 추출시 추출 온도는 100℃ 내지 150℃인 화장료 조성물.
5. 청구항 4에 있어서,
   상기 추출시 추출 온도는 105℃ 내지 140℃인 화장료 조성물.
6. 청구항 1에 있어서,
   상기 추출시 추출 시간은 30분 이상 내지 10시간 이하인 화장료 조성물.
7. 청구항 6에 있어서,
   상기 추출시 추출 시간은 40분 내지 7시간인 화장료 조성물.
8. 청구항 1에 있어서,
   상기 녹용은 녹용 원물이거나, 녹용을 유기 용매로 추출한 후 얻어지는 잔사인 화장료 조성물.
9. 청구항 8에 있어서,
   상기 유기 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 및 이들의 혼합 용매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 화장료 조성물.
10. 삭제
11. 청구항 1에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선용인 화장료 조성물.
12. 청구항 1에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 피부 탄력 증진용인 화장료 조성물.
13. 삭제

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