KR102073144B1

KR102073144B1 - 올리고펩티드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR102073144B1
Application number: KR1020190165789A
Authority: KR
Inventors: 전도용
Original assignee: 주식회사 엘베이스
Priority date: 2018-12-13
Filing date: 2019-12-12
Publication date: 2020-02-04
Also published as: US20220023378A1; CN113164554A; EP3909597A1; US12048730B2; WO2020122655A1; EP3909597A4; JP2022513209A

Abstract

본 발명은 암을 치료하는데 사용 가능한 올리고펩티드를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 올리고펩티드는 항체에 비해 분자량이 작아 면역반응의 우려가 적고, 조직 내에 침투가 용이하다는 장점이 있으며, 암세포 또는 암조직에 선택적으로 작용할 수 있다.

Description

올리고펩티드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical Composition for Preventing or Treating Cancer Comprising Oligopeptide}

본 발명은 암을 치료하는데 사용 가능한 올리고펩티드를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

현재 암의 조기 진단법의 개발 및 새로운 항암 요법의 지속적인 개발로 인하여 암의 치료 효과가 향상되고 있음에도 불구하고, 암은 아직도 우리나라 사망 원인 중 제1, 2위를 다투는 중요한 질환이다. 현재 사용되고 있는 항암제의 대부분은 화학요법에 의한 것으로 암의 종류에 따라 약리작용이 다양하고, 독성에 의한 부작용이 다양하게 나타나기 때문에 암 치료의 문제점으로 지적되고 있다.

기존의 항암제는 암세포뿐 아니라, 정상조직에도 침투하여 정상세포의 기능 및 활성에 손상을 입히기 때문에, 골수기능저하, 위장장애, 탈모증 등의 부작용을 유발하기도 하고, 장기간 화학 요법에 따른 항암제에 대한 다약제 저항성을 보이는 등 암 치료의 커다란 문제점을 보인다. 따라서, 기존 항암제의 이러한 심각한 문제점을 해결할 수 있는 혁신적인 항암제의 개발에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다.

한편, 종양 세포의 특이적 종양 항원을 표적으로 하는 항체의 개발이 이루어지고 있으나, 항체의 경우 면역반응의 우려 및 조직 내 침투의 낮은 효율성 등의 문제점이 있다. 반면, 펩티드의 경우 분자량이 작아 항체와는 다르게 면역반응 우려가 적고, 조직 내 침투가 용이한 장점이 있으며, 종양 항원을 표적으로 하는 펩티드 기반 항암제는 종양에 선택적으로 작용할 수 있기 때문에 정상세포에 손상을 입히는 등의 부작용이 거의 없을 것으로 기대되고 있다.

대한민국 공개특허 제10-2014-0101957호 대한민국 공개특허 제10-2019-0072467호

이에 본 발명자들은 본 발명의 올리고펩티드들이 암세포의 증식을 억제하고 세포사멸을 유도함으로써, 암을 효과적으로 치료할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다.

뿐만 아니라, 본 발명은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드의 암에 대한 예방, 개선 또는 치료 용도를 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 암은 폐암, 유방암, 혈액암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 혈액암은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액암 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 폐암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 6 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 폐암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 폐암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 2 내지 5, 서열번호 7 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 유방암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 서열번호 3 내지 5, 서열번호 7 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 유방암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 7 또는 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 유방암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 1 내지 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 혈액암 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 1 내지 3, 서열번호 5 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 혈액암 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 서열번호 5 또는 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 혈액암 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 올리고펩티드는 PD-L1의 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 올리고펩티드는 Bax, Bcl-x, p53 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 증가시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 암세포의 증식을 억제하고, 세포사멸을 유도하는 효과를 나타내므로 암을 치료하는데 유용한 항암제로 사용할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 유효성분으로 올리고펩티드를 포함하는데, 올리고펩티드는 항체에 비해 분자량이 작아 면역반응의 우려가 적고, 조직 내에 침투가 용이하다는 장점이 있으며, 암세포 또는 암조직에 선택적으로 작용할 수 있어 기존 항암제의 부작용 문제를 효과적으로 개선할 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 본 발명에 따른 올리고펩티드에 의한 폐암 세포주의 증식 억제를 보여주는 그래프이다. JC: 비-처리 대조군, ^*p<0.05, ^**p<0.01, ^***p<0.001
도 2는 본 발명에 따른 올리고펩티드에 의한 유방암 세포주의 증식 억제를 보여주는 그래프이다. JC: 비-처리 대조군, ^*p<0.05, ^**p<0.01
도 3은 본 발명에 따른 올리고펩티드에 의한 혈액암 세포주의 증식 억제를 보여주는 그래프이다. JC: 비-처리 대조군, ^*p<0.05, ^***p<0.001
도 4는 본 발명에 따른 올리고펩티드에 의한 암세포 내 세포사멸 관련 유전자 PD-L1, Bax, Bcl-x 및 p53의 발현 변화를 보여주는 사진이다.

본 발명은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법을 제공한다.

본 명세서에서 사용된 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 암에 의한 증상을 차단하거나, 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 용어, "치료"란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 암에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 용어, "개체"란 질병의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상을 의미한다. 예를 들어, 상기 개체는 인간, 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말, 양 및 소를 포함하는 포유류일 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어, "올리고펩티드"는 펩티드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형(linear)의 분자를 의미한다. 본 발명의 올리고펩티드는 분자생물학적인 방법과 함께 당업계에 공지된 화학적 합성 방법(예를 들어, 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques))에 따라 제조될 수 있다(Merrifield, J. Amer . Chem . Soc . 85: 2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)).

본 발명의 올리고펩티드의 범위에는 이의 약학적으로 허용 가능한 염도 포함될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어, "약학적으로 허용 가능한"이라는 용어는 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 또는 기타 문제점이나 합병증 없이 이득/위험 비가 합리적이어서 대상체(예: 인간)의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며, 건전한 의학적 판단의 범주 이내인 올리고펩티드를 의미한다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염 및 약학적으로 허용 가능한 금속염을 포함한다.

또한, 본 발명의 올리고펩티드의 범위에는 본 발명의 올리고펩티드와 균등한 생물학적 활성을 발휘하는 아미노산 서열의 변이를 갖는 생물학적 기능 균등물이 포함될 수 있다. 이러한 아미노산 서열의 변이는 아미노산 곁사슬 치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하 및 크기 등에 기초하여 이루어질 수 있다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 잔기이고; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 크기를 가지며; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 유사한 모양을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다.

변이를 도입하는 데 있어서, 아미노산의 소수성 인덱스가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 소수성과 전하에 따라 소수성 인덱스가 부여되어 있다. 또한, 유사한 친수성 값(hydrophilicity value)을 가지는 아미노산 사이의 치환이 균등한 생물학적 활성을 갖는 펩티드를 초래한다는 것도 알려져 있다.

분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 펩티드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H. Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.

상술한 생물학적 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 본 발명의 올리고펩티드는 서열목록에 기재된 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 80%의 상동성, 90%의 상동성 또는 95%의 상동성을 나타내는 서열을 의미할 수 있다. 서열비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다(Huang et al., Comp . Appl . BioSci. 8:155-65(1992); Pearson et al., Meth . Mol . Biol. 24:307-31(1994)).

본 발명의 약학적 조성물은 암의 예방 또는 치료에 사용된다. 본 발명의 약학적 조성물이 사용 가능한 암은 폐암, 유방암, 혈액암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 혈액암은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액암 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에서는 본 발명의 올리고펩티드들이 폐암, 유방암 및 혈액암에 대하여 우수한 항암 활성을 나타내는 것을 확인하였다(실시예 2 참조).

본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물이 폐암의 예방 또는 치료에 사용되는 경우, 조성물은 하기의 올리고펩티드를 유효성분으로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:

(i) 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드;

(ii) 서열번호 6 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드; 또는

(iii) 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드.

또한, 본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물이 유방암의 예방 또는 치료에 사용되는 경우, 조성물은 하기의 올리고펩티드를 유효성분으로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:

(i) 서열번호 2 내지 5, 서열번호 7 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드;

(ii) 서열번호 3 내지 5, 서열번호 7 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드; 또는

(iii) 서열번호 7 또는 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드.

또한, 본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물이 혈액암의 예방 또는 치료에 사용되는 경우, 조성물은 하기의 올리고펩티드를 유효성분으로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다:

(i) 서열번호 1 내지 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드;

(ii) 서열번호 1 내지 3, 서열번호 5 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드; 또는

(iii) 서열번호 5 또는 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드.

본 발명에 있어서, 상기 올리고펩티드는 PD-L1의 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 올리고펩티드는 Bax, Bcl-x, p53 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 발현을 증가시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에서, 본 발명의 올리고펩티드에 의한 암세포 내 세포사멸(apoptosis) 관련 유전자(PD-L1, Bax, Bcl-x 및 p53)의 발현 변화를 측정한 결과, PD-L1의 발현을 억제하였고, Bax, Bcl-x 및 p53 유전자의 발현은 증가시켰다(실시예 3 참조). 상기 PD-L1은 암세포 표면에 존재하는 단백질로, T 세포의 표면 단백질 PD-1과 결합하여 T 세포의 암세포 공격을 방해하는 것으로 알려져 있고, Bax(Bcl-2-associated X protein)는 세포사멸을 유도하는 단백질로, 종양억제자(tumor suppressor)인 p53에 의해 발현이 조절되는 것으로 알려져 있다. 또한, Bcl-X(B-cell lymphoma-X)는 형태에 따라 세포사멸을 유도하는 세포사멸 조절자(apoptosis regulator)로 알려져 있다. 따라서, 상기 실시예의 결과는 본 발명의 올리고펩티드가 암세포에 대한 T 세포의 감수성을 높이고, 암세포의 세포사멸을 유도할 수 있음을 보여주는 것이다.

한편, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약학적 조성물로 제조하기 위하여 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 광물유 등이 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여된다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 선택될 수 있다. 구체적인 예로, 상기 약학적 조성물은 0.001 내지 1000 mg/kg, 0.01 내지 100 mg/kg, 0.01 내지 10 mg/kg, 0.1 내지 10 mg/kg 또는 0.1 내지 1 mg/kg의 양을 1일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.

상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 결정될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들면, 경구 투여, 비강 내 투여, 경기관지 투여, 동맥 주사, 정맥 주사, 피하 주사, 근육 주사 또는 복강 내 주사에 의해 투여될 수 있다. 일일 투여량은 하루 일회 내지 수회 나누어 투여할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ]

실시예 1. 올리고펩티드의 제조

하기 표 1과 같은 아미노산 서열을 가지는 올리고펩티드를 합성하였다. 올리고펩티드는 ㈜세원생명공학과 ㈜펩트론에 의뢰하여 합성하였으며, LC-MS/MS법과 아미노산 서열분석, NMR 구조분석을 통해 합성된 펩티드를 동정하였고, HPLC법으로 순도 95% 이상임을 확인하였다.

펩티드	아미노산 서열
pep #1 (서열번호 1)	ATWPDTVRQL
pep #2 (서열번호 2)	TSATWPDTVR
pep #3 (서열번호 3)	WPDTVRQLAL
pep #4 (서열번호 4)	CSKYSYKGLK
pep #5 (서열번호 5)	AECSKYSYKG
pep #6 (서열번호 6)	QTVMTSATWP
pep #7 (서열번호 7)	SICIYGGRNR
pep #8 (서열번호 8)	GMLVLTPTRE
pep #9 (서열번호 9)	SREQRNGPGM

실시예 2. 올리고펩티드의 암세포 증식 억제 활성 측정

실시예 1에서 합성한 올리고펩티드들의 암세포 증식 억제 효과를 측정하기 위하여, 암세포에 대한 MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-2-y)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt) 분석을 실시하였다. 구체적으로, 96웰 마이크로플레이트(96-well microplate)에서 각각 배양된 폐암 세포주(H1975), 유방암 세포주(MDA-MB-231) 및 혈액암 세포주(Daudi)에 실시예 1에서 합성된 올리고펩티드를 각각 500 μM씩 처리한 후 72시간 동안 37℃ 배양기에서 배양하였다. 각 세포의 배양액에 MTS 시약을 처리하여 37℃ 배양기에서 30분 이상 배양한 후 OD490 nm에서 흡광도를 측정하고, 그 결과를 도 1 내지 3에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 올리고펩티드 처리에 의하여 폐암 세포주의 증식이 억제되었다. 구체적으로, 모든 올리고펩티드는 비-처리 대조군에 비하여 더 우수한 암세포 증식 억제 활성을 나타내었고, 그 중에서도 특히 올리고펩티드 pep #6, #7, #8 및 #9의 암세포 증식 억제능이 우수한 것으로 나타났다.

또한, 도 2에 나타낸 바와 같이, 올리고펩티드 처리에 의하여 유방암 세포주의 증식이 억제되었다. 구체적으로, 올리고펩티드 pep #7, #3, #5, #4, #8 및 #2는 비-처리 대조군에 비하여 더 우수한 암세포 증식 억제 활성을 나타내었고, 그 중에서도 특히 올리고펩티드 pep #7, #3 및 #5의 암세포 증식 억제능이 우수한 것으로 나타났다.

뿐만 아니라, 도 3에 나타낸 바와 같이, 올리고펩티드 처리에 의하여 혈액암 세포주의 증식이 억제되었다. 구체적으로, 올리고펩티드 pep #5, #8, #1, #2, #3, #7, #6 및 #4는 비-처리 대조군에 비하여 더 우수한 암세포 증식 억제 활성을 나타내었고, 그 중에서도 특히 올리고펩티드 pep #5 및 #8의 암세포 증식 억제능이 우수한 것으로 나타났다.

실시예 3. 세포사멸( apoptosis ) 관련 유전자의 발현 측정

실시예 1에서 합성한 올리고펩티드에 의한 암세포 내 세포사멸(apoptosis) 관련 유전자인 PD-L1, Bax, Bcl-x 및 p53의 발현을 측정하였다. PD-L1은 암세포 표면에 존재하는 단백질로, T 세포의 표면 단백질 PD-1과 결합하여 T 세포의 암세포 공격을 방해한다. Bax(Bcl-2-associated X protein)는 세포사멸을 유도하는 단백질로, 종양억제자(tumor suppressor)인 p53에 의해 발현이 조절된다. Bcl-X(B-cell lymphoma-X)는 형태에 따라 세포사멸을 유도하는 세포사멸 조절자(apoptosis regulator)이다.

6웰 마이크로플레이트(6-well microplate)에서 배양된 혈액암 세포주 (RPMI8226)에 실시예 1에서 합성된 올리고펩티드 pep #9 10 μM 처리한 후 48시간 동안 37℃ 배양기에서 배양하였다. 세포에서 DNA를 추출한 후 하기 표 2와 같은 프라이머를 이용하여 중합연쇄반응(PCR, 반응조건: 95℃에서 5분 → 95℃에서 45초, 56℃에서 45초, 72℃에서 45초(35회 반복) → 72℃에서 5분)으로 각 유전자의 발현을 측정하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.

프라이머 ( primer )	염기서열(5' > 3')	서열번호
PD-L1_F	GACCTATATGTGGTAGAGTATGGTAGC	10
PD-L1_R	TTCAGCTGTATGGTTTTCCTCAGGATC	11
Bax_F	GGCCCACCAGCTCTGAGCAGA	12
Bax_R	GCCACGTGGGCGTCCCAAAGT	13
Bcl-x_F	TTGGACAATGGACTGGTTGA	14
Bcl-x_R	GTAGAGTGGATGGTCAGTG	15
p53_F	GCGTGTGGAGTATTTGGA	16
p53_R	GAGAGGAGCTGGTGTTGTT	17

도 4에 나타낸 바와 같이, 올리고펩티드는 암세포 내 유전자 PD-L1의 발현을 억제하는 반면, 유전자 Bax, Bcl-x 및 p53의 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 이러한 결과는, 본 발명에 따른 올리고펩티드는 암세포에 대한 T 세포의 감수성을 높이고, 암세포의 세포사멸을 유도한다는 것을 보여준다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

<110> L-Base Co., Ltd. <120> Pharmaceutical Composition for Preventing or Treating Cancer Comprising Oligopeptide <130> MP19-312 <150> KR 10-2018-0160826 <151> 2018-12-13 <160> 17 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #1 <400> 1 Ala Thr Trp Pro Asp Thr Val Arg Gln Leu 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #2 <400> 2 Thr Ser Ala Thr Trp Pro Asp Thr Val Arg 1 5 10 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #3 <400> 3 Trp Pro Asp Thr Val Arg Gln Leu Ala Leu 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #4 <400> 4 Cys Ser Lys Tyr Ser Tyr Lys Gly Leu Lys 1 5 10 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #5 <400> 5 Ala Glu Cys Ser Lys Tyr Ser Tyr Lys Gly 1 5 10 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #6 <400> 6 Gln Thr Val Met Thr Ser Ala Thr Trp Pro 1 5 10 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #7 <400> 7 Ser Ile Cys Ile Tyr Gly Gly Arg Asn Arg 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #8 <400> 8 Gly Met Leu Val Leu Thr Pro Thr Arg Glu 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pep #9 <400> 9 Ser Arg Glu Gln Arg Asn Gly Pro Gly Met 1 5 10 <210> 10 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-L1_F primer <400> 10 gacctatatg tggtagagta tggtagc 27 <210> 11 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PD-L1_R primer <400> 11 ttcagctgta tggttttcct caggatc 27 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bax_F primer <400> 12 ggcccaccag ctctgagcag a 21 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bax_R primer <400> 13 gccacgtggg cgtcccaaag t 21 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bcl-x_F primer <400> 14 ttggacaatg gactggttga 20 <210> 15 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bcl-x_R primer <400> 15 gtagagtgga tggtcagtg 19 <210> 16 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> p53_F primer <400> 16 gcgtgtggag tatttgga 18 <210> 17 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> p53_R primer <400> 17 gagaggagct ggtgttgtt 19

Claims

서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 암은 폐암, 유방암, 혈액암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제2항에 있어서,
상기 혈액암은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 1 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 폐암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 6 내지 9 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 폐암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 폐암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 2 내지 5, 서열번호 7 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 유방암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 3 내지 5, 서열번호 7 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 유방암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 7 또는 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 유방암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 1 내지 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 혈액암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 1 내지 3, 서열번호 5 및 서열번호 8 중 하나로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 혈액암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유효성분은 서열번호 5 또는 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩티드이며, 상기 암은 혈액암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.