KR20170073585A - Cd44의 단리된 폴리펩타이드 및 이의 사용 - Google Patents

Abstract

CD44의 단리된 폴리펩타이드를 제공하고, 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는 단리된 폴리펩타이드를 제공한다. 또한, 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드를 제공하고; 여기서 상기 변형 폴리펩타이드는 항-염증 활성을 포함한다. 또한 조성물, 융합 단백질 및 약제학적 조성물 및 염증성 질병의 치료에 그들의 사용을 제공한다.

Description

CD44의 단리된 폴리펩타이드 및 이의 사용{ISOLATED POLYPEPTIDES OF CD44 AND USES THEROF}

본 발명은 CD44의 단리된 폴리펩타이드에 관한 것으로서, 이들의 일부 구체예로서는 특히 CD44vRA의 단리된 폴리펩타이드 및 염증성 질병의 치료에서의 그의 용도에 관한 것이나, 이에 한정되지는 않는다.

CD44는 세포-세포 및 세포-매트릭스 상호작용, 세포 이동, 프로그램된 세포 괴사(세포 자멸), 또는 역으로 세포 생존 및 세포 증식을 포함하는 다중 세포성 기능(multiple cellular function)과 연관된 세포 표면 부착 분자이다.

CD44는 히알루론산(HA)을 위한 주요 세포 표면 수용체이나, 이것은 또한 콜라겐, 피브로넥틴, 피브리노겐, 라미닌, 점막의 혈관의 어드레신(addressin) 및 오스테오폰틴과 같은 단백질에도 결합하는 것으로 알려져 있다. CD44는 염증 부위에 순환하는 림프구를 모으는데 필수적이며, CD44 및 때때로 히알루론산의 현저한 축적은 상처 치유, 조직 개조(tissue remodeling), 염증, 형태 발생(morphogenesis) 및 발암(carcinogenesis)과 같이 집중 세포 이동 및 세포 증식의 영역에서 검출된다.

마우스 CD44 및 인간 CD44의 게놈 서열은 5' 말단에 5개의 불변 엑손 및 3'말단에 5개의 불변 엑손을 포함한다. 상기 마우스 CD44 유전자는 분자의 중간에 V₁-V₁₀으로 지칭된 10개의 변이 엑손(variant exons)을 포함하고, 그 결과 총 20개의 엑손을 포함한다. 상기 인간 CD44 유전자는 상기 10개의 변이 엑손(V₂-V₁₀) 중 9개만을 포함하여 총 19개의 엑손을 포함한다. 차별되는 V₂-V₁₀의 선택적 접합(alternative splicing)에 의해, 막 근위 도메인(membrane-proximal domain) 내에 삽입되어 분자의 가변 영역을 구성하는 변이 엑손(엑손 Vx, x=1~10으로 나타냄)의 다양한 조합을 발현하는 CD44의 다수의 동형 단백질(isoform)이 생성된다. 이들 분자들은 CD44 변이체(CD44v)로 지칭된다. 이제까지 수십개의 CD44의 동형 단백질들이 잘 알려져 있다.

임의의 변이 엑손을 포함하지 않는 CD44s가 가장 흔한 형태이며, 대부분 세포 타입들로 발현된다[Ponta, H., et al. Nat Rev Mol Cell Biol. 2003 Jan;4(l):33-45]. 10개의 변이 엑손들 중 하나 이상을 포함하는 CD44 변이 단백질들은 암, 및 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) 및 다발성 경화증(multiple sclerosis)과 같은 자가 면역 질병(autoimmune diseases)과 대부분 연관이 있다고 보고되어 있다[예를 들어, Naor et al. Adv. Cancer Res., 71, 241-319,1997; 및 Naor et al. Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences. 39, 527-579, 2002 참고].

류마티스 관절염(RA) 환자들의 관절 염증 세포들은 CD44vRA로 명명된 선택적으로 접합된 CD44 변이체의 염기서열을 나타낸다. 인간 CD44vRA는 해독틀(reading frame)에 영향을 주지 않는 변이 엑손 4 및 변이 엑손 5 사이의 스플라이싱 연접부(splicing junction) 내에 추가의 알라닌이 추가된 케라티노사이트 CD44v3-vlO 동형 단백질의 서열과 동일한 염기서열을 포함한다. 콜라겐 유도성 관절염(collagen-induced arthritis; CIA)을 가진 마우스는 동일한 부위에 알라닌을 또한 포함하는 유사한 염기서열을 함유한다. 상기 CD44vRA 염기서열은 RA 환자들 및 건선성 관절염(Psoriatic Arthritis) 환자들의 관절 염증성 활액 세포(synovial cells)에서 발현되지만, 건강한 공여자의 케라티노사이트 또는 말초 혈액 백혈구(peripheral blood leukocytes; PBL)에서는 발현되지 않는다. 또한, RA 환자들의 관절 염증 세포들은 CD44vRA를 발현하지만, 골관절염 환자들로부터의 PBLs 및 동일한 환자들의 활액 세포는 이 변이체를 거의 발현하지 않는데, 이는 상기 동형 단백질의 독점성을 증명한다(Nedvetzki et al., J Clin Invest 111: 1211-1220, 2003; Golan et al., J Autoimm 28:99-113, 2007).

항-CD44 항체들, CD44 단백질들, 펩타이드들 또는 유도체들의 투여가 다양한 자가 면역 질병의 치료에 사용될 수 있다고 보고되어 있다(예를 들어., Naor et al., Adv. Cancer Res., 71, 241-319, 1997; Naor et al., Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences. 39, 527-579, 2002; Turley EA, and Naor D. Front Biosci. 17:1775-1794, 2012). 또한, 항-CD44vRA 단클론성 항체들(monoclonal antibodies) 및 CD44vRA-유래 펩타이드가 이미 제안되어 있다(Golan et al., J Autoimm 28:99-113, 2007, International Application Publication Nos: WO2010/058396, WO 2005/007700; WO 2003/014160, WO 2000/075312; US Patent Nos: US 7,534,605 and US 8,193,311; and US Patent Application Publication No: US 20060019340).

본 발명의 일부 구체예들의 하나의 측면에 따르면, 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는 단리된 폴리펩타이드를 제공한다.

본 발명의 일부 구체예들의 하나의 측면에 따르면, 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드를 제공하고, 여기서, 상기 변형된 폴리펩타이드는 항염증 활성을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 엔드-캡핑은 N-말단 엔드-캡핑을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 N-말단 엔드-캡핑은 아세틸을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 엔드-캡핑은 C 말단 엔드-캡핑을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 C 말단 엔드-캡핑은 아미드를 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어진다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 1로 표시된다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드는 서열번호 4~6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 단리된 폴리펩타이드 및 상기 단리된 폴리펩타이드에 부착된 비단백질 모이어티(moiety)를 포함하는 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 단리된 융합 폴리펩타이드는 항염증 활성을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, C 말단 및/또는 N 말단에 결합된 아미노산 서열을 갖는 단리된 폴리펩타이드를 포함하는 단리된 융합 폴리펩타이드를 제공하고, 여기서, 상기 C 말단 아미노산 서열은 상기 단리된 융합 폴리펩타이드를 갖는 비연속적(non-contiguous) CD44vRA 아미노산 서열이고; 그리고, 상기 융합 폴리펩타이드는 항-염증 활성을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 부착은 공유결합적으로 부착된 것이다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 항-염증 활성은 백신 접종(vaccination) 또는 점막 내성(mucosal tolerance)에 의존하지 않는다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물은 세럼 아밀로이드 A, 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어지는 군으로부터 선택되는 단백질과 결합이 가능하다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 활성제로서 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물; 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 단리된 펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하여, 대상의 염증성 질병을 치료하는 것을 포함하는, 대상의 염증성 질병을 치료하기 위한 방법을 제공한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 염증성 질병의 치료용 약물의 제조를 위한, 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 사용을 제공한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 투여는 경구 투여를 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 조성물은 경구 투여를 위해 제형화된다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 염증성 질병은 CD44vRA를 발현하는 세포를 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 염증성 질병은 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 알츠하이머병, 암 및 심혈관 질병으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 염증성 질병은 류마티스 관절염이다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 단리된 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 구조물을 제공한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 다음의 단계들을 포함하는 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 배치(batch)의 효능을 결정하는 방법을 제공한다:

(a) 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 배치를 류마티스 관절염 환자의 염증성 관절로부터 수득된 섬유아세포와 접촉시키는 단계; 및

(b) 상기 배치의 효능을 결정하기 위해, 미리 결정된 항온처리 시간 후에, 상기 섬유아세포의 생존율을 결정하는 단계.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 방법은 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물을 상기 접촉 전에 변형시켜 합성하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 접촉 후에 상기 섬유아세포의 감소된 생존율은 상기 배치의 효능을 나타내는 지표이다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 방법은 상기 배치의 상대적 효능을 결정하기 위해 상기 세포들의 생존율을, 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 참조 표준 배치와 접촉시킨 후의 상기 세포들의 생존율과 비교하는 것을 포함한다.

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 방법은 시험관내(in-vitro) 또는 생체외(ex-vivo)에서 수행된다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및/또는 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기술된 것들과 유사하거나 동등한 방법 및 재료들이 본 발명의 실시예를 수행 또는 테스트하는데 사용될 수 있을지라도, 예시적인 방법들 및/또는 재료들을 하기에 기술한다. 상충하는 경우에, 정의를 포함하여 특허 명세서의 내용은 조절될 수 있다. 또한, 재료들, 방법들 및 실시예들은 단지 예시적인 것이며, 반드시 제한하는 의도는 아니다.

본 발명의 일부 구체예들은 첨부 도면을 참조하여 단지 예시적으로 기술한 것이다. 지금부터 도면을 상세하게 구체적으로 참조하면, 도시된 세부사항은 예시로서 그리고 본 발명의 구체예들에 대한 설명을 목적으로 한 것임을 강조한다. 이와 관련하여, 도면과 함께 취해진 설명은 본 발명의 구체예들이 어떻게 실시될 수 있는지를 당업자에게 명백하게 한다.
도면에서:
도 1은 표시된 온도에서 저장 후, 5량체(5-mer) RA 펩타이드(서열번호 1)의 %안정성을 나타내는 액체 크로마토그래피-질량 분석법(LCMS) 분석을 나타낸다: -20℃에서의 저장은 100% 안정성을 나타낸다.
도 2a 내지 2c는 9량체 RA 펩타이드(서열번호 3)가 DBA/1 백그라운드에서 콜라겐-유도 관절염(CIA) 마우스에서 관절염(joint inflammati)을 감소시키는 것을 나타내는 그래프들이다. 상기 도면들은 표시된 시점(화살표 머리로 표시됨)에서 25㎍(도 2a), 100㎍(도 2b) 또는 150㎍(도 2c)의 용량으로 9량체 펩타이드를 주입한 후의 발 부종을 나타낸다. PBS는 대조군으로서 주입되었다. y-축은 각 측정 시점에서의 발의 폭과 발병시(시간 0)의 발의 폭 간의 차이(mm 단위)를 나타내는 Δ발 부종을 나타낸다. 상기 결과들은 평균±SE로 표시되었다. 각 그룹의 마우스 수(n)는 각 도면에 삽입되어 표시된다; * P < 0.05.
도 3a 내지 3c는 5량체 RA 펩타이드(서열번호 1)에 의한 처리는 C57BL/6 백그라운드의 CIA 마우스에서 염증이 있는 관절의 정상 조직학을 회복시킬 수 있음을 증명한 것이다. 도 3a 및 3b는 PBS 대조군(도 3a) 또는 5량체 RA 펩타이드(도 3b)로 처리된 마우스로부터의 H&E 염색된 뒷다리 접합부 절편의 대표적인 현미경 사진이다. 도 3c는 PBS 대조군(n=7) 또는 5량체 RA 펩타이드(n=7)로 처리된 마우스로부터의 H&E 염색된 뒷다리 관절 절편의 조직학적 검사로 평가한 평균 염증 점수를 요약한 그래프로서, 0은 침윤 없음을 나타내고, 4는 방광 침윤을 나타냈다; p <0.0001.
도 4는 7량체 및 9량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호 5~6)가 DBA/1 백그라운드에서 CIA 마우스 내의 관절 염증을 감소시키는 것을 증명하는 그래프이다. 상기 도면은 표시된 시점(화살표로 표시)에서 200㎍의 펩타이드 주입 후 발 부종(paw swelling)을 나타낸다. PBS를 대조군으로 주입하였다. y-축은 각 측정 시점에서의 발의 폭과 발병시(시간 0)의 발의 폭 간의 차이(mm 단위)를 나타내는 Δ 발 부종을 나타낸다. 상기 결과들은 평균±SE로 표시되었다. 각 그룹의 마우스 수(n)는 각 도면에 삽입되어 표시된다; * P <0.05, ** p <0.01.
도 5a 및 5b는 5량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호 4)가 DBA/1 백그라운드에서 CIA 마우스에서 관절 염증을 감소시킨다는 것을 증명하는 그래프이다. 상기 도면들은 표시된 시점(화살표로 표시)에서 200㎍의 용량으로 펩타이드를 주사한 후의 발 부종을 나타낸다. PBS(도 5a 및 5b) 또는 덱사메타손(Dex)(도 5a)을 대조군으로서 주사하였다. y-축은 각 측정 시점에서의 발의 폭과 발병시(시간 0)의 발의 폭 간의 차이(mm 단위)를 나타내는 Δ 발 부종을 나타낸다. 결과는 평균±SE로 표시된다. 각 그룹의 마우스 수(n)는 각 도면에 삽입하여 표시된다. * P <0.05, ** p <0.01.
도 6은 5량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호 4)가 C57BL 백그라운드 상의 CIA 마우스에서 관절 염증을 감소시키는 것을 증명하는 그래프이다. 상기 도면들은 질병 발병 후 연속 10일 동안 70㎍의 용량으로 펩타이드를 주입한 후의 발 부종을 나타낸다. PBS를 대조군으로 주입하였다. y-축은 각 측정 시점에서의 발의 폭과 발병시(시간 0)의 발의 폭 간의 차이(mm 단위)를 나타내는 Δ 발 부종을 나타낸다. 상기 결과들은 평균±SE로 표시된다; * P <0.006.
도 7a 내지 도 7c는 코어 MTADV 서열(서열번호 5)을 포함하는 7량체 보호된 RA 펩타이드가 DBA/1 백그라운드에서 CIA 마우스의 관절 염증을 감소시키는 반면에 비특이적 코어가 스크램블된(scrambled) 7량체 펩타이드(서열번호 7)는 상기 모델에서 관절 염증에 영향을 미치지 않는다 것을 증명하는 그래프들이다. 상기 도면들은 표시된 시점(화살표로 표시)에서 200㎍의 용량으로 펩타이드 주입 후의 발 부종을 나타낸다. PBS를 대조군으로 주입하였다. y-축은 각 측정 시점에서의 발의 폭과 질병의 발병시(시간 0, 도 7b) 발의 폭 간의 차이를 mm로 표시한 발 부종(도 7a 및 7c) 또는 Δ 발 부종(도 7b)을 나타낸다. 결과는 평균±SE로 표시된다. 각 그룹의 마우스 수(n)는 각 도면에 삽입하여 표시된다. * P <0.05, ** p <0.005.
도 8은 표 6에 기재된 실험방법에 따라 7량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호: 5) 또는 비특이적 스크램블된 7량체 펩타이드 (서열번호: 7)를 주사한 후의 CIA 마우스의 건강한 뒷발의 백분율을 나타낸 바(bar) 그래프이다. PBS를 대조군으로서 주사 하였다.
도 9a 내지 9b는 5량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호 4)에 의한 C57BL/6 백그라운드에서 CIA 마우스 내의 관절 염증을 억제하기 위한 최적의 투여량은 주사당 70㎍의 투여량임을 증명하는 그래프이다. 상기 도면들은 질병 발병 후 연속 10일 동안 70, 200 및 600㎍(도면 9a) 또는 10, 25 및 70㎍(도면 9b)의 용량으로 펩타이드를 주사한 후의 발 부종을 나타낸다. PBS를 대조군으로 주입하였다. y-축은 각 측정 시점에서의 발의 폭과 발병 초기(시간 0)의 발의 폭 간의 차이를 표시하는 Δ 발 부종을 나타낸다. 결과는 평균±SE로 표시된다. 각 그룹의 마우스 수(n)는 각 그래프에 삽입되어 표시된다. * P는 각 그래프에 표시된다.
도 10은 C57BL/6 마우스에서 지연형 과민성(DTH) 반응에 대한 5량체 RA 펩타이드(서열번호 1)의 효과를 나타내는 그래프들이다. y-축은 7일째에 오른쪽 귀와 왼쪽 귀 사이의 두께의 차이를 나타낸다. PBS 및 항-TNFα에 의한 처리는 각각 양성 및 음성 대조군으로서 작용하였다. 상기 결과들은 평균±SE로 표시된다. 상기 DTH 프로토콜은 0일째에 옥사졸론에 의한 감각; 그리고 6일째에 옥사졸론으로 귀에 자극(challenge); 및 7일째의 귀의 측정을 포함하였다. PBS 또는 펩타이드를 -1일부터 7일째까지 주사하였다.
도 11은 ELISA로 측정한, 5량체 펩타이드(서열번호 1)로 처리한 마우스의 혈청 중 항-펩타이드 특이적 항체의 중화의 부재를 나타낸 그래프이다. ELISA 플레이트들은 5량체 펩타이드 또는 콜라겐으로 코팅하고, 양성 대조군으로서 마우스 IgG를 사용하였다. 5량체 펩타이드 또는 PBS로 처리한 마우스로부터의 혈청을 플레이트 웰에 첨가하였다. 약물 미투여 마우스 및 PBS로 처리한 마우스로부터의 혈청을 음성 대조군으로 사용하였다.
도 12는 5량체 펩타이드 표적 단백질들의 동정을 위해 사용된 공정에 대한 대표 개략도이다.
도 13은 펩타이드의 1회 주사 후의 마우스의 혈청에서의 5량체 RA 펩타이드(서열번호 1)의 약물학적 제거를 나타낸 그래프이다.
도 14는 MTT 분석에 의해 측정한, RA 환자의 염증성 관절로부터 분리된 섬유 아세포의 생존에 대한 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)의 시험관내 효과를 증명하는 그래프이다.
도 15는, MTT 분석에 의해 측정한 바와 같이, RA 환자의 염증성 관절로부터 분리된 섬유아세포의 생존율에 대한 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)의 시험관내 효과를 혈청 아밀로이드 A(Serum Amyloid A : SAA)가 방해하는 것을 증명하는 그래프이다. 락트알부민(LA)은 비특이적인 대조군으로 사용되었다. 상기 5량체 펩타이드를 일정한 농도(25㎍/ml)로 첨가하였다; X-축은 SAA 및 LA 농도를 나타낸다.
도 16은 MTT 분석으로 측정된, RA 환자의 염증성 관절로부터 분리된 섬유아세포의 생존율에 대한 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)의 시험관내 효과를 5량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호: 4)와 비교하여 증명하는 그래프이다.

본 발명은 일부 구체예로서 CD44의 단리된 폴리펩타이드 및 특히 한정되지는 않으나, CD44vRA의 단리된 폴리펩타이드 및 염증성 질병의 치료에서의 그의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 적어도 하나의 구체예를 상세하게 설명하기 전에, 본 발명은 그것의 적용에 있어서 이하의 설명에서 설명되거나, 또는 실시예들에 의해 예시된 세부 사항으로 반드시 제한되지 않는다는 것을 이해하여야 한다. 본 발명은 다른 구체예들이 가능하거나 또는 다양한 방법으로 실시되거나 수행될 수 있다.

CD44는 세포-세포 및 세포-매트릭스 상호작용, 세포 이동, 프로그램된 세포 괴사(세포 자멸), 또는 역으로 세포 생존 및 세포 증식을 포함하는 다중 세포성 기능과 연관된 세포 표면 부착 분자이다. 인간 CD44의 게놈 서열은 5' 말단에 5개의 불변 엑손 및 3' 말단에 5개의 불변 엑손뿐만 아니라 그 사이에 포함된 9개의 변이 엑손을 포함한다. CD44의 수십 개의 스플라이스 변이체가 현재까지 알려져 있다. 임의의 변이된 엑손을 함유하지 않는 CD44(서열번호 9)는 가장 보편적인 형태이며, 대부분의 세포 유형에 의해 발현된다. 건선성 관절염(PA), 류마티스성 관절염(RA) 환자의 관절 염증 세포들은 건강한 공여자의 케라티노사이트 또는 말초 혈액 백혈구(PBL)에서는 발현되지 않는 CD44vRA(서열번호 11)로 명명된 선택적으로 접합된 CD44 변이체의 염기서열을 나타낸다.

본 발명을 실시하기 위해, 본 발명자들은 CD44vRA의 변이체 엑손 4와 변이체 엑손 5 사이의 스플라이싱 연접부 내에 알라닌을 포함시킴으로써 생성된 MTADV 서열을 포함하는 5, 7 또는 9량체와 같이 짧은 펩타이드들이 CIA 마우스 모델(인간 RA의 마우스 유사체)에서 관절 염증을 억제할 수 있는 방법을 밝혀냈다. 이론에 얽매이기를 원하지 않고, 본 발명의 일부 구체예들의 폴리펩타이드는 CD44vRA의 천연 리간드와 경쟁함으로써 활성을 유도한다고 믿어지고 있다.

하기 실시예 부분에 예시된 바와 같이, 본 발명자들은 5-, 7- 및 9량체 펩타이드(서열번호 1~3, 본 명세서에서 "RA 펩타이드"라고도 표시됨) 및 각각의 펩타이드들의 아미노 말단 및 카르복실 말단(서열번호 4~6, 본 명세서에서 "RA 보호된 펩타이드"라고도 표시됨)에서 아세틸 및 아미드 보호 잔기들(residues)을 갖는 각각의 펩타이드들을 합성하였다. 상기 펩타이드들은 소수성 아미노산, 단백질 가수분해 사이트가 없으며, 실온에서 안정하고, 4℃에서 적어도 22주 동안 안정하다(실시예 1, 도 1). 합성된 RA 펩타이드들 및 RA 보호된 펩타이드들은 CIA 마우스 모델에서 생체내 관절염을 감소시킬 수 있었다(실시예 2~4, 도 2a 내지 2b, 도 3a~c, 도 4, 도 5a~b, 도 6, 도 8 및 도 9a~b). 또한, 상기 펩타이드들은 중화(neutralizing) 항-펩타이드 특이적 항체의 생성을 유도하지도 않고, 지연형 과민성(DTH) 반응에 의해 평가된 바와 같은 일반적인 면역 반응에도 영향을 미치지 않았다(실시예 5~6, 도 10~11). 중요하게도, 스크램블된 비특이적 7량체 보호된 펩타이드(서열번호 7)는 CIA 마우스 모델(실시예 3, 도 7a~b 및 도 8)에서 관절염에 어떠한 영향을 미치지 않았다. 질량 분광계 분석은 RA 펩타이드들의 몇몇 잠재적인 표적 단백질, 즉 혈청 아밀로이드 A, 트랜스사이레틴 및 아포지질단백질 B(실시예 7, 도 12)를 거의 나타내지 않았다. 또한, 본 발명자들은 RA 펩타이드들 및 RA 보호된 펩타이드들의 활성을 시험하기 위한 신규한 시험관내 분석법을 개발하였다(실시예 9, 도 14~16).

결론적으로, 본 발명의 기술들은 염증성 질병의 치료에서 RA- 및 RA- 보호된 펩타이드를 포함하는 조성물의 용도를 제시한다.

따라서, 본 발명의 제1 측면에 따르면, 서열번호 1~3으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 단리된 폴리펩타이드가 제공된다.

특정 구체예들에 따라, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 1에 표시된 바와 같다.

특정 구체예들에 따라, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 2에 표시된 바와 같다.

특정 구체예들에 따라, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 3에 표시된 바와 같다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 서열번호 1~3으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 말단-캡핑된 변형 폴리펩타이드가 제공되고, 여기서 상기 변형 폴리펩타이드는 항-염증 활성을 포함한다.

특정 구체예들에 따라, 말단-캡핑된 변형된 폴리펩타이드의 폴리펩타이드 아미노산 서열은 서열번호 1~3으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 단리된 폴리펩타이드 및 상기 단리된 폴리펩타이드에 부착된 비단백질성 부분을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 상기 단리된 융합 폴리펩타이드는 항-염증 활성을 포함한다.

본 발명의 또 다른 측면에 따르면, C 말단 및/또는 N 말단에 부착된 아미노산 서열을 갖는 단리된 폴리펩타이드를 포함하는 단리된 융합 펩타이드가 제공되며, 여기서 상기 C 말단 아미노산 서열은 상기 단리된 융합 폴리펩타이드를 갖는 비연속적 CD44vRA 아미노산 서열이고; 상기 융합 폴리펩타이드는 항-염증 활성을 포함한다.

본 발명에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "펩타이드" 및 "폴리펩타이드"는 천연 펩타이드들(분해 생성물, 합성적으로 합성된 펩타이드들 또는 재조합 펩타이들) 및 펩타이드 유사체인 펩토이드 및 세미펩토이드 뿐만 아니라, 예를 들어, 생체 내에서 펩타이드를 보다 안정하게 만들고, 세포 내로 침투하여 제거, 생체 분배 및/또는 약동학을 개선시킬 수 있는 변형을 갖는 펩타이도미메틱스(peptidomimetics)(전형적으로 인공적으로 합성된 펩타이드들)를 포함한다. 그러한 변형들은 N 말단 변형, C 말단 변형, 펩타이드 결합 변형, 골격 변형 및 잔기 변형을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 펩타이도미메틱 화합물을 제조하는 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, Quantitative Drug Design, C.A Ramsden Gd., Chapter 17.2, F. Choplin Pergamon Press(1992)에 개시되어 있고, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고문헌으로 통합된다. 이와 관련한 보다 상세한 내용은 이하에 제공된다.

상기 펩타이드 내의 펩타이드 결합들(-CO-NH-)은, 예를 들어 N-메틸화 아미드 결합들(-N(CH₃)-CO-), 에스테르 결합들(-C(=O)-O-), 케토메틸렌 결합들(-CO-CH₂-), 설피닐메틸렌 결합들(-S(=O)-CH₂-), α-아자 결합들(-NH-N(R)-CO-)로 치환될 수 있고, 여기서 R은 임의의 알킬(예를 들면, 메틸), 아민 결합들(-CH₂-NH-), 설파이드 결합들(-CH₂-S-), 에틸렌 결합들(-CH₂-CH₂-), 히드록시에틸렌 결합들(-CH(OH)-CH₂-), 티오아미드 결합들(-CS-NH-), 올레핀 이중 결합들(-CH=CH-), 플루오르화 올레핀 이중 결합들(-CF=CH-), 레트로 아미드 결합들(-NH-CO-), 펩타이드 유도체들(-N(R)-CH₂-CO-)이며, 여기서 R은 탄소 원자 상에 자연적으로 존재하는 "노르말" 측쇄(side chain)이다.

이들 변형들은 펩타이드 사슬의 결합들 중 어느 것에서, 그리고 동시에 여러(예를 들면, 2~3개) 결합들에서 발생할 수 있다.

천연 방향족 아미노산, Trp, Tyr 및 Phe는 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-3-카르복실산(Tic), 나프틸알라닌, Phe의 고리메틸화 유도체, Phe 또는 O-메틸 -Tyr의 할로겐화 유도체와 같은 비천연 방향족 아미노산에 의해 치환될 수 있다.

본 발명의 일부 구체예들의 펩타이드들은 또한 하나 이상의 변형된 아미노산들 또는 하나 이상의 비아미노산 모노머들(예를 들어: 지방산, 복합 카보하이드레이트 등)을 포함할 수 있다.

용어 "아미노산" 또는 "아미노산들"은 20개의 천연 발생 아미노산을 포함하는 것으로 이해된다; 이들 아미노산들은 종종, 예를 들어 히드록시프롤린, 포스포세린 및 포스포트레오닌을 포함하여 생체 내에서 번역 후 변형된다; 그리고 다른 비통상적인 아미노산인 2-아미노아디프산, 하이드록시리신, 이소데스모신, 노르-발린, 노르-루신 및 오르니틴을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 상기 용어 "아미노산"은 D- 및 L-아미노산(스테레오아이소머들)을 포함한다.

표 1 및 표 2는 천연 발생 아미노산들(표 1) 및 본 발명의 일부 구체예들에서 사용될 수 있는 비통상적 또는 변형된 아미노산들(예를 들어, 합성, 표 2)을 열거한다.

아미노산	3문자 약어	1문자 기호
알라닌	Ala	A
아르기닌	Arg	R
아스파라긴	Asn	N
아스파르트산	Asp	D
시스테인	Cys	C
글루타민	Gln	Q
글루탐산	Glu	E
글리신	Gly	G
히스티딘	His	H
이소루신	Ile	I
루신	Leu	L
리신	Lys	K
메티오닌	Met	M
페닐알라닌	Phe	F
프롤린	Pro	P
세린	Ser	S
트레오닌	Thr	T
트립토판	Trp	W
티로신	Tyr	Y
발린	Val	V
상기와 같은 임의의 아미노산	Xaa	X

본 발명의 폴리펩타이드들의 아미노산들은 보존적으로 또는 비보존적으로 치환될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "보존적 치환"은 펩타이드의 천연 염기서열에 존재하는 아미노산을 천연 또는 비천연 발생 아미노산 또는 유사한 입체 물성을 갖는 펩타이도미메틱스로 치환하는 것을 의미한다. 치환될 천연 아미노산의 측쇄가 극성 또는 소수성인 경우, 상기 보존적 치환은 (치환된 아미노산의 측쇄와 동일한 입체적 성질을 갖는 것 이외에) 마찬가지로 극성 또는 소수성인 천연 발생 아미노산, 비천연 발생 아미노산 또는 펩타이도미메틱 모이어티와 함께 존재해야 한다.

천연 발생 아미노산들은 그의 특성들에 따라 전형적으로 분류되기 때문에, 천연 발생 아미노산들에 의한 보존적 치환들은 본 발명에 따라 하전된 아미노산들이 보존적 치환기들로 간주되는 입체적으로 유사한 비하전 아미노산들로 치환된다는 사실을 고려하여 쉽게 결정될 수 있다.

비천연 발생 아미노산들에 의해 보존적 치환을 생성하기 위해, 당분야에 공지된 아미노산 유사체들(합성 아미노산들)을 사용할 수도 있다. 천연 발생 아미노산의 펩타이도미메틱은 숙련된 당업자에게 공지된 문헌에 잘 기록되어 있다.

보존적 치환을 수행할 때, 상기 치환 아미노산은 원래의 아미노산과 같이 측쇄에 동일하거나 유사한 관능기를 가져야 한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비보존적 치환기들"은 부모 서열에 존재하는 것과 같은 아미노산을 다른 전기 화학 및/또는 입체 특성들을 갖는 또 다른 천연 또는 비천연 발생 아미노산으로 치환하는 것을 의미한다. 따라서, 치환 아미노산의 측쇄는 치환되는 천연 아미노산의 측쇄보다 현저하게 클 수 있고, 그리고/또는 치환된 아미노산보다 현저하게 다른 전기적인 특성들을 갖는 관능기들을 가질 수 있다. 상기 유형의 비보존적 치환기들의 구체예들은 알라닌에 대한 페닐알라닌 또는 시클로헥실메틸글리신, 글리신에 대한 이소루신, 또는 아스파르트산에 대한 -NH-CH[(-CH₂)₅-COOH]-CO-의 치환기를 포함한다. 본 발명의 범위에 속하는 이들 비보존적 치환기들은 여전히 신경보호 특성들을 갖는 펩타이드를 구성하는 것이다.

본 발명의 일부 구체예들의 펩타이드들은, 바람직하게는 선형으로 이용되지만, 고리화가 펩타이드 특성을 심각하게 방해하지 않는 경우, 펩타이드의 고리형이 또한 이용될 수 있다고 인식될 것이다.

본 발명의 펩타이드들은, 바람직하게는 펩타이드가 가용성 형태로 존재할 것을 요구하는 치료제에 사용되기 때문에, 본 발명의 일부 구체예들의 펩타이드들은 바람직하게는 하나 이상의 비천연 또는 천연 극성 아미노산인 히드록실-포함 측쇄로 인해 펩타이드 안정성을 증가시킬 수 있는 세린 및 트레오닌을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 상기 펩타이드의 N 말단 및 C 말단은 관능기에 의해 보호될 수 있다. 적합한 관능기들은, 그 내용이 본 명세서에 참고문헌으로서 통합되어 있는 Green 및 Wuts의 "Protecting Groups in Organic Synthesis", John Wiley 및 Sons, Chapters 5 and 7, 1991에 기재되어 있다. 따라서, 상기 폴리펩타이드는 엔드 캡핑된 변형 펩타이드를 생성하기 위해 그것의 N-(아민) 말단 및/또는 C-(카르복실) 말단에서 변형될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 상기 표현 "엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드" 및 "보호된 폴리펩타이드"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용가능하고, 이것의 N-(아민)말단 및/또는 C-(카르복실)말단이 변형된 폴리펩타이드를 의미한다. 상기 엔드-캡핑된 변형은 캡을 형성하기 위해 폴리펩타이드의 말단에 화학적 모이어티의 부착을 의미한다. 이러한 화학적 모이어티는 본 명세서에서 엔드 캡핑된 모이어티를 의미하며, 통상적으로 본 명세서 및 당 분야에서 상호교환적으로 펩타이드 보호 모이어티 또는 관능기로 지칭된다. 히드록실 보호기들은 에스테르, 카르보네이트 및 카르바메이트 보호기들을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 아민 보호기들은 알콕시 및 아릴록시 카르보닐기를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 카르복실산 보호기들은 지방족 에스테르, 벤질 에스테르 및 아릴 에스테르를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 표현 "엔드-캡핑된 모이어티"는 말단에 부착될 때 펩타이드의 N 말단 및/또는 C 말단을 변형시키는 모이어티를 의미한다. 말단-캡핑된 변형은 전형적으로 펩타이드 말단의 전하를 마스킹하고, 그리고/또는 소수성, 친수성, 반응성, 용해도 등과 같은 그것의 화학적 특성을 변경시키는 결과를 나타낸다. 말단 캡핑된 변형의 성질을 선택함으로써, 소수성/친수성뿐만 아니라 펩타이드의 용해도를 미세하게 조절할 수 있다. 특정 구체예들에 따라, 상기 보호기들은 그에 부착된 펩타이드의 세포 내로의 운반을 촉진시킨다. 이들 잔기들은 세포내에서 가수분해 또는 효소적으로 생체내에서 분해될 수 있다.

특정 구체예들에 따라, 말단-캡핑된 변형은 폴리펩타이드의 생물학적 활성(즉, 항염증 활성)을 손상시키지 않는다. 펩타이드의 엔드-캡핑된 변형에 적합한 잔기들의 구체예들은, 예를 들어 Green 등의 "Protective Groups in Organic Chemistry", (Wiley, 2.sup.nd ed. 1991) 및 Harrison et al., "Compendium of Synthetic Organic Methods", Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996)에서 발견될 수 있다.

특정 구체예들에 따르면, 상기 엔드-캡핑은 N 말단 엔드-캡핑을 포함한다.

N-말단 엔드-캡핑된 잔기들의 대표적인 예들로는 포르밀, 아세틸(본 명세서에서 "AC"로도 표시됨), 트리플루오로아세틸, 벤질, 벤질옥시카르보닐(본 명세서에서 "Cbz"로도 표시됨), tert-부톡시카르보닐(본 명세서에서 "Boc"로도 표시됨), 트리메틸실릴(본 명세서에서 "TMS"로도 표시됨), 2-트리메틸실릴-에탄설포닐(본 명세서에서 "SES"로도 표시됨), 트리틸 및 치환된 트리틸기들인 알릴옥시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐(본 명세서에서 "Fmoc"로도 표시됨), 및 니트로-베라트릴옥시카르보닐("NVOC")을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

특정 구체예들에 따라, 상기 N 말단 엔드-캡핑은 아세틸을 포함한다.

특정 구체예들에 따라, 상기 엔드-캡핑은 C 말단 엔드-캡핑을 포함한다.

C-말단 엔드-캠핑된 잔기들의 대표적인 구체예들은 C-말단에서 카르복실기의 아실화를 유도하는 전형적인 잔기들이며, 알킬에테르, 테트라히드로피라닐 에테르, 트리알킬실릴 에테르, 알릴에테르, 모노메톡시트리틸 및 디메톡시트리틸뿐만 아니라 벤질 및 트리틸 에테르를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 선택적으로 C-말단-캡핑의 -COOH기는 아미드기로 변형될 수 있다.

특정 구체예들에 따라, 상기 C 말단 엔드-캡핑은 아미드를 포함한다.

다른 펩타이드의 엔드-캡핑 변형은 아민 및/또는 카르복실을 히드록시, 티올, 할라이드, 알킬, 아릴, 알콕시, 아릴옥시 등과 같은 다른 모이어티로의 치환을 포함한다.

특정한 구체예들에 따라, 상기 펩타이드는 N-말단 또는 C-말단에서만 오직 변형된다.

다른 특정한 구체예들에 따라, 상기 펩타이드는 N-말단 및 C-말단에서 변형된다.

특정한 구체예들에 따라, 상기 펩타이드는 N-말단에서 아세틸로, C 말단에서 아미드로 변형된다.

특정한 구체예들에 따라, 상기 말단-캡핑된 변형 폴리펩타이드는 서열번호 4~6으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 발명은 본 발명에 따른 펩타이드들, 유사체들 및 유도체들을 포함하는 폴리펩타이드 접합체(conjugate) 및 융합 폴리펩타이드를 더 제공한다.

따라서, 상술한 바와 같이, 본 발명의 일 측면에 따르면, C 말단 및/또는 N 말단에 부착된 아미노산 서열을 갖는 단리된 폴리펩타이드를 포함하는 단리된 융합 폴리펩타이드를 제공하고, 여기서 상기 C 말단 아미노산 서열은 상기 단리된 융합 폴리펩타이드를 갖는 비연속적 CD44vRA 아미노산 서열이고; 그리고 상기 융합 폴리펩타이드는 항염증 활성을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 표현 "비연속적 CD44vRA 아미노산 서열"은 그의 C 말단에서, 각각 서열번호 11의 좌표 306, 308 또는 308에서 개시되는 CD44vRA의 아미노산 서열에 직접 부착된 서열번호 1, 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하지 않는 융합 폴리펩타이드를 의미한다.

특정 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드 및 상기 부착된 아미노산 서열은 직접적으로, 또는 스페이서 또는 합성 또는 아미노산 링커일 수 있는 링커를 통해 공유결합적으로 부착된다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "CD44"는 다수의 포유류 세포 유형에서 발현되고, CD44 유전자에 의해 인코딩되는 세포 표면 단백질을 의미한다. 특정 구체예에 따라, 상기 CD44는 인간 CD44 유전자이다. 엑손 1~5 및 16~20을 포함하는 CD44로 명명된 표준 동형 단백질은 대부분의 세포 유형에서 발현되며, GeneBank Accession No. NM_000610 및 NP_000601 (서열번호 8 및 9)로 표시된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 용어 "CD44vRA"(서열번호 10 및 11)는 염증 부위에서, 예를 들어, 건강한 사람의 PBL이 아니라 RA 환자의 포화 지방 세포(synovial fluid cell)에서 발현되는 CD44 변이체를 의미한다. CD44vRA 변이체는 염증 부위 내(예를 들어, RA 환자들의 관절 내)의 세포에서 발생하고, 공지된 CD44 유전자의 절단 또는 돌연변이로부터는 발생하지 않는 공지된 CD44 유전자의 1차 전사물의 선택적 접합에 의해 생성되는 것으로 추측되는 천연 발생 염기서열이다. 상기 CD44vRA 변이체의 염기서열은 유전자의 가변 영역의 엑손 7~14(v3-vl0)뿐만 아니라 CD44 유전자의 불변 영역의 엑손 1~5, 15~17 및 19를 포함한다. 상기 변이체 코딩 서열은 엑손 v4를 엑손 v5에 가교하는 인트론의 말단으로부터 전사되고, 엑손 v5의 5' 말단에 삽입되는 3개의 추가 염기(CAG)를 포함한다. 이러한 여분의 CAG 서열은 판독 프레임을 손상시키지 않으면서 서열번호 11의 위치 303에서 아미노산 알라닌에 대한 새로운 코돈의 삽입을 초래한다.

상기 용어들 "CD44" 및 "CD44vRA"는 또한 원하는 활성(예를 들어, 세포 이동 및/또는 세포-세포 및 세포-매트릭스 상호작용)을 나타내는 CD44 및 CD44vRA 동족체들(homologues)을 의미한다. 이러한 동족체들은, 예를 들어, 서열번호 9 및 11의 폴리펩타이드와 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일하거나 동족체이거나, 또는 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일할 수 있다.

또한, 상기 동족체는 활성을 유지하는 한, 아미노산 치환기를 포함하는 오솔로그(ortholog), 결실(deletion), 삽입 또는 치환 변이체를 의미할 수 있다.

서열 동일성 또는 동족체는 Blast, ClustalW, 및 MUSCLE과 같은 임의의 단백질 또는 핵산 서열 배열(nucleic acid sequence alignment) 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.

본 발명의 다른 특정 구체예들에 따라, 상기 펩타이드는 비단백질 모이어티에 부착된다.

특정 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드 및 상기 부착된 비단백질 모이어티는 직접적으로, 또는 스페이서 또는 링커를 통하여 공유결합적으로 부착된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 표현 "비단백질 모이어티"는 상기 기재된 펩타이드에 부착된 펩타이드 결합된 아미노산들을 포함하지 않는 분자를 의미한다. 특정 구체예에 따라, 상기 비단백질성은 비독성 모이어티이다. 본 발명의 기술들에 따라 사용될 수 있는 예시적인 비단백질 모이어티들은 약물, 화학, 작은 분자, 폴리뉴클레오타이드, 검출가능 모이어티, 폴리에틸렌글리콜(PEG), 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리(스티렌 코말레익 언하이드라이드)(SMA), 및 디비닐 에테르 및 말레익 언하이드라이드 코폴리머(DIVEMA)를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 특정 구체예들에 따라, 상기 비단백질 모이어티는 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 포함한다.

이러한 분자는 매우 안정적(비단백질 모이어티에 의해 부여된 입체 장애로 인하여 생체 내 단백질 분해 활성에 내성이 있을 수 있음)이며, 이하에 기술되는 바와 같이, 저렴하고 고효율적인 통상의 고체상 합성 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 그러나, 재조합 기술이 여전히 사용될 수 있으며, 이로써 상기 재조합 펩타이드 생성물은 시험관내 변형(예를 들어, 이하에서 추가로 기술되는 바와 같은 PEG화)에 적용될 것이다.

PEG(즉, PEG화)를 갖는 폴리펩타이드 아미노산 서열의 생물접합기술(Bioconjugation)은 PEG 카르복실산의 N-히드록시숙신이미드(NHS) 에스테르, 모노메톡시 PEG₂-NHS, 카르복시메틸화된 PEG의 숙신이미딜 에스테르(SCM-PEG), PEG의 벤조트리아졸 카르보네이트 유도체들, PEG의 글리시딜 에테르, PEG p-니트로페닐카르보네이트(PEG-NPC, 예를 들어 메톡시 PEG-NPC), PEG 알데하이드, PEG-오르토피리딜-디설파이드, 카르보닐디이미다졸-활성화된 PEGs, PEG-티올, PEG-말레이미드와 같은 PEG 유도체들을 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 PEG 유도체들은 다양한 분자량의 것들이 상업적으로 입수가능하다[참조, 예를 들어, Catalog, Polyethylene Glycol and Derivatives, 2000 (Shearwater Polymers, Inc., Huntsvlle, Ala.)]. 원한다면, 상기 유도체들의 다수는 단일 작용성 모노메톡시 PEG(mPEG) 형태로 입수 가능하다. 일반적으로, 본 발명의 폴리펩타이드에 첨가되는 상기 PEG는 수백 달톤의 분자량(MW) 내지 약 100kDa(예를 들어, 3~30kDa)의 범위 내여야 한다. 더 큰 분자량의 PEG가 사용될 수 있지만, PEG화된 폴리펩타이드의 수율의 일부 손실을 초래할 수 있다. 저 분자량 PEG에 대하여 얻을 수 있는 것보다 더욱 높은 순도의 보다 큰 PEG를 얻는 것이 어려울 수 있기 때문에, 더 큰 PEG 분자의 순도도 관찰되어야 한다. 적어도 85% 순도, 보다 바람직하게는 적어도 90% 순도, 95% 순도 또는 그 이상의 순도의 PEG를 사용하는 것이 바람직하다. 분자의 PEG화는, 예를 들어 Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press San Diego, Calif. (1996), at Chapter 15 and in Zalipsky et al., "Succinimidyl Carbonates of Polyethylene Glycol," in Dunn and Ottenbrite, eds., Polymeric Drugs and Drug Delivery Systems, American Chemical Society, Washington, D.C. (1991)에서 더욱 논의되어 있다.

편리하게는, PEG는 접합체의 활성이 유지되는 한 부위 특이적 돌연변이 유발에 의해 폴리펩타이드의 선택된 위치에 부착될 수 있다. PEG화에 대한 표적은 펩타이드 서열의 N-말단 또는 C-말단의 임의의 시스테인 잔기일 수 있다. 추가적으로 또는 선택적으로, 다른 시스테인 잔기들이 폴리펩타이드 아미노산 서열(예를 들어, N-말단 또는 C-말단)에 첨가되어 PEG화를 위한 표적으로서 작용할 수 있다. 활성을 손상시키지 않으면서 돌연변이 유발을 위한 바람직한 위치를 선택하기 위해 전산 분석이 수행될 수 있다.

PEG-말레이미드, PEG-비닐술폰(VS), PEG-아크릴레이트(AC), PEG-오르토피리딜 디설파이드와 같이 활성화된 PEG의 다양한 접합 화학이 사용될 수 있다. 활성화된 PES 분자들을 제조하기 위한 방법은 당분야에 잘 알려져 있다. 예를 들면, PEG-VS는 PEG-OH의 디클로로메탄(DCM) 용액을 NaH와 반응시키고, 디비닐설폰(0.2g PEG/mL DCM에서, 몰비:OH 1:NaH 5:디비닐설폰 50)과 반응시킴으로써 아르곤 하에서 제조될 수 있다. PEG-AC는 PEG-OH의 DCM 용액을 아크릴로일클로라이드 및 트리에틸아민(0.2g PEG/mL DCM에서, 몰비: OH 1: 아크릴로일클로라이드 1.5:트리에틸아민 2)과 반응시킴으로써 아르곤 하에서 제조하였다. 이러한 화학 관능기들은 선형 2-arm, 4-arm 또는 8-arm PEG 분자들에 부착될 수 있다.

결과의 접합된(conjugated) 분자(예를 들어, PEG화 또는 PVP-접합된 폴리펩타이드)는 생물학적 분석뿐만 아니라, 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 사용하여 분리, 정제 및 검정된다.

특정한 구체예들에 따라, 상기 서열번호 1~3으로 이루어진 것으로 나열된 것들 이외의 본 발명의 폴리펩타이드의 CD44vRA 펩타이드 부분은 5~100, 5~50 또는 5~40, 또는 5~20, 5~15, 5~10, 5~9, 5~7개의 아미노산 길이이다.

특정한 구체예들에 따라, 본 발명의 폴리펩타이드의 펩타이드 부분은 서열번호 1~3으로 이루어진 것으로 열거된 것 이외의 다른 CD44vRA 아미노산 서열을 포함하지 않는다.

본 발명의 펩타이드 및 조성물은 침투제에 (공유 결합 또는 비공유 결합으로) 결합될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 표현 "침투제"는 세포막을 가로지르는 부착된 펩타이드 또는 조성물 중 어느 하나의 전위(translocation)를 향상시키는 제제를 의미한다.

일 구체예에 따르면, 상기 침투제는 펩타이드이고, 펩타이드 결합을 통해 (직접 또는 간접적으로) 폴리펩타이드에 부착된다.

전형적으로, 펩타이드 침투제는 리신 또는 아르기닌과 같은 비교적 큰 양전하 아미노산을 함유하는 아미노산 조성물을 갖거나 또는 극성/하전된 아미노산과 비극성, 소수성 아미노산의 교차 패턴을 함유하는 서열을 갖는다.

특정한 구체예들에서, 상기 폴리펩타이드는 하기에 더 기재된 바와 같이, 폴리펩타이드의 세포내 전달을 증진시키는 세포 침투에 적합한 제제로 제공된다.

비제한적인 예로서, 세포 침투 펩타이드(CPP) 서열은 세포 내 침투를 증진시키기 위해 사용될 수 있다; 그러나, 상기 개시는 그렇게 제한되지는 않으며, 임의의 적합한 침투제가 당업자에게 공지된 바와 같이 사용될 수 있다.

세포 침투성 펩타이드들(CPPs)은 짧은 펩타이드들(≤40개 아미노산)이며, 거의 모든 세포의 내부에 접근할 수 있다. 그들은 양이온성이 높고, 보통 아르기닌과 리신 아미노산이 풍부하다. 그들은 단백질, 올리고뉴클레오타이드 및 심지어 200nm 리포좀과 같은 다양한 공유 및 비공유 접합화된 카르고들(conjugated cargoes)을 세포 내로 운반하는 예외적인 특성을 가지고 있다. 따라서, 추가의 예시적인 구체예에 따라, CPP는 본 발명의 폴리펩타이드 또는 조성물을 세포의 내부로 이동(transport)시키기 위해 사용될 수 있다.

TAT(HIV-1의 전사 활성제), pAntp(페네트라틴, Drosophila antennapedia homeodomain 전사 인자라고도 명명됨) 및 VP22(단순 포진 바이러스 유래)는 효율적인 비독성 방식으로 세포에 들어갈 수 있는 CPP의 예들이며, 본 발명의 일부 구체예들과 함께 사용하기에 적합할 수 있다. CPPs-카르고 접합체를 제조하고, 그러한 접합체로 세포를 감염시키기 위한 프로토콜들은, 예를 들어 문헌 L Theodore et al. [Journal of Neuroscience, (1995) 15 (11) : 7158-7167], Fawell S, et al. [Proc Natl Acad Sci USA, (1994) 91 : 664-668] 및 Jing Bian et al. [Circulation Research (2007) 100 : 1626-1633]에서 발견될 수 있다.

본 발명의 일부 실시예들의 폴리펩타이드들은, 고체상 및 재조합 기술을 포함하는, 펩타이드 합성 분야에서 당업자에게 공지된 임의의 기술에 의해 합성될 수 있다.

본 명세서에 기재된 임의의 단백질성 폴리펩타이드들은 폴리뉴클레오타이드로부터 인코딩될 수 있다. 이들 폴리뉴클레오타이드는 치료제로서 사용되거나 또는 약제의 재조합 생산에 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 폴리 뉴클레오타이드가 제공된다.

따라서, 본 발명의 일 측면에 따르면, 단리된 폴리 뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 구조물이 제공된다.

이러한 핵산 구조물 또는 시스템은 핵산 서열의 발현을 지시하기 위한 적어도 하나의 시스-작용(cis-acting) 조절 요소를 포함한다. 시스-작용 조절의 염기서열은 특정한 조건 하에서만 뉴클레오타이드 서열의 유도 발현을 명령하는 것들 뿐만 아니라 뉴클레오타이드 서열의 구성적 발현을 명령하는 것들을 포함한다. 따라서, 예를 들어, 구성적 또는 유도 가능한 방식으로 세포에서 폴리뉴클레오타이드 서열의 전사를 명령하기위한 프로모터 서열이 핵산 구조물에 포함된다.

본 발명의 단리된 폴리펩타이드들 및 조성물은 항염증 활성이 부여된다.

본 명세서에서 사용된 표현 "항염증 활성"은 급성 및/또는 만성 염증 반응의 예방 및/또는 감소, 및/또는 염증 관련 질병의 예방 및/또는 치료를 의미한다. 항염증 활성을 검정하기 위한 분석법에는 염증 조건(예를 들어, RA)에 대한 시험관내 및 생체내 모델 모두를 사용하는 후술되는 실시예들 부분에 기재된 것들이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 비제한적인 예들은, 하기에 더욱 기재된 바와 같이, CIA 마우스 모델(예를 들어, Nedvetzki 등 (2004) PNAS 101, 18081~18086 참조)에서의 생체내 발 부종, CIA 마우스로부터 얻은 관절 절편의 조직학적 검사 및 RA 환자의 관절 낭액(synovial fluid)에서 얻은 시험관내 섬유 아세포의 세포 생존력을 포함한다.

특정 구체예들에 따라, 항염증 활성은 백신 접종 또는 점막 내성에 의존적이지 않다.

특정 구체예들에 따르면, 본 발명의 조성물의 단리된 폴리펩타이드는 Weiss 등 (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. 미국. 97, 285-290; 및 하기 실시예 부분의 실시예 5에 기재된 것과 같은 지연형 과민성 분석(DTH)에 의해 평가될 수 있는 바와 같이, 일반적인 면역 반응에 영향을 미치지 않는다.

특정 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물은 혈청 아밀로이드 A, 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질에 결합할 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "혈청 아밀로이드 A" 또는 "SAA"는 폴리뉴클레오타이드 및 발현 생성물, 예를 들어, SAA1, SAA2 및 SAA4 유전자의 폴리펩타이드를 의미한다. SAA1은 혈청 아밀로이드 A1, MGC1 11216, PIG4, SAA, 및 종양 단백질 p53 유도성 단백질 4(TP53I4)로도 잘 알려져 있다. 특정 구체예들에 따르면, SAA1은 하기 GeneBank 번호들 NM_199161 및 NM_000331 및 유니프로 번호(Uniprot number): P0DJI8(서열번호 12~14)에 제공된 바와 같은 인간 SAA1을 의미한다. 특정 구체예들에 따르면, SAA1은 하기 GeneBank 번호 NM 009117 (서열번호: 15)에 제공되는 바와 같은 마우스 SAA1을 의미한다. SAA2는 또한 혈청 아밀로이드 A2 및 SAA로도 알려져 있다. 특정 구체예들에 따르면, SAA2는 하기 GeneBank 번호들 NM_001127380 및 NM_030754 및 유니프로 번호 P0DJI8(서열번호 16~18)에 제공된 바와 같은 인간 SAA2를 의미한다. 특정 구체예들에 따르면, SAA2는 하기 GeneBank 번호들 NM_011314(서열번호 NO: 19)에 제공된 바와 같은 마우스 SAA2를 의미한다. 특정 구체예들에 따르면, SAA4는 하기 GeneBank 번호 NM_006512 및 유니프로 번호 P35542(서열번호 20~21)에 제공된 바와 같은 인간 SAA4를 의미한다.

특정 구체예들에 따라, 상기 용어 "SAA"는 혈청 아밀로이드 A 급성 단계의 단백질군(family of proteins)에 속하는 SAA1 및 SAA2 유전자를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 용어 "트랜스타이레틴"은 폴리뉴클레오타이드 및 발현 생성물, 예를 들어, 갑상선 호르몬 티록신 및 레티놀의 단백질 담체 인 TTR 유전자의 폴리펩타이드를 의미한다. 특정 구체예들에 따라, 트랜스타이레틴은 하기 GeneBank Numbers NP_000362 및 NM_000371(서열번호 22~23)에 제공된 바와 같은 인간 트랜스타이레틴을 의미한다. 다른 특정 구체예들에 따르면, 상기 트랜스타이레틴은 하기 GeneBank 번호 NP_038725 및 NM_013697(서열번호 24~25)에 제공된 바와 같은 마우스 트랜스타이레틴을 의미한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "아포리포프로테인 B"는 폴리뉴클레오타이드 및 발현 생성물, 예를 들어, APOB 유전자의 폴리펩타이드를 의미한다. 특정 구체예들에 따르면, 아포리포프로테인 B는 다음의 GeneBank 번호 NP_000375 및 NM_000384(서열번호 26~27)에 제공된 바와 같은 인간 아포리포프로테인 B를 의미한다. 다른 특정 구체예에 따르면, 아포리포프로테인 B는 다음의 유전자 은행 번호 NP_033823 및 NM_009693 (서열번호 28 내지 29)에서 제공되는 바와 같은 마우스 아포리포프로테인 B를 나타낸다.

항염증 활성에 의해, 본 발명의 폴리펩타이드들 및 조성물들은 류마티스 관절염(RA)과 같은 염증성 질병의 치료 등 그들의 발증 또는 진행에 대해 CD44vRA(활성 또는 발현)에 의존하는 질병을 치료하는데 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 일 측면에 따라, 치료를 필요로 하는 대상에게 염증성 질병을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 치료 유효량의 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하고, 이로써 대상에서 염증성 질병을 치료한다.

본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 염증성 질병의 치료용 의약의 제조를 위한 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 용도가 제공된다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, 상기 용어 "치료하는"은 병리학(질병, 장애 또는 상태, 예컨대 염증, 예를 들어, RA)의 발병을 억제, 예방 또는 저지하고/하거나 병리학의 감소, 완화 또는 퇴행을 초래하는 것을 의미한다. 당업자는 다양한 방법론들 및 분석법들이 병리학의 발달을 평가하는데 사용될 수 있고, 유사하게, 다양한 방법론들 및 분석법들이 병리학의 감소, 완화 또는 퇴행을 평가하는데 사용될 수 있음을 이해할 것이다.

특정 구체예들에 따라, 상기 용어 "치료하는"은 RA 및 관련 질병과 연관된 증상의 개선, 심각성의 감소 또는 질병의 치료, 또는 질병의 예방, 질병이 발생하기 전에 질병과 관련된 증상의 발현의 예방, 질병의 진행을 늦추거나 그와 관련된 증상을 약화시키는 것, 완화 기간의 발병을 향상시키는 것, 질병의 진행성 만성 단계에서 초래되는 비가역적 손상을 늦추는 것, 상기 진행 단계의 발병을 지연시키는 것, 생존율 또는 더 빠른 회복을 높이는 것 또는 상기에 열거한 두 가지 이상의 조합을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 표현 "이를 필요로 하는 대상"은 염증성 질병으로 진단되거나 염증성 질병이 발병할 위험이 있는 포유 동물의 남성 또는 여성 대상(예를 들어, 인간)을 의미한다. 수의학적 용도도 또한 고려된다. 상기 대상은 신생아, 영아, 소아, 청소년, 성인 및 노인을 포함하는 모든 연령대일 수 있다.

대상에서 염증을 측정하는 방법은 당해 분야에 공지이며, 피험자로부터의 혈액 샘플에서 적혈구 침강 속도(erythrocyte sedimentation rate: ESR); 플라즈마 점도; C-반응성 단백질(CRP)의 수준; IL6 및 TNFα와 같은 특정한 염증성 사이토카인의 수준; 피브리노겐 측정 및 헤마토크릿(hematocrit) 또는 헤모글로빈을 사용하는 것과 같은 염증 지수의 결정을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

특정 구체예들에 따라, 상기 염증성 질병은 CD44vRA를 발현하는 세포들을 포함한다. 세포들에서 CD44vRA의 발현을 평가할 수 있는 분석들의 비제한적 예들은 유동 세포 분석법(flow cytometry) 및 면역 세포 화학법을 포함한다.

염증성 질병(본 명세서에서 염증 또는 염증성 상태를 의미함)의 예들은 만성 염증성 질병 및 급성 염증성 질병을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

염증성 질병의 예들로는 과민증, 자가 면역 질병, 감염성 질병, 이식편 거부 반응 질병(graft rejection diseases), 알레르기 질병 및 암성 질병과 관련된 염증성 질병을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

과민증과 연관된 염증성 질병

과민증의 예들은 제1형 과민증, 제2형 과민증, 제3형 과민증, 제4형 과민증, 즉시 과민증(immediate hypersensitivity), 항체매개과민증(antibody mediated hypersensitivity), 면역복합체 매개 과민증, T 림프구 매개 과민증 및 DTH를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

천식과 같은 제1형 과민증 또는 즉시 과민증

제2형 과민반응은 류마티스양질병(rheumatoid diseases), 류마티스 자가 면역 질병(rheumatoid autoimmune diseases), 류마티스성 관절염(Krenn V. et al, Histol Histopathol 2000 Jul;15 (3):791), 건선성 관절염(PA), 척추염, 강직성 척추염(ankylosing spondylitis)(Jan Voswinkel et al, Arthritis Res 2001; 3 (3): 189), 전신병(systemic diseases), 자가면역성 전신질병(systemic autoimmune diseases), 전신 홍반성 루프스(systemic lupus erythematosus)(Erikson J. et al, Immunol Res 1998; 17 (l-2):49), 경화증(sclerosis), 경피증(systemic sclerosis) (Renaudineau Y. et al, Clin Diagn Lab Immunol. 1999 Mar;6 (2): 156); Chan OT. et al, Immunol Rev 1999 Jun;169: 107), 땀샘 질병(glandular diseases), 땀샘 자가면역질병(glandular autoimmune diseases), 자가면역성 췌장질병(pancreatic autoimmune diseases), 당뇨병(diabetes), 제1형 당뇨병(Type I diabetes)(Zimmet P. Diabetes Res Clin Pract 1996 Oct;34 Suppl:S 125), 갑상선 질병(thyroid diseases), 자가면역성 갑상선 질병 (autoimmune thyroid diseases), 그레이브즈 질병(Graves' disease)(Orgiazzi J. Endocrinol Metab Clin North Am 2000 Jun;29 (2):339), 갑상선염(thyroiditis), 자발적 자가면역성갑상샘염(spontaneous autoimmune thyroiditis)(Braley-Mullen H. and Yu S, J Immunol 2000 Dec 15; 165 (12):7262), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis)(Toyoda N. et al, Nippon Rinsho 1999 Aug;57 (8): 1810), 점액수종(myxedema), 특발성 점액 수종(idiopathic myxedema)(Mitsuma T. Nippon Rinsho. 1999 Aug;57 (8): 1759); 자가면역 생식질병(autoimmune reproductive diseases), 난소병(ovarian diseases), 자가면역성 난소질병(ovarian autoimmunity)(Garza KM. et al, J Reprod Immunol 1998 Feb;37 (2):87), 자가면역성 항-정자 불임(autoimmune anti-sperm infertility) (Diekman AB. et al., Am J Reprod Immunol. 2000 Mar;43 (3): 134), 습관성 유산(repeated fetal loss)(Tincani A. et al, Lupus 1998;7 Suppl 2:S 107-9), 신경변성질병(neurodegenerative diseases), 신경질병(neurological diseases), 자가면역성 신경질병(neurological autoimmune diseases), 다발성 경화증(multiple sclerosis)(Cross AH. et al, J Neuroimmunol 2001 Jan 1 ; 112 (1-2): 1), 알츠하이머병(Alzheimer's disease)(Oron L. et al, J Neural Transm Suppl. 1997;49:77), 중증 근무력증(myasthenia gravis)(Infante AJ. And Kraig E, Int Rev Immunol 1999; 18 (l-2):83), 운동신경병증(motor neuropathies)(Kornberg AJ. J Clin Neurosci. 2000 May;7 (3): 191), 귈랑 바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 신경병증(neuropathies) 및 자가면역성 신경병증(autoimmune neuropathies)(Kusunoki S. Am J Med Sci. 2000 Apr;319 (4):234), 근무력증 질병(myasthenic diseases), 람베르트-이튼 근무력 증후군(Lambert-Eaton myasthenic syndrome)(Takamori M. Am J Med Sci. 2000 Apr;319 (4):204), 부종양성 신경증후군(paraneoplastic neurological diseases), 소뇌위축증(cerebellar atrophy), 부종양 소뇌위축증(paraneoplastic cerebellar atrophy), 비방종양성의 강직인간증후군(non-paraneoplastic stiff man syndrome), 소뇌위축증(cerebellar atrophies), 진행성 소뇌위축증(progressive cerebellar atrophies), 뇌염(encephalitis), 라스무센뇌염(Rasmussen's encephalitis), 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 시덴함무도병(Sydeham chorea), 질드라 투렛증후군(Gilles de la Tourette syndrome), 다발성 내분비병증(polyendocrinopathies), 자가면역 다발성 내분비병증(autoimmune polyendocrinopathies)(Antoine JC. and Honnorat J. Rev Neurol (Paris) 2000 Jan;156 (1):23); 신경병증(neuropathies), 염증성 신경병증(dysimmune neuropathies)(Nobile-Orazio E. et al, Electroencephalogr Clin Neurophysiol Suppl 1999;50:419); 신경근긴장증(neuromyotonia), 후천적 신경근 긴장증(acquired neuromyotonia), 선천성근형성부전(arthrogryposis multiplex congenita)(Vincent A. et al, Ann N Y Acad Sci. 1998 May 13;841:482), 심장혈관계 질병(cardiovascular diseases), 심장혈관계 자가면역질병(cardiovascular autoimmune diseases), 아테롬성 동맥 경화증(atherosclerosis)(Matsuura E. et al, Lupus. 1998;7 Suppl 2:S 135), 심근 경색(myocardial infarction)(Vaarala O. Lupus. 1998;7 Suppl 2:S 132), 혈전증(thrombosis)(Tincani A. et al, Lupus 1998;7 Suppl 2:S 107-9), 육아종증(granulomatosis), 베게너육아종증(Wegener's granulomatosis), 동맥염(arteritis), 타까야수동맥염(Takayasu's arteritis) 및 가와사키 증후군(Kawasaki syndrome) (Praprotnik S. et al, Wien Klin Wochenschr 2000 Aug 25;112 (15-16):660); 항-인자 자가면역질병(anti-factor VIII autoimmune disease)(Lacroix-Desmazes S. et al, Semin Thromb Hemost.2000;26 (2): 157); 맥관염(vasculitises), 괴사성 소형 도관 혈관염(necrotizing small vessel vasculitises), 현미경다발혈관염(microscopic polyangiitis), 처그-스트라우스증후군(Churg and Strauss syndrome), 사구체신염(glomerulonephritis), 무-면역 초첨 괴사성 사구체신염(pauci-immune focal necrotizing glomerulonephritis), 초승달사구체신염(crescentic glomerulonephritis) (Noel LH. Ann Med Interne (Paris) 2000 May; 151 (3): 178); 휴즈 증후군(antiphospholipid syndrome) (Flamholz R. et al, J Clin Apheresis 1999; 14 (4): 171); 심부전(heart failure), 심부전 내 흥분제형 베타-아드레날린 수용체 항체들(agonist-like beta-adrenoceptor antibodies in heart failure) (Wallukat G. et al, Am J Cardiol. 1999 Jun 17;83 (12a):75H), 혈소판감소자색반(thrombocytopenic purpura) (Moccia F. Ann Ital Med Int. 1999 Apr- Jun; 14 (2): 114); 용혈성 빈혈(hemolytic anemia), 자가면역용혈빈혈(autoimmune hemolytic anemia) (Efremov DG. et al, Leuk Lymphoma 1998 Jan;28 (3-4):285), 위장 질병(gastrointestinal diseases), 위장기관의 자가면역질병(autoimmune diseases of the gastrointestinal tract), 장질병(intestinal diseases), 만성 염증성 장질병(cronic inflammatory intestinal disease) (Garcia Herola A. et al, Gastroenterol Hepatol. 2000 Jan;23 (1): 16), 복강 질병(celiac disease) (Landau YE. and Shoenfeld Y. Harefuah 2000 Jan 16; 138 (2): 122), 근육계 자가면역질병(autoimmune diseases of the musculature), 근염(myositis), 자가면역성 근염(autoimmune myositis), 쇼그렌증후군(Sjogren's syndrome) (Feist E. et al, Int Arch Allergy Immunol 2000 Sep;123 (1):92); 평활근 자가면역질병(smooth muscle autoimmune disease) (Zauli D. et al, Biomed Pharmacother 1999 Jun;53 (5-6):234), 간장병(hepatic diseases), 간성의 자가면역질병(hepatic autoimmune diseases), 자가면역성 간염(autoimmune hepatitis) (Manns MP. J Hepatol 2000 Aug; 33 (2):326) 및 원발쓸개관간경화증(primary biliary cirrhosis) (Strassburg CP. et al, Eur J Gastroenterol Hepatol. 1999 Jun; 11 (6):595)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

제4형 과민증 또는 T세포 매개 과민증(T cell mediated hypersensitivity)은 류마티스양질병(rheumatoid diseases), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) (Tisch R, McDevitt HO. Proc Natl Acad Sci U S A 1994 Jan 18; 91 (2):437), 전신병(systemic diseases), 자가면역성 전신질병(systemic autoimmune diseases), 전신 홍반성 루프스(systemic lupus erythematosus) (Datta SK., Lupus 1998; 7 (9):591), 땀샘 질병(glandular diseases), 땀샘 자가면역질병(glandular autoimmune diseases), 자가면역성 췌장질병(pancreatic autoimmune diseases), 자가면역성 췌장질병(pancreatic autoimmune diseases), 제1형 당뇨병(Type I diabetes) (Castano L. and Eisenbarth GS. Ann. Rev. Immunol. 8:647); 갑상선 질병(thyroid diseases), 자가면역성 갑상선 질병 (autoimmune thyroid diseases), 그레이브즈 질병(Graves' disease) (Sakata S. et al, Mol Cell Endocrinol 1993 Mar;92 (1):77); 난소병(ovarian diseases) (Garza KM. et al, J Reprod Immunol 1998 Feb;37 (2):87), 전립선염(prostatitis), 자가면역성 전립선염(autoimmune prostatitis) (Alexander RB. et al, Urology 1997 Dec;50 (6):893), 다선증후군(polyglandular syndrome), 자가면역성 다선증후군(autoimmune polyglandular syndrome), 제1형 자가면역성 다선증후군(Type I autoimmune polyglandular syndrome) (Hara T. et al, Blood. 1991 Mar 1;77 (5): 1127), 신경질병(neurological diseases), 자가면역성 신경질병(autoimmune neurological diseases), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 신경염(neuritis), 시신경염(optic neuritis) (Soderstrom M. et al, J Neurol Neurosurg Psychiatry 1994 May;57 (5):544), 중증 근무력증(myasthenia gravis) (Oshima M. et al, Eur J Immunol 1990 Dec;20 (12):2563), 강직인간증후군(stiff-man syndrome) (Hiemstra HS. et al, Proc Natl Acad Sci U S A 2001 Mar 27;98 (7):3988), 심장혈관계 질병(cardiovascular diseases), 샤가스병의 자가면역 심장질병(cardiac autoimmunity in Chagas' disease) (Cunha-Neto E. et al, J Clin Invest 1996 Oct 15;98 (8): 1709), 자가면역 혈소판감소성 자반병(autoimmune thrombocytopenic purpura) (Semple JW. et al, Blood 1996 May 15;87 (10):4245), 항-헬퍼 T 림프구 자가면역(anti-helper T lymphocyte autoimmunity) (Caporossi AP. et al., Viral Immunol 1998; 11 (1):9), 용혈성 빈혈(hemolytic anemia) (Sallah S. et al, Ann Hematol 1997 Mar;74 (3): 139), 간장병(hepatic diseases), 간성의 자가면역질병(hepatic autoimmune diseases), 간염(hepatitis), 만성활동간염(chronic active hepatitis) (Franco A. et al, Clin Immunol Immunopathol 1990 Mar;54 (3):382), 쓸개관간경화증(biliary cirrhosis), 원발쓸개관간경화증(primary biliary cirrhosis) (Jones DE. Clin Sci (Colch) 1996 Nov; 91 (5):551), 신장 질병(nephric diseases), 자가면역성 신장질병(nephric autoimmune diseases), 신염(nephritis), 간질성 신염(interstitial nephritis) (Kelly CJ. J Am Soc Nephrol 1990 Aug; 1 (2): 140), 결합조직병(connective tissue diseases), 귓병(ear diseases), 자가면역성 결합조직병(autoimmune connective tissue diseases), 자가면역성 귓병(autoimmune ear disease) (Yoo TJ. et al, Cell Immunol 1994 Aug; 157 (1):249), 내이의 질병(disease of the inner ear) (Gloddek B. et al, Ann N Y Acad Sci 1997 Dec 29; 830:266), 피부 질병(skin diseases), 피부 질병(cutaneous diseases), 피부 질병(dermal diseases), 수포성 피부 질병(bullous skin diseases), 심상성천포창(pemphigus vulgaris), 수포성류천포창(bullous pemphigoid) 및 낙엽성천포창(pemphigus foliaceus)를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 이들 질병의 이질성으로 인해, 몇몇 동일한 질병은 다른 종류의 과민증으로 분류될 수 있다.

지연형 과민성의 예들은 접촉성 피부염 및 약물 분출을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

T 림프구 매개 과민증의 유형의 예들로는 헬퍼 T 림프구 및 세포 독성 T 림프구가 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다.

헬퍼 T 림프구 매개 과민증의 예들로는 T_h1 림프구 매개 과민증 및 T_h2 림프구 매개 과민증이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.

자가면역성 질병

심장혈관계 질병(cardiovascular diseases), 류마티스양질병(rheumatoid diseases), 땀샘 질병(glandular diseases), 위장 질병(gastrointestinal diseases), 피부 질병(cutaneous diseases), 간장병(hepatic diseases), 신경질병(neurological diseases), 근육병(muscular diseases), 신장 질병(nephric diseases), 생식과 관련된 질병(diseases related to reproduction), 결합조직병(connective tissue diseases) 및 전신병(systemic diseases)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

심장혈관계 자가면역질병(autoimmune cardiovascular diseases)의 예들로는 아테롬성 동맥 경화증(atherosclerosis) (Matsuura E. et al., Lupus. 1998;7 Suppl 2:S 135), 심근 경색(myocardial infarction) (Vaarala O. Lupus. 1998;7 Suppl 2:S 132), 혈전증(thrombosis) (Tincani A. et al., Lupus 1998;7 Suppl 2:S 107-9), 베게너육아종증(Wegener's granulomatosis), 타까야수동맥염(Takayasu's arteritis), 가와사키 증후군(Kawasaki syndrome) (Praprotnik S. et al., Wien Klin Wochenschr 2000 Aug 25;112 (15-16):660), 항-인자 자가면역질병(anti-factor VIII autoimmune disease) (Lacroix-Desmazes S. et al., Semin Thromb Hemost.2000;26 (2): 157), 괴사성 소형 도관 혈관염(necrotizing small vessel vasculitis), 현미경다발혈관염(microscopic polyangiitis), 처그-스트라우스증후군(Churg and Strauss syndrome), 무-면역 초첨 괴사성 사구체신염 및 초승달사구체신염(pauci-immune focal necrotizing and crescentic glomerulonephritis) (Noel LH. Ann Med Interne (Paris) 2000 May; 151 (3): 178), 휴즈 증후군(antiphospholipid syndrome) (Flamholz R. et al., J Clin Apheresis 1999; 14 (4): 171), 항체 매개 심부전 (Wallukat G. et al., Am J Cardiol. 1999 Jun 17;83 (12a):75H), 혈소판감소자색반(thrombocytopenic purpura) (Moccia F. Ann Ital Med Int. 1999 Apr- Jun; 14 (2): 114; Semple JW. et al., Blood 1996 May 15;87 (10):4245), 자가면역용혈빈혈(autoimmune hemolytic anemia) (Efremov DG. et al., Leuk Lymphoma 1998 Jan;28 (3-4):285; Sallah S. et al., Ann Hematol 1997 Mar;74 (3): 139), 샤가스병의 자가면역 심장질병(cardiac autoimmunity in Chagas' disease) (Cunha-Neto E. et al., J Clin Invest 1996 Oct 15;98 (8): 1709) 및 항-헬퍼 T 림프구 자가면역(anti-helper T lymphocyte autoimmunity) (Caporossi AP. et al., Viral Immunol 1998;11 (1):9)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역 류마티스양질병의 예들로는 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) (Krenn V. et al., Histol Histopathol 2000 Jul;15 (3):791; Tisch R, McDevitt HO. Proc Natl Acad Sci units S A 1994 Jan 18;91 (2):437) 및 강직성 척추염(ankylosing spondylitis) (Jan Voswinkel et al., Arthritis Res 2001; 3 (3): 189)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역의 땀샘 질병의 예들로는 췌장질병(pancreatic disease), 제1형 당뇨병(Type I diabetes), 갑상선 질병(thyroid diseases), 그레이브즈 질병(Graves' disease), 갑상선염(thyroiditis), 자발적 자가면역성갑상샘염(spontaneous autoimmune thyroiditis), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 특발성 점액 수종(idiopathic myxedema), 자가면역성 난소질병(ovarian autoimmunity), 자가면역성 항-정자 불임(autoimmune anti-sperm infertility), 자가면역성 전립선염(autoimmune prostatitis) 및 제1형 자가면역성 다선증후군(Type I autoimmune polyglandular syndrome)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 질병들은 자가면역성 췌장질병(autoimmune diseases of the pancreas), 제1형 당뇨병(Type 1 diabetes) (Castano L. and Eisenbarth GS. Ann. Rev. Immunol. 8:647; Zimmet P. Diabetes Res Clin Pract 1996 Oct;34 Suppl:S 125), 자가면역성 갑상선 질병 (autoimmune thyroid diseases), 그레이브즈 질병(Graves' disease) (Orgiazzi J. Endocrinol Metab Clin North Am 2000 Jun;29 (2):339; Sakata S. et al, Mol Cell Endocrinol 1993 Mar;92 (1):77), 자가면역성갑상샘염(spontaneous autoimmune thyroiditis) (Braley-Mullen H. and Yu S, J Immunol 2000 Dec 15;165 (12):7262), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis) (Toyoda N. et al, Nippon Rinsho 1999 Aug;57 (8): 1810), 특발성 점액 수종(idiopathic myxedema) (Mitsuma T. Nippon Rinsho. 1999 Aug;57 (8): 1759), 자가면역 난소질병(ovarian autoimmunity) (Garza KM. et al, J Reprod Immunol 1998 Feb;37 (2):87), 자가면역 항-정자 불임(autoimmune anti-sperm infertility) (Diekman AB. et al., Am J Reprod Immunol. 2000 Mar;43 (3): 134), 자가면역성 전립선염(autoimmune prostatitis) (Alexander RB. et al., Urology 1997 Dec;50 (6):893) 및 제1형 자가면역성 다선증후군(Type I autoimmune polyglandular syndrome) (Hara T. et al, Blood. 1991 Mar 1;77 (5): 1127)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역성 위장질병(autoimmune gastrointestinal diseases)의 예들로는 만성 염증성 장질병(chronic inflammatory intestinal diseases) (Garcia Herola A. et al, Gastroenterol Hepatol. 2000 Jan; 23 ( 1): 16), 복강 질병(celiac disease) (Landau YE. and Shoenfeld Y. Harefuah 2000 Jan 16; 138 (2): 122), 대장염(colitis), 회장염(ileitis) 및 크론병(Crohn's disease)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역성 피부질병(autoimmune cutaneous diseases)은 심상성천포창(pemphigus vulgaris), 수포성류천포창(bullous pemphigoid) 및 낙엽성천포창(pemphigus foliaceus) 등의 자가면역 수포성 피부질병(autoimmune bullous skin diseases)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역성 간장병(autoimmune hepatic diseases)은 간염(hepatitis), 자가면역성 만성활동간염(autoimmune chronic active hepatitis) (Franco A. et al, Clin Immunol Immunopathol 1990 Mar; 54 (3):382), 원발쓸개관간경화증(primary biliary cirrhosis) (Jones DE. Clin Sci (Colch) 1996 Nov; 91 (5):551; Strassburg CP. et al., Eur J Gastroenterol Hepatol. 1999 Jun; 11 (6):595) 및 자가면역성 간염(autoimmune hepatitis) (Manns MP. J Hepatol 2000 Aug; 33 (2):326)를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역성 신경질병(autoimmune neurological diseases)의 예들로는 다발성 경화증(multiple sclerosis)(Cross AH. et al, J Neuroimmunol 2001 Jan 1 ; 112 (1-2): 1), 알츠하이머병(Alzheimer's disease)(Oron L. et al., J Neural Transm Suppl. 1997;49:77), 중증 근무력증(myasthenia gravis) (Infante AJ. And Kraig E, Int Rev Immunol (1999) 18(l-2):83; Oshima M. et al., Eur J Immunol (1990) 20(12):2563), 신경병증(neuropathies), 운동신경병증(motor neuropathies) (Kornberg AJ. J Clin Neurosci. (2000) 7(3): 191); 귈랑 바레 증후군(Guillain-Barre syndrome) 및 자가면역성 신경병증(autoimmune neuropathies) (Kusunoki S. Am J Med Sci. (2000) 319(4):234), 근무력증(myasthenia), 람베르트-이튼 근무력 증후군(Lambert-Eaton myasthenic syndrome) (Takamori M. Am J Med Sci. (2000) 319(4):204); 부종양성 신경증후군(paraneoplastic neurological diseases), 소뇌위축증(cerebellar atrophy), 부종양 소뇌위축증(paraneoplastic cerebellar atrophy) 및 강직인간증후군(stiff-man syndrome) (Hiemstra HS. et al., Proc Natl Acad Sci units S A (2001) 98(7):3988); 비방종양성의 강직인간증후군(non-paraneoplastic stiff man syndrome), 진행성 소뇌위축증(progressive cerebellar atrophies), 뇌염(encephalitis), 라스무센뇌염(Rasmussen's encephalitis), 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 시덴함무도병(Sydeham chorea), 질드라 투렛증후군(Gilles de la Tourette syndrome) 및 자가면역 다발성 내분비병증(autoimmune polyendocrinopathies) (Antoine JC. and Honnorat J. Rev Neurol (Paris) 2000 Jan; 156 (1):23); 염증성 신경병증(dysimmune neuropathies) (Nobile-Orazio E. et al., Electroencephalogr Clin Neurophysiol Suppl 1999;50:419); 후천적 신경근 긴장증(acquired neuromyotonia), 선천성근형성부전(arthrogryposis multiplex congenita) (Vincent A. et al., Ann N Y Acad Sci. 1998 May 13;841:482), 신경염(neuritis), 시신경염(optic neuritis) (Soderstrom M. et al., J Neurol Neurosurg Psychiatry 1994 May;57 (5):544) 및 신경변성질병(neurodegenerative diseases)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역 근육병(autoimmune muscular diseases)의 예들로는 근염(myositis), 자가면역성 근염(autoimmune myositis) 및 원발성 쇼그렌 증후군(primary Sjogren's syndrome) (Feist E. et al., Int Arch Allergy Immunol 2000 Sep;123 (1):92) 및 평활근 자가면역질병(smooth muscle autoimmune disease) (Zauli D. et al., Biomed Pharmacother 1999 Jun;53 (5-6):234)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역성 신장질병(autoimmune nephric diseases)의 예들로는 신염(nephritis) 및 자가면역성 간질성 질병(autoimmune interstitial nephritis) (Kelly CJ. J Am Soc Nephrol 1990 Aug; 1 (2): 140)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

생식과 관련된 자가면역질병(autoimmune diseases related to reproduction)의 예들로는 습관성 유산(repeated fetal loss) (Tincani A. et al., Lupus 1998; 7 Suppl 2:S 107-9)을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

자가면역성 결합조직병(autoimmune connective tissue diseases)은 귓병(ear diseases), 자가면역성 귓병(autoimmune ear diseases) (Yoo TJ. et al., Cell Immunol 1994 Aug; 157 (1):249) 및 자가면역성 내이의 질병(autoimmune diseases of the inner ear) (Gloddek B. et al., Ann N Y Acad Sci 1997 Dec 29; 830:266)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

자가면역성 전신질병(autoimmune systemic diseases)은 전신 홍반성 루프스(systemic lupus erythematosus) (Erikson J. et al., Immunol Res 1998; 17 (l-2):49) 및 경피증(systemic sclerosis) (Renaudineau Y. et al., Clin Diagn Lab Immunol. 1999 Mar;6 (2): 156); Chan OT. et al., Immunol Rev 1999 Jun; 169: 107)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

전염병

전염병들의 예들로는 만성전염병(chronic infectious diseases), 아급성전염병(subacute infectious diseases), 급성전염병(acute infectious diseases), 바이러스성 질병(viral diseases), 세균성 질병(bacterial diseases), 원충병(protozoan diseases), 기생병(parasitic diseases), 진균성 질병(fungal diseases), 마이코플라스마병(mycoplasma diseases) 및 프리온 질병 (prion diseases)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

이식편 거부 반응 질병(graft rejection diseases)

이식편(graft) 이식과 관련된 질병의 예들로는 이식편 거부(graft rejection), 만성 이식편 거부(chronic graft rejection), 아급성 이식편 거부(subacute graft rejection), 초급성 이식편 거부(hyperacute graft rejection), 급성 이식편 거부(acute graft rejection) 및 이식편대숙주병(graft versus host disease)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

알레르기 질병

알레르기 질병은 천식(asthma), 염증(hives), 두드러기(urticaria), 꽃가루 알레르기(pollen allergy), 진드기 알레르기(dust mite allergy), 독 알레르기(venom allergy), 화장품 알레르기(cosmetics allergy), 라텍스알레르기(latex allergy), 화학약품 알레르기(chemical allergy), 약물 알레르기(drug allergy), 곤충물림 알레르기(insect bite allergy), 동물 비듬 알레르기(animal dander allergy), 쐐기털식물 알레르기(stinging plant allergy), 덩굴옻나무 알레르기(poison ivy allergy) 및 음식 알레르기(food allergy)를 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

암질병

암의 예들로는 암종(carcinoma), 림프종(lymphoma), 모세포종(blastoma), 육종암(sarcomas), 및 백혈병(leukemia)을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 특히, 암질병의 예들로는 만성 골수성 백혈병(Chronic myelogenous leukemia)과 같은 골수성 백혈병(Myeloid leukemia); 숙성의 급성골수성 백혈병(Acute myelogenous leukemia with maturation), 급성전골수성 백혈병(Acute promyelocytic leukemia), 호염기성 세포가 증가하는 급성비림프구성백혈병(Acute nonlymphocytic leukemia with increased basophils), 급성단구성백혈병(Acute monocytic leukemia); 호산(好酸) 백혈구 증가증의 급성 골수단구 백혈병(Acute myelomonocytic leukemia with eosinophilia); 비호지킨(Burkitt's Non-Hodgkin's)과 같은 악성림프종(Malignant lymphoma) ; 급성 림프구성 백혈병(Acute lymphoblastic leukemia)과 같은 림프성백혈병(Lymphocytic leukemia); 만성림프성 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia); 고형 종양 양성 수막종(Solid tumors Benign Meningioma), 침샘의 혼합종양(Mixed tumors of salivary gland), 대장 선종(Colonic adenomas)과 같은 골수증식성질병(Myeloproliferative diseases); 소세포폐암(Small cell lung cancer), 신장(Kidney), 자궁(Uterus), 전립선(Prostate), 방광(Bladder), 난소(Ovary), 대장(Colon), 육종(Sarcomas), 지방육종(Liposarcoma), 점액낭(myxoid), 윤활막육(Synovial sarcoma), 횡문근육(Rhabdomyosarcoma)(치경음(alveolar)), 점액성 연골육종(Extraskeletal myxoid chonodro sarcoma), 유윙종양(Ewing's tumor)과 같은 선암종(Adenocarcinoma); 고환 및 난소의 미분화세포종(Testicular and ovarian dysgerminoma), 망막아종(Retinoblastoma), 빌름스 종양(Wilms' tumor), 신경아(芽) 세포종(Neuroblastoma), 악성 흑색종(Malignant melanoma), 중피종(Mesothelioma), 유방(breast), 피부(skin), 전립선(prostate), 및 난소(ovarian)를 포함하는 기타의 것들을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

특정 구체예들에 따라, 상기 염증성 질병은 류마티스성 관절염(RA), 건선 관절염, 알츠하이머병, 암 및 심혈관 질병으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 특정한 구체예들에 따라, 상기 염증성 질병은 RA를 포함한다.

RA는 소아기 특발성 관절염(juvenile iodopathic arthritis), 소아 류머티스 관절염(juvenile RA) 및 소아 만성 관절염(juvenile chronic arthritis)을 포함하나,이에 제한되는 것은 아니다. RA는 류마티스 관절염 또는 임의의 유사한 기준의 분류에 대한 미국 류마티스 협회 기준에 따라 진단될 수 있으며, 초기 RA 활성군(RA 활성군은 적어도 8주 이상 4년 이하에 대하여 진단됨) 및 초기 RA(RA의 진단 기준을 완전히 충족시키지 못하는 다발성 관절염 - 항 CCP 및 공유 에피토프와 같은 RA-특이적 예후의 바이오 마커의 존재와 관련됨)을 포함한다.

본 발명의 단리된 폴리펩타이드 및 조성물로 치료하는 동안의 개선을 나타내기 위해 모니터링할 수 있는 RA 임상 파라미터 증상들의 예는 다음과 같다:

● 적어도 한 시간 동안 및 적어도 6주 동안 존재하는 조조경직(Morning stiffness) ;

● 적어도 6주 동안 3개 이상의 관절의 부종(swelling);

● 적어도 6주 동안 손목, 손허리손가락, 또는 지관절(interphalangeal joints)의 부종

● 대칭성 관절 부종;

● 짓무름 또는 명백하게 뼈탈회(unequivocal bony decalcification)를 포함하는 손 x-레이;

● 류마티스 피하 결절(Rheumatoid subcutaneous nodules) 및;

● 류마티스 인자.

RA 개선을 평가하기 위해 인간에게 사용될 수 있고, American College of Rheumatology (ACR)에 따를 수 있는 추가적인 파라미터들은, 예를 들어, ACR 개선 기준 - 특정 RA 증상의 감소에 의한 질병 활성 개선의 백분율(20, 50 또는 70%)을 나타내는 ACR20, ACR50 및 ACR70을 포함한다. 따라서 예를 들어, ACR20은 부드럽고 부어오른 관절수가 20% 향상되고, 5개의 나머지 ACR 코어 세트 측정 중 3개가 20% 향상된 환자를 의미한다.

본 발명자들은 단리된 폴리펩타이드의 3가지 잠재적 표적 단백질을 발견하였고, 또한, 이들 단백질 중 하나(즉, SAA)의 첨가는 폴리펩타이드의 시험관내 활성을 억제할 수 있음을 나타내었다(하기 실시예 7 및 9 및 실시예 15를 참조). 본 발명은 본 발명의 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물 및 혈청 아밀로이드 A (SAA), 트랜스타이레틴 및/또는 아포리포프로테인 B 억제제를 포함하는 병합 치료의 사용을 고려한다.

따라서, 본 발명의 다른 측면에 따르면, 이를 필요로 하는 대상에게 염증성 질병을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 다음을 포함한다:

(a) 본 발명의 일부 구체예들의 단리된 펩타이드 또는 조성물의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하고; 그리고

(b) 혈청 아밀로이드 A (SAA), 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 억제제의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하며,

이에 따라 대상의 염증성 질병이 치료된다.

다른 측면에 따르면, 염증성 질병의 치료를 위한 의약의 제조를 위하여, 본 발명의 일부 구체예들의 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물 및 혈청 아밀로이드 A, 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 억제제의 용도가 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명의 일부 구체예들의 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물, 및 혈청 아밀로이드 A, 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 억제제를 포장하는 포장재를 포함하는, 염증성 질환의 치료용 제품 또는 키트가 제공된다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 이를 필요로 하는 대상에게 염증성 질병을 치료하기 위한 방법이 제공되고, 상기 방법은 다음을 포함한다:

(a) 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 폴리펩타이드의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하고,

여기서, 상기 폴리펩타이다는 항염증 활성을 포함하고;

혈청 아밀로이드 A (SAA), 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 억제제의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하며,

이로써 대상의 염증성 치료가 치료된다.

다른 측면에 따르면, 염증성 질병을 치료하기 위한 의약의 제조를 위해 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 염기서열을 포함하는 단리된 폴리펩타이드 및 혈청 아밀로이드 A (SAA), 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 억제제의 용도가 제공되고, 여기서 상기 폴리펩타이드는 항염증 활성을 포함한다.

본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 염기서열을 포함하는 단리된 폴리펩타이드 및 혈청 아밀로이드 A (SAA), 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 억제제를 포장하는 포장재를 포함하는, 염증성 질환의 치료용 제품 또는 키트가 제공되고, 여기서 상기 폴리펩타이드는 항염증 활성을 포함한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, 상기 용어 "억제제"는 단백질 수준(예를 들어, 압타머들, 작은 분자들 및 억제 펩타이드들, 길항제들, 폴리펩타이드 및 항체들 등이 제거된 효소들)에서 전사 및/또는 번역(예를 들어, RNA 침묵제(RNA silencing agents)를 방해하는 다양한 분자들을 사용하여, 게놈(예를 들어, 상동성 재조합 및 부위 특이적 엔도뉴클레아제) 및/또는 전사 수준에서 단백질(예를 들어, SAA, 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B)의 발현 및/또는 활성을 하향조절하는 작용제를 의미한다.

비제한적인 예로는 항혈청 알부민 A, SAA, SAA mRNA를 표적으로 하는 RNA 간섭제(예를 들어, International Publication Application No: WO 2006071691를 참고), 비제한적인 예로서 미포메르센(ISIS-301012, KYNAMRO™)과 아포리포프로테인 B를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 아포리포프로테인 B 합성 억제제들(see e.g. US Patent No. US 6197972) 및 아포리포프로테인 B 분비 억제제(see e.g. EP Application Publication No. EP 1099438)로서의 트리아졸론과 같은 SAA를 억제하는 항체를 포함한다.

특정한 구체예에 따라, (a) 단계는 (b) 단계 이전에 수행된다.

다른 특정한 구체예에 따라, (a) 단계는 (b) 단계 후에 수행된다.

또 다른 특정 구체예에 따라, (a) 단계는 (b) 단계와 동시에 수행된다.

본 발명의 방법에 따른 다수 회 투여 및 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물 및 상기 억제제의 다중 투여량이 투여될 수 있다. 특정한 구체예들에 따라, (a) 단계는 여러 회 수행된다. 따라서, 특정한 구체예들에 따라, 억제제의 투여는 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물의 적어도 1회 투여 후에 수행된다. 특정한 구체예들에 따라, (b) 단계는 여러 회 수행된다. 따라서, 특정한 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물의 투여는 상기 억제제의 적어도 1회 투여 후에 수행된다. 특정한 구체예들에 따라, 본 발명의 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물의 투여는 상기 억제제의 투여와 함께 순차적인 순서로 수행된다.

상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물 및 상기 억제제는 동일한 용기 또는 별도의 용기들에 포장될 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별적인 구체예를 나타낸다.

특정 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물 및 상기 억제제는 별개의 제형이다.

특정 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물 및 상기 억제제는 공동 제형이다.

특정 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물 및 상기 억제제는 그 자체로 또는 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합되는 약제학적 조성물의 일부로서 대상에게 제공될 수 있다.

따라서, 본 발명의 일 측면에 따르면, 활성제로서 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 상기 조성물 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, "약제학적 조성물"은 생리학적으로 적합한 담체 및 부형제와 같은 다른 화학 성분들과 함께 본 발명의 하나 이상의 활성 성분을 포함하는 제제를 의미한다. 약제학적 조성물의 목적은 화합물을 유기체에 투여하는 것을 용이하게 하는 것이다.

본 명세서에서 상기 용어 "활성 성분"은 생물학적 효과에 기여할 수 있는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 의미한다.

이하에서, 상호교환적으로 사용될 수 있는 표현 "생리학적으로 허용가능한 담체" 및 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 유기체에 유의한 자극을 유발하지 않으면서 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 없애지 않는 담체 또는 희석제를 의미한다. 이들 표현에는 보조제가 포함되어 있다.

본 명세서에서 용어 "부형제"는 활성 성분의 투여를 보다 용이하게 하기 위해 약제학적 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 의미한다. 부형제의 예로는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당 및 전분류, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물성 오일 및 폴리에틸렌글리콜이 포함된다.

약물의 제제 및 투여 기술은 "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, PA, 최신판에 기재되어 있으며, 이는 본 명세서에 참고문헌으로 통합된다.

적합한 투여 경로는 경구, 국소, 피부내, 직장, 점막경유, 특히 경비도관(transnasal), 장(intestinal), 또는 근육내, 피하 및 골수내 주사뿐만 아니라 척수강내, 직접 심실내, 심장내, 예를 들어 오른쪽 심실 공동 또는 왼쪽 심실 공동내, 일반적인 관상 동맥내, 정맥내, 복강내, 비강내, 또는 안구내(intraocular) 주사를 포함하는 비경구적(parenteral) 전달을 포함할 수 있다.

특정한 구체예들에 따라, 투여 경로는 경구 투여이다.

특정한 구체예들에 따라, 상기 투여 경로는 피부내이다. 피부내에 활성제를 투여하는 방법은 당분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 활성제를 포함하고 피부의 외부 표면 상에 적용되는 피부내 주사, 겔, 액체 스프레이 및 패치를 포함한다.

특정한 구체예들에 따라, 상기 대상의 피부내에 활성제를 투여하는 방법은 국소적으로(피부 위) 수행된다.

본 발명의 일부 구체예들에 따라, 활성제를 대상의 피부 내로 투여하는 것은 예를 들어, 활성 성분을 포함하는 겔, 액체 스프레이 또는 패치(예를 들어, 저장기형 패치 및 매트릭스형 패치)를 사용하여 비침습적으로 수행되고, 대상의 피부에 적용된다.

활성제의 피부 내로의 전달을 증가시키기 위해, 상기 활성제는 표피 또는 진피층으로의 전달을 증가시키도록 고안된 다양한 비히클로 제형화될 수 있음을 인식해야 한다. 이러한 비히클은 리포좀, 덴드리머, 니오좀(niosome), 트랜스퍼좀(transfersome), 마이크로에멀젼 및 고체 지질 나노 입자들을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일부 구체예들에 따라, 투여는 피내(intradermal) 주사에 의해 수행된다.

중추 신경계(CNS)로 약물 전달을 위한 종래의 접근법은 신경외과적(neurosurgical) 방법(예를 들어, 뇌내 주사(intracerebral injection) 또는 뇌실내 주입(intracerebroventricular infusion)); BBB의 내생적인 수송 경로 중 하나를 이용하기 위한 시도로 작용제의 분자 조작(예를 들어, 내피세포 표면 분자에 대한 친화성을 갖는 수송 펩타이드와 그 자체가 BBB를 가로지르는 것이 불가능한 작용제를 포함하는 키메라(chimeric) 융합 단백질의 생산); 작용제의 지질 용해도를 증가시키도록 고안된 약제학적 방법들(예를 들어, 지질 또는 콜레스테롤 담체에 대한 수용성 작용제의 접합체); 및 고삼투압성 붕괴에 의한 BBB의 완전성의 일시적 파괴(경동맥(carotid artery)내로 만니톨 용액의 주입 또는 앤지오텐신 펩타이드와 같은 생물학적 활성제의 사용의 결과)를 포함한다.

그러나, 이들 방법들 각각은 침습성 외과적 절차와 관련된 내재적 위험, 내인성 수송 시스템에 고유한 한계로 인한 크기 제한, CNS 외부에서 활동적 일 수 있는 담체 모티프가 포함된 키메라 분자의 전신 투여와 관련된 잠재적으로 바람직하지 않은 생물학적 부작용, 및 BBB가 손상된 뇌 영역 내의 뇌 손상의 위험 가능성을 포함하며, 이로 인해 이들 방법들은 차선의 전달 방법이다.

선택적으로, 예를 들어 관절 내로의 국소 주입과 같은 환자의 조직 영역 내로의 약제학적 조성물의 직접 주입을 통해 전신 방식이 아닌 국부적 방식으로 약제학적 조성물을 투여할 수 있다. 활성제를 관절에 투여하는 방법은 당분야에 공지되어 있으며, 피하 주사 바늘을 관절에 삽입하여 관절내 관절 공간에 활성제를 전달하는 관절내 주사를 포함한다.

상기에 기재된 바와 같이, 본 발명의 상기 폴리펩타이드 및 조성물은, 예를 들어 알츠하이머병을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 중추 신경계(CNS)로의 약물 전달을 위한 통상적인 방법들은 다음을 포함한다: 신경외과적(neurosurgical) 방법(예를 들어, 해마내(intrahippocampal)(IH), 두개내(intracranial)(IC), 뇌내 주사 또는 뇌실내 주사(ICV) 또는 주입, 또는 경막내투여(intrathecal administration)); BBB의 내생적인 수송 경로 중 하나를 이용하기 위한 시도로 작용제의 분자 조작(예를 들어, 내피세포 표면 분자에 대한 친화성을 갖는 수송 펩타이드와 그 자체가 BBB를 가로지르는 것이 불가능한 작용제를 포함하는 키메라(chimeric) 융합 단백질의 생산); 작용제의 지질 용해도를 증가시키도록 고안된 약제학적 방법들(예를 들어, 지질 또는 콜레스테롤 담체에 대한 수용성 작용제의 접합체); 및 고삼투압성 붕괴에 의한 BBB의 완전성의 일시적 파괴(경동맥(carotid artery)내로 만니톨 용액의 주입 또는 앤지오텐신 펩타이드와 같은 생물학적 활성제의 사용의 결과). 그러나, 이들 방법들 각각은 침습성 외과적 절차와 관련된 내재적 위험, 내인성 수송 시스템에 고유한 한계로 인한 크기 제한, CNS 외부에서 활동적일 수 있는 담체 모티프가 포함된 키메라 분자의 전신 투여와 관련된 잠재적으로 바람직하지 않은 생물학적 부작용, 및 BBB가 손상된 뇌 영역 내의 뇌 손상의 위험 가능성을 포함하며, 이로 인해 차선의 전달 방법이 된다.

본 발명의 일부 구체예들의 약제학적 조성물은, 예를 들어 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 드라제화(dragee-making), 분말화(levigating), 유화, 캡슐화, 포착 또는 동결 건조 공정과 같은 당분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.

따라서, 본 발명의 일부 구체예들에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물은 약제학적으로 사용할 수 있는 제제로 활성 성분을 가공하는 것을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체를 사용하여 통상적인 방식으로 제형화 될 수 있다. 적합한 제형은 선택된 투여 경로에 따라 결정된다.

주사를 위해, 상기 약제학적 조성물의 활성 성분은 수용액, 바람직하게는 행크 용액, 링거 용액 또는 생리 식염 완충액과 같은 생리적으로 상용성인 완충액으로 제형화 될 수 있다. 점막경유(transmucosal)의 투여를 위해, 침투될 배리어에 적합한 침투제가 제형화를 위해 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로 당분야에 공지되어 있다.

경구 투여를 위해, 당분야에 공지된 약제학적으로 허용가능한 담체와 활성 화합물을 배합하여 약제학적 조성물을 용이하게 제형화할 수 있다. 이러한 담체들은 환자에 의한 경구 섭취를 위해 정제, 환제, 당의정, 캡슐, 액체, 젤, 시럽, 슬러리, 현탁액 등과 같이 제형화될 수 있다. 경구 사용을 위한 약제학적 제제는 고체 부형제를 사용하고, 선택적으로 생성된 혼합물을 분쇄하고, 원하는 경우 적합한 보조제를 첨가한 후에 과립의 혼합물을 가공하여 제조될 수 있고, 정제 또는 당의정 코어를 수득할 수 있다. 적합한 부형제들은, 특히, 락토오스, 수크로스, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당과 같은 충전제; 셀룰로오스 제제, 예를 들어 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀겨, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸트, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 소듐카르보메틸셀룰로오스; 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)과 같은 생리학적으로 허용가능한 중합체를 포함한다. 원한다면, 가교-결합된 폴리비닐피롤리돈, 한천 또는 알긴산 또는 알긴산 나트륨과 같은 그것의 염과 같은 붕해제를 첨가할 수 있다.

특정 구체예들에 따라, 약제학적 조성물은 경구 투여용으로 제형화된다.

당의정 코어는 적절한 코팅이 제공된다. 상기 목적을 위해, 선택적으로 아라비아 검, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 티타늄디옥사이드, 래커 용액 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있는 농축당 용액을 사용할 수 있다. 염료 또는 안료를 정제 또는 당의 코팅에 첨가하여 활성 화합물 복용량의 상이한 조합을 확인하거나 특성화할 수 있다.

경구로 사용될 수 있는 약제학적 조성물은 젤라틴으로 제조된 푸쉬-핏(push-fit) 캡슐뿐만 아니라 젤라틴, 및 글리세롤 또는 소르비톨과 같은 가소제로 제조 된 연질, 밀봉 캡슐을 포함한다. 상기 푸쉬-핏 캡슐은 활성 성분을 락토오스와 같은 충전제, 전분과 같은 결합제, 활석 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제 및 선택적으로 안정화제와 혼합하여 함유할 수 있다. 연질 캡슐에서, 상기 활성 성분은 지방성 오일, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 액체에 용해되거나 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제들이 첨가될 수 있다. 경구 투여를 위한 모든 제형들은 선택된 투여 경로에 적합한 투여량이어야 한다.

구강(buccal) 투여의 경우, 상기 조성물은 통상적인 방식으로 제형화된 정제 또는 로젠지(lozenges) 형태를 취할 수 있다.

비강 흡입에 의한 투여의 경우, 본 발명의 일부 구체예들에 따라 사용하기 위한 활성 성분들은 적절한 추진제, 예를 들어 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로-테트라플루오로에탄 또는 카본디옥사이드의 사용으로 가압팩 또는 분무기로부터의 에어로졸 스프레이의 형태로 편리하게 전달된다. 가압 에어로졸의 경우에, 상기 투여량 단위는 계량된 양을 전달하기 위한 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 디스펜서에 사용하기 위한 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 화합물과 락토오스 또는 전분과 같은 적합한 파우더 베이스의 파우더 혼합물을 함유하여 제형화될 수 있다.

본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 비경구 투여, 예를 들어, 보강 주입 또는 연속 주입을 위해 제형화될 수 있다. 주사용 제형은 단위 투약 형태, 예를 들어, 앰플 또는 다회 투여용 용기에, 선택적으로 방부제를 첨가하여 제공될 수 있다. 상기 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 유제일 수 있고, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다.

비경구 투여용 약제학적 조성물은 수용성 형태의 활성 제제의 수용액을 포함한다. 또한, 활성 성분의 현탁액은 적절한 유성 또는 물 기반 주사 현탁액으로서 제조될 수 있다. 적절한 친유성 용매 또는 비히클은 참기름과 같은 지방성 오일 또는 에틸올레에이트, 트리글리세라이드 또는 리포좀과 같은 합성 지방산 에스테르를 포함한다. 수성 주사 현탁액은 소듐카르복시 메틸셀룰로오스, 소르비톨 또는 덱스 트란과 같은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 임의적으로, 상기 현탁액은 또한 고농축 용액의 제조를 허용하기 위해 활성 성분의 용해도를 증가시키는 적합한 안정화제 또는 작용제를 함유할 수 있다.

선택적으로, 상기 활성 성분은 사용하기 전에 적합한 비히클, 예를 들어, 멸균된 주사용 수계 용액으로 구성하기 위한 파우더 형태일 수 있다.

본 발명의 일부 구체예들의 약제학적 조성물은, 또한, 예를 들어, 코코아 버터 또는 기타 글리세리드와 같은 통상적인 좌제 기재를 사용하여 좌약 또는 유지 관장과 같은 직장 조성물로 제제화 될 수 있다.

본 발명의 일부 구체예들의 약제학적 조성물은 또한 증가된 혈청 반감기를 제공하기 위해 서방성을 위해 제제화될 수 있다. 이러한 서방성 시스템은 당업자에게 공지되어 있으며, 예를 들어, 마이크로 캡슐 및 나노입자를 포함한다. 특정 구체예들에 따라, 단백질 및 펩타이드용 ProLease 생분해성 마이크로 스피어 전달 시스템은 다른 제제를 갖거나 갖지 않는 건조 제형물로서 배합될 수 있는 폴리머 매트릭스 중에 단백질을 함유하는 생분해성 고분자형 마이크로스피어로 이루어진 건조 분말을 포함한다(Tracy, 1998, Biotechnol. Prog. 14, 108; Johnson et al., 1996, Nature Med. 2, 795; Herbert et al., 1998, Pharmaceut. Res. 15, 357).

본 발명의 일부 구체예와 관련하여 사용하기에 적합한 약제학적 조성물은 활성 성분이 의도된 목적을 달성하는데 효과적인 양으로 함유된 조성물을 포함한다. 보다 구체적으로, 치료적 유효량은 장애(예를 들어, RA)의 증상을 예방, 경감 또는 완화시키거나, 또는 치료되는 대상의 생존을 연장시키기에 효과적인 활성 성분의 양을 의미한다.

치료적 유효량의 결정은 특히 본 명세서에서 제공된 상세한 설명에 비추어 당업자의 능력 범위 내에 있다.

본 발명의 방법에 사용된 임의의 제제에 대해, 상기 치료적 유효량 또는 투여량은 초기에 시험관내 및 세포 배양 분석으로부터 추정될 수 있다. 예를 들어, 용량은 원하는 농도 또는 역가를 달성하기 위해 동물 모델로 제형화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에게 유용한 복용량을 보다 정확하게 결정하는데 사용될 수 있다.

본 명세서에 기술된 독성과 활성 성분의 치료학적 효능은 세포 배양 또는 실험 동물에서, 시험관내에서 표준 약제학적 공정에 의해 결정될 수 있다. 이러한 시험관내 및 세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에게 사용하기 위한 투여량의 범위를 정하는데 사용될 수 있다. 상기 투여량은 적용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로 및 투여량은 환자의 상태를 고려하여 개개인의 의사에 의해 선택될 수 있다(예를 들어, Fingl, et al., 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p. l 참고).

투여량 및 투여 간격은 활성 성분의 수준이 생물학적 효과(최소 유효 농도, MEC)를 유발하거나 억제하기에 충분하게 제공하기 위해 개별적으로 조정할 수 있다. 상기 MEC는 각 제조에 따라 다르지만, 시험관내 데이터를 통해 추정할 수 있다. MEC를 달성하는데 필요한 용량은 개개인의 특성과 투여 경로에 달려있다. 검출 분석은 혈장 농도를 결정하는데 사용될 수 있다.

마우스 동물 모델과 관련하여 본 명세서에 나타낸 투여량은 인간 및 염증성 질병으로 진단된 다른 동물과 같은 다른 종의 치료를 위해 전환될 수 있다. FDA에 의해 승인된 전환 테이블(Conversion Table)은 Reagan-Shaw S., et al., FASEB J. 22:659-661 (2007)에 나타나 있다.

인간 등가 용량(equivalent dose)은 다음과 같이 계산된다 : HED (mg/kg) = 동물 투여량(mg/kg)×(동물 K_m/사람 K_m).

본 발명의 일부 구체예들에 따르면, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물은 마우스에서 약 2.5 내지 40mg/kg/일 범위의 양으로 제공되며, 중간 부분 범위 및 그 사이의 값을 포함한다.

특정 구체예들에 따르면, 상기 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물은 마우스에서 약 3.5mg/kg/일에 상응하는 양으로 제공된다.

치료될 상태의 중증도 및 반응성에 따라, 투약은 수 일 내지 수 주간 지속되는 치료 과정 동안, 또는 치료가 이루어지거나 질병 상태의 감소가 달성될 때까지 단일회 또는 복수회의 투여일 수 있다.

투여되는 조성물의 양은 물론 치료되는 대상, 괴로움의 중증도, 투여 방식, 처방 의사의 판단 등에 따라 좌우될 것이다.

본 발명의 일부 구체예들의 조성물은, 필요하다면, 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투여형을 함유할 수 있는 FDA 승인된 키트와 같은 팩 또는 디스펜서 장치로 제공될 수 있다. 상기 팩은, 예를 들어 블리스터 팩(blister pack)과 같은 금속 또는 플라스틱 호일을 포함할 수 있다. 상기 팩 또는 디스펜서 장치에는 관리 지침이 첨부될 수 있다. 상기 팩 또는 디스펜서는 또한 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 정한 형태로 용기와 관련된 고지(notice)에 의해 수용될 수 있으며, 이들 고지는 조성물 또는 인간 또는 수의 투여(veterinary administration) 형태의 기관의 승인을 반영한다. 이러한 고지는, 예를 들어 처방약이나 승인된 제품의 삽입을 위해 미국 식품의약국(FDA)의 승인을 받은 라벨일 수 있다. 또한, 공존가능한 약제학적 담체 내에 제형화된 본 발명의 제제를 포함하는 조성물을 제조하고, 적절한 용기에 넣고, 상술한 바와 같이 지시 조건의 치료를 위해 표지될 수 있다. 본 발명의 치료제는 각각의 작용제 단독으로의 치료와 비교하여 개선된 치료학적 효과를 달성하기 위해 추가적인 활성제와 함께 개인에게 제공될 수 있음을 이해할 것이다. 그러한 치료에서, 병용 요법과 연관될 수 있는 부작용에 대한 조치(예를 들어, 보충제의 투여 및 선택)가 취해진다.

이러한 병용 요법의 투여는 이들 활성제들의 고정 비율을 갖는 단일 캡슐 또는 각 작용제에 대한 다중 캡슐과 같이 동시적 투여일 수 있다.

따라서, 본 발명의 작용제들은 비스테로이드성 항염증제(NSAID), 질병-개질성 항류머티스 약물(DMARDS), 코르티코스테로이드, 진통제, 섬유근육통 약물, 항염증제, 화학치료제와 같이 염증성 질환을 치료하기 위한 다른 확립된 또는 실험적인 치료 요법 및 당분야에 공지된 다른 치료제 요법으로 단독으로 투여될 수 있다.

상기에서 언급한 바와 같이, 본 발명자들은 본 발명의 펩타이드 및 조성물의 활성을 시험하기 위한 새로운 시험관내 분석을 개발하였다. 상기 분석은 RA 펩타이드가 RA 환자의 관절 낭액으로부터 단리된 섬유아세포의 생존율을 감소시킬 수 있다는 사실에 기초한다. 따라서, 상기 분석은 저장 온도, 펩타이드 및 제제에 대한 변형과 같은 환경 조건에 노출된 후의 본 발명의 펩타이드 및 조성물의 염증 활성을 검증할 뿐만 아니라, 예를 들어 본 발명의 펩타이드 및 조성물의 안정성을 시험하기 위한 본 발명의 제조된 펩타이드 및 조성물의 배치 대 배치 변화를 비교하는데 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 일 측면에 따라, 다음의 단계들을 포함하는 본 발명의 일부 구체예들의 단리된 폴리펩타이드, 조성물, 또는 약제학적 조성물의 배치(batch)의 효능을 결정하는 방법을 제공한다:

(a) 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 배치를 류마티스 관절염 환자의 염증성 관절로부터 수득된 섬유아세포와 접촉시키는 단계; 및

(b) 상기 배치의 효능을 결정하기 위해, 미리 결정된 항온처리 시간 후에 상기 섬유아세포의 생존율을 결정하는 단계.

특정 구체예들에 따라, 상기 방법은 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물을 변형시켜 합성하는 것을 포함한다. 이러한 변형은 상기에서 언급된 변형 중 하나일 수 있다.

특정 구체예들에 따라, 상기 방법은 시험관내 또는 생체외에서 수행된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 상기 용어 "효능"은 관련 생물학적 특성들(즉, RA 환자로부터 수득한 섬유아세포의 감소된 생존율)에 관련된 제품의 특성에 근거한 제품(즉, 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물)의 생물학적 활성의 측정을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 상기 용어 "배치(batch)"는 특정한 제한 내에서 일정한 특성 및 품질을 갖도록 의도된 약물의 특정한 양을 의미하며, 전형적으로 동일한 제조 사이클 동안 단일 제조 순서에 따라 제조된다. 따라서, 본 발명의 교시는 배치 조건의 일부로서 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 생물학적 활성을 평가하기 위한 제조 공정의 QA에서 사용될 수 있다.

특정 구체예들에 따라, 용어 "배치"는 또한 안정성 특성화 과정 및/또는 펩타이드 및 제형 변형 과정에 노출된 약물의 양을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 용어 "섬유아세포"는 세포 외 매트릭스 및 콜라겐을 합성하는, RA 환자의 관절 낭액으로부터 얻어지는 결합 조직 세포를 의미한다. 상기 방법에 따라 사용된 상기 섬유아세포는 RA 환자로부터 직접 분리된 일차 배양물일 수 있거나, 또는 ATCC로부터 얻어질 수 있는 상업적으로 입수가능한 세포주 SW982, PCS-201-010 및 ACS-1023과 같은 섬유아세포로부터 얻은 세포주일 수 있다.

대상으로부터 관절 낭액을 얻는 방법은 당분야에 공지되어 있으며, 관절 생체 검사(joint biopsy) 및 관절천자(joint aspiration)와 같은 생체검사(biopsy)를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일반적으로 조직 또는 유체 생체검사를 얻기 위한 과정들은 Hypertext Transfer Protocol://World Wide Web (dot) healthatoz (dot)com/healthatoz/Atoz/search.asp에 상세하게 기재되어 있다.

특히, 관절염 흡입술(Arthrocentesis)이라고도 하는 관절천자는 바늘과 주사기를 사용하여 관절 주위의 공간에서 유체를 제거하는 것을 의미한다. 이것은 일반적으로 국소 마취하에 팽창을 완화하거나 관절 질병 및/또는 관절 문제를 진단하기 위한 분석을 위한 유체를 얻기 위해 사용된다. 관절 천자는 일반적으로 무릅에서 수행되나, 유체는 힙, 발목, 어깨, 팔꿈치 또는 손목과 같은 다른 관절들로부터 제거될 수 있다.

관절 생체 검사는 관절 또는 관절낭액 생체검사(synovial biopsy)를 의미한다. 시술 과정에서, 관절 내막 또는 활막(synovial membrane) 또는 유체 샘플을 채취한다. 간단하게, 상기 과정은 외과 의사에 의해 임상 시설에서 수행된다. 상기 생체검사를 수행하기 위해, 예를 들어, 관절 절개를 통해; 관절에 삽입된 스코프로; 또는 보다 전형적으로는 피부를 통한 날카로운 기구의 삽입에 의한 여러 가지 접근법을 사용할 수 있다. 상기 샘플은 모든 관절에서 가져올 수 있으며, 일반적으로 검사되는 관절은 무릎이다. 날카로운 도구(투관침(trocar))를 관절 공간으로 밀어 넣는다. 실험실 분석을 위해 유체를 회수하기 위해 부착된 주사기가 있는 바늘을 관절에 삽입한다. 상기 외과 의사는 바늘이 빠지기 전에 바늘 트랙을 따라 관절에 진통제 화합물을 주입할 수 있다. 그런 다음, 상기 투관침 및 생체검사 바늘을 삽입하고, 표본(specimens)을 채취한다. 표본이 채취된 후에, 투관침 및 생체검사 바늘을 제거한다.

적용된 절차에 관계없이, 일단 생물학적 샘플을 얻으면, 섬유아세포를 추가로 분리할 수 있다. 상기 섬유아세포 개체군의 농축은 당분야에 공지된 방법에 의해 수득될 수 있으며, 예를 들어 Bendersky 등, J Immunol.; 188:4349-59, 2012의 자성 세포 분리 및 유동세포 분석법의 세포 분류에 개시된 것들을 포함한다.

따라서, 예를 들어, 상기 섬유아세포는 DMEM-보충 배지 내의 플라스틱 웰에서 부착성 관절낭액 세포를 약 48시간 동안 배양한 다음, 모든 비부착 세포를 제거함으로써 단리될 수 있다.

상기 섬유아세포를 포함하는 접착 세포는, 일반적으로 섬유아세포 형태를 나타내며, CD90, 저농도의 CD49a 인테그린, 음성 대식세포(CD14), T 세포(CD3) 및 B 세포 (CD20) 표면 마커(예를 들어: 유동세포 분석법에 의해 결정됨), 및 시리우스 레드 (Sirius red) 염색으로 확인된 제1형 콜라겐에 대해 양성인 염색을 나타낸다.

상기 섬유아세포의 일차 배양물은 특정 구체예에 따라 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상의 섬유아세포를 포함한다.

섬유아세포의 제조 후, 미리결정된 양의 세포를 적절한 성장 배지로 조직 배양 플레이트(예: 12, 24, 96, 384 웰 플레이트)에서 배양하고, 미리 결정된 양의 시험될 단리된 폴리펩타이드, 조성물 또는 약제학적 조성물로 자극한다. 상기 배지의 선택은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 따라서, 예를 들어, RPMI 또는 DMEM(Sigma-Aldrich 또는 Biological Industries, Beit Haemek, Israel로부터 입수가능)을 성장 배지로 사용할 수 있다. 상기 배지에는 L- 글루타민, 비필수 아미노산, 피루브산 나트륨, 항생제/항균 용액, 2-메르캅토에탄올 및 혈청을 보충할 수 있다.

세포 생존에 대한 검출가능한 효과를 나타낼 시험관내 시험을 위해 배양된 미리결정된 양의 세포의 선별은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 따라서, 예를 들어, 세포 농도는 1×lO⁴/ml 내지 5×l0⁶/ml; 1×lO⁴/ml 내지 1×lO⁶/ml; 5×l0⁴/ml 내지 5×l0⁶/ml; 1×lO⁵/ml 내지 5×l0⁶/ml; 또는 1×1O⁵/ml 내지 1×l0⁶/ml일 수 있다.

특정 구체예들에 따라, 상기 세포 농도는 2×l0⁵/ml이다.

세포 생존에 대한 검출가능한 효과를 나타낼 시험관내 시험을 위해 사용되는 펩타이드 또는 조성물의 농도의 선별은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 바람직하게, 상기 사용되는 농도는 선택된 자극 파라미터의 선형 범위 내에 있어야 한다. 따라서, 예를 들어, 상기 농도는 1㎍/ml 내지 30㎍/ml; 1㎍/ml 내지 20㎍/ml; 5㎍/ml 내지 30㎍/ml; 또는 5㎍/ml 내지 20㎍/ml일 수 있다.

시험된 농도의 수는 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 5, 적어도 6, 1~10, 2~10, 3~10, 5~10, 1~5, 2~5 및 3~5의 다른 농도들일 수 있다.

시험된 농도의 각각에 대한 샘플들의 반복수는 2, 3, 4, 5 또는 6의 반복수일 수 있다.

미리 결정된 배양 시간 후, 섬유 아세포의 생존이 결정된다.

세포 생존을 모니터링하는 특정 방법은 당분야에 공지이며, 예를 들어, 살아있는 세포가 황색의 MTT염(3-(4,5-디메틸티아졸릴-2)-2,5-디페닐테트라졸륨브로마이드)(예를 들어 시그마 알드리치로부터 입수가능)을 퍼플-블루의 불용성 포르마잔 침전물로 환원시키는 선택적 능력에 기초한 MTT 테스트; TUNEL 분석(로슈로부터 입수가능)과 같은 세포 사멸 분석; 및 아넥신 V 분석[예를 들어, Apo Alert® Annexin V Apoptosis Kit (Clontech Laboratories, Inc., CA, USA)]을 포함한다.

상기 배양 시간은 다양할 수 있고, 세포 생존에 대한 검출가능한 효과를 초래할 배양 시간의 결정은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 특정 구체예에 따라, 상기 배양 시간은 12~96시간이다. 본 발명의 특정 구체예에 따라, 상기 배양 시간은 12~72시간; 12~48시간; 12~24시간; 24~96시간, 24~72시간 또는 24~48시간이다. 본 발명의 특정 구체예에 따라, 상기 배양 시간은 24~48시간이다.

특정 구체예들에 따라, 상기 접촉 후, 섬유아세포의 감소된 생존율은 해당 배치가 효능이 있음을 나타낸다.

특정 구체예들에 따라, 상기 분석은 양성 및 음성 대조구 샘플들을 더 포함할 수 있다. 상기 분석을 위한 양성 대조구는 비특이적 섬유아세포 세포괴사를 포함하는 작용제, 예를 들어 아스코르브산염을 포함할 수 있다(예를 들어, Schmidt et al., J Biomed Mater Res. 1993 Apr; 27(4):521-30 참조).

분석을 위한 음성 대조군은 시험된 폴리펩타이드 또는 SAA(예를 들어, PeproTech로부터 입수 가능)와 같은 조성물의 생물학적 활성을 방해하는 작용제를 포함할 수 있다.

특정 구체예들에 따라, 상기 배치의 상대적 효능을 결정하기 위해, 상기 세포들의 생존율을, 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 참조 표준 배치와 접촉시킨 후의 상기 세포들의 생존율과 비교하는 것을 포함한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, 상기 용어 "상대적인 효능"은 공지된 효능을 갖는 단리된 폴리펩타이드, 조성물 또는 약제학적 조성물의 표준 참조와 비교하여, 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 단리된 폴리펩타이드의 배치의 효능의 정성 측정(qualitative measure)하는 것을 의미한다.

특정 구체예들에 따라, 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 배치의 효능은 표준 참조(RS)의 공지된 효능과 비교하여 결정된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 상기 표현 "참조 표준" 또는 "RS"는 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 측정 기준으로 사용되는 표준화된 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 약제학적 조성을 의미한다. RS는 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 새로운 제조물과 비교될 수 있는 검정된(calibrated) 수준의 생물학적 효과를 제공한다.

특정 구체예에 따라, 상기 RS는 상기 질병(예를 들어, RA)을 치료하기에 효과적인 활성 성분의 최적의 효능 및 품질에 의해 특징지워진다.

계산된 효능값 및 상대 효능값은 당분야에 공지되어 있다. 특정한 구체예들에 따라, 상기 상대 효능은, 예를 들어 PLA(Stegmann Systems GmbH) 및 Gen5 데이터 분석 소프트웨어(BioTek)와 같은 생물학적 분석에 적합한 소프트웨어를 사용하여 계산된다.

본 발명의 상기 방법 및/또는 시스템의 구현은 선택된 작업을 수동, 자동, 또는 이들의 조합으로 수행하거나, 또는 완료하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법 및/또는 시스템의 실제 기구 및 장치에 따라, 몇몇 선택적인 작업들은 작동 시스템을 사용하는 하드웨어, 소프트웨어, 또는 펌웨어 또는 이들의 조합에 의해 구현될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 상기 용어, "약(about)"은 ±10%를 의미한다.

상기 용어들 "함유하다", "함유하는", "포함하다", "포함하는", "갖는" 및 이들의 활용형은 "포함하나, 이에 제한되지 않는 것이다"를 의미한다.

상기 용어 "이루어지다"는 "포함하며, 이에 제한된다"를 의미한다.

상기 용어 "본질적으로 이루어지다"는, 추가의 성분들, 단계들 및/또는 부분들은, 청구된 조성물, 방법 또는 구성의 기본적이고 새로운 특성들이 실질적으로 변경되지 않는 경우에만, 상기 조성물, 방법 또는 구성이 추가의 성분들, 단계들 및/또는 부분들을 포함할 수 있다는 것을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 단수 형태인 "하나(a)", "하나(an)", 및 "상기(the)"는, 문맥에서 명백하게 달리 지시하지 않는 한, 복수의 대상을 포함한다. 예를 들어, 상기 용어 "하나의 화합물" 또는 "적어도 하나의 화합물"은 이들의 혼합물들을 포함하는 복수의 화합물을 포함할 수 있다.

본 명세서 전반에 걸쳐, 본 발명의 다양한 구체예들은 범위 형식으로 제공될 수 있다. 범위 형식에서의 설명은 단순히 편의성과 간결성을 위한 것이며, 본 발명의 범위에 대한 엄격한 제한으로 해석되어서는 안되는 것으로 이해하여야 한다. 따라서, 범위의 설명은 상기 범위 내의 모든 가능한 부분 범위 뿐만 아니라 개별적인 절대값들을 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 1~6과 같은 범위의 설명은 1~3, 1~4, 1~5, 2~4, 2~6, 3~6 등과 같은 부분 범위 및 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 및 6의 범위 내의 절대값을 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다.

본 명세서에서 수치 범위가 지시될 때마다, 표시된 범위 내에서 임의의 인용된 수치(분수 또는 정수)를 포함하는 것을 의미한다. 상기 표현 제1 표시 숫자 및 제2 표시 숫자의 "사이의 범위/내지" 및 제1 표시 숫자 "로부터" 제2 표시 숫자 "까지"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 제1 및 제2 표시 숫자들 및 그들 사이의 모든 분수 및 정수를 포함하는 것을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 상기 용어 "방법"은 화학, 약제학, 생물학, 생화학 및 의약 분야의 전문가들에게 공지된 방식, 수단, 기술 및 공정들, 또는 이들 공지의 방식, 수단, 기술 및 공정들로부터 상기 전문가들에 의해 쉽게 개발되는 방식, 수단, 기술 및 공정들을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아닌, 주어진 과제를 성취하기 위한 방식, 수단, 기술 및 공정들을 의미한다.

특정 서열 목록이 참조될 때, 이러한 참조는, 염기 치환, 염기 결실 또는 염기 첨가를 초래하는, 예를 들어 서열상 오류, 복제 오류 또는 다른 변경에 따른 경미한 서열 변이체를 포함하는 것과 같이, 그의 상보적인 서열에 실질적으로 상응하는 서열도 포함하는 것으로 이해되어야하고, 그러한 변이체들의 빈도는 50개의 뉴클레오티드에서 1개 미만이거나, 선택적으로 100개의 뉴클레오타이드에서 1개 미만이거나, 선택적으로 200개의 뉴클레오티드에서 1개 미만이거나, 선택적으로 500개의 뉴클레오타이드에서 1개 미만이거나, 선택적으로 1000개의 뉴클레오티드에서 1개 미만이거나, 선택적으로 5,000개의 뉴클레오티드에서 1개 미만이거나, 선택적으로 10,000개의 뉴클레오티드에서 1개 미만이다.

명확한 설명을 위해, 별개의 구체예들의 설명에 기재되어 있는 본 발명의 특정한 특징들은, 단일 구체예에서 조합되어 제공될 수 있음을 인식하여야 한다. 반대로, 간략화를 위해, 단일 구체예의 설명에 기재되어 있는 본 발명의 다양한 특징들은 개별적으로 또는 임의의 적절한 서브콤비네이션 또는 임의의 다른 기재된 구체예로서 적절하게 제공될 수 있다. 다양한 구체예들의 설명에 기재된 어떤 특징들은, 상기 구체예가 이들 요소 없이는 작용하지 않는 경우가 아닌 한, 이들 구체예들의 본질적인 특징으로 간주되어서는 안된다.

상기에서 기술되고, 하기 청구범위에서 청구되는 바와 같은, 본 발명의 다양한 구체예들 및 측면들은 다음의 실시예들에 의해 실험적으로 지지된다.

실시예들

비제한적 방식으로, 본 발명의 일부 구체예들을 예시하는 상기 상세한 설명들과 함께 다음의 실시예들을 참조한다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 및 본 발명에서 사용되는 실험 공정들은 분자, 생화학, 미생물학 및 재조합 DNA 기술을 포함한다. 이러한 기술들은 문헌들에 상세히 설명되어 있다. 예를 들어, "Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R. M., ed. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988); Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, New York; Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998); methodologies as set forth in U.S. Pat. Nos. 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659 and 5,272,057; "Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J. E., ed. (1994); "Culture of Animal Cells - A Manual of Basic Technique" by Freshney, Wiley-Liss, N. Y. (1994), Third Edition; "Current Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed. (1994); Stites et al. (eds), "Basic and Clinical Immunology" (8th Edition), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell and Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W. H. Freeman and Co., New York (1980); available immunoassays are extensively described in the patent and scientific literature, see, for example, U.S. Pat. Nos. 3,791,932; 3,839,153; 3,850,752; 3,850,578; 3,853,987; 3,867,517; 3,879,262; 3,901,654; 3,935,074; 3,984,533; 3,996,345; 4,034,074; 4,098,876; 4,879,219; 5,011,771 and 5,281,521; "Oligonucleotide Synthesis" Gait, M. J., ed. (1984); "Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., eds. (1985); "Transcription and Translation" Hames, B. D., and Higgins S. J., eds. (1984); "Animal Cell Culture" Freshney, R. I., ed. (1986); "Immobilized Cells and Enzymes" IRL Press, (1986); "A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, B., (1984) and "Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press; "PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990); Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996)를 참조하고; 이들 모두는 그 전체 내용이 참고문헌으로서 본 명세서에 통합된다. 다른 일반적인 참조는 본 명세서에서 제공된다. 본 명세서에서 상기 공정들은 당분야에 공지인 것으로 간주되고, 독자들의 편의를 위해 제공된다. 본 명세서에 포함되는 모든 정보는 참고문헌으로서 본 명세서에 통합된다.

실시예 1

펩타이드 합성 및 특성화

● 물질들 및 방법들

5, 7 및 9량체 펩타이드들의 합성 - 상기 5-, 7- 및 9량체 펩타이드들[MTADV (서열번호: 1), MTADVDR (서열번호: 2) 및 TRMTADVDR (서열번호: 3)], -3, 아실화-N 말단 및 아미드화(Amidated)-C 말단 5-, 7- 및 9량체 펩타이드들[Ac-MTADV-NH₂ (서열번호: 4), Ac-MTADVDR-NH₂ (서열번호: 5) 및 Ac-TRMTADVDR-NH₂ (서열번호: 6)] 및 스크램블된 7량체 펩타이드[Ac-TMDVADR-NH₂ (서열번호: 7)]은 고체상 합성 fmoc 화학을 사용하여 시그라 이스라엘에 의해 합성되었다. 순도는 95 내지 97%에 도달하였다.

액체 크로마토그래피-질량 분석법 ( LCMS )

-안정성, 약동학(PK) 및 펩타이드의 표적 단백질은 LCMS에 의해 평가되었다.

질량 분석을 위한 샘플의 준비: 단백질-결합 비드를 8M 우레아 및 400mM 암모늄 바이카보네이트 중에서 2.8mM DTT(30분 동안 60℃)로 환원시키고, 8.8mM 요오드아세트아미드(어두운 조건 하에서 30분 동안 실온)로 변형시켰다. 상기 단백질은 1:50의 효소 대 기질 비율에서 2M 우레아 및 변형된 트립신(Promega)을 갖는 25M 암모늄 바이카보네이트에서 37℃에서 하룻밤 소화되었다. 상기 트립신 펩타이드(tryptic peptides)는 건조된 C18 팁스(Harvard)를 사용하여 탈염시키고, 질량 분광계 측정을 위해 0.1% 포름산에 재현탁시켰다. 상기 결과의 트립신 펩타이드를 모세관 HPLC(Eksigent)가 장착된 OrbitrapXL 질량 분석기(Thermo-Fisher)를 사용하여 LC-MS/MS로 분석하였다. 특히, Reprosil C18-Aqua (Dr Maisch GmbH, Germany)가 채워진(packed) 홈메이드 모세관 컬럼(75 micron ID)에 온라인으로 연결된 C18 트랩 컬럼(0.3 5mm, LC-Packings) 상에 상기 펩타이드들을 로딩하였고, 5 내지 40% 아세토니트릴 구배로 연속 94분 동안, 이어서 0.25㎕/분의 유속에서 수중(in water) 0.1% 포름산의 존재하에서 95% 아세토니트릴에서 12분 동안 분석하였다. 질량 분석은 반복적으로 전체 MS스캔 (해상도 60000), 이어서 충돌유도해리(CID)를 이용하는 포지티브 모드에 의해 수행되었다. 상위 7개(> 1개의 하전 펩타이드, 350~2000M/Z)가 각각의 전체 질량 스펙트럼으로부터의 단편화(fragmentation)를 위해 선택되었다.

데이터 분석: 상기 질량 분석은 Sequest 및 Mascot 검색 엔진을 사용하여 인간 유니포트 데이터베이스 및 디코이 데이터베이스(오류 발견율(FDR)을 결정하기 위해)에 대해 디스코버러 소프트웨어 버전 1.4를 사용하여 분석하였다. 높은 신뢰도는 0.01 FDR을 의미한다. 각 펩타이드의 피크 면적을 계산함으로써 세미 정량(Semi quantitation)을 수행하였다. 단백질의 면적은 각 단백질 유래의 3개의 가장 강한 펩타이드들의 평균이다.

결과들

원래의 MTDV 서열 대신에 MTADV 서열의 존재를 유도하는 CD44vRA 변이체의 변이 엑손 4와 변이 엑손 5 사이의 스플라이싱 연접부에 알라닌을 삽입시킴으로써, CD44vRA의 병리학적 활성이 부여되는 것으로 나타났다(Nedvetzki et al., J Clin Invest 111: 1211-1220,2003).

본 발명자들은 MTADV 서열을 포함하는 5-, 7- 및 9량체 펩타이드(본 명세서에서 RA 펩타이드로 표시함)를 합성하였다. 상기 5량체 RA 펩타이드는 저분자량(700달톤 미만)의 비교적 소수성인 아미노산 서열을 포함한다. 따라서, 조직에 쉽게 침투할 수 있으며, 결과적으로 국소 적용 및 경구 전달에 사용될 수 있다.

RA 펩타이드의 단백질 가수분해 분석에서는 단백질 가수분해 부위가 나타나지 않았으며(데이터는 나타내지 않음), 이는 상기 펩타이드가 적어도 비교적 안정하다는 것을 나타낸다. 질량 분석법에 의한 정량 분석은 4℃, 실온 또는 -20℃에서 22주 동안 식염수에 저장시 5량체 펩타이드(서열번호 1)와 거의 동일한 안정성을 나타냈다(도 1). -20℃에서의 저장이 100% 안정성을 나타내는 것으로 가정하면, 이들 결과들은 5량체 펩타이드가 실온 및 4℃에서 적어도 22주 동안 안정하다는 것을 입증한다.

실시예 2

5- 및 9량체 RA 펩타이드는 콜라겐-유도성 관절염(CIA) 마우스 모델에서 관절염을 감소시킬 수 있다

● 물질들 및 방법들

마우스 - Nedvetzki et al., PNAS 101, 18081-18086, 2004에서 기재된 바와 같이, 제2형 콜라겐 주사에 의해 DBA/1 또는 C57BL 마우스에서 콜라겐 유도성 관절염(CIA)을 발생시켰다.

치료 프로토콜 - 주입 당 25㎍, 100㎍ 또는 150㎍의 용량으로 PBS, 또는 상기 9량체 RA 펩타이드(서열번호: 3)를 6일 내에 4회 CIA 마우스에게 i.p 투여하였다(하기 표 3 참조). 주사당 70㎍의 투여량으로 PBS(n = 7) 또는 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1, n = 7)를 C57BL/6 백그라운드 상의 CIA 마우스에게 10 일간 연속 i.p 투여하였다. 모든 그룹들에서 첫번째 주사는 발 부종에 의해 결정되는 질병의 발병시에 주사되었다.

관절 염증 평가 - 염증은 발 부종 반응에 의해 평가되었다. 발 부종은 마이크로 칼리버에 의해 측정되었다. 2.1~2.3mm 범위의 발 부종은 "질병의 발병"으로 간주되어 상기 펩타이드의 주입을 위한 시작점으로 간주된다. 2.3mm 이상의 발 부종을 보이는 마우스는 실험에서 제외시켰다. 모든 측정은 블라인드 방식으로 수행되었다(추가적인 세부 사항은 Nedvetzki, et al., (2004) PNAS 101, 18081-18086 참조).

조직학 - 마우스를 11일째(처리 중단 후 1일째)에 희생시키고, 뒷다리를 분리하고, 실온에서 4%의 파라포름알데하이드로 밤새 고정시켰다(추가 세부 사항은 Nedvetzki et al. (2004) PNAS 101,18081-18086 참조). 고정 후, 가동관절(diarthrodial joint) 부분을 준비하고, 헤마톡실린과 에오신(H&E)으로 염색하고, 블라인드 방식 하에서 병리학자에 의해 평가하였다. 관절 침투 평가: 0 = 침투없음; 4 = 방대한 침투.

통계분석 - 각 측정 지점에 대한 통계 분석은 비대응 값(paired value)에 대하여 스튜던트 t-테스트에 의해 수행되었다.

실험 설계-투여량 반응(도 2a 내지 2c)

그룹 #	치료	#마우스	주사 프로토콜
1	1XPBS 100㎕/주사	8	격일로 6연속일 동안 주사
2	펩타이드 9량체 TRMTADVDR(서열번호: 3) 25㎍/100㎕/주사	8	격일로 6연속일 동안 주사
3	펩타이드 9량체 TRMTADVDR (서열번호: 3) 100㎍/100㎕/주사	6	격일로 6연속일 동안 주사
3	타이드 9량체 TRMTADVDR (서열번호: 3) 150㎍/100㎕/주사	4	격일로 6연속일 동안 주사

결과들

상기 콜라겐-유도 관절염(CIA) 마우스 모델은 인간 류마티스 관절염(RA)의 마우스 유사체이다.

생성된 RA 펩타이드가 CIA 마우스 모델에서 관절염증에 미치는 영향을 평가하기 위해, 9량체 RA 펩타이드(서열번호: 3)의 상이한 투여량을 질병의 발병으로부터 DBA/1 백그라운드 상의 CIA 마우스에게 투여하였다; 관절염은 발목 부종을 결정함으로써 평가하였다. 도 2a 내지 2b에 나타낸 바와 같이, 25 및 100㎍의 9량체 RA 펩타이드(서열번호: 3)를 투여한 마우스는 PBS를 투여한 마우스와 비교하여 발 부종 반응에서 유의한 차이가 없었으므로, 유의한 치료 효과가 없음을 나타낸다. 반대로 150㎍의 9량체 RA 펩타이드(서열번호: 3)를 투여한 마우스는 발 부종이 유의하게 감소한 것으로 나타났다(도 2c).

PBS 대조군으로 처리한 후, C57BL/6 백그라운드에서 CIA 마우스로부터 취한 뒷다리 절편의 조직학적 평가는 단핵구 염증 세포의 관절낭(joint capsule) 내로의 방대한 침투, 광범위한 관절 낭액 비대 및 반응성 세포로 채워진 관절 공간의 심한 협착을 나타냈다. 또한, 연골 기질(cartilage matrix)의 파괴와 함께 관절 연골(articular cartilage) 및 연하골(subchondral bone)의 극심한 짓무름(erosion)이 기록되었다. 나머지 연골 기질도 심하게 침투되었다. 종합한 결과, PBS로 처리한 마우스의 평균 관절 침투 점수는 약 4였다(도 3a 및 3c).

대조적으로, 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)로 처리한 후, CIA 마우스에서 채취한 뒷다리 절편의 조직학적 평가는 단핵구 염증 세포의 경막 외 비대증이 없이 관절낭으로의 경미한 침윤을 나타내었다. 염증성 침투는 샘플의 소수에서 나타났다. 상기 관절 공간은 보존되었고, 반응 세포가 거의 없다. 또한, 관절 연골 및 연하골의 짓무름은 관찰되지 않았고, 연골 기질은 일반적으로 보존되었다고 기록하였다. 또한, 샘플 중 일부는 처리되지 않은 마우스와 구별할 수 없었다 (데이터는 표시되지 않음). 종합한 결과, 5량체 RA 펩타이드로 처리한 마우스의 평균 관절 침투 점수는 약 1이였다(도 3b 및 3c).

전체적으로, 대조군 PBS 처리군의 관절 염증 점수는 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1) 처리군의 관절 염증 점수보다 유의하게 높았으며(P <0.0001), 이는 상기 펩타이드로 처리하면 염증이 있는 관절의 정상적인 조직을 회복시킬 수 있음을 나타낸다.

종합한 결과, 5- 및 9량체 RA 펩타이드(서열번호: 1 및 3)에 의한 처리는 CIA 마우스 모델에서 관절염을 억제한다.

이론에 얽매이지 않고, 알려지지 않은 CD44vRA 리간드 및 CD44vRA 사이의 상호 작용이 CD44vRA 당단백질의 구조적 변화를 일으킨다는 것이 제시된다. 상기 새로운 에피토프(epitope)는 동일한 분자 내 v3 엑손 생성물의 헤파린 설페이트에 FGF-2의 결합을 허용한다. 상기 결합된 FGF-2는 내피 세포 또는 FGF 수용체 1을 발현하는 섬유아세포와 상호 작용하도록 배향되어, 염증 활성의 증식 및 과증식을 유발한다(Nedvetzki 등, J Clin Invest 111 : 1211-1220, 2003). 상기 RA 펩타이드는 상기 알려지지 않은 리간드와의 상호작용에서 세포 표면 CD44와 경쟁하여 Nedvetzki 등에 의해 기술된 FGF-2-유도성 염증 캐스케이드를 차단할 수 있다(J Clin Invest 111 : 1211-1220, 2003).

실시예 3

상기 5- 7- 및 9량체 보호된 RA 펩타이드들은 CIA 마우스 모델에서 관절염을 감소시킬 수 있다.

● 물질들 및 방법들

마우스 - 상기 실시예 2에 기재됨.

치료 프로토콜 - 주사당 70 또는 200㎍의 투여량으로 PBS 또는 시험될 펩타이드들[Ac-TRMTADVDR-NH₂ (서열번호: 6), Ac-MTADVDR-NH₂ (서열번호: 5), Ac-MTADV-NH₂ (서열번호: 4) 및 스크램블된 Ac-TMDVADR-NH₂ (서열번호: 7)]을 DBA 백그라운드 상의 CIA/1 마우스에게 i.p 투여하였다(하기 표 4~7 참조). 비특이적 대조군으로서, 동일한 프로토콜에 따라 여러 마우스에게 50㎍의 투여량으로 덱사메타손(Dex)을 i.p. 투여하였다. 모든 그룹에서 첫번째 주사는 발 부종에 의해 결정되는 질병의 발병시에 주사되었다.

관절염 평가 - 상기 실시예 2에 기재됨. 2mm 미만의 발 부종은 건강한 것으로 간주되었다.

통계분석 - 상기 실시예 2에 기재됨.

실험 설계(도 4)

그룹 #	치료	#마우스/발 *	주사 프로토콜
1	PBSx1 100㎕/주사	4/5*	9연속일 동안 하루에 1회 주사
2	펩타이드 9량체 Ac-TRMTADVDR-NH2 (서열번호: 6) 200㎍/100㎕/주사	5/7*	9연속일 동안 하루에 1회 주사
3	펩타이드 7량체 Ac-MTADVDR-NH2 (서열번호: 5) 200㎍/100㎕/주사	2/3*	9연속일 동안 하루에 1회 주사

* 마우스의 2개의 뒷발들에 염증이 있는 경우, 두개 발들 모두 부종에 대하여 분석하였다.

[표 5a]

[표 5b]

* 마우스의 2개의 뒷발들에 염증이 있는 경우, 두개 발들 모두 부종에 대하여 분석하였다.

실험 설계(도 6)

그룹 #	치료	#마우스	주사 프로토콜
1	1XPBS 100㎕/주사 1	13	10연속일 동안 하루에 1회 주사
2	펩타이드 5량체 Ac-MTADV-NH2 (서열번호: 4) 70㎍/100㎕/주사	11	10연속일 동안 하루에 1회 주사

실험 설계(도 7a 내지 7c)

그룹 #	치료	#마우스/발 *	주사 프로토콜
1	1XPBS 100㎕/주사 1	8/9*	9연속일 동안 하루에 1회 주사
2	대주군:7량체 스크램블된 펩타이드 Ac-TMDVADR-NH2 (서열번호: 7) 200㎍/100㎕/주사	7/10*	9연속일 동안 하루에 1회 주사
3	펩타이드 7량체 Ac-MTADVDR-NH2 (서열번호: 5) 200㎍/100㎕/주사	9/11*	9연속일 동안 하루에 1회 주사

* 마우스의 2개의 뒷발들에 염증이 있는 경우, 두개 발들 모두 부종에 대하여 분석하였다.

결과들

다음 단계에서, 9- 7- 및 5량체 RA 펩타이드들은 보호 잔기들 즉, 펩타이드들의 아미노 말단 및 카르복실 말단에서 아세틸 및 아미드 잔기들로 보호하여 합성하였다[Ac-TRMTADVDR-NH₂ (서열번호: 6), Ac-MTADVDR-NH₂ (서열번호: 5) 및 Ac-MTADV-NH₂ (서열번호: 4), 본 명세서에서 각각 9- 7- 및 5량체 RA 보호된 펩타이드로 지칭하였다.]. 이들 보호 잔기들은 실험용 마우스에서 펩타이드의 천연 상태를 보존하고, 펩타이드를 안정화시킨다. CIA의 발병시에 주사한 후, DBA/1 마우스의 관절염증을 감소시키는 보호된 펩타이드들의 능력을 평가하였다. 모든 측정은 블라인드 방식하에서 수행되었다.

도 4 및 5a 내지 5b에 나타낸 바와 같이, 주사당 200㎍의 투여량으로 모든 보호된 RA 펩타이드를 주사한 결과, PBS로 처리된 마우스와 비교하여 DBA 백그라운드 상의 CIA 마우스에서 관절 염증을 유의하게 억제하였다. 도 5a에서 명백한 바와 같이, 덱사메타손의 투여는, 아마도 상기 스테로이드의 비특이적 항염증 효과를 생성함으로써, 발바닥 부종을 감소시켰다. 상기 5량체 보호된 펩타이드(서열번호 : 4)는 또한 주사 1회당 70㎍의 투여량으로 투여했을 때, C57BL/6 백그라운드 상의 CIA 마우스에서 관절 염증을 유의하게 억제할 수 있었다(도 6). 모든 측정은 블라인드 방식하에서 수행되었다.

다음 단계에서는 관절 염증에 대한 스크램블된 RA 펩타이드의 효과를 평가했다. 이를 위해, 상기 7량체 보호된 RA 펩타이드(Ac-MTADVDR-NH₂, 서열번호: 5)의 결과를 스크램블된 7량체 보호된 펩타이드(Ac-TMDVADR-NH₂, 서열번호: 7)의 결과와 비교하였다. 도 7a 내지 7c에 나타낸 바와 같이, 상기 스크램블된 비특이적 7량체 보호된 펩타이드는 발바닥 부종에 어떠한 영향을 미치지 않았다. 모든 측정은 블라인드 방식 하에서 수행되었다.

도 7a~c에 나타낸 결과들은, 또한 각 그룹의 건강한 발의 백분율을 측정함으로써 평가되었다. 따라서, 상기 질병의 중증도를 반영한, CIA DBA/1 마우스(도 8)의 뒷발을 평가한 결과, 7량체 보호된 RA 펩타이드로 치료된 CIA 마우스의 뒷발의 60% 이상이 건강하게 남아있는 것으로 나타났다. 대조적으로, 시험한 다른 그룹에서 남아있는 건강한 뒷발의 백분율은 PBS 처리된 그룹에서 15% 및 7량체 펩타이드 스크램블된 그룹에서 33%였다.

종합한 결과, 5-, 7- 및 9량체 RA 보호된 펩타이드들(서열번호: 4~6)은 DBA 및 C57BL/6 백그라운드 모두에서 CIA 마우스에 주사시 관절염 염증을 억제하나, 비특이적 스크램블된 7량체 보호된 펩타이드는 관절염에 영향을 미치지 않는다. 아세틸화 및 아미드화는 RA 펩타이드의 활성에 영향을 미치지 못하나(데이터로 표시되지 않음); 그러나, 그들은 RA 펩타이드의 안정성 및 약제학을 향상시키는 것으로 기대된다.

실시예 4

주사당 70㎍은 CIA 마우스 모델에서 관절염을 줄이기 위한 5량체 보호된 RA 펩타이드를 위한 최적의 투여량이다.

● 물질들 및 방법들

마우스 - 상기 실시예 2에 기재됨.

치료 프로토콜 - 주사당 10, 25, 70, 200 또는 600㎍의 투여량으로 PBS 또는 시험될 펩타이드[Ac-MTADV-NH₂ (서열번호: 4)]를 10일 구성 동안 CIA 마우스에게 i.p 투여하였다(하기 표 8~9 참조). 모든 그룹들에서 첫번째 주사는 발 부종에 의해 결정된 바와 같이 질병의 발병시에 주사되었다.

관절염의 평가 - 상기 실시예 2에 기재됨. 측정은 블라인드 방식 하에서 수행하였다.

통계분석 - 상기 실시예 2에 기재됨.

실험 설계 (도 9a)

그룹 #	치료	#발	주사 프로토콜
1	1XPBS 100㎕/주사	13	10연속일 동안 하루에 1회 주사
2	5량체 펩타이드 Ac-MTADV-NH2 (서열번호: 4) 70㎍/100㎕/주사	11	10연속일 동안 하루에 1회 주사
3	5량체 펩타이드 Ac-MTADV-NH2 (서열번호: 4) 200㎍/100㎕/주사	11	10연속일 동안 하루에 1회 주사
4	5량체 펩타이드 Ac-MTADV-NH2 (서열번호: 4) 600㎍/100㎕/주사	9	10연속일 동안 하루에 1회 주사

실험 설계 (도 9b)

그룹 #	치료	#발	주사 프로토콜
1	1XPBS 100㎕/주사	13	10연속일 동안 하루에 1회 주사
2	5량체 펩타이드 Ac-MTADV-NH2 (서열번호: 4) 10㎍/100㎕/주사	11	10연속일 동안 하루에 1회 주사
3	5량체 펩타이드 Ac-MTADV NH2 (서열번호: 4) 25㎍/100㎕/주사	11	10연속일 동안 하루에 1회 주사
4	5량체 펩타이드 Ac-MTADV-NH2 (서열번호: 4) 70㎍/100㎕/주사	9	10연속일 동안 하루에 1회 주사

결과들

5량체 RA 펩타이드의 최적의 항-염증 치료를 평가하기 위해, 보호된 펩타이드 (서열번호: 4)의 몇몇 상이한 투여량이 C57BL/6 백그라운드 상의 CIA 마우스에 투여되었고, 상기 관절염은 발바닥 부종의 측정에 의해 결정되었다(발바닥 부피의 전기 자동 측정은 아르키메데스 관찰에 근거함). 도 9a에 나타난 바와 같이, 5량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호: 4)의 주사당 70, 200 또는 600㎍의 주사는 PBS 대조군과 비교하였을 때 관절염을 감소시켰다; 그러나, 상기 펩타이드의 70㎍의 투여량은 통계학적으로 가장 유의한 항-염증 결과를 나타내었다. 또한, 도 9b에 나타낸 바와 같이, 5량체 보호된 RA 펩타이드의 주사당 10 및 25㎍의 주사는 유의한 항-염증 효과를 유도하지 않았다.

종합한 결과, 상기 데이터는 주사당 70㎍의 투여량이, 5량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호: 4)에 의한 CIA 억제를 위해 최적의 가장 낮은 용량임을 나타낸다.

실시예 5

5량체 RA 펩타이드는 CIA 마우스 모델에서 DTH를 억제하지 않는다.

● 물질들 및 방법들

DTH 모델 - C57BL/6 마우스의 복부에 옥사졸론 용액을 칠하였다(민감화). 6일째에, 지연형 과민성(DTH) 반응을 생성시키기 위해, 각 마우스의 오른쪽 귀에 동일한 합텐, 옥사졸론(유발)을 칠했다. DTH 발생을 나타내는 오른쪽과 왼쪽 귀 사이의 두께의 차이는 24시간 후에 마이크로캘리퍼(microcaliper)에 의해 결정되었다. DTH 유도는 정상적인 면역 반응을 나타낸다. 추가의 세부 사항들은 Weiss et al., (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 285-290 참조.

치료 프로토콜 - 200㎍의 투여량으로 PBS 및 5량체 펩타이드(서열번호: 1)를 민감화 반응 하루 전에 투여하고, 그런 다음 민감화 반응 기간(7일) 동안 매일 투여하였다. 항-TNF 항체(Herrring at al., (2002) Infect Immun 70, 2959-64)가 비특이적 효과를 증명하기 위하여 비교하는데 사용되었다.

통계 분석 - 상기 실시예 2에 기재됨.

결과들

일반적으로 면역 반응에 대한 RA 펩타이드의 영향을 평가하기 위해, 지연형 민감성(DTH) 반응에 대한 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)의 효과를 C57BL/6 마우스에서 생성된 DTH 모델에서 평가하였다. DTH는 미생물에 대한 면역 반응을 특징으로하는 급성 염증을 반영한다. 결과들은 5량체 RA 펩타이드의 주사가 DTH 반응에 영향을 미치지 않으며, 펩타이드로 처리된 마우스는 7일 분석 기간(도 10)에 걸쳐, PBS로 처리된 대조군 마우스와 같이 동일한 DTH 반응을 나타내었다. 대조적으로, 항-TNFα 항체로 처리된 마우스는 대조군 마우스와 비교하여 유의하게 DTH 반응을 억제하였음을 나타내었다.

실시예 6

5량체 펩타이드는 CIA 마우스 모델에서 중화 항체를 생성하지 않는다.

● 물질들 및 방법들

마우스 - 상기 실시예 2에 기재됨.

치료 프로토콜 - 주사당 70㎍의 용량으로 PBS 또는 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)를 C57BL/6 백그라운드 상의 CIA 마우스에 10일간 연속 투여하였다. 모든 그룹들에서, 첫번째 주사는 발 부종에 의해 결정되는 질병의 발병시에 주사되었다.

효소면역정량법( ELISA) - 96웰 ELISA 플레이트를 5량체 RA 펩타이드(서열번호 1), 콜라겐 또는 면역글로불린(양성 대조군)으로 코팅하였다. PBS 또는 상기 5량체 RA 펩타이드로 처리된 CIA 마우스로부터의 혈청을 코팅된 플레이트에 첨가하고, 콜라겐 또는 RA 펩타이드에 대한 중화 항체의 존재를 항 면역글로불린 + 검출 시스템으로 검출하였다. 상기 플레이트 웰들을 1mg/ml의 펩타이드 또는 단백질로 코팅하였다. 마우스 혈청을 차가운 온도에서 15시간 동안 플레이트 웰에 첨가하였다. 상기 검출 시스템은 HRP-항마우스 IgG 및 TMB(Bako) 기질을 포함하였다. 450nm의 파장에서 ELISA 판독기를 사용하여 플레이트를 분석하였다.

통계분석 - 상기 실시예 2에 기재됨.

결과들

RA 펩타이드 치료가, 펩타이드 항염증 효과를 감소시키거나 심지어 차단할 수 있는 특이적 중화 항체의 생성을 유도하는지의 여부를 결정하기 위해 혈청 중의 항-5량체 펩타이드 항체의 존재를 ELISA 분석을 사용하여 측정하였다. 도 11에 나타낸 바와 같이, 5량체 RA 펩타이드에 대한 중화 항체는, 펩타이드로 처리한 후 CIA 마우스의 혈청에서 검출되지 않았다. 대조적으로, 상기 CIA 마우스 모델은 콜라겐 주사에 의해 생성되므로, 항-콜라겐 특이적 항체는 CIA 마우스의 혈청에서 명백하게 나타났다.

실시예 7

혈청 아밀로이드 A, 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B는 5량체 펩타이드의 잠재적인 표적 단백질이다.

● 물질들 및 방법들

펩타이드 표적 단백질(들)의 분리 - 관절 낭액을 류마티스 관절염(RA) 환자의 관절로부터 제거하였다. 상기 관절 낭액을 PBS와 1:1로 희석하고, 1,200rpm에서 원심분리하였다. 상기 세포 펠렛을 프로테아제 억제제들을 포함하는 용해 완충액(lysis buffer)에 적용하였다. 상기 세포 용해물(cell lysate)을 비오티닐화(biotinylated) 5량체 펩타이드(시그마) 또는 PBS와 함께 4℃에서 12시간 동안 흔들면서 배양하였다. 스트렙타아비딘 세파로오스 비드들(세파덱스)을 비오티닐화 5량체 펩타이드-처리된 세포 추출액 또는 PBS로 처리된 세포 추출액에 4℃에서 추가의 1시간 동안 흔들면서 첨가하였다. 상기 펩타이드-결합 비드들 및 대조군 비드들은 원심분리기에 의해 분리하였고, 광범위하게 세척하였으며, 질량 분석을 위해 이송되었다(도 12 참조). 상기 질량 분석(MS) 측정 및 분석은 Haifa의 Technion의 흡연자 단백질학 연구 센터에서 수행되었다.

결과들

5량체 펩타이드(서열번호 1)가 결합된 RA 환자의 관절 낭액 세포로부터 추출한 세포 용해물로부터의 단백질의 질량 분석에 의해, 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)의 잠재적인 표적 단백질로서 혈청 아밀로이드 A(SAA), 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B가 확인되었다. 상기 단백질들은 RA의 병리학뿐만 아니라 알츠하이머 병, 암 질병 및 심혈관 질병의 병리학과 연관된 것으로 알려져있다.

실시예 8

5량체 RA 펩타이드의 약동학

● 물질들 및 방법들

치료 프로토콜 - C57BL/6 마우스에 200㎍의 5량체 펩타이드(서열번호: 1)의 단일 i.p. 주사를 적용하였다. 주사 후 15, 35 및 60분에 말초 출혈(500~1000㎕)에 의해 혈액 샘플들을 취하였고, 혈청은 질량 분석 평가를 위해 보내어졌다.

질량 분석법 분석 - 혈액 내의 상기 5량체 RA 펩타이드의 농도는 상기에 기재된 바와 같이 질량 스펙트럼 분석에 의해 결정되었다.

결과들

단일 i.p 주사 후, 마우스의 혈액 내의 5량체 RA 펩타이드 제거의 약동학(PK)이 도 13에 나타나 있다.

실시예 9

RA 펩타이드의 효과를 평가하기 위한 시험관내 모델

● 물질들 및 방법들

세포들 - RA 환자의 염증 관절로부터의 섬유아세포를 Bendersky et al, J Immunol. ;188:4349-59, 2012에 나타낸 바와 같이 배양하고 유지하였다. 펩타이드, 혈청 아밀로이드 A 또는 α-락트알부민의 지시된 농도를 갖는 96웰 플레이트의 각각에 20,000개 세포들을 첨가하였다.

MTT 분석 - MTT 분석은 Madhyastha et al. (2015) J Clin Diagn Res.; 9 : ZC05-8에 개시된 바와 같이 수행하였다.

통계분석 - 상기 실시예 2에 기재됨.

결과들

생성된 RA 펩타이드의 생물학적 활성을 평가하기 위한 도구로서 시험관내 모델을 개발하였다. 이를 위해, RA 환자의 염증성 관절로부터의 섬유아세포를 시험관내 배양하고, 세포 생존에 대한 펩타이드의 효과를 MTT 분석에 의해 평가하였다.

도 14에 나타낸 바와 같이, 5량체 RA 펩타이드(서열번호 1)의 투여량을 증가시키는 것은 세포 생존을 점차적으로 억제한다. 추가의 50㎍/ml 혈청 아밀로이드 A(SAA)를 5량체 펩타이드와 함께 섬유아세포 배양물에 첨가하면, 그러한 억제를 예방할 수 있다. 이들 결과들은, 또한 2.5㎍/ml(~5nM)의 저용량 펩타이드가 상기 시험관내 모델에서 세포 생존을 유의하게 억제할 수 있으며, 시험관내 최대 억제 효과가 60%임을 나타낸다.

세포 생존에 대한 펩타이드의 영향의 특이성을 입증하기 위해, 상기 펩타이드를 일정 농도(25㎍/ml)로 세포 배양액에 첨가하였고, SAA 또는 락트알부민(LA, 유사한 분자량을 갖는 대조군 단백질)은 농도를 높여 첨가하였다. 도 15에 나타낸 바와 같이, 상기 5량체 펩타이드는 섬유아세포의 생존율을 감소시켰고, SAA의 첨가는 투약 반응 방식(dose response manner)으로 점차 이러한 감소를 방지하였다. 반대로, LA의 첨가는 펩타이드의 억제 활성에 영향을 미치지 않았고; 이는 SAA가 특정 방식으로 5량체 펩타이드의 억제 효과를 방지한다는 것을 나타낸다.

다음 단계에서, 5량체 보호된 RA 펩타이드(서열번호: 4)의 억제 효과를 5량체 RA 펩타이드(서열번호: 1)와 비교하였다. 도 16에 나타낸 바와 같이, 펩타이드 변형은 상기 펩타이드의 억제 효과를 향상시켰다.

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SEQUENCE LISTING <110> Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. NAOR, David ESHKAR-SEBBAN, Lora AMAR, Keren-Or COHEN, Shmuel <120> ISOLATED POLYPEPTIDES OF CD44 AND USES THEREOF <130> 62563 <150> US 62/024,719 <151> 2014-07-15 <160> 29 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 1 Met Thr Ala Asp Val 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 2 Met Thr Ala Asp Val Asp Arg 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 3 Thr Arg Met Thr Ala Asp Val Asp Arg 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Acylated-N terminus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> C-Terminal Amidation <400> 4 Met Thr Ala Asp Val 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Acylated-N terminus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> C-Terminal Amidation <400> 5 Met Thr Ala Asp Val Asp Arg 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Acylated-N terminus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> C-Terminal Amidation <400> 6 Thr Arg Met Thr Ala Asp Val Asp Arg 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Acylated-N terminus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> C-Terminal Amidation <400> 7 Thr Met Asp Val Ala Asp Arg 1 5 <210> 8 <211> 5748 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 gagaagaaag ccagtgcgtc tctgggcgca ggggccagtg gggctcggag gcacaggcac 60 cccgcgacac tccaggttcc ccgacccacg tccctggcag ccccgattat ttacagcctc 120 agcagagcac ggggcggggg cagaggggcc cgcccgggag ggctgctact tcttaaaacc 180 tctgcgggct gcttagtcac agcccccctt gcttgggtgt gtccttcgct cgctccctcc 240 ctccgtctta ggtcactgtt ttcaacctcg aataaaaact gcagccaact tccgaggcag 300 cctcattgcc cagcggaccc cagcctctgc caggttcggt ccgccatcct cgtcccgtcc 360 tccgccggcc cctgccccgc gcccagggat cctccagctc ctttcgcccg cgccctccgt 420 tcgctccgga caccatggac aagttttggt ggcacgcagc ctggggactc tgcctcgtgc 480 cgctgagcct ggcgcagatc gatttgaata taacctgccg ctttgcaggt gtattccacg 540 tggagaaaaa tggtcgctac agcatctctc ggacggaggc cgctgacctc tgcaaggctt 600 tcaatagcac cttgcccaca atggcccaga tggagaaagc tctgagcatc ggatttgaga 660 cctgcaggta tgggttcata gaagggcacg tggtgattcc ccggatccac cccaactcca 720 tctgtgcagc aaacaacaca ggggtgtaca tcctcacatc caacacctcc cagtatgaca 780 catattgctt caatgcttca gctccacctg aagaagattg tacatcagtc acagacctgc 840 ccaatgcctt tgatggacca attaccataa ctattgttaa ccgtgatggc acccgctatg 900 tccagaaagg agaatacaga acgaatcctg aagacatcta ccccagcaac cctactgatg 960 atgacgtgag cagcggctcc tccagtgaaa ggagcagcac ttcaggaggt tacatctttt 1020 acaccttttc tactgtacac cccatcccag acgaagacag tccctggatc accgacagca 1080 cagacagaat ccctgctacc actttgatga gcactagtgc tacagcaact gagacagcaa 1140 ccaagaggca agaaacctgg gattggtttt catggttgtt tctaccatca gagtcaaaga 1200 atcatcttca cacaacaaca caaatggctg gtacgtcttc aaataccatc tcagcaggct 1260 gggagccaaa tgaagaaaat gaagatgaaa gagacagaca cctcagtttt tctggatcag 1320 gcattgatga tgatgaagat tttatctcca gcaccatttc aaccacacca cgggcttttg 1380 accacacaaa acagaaccag gactggaccc agtggaaccc aagccattca aatccggaag 1440 tgctacttca gacaaccaca aggatgactg atgtagacag aaatggcacc actgcttatg 1500 aaggaaactg gaacccagaa gcacaccctc ccctcattca ccatgagcat catgaggaag 1560 aagagacccc acattctaca agcacaatcc aggcaactcc tagtagtaca acggaagaaa 1620 cagctaccca gaaggaacag tggtttggca acagatggca tgagggatat cgccaaacac 1680 ccaaagaaga ctcccattcg acaacaggga cagctgcagc ctcagctcat accagccatc 1740 caatgcaagg aaggacaaca ccaagcccag aggacagttc ctggactgat ttcttcaacc 1800 caatctcaca ccccatggga cgaggtcatc aagcaggaag aaggatggat atggactcca 1860 gtcatagtat aacgcttcag cctactgcaa atccaaacac aggtttggtg gaagatttgg 1920 acaggacagg acctctttca atgacaacgc agcagagtaa ttctcagagc ttctctacat 1980 cacatgaagg cttggaagaa gataaagacc atccaacaac ttctactctg acatcaagca 2040 ataggaatga tgtcacaggt ggaagaagag acccaaatca ttctgaaggc tcaactactt 2100 tactggaagg ttatacctct cattacccac acacgaagga aagcaggacc ttcatcccag 2160 tgacctcagc taagactggg tcctttggag ttactgcagt tactgttgga gattccaact 2220 ctaatgtcaa tcgttcctta tcaggagacc aagacacatt ccaccccagt ggggggtccc 2280 ataccactca tggatctgaa tcagatggac actcacatgg gagtcaagaa ggtggagcaa 2340 acacaacctc tggtcctata aggacacccc aaattccaga atggctgatc atcttggcat 2400 ccctcttggc cttggctttg attcttgcag tttgcattgc agtcaacagt cgaagaaggt 2460 gtgggcagaa gaaaaagcta gtgatcaaca gtggcaatgg agctgtggag gacagaaagc 2520 caagtggact caacggagag gccagcaagt ctcaggaaat ggtgcatttg gtgaacaagg 2580 agtcgtcaga aactccagac cagtttatga cagctgatga gacaaggaac ctgcagaatg 2640 tggacatgaa gattggggtg taacacctac accattatct tggaaagaaa caaccgttgg 2700 aaacataacc attacaggga gctgggacac ttaacagatg caatgtgcta ctgattgttt 2760 cattgcgaat cttttttagc ataaaatttt ctactctttt tgttttttgt gttttgttct 2820 ttaaagtcag gtccaatttg taaaaacagc attgctttct gaaattaggg cccaattaat 2880 aatcagcaag aatttgatcg ttccagttcc cacttggagg cctttcatcc ctcgggtgtg 2940 ctatggatgg cttctaacaa aaactacaca tatgtattcc tgatcgccaa cctttccccc 3000 accagctaag gacatttccc agggttaata gggcctggtc cctgggagga aatttgaatg 3060 ggtccatttt gcccttccat agcctaatcc ctgggcattg ctttccactg aggttggggg 3120 ttggggtgta ctagttacac atcttcaaca gaccccctct agaaattttt cagatgcttc 3180 tgggagacac ccaaagggtg aagctattta tctgtagtaa actatttatc tgtgtttttg 3240 aaatattaaa ccctggatca gtcctttgat cagtataatt ttttaaagtt actttgtcag 3300 aggcacaaaa gggtttaaac tgattcataa taaatatctg tacttcttcg atcttcacct 3360 tttgtgctgt gattcttcag tttctaaacc agcactgtct gggtccctac aatgtatcag 3420 gaagagctga gaatggtaag gagactcttc taagtcttca tctcagagac cctgagttcc 3480 cactcagacc cactcagcca aatctcatgg aagaccaagg agggcagcac tgtttttgtt 3540 ttttgttttt tgtttttttt ttttgacact gtccaaaggt tttccatcct gtcctggaat 3600 cagagttgga agctgaggag cttcagcctc ttttatggtt taatggccac ctgttctctc 3660 ctgtgaaagg ctttgcaaag tcacattaag tttgcatgac ctgttatccc tggggcccta 3720 tttcatagag gctggcccta ttagtgattt ccaaaaacaa tatggaagtg ccttttgatg 3780 tcttacaata agagaagaag ccaatggaaa tgaaagagat tggcaaaggg gaaggatgat 3840 gccatgtaga tcctgtttga catttttatg gctgtatttg taaacttaaa cacaccagtg 3900 tctgttcttg atgcagttgc tatttaggat gagttaagtg cctggggagt ccctcaaaag 3960 gttaaaggga ttcccatcat tggaatctta tcaccagata ggcaagttta tgaccaaaca 4020 agagagtact ggctttatcc tctaacctca tattttctcc cacttggcaa gtcctttgtg 4080 gcatttattc atcagtcagg gtgtccgatt ggtcctagaa cttccaaagg ctgcttgtca 4140 tagaagccat tgcatctata aagcaacggc tcctgttaaa tggtatctcc tttctgaggc 4200 tcctactaaa agtcatttgt tacctaaact tatgtgctta acaggcaatg cttctcagac 4260 cacaaagcag aaagaagaag aaaagctcct gactaaatca gggctgggct tagacagagt 4320 tgatctgtag aatatcttta aaggagagat gtcaactttc tgcactattc ccagcctctg 4380 ctcctccctg tctaccctct cccctccctc tctccctcca cttcacccca caatcttgaa 4440 aaacttcctt tctcttctgt gaacatcatt ggccagatcc attttcagtg gtctggattt 4500 ctttttattt tcttttcaac ttgaaagaaa ctggacatta ggccactatg tgttgttact 4560 gccactagtg ttcaagtgcc tcttgttttc ccagagattt cctgggtctg ccagaggccc 4620 agacaggctc actcaagctc tttaactgaa aagcaacaag ccactccagg acaaggttca 4680 aaatggttac aacagcctct acctgtcgcc ccagggagaa aggggtagtg atacaagtct 4740 catagccaga gatggttttc cactccttct agatattccc aaaaagaggc tgagacagga 4800 ggttattttc aattttattt tggaattaaa tacttttttc cctttattac tgttgtagtc 4860 cctcacttgg atatacctct gttttcacga tagaaataag ggaggtctag agcttctatt 4920 ccttggccat tgtcaacgga gagctggcca agtcttcaca aacccttgca acattgcctg 4980 aagtttatgg aataagatgt attctcactc ccttgatctc aagggcgtaa ctctggaagc 5040 acagcttgac tacacgtcat ttttaccaat gattttcagg tgacctgggc taagtcattt 5100 aaactgggtc tttataaaag taaaaggcca acatttaatt attttgcaaa gcaacctaag 5160 agctaaagat gtaatttttc ttgcaattgt aaatcttttg tgtctcctga agacttccct 5220 taaaattagc tctgagtgaa aaatcaaaag agacaaaaga catcttcgaa tccatatttc 5280 aagcctggta gaattggctt ttctagcaga acctttccaa aagttttata ttgagattca 5340 taacaacacc aagaattgat 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tccaactact 900 tctgaaaaaa aagtaatgag ggcaattaat acattgaaga aagcctcaat aagtacaaca 960 gtgtagtact gacttatata tagaaaaaac ctgatcagtg gaaccaaatc ctcagaatta 1020 gacataagtg catatgagaa ttttgtatgt gataaaggtt gtatgttaac gtattaagta 1080 aaagacggac tattcaacaa atgggattgg tacaactggg tgaccatcta aaataacatc 1140 atgttgaaaa catactgtat atattacggt aggacaaatt ccaaatatgc taaatattta 1200 taaacaaata aggaaaatga taataataat attaacatta tctggtgaat ccatggaaaa 1260 ttcttttata gcccaaagta gggaaagctg caacaacaag gatggaactg gaggtcatta 1320 tgctaagtga aatcattcag gaacagaaag acaaacatca catgttctca cttatttgtg 1380 ggatctaaaa atcaaaacaa ttgaattcat ggagatagag aatagaagga tggttaccag 1440 aggctgggaa gggtagtggg gaggggggga gtgaggggag gtgaggatgg ttaatgagta 1500 ccaaaaaaat acttagaatg aataagagct agtatttgat agcacaacgg gggactatag 1560 tcagtaataa tttagctgta cattgtaaaa taaccaaaag agtataattg gattatttgt 1620 aacacaaagg ataaatgctt gaggggatgg atacccaatt ttccatgatg tgattattgc 1680 gcattgcatg gctgtaccaa aatatctcat gtaccccata attatataca 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acgtgggctc cagcattcta acagccaatg gtcgggcact gctcaaggac 9120 gcaaaggcag aaatgactgg tgagcacaat gccaacttaa atggaaaagt tattggaact 9180 ttgaaaaatt ctctcttctt ttcagcacaa ccatttgaga ttactgcatc cacaaataat 9240 gaaggaaatt tgaaagtggg ttttccacta aagctgactg ggaaaataga cttcctgaat 9300 aactatgcat tgtttctgag tccccgtgcc caacaagcaa gctggcaagc gagtaccaga 9360 ttcaatcagt acaaatacaa tcaaaacttt tctgctataa acaatgaaca caacatagaa 9420 gccagtatag gaatgaatgg agatgccaac ctggatttct taaacatacc tttaacaatt 9480 cctgaaatta acttgcctta cacggagttc aaaactccct tactgaagga tttctccata 9540 tgggaagaaa caggcttgaa agaatttttg aagacaacaa agcaatcatt tgatttgagt 9600 gtaaaggctc aatataaaaa gaacagtgac aagcattcca ttgttgtccc tctgggtatg 9660 ttttatgaat ttattctcaa caatgtcaat tcgtgggaca gaaaatttga gaaagtcaga 9720 aacaatgctt tacattttct taccacctcc tataatgaag caaaaattaa ggttgataag 9780 tacaaaactg aaaattccct taatcagccc tctgggacct ttcaaaatca tggctacact 9840 atcccagttg tcaacattga agtatctcca tttgctgtag agacactggc ttccagccat 9900 gtgatcccca cagcaataag caccccaagt gtcacaatcc ctggtcctaa catcatggtg 9960 ccttcataca agttagtgct gccacccctg gagttgccag ttttccatgg tcctgggaat 10020 ctattcaagt ttttcctccc agatttcaag ggattcaaca ctattgacaa tatttatatt 10080 ccagccatgg gcaactttac ctatgacttt tcttttaaat caagtgtcat cacactgaat 10140 accaatgctg gactttataa ccaatcagat atcgttgccc atttcctttc ttcctcttca 10200 tttgtcactg acgccctgca gtacaaatta gagggaacat cacgtctgat gcgaaaaagg 10260 ggattgaaac tagccacagc tgtctctcta actaacaaat ttgtaaaggg cagtcatgac 10320 agcaccatta gtttaaccaa gaaaaacatg gaagcatcag tgagaacaac tgccaacctc 10380 catgctccca tattctcaat gaacttcaag caggaactta atggaaatac caagtcaaaa 10440 cccactgttt catcatccat tgaactaaac tatgacttca attcctcaaa gctgcactct 10500 actgcaacag gaggcattga tcacaagttc agcttagaaa gtctcacttc ctacttttcc 10560 attgagtcat tcaccaaagg aaatatcaag agttccttcc tttctcagga atattcagga 10620 agtgttgcca atgaagccaa tgtatatctg aattccaagg gtactcggtc ttcagtgagg 10680 ctacaaggag cttccaaagt tgatggtatc tggaacgttg aagtaggaga aaattttgct 10740 ggagaagcca ccctccaacg catctacacc acatgggagc acaatatgaa aaaccatttg 10800 caggtatata gctacttctt cacaaaagga aagcaaacat gcagagctac tttggagctc 10860 tccccatgga ccatgtcaac cttgctacag gttcatgtga gtcaactcag ttccctcctt 10920 gacctccatc actttgacca ggaagtgatc ctaaaagcta acactaagaa ccagaagatc 10980 agctggaaag gtggggtcca ggttgaatca cgggttcttc agcacaatgc acagttctcc 11040 aatgaccaag aagaaatacg gcttgacctt gcaggatcct tagacggaca gctgtgggac 11100 cttgaagcta tctttttacc agtatatggc aagagcttgc aggaactcct acaaatggat 11160 ggaaagcgac agtatcttca agcttcaact tctcttctat ataccaaaaa ccctaatggc 11220 tatctcctct cactccccgt gcaagaactg gctgatagat ttattatacc agggataaaa 11280 ctaaatgact tcagtggagt aaaaatctat aagaagttaa gtacttcacc atttgccctc 11340 aacctaacaa tgctccccaa agtaaaattc cctgggattg atctgttaac acagtactct 11400 acaccagagg gctcctctgt ccctattttt gaggcaacta tacctgaaat tcatttaact 11460 gtatcccagt ttacacttcc aaagagcctt ccagttggca acacagtctt tgatctgaat 11520 aagttggcca acatgattgc cgatgttgac ctgcctagtg tcaccctgcc 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tggctcagaa gagcctgagc 12420 atccctgaga atctcaagaa gagggtgtta gacagtatag tacatgttac tcagaagtac 12480 cacatggcag tcatgtggct gatggactca ttcattcatt ttctgaaatt caatagagtc 12540 cagttcccag ggtacgctgg aacatatact gtggacgaac tctacactat agtcatgaag 12600 gaaaccaaga agtcactgtc tcagctgttt aatgggttag gaaacctact ttcctacgtt 12660 caaaaccaag tagagaaatc aagattaatc aatgacataa catttaaatg tccttttttc 12720 tcaaaacctt gtaaactaaa agatctcata ttgattttca gggaggagtt aaacatttta 12780 tcaaacatag gccaacagga tatcaagttt acaacaatac taagtagtct tcagggcttt 12840 ttggagagag ttttagacat catagaagaa caaattaaat gcctaaagga caatgaatct 12900 acttgtgttg ctgaccatat caacatggtt ttcaaaatac aggtcccata tgcttttaaa 12960 tccctaagag aagacatata ctttgtcctc ggtgagttca atgactttct tcaatccata 13020 cttcaggagg ggtcctacaa gctacagcag gtccatcagt atatgaaggc ccttcgtgaa 13080 gagtattttg atccgagcat ggttgggtgg acagtgaaat attatgaaat agaagaaaat 13140 atggttgagc tgatcaagac ccttttagtt tcctttaggg atgtctactc tgaatatagt 13200 gtgacagctg ctgattttgc ttccaaaatg tcaactcaag ttgaacaatt tgtgtccagg 13260 gatatcagag agtatcttag catgcttact gatataaatg gaaagtggat ggaaaagatt 13320 gcagagcttt ctattgtggc aaaggaaaca atgaaaagct gggtcactgc cgtggccaaa 13380 ataatgtctg attaccccca gcagttccac tccaatctgc aggatttttc agaccaactc 13440 tctagctact atgaaaaatt tgttggtgag tccacaagat tgattgacct gtccattcaa 13500 aactaccacg tgtttctcag atacatcacc gagttactga gaaagctgca ggtggccaca 13560 gccaataatg tgagccccta tataaagctt gctcaaggag agctgatgat caccttctga 13620 ttcatctact aacaaattca aattaaacct tcacatagta ggagactttg tagactacta 13680 taaagaccat cctgagccag acctgcagtc aacagcaaga gcaagaagca cataggaact 13740 atacctgcaa ccaagctggc ataagaacca agaccttcaa agcagcctga actcaagatg 13800 acatatttta caagttagag taaagtcaag agctgagttg ttttgtccaa ctcaggatgg 13860 agggagggag ggaaggggaa ataaataaat acttccttat tgtgcagcaa aaaaaaaaaa 13920 aaaaaaaaaa a 13931

Claims (29)

1. 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는 단리된 폴리펩타이드.
   
2. 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고, 항염증 활성을 포함하는 단리된 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드.
   
3. 제2항에 있어서,
   상기 엔드-캡핑은 N-말단 엔드-캡핑을 포함하는 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드.
   
4. 제3항에 있어서,
   상기 N-말단 엔드-캡핑은 아세틸을 포함하는 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드.
   
5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 엔드-캡핑은 C 말단 엔드-캡핑을 포함하는 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드.
   
6. 제5항에 있어서,
   상기 C 말단 엔드-캡핑은 아미드를 포함하는 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드.
   
7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 폴리펩타이드는 서열번호 1~3으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어지는 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드.
   
8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 폴리펩타이드는 서열번호 1로 표시되는 단리된 폴리펩타이드.
   
9. 제2항에 있어서,
   상기 폴리펩타이드는 서열번호 4~6으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 엔드-캡핑된 변형 폴리펩타이드.
   
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드 및 상기 단리된 폴리펩타이드에 결합된 비단백질 부분을 포함하는 조성물로서, 상기 단리된 융합 폴리펩타이드는 항염증 활성을 포함하는 조성물.
    
11. C 말단 및/또는 N 말단에 결합된 아미노산 서열을 갖는 제1항 및 제8항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드를 포함하는 단리된 융합 폴리펩타이드로서, 상기 C 말단 아미노산 서열은 상기 단리된 융합 폴리펩타이드를 갖는 불연속적인(non-contiguous) CD44vRA 아미노산 서열이고; 상기 융합 폴리펩타이드는 항-염증 활성을 포함하는 단리된 융합 폴리펩타이드.
    
12. 제10항에 따른 조성물 또는 제11항에 따른 단리된 폴리펩타이드에 있어서,
    상기 결합은 공유결합인 조성물 또는 단리된 폴리펩타이드.
    
13. 제2항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드 또는 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 조성물에 있어서,
    상기 항-염증 활성은 백신 접종 또는 점막 내성에 의존하지 않는 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물.
    
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물에 있어서,
    세럼 아밀로이드 A, 트랜스타이레틴 및 아포리포프로테인 B로 이루어지는 군으로부터 선택되는 단백질과 결합이 가능한 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물.
    
15. 활성제로서 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드 또는 조성물; 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
    
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 조성물 또는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 대상에게 투여하여, 상기 대상의 염증성 질병을 치료하는 것을 포함하는, 대상의 염증성 질병을 치료하는 방법.
17. 염증성 질병의 치료용 약물의 제조를 위한, 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드, 조성물 또는 약제학적 조성물의 사용.
    
18. 제16항에 있어서,
    상기 투여는 경구 투여를 포함하는 방법.
    
19. 제15항에 있어서,
    상기 조성물은 경구 투여를 위해 제형화되는 약제학적 조성물.
    
20. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 방법 또는 제17항에 따른 사용에 있어서,
    상기 염증성 질병은 CD44vRA를 발현하는 세포를 포함하는 방법 또는 사용.
    
21. 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 따른 방법 또는 제17항에 따른 사용에 있어서,
    상기 염증성 질병은 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 알츠하이머병, 암 및 심혈관 질병으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법 또는 사용.
    
22. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 방법 또는 제17항에 따른 사용에 있어서,
    상기 염증성 질병은 류마티스 관절염인 방법 또는 사용.
    
23. 제1항 또는 제11항에 따른 단리된 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드.
    
24. 제23항에 따른 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 구조물.
    
25. 다음의 단계들을 포함하는 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드, 조성물 또는 약제학적 조성물의 배치(batch)의 효능을 결정하는 방법:
    (a) 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 단리된 폴리펩타이드, 조성물 또는 약제학적 조성물의 배치를 류마티스 관절염 환자의 염증성 관절로부터 수득된 섬유아세포와 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 배치의 효능을 결정하기 위해, 미리 결정된 항온처리 시간 후에 상기 섬유아세포의 생존율을 결정하는 단계.
    
26. 제25항에 있어서,
    상기 방법은 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물을 상기 접촉 전에 변형시켜 합성하는 것을 포함하는 방법.
    
27. 제25항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 접촉 후에 상기 섬유아세포의 감소된 생존율은 상기 배치의 효능을 나타내는 지표인 방법.
    
28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 배치의 상대적 효능을 결정하기 위해, 상기 세포들의 생존율을, 상기 단리된 폴리펩타이드, 상기 조성물 또는 상기 약제학적 조성물의 참조 표준 배치와 접촉시킨 후의 상기 세포들의 생존율과 비교하는 것을 포함하는 방법.
29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 시험관내 또는 생체외에서 수행되는 방법.

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