KR102068370B1 - 심부전의 치료를 위한 합성 아펠린 모방체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I'의 합성 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 제공한다.
<화학식 I'>
Figure 112014079668487-pct00082

상기 식에서, X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12 및 X13은 본원에 정의되어 있다. 폴리펩티드는 APJ 수용체의 효능제이다. 본 발명은 또한 본 발명의 폴리펩티드의 제조 방법, 및 그의 치료 용도, 예컨대 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증의 치료 또는 예방에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 약리학적 활성제의 조합물 및 제약 조성물을 제공한다.

Description

심부전의 치료를 위한 합성 아펠린 모방체{SYNTHETIC APELIN MIMETICS FOR THE TREATMENT OF HEART FAILURE}
서열목록
본 출원은 EFS-Web를 통해 ASCII 형식으로 제출된 서열목록을 포함하며, 본 명세서에 그 전체가 참조로 포함된다. 2013년 6월 28일에 만들어진 상기 ASCII 사본의 명칭은 PAT054961-WO-PCT_SL.txt이며, 크기는 85,581 바이트이다.
기술분야
본 발명은 투여된 대상체에서 심혈관 질환을 치료하기 위해 설계되고, 그의 야생형 대응물보다 큰 분해 저항성, 및 그와 동등하거나 또는 그보다 큰 생물활성을 나타내는 변형된 펩티드 및 폴리펩티드 서열을 포함하는 신규 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 조성물을 제조하는 방법 및 상기 조성물을 심혈관 질환을 치료하기 위한 제약 활성제로서 사용하는 방법에 관한 것이다.
서양에서 심부전의 발생률은 65세 이후 성인의 대략 1/100이다. 가장 흔한 병리상태는 심장 수축성에서의 만성 결핍, 및 이로 인한 심장 박출량, 즉 시간 경과에 따라 각 심실에 의해 배출되는 혈액의 유효한 부피에서의 만성 결핍이다. 만성 심부전을 앓고 있는 환자는 비대상성의 급성 에피소드, 즉 심장의 적절한 혈액 순환 유지 부전을 가질 수 있으며, 이때 심장 수축성이 추가로 저하된다. 미국에서만 "급성 비대상성 심부전" (ADHF)에 대해 연간 ~50만 건의 입원이 존재한다.
ADHF에 대한 현행 요법은 이뇨제, 혈관확장제 및 수축촉진제를 포함하며, 이는 직접적으로 심장 수축성을 증가시킨다. 현재의 정맥내 수축촉진제 (도부타민, 도파민, 밀리논, 레보시멘단)는 유해 사례, 예컨대 부정맥 및 증가된 장기 사망률과 그의 연관성에도 불구하고, 급성 상황에서 사용된다. 이들 부담은 만성 심부전에서 그의 적용을 방해해 왔다. 디곡신은 경구 수축촉진제이지만, 좁은 치료 지수, 증가된 부정맥유발 잠재력 및 신기능부전에서의 금기에 의해 제한된다.
부정맥유발 또는 사망률 부담 없이 심장 수축성을 증가시키는 심부전에 대한 요법이 ADHF를 위해 긴급히 필요하지만, 이는 만성 심부전에서 충족되지 않은 막대한 의학적 필요성도 다룰 수 있다.
아펠린은 아펠린 수용체, 안지오텐신-유사-1 수용체, 안지오텐신 II-유사-1 수용체 등으로서도 지칭되는, 이전의 고아 G-단백질-커플링 수용체 (GPCR)인 APJ에 대한 내인성 리간드이다. 아펠린/APJ 경로는 심혈관계에서 광범위하게 발현되고 아펠린은 전임상 모델에서 주요한 유익한 심혈관 효과를 나타내었다. 인간에서의 급성 아펠린 투여는 말초 및 관상동맥 혈관확장을 야기하고, 심장 박출량을 증가시킨다 (문헌 [Circulation. 2010; 121:1818-1827]). 그 결과, APJ 효능작용은 심부전을 앓고 있는 환자에 대한 중요한 치료 표적으로서 부상하고 있다. 아펠린 수용체 APJ의 활성화는 현행 요법의 부담 없이, 심장 수축성을 증가시키고 심장보호를 제공하는 것으로 여겨진다. 그러나, 천연 아펠린은 생체내에서 매우 짧은 반감기 및 작용 지속기간을 나타낸다.
따라서, 아펠린의 기능을 모방하지만, 증가된 반감기를 갖고 자연 발생 아펠린과 동등하거나 또는 그보다 큰 생물활성을 나타내는 펩티드 및 폴리펩티드를 확인하는 것이 바람직하다. 또한, 증가된 입체형태 제한, 즉 펩티드 및 폴리펩티드가 추가의 폴딩 또는 재배치를 필요로 하지 않고 그의 수용체 및/또는 다른 경로 표적과 상호작용할 수 있도록 활성 입체형태 상태를 달성하고 유지하는 능력을 나타내는 아펠린 유사체 펩티드 및 폴리펩티드를 확인하는 것이 바람직하다. 이러한 펩티드 및 폴리펩티드 유사체의 사용, 상기 유사체를 포함하는 조성물, 및 상기 조성물을 제조하고 질환, 예컨대 심혈관 질환을 치료하기 위한 제약 활성제로서 사용하는 방법에 대한 필요성이 존재한다.
발명의 개요
본 발명의 목적은 APJ 효능제로서 유용하고, 또한 야생형 아펠린 및 다른 공지된 아펠린 유사체에 비한 하기 개선: 증가된 반감기; 투여 및/또는 가용화 시의 분해에 대한 보다 큰 면역; 및 증가된 입체형태 제한 (모두 야생형 아펠린과 동일하거나 또는 그보다 큰 생물학적 활성을 나타내는 것을 동반함) 중 적어도 하나를 보유하는 신규 펩티드 및 폴리펩티드를 제공하는 것이다. 따라서, 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드는 심혈관 질환, 예컨대 심부전, 심부전과 연관된 장애 및 상태, 및 APJ 수용체 활성의 활성화에 반응성인 장애 및 상태의 치료 또는 예방에 특히 유용하다.
한 실시양태에서, 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드는 심부전과 연관된 장애 또는 상태, 또는 APJ 수용체 활성의 활성화 (또는 효능작용)에 반응성인 장애의 치료 또는 예방에 특히 유용하다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드는 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다(Brugada) 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증의 치료에 유용하다.
본 발명은, 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 및 폴리펩티드, 제약 조성물, 및 그의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다. 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드의 예는 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 뿐만 아니라 실험 실시예를 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 구체적으로 나열된 임의의 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함한다.
따라서, 본 발명은 하기 화학식 I'의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드를 제공한다.
<화학식 I'>
Figure 112014079668487-pct00001
상기 식에서,
X1은 폴리펩티드의 N-말단이고, 부재하거나 또는 pE, R, Isn, Q, A, K 및 5-아미노-발레르산으로부터 선택되고;
X2는 R, A, r, N-Me-R, K, H, hF, hK, F, E 또는 Orn이고;
X3은 P, A, a, p, 4-PhP, K, D, 피페콜산 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X4는 R, A, r, N-Me-R, F, E 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X5는 L, Cha, A, D-L, N-Me-L, K, D, 4-PhF 또는 F이고;
X6 및 X12는 독립적으로 C, c, hC, D-hC, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄는 공유 결합을 통해 함께 연결되어 모노술피드 (-S-), 디술피드 (-S-S-) 또는 아미드 결합 (-NHC(O)- 또는 -C(O)-NH-) 또는 화학식 -S-CH2-C(=Z)-CH2-S-의 연결을 형성하고; 여기서 Z는 O, N-O-CH2C(O)-L1-R1 또는 N-NH-CH2C(O)-L1-R1이고, 여기서 R1은 지방산 유도체이고, L1은 1개 이상의 아미노산 및/또는 1개 이상의 -NH-C2 -6-알킬렌-NH- 단위를 함유하는 링커이거나;
또는 대안적으로 X6은 K이고, X13은 부재하고, X12는 F 또는 f이고, 여기서 X12의 C-말단은 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하고;
X7은 H, h, A, N-Me-A, a, Aib, K, Nal, F, P, Dap, N, E 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 위치 X3에서의 시스테인의 측쇄 또는 위치 X4에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X8은 K, k, F, f, A, hF, N-Me-R, E 또는 4-아미노-Isn이고;
X9는 G, N-Me-G, A, D, L, R 또는 Aib이고;
X10은 P, A, p, 4-PhP 또는 피페콜산이고,
X11은 M, D-Nle, Nle, N-Me-Nle, M(O), A, F, Y, L, K, 3-PyA 또는 Cha이고;
X13은 C-말단이고, 부재하거나 또는 F, f, N-Me-F, Nal, D-Nal, 3-Br-F, (S)-β-3-F, I, A, a, K, Dap, H 및 E로부터 선택되고;
여기서,
Nle는 L-노르류신이고;
D-hC는 D-호모시스테인이고;
hC는 L-호모시스테인이고;
hF는 L-호모페닐알라닌이고;
hK는 L-리신이고;
Nal은 L-나파탈린이고;
Orn은 오르니틴이고;
Aib는 α-아미노이소부티르산이고;
Dab는 (S)-디아미노부티르산이고;
Dap는 (S)-2,3-디아미노프로피온산이고;
M(O)는 메티오닌 술폰이고;
Cha는 (S)-β-시클로헥실알라닌이고;
4-아미노-Isn은 4-아미노피페리딘-4-카르복실산이고;
Isn은 이소니페코티노일이고;
pE는 L-피로글루탐산이고;
3-PyA는 3-(3-피리딜)-L-알라닌이고;
4-PhF는 4-페닐-L-페닐알라닌이고;
N-말단 및 C-말단은 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성하고;
K, Orn, Dab, Dap, hK 또는 4-아미노-Isn의 측쇄에서의 아미노 기는 아미드 결합을 통해 친지성 기에 임의로 연결된다.
본원에 추가로 설명된 바와 같은, 당업계에서 인식되는 3문자 또는 1문자 약어는 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드를 구성하는 아미노산 잔기를 나타내는데 사용된다. "D"로 시작될 때를 제외하고, 아미노산은 L-아미노산이다. 1문자 약어가 대문자일 때, 그것은 L-아미노산을 지칭한다. 1문자 약어가 소문자일 때, 그것은 D-아미노산을 지칭한다.
화학식 I', 또는 본원에 기재된 그의 관련 화학식, 예를 들어 화학식 I, II 내지 IX의 상기 나열된 아미노산 잔기 중 임의의 것은 보존적 방식으로 치환될 수 있는데, 단 본 발명의 펩티드 또는 폴리펩티드는 여전히 기능적 활성 및 구조적 특성 (예를 들어, 반감기 연장, 분해로부터의 보호, 입체형태 제한)을 유지한다. 허용가능한 보존적 아미노산 치환의 원칙 및 예는 본원에 추가로 설명된다.
본 발명의 폴리펩티드는 APJ 수용체를 활성화시킴으로써, 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증의 치료에서 유용성을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 급성 비대상성 심부전 (ADHF)의 치료에 유용하다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 유효량의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 장애 또는 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, 상기 대상체에서 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 장애 또는 질환을 치료하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 장애 또는 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 1종 이상의 치료 활성제의 제약 조합물을 포함하는 조합물에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 APJ 수용체의 활성화를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 APJ 수용체를 활성화시키는 방법에 관한 것이다.
본 명세서를 해석하려는 목적을 위해, 달리 명시되지 않는 한 하기 정의가 적용될 것이고, 적절한 경우에는 단수형으로 사용된 용어는 또한 복수형을 포함할 것이고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다.
본원에 사용된 바와 같은, "APJ 수용체의 조절에 반응성인 장애 또는 질환", "APJ의 조절에 반응성인 장애 및 상태", "APJ 수용체 활성의 조절에 반응성인 장애 및 상태", "APJ 수용체 활성의 활성화 (또는 효능작용)에 반응성인 장애" 및 유사 용어는 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "APJ 수용체 활성의 활성화" 또는 "APJ 수용체의 활성화"는 APJ 수용체 활성에서의 증가를 지칭한다. APJ 수용체 활성의 활성화는 또한, 예를 들어 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드의 투여에 의해 APJ 수용체의 "효능작용"으로서 지칭된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "폴리펩티드" 및 "펩티드"는 함께 연결된 2개 이상의 아미노산을 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 하기 표 1에 제시된 드물거나 또는 비천연인 아미노산에 대한 약어를 제외하고는, 당업계에서 인식되는 3문자 또는 1문자 약어를 사용하여 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드를 구성하는 아미노산 잔기를 나타낸다. "D"로 시작될 때를 제외하고, 아미노산은 L-아미노산이다. 1문자 약어가 대문자일 때, 그것은 L-아미노산을 지칭한다. 1문자 약어가 소문자일 때, 그것은 D-아미노산을 지칭한다. 군 또는 문자열 또는 아미노산 약어를 사용하여 펩티드를 나타낸다. 펩티드는 왼쪽에 N-말단을 갖도록 표시되고, 서열은 N-말단에서 C-말단으로 기재된다.
본 발명의 펩티드는 비천연 아미노산 (즉, 자연에서 발생하지 않는 화합물)을 함유하고, 당업계에 공지된 바와 같은 다른 아미노산 유사체가 대안적으로 사용될 수 있다.
특정 비천연 아미노산은 문헌 [Deiters et al., J Am Chem Soc 125:11782-11783, 2003; Wang and Schultz, Science 301:964-967, 2003; Wang et al., Science 292:498-500, 2001; Zhang et al., Science 303:371-373, 2004] 또는 미국 특허 번호 7,083,970에 기재된 기술에 의해 도입될 수 있다. 간략하게, 이들 발현 시스템의 일부는 넌센스 코돈, 예컨대 앰버 태그를 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 오픈 리딩 프레임 내로 도입하기 위한 부위-지정 돌연변이유발을 포함한다. 이어서, 도입된 넌센스 코돈에 특이적이며 선택된 비천연 아미노산이 충전된 tRNA를 이용할 수 있는 숙주 내로 이러한 발현 벡터를 도입한다. 본 발명의 폴리펩티드에 모이어티를 접합시키는 목적에 유익한 특정한 비천연 아미노산은 아세틸렌 및 아지도 측쇄를 갖는 것을 포함한다.
본 발명의 펩티드에서 천연 또는 비천연 아미노산 중 1개 이상은, 예를 들어 화학 물질, 예컨대 탄수화물 기, 포스페이트 기, 파르네실 기, 이소파르네실 기, 지방산 기 (CqHq +1C(O)2H, 여기서 q는 3 내지 20), 접합, 관능화 또는 다른 변형을 위한 링커 등의 첨가에 의해 변형될 수 있다. 상기 변형은 부위 특이적 또는 비-부위-특이적 방식으로 이루어질 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 펩티드의 변형은 보다 안정한 펩티드 (예를 들어, 보다 긴 생체내 반감기를 나타내는 것)를 생성한다. 이들 변형은 추가의 D-아미노산 등의 혼입을 포함할 수 있다. 변형은 펩티드의 목적한 생물학적 활성을 실질적으로 간섭하지 않아야 하지만, 이러한 변형은 펩티드에 목적한 특성, 예를 들어 증진된 생물학적 활성을 부여할 수 있다.
상기 변형은 야생형 단백질에 비해 본 발명의 단백질의 생물학적 특성을 증진시키고, 뿐만 아니라 일부 경우에는, 예를 들어 표지 및 단백질 반감기 연장제에 대한 부착 지점으로서 작용하고, 고체 지지체의 표면에 상기 변이체를 부착시키는 목적을 위해 작용한다.
특정 실시양태에서, 이러한 변형, 예를 들어 부위-특이적 변형은, 예를 들어 본 발명의 폴리펩티드 및/또는 펩티드의 반감기를 연장시키거나 또는 달리 생물학적 특성을 개선시키는 목적을 위해 상기 폴리펩티드 및/또는 펩티드에 접합체, 예를 들어 PEG 기를 부착하는데 사용된다. 상기 기술은 본원에 추가로 기재되어 있다.
다른 실시양태에서, 이러한 변형, 예를 들어 부위-특이적 변형은 본 발명의 폴리펩티드의 반감기를 연장시키는 다른 중합체 및 소분자 및 재조합 단백질 서열을 부착하는데 사용된다. 이러한 한 실시양태는 폴리펩티드 및/또는 펩티드에 대한 지방산 또는 특정 알부민 결합 화합물의 부착을 포함한다. 다른 실시양태에서, 변형은 특정한 아미노산 유형에서 이루어지고, 폴리펩티드 상의 하나 이상의 부위에 부착될 수 있다.
다른 실시양태에서, 이러한 변형, 예를 들어 부위-특이적 변형은 야생형 및/또는 변이 다량체, 예를 들어 이량체 (동종이량체 또는 이종이량체) 또는 삼량체 또는 사량체의 생성을 위한 부착 수단으로서 사용된다. 이들 다량체 단백질 분자는 아미노-말단에서 또는 카르복시-말단에서 다른 단백질, 예컨대 Fc, 인간 혈청 알부민 (HSA) 등에 부착되거나 또는 융합된 PEG, 당 및/또는 PEG-콜레스테롤 접합체와 같은 기를 추가로 가질 수 있다.
다른 실시양태에서, 이러한 부위-특이적 변형은 부위-특이적으로 혼입된 피롤리신 또는 피롤리신 유사체 또는 비-자연 발생 아미노산 (파라-아세틸-Phe, 파라-아지도-Phe)의 위치가 단백질, 폴리펩티드 및/또는 펩티드의 고체 지지체 표면 상에 대한 제어된 배향 및 부착을 허용하는 것인 상기 단백질, 폴리펩티드 및/또는 펩티드를 생산하는데 사용되거나 또는 PEG, 당 및/또는 PEG-콜레스테롤 접합체와 같은 기가 부착되도록 하는데 사용된다.
다른 실시양태에서, 이러한 부위-특이적 변형은 단백질, 폴리펩티드 및/또는 펩티드를 부위-특이적으로 가교결합시켜 이종이량체 및 이종삼량체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 헤테로-올리고머를 형성하는데 사용된다. 다른 실시양태에서, 이러한 부위-특이적 변형은 단백질, 폴리펩티드 및/또는 펩티드를 부위-특이적으로 가교결합시켜 단백질-단백질 접합체, 단백질-폴리펩티드 접합체, 단백질-펩티드 접합체, 폴리펩티드-폴리펩티드 접합체, 폴리펩티드-펩티드 접합체 또는 펩티드-펩티드 접합체를 형성하는데 사용된다. 다른 실시양태에서, 부위 특이적 변형은 하나 초과의 분자의 유형이 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드의 단일 부위에 부착되는 것을 허용하는 분지화 지점을 포함할 수 있다.
다른 실시양태에서, 본원에 나열된 변형은 비-부위-특이적 방식으로 이루어져, 본 발명의 단백질-단백질 접합체, 단백질-폴리펩티드 접합체, 단백질-펩티드 접합체, 폴리펩티드-폴리펩티드 접합체, 폴리펩티드-펩티드 접합체 또는 펩티드-펩티드 접합체를 생성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 항체, 예컨대 본원에 개시된 바와 같은 펩티드 또는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체에 결합된 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 펩티드 또는 폴리펩티드를 적어도 하나 포함하는 복합체를 제공한다.
당업자는 다양한 아미노산 치환, 예를 들어 보존적 아미노산 치환이 그의 활성을 반드시 감소시키지 않고도, 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드의 서열에서 이루어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 본원에 사용된 바와 같은, "그의 치환기로서 통상적으로 사용된 아미노산"은 보존적 치환 (즉, 비슷한 화학적 특징의 아미노산으로의 치환)을 포함한다. 보존적 치환의 목적을 위해, 비-극성 (소수성) 아미노산은 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 글리신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판 및 메티오닌을 포함한다. 극성 (친수성), 중성 아미노산은 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴 및 글루타민을 포함한다. 양으로 하전된 (염기성) 아미노산은 아르기닌, 리신 및 히스티딘을 포함한다. 음으로 하전된 (산성) 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함한다. 아미노산 치환의 예는 L-아미노산으로 그의 상응하는 D-아미노산을 치환하는 것, 시스테인으로 호모시스테인 또는 티올-함유 측쇄를 갖는 다른 비천연 아미노산을 치환하는 것, 리신으로 호모리신, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 오르니틴 또는 아미노 함유 측쇄를 갖는 다른 비천연 아미노산을 치환하는 것, 또는 알라닌으로 노르발린을 치환하는 것 등을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "아미노산"은 자연 발생 아미노산, 비천연 아미노산, 아미노산 유사체, 및 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 모방체 (이들 모두는 그 구조가 D 및 L 입체이성질체 형태를 허용하는 경우 이러한 입체이성질체임)를 지칭한다. 아미노산은 본원에서 그의 명칭, 그의 통상적으로 공지된 3문자 기호, 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회(Biochemical Nomenclature Commission)에 의해 권고된 1-문자 기호에 의해 지칭된다.
용어 "자연 발생"은 자연에서 발견되고 인간에 의해 조작되지 않은 물질을 지칭한다. 유사하게, 본원에 사용된 바와 같은 "비-자연 발생", "비천연" 등은 자연에서 발견되지 않거나 또는 인간에 의해 구조적으로 변형되거나 또는 합성된 물질을 지칭한다. 아미노산과 관련하여 사용되는 경우에, 용어 "자연 발생"은 20개의 통상의 아미노산 (즉, 알라닌 (A 또는 Ala), 시스테인 (C 또는 Cys), 아스파르트산 (D 또는 Asp), 글루탐산 (E 또는 Glu), 페닐알라닌 (F 또는 Phe), 글리신 (G 또는 Gly), 히스티딘 (H 또는 His), 이소류신 (I 또는 Ile), 리신 (K 또는 Lys), 류신 (L 또는 Leu), 메티오닌 (M 또는 Met), 아스파라긴 (N 또는 Asn), 프롤린 (P 또는 Pro), 글루타민 (Q 또는 Gln), 아르기닌 (R 또는 Arg), 세린 (S 또는 Ser), 트레오닌 (T 또는 Thr), 발린 (V 또는 Val), 트립토판 (W 또는 Trp), 및 티로신 (Y 또는 Tyr))을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "비천연 아미노산"은 동일하든지 또는 상이하든지 임의의 유기체로부터의 비변형된 또는 변형된 유전자를 사용하여 임의의 유기체에서 생합성적으로 생성될 수 없는 아미노산 구조를 나타내기 위해 상호교환적으로 의도된다. 상기 용어는 자연 발생 (야생형) 아펠린 단백질 서열 또는 본 발명의 서열에 존재하지 않는 아미노산 잔기를 지칭한다. 이들은 20개의 자연 발생 아미노산, 셀레노시스테인, 피롤리신 (Pyl) 또는 피롤린-카르복시-리신 (Pcl, 예를 들어 PCT 특허 공개공보 WO2010/48582에 기재된 바와 같은 것) 중 하나가 아닌 변형된 아미노산 및/또는 아미노산 유사체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 비천연 아미노산 잔기는 자연 발생 아미노산의 치환에 의해, 및/또는 비천연 아미노산의 자연 발생 (야생형) 아펠린 단백질 서열 또는 본 발명의 서열 내로의 삽입에 의해 도입될 수 있다. 또한, 비천연 아미노산 잔기는 목적 관능기, 예를 들어 관능성 모이어티 (예를 들어, PEG)를 연결하는 능력을 아펠린 분자에 부여하도록 혼입될 수 있다. 아미노산과 관련하여 사용되는 경우에, 기호 "U"는 본원에 사용된 바와 같은 "비천연 아미노산"을 의미할 것이다.
또한, 이러한 "비천연 아미노산"은 단백질 내로의 혼입을 위해 변형된 tRNA 및 변형된 tRNA 신테타제 (RS)를 요구하는 것으로 이해된다. 이들 "선택된" 직교 tRNA/RS 쌍은 슐츠(Schultz) 등에 의해 개발된 선택 방법 또는 무작위 또는 표적화 돌연변이에 의해 생성된다. 예로서, 피롤린-카르복시-리신은 한 유기체로부터 숙주 세포로 전달된 유전자에 의해 생합성적으로 생성된다는 점 및 천연 tRNA 및 tRNA 신테타제 유전자를 사용하여 단백질 내로 혼입된다는 점에서 "천연 아미노산"인 반면, p-아미노페닐알라닌 (문헌 [Generation of a bacterium with a 21 amino acid genetic code, Mehl RA, Anderson JC, Santoro SW, Wang L, Martin AB, King DS, Horn DM, Schultz PG. J Am Chem Soc. 2003 Jan 29;125(4):935-9] 참조)은 생합성적으로 생성될지라도, "선택된" 직교 tRNA/tRNA 신테타제 쌍에 의해 단백질 내로 혼입되기 때문에 "비천연 아미노산"이다.
변형된 코딩된 아미노산은 히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트, O-포스포세린, 아제티딘카르복실산, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, 베타-알라닌, 아미노프로피온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로산, 2-아미노헵탄산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 3급-부틸글리신, 2,4-디아미노이소부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-디아미노프로프리온산, N-에틸글리신, N-메틸글리신, N-에틸아스파라긴, 호모프롤린, 히드록시리신, 알로-히드록시리신, 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린, 이소데스모신, 알로-이소류신, N-메틸알라닌, N-메틸글리신, N-메틸이소류신, N-메틸펜틸글리신, N-메틸발린, 나프트알라닌, 노르발린, 노르류신, 오르니틴, 펜틸글리신, 피페콜산 및 티오프롤린을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 용어 "아미노산"은 또한 특정 유기체 내에서의 대사물이지만 단백질 내로의 혼입을 위한 유전자 코드에 의해 코딩되지 않는 자연 발생 아미노산을 포함한다. 이러한 아미노산은 오르니틴, D-오르니틴 및 D-아르기닌을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "아미노산 유사체"는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 단지 예로서 수소, 카르복실기, 아미노기 및 R 기에 결합된 α-탄소를 갖는 화합물을 지칭한다. 아미노산 유사체는, 가역적으로 또는 비가역적으로 화학적으로 차단되거나, 또는 그의 C-말단 카르복시기, 그의 N-말단 아미노기 및/또는 그의 측쇄 관능기가 화학적으로 변형된 천연 및 비천연 아미노산을 포함한다. 이러한 유사체는 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 술폰, S-(카르복시메틸)-시스테인, S-(카르복시메틸)-시스테인 술폭시드, S-(카르복시메틸)-시스테인 술폰, 아스파르트산-(베타-메틸 에스테르), N-에틸글리신, 알라닌 카르복스아미드, 호모세린, 노르류신 및 메티오닌 메틸 술포늄을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
표 1: 본 발명에 기재된 바와 같은 비천연 아미노산:
Figure 112014079668487-pct00002
Figure 112014079668487-pct00003
Figure 112014079668487-pct00004
Nal은 1-나프트알라닌 및 2-나프트알라닌 둘 다를 지칭하고, 바람직하게는 2-나프트알라닌을 지칭한다.
4-페닐프롤린은 시스 및 트랜스 4-페닐프롤린 둘 다를 지칭하고, 바람직하게는 트랜스-4-페닐프롤린을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "아미드"는 C-말단에서의 카르복실산 기의 아미드 유도체 (예를 들어, -C(O)NH2, -C(O)NH-C1 -6 알킬, C(O)NH-C1 - 2알킬페닐, -C(O)NH-NHBn 또는 -C(O)N(C1-6 알킬)2)를 지칭한다.
용어 "아미드"는 또한 N-말단에서의 아미노 기의 유도체 (예를 들어, -NHC(O)C1-16알킬, -NHC(O)(CH2)nPh (n은 1 내지 6의 정수임), -NHC(O)(CH2)2CO2H, 4-Cl-Ph-(CH2)3C(O)NH-, C11H23C(O)NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)-NH-, C13H27C(O)NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)-NH-; C15H27C(O)NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)NH-, Ph-CH2CH2NHC(O)-NH- 또는 CH3(OCH2CH2)mC(O)NH- (m은 1 내지 12의 정수임)를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "에스테르"는 C-말단에서의 카르복실산 기의 에스테르 유도체 (예를 들어, -COOR) 형태를 지칭하고, 여기서 에스테르의 R은 C1 -6 알킬 기, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸 등, C3 -8 시클로알킬 기, 예컨대 시클로펜틸, 시클로헥실 등, C6 -10 아릴 기, 예컨대 페닐, α-나프틸 등, C6 -10 아릴-C1 -6 알킬 기, 예를 들어 페닐-C1 -2 알킬 기, 예컨대 벤질, 페네틸, 벤즈히드릴 등, 및 α-나프틸-C1 -2 알킬 기, 예컨대 α-나프틸메틸 등을 지칭한다. 경구 투여를 위한 에스테르로서 통상적으로 사용되는 피발로일옥시메틸 에스테르 등을 또한 언급할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드가 C 말단 이외의 위치에서 추가의 카르복실 또는 카르복실레이트 기를 보유하는 경우에, 이러한 기가 아미드화 또는 에스테르화된 이들 폴리펩티드 또한 본 발명의 폴리펩티드의 카테고리에 속한다. 이러한 경우에, 에스테르는, 예를 들어 상기 언급된 C-말단 에스테르와 동일한 종류의 에스테르일 수 있다.
용어 "APJ" ("아펠린 수용체", "안지오텐신-유사-1 수용체", "안지오텐신 II-유사-1 수용체" 등으로서도 지칭됨)는 유전자가 인간에서의 염색체 11의 긴 아암 상에 국재화된, 380개 잔기, 7개 막횡단 도메인, Gi 커플링된 수용체 (NCBI 참조 서열: NP_005152.1, 또한 NCBI 참조 서열: NM_005161에 의해 코딩됨)를 나타낸다. APJ는 축중성 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 게놈 인간 DNA로부터 1993년에 처음 클로닝되었고 (문헌 [O'Dowd et al. Gene, 136:355-60, 1993]), 안지오텐신 II 수용체 유형 1과 유의한 상동성을 공유한다. 그러나, 상기 상동성에도 불구하고, 안지오텐신 II는 APJ에 결합하지 않는다. 수년 동안 고아 상태였지만, 내인성 리간드가 단리되어 아펠린으로 명명되었다 (문헌 [Tatemoto et al., Biochem Biophys Res Commun 251, 471-6 (1998)]).
용어 "아펠린"은 77개 잔기 예비단백질 (NCBI 참조 서열: NP_0059109.3, 또한 NCBI 참조 서열: NM_017413.3에 의해 코딩됨)을 나타내고, 이는 아펠린 펩티드의 생물학적 활성 형태, 예컨대 아펠린-36, 아펠린-17, 아펠린-16, 아펠린-13, 아펠린-12로 프로세싱된다. "아펠린-36"으로서 지칭되는 전장 성숙 펩티드는 36개 아미노산을 포함하지만, 가장 강력한 이소형은 "Pyr-1-아펠린-13 또는 Pyr1-아펠린-13"으로서 지칭되는 아펠린의 13량체 (아펠린-13)의 피로글루타메이트화 형태이다. 다양한 아펠린 형태가, 예를 들어 미국 특허 6,492,324B1에 기재되어 있다.
본 발명의 폴리펩티드:
본 발명의 다양한 실시양태가 본원에 기재되어 있다. 각 실시양태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 추가 실시양태를 제공할 수 있다는 것이 인지될 것이다.
따라서, 실시양태 1에서, 본 발명은 하기 화학식 I'의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드를 제공한다.
<화학식 I'>
Figure 112014079668487-pct00005
상기 식에서,
X1은 폴리펩티드의 N-말단이고, 부재하거나 또는 pE, R, Isn, Q, A, K 및 5-아미노-발레르산으로부터 선택되고;
X2는 R, A, r, N-Me-R, K, H, hF, hK, F, E 또는 Orn이고;
X3은 P, A, a, p, 4-PhP, K, D, 피페콜산 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X4는 R, A, r, N-Me-R, F, E 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X5는 L, Cha, A, D-L, N-Me-L, K, D, 4-PhF 또는 F이고;
X6 및 X12는 독립적으로 C, c, hC, D-hC, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄는 공유 결합을 통해 함께 연결되어 디술피드 또는 아미드 결합을 형성하거나;
또는 대안적으로 X6은 K이고, X13은 부재하고, X12는 F 또는 f이고, 여기서 X12의 C-말단은 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하고;
X7은 H, h, A, N-Me-A, a, Aib, K, Nal, F, P, Dap, N, E 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 위치 X3에서의 시스테인의 측쇄 또는 위치 X4에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X8은 K, k, F, f, A, hF, N-Me-R, E 또는 4-아미노-Isn이고;
X9는 G, N-Me-G, A, D, L, R 또는 Aib이고;
X10은 P, A, p, 4-PhP 또는 피페콜산이고,
X11은 M, D-Nle, Nle, N-Me-Nle, M(O), A, F, Y, L, K, 3-PyA 또는 Cha이고;
X13은 C-말단이고, 부재하거나 또는 F, f, N-Me-F, Nal, D-Nal, 3-Br-F, (S)-β-3-F, I, A, a, K, Dap, H 및 E로부터 선택되고;
여기서,
Nle는 L-노르류신이고;
D-hC는 D-호모시스테인이고;
hC는 L-호모시스테인이고;
hF는 L-호모페닐알라닌이고;
hK는 L-리신이고;
Nal은 L-나파탈린이고;
Orn은 오르니틴이고;
Aib는 α-아미노이소부티르산이고;
Dab는 (S)-디아미노부티르산이고;
Dap는 (S)-2,3-디아미노프로피온산이고;
M(O)는 메티오닌 술폰이고;
Cha는 (S)-β-시클로헥실알라닌이고;
4-아미노-Isn은 4-아미노피페리딘-4-카르복실산이고;
Isn은 이소니페코티노일이고;
pE는 L-피로글루탐산이고;
3-PyA는 3-(3-피리딜)-L-알라닌이고;
4-PhF는 4-페닐-L-페닐알라닌이고;
N-말단 및 C-말단은 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성하고;
K, Orn, Dab, Dap, hK 또는 4-아미노-Isn의 측쇄에서의 아미노 기는 아미드 결합을 통해 친지성 기에 임의로 연결된다.
따라서, 실시양태 2에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드를 제공한다.
<화학식 I>
Figure 112014079668487-pct00006
상기 식에서,
X1은 폴리펩티드의 N-말단이고, 부재하거나 또는 pE, R, Q, A, K, 5-아미노-발레르산 및 Isn으로부터 선택되고;
X2는 R, A, r, N-Me-R, K, H, hF, hK 또는 Orn이고;
X3은 P, A, a, p, 4-PhP, 피페콜산 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X4는 R, A, r, N-Me-R 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X5는 L, Cha, A, D-L, N-Me-L 또는 F이고;
X6 및 X12는 독립적으로 C, c, hC, D-hC, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄는 공유 결합을 통해 함께 연결되거나;
또는 대안적으로 X6은 K이고, X13은 부재하고, X12는 F 또는 f이고, 여기서 X12의 C-말단은 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하고;
X7은 H, h, A, N-Me-A, a, Aib, K, Nal, F, P, Dap, N 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 위치 X3에서의 시스테인의 측쇄 또는 위치 X4에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X8은 K, k, F, f, A, hF, N-Me-R 또는 4-아미노-Isn이고;
X9는 G, N-Me-G 또는 Aib이고;
X10은 P, A, p, 4-PhP 또는 피페콜산이고,
X11은 M, D-Nle, Nle, N-Me-Nle, M(O), A, F, Y, L, K 또는 Cha이고;
X13은 C-말단이고, 부재하거나 또는 F, f, N-Me-F, Nal, D-Nal, 3-Br-F, (S)-β-3-F, I, A, a, K, Dap로부터 선택되고
여기서,
Nle는 L-노르류신이고;
D-hC는 D-호모시스테인이고;
hC는 L-호모시스테인이고;
hF는 L-호모페닐알라닌이고;
hK는 L-리신이고;
Nal은 L-나파탈린이고;
Orn은 오르니틴이고;
Aib는 α-아미노이소부티르산이고;
Dab는 (S)-디아미노부티르산이고;
Dap는 (S)-2,3-디아미노프로피온산이고;
M(O)은 메티오닌 술폰이고;
Cha는 (S)-β-시클로헥실알라닌이고;
4-아미노-Isn은 4-아미노피페리딘-4-카르복실산이고;
Isn은 이소니페코티노일이고;
pE는 L-피로글루탐산이고;
N-말단 및 C-말단은 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성하고;
K, Orn, Dab, Dap, hK 또는 4-아미노-Isn의 측쇄에서의 아미노 기는 아미드 결합을 통해 친지성 기에 의해 임의로 연결된다.
실시양태 1 또는 2의 한 측면에서, 본 발명은 K, Orn, Dab, Dap, hK 또는 4-아미노-Isn의 측쇄에서의 아미노 기가 아미드 결합을 통해 지방산에 임의로 연결되는 것인, 화학식 I 또는 I'의 펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 추가 측면에서, 지방산은 라우로일, 미리스토일 또는 팔미토일로부터 선택되고, 여기서 라우로일은 C11H23C(O)-이고, 미리스토일은 C13H27C(O)-이고, 팔미토일은 C15H31C(O)-이다. 대안적으로, 지방산 (예컨대, 라우로일, 미리스토일 또는 팔미토일)의 말단 CH3 모이어티는 그의 상응하는 카르복실산으로 산화될 수 있다.
실시양태 1 또는 2의 한 측면에서, 본 발명은 K, Orn, Dab, Dap, hK 또는 4-아미노-Isn의 측쇄에서의 아미노 기가 아미드 결합을 통해 친지성 기에 임의로 연결되고, 여기서 친지성 기가 상기에 기재된 바와 같은 지방산, 및 라우로일(O2Oc), 미리스토일(O2Oc) 및 팔미토일(O2Oc)로부터 선택되고, 여기서 라우로일(O2Oc)가 C11H23C(O)NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2C(O)-이고; 미리스토일(O2Oc)가 C13H27C(O)NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2C(O)-이고; 팔미토일(O2Oc)가 C15H31C(O)NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2C(O)-인, 화학식 I 또는 I'의 펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 대안적으로, 지방산 (예컨대, 라우로일, 미리스토일 또는 팔미토일)의 말단 CH3 모이어티는 그의 상응하는 카르복실산으로 산화될 수 있다.
실시양태 3에서, 본 발명은 하기 화학식 I 또는 I'의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
<화학식 I>
Figure 112014079668487-pct00007
상기 식에서,
X1은 폴리펩티드의 N-말단이고, 부재하거나 또는 pE, R, Q, A, K(팔미토일), K(미리스토일), K(라우로일), 5-아미노-발레르산 및 Isn으로부터 선택되고;
X2는 R, A, r, N-Me-R, K, H, hF, hK 또는 Orn이고;
X3은 P, A, a, p, 4-PhP, 피페콜산 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X4는 R, A, r, N-Me-R 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X5는 L, Cha, A, D-L, N-Me-L 또는 F이고;
X6 및 X12는 독립적으로 C, c, hC, D-hC, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄는 공유 결합을 통해 함께 연결되거나;
또는 대안적으로 X6은 K이고, X13은 부재하고, X12는 F 또는 f이고, 여기서 X12의 C-말단은 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하고;
X7은 H, h, A, N-Me-A, a, Aib, K(라우로일), K(팔미토일), Nal, F, P, Dap, N 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 위치 X3에서의 시스테인의 측쇄 또는 위치 X4에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X8은 K, k, F, f, A, hF, N-Me-R 또는 4-아미노-Isn이고;
X9는 G, N-Me-G 또는 Aib이고;
X10은 P, A, p, 4-PhP 또는 피페콜산이고,
X11은 M, D-Nle, Nle, N-Me-Nle, M(O), A, F, Y, L, K(팔미토일) 또는 Cha이고;
X13은 C-말단이고, 부재하거나 또는 F, f, N-Me-F, Nal, D-Nal, 3-Br-F, (S)-β-3-F, I, A, a, K(라우로일), K(미리스토일), K(팔미토일), K(O2Oc-팔미토일), Dap(팔미토일)로부터 선택되고;
여기서,
K(라우로일)은 N-ε-라우로일-L-리신이고;
K(팔미토일)은 N-ε-팔미토일-L-리신이고;
K(미리스토일)은 N-ε-미리스토일-L-리신이고;
K(O2Oc-팔미토일)은 N-ε-(O2Oc-팔미토일)-L-리신이고; 팔미토일(O2Oc)는 C15H31C(O)NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)-이고;
Nle는 L-노르류신이고;
D-hC는 D-호모시스테인이고
hC는 L-호모시스테인이고;
hF는 L-호모페닐알라닌이고;
hK는 L-리신이고;
Nal은 L-나파탈린이고;
Orn은 오르니틴이고;
Aib는 α-아미노이소부티르산이고;
Dab는 (S)-디아미노부티르산이고;
Dap는 (S)-2,3-디아미노프로피온산이고;
M(O)은 메티오닌 술폰이고;
Cha는 (S)-β-시클로헥실알라닌이고;
4-아미노-Isn은 4-아미노피페리딘-4-카르복실산이고;
Isn은 이소니페코티노일이고;
pE는 L-피로글루탐산이고;
N-말단 및 C-말단은 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성한다.
실시양태 4에서, 본 발명은 하기 화학식 II (서열식별번호: 1)를 갖는, 실시양태 1, 2 또는 3에 따른 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드에 관한 것이다.
<화학식 II>
Figure 112014079668487-pct00008
상기 식에서,
X1은 부재하거나, pE, R, Q 또는 Isn이고;
X5는 L 또는 Cha이고;
X7은 H, Aib, F, K(라우로일) 또는 K(팔미토일)이고;
X8은 K, F 또는 4-아미노-Isn이고;
X9는 G 또는 Aib이고;
X11은 Nle 또는 Cha이고;
X13은 부재하거나, 또는 F, f, K(라우로일), K(팔미토일)이고;
X6 및 X12는 독립적으로 C, c, hC, D-hC, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄는 공유 결합을 통해 함께 연결되거나; 또는 대안적으로 X6은 K이고, X13은 부재하고, X12는 F 또는 f이고, 여기서 X12의 C-말단은 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하고;
N-말단 및 C-말단은 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성한다.
실시양태 5에서, 본 발명은
X1이 부재하거나, pE, R, Q 또는 Isn이고;
X5가 L 또는 Cha이고;
X7이 H, Aib, F, K(라우로일) 또는 K(팔미토일)이고;
X8이 K, F 또는 4-아미노-Isn이고;
X9가 G 또는 Aib이고;
X11이 Nle 또는 Cha이고;
X13이 부재하거나, 또는 F, f, K(라우로일), K(팔미토일)이고;
X6 및 X12가 독립적으로 C, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 공유 결합을 통해 함께 연결되거나; 또는 대안적으로 X6이 K이고, X13이 부재하고, X12가 F 또는 f이고, 여기서 X12의 C-말단이 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하고;
N-말단 및 C-말단이 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성하는 것인, 실시양태 4에 따른 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드에 관한 것이다.
실시양태 4의 추가 측면인 실시양태 6에서, 본 발명은
X1이 부재하거나, pE, R, Q 또는 Isn이고;
X5가 L 또는 Cha이고;
X7이 H, Aib, F, K(라우로일) 또는 K(팔미토일)이고;
X8이 K, F 또는 4-아미노-Isn이고;
X9가 G 또는 Aib이고;
X11이 Nle 또는 Cha이고;
X13이 부재하거나, 또는 F, f, K(라우로일), K(팔미토일)이고;
X6 및 X12가 독립적으로 C, c, hC, D-hC, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 공유 결합을 통해 함께 연결되고; N-말단 및 C-말단이 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성하는 것인, 화학식 II의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드에 관한 것이다.
이전 실시양태 중 어느 하나, 보다 구체적으로 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나의 추가 측면에서, 본 발명은 X6 및 X12가 독립적으로 C, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 공유 결합을 통해 함께 연결되는 것인, 화학식 I, I' 또는 II의 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드에 관한 것이다.
실시양태 7에서, 본 발명은 X6 및 X12가 독립적으로 K, Orn, Dab, E 및 D로부터 선택되고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 함께 아미드 결합을 형성하는 것인, 이전 실시양태 중 어느 하나, 보다 구체적으로 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 화학식 I, I' 또는 II의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 펩티드 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 추가 측면에서, X6은 K, Orn 또는 Dab이고, X12는 E 또는 D이고, X6 및 X12의 측쇄는 아미드 결합을 형성한다. 이러한 실시양태의 또 다른 측면에서, X6은 K이고, X12는 E 또는 D이다.
실시양태 8에서, 본 발명은 X6 및 X12가 독립적으로 C, c, D-hC 또는 hC이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 함께 디술피드 결합을 형성하는 것인, 이전 실시양태 중 어느 하나, 보다 구체적으로 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 화학식 I, I' 또는 II의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 펩티드 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 추가 측면에서, X6 및 X12는 C이다.
실시양태 8A에서, 본 발명은 X6 및 X12가 독립적으로 C, c, D-hC 또는 hC이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 함께 모노술피드 (-S-) 결합을 형성하는 것인, 이전 실시양태 중 어느 하나, 보다 구체적으로 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 화학식 I, I' 또는 II의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 펩티드 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 추가 측면에서, X6 및 X12는 C이다.
실시양태 8B에서, 본 발명은 X6 및 X12가 독립적으로 C, c, D-hC 또는 hC이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 함께 화학식 -S-CH2-C(=Z)-CH2-S-의 연결 모이어티를 형성하고; 여기서 =Z가 =O, =N-O-CH2C(O)-L1-R1 또는 =N-NH-CH2C(O)-L1-R1이고, 여기서 R1이 지방산 유도체이고, L1이 1개 이상의 아미노산 및/또는 1개 이상의 -NH-C2-6-알킬렌-NH- 단위를 함유하는 링커인, 이전 실시양태 중 어느 하나, 보다 구체적으로 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 화학식 I, I' 또는 II의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 펩티드 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 추가 측면에서, X6 및 X12는 C이다.
L1은 에스테르 또는 아미드 결합을 통해 폴리펩티드에 지방산 유도체를 연결하는 적합한 유기 링커이다. 전형적으로, 링커는 1개 이상의 아미노산 모이어티, 예컨대 예를 들어 (O2Oc) 단위 또는 글루탐산을 함유하거나, 또는 -NH-C2 - 6알킬렌-NH- 디아미노 단위 또는 그의 조합을 함유한다. R1은 폴리펩티드의 반감기를 증가시키기 위해 부가될 수 있는 특성-변형 기, 예컨대 지방산 유도체이다. 이러한 실시양태의 한 측면에서, R1은 화학식 CqHq +1C(O)2H의 지방산이고, 여기서 q는 3 내지 20이다. 임의로, 말단 CH3 단위는 그의 상응하는 카르복실산으로 산화될 수 있다.
한 특정한 실시양태에서, -L1-R1은 하기 화학식을 갖는다.
Figure 112014079668487-pct00009
q는 3 내지 20의 정수이다. 바람직하게는, q는 12 내지 18의 정수이다.
X6 및 X12가 독립적으로 C, c, D-hC 또는 hC이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄가 함께 화학식 -S-CH2-C(=Z)-CH2-S-의 연결 모이어티를 형성하고; 여기서 =Z가 =O, =N-O-CH2C(O)-L1-R1 또는 =N-NH-CH2C(O)-L1-R1인, 화학식 I, I' 또는 II의 펩티드 또는 폴리펩티드는 하기 반응식 1에 따라 합성될 수 있다.
<반응식 1>
Figure 112014079668487-pct00010
(1A)에서의 폴리펩티드 디술피드 결합의 환원에 이어서 2-친전자성 화합물 (1B)와의 친핵성 반응에 의해 폴리펩티드 (1C)를 형성한다. 폴리펩티드 (1C)의 케톤 관능기를 옥시아민 또는 히드라진과 용이하게 축합시켜 폴리펩티드 1D를 생성한다.
실시양태 9에서, 본 발명의 특정 폴리펩티드는 하기 화학식 III (서열식별번호: 2)을 갖는, 실시양태 1 내지 6 및 8 중 어느 하나에 따른 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염을 포함한다.
<화학식 III>
Figure 112014079668487-pct00011
실시양태 9A에서, 본 발명은 위치 6 및 12에서의 2개의 시스테인이 디술피드 결합 (-S-S-), 모노술피드 결합 (-S-) 또는 화학식 -S-CH2-C(=Z)-CH2-S-의 연결을 형성하고, 여기서 Z가 상기에 정의된 바와 같은 것인, 화학식 III의 펩티드 및 폴리펩티드에 관한 것이다. 실시양태 9 또는 9A의 추가 측면에서, 본 발명은 위치 6 및 12에서의 2개의 시스테인이 디술피드 결합 (-S-S-)을 형성하는 것인, 화학식 III의 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함한다.
실시양태 10에서, 본 발명의 특정 펩티드 및 폴리펩티드는 하기 화학식 IV (서열식별번호: 3)를 갖는 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나에 따른 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염을 포함한다.
<화학식 IV>
Figure 112014079668487-pct00012
실시양태 11에서, 본 발명의 특정 폴리펩티드는 하기 화학식 V (서열식별번호: 4)를 갖는, 실시양태 1 내지 6 및 8 내지 10 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염을 포함한다.
<화학식 V>
Figure 112014079668487-pct00013
실시양태 11A에서, 본 발명은 위치 6 및 12에서의 2개의 시스테인이 디술피드 결합 (-S-S-), 모노술피드 결합 (-S-) 또는 화학식 -S-CH2-C(=Z)-CH2-S-의 연결을 형성하고, 여기서 Z가 상기에 정의된 바와 같은 것인, 화학식 V의 펩티드 및 폴리펩티드에 관한 것이다. 실시양태 11 또는 11A의 추가 측면에서, 본 발명은 위치 6 및 12에서의 2개의 시스테인이 디술피드 결합 (-S-S-)을 형성하는 것인, 화학식 V의 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함한다.
실시양태 12에서, 본 발명은 X3이 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄가 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하는 것인, (실시양태 1, 2 또는 3에 따른) 화학식 I 또는 I'의 비시클릭 펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 실시양태는 하기 화학식 VI (서열식별번호: 5)의 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 의해 나타낸다.
<화학식 VI>
Figure 112014079668487-pct00014
실시양태 13에서, 본 발명은 X4가 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄가 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하는 것인, (실시양태 1, 2 또는 3에 따른) 화학식 I 또는 I'의 비시클릭 펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 실시양태는 하기 화학식 VII (서열식별번호: 6)의 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 의해 나타낸다.
<화학식 VII>
Figure 112014079668487-pct00015
실시양태 14에서, 본 발명은 N-말단 및 C-말단이 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성하는 것인, 실시양태 1 내지 11 중 어느 하나에 따른 화학식 I 내지 V 중 어느 하나의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 실시양태는 하기 화학식 VIII을 갖는 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 염에 의해 나타낸다.
<화학식 VIII>
Figure 112014079668487-pct00016
상기 식에서, L은 (G)r이고, G는 글리신이고, r은 1, 2, 3 또는 4이다.
실시양태 14의 추가 측면인 실시양태 15에서, 본 발명은 X1이 Q이고, X13이 F이고, r이 2인, 화학식 VIII의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 그의 에스테르, 아미드 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 16에서, 본 발명은 X6이 K이고, X13이 부재하고, X12가 F 또는f이고, 여기서 X12의 C-말단이 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하는 것인, 실시양태 1, 2 또는 3에 따른 화학식 I 또는 I'에 따른 펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 실시양태는 하기 화학식 IX의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 에스테르, 아미드 또는 염에 의해 나타낸다.
<화학식 IX>
Figure 112014079668487-pct00017
화학식 I', 또는 본원에 기재된 그의 관련 화학식 및 모든 실시양태, 예를 들어 화학식 I, II 내지 IX의 하기 또는 상기 나열된 아미노산 잔기 중 임의의 것은 보존적 방식으로 치환될 수 있는데, 단 본 발명의 펩티드 또는 폴리펩티드는 여전히 기능적 활성 및 구조적 특성 (예를 들어, 반감기 연장, 분해로부터의 보호, 입체형태 제한)을 유지한다. 허용가능한 보존적 아미노산 치환의 원칙 및 예는 본원에 추가로 설명된다.
하기 실시양태는 독립적으로, 집합적으로, 또는 임의의 조합 또는 하위-조합으로 사용될 수 있다.
실시양태 17에서, 본 발명은 X1이 pE인, 화학식 I', I 내지 VII 및 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 13 및 16 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 18에서, 본 발명은 X1이 부재하는 것인, 화학식 I 내지 VII 및 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 13 및 16 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 한 측면에서, 펩티드의 N-말단은 아미드이다. 실시양태 18의 추가 측면인 실시양태 19에서, 본 발명은 X1이 부재하고, N-말단이 화학식 -NHR의 아미드이고, R이 CH3C(O)-, CH3-(O-CH2CH2)m-C(O)-, 팔미토일(O2Oc)p, 미리스토일(O2Oc)p, 라우로일(O2Oc)p 또는 Ph-CH2CH2NHC(O)-, 아세틸, 벤조일, 페나실, 숙시닐, 옥타노일, 4-페닐부타노일, 4-Cl-Ph-(CH2)3C(O)- 또는 Ph-CH2CH2NHC(O)-이고; 여기서
p가 1 내지 4의 정수이고;
m이 1 내지 12의 정수이고;
라우로일(O2Oc)p가 C11H23C(O)[NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)]p-이고;
미리스토일(O2Oc)p가 C13H27C(O)[NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)]p-이고;
팔미토일(O2Oc)p가 C15H31C(O)[NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-C(O)]p-인, 화학식 I 내지 VII 및 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중임의의 것에 따른 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 한 특정한 측면에서, R은 아세틸, 벤조일, 페나실, 숙시닐, 옥타노일, 4-페닐부타노일, 4-Cl-Ph-(CH2)3C(O)- 또는 Ph-CH2CH2NHC(O)-이다.
실시양태 20에서, 본 발명은 N-말단이 화학식 NHR1의 아미드이고, 여기서 R1이 CH3C(O)-, CH3-(O-CH2CH2)m-C(O)-, 팔미토일(O2Oc), 미리스토일(O2Oc), 라우로일(O2Oc) 또는 Ph-CH2CH2NHC(O)-이고; 여기서 m, 라우로일(O2Oc), 미리스토일(O2Oc)및 팔미토일(O2Oc)가 상기에 정의된 것인, 화학식 I 내지 VII 및 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 13 및 16 중 어느 하나에 따른) 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 21에서, 본 발명은 X13이 F인, 화학식 I 내지 VII 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 13 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 22에서, 본 발명은 X13이 부재하는 것인, 화학식 I 내지 VII 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 13 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 실시양태 22의 한 측면인 실시양태 23에서, C-말단은 아미드이다. 실시양태 23의 추가 측면인 실시양태 24에서, 본 발명은 C-말단이 화학식 -C(O)R2의 아미드이고, R2가 -NH2, -NH-Me, -NH-NHBn 또는 -NH-(CH2)2-Ph인, 화학식 I 내지 VII 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 실시양태 23의 바람직한 측면에서, 본 발명은 C-말단이 화학식 -C(O)R2의 아미드이고, R2가 -NH-(CH2)2-Ph인, 화학식 I 내지 VII 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 25에서, 본 발명은 X5가 L인, 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 25 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 26에서, 본 발명은 X7이 H인, 화학식 I 내지 V, VIII 및 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 11 및 14 내지 25 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 27에서, 본 발명은 X8이 K 또는 F인, 화학식 I 내지 III 및 VI 내지 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 9 및 12 내지 26 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다. 이러한 실시양태의 추가 측면에서, X8은 K이다.
실시양태 28에서, 본 발명은 X9가 G인, 화학식 I 내지 III 및 VI 내지 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 9 및 12 내지 27 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
실시양태 29에서, 본 발명은 X11이 Nle인, 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나, 또는 상기에 기재된 임의의 다른 부류 및 하위부류 중 임의의 것에 따른 (즉, 실시양태 1 내지 28 중 어느 하나에 따른) 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염에 관한 것이다.
따라서, 실시양태 30에서, 본 발명은 하기 화학식 I'의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염; 또는 그와 실질적으로 동등한 폴리펩티드를 제공한다.
<화학식 I'>
Figure 112014079668487-pct00018
상기 식에서,
X1은 폴리펩티드의 N-말단이고, 부재하거나 또는 pE, R, Isn 및 Q로부터 선택되고;
X2는 R, r, F 또는 E이고;
X3은 P, p, K, D 또는 4-PhF; 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X4는 R, F, E 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 X7 위치에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X5는 L, K, D 또는 4-PhF이고;
X6 및 X12는 독립적으로 C, c, hC, D-hC, K, D, Orn, Dab 또는 E로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄는 공유 결합을 통해 함께 연결되어 디술피드 또는 아미드 결합을 형성하거나;
또는 대안적으로 X6은 K이고, X13은 부재하고, X12는 F 또는 f이고, 여기서 X12의 C-말단은 X6의 아미노 측쇄와 아미드 결합을 형성하고;
X7은 H, Aib, K, E, F 또는 시스테인이고, 여기서 시스테인의 측쇄는 위치 X3에서의 시스테인의 측쇄 또는 위치 X4에서의 시스테인의 측쇄와 디술피드 결합을 형성하고;
X8은 K, E, F 또는 4-아미노-Isn이고;
X9는 G, D, L, R 또는 Aib이고;
X10은 P 또는 피페콜산이고;
X11은 Nle 또는 3-PyA이고;
X13은 C-말단이고, 부재하거나 또는 F, f, K, H 및 E로부터 선택되고;
N-말단 및 C-말단은 1, 2, 3 또는 4개의 글리신 아미노산과 함께 임의로 고리를 형성하고;
K, Orn, Dab, Dap, hK 또는 4-아미노-Isn의 측쇄에서의 아미노 기는 아미드 결합을 통해 친지성 기에 의해 임의로 연결된다.
실시양태 31에서, 본 발명은 아미노산 X1 내지 X13 중 3개가 Pyr-1-아펠린-13에 존재하는 상응하는 아미노산과 상이한 것인, 실시양태 1, 2 또는 3의 펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 실시양태 32에서, 본 발명은 아미노산 X1 내지 X13 중 4개가 Pyr-1-아펠린-13에 존재하는 상응하는 아미노산과 상이한 것인, 실시양태 1, 2 또는 3의 펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12 및 X13 아미노산은 하기 실시예 섹션에서의 X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12 및 X13 아미노산에 의해 정의된 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 개별 폴리펩티드는 하기 실시예 섹션에 나열된 것 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "본 발명의 폴리펩티드"는 화학식 I' 및 그의 하위화학식 (화학식 I, II 내지 IX)의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 지칭한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "본 발명의 폴리펩티드", "본 발명의 펩티드", "아펠린 펩티드 효능제" 등은 화학식 I' 및 그의 하위화학식 (화학식 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII 또는 IX)의 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 지칭한다. 본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드는 야생형 아펠린, 아펠린-13 및 pyr-1-아펠린-13을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 기재된 공지된 아펠린 펩티드 및 폴리펩티드와 실질적으로 동등하거나 또는 그에 비해 개선된 활성 및/또는 혈장 안정성을 나타낸다.
본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드는 또한 화학식 I', I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 펩티드 및 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 뿐만 아니라 실험 실시예를 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 구체적으로 나열된 임의의 펩티드 또는 폴리펩티드와 적어도 약 95% 동일한 펩티드 및 폴리펩티드를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 어구 "상동 아미노산 서열" 또는 그의 변형은 아미노산 수준에서 적어도 명시된 백분율의 상동성을 특징으로 하는 서열을 지칭하고, "서열 동일성"과 상호교환적으로 사용된다. 상동 아미노산 서열은 보존적 아미노산 치환을 함유하고 폴리펩티드가 동일한 결합 및/또는 활성을 갖는 것인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 서열은 비교 서열과 적어도 60% 또는 그 초과, 99% 이하의 동일성을 갖는 경우에 상동이다. 일부 실시양태에서, 아미노산 서열은 비교 서열과 1개 이상, 60개 이하의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 공유하는 경우에 상동이다. 일부 실시양태에서, 상동 아미노산 서열은 5개 이하 또는 3개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는다.
상동성은 또한 폴리펩티드 수준일 수 있다. 본 발명의 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 그의 일부와 상이한 아미노산 서열의 동일성 정도 또는 백분율은 "본 발명 서열" 또는 "외래 서열" 중 어느 것이든 가장 짧은 것의 길이에 의해 나눠진 2개의 서열의 정렬에서 정확한 일치의 수로서 계산된다. 그 결과는 동일성 퍼센트로서 표현된다.
구체적 예에 기재된 아미노산 서열과 약 80 내지 99.9%, 바람직하게는 90 내지 99.9%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 아펠린-13 또는 pyr-1-아펠린-13보다 우수한 혈장 안정성을 보유하는 폴리펩티드가 본 발명의 폴리펩티드의 카테고리에 속한다. 한 실시양태에서, 혈장 안정성 개선은 적어도 2배이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 적어도 30분의 혈장 안정성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 적어도 60분, 바람직하게는 적어도 100분, 보다 바람직하게는 적어도 150분의 혈장 안정성을 갖는다.
용어 "실질적으로 동등한"은 수용체-결합 활성, 신호 전달 활성 등의 특성이 동등하다는 것을 의미한다. 따라서, 그것은 등급, 예컨대 수용체 결합 활성의 강도 및 폴리펩티드의 분자량 사이에 차이가 존재하는 경우에도 허용된다.
본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드, 또는 1개 이상의 아미노산의 치환, 결실, 부가 또는 삽입에 의한 그의 실질적인 등가물은 상기 의미에서 아미노산 서열의 실질적인 등가물(들)을 함유하는 폴리펩티드로서 언급될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드, 또는 천연 또는 비천연 아미노산으로의 1 내지 5개, 바람직하게는 1 내지 3개, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산의 치환에 의한 그의 실질적인 등가물은, 상기 의미에서 아미노산 서열의 실질적인 등가물(들)을 함유하는 폴리펩티드로서 언급될 수 있다. 추가의 변형 및 변경은, 화학식 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII 또는 IX의 펩티드 또는 폴리펩티드의 아펠린 효능작용 활성이 유지되고 혈장 안정성이 아펠린-13의 피로글루타메이트화 형태에 비해 개선되는 한, L-아미노산의 D-아미노산으로의 대체, 또는 인산화, 카르복실화, 알킬화 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 변이를 포함할 수 있다. 예를 들어, D-아미노산은 화학식 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII 또는 IX의 시클릭 펩티드 및 폴리펩티드의 위치 2 (X2), 위치 3 (X3), 위치 5, 6, 7 및 8 (X5, X6, X7 및 X8), 위치 10 (X10) 및 위치 13 (X13)에서 폴리펩티드의 활성 및 안정성에 대해 잘 용인된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 폴리펩티드의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하는 염을 지칭하며, 이는 전형적으로 생물학적으로 또는 달리 바람직하다. 다수의 경우에, 본 발명의 폴리펩티드는 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 그와 유사한 기의 존재에 의해 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.
제약상 허용되는 산 부가염은 무기 산 및 유기 산에 의해 형성될 수 있고, 예를 들어 아세테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염이다.
염이 유도될 수 있는 무기 산은, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기 산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 술포살리실산 등을 포함한다. 제약상 허용되는 염기 부가염은 무기 및 유기 염기에 의해 형성될 수 있다.
염이 유도될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어 암모늄 염 및 주기율표의 I 내지 XII족으로부터의 금속을 포함한다. 특정 실시양태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연 및 구리로부터 유도되고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어 1급, 2급, 및 3급 아민, 자연 발생의 치환된 아민을 포함하는 치환된 아민, 시클릭 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.
본 발명의 제약상 허용되는 염은 통상의 화학적 방법에 의해 모 화합물, 염기성 또는 산성 모이어티로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 (예컨대, Na, Ca, Mg 또는 K 히드록시드, 카르보네이트, 비카르보네이트 등)와 반응시키거나, 또는 이들 화합물의 유리 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 물 또는 유기 용매, 또는 상기 둘의 혼합물 중에서 수행된다. 일반적으로, 실행가능한 경우에 비-수성 매질, 예컨대 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴의 사용이 바람직하다. 추가의 적합한 염의 목록은, 예를 들어 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); 및 "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 찾아볼 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약상 허용되는 담체"는 당업자에게 공지된 바와 같은 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등, 및 그의 조합을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 임의의 통상의 담체가 활성 성분과 상용적이지 않은 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 그의 사용이 고려된다.
본 발명의 폴리펩티드의 "치료 유효량"이라는 용어는 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 증상의 개선, 상태의 완화, 질환 진행의 둔화 또는 지연, 또는 질환의 예방 등을 도출하는 본 발명의 폴리펩티드의 양을 지칭한다. 한 비제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은, 대상체에게 투여되는 경우에 (1) (i) APJ 수용체의 활성화에 의해 개선되거나, 또는 (ii) APJ 수용체의 활성과 연관되거나, 또는 (iii) APJ 수용체의 비정상적 활성을 특징으로 하는 상태, 장애 또는 질환 또는 그의 증상을 적어도 부분적으로 완화, 억제, 예방 및/또는 개선시키거나; 또는 (2) APJ 수용체를 활성화시키는데 유효한 본 발명의 폴리펩티드의 양을 지칭한다.
또 다른 비제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 세포, 또는 조직, 또는 비-세포 생물학적 물질, 또는 배지에 투여되는 경우에 APJ 수용체를 적어도 부분적으로 활성화시키는데 유효한 본 발명의 폴리펩티드의 양을 지칭한다. 당업자에 의해 인지되는 바와 같이, 유효한 특정한 작용제의 절대량은 목적한 생물학적 종말점, 전달되는 작용제, 표적 조직 등과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 당업자는 "치료 유효량"이 단일 용량으로 투여될 수 있거나, 또는 다중 용량의 투여에 의해 달성될 수 있음을 이해한다. 예를 들어, 심부전을 치료하기 위한 작용제의 경우에, 유효량은 환자의 임상적 개선, 예를 들어 상승된 운동 부하/능력, 상승된 혈압, 감소된 체액 저류, 및/또는 심장 기능, 예를 들어 박출 계수, 운동 능력 (탈진까지의 시간) 등의 정량적 시험에 대한 개선된 결과를 생성하기에 충분한 양일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로, 동물은 포유동물이다. 대상체는 또한, 예를 들어 영장류 (예를 들어, 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 주어진 상태, 증상, 또는 장애, 또는 질환의 감소 또는 저해, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기저 활성에서의 유의한 감소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 임의의 질환 또는 장애에 대한 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 한 실시양태에서, 질환 또는 장애를 개선시키는 것 (즉, 질환 또는 그의 적어도 하나의 임상적 증상의 발달을 둔화시키거나 또는 정지시키거나 또는 감소시키는 것)을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자에 의해 식별가능하지 않을 수 있는 것을 포함하는 적어도 하나의 물리적 파라미터를 완화시키거나 또는 개선시키는 것을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 물리적으로 (예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리학적으로 (예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다로 질환 또는 장애를 조절하는 것을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 발병 또는 발달 또는 진행을 예방하거나 또는 지연시키는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "예방하다", "예방하는" 및 "예방"은 요법 (예를 들어, 치료제)의 투여 또는 요법의 조합물 (예를 들어, 치료제의 조합물)의 투여에 기인한, 대상체에서의 장애의 하나 이상의 증상의 재발, 발병 또는 발달의 예방을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상체가 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어 유익할 경우에, 이러한 대상체는 이러한 치료를 "필요로 한다".
본원에 사용된 바와 같은, 본 발명의 문맥에서 (특히 특허청구범위의 문맥에서) 사용된 단수 용어 및 유사한 용어는 본원에 달리 나타내거나 또는 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 단수형 및 복수형 둘 다를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.
본원에 기재된 모든 방법은 본원에 달리 나타내거나 또는 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 어휘 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 본 발명을 보다 잘 예시하기 위한 의도일 뿐, 달리 청구된 본 발명의 범위에 대한 제한을 제시하는 것은 아니다.
본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드는 펩티드 합성에 대해 공지된 절차 그 자체에 의해 제조될 수 있다. 펩티드의 합성 방법은 고체-상 합성 및 액체-상 합성 중 임의의 것일 수 있다. 따라서, 관심 펩티드 및 폴리펩티드는 단백질을 구성할 수 있는 부분적 펩티드 또는 아미노산을 그의 잔여 부분과 축합시킴으로써 제조될 수 있고, 생성물이 보호기를 가지고 있는 경우에는, 보호기를 분리하여 목적한 펩티드를 제조할 수 있다. 축합 및 탈보호에 대해 공지된 방법은 하기 문헌 (1) 내지 (5)에 기재된 절차를 포함한다.
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반응 후에, 펩티드는 통상의 정제 기술, 예컨대 용매 추출, 칼럼 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피 및 재결정화의 조합에 의해 정제 및 단리될 수 있다. 상기와 같이 단리된 펩티드가 유리 화합물인 경우에는, 그것을 공지된 방법에 의해 적합한 염으로 전환시킬 수 있다. 반대로 단리된 생성물이 염인 경우에는, 그것을 공지된 방법에 의해 유리 펩티드로 전환시킬 수 있다.
폴리펩티드의 아미드는 아미드화에 적합한 펩티드 합성을 위한 수지를 사용하여 수득될 수 있다. 수지는 클로로메틸 수지, 히드록시메틸 수지, 벤즈히드릴아민 수지, 아미노메틸 수지, 4-벤질옥시벤질 알콜 수지, 4-메틸벤즈-히드릴아민 수지, PAM 수지, 4-히드록시메틸메틸페닐아세트아미도메틸 수지, 폴리아크릴아미드 수지, 4-(2',4'-디메톡시페닐-히드록시메틸)페녹시 수지, 4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-아미노메틸)페녹시 수지, 2-클로로트리틸 클로라이드 수지 등을 포함한다. 이러한 수지를 사용하여, α-아미노 기 및 측쇄의 관능기가 적합하게 보호되어 있는 아미노산을, 그 자체로 공지된 다양한 축합 기술에 의해 목적 펩티드의 서열에 따라 수지 상에서 축합시킨다. 일련의 반응의 끝에서, 펩티드 또는 보호된 펩티드를 수지로부터 제거하고, 보호기를 제거하고, 필요한 경우 디술피드 결합을 형성하여 목적 폴리펩티드를 수득한다.
상기 언급된 보호된 아미노산의 축합을 위해, 펩티드 합성을 위한 다양한 활성화 시약, 예컨대 HATU, HCTU, 또는 예를 들어 카르보디이미드를 사용할 수 있다. 카르보디이미드는 DCC, N,N'-디이소프로필카르보디이미드 및 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드를 포함한다. 이러한 시약으로의 활성화를 위해, 라세미화 억제제 첨가제, 예를 들어 HOBt 또는 옥시마 퓨어(Oxyma Pure)를 사용할 수 있다. 보호된 아미노산은 직접적으로 활성화 시약 및 라세미화 억제제와 함께 수지에 첨가될 수 있거나, 또는 대칭 산 무수물, HOBt 에스테르 또는 HOOBt 에스테르로서 미리 활성화시킨 다음 수지에 첨가될 수 있다. 보호된 아미노산의 활성화 또는 수지와의 축합을 위한 용매는 펩티드 축합 반응에 유용한 것으로 공지된 용매 중에서 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 클로로포름, 트리플루오로에탄올, 디메틸 술폭시드, DMF, 피리딘, 디옥산, 메틸렌 클로라이드, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트 또는 그의 적합한 혼합물이 언급될 수 있다.
반응 온도는 펩티드 결합 형성에 유용한 것으로 지금까지 공지된 범위로부터 선택될 수 있고, 일반적으로 약 -20℃ 내지 50℃의 범위로부터 선택된다. 활성화된 아미노산 유도체는 일반적으로 1.5 내지 4배 과량의 비율로 사용된다. 축합이 닌히드린 반응을 이용하는 시험에 의해 불충분한 것으로 밝혀진 경우에는, 보호기를 제거하지 않고 축합 반응을 반복하여 충분한 축합을 달성할 수 있다. 반복된 축합이 여전히 충분한 축합 정도를 제공하지 못하는 경우에는, 미반응 아미노 기를 아세트산 무수물 또는 아세틸이미다졸로 아세틸화시킬 수 있다.
출발 물질 아미노산에 대한 아미노 기의 보호기는 Z, Boc, 3급-아밀옥시카르보닐, 이소보르닐옥시카르보닐, 4-메톡시벤질옥시카르보닐, Cl-Z, Br-Z, 아다만틸옥시카르보닐, 트리플루오로아세틸, 프탈릴, 포르밀, 2-니트로페닐술페닐, 디페닐포스피노티오일 또는 Fmoc를 포함한다. 사용할 수 있는 카르복시-보호기는 상기 언급된 C1 - 6알킬, C3 - 8시클로알킬 및 C6 - 10아릴-C1 - 2알킬, 뿐만 아니라 2-아다만틸, 4-니트로벤질, 4-메톡시벤질, 4-클로로벤질, 페나실, 벤질옥시카르보닐히드라지도, 3급-부톡시카르보닐히드라지도 및 트리틸히드라지도를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
세린 및 트레오닌의 히드록시 기는 에스테르화 또는 에테르화에 의해 보호될 수 있다. 상기 에스테르화에 적합한 기는 탄소-유도 기, 예컨대 저급 알카노일 기, 예를 들어 아세틸 등, 아로일 기, 예를 들어 벤조일 등, 벤질옥시카르보닐 및 에톡시카르보닐을 포함한다. 상기 에테르화에 적합한 기는 벤질, 테트라히드로피라닐 및 3급-부틸을 포함한다. 티로신의 페놀성 히드록실 기에 대한 보호기는 Bzl, Cl2-Bzl, 2-니트로벤질, Br-Z 및 3급-부틸을 포함한다.
히스티딘에 대한 이미다졸의 보호기는 Tos, 4-메톡시-2,3,6-트리에틸벤젠술포닐, DNP, 벤질옥시메틸, Bum, Boc, Trt 및 Fmoc를 포함한다.
출발 아미노산의 활성화된 카르복실 기는 상응하는 산 무수물, 아지드 및 활성 에스테르, 예를 들어 알콜, 예컨대 펜타클로로페놀, 2,4,5-트리클로로페놀, 2,4-디니트로페놀, 시아노메틸 알콜, p-니트로페놀, HONB, N-히드록시숙신이미드, N-히드록시프탈이미드, HOBt 등과의 에스테르를 포함한다. 출발 아미노산의 활성화된 아미노 기는 상응하는 포스포르아미드를 포함한다.
보호기의 제거 방법은 촉매, 예컨대 팔라듐 블랙 또는 탄소상 팔라듐 존재 하의 수소 기체를 사용한 촉매 환원, 무수 플루오린화수소, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 트리플루오로아세트산 또는 이러한 산의 혼합물로의 산 처리, 디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, 피페리딘, 피페라진으로의 염기 처리, 액체 암모니아 중 나트륨 금속으로의 환원을 포함한다. 상기 언급된 산 처리에 의한 제거 반응은 일반적으로 -20℃ 내지 40℃의 온도에서 수행되고, 유리하게는 양이온 수용자, 예컨대 아니솔, 페놀, 티오아니솔, m-크레졸, p-크레졸, 디메틸 술피드, 1,4-부탄디티올, 1,2-에탄디티올의 첨가와 함께 수행될 수 있다. 히스티딘의 이미다졸 기를 보호하는데 사용된 2,4-디니트로페닐 기는 티오페놀로의 처리에 의해 제거될 수 있고, 한편 트립토판의 인돌 기를 보호하는데 사용된 포르밀 기는 묽은 수산화나트륨 용액 또는 묽은 수성 암모니아로의 알칼리 처리 뿐만 아니라, 1,2-에탄디티올, 1,4-부탄디티올 존재 하의 상기 언급된 산 처리에 의해 제거될 수 있다.
출발 물질의 반응에 참여하면 안 되는 관능기를 보호하는 방법, 사용할 수 있는 보호기, 보호기를 제거하는 방법, 및 반응에 참여하는 관능기를 활성화시키는 방법은 모두 공지된 기 및 방법 중에서 신중하게 선택될 수 있다.
폴리펩티드의 아미드 형태를 수득하는 또 다른 방법은 처음에 C-말단 아미노산의 -카르복실 기를 아미드화시킨 다음, 목적한 쇄 길이까지 N-측으로 펩티드 쇄를 연장하고, 이어서 C-말단 펩티드의 α-아미노 기 및 아미노산 또는 펩티드의 α-카르복시 기를 선택적으로 탈보호시켜 목적 폴리펩티드의 나머지를 형성하고, α-아미노 기 및 측쇄 관능 기가 상기에 언급된 적합한 보호기로 보호된 2개의 단편을 상기에 언급된 것과 같은 혼합된 용매 중에서 축합시키는 것을 포함한다. 상기 축합 반응의 파라미터는 상기에 기재된 바와 동일할 수 있다. 축합에 의해 수득된 보호된 펩티드로부터, 모든 보호기를 상기 기재된 방법에 의해 제거함으로써 목적한 조 펩티드를 제공한다. 상기 조 펩티드는 공지된 정제 절차에 의해 정제될 수 있고, 주요 분획을 동결건조시켜 목적 아미드화 폴리펩티드를 제공할 수 있다. 폴리펩티드의 에스테르를 수득하기 위해서는, C-말단 아미노산의 a-카르복실 기를 목적한 알코올과 축합시켜 아미노산 에스테르를 수득한 다음, 아미드의 제조에 대해 상기 기재된 절차를 따른다.
본 발명의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염은 피하로, 근육내로, 정맥내로, 복강내로, 흡입으로 등을 포함하는 다양한 방식 중 임의의 것으로 투여될 수 있다. 본 발명의 특히 바람직한 실시양태는 본 발명의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르, 또는 염의 연속 정맥내 투여를 사용한다. 본 발명의 폴리펩티드는 볼루스로서 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 이식형 펌프가 사용될 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 간헐 또는 연속 폴리펩티드 투여는 1 내지 수일 (예를 들어, 2 내지 3일 또는 그 초과) 동안, 또는 그보다 장기간, 예를 들어 몇 주, 몇 달, 또는 몇 년 동안 계속된다. 일부 실시양태에서, 간헐 또는 연속 폴리펩티드 투여는 적어도 약 3일 동안 제공된다. 다른 실시양태에서, 간헐 또는 연속 폴리펩티드 투여는 적어도 약 1주 동안 제공된다. 다른 실시양태에서, 간헐 또는 연속 폴리펩티드 투여는 적어도 약 2주 동안 제공된다. 투여 동안 또는 다중 용량의 투여 사이에 평균 혈장 폴리펩티드 농도를 특정한 역치 값 초과로 유지하는 것이 바람직할 수 있다. 바람직한 농도는, 예를 들어 대상체의 생리학적 상태, 질환 중증도 등을 기준으로 하여 결정할 수 있다. 이러한 바람직한 값(들)은 표준 임상 시험을 수행함으로써 확인할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 제약 조성물은 특정한 투여 경로, 예컨대 경구 투여, 비경구 투여 및 직장 투여 등을 위해 제제화될 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태 (비제한적으로 캡슐, 정제, 환제, 과립, 동결건조물, 분말 또는 좌제 포함) 또는 액체 형태 (비제한적으로 용액, 현탁액 또는 에멀젼 포함)로 제조될 수 있다. 제약 조성물은 통상의 제약 작업, 예컨대 무균 제조, 멸균에 적용될 수 있고/거나, 통상의 불활성 희석제, 케이크 형성제, 등장화제, 윤활제 또는 완충제, 뿐만 아니라 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다.
주사가능한 용도에 적합한 제약 조성물은 전형적으로 멸균 수용액 (수용성인 경우) 또는 분산액, 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다.
정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리 염수, 정균수, 크레모포르(Cremophor) ELTM (바스프(BASF), 뉴저지주 파시파니) 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS)를 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균되어야 하고, 용이한 주사가능성이 존재할 정도로 유동성이어야 한다. 바람직한 제약 제제는 제조 및 저장 조건 하에 안정하며, 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 일반적으로, 적절한 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅제, 예컨대 레시틴의 사용, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 다수의 경우에, 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 아미노산, 소르비톨, 염화나트륨이 조성물 중에 포함되는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 지속 흡수는 조성물 중에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
특정 주사가능한 조성물은 수성 등장성 용액 또는 현탁액이고, 좌제는 지방 에멀젼 또는 현탁액으로부터 유리하게 제조된다. 상기 조성물은 멸균될 수 있고/거나, 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용해 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 또한, 이는 다른 치료상 유익한 물질도 함유할 수 있다. 상기 조성물은 각각 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제조되며, 약 0.1 내지 75% 또는 약 1 내지 50%의 활성 성분을 함유한다.
멸균 주사가능한 용액은 필요량의 활성 화합물을 상기 열거된 성분 중 하나 또는 그의 조합물과 함께 적절한 용매 중에 혼입시킨 후에 필요에 따라 멸균 여과를 수행하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 활성 화합물을 혼입시켜 제조한다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 활성 성분 + 이전에 멸균-여과된 그의 용액으로부터의 임의의 추가의 목적한 성분의 분말을 수득하는 진공 건조 및 동결건조이다.
경구 조성물은 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 치료적 경구 투여의 목적을 위해, 활성 화합물을 부형제와 혼입시켜, 정제, 트로키 또는 캡슐, 예를 들어 젤라틴 캡슐의 형태로 사용할 수 있다. 또한, 경구 조성물은 구강세정제로서 사용하기 위해 유동적 담체를 사용하여 제조될 수 있다. 제약상 상용성인 결합제 및/또는 아주반트 물질을 조성물의 부분으로서 포함시킬 수 있다. 정제, 환제, 캡슐, 트로키 등은 하기 성분 또는 유사한 특성의 화합물: 결합제, 예컨대 미세결정질 셀룰로스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대 전분 또는 락토스, 붕해제, 예컨대 알긴산, 프리모겔(Primogel) 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘 또는 스테로테스(Sterotes); 활택제, 예컨대 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린; 또는 향미제, 예컨대 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향미제 중 임의의 것을 함유할 수 있다. 경구 전달을 위한 제제에는 유리하게는 위장관 내의 안정성을 개선시키고/거나 흡수를 증진시키기 위한 작용제가 혼입될 수 있다.
흡입에 의한 투여를 위해, 본 발명의 치료제는 바람직하게는 적합한 추진제, 예를 들어 기체, 예컨대 이산화탄소를 함유하는 압축 용기 또는 분배기, 또는 네뷸라이저로부터의 에어로졸 스프레이의 형태로 전달된다. 폐는 치료제의 전신 전달을 위한 넓은 표면적을 제공함에 주의한다.
작용제는, 예를 들어 중합체성 마이크로입자, 예컨대 미국 공개공보 20040096403에 기재된 것 중에, 또는 당업계에 공지된 매우 다양한 다른 약물 전달 비히클 중 임의의 것과 공동으로 캡슐화될 수 있다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 작용제는, 예를 들어 미국 공개공보 20040062718에 기재된 바와 같은 하전된 지질과 공동으로 전달된다. 후자의 시스템은 치료 폴리펩티드인 인슐린의 투여를 위해 사용되고 있고, 이는 펩티드 작용제의 투여를 위한 상기 시스템의 유용성을 입증함에 주의한다.
전신 투여는 경점막 또는 경피 수단에 의해서도 이루어질 수 있다.
경피 적용에 적합한 조성물은 유효량의 본 발명의 폴리펩티드를 적합한 담체와 함께 포함한다. 경피 전달에 적합한 담체는 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매를 포함하여 숙주의 피부를 통한 통과를 보조한다. 예를 들어, 경피 장치는 백킹 부재, 화합물을 임의로 담체와 함께 함유하는 저장소, 임의로 장기간에 걸쳐 제어된 예정 속도로 숙주의 피부에 화합물을 전달하기 위한 속도 제어 장벽, 및 장치가 피부에 부착되도록 하는 수단을 포함하는 붕대 형태이다.
예를 들어, 피부 및 눈으로의 국소 적용에 적합한 조성물은 수용액, 현탁액, 연고, 크림, 겔, 또는 예를 들어 에어로졸 등에 의한 전달을 위한 분무가능한 제제를 포함한다. 이러한 국소 전달 시스템은 특히 피부 적용에 적절할 것이다. 따라서, 이는 당업계에 익히 공지된 화장품을 비롯한 국소 제제에 사용하기에 특히 적합하다. 이러한 것은 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 국소 적용은 또한 흡입 또는 비강내 적용에 관한 것일 수 있다. 이는 편리하게는, 적합한 추진제를 사용하거나 또는 사용하지 않고, 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말의 형태로 (단독으로, 혼합물로서, 예를 들어 락토스와의 건조 블렌드로서, 또는 예를 들어 인지질과의 혼합 성분 입자로서) 또는 가압 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 스프레이 제형으로 전달될 수 있다.
본 발명은 활성 성분으로서의 본 발명의 화합물이 분해되는 속도를 감소시키는 1종 이상의 작용제를 포함하는 제약 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공한다. 본원에 "안정화제"로서 지칭되는 이러한 작용제는 항산화제, 예컨대 아스코르브산, pH 완충제 또는 염 완충제 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 방법:
아펠린 펩티드 패밀리는 G 단백질 커플링 APJ 수용체에 대한 유일하게 공지된 천연 리간드 패밀리이다. 아펠린 유전자는 77개 아미노산 폴리펩티드를 코딩하고, 이는 아펠린 펩티드의 생물학적 활성 형태, 예컨대 아펠린-36, 아펠린-17, 아펠린-16, 아펠린-13, 아펠린-12, 및 아펠린-13의 피로글루타메이트 변형된 형태 (Pyr1-아펠린-13)로 프로세싱된다. 이들 아펠린 펩티드 중 임의의 하나는 APJ 수용체에 결합 시, Gi 및 Gq 단백질을 통해 신호를 전달한다. 심근세포에서, Gi 또는 Gq 커플링은 세포내 pH, PLC 활성화 및 IP3 생성에서의 변화를 유도하고, 이는 근필라멘트 칼슘 감수성을 증진시켜 궁극적으로 심장 수축성을 증가시킨다. Gi 커플링은 활성화된 Gs, 아데닐릴 시클라제 및 cAMP 생성을 억제하고 pAkt 수준을 증가시켜 심장보호를 유도한다. 혈관 내피 세포에서, Gi, pAKT를 통한 APJ 활성화는 증가된 산화질소 (NO) 생성을 유도하고, 이는 전반적 혈관확장을 유발하는 평활근 완화를 증가시킨다.
만성 안정형 심부전을 앓고 있는 환자는 비대상성의 간헐적인 급성 에피소드를 가지며, 이때 심장 수축성이 추가로 저하되고 증상이 악화된다. 이러한 악화는 급성 비대상성 심부전 (ADHF)으로서 지칭된다. ADHF에 대한 현행 요법은 이뇨제, 혈관확장제 및 수축촉진제를 포함하며, 이는 직접적으로 심장 수축성을 증가시킨다. 현재의 정맥내 수축촉진제 (도부타민, 도파민, 밀리논, 레보시멘단)는 그의 유해 사례, 예컨대 부정맥 및 증가된 장기 사망률에 대해 익히 공지되어 있다. 본 발명의 합성 아펠린 폴리펩티드 유사체는 부정맥유발 또는 사망률 부담 없이 심장 수축성을 증가시키고 만성 심부전에서 충족되지 않은 막대한 의학적 필요성을 다루는 ADHF에 대한 요법을 제공한다.
실제로, 인간에서의 급성 아펠린 치료 (5분)는 관상동맥 혈관확장 및 개선된 심장 박출량을 유발한다. 그러나, 천연 아펠린은 생체내에서 매우 짧은 t½ (수초) 및 작용 지속시간 (수분)을 나타낸다. 본 발명의 강력한 합성 아펠린 펩티드 효능제는 천연 아펠린과 비교하여 더 긴 반감기를 갖는다.
심근세포에서의 APJ 수용체의 활성화는 a) Gi / Gq, PLC 및 Ca2+를 통해 심장 수축성을 개선시키고, b) (다른 수축촉진제에 의해 나타나는 바와 같은) cAMP의 증가 없이, Gi, pAkt 활성화를 통해 심장보호를 제공한다. 또한, 내피 세포에서의 APJ 효능작용은 동맥 혈관확장을 유도하고, 이는 좌심실의 작업 부하를 덜어줌으로써 심부전에 추가로 이익이 된다. 종합하면, 합성 아펠린 폴리펩티드 유사체는 전반적 심장 기능을 개선시키고, 부정맥발생을 감소시키고, 생존 이익을 제공할 수 있다.
보다 최근에는, 당뇨병 및 인슐린 저항성에서의 아펠린의 잠재적 관여에 초점을 맞춘 다수의 전임상 연구 간행물이 존재하였다. 아펠린은 1) 근육, 지방 및 심장에서 글루코스 흡수를 개선시킴으로써 혈액 글루코스 수준을 저하시키고, 2) ER 스트레스 및 후속적인 아폽토시스로부터 췌장 베타 세포를 보호하고, 3) 베타 세포에서 인슐린 분비를 저하시키고, 4) 지방 조직에서 카테콜아민 유발 지방분해를 조절하는 것으로 나타났다. pAKT 경로의 활성화가 이들 과정에 관련되었다.
유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태인 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드 또는 그의 제약상 허용되는 염은 유익한 약리학적 특성, 예를 들어 다음 섹션에 제공된 바와 같은 시험관내 및 생체내 시험에서 나타난 바와 같은, 예를 들어 APJ 수용체 효능작용 특성을 나타내고, 따라서 요법에 대해 지시된다.
본 발명의 폴리펩티드 또는 그의 제약상 허용되는 염은 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증으로부터 선택된 적응증의 치료에 유용할 수 있다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 APJ 수용체 활성과 연관된 질환의 치료를 위한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 요법은 APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 상기 언급된 목록, 적합하게는 급성 비대상성 심부전으로부터 선택된다. 상기 실시양태의 또 다른 하위세트에서, 본 발명은 APJ 수용체 활성과 연관된 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염의 용도를 제공한다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 요법에서의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 요법은 APJ 수용체의 활성화 (효능작용)에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료상 허용되는 양의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 투여하는 것을 포함하는, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 추가 실시양태에서, 질환은 상기 언급된 목록, 적합하게는 급성 비대상성 심부전으로부터 선택된다.
상기 실시양태의 또 다른 하위세트에서, 본 발명은 치료상 허용되는 양의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 투여하는 것을 포함하는, APJ 수용체의 활성과 연관된 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
치료적으로 사용되는 본 발명의 제약 조성물 또는 조합물의 유효량은, 예를 들어 치료 상황 및 목적에 의존할 것이다. 따라서, 당업자는 치료에 적절한 투여량 수준이 부분적으로, 전달되는 분자, 융합 단백질 변이체가 사용되는 적응증, 투여 경로, 및 환자의 체구 (체중, 체표면 또는 기관 크기) 및 상태 (연령 및 전반적 건강)에 따라 달라질 것임을 인지할 것이다. 따라서, 임상의는 최적의 치료 효과를 얻기 위해 투여량을 적정하고 투여 경로를 변경할 수 있다. 전형적인 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 0.1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 다른 실시양태에서, 투여량은 0.1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg; 또는 1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg 범위일 수 있다.
투여 빈도는 사용되는 제제에서의 이중 기능 단백질의 약동학적 파라미터에 의존할 것이다. 전형적으로, 임상의는 목적 효과를 달성하는 투여량에 도달할 때까지 조성물을 투여할 것이다. 따라서, 조성물은 단일 용량으로서, 시간 간격을 두고 2회 이상의 용량 (동일한 양의 목적 분자를 함유할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있음)으로서, 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 투여량의 추가 정밀화는 당업자에 의해 일상적으로 이루어지고, 그들이 일상적으로 수행하는 업무 영역 내에 있다. 적절한 투여량은 적절한 용량-반응 데이터의 사용을 통해 확인될 수 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 활성은 이하에 기재된 하기 시험관내 방법에 의해 평가될 수 있다.
hAPJ 칼슘 플럭스 검정:
Chem-5 APJ 안정한 세포 (밀리포어(Millipore) # HTS068C)를 384-웰 포맷에 25 ul 성장 배지 중 10,000개 세포/웰로 플레이팅한 다음, 37℃ 조직 배양 인큐베이터에서 24시간 성장시켰다. 검정 1시간 전에, 2.5 mM 프로베네시드를 포함하는 25 ul/웰 FLIPR 칼슘 4 염료 (몰레큘라 디바이시스(Molecular Devices) R8142)를 첨가하고, 세포를 37℃ 조직 배양 인큐베이터에서 1시간 인큐베이션하였다. 펩티드를 HBSS, HEPES & 0.1% BSA 완충제 중에 가용화시키고, 3벌로 50 uM에서 5 pM까지 10배 연속 희석하였다. FLIPR 테트라를 사용하여 펩티드를 염료를 갖는 세포에 첨가하였다 (10 uM 내지 1 pM 범위의 최종 펩티드 농도를 위해 1:5로). 칼슘에 대한 결합 후 세포 내부의 FLIPR 염료는 형광을 방출한 반면, 세포 외부로부터의 형광은 차폐되었다. FLIPR 테트라 상에서 470-495 여기 및 515-575 방출 파장을 사용하여 형광을 측정하였다. 판독을 펩티드 첨가 10초 전에 시작하여 총 3분 동안 수행하였다. 각각의 펩티드 농도에 대해 최대-최소 값을 계산하여 플로팅하고, 그래프패드(GraphPad) 프리즘 소프트웨어를 사용하여, 펩티드에 의한 칼슘 플럭스 자극에 대한 곡선 변곡점에서의 EC50 값을 계산하였다.
혈장 안정성 검정:
물질:
작업 용액: 1 mg/ml 시험 물품을 밀리-Q 워터(Milli-Q water) 중에 제조하였다.
추출 용액: 0.1% 포름산 및 400 ng/ml 글리부리드를 포함하는 메탄올:아세토니트릴:물 (1:1:1).
혈장: 바이오레클러메이션 엘엘씨(Bioreclamation LLC) (뉴욕주 리버풀)로부터 구입한 수컷 스프라그-돌리 래트 혈장 (나트륨 헤파린 포함).
전혈: 바이오레클러메이션 엘엘씨 (뉴욕주 리버풀)로부터 구입한 수컷 스프라그 돌리 전혈 (나트륨 헤파린 포함).
폐 균질물: 수컷 래트 스프라그 돌리 폐를 바이오레클러메이션 엘엘씨 (뉴욕주 리버풀)로부터 구입하였다. 폐를 5x 부피의 1X PBS 첨가 후에 폴리트론 균질화기를 사용하여 균질화시켰다. 균질물을 4℃에서 10분 동안 9000 rpm으로 원심분리하였다. 상청액을 다시 30분 동안 3000 rpm으로 원심분리하여 투명한 상청액으로 만들었다. 상업용 키트 (피어스, 써모 사이언티픽(Pierce, Thermo Scientific))를 사용하여 단백질 농도를 결정하였다.
샘플 제조 절차:
시험 물품을 하기 생물학적 매트릭스: 헤파린첨가 래트 혈장, 헤파린첨가 래트 전혈 또는 폐 균질물 중 하나 중에 제조하였다. 혈장 및 전혈 샘플은 1 mg/ml 작업 용액 5 uL를 래트 혈장 또는 전혈 995 uL에 첨가함으로써 5000 ng/ml로 제조하였다. 폐 균질물 샘플은, 포스페이트 완충 염수 (PBS)로 폐 균질물을 1 mg/ml 단백질 농도로 희석하고, 이어서 작업 용액 5 uL를 희석된 폐 균질물 995 uL에 첨가함으로써 제조하였다. 샘플을 수조 인큐베이터에서 부드럽게 진탕시키면서 (65~75rpm) 37℃에서 인큐베이션하였다. 0분, 5분, 15분, 30분, 60분, 120분 및 240분 째에, 인큐베이션 샘플의 25 uL 분취액을 96-웰 플레이트로 옮기고, 즉시 추출 용액 150 uL를 사용하여 단백질을 침전시켰다. 인큐베이션 실험의 완료 후에, 샘플 플레이트를 10분 동안 4℃에서 4000 rpm으로 원심분리하였다. 이후에, 피펫팅 장치 (테칸 테모(Tecan Temo))를 사용하여 상청액을 또 다른 플레이트로 옮기고, 물 50 uL를 모든 샘플에 첨가하였다. 플레이트를 LC-MS 분석 전에 와동시켰다.
안정성 샘플의 LC-MS 분석
HPLC: 오토샘플러를 갖는 애질런트(Agilent) 1290 HPLC
칼럼: MAC-MOD ACE C18, 3 μm, 30mm x 2.1mm i.d.
이동상 A: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산
이동상 B: 물 중 0.1% 포름산
구배 프로그램:
Figure 112014079668487-pct00020
질량 분광계: 애질런트 Q-TOF 6530
데이터 획득 모드: 100 - 1000 m/z의 질량 범위로 전체 스캔
데이터 획득 및 분석 소프트웨어: 매스헌터(MassHunter)
데이터 분석:
안정성 검정: 각 시점에서의 피크 면적을 초기 (t=0) 피크 면적에 대해 잔류한 퍼센트로 전환함으로써 안정성 반감기 (t ½) 값을 결정하였다.
잔류 퍼센트 = 100 x (샘플 피크 면적) ÷ (t = 0 피크 면적)
잔류 퍼센트 값의 자연 로그를 샘플 시간에 대해 계산하여 플로팅하였다 (마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel)). 이 선의 기울기 k를 선형 회귀에 의해 결정하였다 (마이크로소프트 엑셀).
이어서, 식 t ½ = 0.693 ÷ k에 의해 안정성 반감기를 계산하였다.
대용물 활성-기반 혈장 안정성 검정:
상기 기재된 칼슘 플럭스 프로토콜을 따르되, 하기와 같이 변화시켰다. 펩티드를 또한 5% 래트 혈장 (바이오레클러메이션 # RATPLNAHP-M, Na 헤파린-처리)과 함께 인큐베이션하였다. 37℃ 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션한 후에, 시점 t0 및 t24시간에 판독을 수행하였다. 하기를 계산함으로써 분 단위의 펩티드 혈장 반감기를 추정하였다:
1) LN((t0에서의 EC50)/(t24 시간에서의 EC50)),
2) 상기 값의 기울기 계산 및
3) t1 /2 = 0.693/(기울기^2).
시험 검정 (상기 기재된 바와 같음)을 사용하여, 본 발명의 폴리펩티드는 하기 제공된 표 2 및 3에 따른 효능 및 안정성을 나타내었다.
표 2: 폴리펩티드의 활성 및 안정성
Figure 112014079668487-pct00021
Figure 112014079668487-pct00022
Figure 112014079668487-pct00023
표 3: 혈장 안정성 검정과 대용물 활성 기반 혈장 안정성 검정 사이의 상관관계:
Figure 112014079668487-pct00024
본 발명의 폴리펩티드는 아펠린-13 또는 pyr-1-아펠린-13과 유사한 APJ 수용체 효력을 가질 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 100nM 미만의 EC50을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 50nM 미만, 바람직하게는 25nM 미만, 보다 바람직하게는 15nM 미만의 EC50을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 10nM 미만의 EC50을 갖는다.
본 발명의 폴리펩티드는 아펠린-13 또는 pyr-1-아펠린-13보다 우수한 혈장 안정성을 가질 수 있다. 한 실시양태에서, 혈장 안정성 개선은 적어도 2배이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 적어도 30분의 혈장 안정성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 적어도 10분, 적어도 40분, 보다 바람직하게는 적어도 60분의 혈장 안정성을 갖는다.
본 발명의 폴리펩티드는 1종 이상의 다른 치료제와 동시에, 또는 그 전에 또는 그 후에 투여될 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 동일하거나 또는 상이한 투여 경로에 의해 개별적으로 투여되거나, 또는 다른 작용제와 동일한 제약 조성물 중에 함께 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 요법에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 적어도 1종의 다른 치료제를 포함하는 생성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 요법은 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 질환 또는 상태의 치료이다.
조합 제제로서 제공되는 생성물은 동일한 제약 조성물 중에 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 다른 치료제(들)를 함께 포함하는 조성물, 또는 개별 형태로, 예를 들어 키트 형태로 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 다른 치료제(들)를 포함하는 조성물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 또 다른 치료제(들)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 임의로, 제약 조성물은 상기에 기재된 바와 같은 제약상 허용되는 부형제를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은, 2종 이상의 개별 제약 조성물을 포함하며 그 중 적어도 1종이 화학식 I' 및 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 함유하는 것인 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 키트는 상기 조성물을 개별적으로 보유하기 위한 수단, 예컨대 용기, 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다. 이러한 키트의 예는, 전형적으로 정제, 캡슐 등의 포장에 사용되는 바와 같은 블리스터 팩이다.
본 발명의 키트는 다양한 투여 형태, 예를 들어 경구 및 비경구로 투여하기 위해, 개별 조성물을 상이한 투여 간격으로 투여하기 위해, 또는 개별 조성물을 서로에 대해 적정하기 위해 사용될 수 있다. 순응도를 보조하기 위해, 본 발명의 키트는 전형적으로 투여 지침서를 포함한다.
본 발명의 조합 요법에서, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 동일하거나 또는 상이한 제조업체에 의해 제조되고/거나 제제화될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 (i) 의사에게 조합 생성물로 배포되기 전에 (예를 들어, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우); (ii) 투여 직전에 의사 자신에 의해 (또는 의사의 지시 하에); (iii) 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드 및 다른 치료제의 순차적 투여 동안에 환자 자신에서, 조합 요법으로 합해질 수 있다.
따라서, 본 발명은 의약이 또 다른 치료제와의 투여를 위해 제조되는 것인, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하기 위한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 의약이 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염과 함께 투여되는 것인, 아펠린 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염이 또 다른 치료제와의 투여를 위해 제조되는 것인, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 또한 다른 치료제가 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염과의 투여를 위해 제조되는 것인, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 또 다른 치료제를 제공한다. 본 발명은 또한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염이 또 다른 치료제와 함께 투여되는 것인, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 제공한다. 본 발명은 또한 다른 치료제가 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염과 함께 투여되는 것인, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 또 다른 치료제를 제공한다.
본 발명은 또한 환자가 이전에 (예를 들어, 24시간 내에) 또 다른 치료제로 치료받았던 것인, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하기 위한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 환자가 이전에 (예를 들어, 24시간 내에) 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염으로 치료받았던 것인, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 상태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공한다.
한 실시양태에서, 다른 치료제는 수축촉진제, 베타 아드레날린성 수용체 차단제, HMG-Co-A 리덕타제 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제, 칼슘 채널 차단제 (CCB), 엔도텔린 길항제, 레닌 억제제, 이뇨제, ApoA-I 모방체, 항당뇨병제, 비만감소제, 알도스테론 수용체 차단제, 엔도텔린 수용체 차단제, 알도스테론 신타제 억제제 (ASI), CETP 억제제, 항응고제, 렐락신, BNP (네시리티드) 및 NEP 억제제로부터 선택된다.
제2 작용제 또는 치료"와 조합하여"라는 용어는 본 발명의 폴리펩티드 (예를 들어, 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드, 또는 본원에 달리 기재된 폴리펩티드)와 제2 작용제 또는 치료의 공-투여, 본 발명의 화합물의 투여 후, 제2 작용제 또는 치료의 투여, 및 제2 작용제 또는 치료의 투여 후, 본 발명의 화합물의 투여를 포함한다.
용어 "제2 작용제"는 본원에 기재된 질환 또는 장애, 예를 들어 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 장애 또는 질환, 예컨대 예를 들어 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 또는 감소시키는, 당업계에 공지된 임의의 작용제를 포함한다.
제2 작용제의 예는 수축촉진제, 베타 아드레날린성 수용체 차단제, HMG-Co-A 리덕타제 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제, 칼슘 채널 차단제 (CCB), 엔도텔린 길항제, 레닌 억제제, 이뇨제, ApoA-I 모방체, 항당뇨병제, 비만감소제, 알도스테론 수용체 차단제, 엔도텔린 수용체 차단제, 알도스테론 신타제 억제제 (ASI), CETP 억제제, 항응고제, 렐락신, BNP (네시리티드) 및/또는 NEP 억제제를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 수축촉진제는, 예를 들어 도부타민, 이소프로테레놀, 밀리논, 아미리논, 레보시멘단, 에피네프린, 노르에피네프린, 이소프로테레놀 및 디곡신을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 베타 아드레날린성 수용체 차단제는, 예를 들어 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 비소프롤롤, 카르테올롤, 메토프롤롤, 나돌롤, 프로프라놀롤, 소탈롤 및 티몰롤을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 항응고제는 달테파린, 다나파로이드, 에녹사파린, 헤파린, 틴자파린, 와파린을 포함한다.
용어 "HMG-Co-A 리덕타제 억제제" (베타-히드록시-베타-메틸글루타릴-조효소-A 리덕타제 억제제로도 불림)는 혈중 콜레스테롤을 비롯한 지질 수준을 저하시키는데 사용될 수 있는 활성제를 포함한다. 예는 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 콤팩틴, 달바스타틴, 디히드로콤팩틴, 플루인도스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 메바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 리바스타틴, 심바스타틴 및 벨로스타틴, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
용어 "ACE-억제제" (안지오텐신 전환 효소 억제제로도 불림)는 안지오텐신 I의 안지오텐신 II로의 효소적 분해를 방해하는 분자를 포함한다. 이러한 화합물은 혈압 조절 및 울혈성 심부전 치료에 사용될 수 있다. 예는 알라세프릴, 베나제프릴, 베나제프릴라트, 캅토프릴, 세로나프릴, 실라자프릴, 델라프릴, 에날라프릴, 에나프릴라트, 포시노프릴, 이미다프릴, 리시노프릴, 모엑시프릴, 모벨토프릴, 페린도프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 스피라프릴, 테모카프릴 및 트란돌라프릴, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
용어 "엔도텔린 길항제"는 보센탄 (EP 526708 A 참조), 테조센탄 (WO 96/19459 참조), 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
용어 "레닌 억제제"는 디테키렌 (화학 명칭: [1S-[1R*,2R*,4R*(1R*,2R*)]]-1-[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]-L-프롤릴-L-페닐알라닐-N-[2-히드록시-5-메틸-1-(2-메틸프로필)-4-[[[2-메틸-1-[[(2-피리디닐메틸)아미노]카르보닐]부틸]아미노]카르보닐]헥실]-N-알파-메틸-L-히스티딘아미드); 테를라키렌 (화학 명칭: [R-(R*,S*)]-N-(4-모르폴리닐카르보닐)-L-페닐알라닐-N-[1-(시클로헥실메틸)-2-히드록시-3-(1-메틸에톡시)-3-옥소프로필]-S-메틸-L-시스테인아미드); 알리스키렌 (화학 명칭: (2S,4S,5S,7S)-5-아미노-N-(2-카르바모일-2,2-디메틸에틸)-4-히드록시-7-{[4-메톡시-3-(3-메톡시프로폭시)페닐]메틸}-8-메틸-2-(프로판-2-일)노난아미드) 및 잔키렌 (화학 명칭: [1S-[1R*[R*(R*)],2S*,3R*]]-N-[1-(시클로헥실메틸)-2,3-디히드록시-5-메틸헥실]-알파-[[2-[[(4-메틸-1-피페라지닐)술포닐]메틸]-1-옥소-3-페닐프로필]-아미노]-4-티아졸프로판아미드), 또는 그의 히드로클로라이드 염, 또는 스피델(Speedel)에 의해 개발된 바와 같은 SPP630, SPP635 및 SPP800, 또는 하기 화학식 (A) 및 (B)의 RO 66-1132 및 RO 66-1168, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
Figure 112014079668487-pct00025
용어 "알리스키렌"은, 구체적으로 정의되지 않는 경우에, 그의 유리 염기 및 염 둘 다, 특히 그의 제약상 허용되는 염, 가장 바람직하게는 그의 헤미-푸마레이트 염으로서 이해될 것이다.
용어 "칼슘 채널 차단제 (CCB)"는 디히드로피리딘 (DHP) 및 비-DHP (예를 들어, 딜티아젬-유형 및 베라파밀-유형 CCB)를 포함한다. 예는 암로디핀, 베프리딜, 딜티아젬, 펠로디핀, 리오시딘, 이스라디핀, 라시디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 니굴디핀, 닐루디핀, 니모디핀, 니솔디핀, 니트렌디핀, 베라파밀 및 니발디핀을 포함하고, 바람직하게는 플루나리진, 프레닐아민, 딜티아젬, 펜딜린, 갈로파밀, 미베프라딜, 아니파밀, 티아파밀 및 베라파밀, 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 비-DHP 대표물이다. CCB는 항고혈압, 항협심증 또는 항부정맥 약물로서 사용될 수 있다.
용어 "이뇨제"는 티아지드 유도체 (예를 들어, 클로로티아지드, 히드로클로로티아지드, 메틸클로티아지드 및 클로로탈리돈)를 포함한다.
용어 "ApoA-I 모방체"는 D4F 펩티드 (예를 들어, 화학식 D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F) (서열식별번호: 7)를 포함한다.
안지오텐신 II 수용체 길항제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 안지오텐신 II 수용체의 AT1-수용체 하위유형에 결합하지만 상기 수용체를 활성화시키지는 않는 활성 성분인 것으로 이해된다. AT1 수용체 억제의 결과로서, 이들 길항제는, 예를 들어 항고혈압제로서 또는 울혈성 심부전을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
AT1 수용체 길항제 부류는 다양한 구조적 특징을 갖는 화합물을 포함하고, 비-펩티드성인 것이 본질적으로 바람직하다. 예를 들어, 발사르탄, 로사르탄, 칸데사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄, 사프리사르탄, 타소사르탄, 텔미사르탄, 하기 화학식의 명칭 E-1477을 갖는 화합물,
Figure 112014079668487-pct00026
하기 화학식의 명칭 SC-52458을 갖는 화합물,
Figure 112014079668487-pct00027
및 하기 화학식의 명칭 ZD-8731을 갖는 화합물
Figure 112014079668487-pct00028
로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물, 또는 각 경우에, 그의 제약상 허용되는 염이 언급될 수 있다.
바람직한 AT1-수용체 길항제는 칸데사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄, 로사르탄, 텔미사르탄, 발사르탄이다. 또한, 바람직한 것은 시판되는 작용제이고, 가장 바람직한 것은 발사르탄 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
용어 "항당뇨병제"는 췌장 β-세포로부터의 인슐린 분비를 촉진하는 인슐린 분비 증진제를 포함한다. 예는 비구아니드 유도체 (예를 들어, 메트포르민), 술포닐우레아 (SU) (예를 들어, 톨부타미드, 클로르프로파미드, 톨라자미드, 아세토헥사미드, 4-클로로-N-[(1-피롤리디닐아미노)카르보닐]-벤젠술폰아미드 (글리코피라미드), 글리벤클라미드 (글리부리드), 글리클라지드, 1-부틸-3-메타닐릴우레아, 카르부타미드, 글리보누리드, 글리피지드, 글리퀴돈, 글리속세피드, 글리부티아졸, 글리부졸, 글리헥사미드, 글리미딘, 글리피나미드, 펜부타미드 및 톨릴시클라미드), 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 추가의 예는 페닐알라닌 유도체 (예를 들어, 하기 화학식의 나테글리니드 [N-(트랜스-4-이소프로필시클로헥실카르보닐)-D-페닐알라닌] (EP 196222 및 EP 526171 참조);
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레파글리니드 [(S)-2-에톡시-4-{2-[[3-메틸-1-[2-(1-피페리디닐)페닐]부틸]아미노]-2-옥소에틸}벤조산] (EP 589874, EP 147850 A2, 특히 페이지 61의 실시예 11, 및 EP 207331 A1 참조); 칼슘 (2S)-2-벤질-3-(시스-헥사히드로-2-이소인돌리닐카르보닐)-프로피오네이트 2수화물 (예를 들어, 미티글리니드 (EP 507534 참조)); 및 글리메피리드 (EP 31058 참조)를 포함한다.
본 발명의 펩티드 및 폴리펩티드와 조합하여 사용될 수 있는 제2 작용제의 추가의 예는 DPP-IV 억제제, GLP-1 및 GLP-1 효능제를 포함한다.
DPP-IV는 GLP-1의 불활성화를 담당한다. 보다 특히, DPP-IV는 GLP-1 수용체 길항제를 생성하고, 이에 따라 GLP-1에 대한 생리학적 반응을 단축시킨다. GLP-1은 췌장 인슐린 분비의 주요 자극제이며, 글루코스 처리에 직접적인 유익한 효과를 갖는다.
DPP-IV (디펩티딜 펩티다제 IV) 억제제는 펩티드성, 또는 바람직하게는 비-펩티드성일 수 있다. DPP-IV 억제제는 각 경우에, 예를 들어 WO 98/19998, DE 196 16 486 A1, WO 00/34241 및 WO 95/15309에, 각 경우에 특히 화합물 특허청구범위 및 작업 실시예의 최종 생성물에 일반적으로 및 구체적으로 개시되어 있으며, 최종 생성물, 제약 제제 및 특허청구범위의 대상은 여기서 이들 공개물에 대한 참조에 의해 본원에 포함된다. WO 98/19998의 실시예 3 및 WO 00/34241의 실시예 1에 각각 구체적으로 개시되어 있는 화합물이 바람직하다.
GLP-1 (글루카곤 유사 펩티드-1)은, 예를 들어 문헌 [W.E. Schmidt et al., Diabetologia, 28, 1985, 704-707] 및 US 5,705,483에 기재되어 있는 인슐린분비자극 단백질이다.
용어 "GLP-1 효능제"는 특히 US 5,120,712, US 5,118666, US 5,512,549, WO 91/11457 및 문헌 [C. Orskov et al, J. Biol. Chem. 264 (1989) 12826]에 개시되어 있는 GLP-1(7-36)NH2의 변이체 및 유사체를 포함한다. 추가의 예는 GLP-1(7-36)NH2 분자의 37번째 위치에서 Arg36의 카르복시-말단 아미드 관능기가 Gly로 대체된 화합물인 GLP-1(7-37) 및 그의 변이체 및 유사체, 예컨대 GLN9-GLP-1(7-37), D-GLN9-GLP-1(7-37), 아세틸 LYS9-GLP-1(7-37), LYS18-GLP-1(7-37) 및 특히 GLP-1(7-37)OH, VAL8-GLP-1(7-37), GLY8-GLP-1(7-37), THR8-GLP-1(7-37), MET8-GLP-1(7-37) 및 4-이미다조프로피오닐-GLP-1을 포함한다. 또한, 문헌 [Greig et al., Diabetologia 1999, 42, 45-50]에 기재되어 있는 GLP 효능제 유사체 엑센딘-4가 특히 바람직하다.
또한, 정의 "항당뇨병제"는 손상된 인슐린 수용체 기능을 복구하여 인슐린 저항성을 감소시킴으로써 결과적으로 인슐린 감수성을 증진시키는 인슐린 감수성 증진제를 포함한다. 예는 저혈당 티아졸리딘디온 유도체 (예를 들어, 글리타존, (S)-((3,4-디히드로-2-(페닐-메틸)-2H-1-벤조피란-6-일)메틸-티아졸리딘-2,4-디온 (엔글리타존), 5-{[4-(3-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸릴)-1-옥소프로필)-페닐]-메틸}-티아졸리딘-2,4-디온 (다르글리타존), 5-{[4-(1-메틸-시클로헥실)메톡시)-페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온 (시글리타존), 5-{[4-(2-(1-인돌릴)에톡시)페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온 (DRF2189), 5-{4-[2-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸릴)-에톡시)]벤질}-티아졸리딘-2,4-디온 (BM-13.1246), 5-(2-나프틸술포닐)-티아졸리딘-2,4-디온 (AY-31637), 비스{4-[(2,4-디옥소-5-티아졸리디닐)메틸]페닐}메탄 (YM268), 5-{4-[2-(5-메틸-2-페닐-4-옥사졸릴)-2-히드록시에톡시]벤질}-티아졸리딘-2,4-디온 (AD-5075), 5-[4-(1-페닐-1-시클로프로판카르보닐아미노)-벤질]-티아졸리딘-2,4-디온 (DN-108) 5-{[4-(2-(2,3-디히드로인돌-1-일)에톡시)페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온, 5-[3-(4-클로로-페닐])-2-프로피닐]-5-페닐술포닐)티아졸리딘-2,4-디온, 5-[3-(4-클로로페닐])-2-프로피닐]-5-(4-플루오로페닐-술포닐)티아졸리딘-2,4-디온, 5-{[4-(2-(메틸-2-피리디닐-아미노)-에톡시)페닐]메틸}-티아졸리딘-2,4-디온 (로시글리타존), 5-{[4-(2-(5-에틸-2-피리딜)에톡시)페닐]-메틸}티아졸리딘-2,4-디온 (피오글리타존), 5-{[4-((3,4-디히드로-6-히드록시-2,5,7,8-테트라메틸-2H-1-벤조피란-2-일)메톡시)-페닐]-메틸}-티아졸리딘-2,4-디온 (트로글리타존), 5-[6-(2-플루오로-벤질옥시)나프탈렌-2-일메틸]-티아졸리딘-2,4-디온 (MCC555), 5-{[2-(2-나프틸)-벤족사졸-5-일]-메틸}티아졸리딘-2,4-디온 (T-174) 및 5-(2,4-디옥소티아졸리딘-5-일메틸)-2-메톡시-N-(4-트리플루오로메틸-벤질)벤즈아미드 (KRP297))를 포함한다.
추가의 항당뇨병제는 인슐린 신호전달 경로 조절제, 예컨대 단백질 티로신 포스파타제 (PTPase)의 억제제, 항당뇨병성 비-소분자 모방체 화합물 및 글루타민-프룩토스-6-포스페이트 아미도트랜스퍼라제 (GFAT)의 억제제; 조절이상 간 글루코스 생산에 영향을 미치는 화합물, 예컨대 글루코스-6-포스파타제 (G6Pase)의 억제제, 프룩토스-1,6-비스포스파타제 (F-1,6-Bpase)의 억제제, 글리코겐 포스포릴라제 (GP)의 억제제, 글루카곤 수용체 길항제 및 포스포에놀피루베이트 카르복시키나제 (PEPCK)의 억제제; 피루베이트 데히드로게나제 키나제 (PDHK) 억제제; 위 배출 억제제; 인슐린; GSK-3의 억제제; 레티노이드 X 수용체 (RXR) 효능제; 베타-3 AR의 효능제; 언커플링 단백질 (UCP)의 효능제; 비-글리타존 유형 PPARγ 효능제; 이중 PPARα/PPARγ 효능제; 항당뇨병성 바나듐 함유 화합물; 인크레틴 호르몬, 예컨대 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1) 및 GLP-1 효능제; 베타-세포 이미다졸린 수용체 길항제; 미글리톨; α2-아드레날린성 길항제; 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 정의에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 β-아드레날린성 수용체 차단제, 예컨대 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 비소프롤롤, 메토프롤롤, 나돌롤, 프로프라놀롤, 소탈롤 및 티몰롤; 안지오텐신 II 수용체 길항제, 예컨대 AT1 차단제; 항당뇨병제, 예컨대 DPPIV 억제제 (예를 들어, 빌다글립틴) 및 GLP1 펩티드 효능제로부터 선택된 1종 이상의 치료 활성제를 포함하는 조합물, 특히 제약 조합물을 제공한다.
용어 "비만감소제"는 리파제 억제제 (예를 들어, 오를리스타트) 및 식욕 억제제 (예를 들어, 시부트라민 및 펜테르민)를 포함한다.
알도스테론 신타제 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 알도스테론의 생산을 억제하는 특성을 갖는 활성 성분인 것으로 이해된다. 알도스테론 신타제 (CYP11B2)는 부신 피질에서 알도스테론 생산의 최종 단계, 즉 11-데옥시코르티코스테론을 알도스테론으로 전환시키는 단계에 촉매작용하는 미토콘드리아 시토크롬 P450 효소이다. 소위 알도스테론 신타제 억제제로의 알도스테론 생산의 억제는 저칼륨혈증, 고혈압, 울혈성 심부전, 심방 세동 또는 신부전의 치료에 대한 성공적인 변형인 것으로 공지되어 있다. 이러한 알도스테론 신타제 억제 활성은 표준 검정에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정된다 (예를 들어, US 2007/0049616).
알도스테론 신타제 억제제 부류는 스테로이드성 및 비-스테로이드성 알도스테론 신타제 억제제 둘 다를 포함하고, 후자가 가장 바람직하다.
상업적으로 입수가능한 알도스테론 신타제 억제제 또는 보건 당국에 의해 승인된 알도스테론 신타제 억제제가 바람직하다.
알도스테론 신타제 억제제 부류는 다양한 구조적 특징을 갖는 화합물을 포함한다. 비-스테로이드성 알도스테론 신타제 억제제의 예는 하기 화학식의 파드로졸의 히드로클로라이드의 (+)-거울상이성질체 (미국 특허 4617307 및 4889861), 또는 사용가능한 경우에, 그의 제약상 허용되는 염이다.
Figure 112014079668487-pct00030
상기 조합물에 유용한 알도스테론 신타제 억제제는, 예를 들어 US2007/0049616, 특히 화합물 특허청구범위 및 작업 실시예의 최종 생성물에 일반적으로 및 구체적으로 개시되어 있는 화합물 및 유사체이고, 최종 생성물, 제약 제제 및 특허청구범위의 대상은 여기서 상기 공개물에 대한 참조에 의해 본원에 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 바람직한 알도스테론 신타제 억제제는 제한 없이 4-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-일)-3-메틸벤조니트릴; 5-(2-클로로-4-시아노페닐)-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-카르복실산 (4-메톡시벤질)메틸아미드; 4'-플루오로-6-(6,7,8,9-테트라히드로-5H-이미다조[1,5-a]아제핀-5-일)비페닐-3-카르보니트릴; 5-(4-시아노-2-메톡시페닐)-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-카르복실산 부틸 에스테르; 4-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-일)-2-메톡시벤조니트릴; 5-(2-클로로-4-시아노페닐)-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-카르복실산 4-플루오로벤질 에스테르; 5-(4-시아노-2-트리플루오로메톡시페닐)-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-카르복실산 메틸 에스테르; 5-(4-시아노-2-메톡시페닐)-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-카르복실산 2-이소프로폭시에틸 에스테르; 4-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-일)-2-메틸벤조니트릴; 4-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-일)-3-플루오로벤조니트릴; 4-(6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-일)-2-메톡시벤조니트릴; 3-플루오로-4-(7-메틸렌-6,7-디히드로-5H-피롤로[1,2-c]이미다졸-5-일)벤조니트릴; 시스-3-플루오로-4-[7-(4-플루오로-벤질)-5,6,7,8-테트라히드로-이미다조[1,5-a]피리딘-5-일]벤조니트릴; 4'-플루오로-6-(9-메틸-6,7,8,9-테트라히드로-5H-이미다조[1,5-a]아제핀-5-일)비페닐-3-카르보니트릴; 4'-플루오로-6-(9-메틸-6,7,8,9-테트라히드로-5H-이미다조[1,5-a]아제핀-5-일)비페닐-3-카르보니트릴, 또는 각 경우에 그의 (R) 또는 (S) 거울상이성질체; 또는 사용가능한 경우에, 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
용어 알도스테론 신타제 억제제는 또한 WO2008/076860, WO2008/076336, WO2008/076862, WO2008/027284, WO2004/046145, WO2004/014914, WO2001/076574에 개시되어 있는 화합물 및 유사체를 포함한다.
또한, 알도스테론 신타제 억제제는 미국 특허 출원 US2007/0225232, US2007/0208035, US2008/0318978, US2008/0076794, US2009/0012068, US20090048241 및 PCT 출원 WO2006/005726, WO2006/128853, WO2006128851, WO2006/128852, WO2007065942, WO2007/116099, WO2007/116908, WO2008/119744 및 유럽 특허 출원 EP 1886695에 개시되어 있는 화합물 및 유사체도 포함한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 바람직한 알도스테론 신타제 억제제는 제한 없이 스피델에 의해 개발된 바와 같은 8-(4-플루오로페닐)-5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c1[1,41옥사진; 4-(5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)-2-플루오로벤조니트릴; 4-(5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)-2,6-디플루오로벤조니트릴; 4-(5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)-2-메톡시벤조니트릴; 3-(5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)벤조니트릴; 4-(5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)프탈로니트릴; 4-(8-(4-시아노페닐)-5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)벤조니트릴; 4-(5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)벤조니트릴; 4-(5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진-8-일)나프탈렌-1-카르보니트릴; 8-[4-(1H-테트라졸-5-일)페닐1-5,6-디히드로-8H-이미다조[5,1-c][1,4]옥사진, 또는 각 경우에 (R) 또는 (S) 거울상이성질체; 또는 사용가능한 경우에, 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
상기 조합물에 유용한 알도스테론 신타제 억제제는, 예를 들어 WO 2009/156462 및 WO 2010/130796, 특히 화합물 특허청구범위 및 작업 실시예의 최종 생성물에 일반적으로 및 구체적으로 개시되어 있는 화합물 및 유사체, 최종 생성물, 제약 제제 및 특허청구범위의 대상이다. 본 발명의 조합물에 적합한 바람직한 알도스테론 신타제 억제제는 3-(6-플루오로-3-메틸-2-피리딘-3-일-1H-인돌-1-일메틸)-벤조니트릴 히드로클로라이드, 1-(4-메탄술포닐-벤질)-3-메틸-2-피리딘-3-일-1H-인돌, 2-(5-벤질옥시-피리딘-3-일)-6-클로로-1-메틸-1H-인돌, 5-(3-시아노-1-메틸-1H-인돌-2-일)-니코틴산 에틸 에스테르, N-[5-(6-클로로-3-시아노-1-메틸-1H-인돌-2-일)-피리딘-3-일메틸]-에탄술폰아미드, 피롤리딘-1-술폰산 5-(6-클로로-3-시아노-1-메틸-1H-인돌-2-일)-피리딘-3-일 에스테르, N-메틸-N-[5-(1-메틸-1H-인돌-2-일)-피리딘-3-일메틸]-메탄술폰아미드, 6-클로로-1-메틸-2-{5-[(2-피롤리딘-1-일-에틸아미노)-메틸]-피리딘-3-일}-1H-인돌-3-카르보니트릴, 6-클로로-2-[5-(4-메탄술포닐-피페라진-1-일메틸)-피리딘-3-일]-1-메틸-1H-인돌-3-카르보니트릴, 6-클로로-1-메틸-2-{5-[(1-메틸-피페리딘-4-일아미노)-메틸]-피리딘-3-일}-1H-인돌-3-카르보니트릴, 모르폴린-4-카르복실산 [5-(6-클로로-3-시아노-1-메틸-1H-인돌-2-일)-피리딘-3-일메틸]-아미드, N-[5-(6-클로로-1-메틸-1H-인돌-2-일)-피리딘-3-일메틸]-에탄술폰아미드, C,C,C-트리플루오로-N-[5-(1-메틸-1H-인돌-2-일)-피리딘-3-일메틸]-메탄술폰아미드, N-[5-(3-클로로-4-시아노-페닐)-피리딘-3-일]-4-트리플루오로메틸-벤젠술폰아미드, N-[5-(3-클로로-4-시아노-페닐)-피리딘-3-일]-1-페닐-메탄술폰아미드, N-(5-(3-클로로-4-시아노페닐)피리딘-3-일)부탄-1-술폰아미드, N-(1-(5-(4-시아노-3-메톡시페닐)피리딘-3-일)에틸)에탄술폰아미드, N-((5-(3-클로로-4-시아노페닐)피리딘-3-일)(시클로프로필)메틸)에탄술폰아미드, N-(시클로프로필(5-(1H-인돌-5-일)피리딘-3-일)메틸)에탄술폰아미드, N-(시클로프로필(5-나프탈렌-1-일-피리딘-3-일)메틸)에탄술폰아미드, 에탄술폰산 [5-(6-클로로-1-메틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-피리딘-3-일메틸]-아미드 및 에탄술폰산 {[5-(3-클로로-4-시아노-페닐)-피리딘-3-일]-시클로프로필-메틸}-에틸-아미드를 포함한다.
용어 "엔도텔린 수용체 차단제"는 보센탄 및 암브리센탄을 포함한다.
용어 "CETP 억제제"는, HDL로부터 LDL 및 VLDL로의 다양한 콜레스테릴 에스테르 및 트리글리세리드의 콜레스테릴 에스테르 전달 단백질 (CETP) 매개 수송을 억제하는 화합물을 지칭한다. 이러한 CETP 억제 활성은 표준 검정에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정된다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,140,343). 예는 미국 특허 번호 6,140,343 및 미국 특허 번호 6,197,786에 개시되어 있는 화합물 (예를 들어, [2R,4S]4-[(3,5-비스-트리플루오로메틸-벤질)-메톡시카르보닐-아미노]-2-에틸-6-트리플루오로메틸-3,4-디히드로-2H-퀴놀린-1-카르복실산 에틸 에스테르 (토르세트라피브); 미국 특허 번호 6,723,752에 개시되어 있는 화합물 (예를 들어, (2R)-3-{[3-(4-클로로-3-에틸-페녹시)-페닐]-[[3-(1,1,2,2-테트라플루오로-에톡시)-페닐]-메틸]-아미노}-1,1,1-트리플루오로-2-프로판올); 미국 특허 출원 일련 번호 10/807,838에 개시되어 있는 화합물; 미국 특허 번호 5,512,548에 개시되어 있는 폴리펩티드 유도체; 문헌 [J. Antibiot., 49(8): 815- 816 (1996), 및 Bioorg. Med. Chem. Lett.; 6:1951-1954 (1996)]에 각각 개시되어 있는 콜레스테릴 에스테르의 로세노노락톤 유도체 및 포스페이트-함유 유사체를 포함한다. 또한, CETP 억제제는 WO2000/017165, WO2005/095409, WO2005/097806, WO 2007/128568, WO2008/009435, WO 2009/059943 및 WO2009/071509에 개시되어 있는 것도 포함한다.
용어 "NEP 억제제"는 중성 엔도펩티다제 (NEP) EC 3.4.24.11을 억제하는 화합물을 지칭한다. 예는 칸독사트릴, 칸독사트릴라트, 덱세카도트릴, 에카도트릴, 라세카도트릴, 삼파트릴라트, 파시도트릴, 오마파트릴라트, 게모파트릴라트, 다글루트릴, SCH-42495, SCH-32615, UK-447841, AVE-0848, PL-37 및 (2R,4S)-5-비페닐-4-일-4-(3-카르복시-프로피오닐아미노)-2-메틸-펜탄산 에틸 에스테르 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. NEP 억제제는 또한 미국 특허 번호 5,155,100에 개시된 바와 같은 포스포노/비아릴 치환된 디펩티드 유도체를 포함한다. NEP 억제제는 또한 PCT 출원 번호 WO 2003/104200에 개시된 바와 같은 N-머캅토아실 페닐알라닌 유도체를 포함한다. NEP 억제제는 또한 PCT 출원 번호 WO 2008/133896, WO 2009/035543 또는 WO 2009/134741에 개시된 바와 같은 이중-작용 항고혈압제를 포함한다. 다른 예는 미국 출원 번호 12/788,794; 12/788,766 및 12/947,029에 개시되어 있는 화합물을 포함한다. NEP 억제제는 또한 WO 2010/136474, WO 2010/136493, WO 2011/061271 및 미국 가출원 번호 61/414171 및 61/414163에 개시되어 있는 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 정의에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 APJ 수용체를 활성화시키는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 정의에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 장애 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 APJ 수용체의 활성화 (효능작용)에 반응성인 장애 또는 질환이 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증으로부터 선택되는 것인, 대상체에서 상기 장애 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 정의에 따른 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 장애 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 정의에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 장애 또는 질환이 특히 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병 (임신성 당뇨병 포함), 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상 (일광화상 포함) 및 전자간증으로부터 선택되는 것인, 상기 장애 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I 내지 IX 중 어느 하나의 정의에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르, 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 예시: 펩티드 및 폴리펩티드 합성
Figure 112014079668487-pct00031
Figure 112014079668487-pct00032
펩티드는 표준 고체 상 Fmoc 화학에 의해 합성하였다. 펩티드를 프리루드(Prelude)™ 펩티드 합성기 (프로틴 테크놀로지스 인크.(Protein Technologies, Inc.), 미국 투산) 상에서 조립하였다. C-말단 상에 유리 카르복실산을 갖는 펩티드는 2-클로로트리틸 클로라이드-PS-수지 (ABCR, 독일 카를스루에)로부터 합성하였다. C-말단 상에 비치환된 카르복스아미드를 갖는 펩티드는 Fmoc 보호된 링크-아미드-AM-PS-수지 (머크(Merck), 독일 다름슈타트)로부터 합성하였다. C-말단 상에 N-일치환된 카르복스아미드를 갖는 펩티드는 아민이 로딩된 BAL-AM-PS-수지 (EMC 마이크로콜렉션스(EMC Microcollections), 독일 튀빙겐)로부터 합성하였다.
펩티드를 정제용 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 하기 칼럼을 사용하였다:
·워터스 선파이어(Waters SunFire) 정제용 C18 OBD 칼럼, 5 μm, 30x100 mm, 파트 번호 186002572 (1개의 칼럼 또는 직렬로 연결된 2개의 칼럼)
·워터스 선파이어 정제용 C18 OBD 칼럼, 5 μm, 30x150 mm, 파트 번호 186002797
·워터스 아틀란티스(Waters Atlantis) 정제용 OBD T3 칼럼, 5 μm, 30x150 mm, 파트 번호 186003703
·워터스 엑스브리지(Waters XBridge) 정제용 C8 OBD 칼럼, 5 μm, 30x150 mm, 파트 번호 186003083
·마케리-나겔 뉴클레오실(Machery-Nagel Nucleosil)® 100-5 C18, 5 μm, 250x40 mm, 파트 번호 715340.400
이동상은 용리액 A (H2O 중 0.1% TFA) 및 용리액 B (ACN)로 구성되었다. 구배는 분리 문제의 특정 요건에 기반하여 설계하였다. 순수한 생성물을 ACN/H2O로부터 동결건조시켰다.
λ=214 nm에서의 UV 검출을 사용한 분석용 HPLC (칼럼: 비쇼프(Bischoff) UHC-640, 53x4.0 mm, 프론토실(ProntoSil) 120-3-C18-H, 3 μm, 파트 번호 0604F185PS030)에 의해 생성물을 분석하였다. 이동상은 용리액 A (H2O 중 0.07% TFA) 및 용리액 B (ACN 중 0.1% TFA)로 구성되었다. 전기분무 이온화를 사용한 UPLC-MS (칼럼: 워터스 액퀴티(Waters Acquity) UPLC® BEH C18, 1.7 μm, 2.1x50 mm, 파트 번호 186002350)에 의해 생성물의 추가의 특성화를 수행하였다.
표 4에 예시된 펩티드를 하기 기재된 일반적 절차를 사용하여 합성하였다. 비치환된 N- 또는 C-말단은 각각 작은 이탤릭체 H- 또는 - OH에 의해 나타낸다.
표 4:
삭제
Figure 112018007788968-pct00083

Figure 112018007788968-pct00084

Figure 112018007788968-pct00085

Figure 112018007788968-pct00086

Figure 112018007788968-pct00087
분석 방법
삭제
1) HPLC - 분석 방법 A
·칼럼: 프론토실 120-3-C18-H를 갖는 비쇼프 UHC-640 (53x4.0 mm), 3 μm; 파트 n°: 0604F185PS030
·용리액 A: 물 중 0.07% TFA/용리액 B: ACN 중 0.1% TFA
·유량: 1.5 ml/분
·온도: 40℃
·구배:
Figure 112014079668487-pct00036
2a) UPLC-MS - 분석 방법 B
·워터스 액퀴티 UPLC® BEH C18, 1.7 μm, 2.1x50 mm; 파트 n°: 186002350
·용리액 A: 물 중 0.1% FA; 용리액 B: ACN 중 0.1% FA
·유량: 0.7 ml/분
·온도: 40℃
·구배:
Figure 112014079668487-pct00037
2b) UPLC-MS - 분석 방법 C
·워터스 액퀴티 UPLC® BEH C18, 1.7 μm, 2.1x50 mm; 파트 n°: 186002350
·용리액 A: 물 중 0.1% FA; 용리액 B: ACN 중 0.1% FA
·유량: 0.7 ml/분
·온도: 40℃
·구배:
Figure 112014079668487-pct00038
실시예 1 내지 63의 펩티드에 대한 분석 데이터를 표 5에 요약하였고, 이는 상기에 기재된 분석 방법을 사용하여 생성하였다.
표 5
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Figure 112014079668487-pct00040
Figure 112014079668487-pct00041
Figure 112014079668487-pct00042
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일반적 합성 절차
1) 2-클로로트리틸 클로라이드 수지 상의 제1 아미노산의 로딩 및 Fmoc-제거
2-클로로트리틸 클로라이드 수지 (1 당량, 1.0-1.6 mmol/g)를 DCM으로 완전히 세척하였다. 목적한 아미노산 (1.6 mmol/g 로딩을 고려하여, 수지에 대해 전형적으로 0.5-2 당량)을 DCM (수지의 그램당 대략 10 mL) 및 DIPEA (1.6 mmol/g 로딩을 고려하여, 수지에 대해 4 당량) 중에 용해시켰다. 용액을 수지에 첨가하고, 현탁액을 19시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 수지를 배수시킨 다음, DCM/MeOH/DIPEA (17:2:1), DCM, DMA, DCM으로 순차적으로 완전히 세척하였다.
Fmoc 제거 및 로딩의 결정을 위해, 수지를 피페리딘/DMA (1:4) 또는 4-메틸피페리딘/DMA (1:4) (초기 수지의 그램당 10 mL x 12)와 함께 반복해서 진탕시키고, DMA (초기 수지의 그램당 10 mL x 2)로 세척하였다. 합한 용액을 MeOH로 초기 수지의 그램당 250 mL의 부피 V로 희석하였다. 상기 용액의 2 mL 분취액 (Va)을 MeOH로 추가로 250 mL (Vt)로 희석하였다. UV 흡수를 MeOH의 참조에 대해 299.8 nm에서 측정하여 흡수 A를 제공하였다. 수지를 DMA, DCM, DMA, DCM으로 순차적으로 완전히 세척하고, 40℃에서 고진공 하에 건조시켜 수지 m g을 수득하였다.
수지의 로딩을 하기 식에 따라 계산하였다:
로딩 [mol/g] = (A x Vt x V)/(d x ε x Va x m)
(여기서 d: 큐벳의 폭; ε = 7800 L mol-1 cm-1)
2) 프리루드™ 합성기 상에서의 고체 상 펩티드 합성
2a) 합성 사이클 A
수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc를 4-메틸피페리딘/DMA (1:4)로의 반복적 처리에 의해 제거하였다. 수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc-아미노산 (3 당량; NMP 중 0.2 M 용액), HCTU (3 당량; NMP 중 0.3 M 용액) 및 DIPEA (3.3 당량; NMP 중 0.66 M 용액)를 첨가한 후에, 특정 요건에 따라 전형적으로 15분 내지 4시간 동안 실온에서 질소와 현탁액을 혼합함으로써 커플링을 수행하였다. DMA로의 세척 후에, 커플링 단계를 특정 요건에 따라 전형적으로 1 내지 3회 반복하였다. DMA로의 세척 후에, Ac2O/피리딘/DMA (1:1:8)의 혼합물을 첨가하고, 후속적으로 실온에서 현탁액을 혼합함으로써 캡핑을 수행하였다. 수지를 DMA로 세척하였다.
2b) 합성 사이클 B
수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc를 피페리딘/DMA (1:4)로의 반복적 처리에 의해 제거하였다. 수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc-아미노산 (3 당량; NMP 중 0.3 M 용액), HCTU (3 당량; NMP 중 0.3 M 용액) 및 DIPEA (4.5 당량; NMP 중 0.9 M 용액)를 첨가한 후에, 특정 요건에 따라 전형적으로 15분 내지 4시간 동안 실온에서 질소와 현탁액을 혼합함으로써 커플링을 수행하였다. DMA로의 세척 후에, 커플링 단계를 특정 요건에 따라 전형적으로 1 내지 3회 반복하였다. DMA로의 세척 후에, Ac2O/피리딘/DMA (1:1:8)의 혼합물을 첨가하고, 후속적으로 실온에서 현탁액을 혼합함으로써 캡핑을 수행하였다. 수지를 DMA로 세척하였다.
2c) 합성 사이클 C
수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc를 피페리딘/DMA (1:4)로의 반복적 처리에 의해 제거하였다. 수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc-아미노산 (3 당량; NMP 중 0.3 M 용액), HCTU (3 당량; NMP 중 0.3 M 용액) 및 DIPEA (6 당량; NMP 중 0.9 M 용액)를 첨가한 후에, 특정 요건에 따라 전형적으로 15분 내지 4시간 동안 실온에서 질소와 현탁액을 혼합함으로써 커플링을 수행하였다. DMA로의 세척 후에, 커플링 단계를 특정 요건에 따라 전형적으로 1 내지 3회 반복하였다. DMA로의 세척 후에, Ac2O/피리딘/DMA (1:1:8)의 혼합물을 첨가하고, 후속적으로 실온에서 현탁액을 혼합함으로써 캡핑을 수행하였다. 수지를 DMA로 세척하였다.
2d) 합성 사이클 D
수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc를 4-메틸피페리딘/DMA (1:4)로의 반복적 처리에 의해 제거하였다. 수지를 DMA로 세척하였다. Fmoc-아미노산 및 옥시마 퓨어 (각각 3 당량; NMP 중 둘 다의 0.2 M)의 혼합물 및 DIC (3 당량; NMP 중 0.3 M 용액)를 첨가한 후에, 특정 요건에 따라 전형적으로 15분 내지 4시간 동안 실온에서 질소와 현탁액을 혼합함으로써 커플링을 수행하였다. DMA로의 세척 후에, 커플링 단계를 특정 요건에 따라 전형적으로 1 내지 3회 반복하였다. DMA로의 세척 후에, Ac2O/피리딘/DMA (1:1:8)의 혼합물을 첨가하고, 후속적으로 실온에서 현탁액을 혼합함으로써 캡핑을 수행하였다. 수지를 DMA로 세척하였다.
3) 보호기의 제거를 수반하거나 또는 수반하지 않는 수지로부터의 절단
3a) 절단 방법 A
수지 (0.1 mmol)를 95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (3 mL)와 함께 2시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 새로운 용액 (3 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시킨 다음, 절단 용액을 여과하였다. 새로운 용액 (3 mL)을 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하였다. 합한 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (35 mL)의 혼합물에 천천히 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (10 mL)로 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 고체를 고진공 하에 건조시켰다.
3b) 절단 방법 B
수지 (0.1 mmol)를 95% 수성 TFA/EDT (4:1) (0.75 mL)로 처리하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 95% 수성 TFA (2.18 mL) 및 TIS (75 μL)의 혼합물을 첨가하고, 실온에서의 진탕을 1시간 동안 재개하였다. 절단 용액을 여과한 다음, 95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (3 mL)를 수지에 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하여 수집하고, 새로운 용액 (3 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시킨 다음, 절단 용액을 여과하였다. 합한 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (35 mL)에 부었다. 이에 따라 형성된 침전물이 가라앉도록 하고, 원심분리한 다음, 상청액을 조심스럽게 따라내었다. 침전물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (10 mL)로 1회 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 고진공 하에 건조시켰다.
3c) 절단 방법 C
HFIP/DCM (30:70) (5 mL)을 수지 (0.1 mmol)에 첨가하고, 현탁액을 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 절단 용액을 여과하여 수집하고, 새로운 HFIP/DCM (30:70) (5 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 절단 용액을 여과하여 수집하였다. 수지를 DCM (2 x 5 mL)으로 세척하고, 이를 또한 수집하였다. 합한 절단 및 세척 용액을 고진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 tBuOH/H2O (1:1)로부터 동결건조시켰다.
4) 고리화 방법
4a) 고리화 방법 A (디술피드 형성)
완전히 탈보호된 선형 전구체 펩티드를 H2O/DMSO (9:1) 또는 (4:1) 중에 용해시켜 전형적으로 1-15 mg/mL의 농도를 제공하였다. 이어서, 반응 혼합물을 요건에 따라 전형적으로 40시간 동안 실온에서 교반한 다음, 고진공 하에 농축 건조시켰다.
4b) 고리화 방법 B (디술피드 형성)
완전히 탈보호된 선형 전구체 펩티드 (1 당량)를 H2O 중에 용해시켜 전형적으로 10 mg/mL의 농도를 제공하였다. AcOH 중 50 mM I2의 용액 (1.2 당량)을 교반된 용액에 한 번에 첨가하고, 반응물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. H2O 중 0.5 M 아스코르브산 (1.5 당량)을 첨가하여 과량의 I2를 켄칭하였다. 용액을 진공 하에 거의 농축 건조시켰다.
4c) 고리화 방법 C (2개의 디술피드의 선택적 형성)
부분적으로 보호된 선형 전구체 펩티드 (1 당량) (2개의 시스테인은 Acm으로 보호되고 2개의 시스테인은 비보호됨)를 AcOH/H2O (4:1) 중에 용해시켜 전형적으로 1 mg/mL의 농도를 제공하였다. AcOH 중 50 mM I2 (2 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가로 AcOH 중 50 mM I2 (10 당량)를 4시간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 21시간 후에, 반응 혼합물을 진공 하에 거의 농축 건조시키고, H2O 중 1 M 아스코르브산을 과량 첨가하여 미반응 I2를 켄칭하였다.
4d) 고리화 방법 D (측쇄 사이의 락탐 형성)
완전히 탈보호된 선형 전구체 펩티드 (1 당량) 및 HATU (1.5 당량)를 NMP 중에 용해시켰다 (펩티드 농도: 전형적으로 1 mmol/L). DIPEA (3 당량)를 첨가하고, 용액을 90분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켰다.
4e) 고리화 방법 E (측쇄와 C-말단 사이의 락탐 형성)
DMF 중 펩티드 (1 당량), HATU (1.3 당량) 및 HOAt (1.3 당량)의 용액 (펩티드 농도: 2.6 mmol/L)을 2,6-루티딘 (20 당량)으로 처리하고, 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켰다.
하기에 대표적인 예의 합성을 기재하였다.
실시예 1 pE-R-P-R-L-K-H-F-G-P-Nle-D-페네틸아민 (서열식별번호: 8) (락탐 K6-D12)의 합성
하기 실시예 1은 서열식별번호: 8을 개시한다.
Figure 112014079668487-pct00044
·중간체 1a의 제조
(선형 펩티드의 조립)
페네틸아민-BAL-PS 수지 (167 mg, 0.100 mmol)를 프리루드™ 펩티드 합성기 상에서 고체 상 펩티드 합성에 적용하였다. 커플링을 하기와 같이 수행하였다:
Figure 112014079668487-pct00045
·중간체 1b의 제조
(보호기 제거를 수반하는 수지로부터의 절단에 이은 정제)
95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (2 mL)의 혼합물을 중간체 1a (0.1 mmol)에 첨가하고, 현탁액을 2.5시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 새로운 절단 용액 (2 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 45분 동안 실온에서 진탕시킨 다음, 절단 용액을 여과하였다. 새로운 용액 (2 mL)을 첨가하고, 현탁액을 45분 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 수지를 95% 수성 TFA (1 mL)로 세척하였다. 합한 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (35 mL)의 혼합물에 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (20 mL)로 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 고체를 고진공 하에 건조시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 중간체 1b를 백색 고체로서 상이한 품질의 2개의 배치: 배치 A (35.9 mg (98% 순도), 0.018 mmol) 및 배치 B (52.9 mg (80% 순도), 0.021 mmol)로 수득하였다.
·실시예 1의 제조
(고리화 및 정제)
이전 단계로부터의 배치 둘 다를 동일한 프로토콜에 따라 개별적으로 처리하였다:
배치 A: NMP (18 mL) 및 DIPEA (9.2 μL, 0.053 mmol) 중 펩티드 (35.9 mg (98% 순도), 0.018 mmol) 및 HATU (10.0 mg, 0.026 mmol)의 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다.
배치 B: NMP (26 mL) 및 DIPEA (13.0 μL, 0.076 mmol) 중 펩티드 (52.9 mg (80% 순도), 0.021 mmol) 및 HATU (14.5 mg, 0.038 mmol)의 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다.
각각의 배치를 진공 하에 농축 건조시켰다. 생성물을 정제용 HPLC에 의해 단리시켰다. 정제물 둘 다의 순수한 분획을 합하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 실시예 1을 백색 고체 (52.0 mg, 0.025 mmol)로서 수득하였다.
순수한 생성물을 분석용 HPLC (분석 방법 A: tR=4.16분) 및 UPLC-MS (분석 방법 C; 측정치: [M+3]3+=511.2; 계산치: [M+3]3+=511.3)에 의해 분석하였다.
실시예 5 pE-R-P-R-L-K-F-K-G-P-Nle-F (서열식별번호: 12) (락탐 K6-C-말단) 합성
하기 실시예 5는 서열식별번호: 12를 개시한다.
Figure 112014079668487-pct00046
·중간체 5a의 제조
(Fmoc-F-OH로의 2-클로로트리틸 클로라이드 수지의 로딩, Fmoc 제거 및 수지의 로딩의 결정)
2-클로로트리틸 클로라이드 수지 (10.0 g, 16.0 mmol)를 상기에 기재된 일반적 절차와 유사하게 DCM (100 mL) 및 DIPEA (11.2 mL, 64.0 mmol) 중 Fmoc-F-OH (6.24 g, 32.0 mmol)의 용액과 반응시켜 중간체 5a (12.8 g, 로딩 = 0.79 mmol/g)를 수득하였다.
·중간체 5b의 제조
(선형 펩티드의 조립)
중간체 5a (0.100 mmol)를 프리루드™ 펩티드 합성기 상에서 고체 상 펩티드 합성에 적용하였다. 커플링을 하기와 같이 수행하였다:
Figure 112014079668487-pct00047
·중간체 5c의 제조
(ivDde의 제거 및 수지로부터의 절단)
중간체 5b (0.100 mmol)를 DMA (4 mL) 중 히드라진 1수화물 (0.081 mL, 1.67 mmol)의 용액으로 10분 동안 6회 처리하였다. 이어서, 수지를 THF (4 mL) 중 히드라진 1수화물 (0.081 mL, 1.67 mmol)의 용액으로 20분 동안 3회 처리하였다. 수지를 DCM (3x)으로 세척하였다. HFIP/DCM (30:70) (5 mL)을 수지 (0.100 mmol)에 첨가하고, 현탁액을 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 절단 용액을 여과하고, 새로운 HFIP/DCM (30:70) (5 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 절단 용액을 여과하였다. 수지를 DCM (2 x 5 mL)으로 세척하였다. 합한 절단 및 세척 용액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 tBuOH/H2O (1:1)로부터 동결건조시켜 중간체 5c (187 mg, 0.090 mmol)를 수득하였다.
·실시예 5의 제조
(고리화 및 보호기의 제거)
DMF (35 mL) 중 중간체 5c (187 mg, 0.090 mmol), HATU (44.6 mg, 0.117 mmol) 및 HOAt (16.0 mg, 0.117 mmol)의 용액을 2,6-루티딘 (0.210 mL, 1.80 mmol)으로 처리하고, 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (5 mL) 중에 용해시키고, 용액을 2.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (30 mL)에 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (10 mL)로 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 세척 단계를 1회 반복하였다. 잔류물을 고진공 하에 건조시켰다. 생성물을 정제용 HPLC에 의해 단리시키고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 실시예 5를 백색 고체 (41.4 mg, 0.023 mmol)로서 수득하였다.
순수한 생성물을 분석용 HPLC (분석 방법 A: tR=3.70분) 및 UPLC-MS (분석 방법 C; 측정치: [M+3]3+=484.5; 계산치: [M+3]3+=484.6)에 의해 분석하였다.
실시예 7 Q-R-P-R-L-C-F-K-G-P-Nle-C-F-G-G (서열식별번호: 14) (락탐 N-말단-C-말단) 합성
하기 실시예 7은 서열식별번호: 14를 개시한다.
Figure 112014079668487-pct00048
·중간체 7a의 제조
(Fmoc-Gly-OH로의 2-클로로트리틸 클로라이드 수지의 로딩, Fmoc 제거 및 수지의 로딩의 결정)
2-클로로트리틸 클로라이드 수지 (2.00 g, 3.20 mmol)를 상기에 기재된 일반적 절차와 유사하게 DCM (20 mL) 및 DIPEA (2.24 mL, 12.8 mmol) 중 Fmoc-Gly-OH (0.476 g, 1.60 mmol)의 용액과 반응시켜 중간체 7a (2.22 g; 로딩 = 0.68 mmol/g)를 수득하였다.
·중간체 7b의 제조
(선형 펩티드의 조립 및 Fmoc 제거)
중간체 7a (147 mg, 0.100 mmol)를 프리루드™ 펩티드 합성기 상에서 고체 상 펩티드 합성에 적용하였다. 커플링을 하기와 같이 수행하였다:
Figure 112014079668487-pct00049
펩티드의 조립 후에, Fmoc를 피페리딘/DMA (1:4)로의 반복적 처리에 의해 제거하였다. 수지를 DMA로 세척하여 중간체 7b (0.100 mmol)를 수득하였다.
·중간체 7c의 제조
(수지로부터의 HFIP 절단)
HFIP/DCM (30:70) (3 mL)을 중간체 7b (0.100 mmol)에 첨가하고, 현탁액을 1.5시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 새로운 HFIP/DCM (30:70) (3 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 30분 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하였다. 수지를 DCM (2 x 3 mL)으로 세척하였다. 합한 절단 및 세척 용액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 tBuOH/H2O (1:1)으로부터 동결건조시켜 중간체 7c (203 mg, 0.067 mmol)를 수득하였다.
·중간체 7d의 제조
(백본 고리화)
DMF (40 mL) 중 중간체 7c (203 mg, 0.067 mmol), HATU (33.3 mg, 0.088 mmol) 및 HOAt (11.9 mg, 0.088 mmol)의 용액을 2,6-루티딘 (0.157 ml, 1.35 mmol)으로 처리하고, 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켜 중간체 7d (0.067 mmol)를 수득하였다.
·중간체 7e의 제조
(보호기의 제거에 이은 정제)
95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (3 mL)의 혼합물을 중간체 7d (0.067 mmol)에 첨가하고, 현탁액을 2.5시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (30 mL)의 혼합물에 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (10 mL)로 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 세척 단계를 1회 반복하였다. 고체를 고진공 하에 건조시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 중간체 7e를 백색 고체 (33.6 mg, 0.017 mmol)로서 수득하였다.
·실시예 7의 제조
(고리화 및 정제)
중간체 7e (33.6 mg, 0.017 mmol)를 H2O/DMSO (9:1) (30 mL) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 40시간 동안 실온에서 교반한 다음, 진공 하에 농축 건조시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 실시예 7을 백색 고체 (21.0 mg; 0.010 mmol)로서 수득하였다.
순수한 생성물을 분석용 HPLC (분석 방법 A: tR=3.85분) 및 UPLC-MS (분석 방법 C; 측정치: [M+3]3+=553.6; 계산치: [M+3]3+=553.6)에 의해 분석하였다.
실시예 8 pE-R-P-R-L-C-H-K-G-P-Nle-C-F-OH (서열식별번호: 15) (디술피드 C6-C12)의 합성
하기 실시예 8은 서열식별번호: 15를 개시한다.
Figure 112014079668487-pct00050
·중간체 8a의 제조
(Fmoc-F-OH로의 2-클로로트리틸 클로라이드 수지의 로딩, Fmoc 제거 및 수지의 로딩의 결정)
2-클로로트리틸 클로라이드 수지 (40.0 g, 64.0 mmol)를 DCM (3x)으로 세척하였다. DCM (400 mL) 및 DIPEA (44.7 mL, 256 mmol) 중 Fmoc-F-OH (24.8 g, 64.0 mmol)의 용액을 첨가하고, 현탁액을 실온에서 22시간 동안 진탕시켰다. 수지를 DCM/MeOH/DIPEA (17:2:1) (3x), DCM (3x), DMA (3x), DCM (3x)으로 완전히 세척하였다.
이어서, 수지를 피페리딘/DMA (1:4) (400 mL)의 혼합물로 10분 동안 4회 처리한 후에, DMA (2 x 180 ml)로 세척하였다. 피페리딘/DMA 용액 및 DMA 세척 용액을 수지의 로딩의 결정을 위해 수집하였다. 합한 용액 1 mL를 MeOH로 500 mL로 희석하고, 299.8 nm에서의 UV 흡수를 측정하여 A = 0.368을 얻었다. 이것은 46.2 mmol의 Fmoc 양에 해당한다.
수지를 DCM (3x), DMA (3x), DCM (3x)으로 완전히 세척하고, 진공 하에 건조시켜 중간체 8a (50.7 g; 로딩 = 0.91 mmol/g)를 수득하였다.
·중간체 8b의 제조
(선형 펩티드의 조립)
중간체 8a (2.64 g, 2.40 mmol)를 프리루드™ 펩티드 합성기 상에서 고체 상 펩티드 합성에 적용하였다. 커플링을 하기와 같이 수행하였다:
Figure 112014079668487-pct00051
·중간체 8c의 제조
(보호기 제거를 수반하는 수지로부터의 절단)
중간체 8b (2.40 mmol)를 조심스럽게 DCM (4x)으로 세척하였다. 95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (50 mL)의 혼합물을 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 새로운 절단 용액 (35 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시킨 다음, 절단 용액을 여과하였다. 새로운 용액 (35 mL)을 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하였다. 합한 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (500 mL)의 교반된 혼합물에 천천히 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음, 침전물이 가라앉도록 하였다. 상청액을 프릿으로 흡입해 제거하였다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (2 x 100 mL)로 세척하고, 상청액을 프릿으로 흡입해 제거하였다. 고체를 고진공 하에 건조시켜 중간체 8c를 회백색 고체 (3.75 g, 1.88 mmol)로서 수득하였다.
·실시예 8의 제조
(고리화 및 정제)
중간체 8c (3.75 g, 1.88 mmol)를 H2O (375 mL) 중에 용해시켰다. AcOH (45.1 mL, 2.26 mmol) 중 50 mM I2의 용액을 교반된 용액에 한 번에 첨가하고, 용액을 실온에서 10분 동안 교반하였다. H2O (5.64 mL, 2.82 mmol) 중 0.5 M 아스코르브산을 첨가하여 과량의 I2를 켄칭하였다. 용액을 거의 농축 건조시켰다. 반응을 2부분: 0.188 mmol 규모 및 1.69 mmol 규모로 수행하였다. 조 물질을 정제를 위해 합하였다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 실시예 8을 백색 고체 (1.53 g, 0.767 mmol)로서 수득하였다.
순수한 생성물을 분석용 HPLC (분석 방법 C: tR=3.43분) 및 UPLC-MS (분석 방법 B; 측정치: [M+3]3+=512.4; 계산치: [M+3]3+=512.6)에 의해 분석하였다.
대안적으로는, 실시예 8의 조 폴리펩티드를 물 중에 용해시키고 (물 500mL/폴리펩티드 mmol), 이온 교환 수지 (즉, 앰버라이트(Amberlite) IRA-67 (아세테이트-형태) (200g/폴리펩티드 mmol)의 보조에 의해 아세테이트 염으로 전환시키고, 정제용 HPLC (다이소겔(Daisogel)로부터의 C8 변형된 역상 실리카 겔, 구배: ACN/H2O: 3% ACN 및 97% [0.3% 아세트산/물 혼합물]에서 12% ACN 및 88% [0.3% 아세트산/물 혼합물])에 의해 정제하고, 동결건조시켜 실시예 8의 아세테이트 염을 백색 고체 (60-100% 수율)로서 수득하였다.
염 화학량론을 아세트산 함량 (이온 크로마토그래피) 및 수분 함량의 분석에 기반하여 평가하였고, 1:3 내지 1:4 (폴리펩티드:아세테이트)의 범위로 결정하였다.
실시예 26 pE-R-P-R-L-C-H-K-G-P-Nle-C-K(라우로일)-OH (서열식별번호: 33) (디술피드 C6-C12)의 합성
하기 실시예 26은 서열식별번호: 33을 개시한다.
Figure 112014079668487-pct00052
·중간체 26a의 제조
(Fmoc-K(ivDde)-OH로의 2-클로로트리틸 클로라이드 수지의 로딩, Fmoc 제거 및 수지의 로딩의 결정)
2-클로로트리틸 클로라이드 수지 (1.00 g, 1.60 mmol)를 상기에 기재된 일반적 절차와 유사하게 DCM (10 mL) 및 DIPEA (1.12 mL, 6.40 mmol) 중 Fmoc-K(ivDde)-OH (1.84 g, 3.20 mmol)의 용액과 반응시켜 중간체 26a (1.39 g; 로딩 = 0.75 mmol/g)를 수득하였다.
·중간체 26b의 제조
(선형 펩티드의 조립)
중간체 26a (134 mg, 0.100 mmol)를 프리루드™ 펩티드 합성기 상에서 고체 상 펩티드 합성에 적용하였다. 커플링을 하기와 같이 수행하였다:
Figure 112014079668487-pct00053
·중간체 26c의 제조
(ivDde의 제거 및 라우르산의 커플링)
중간체 26b (0.100 mmol)를 THF (3x)로 세척하였다. THF (12 mL) 중 히드라진 1수화물 (0.245 ml, 5.00 mmol)의 용액을 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 용액을 여과하였다. 상기 단계를 2회 더 수행하였다. 수지를 DMA (3x), DCM (3x), DMA (2x), DCM (5x) 및 DMA (3x)로 세척하였다. 라우르산 (100 mg, 0.500 mmol) 및 HCTU (207 mg, 0.500 mmol)를 NMP (3 mL) 및 DIPEA (0.087 ml, 0.500 mmol) 중에 용해시켰다. 5분 활성화 후에, 용액을 수지에 첨가하고, 현탁액을 16시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 반응 혼합물을 여과하고, 수지를 DMA (3x), DCM (3x), DMA (3x), DCM (5x)으로 세척하여 중간체 26c를 수득하였다.
·중간체 26d의 제조
(보호기 제거를 수반하는 수지로부터의 절단에 이은 정제)
95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (3 mL)의 혼합물을 중간체 26c (0.100 mmol)에 첨가하고, 현탁액을 2시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 새로운 절단 용액 (3 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시킨 다음, 절단 용액을 여과하였다. 새로운 용액 (3 mL)을 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하였다. 합한 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (35 mL)의 혼합물에 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (10 mL)로 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 고체를 고진공 하에 건조시켰다.
조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 중간체 26d를 백색 고체 (74.1 mg, 0.034 mmol)로서 수득하였다.
·실시예 26의 제조
(고리화 및 정제)
중간체 2d (74.1 mg, 0.034 mmol)를 H2O/DMSO (9:1) (74 mL) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 40시간 동안 실온에서 교반한 다음, 진공 하에 농축 건조시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 실시예 26을 백색 고체 (60.0 mg; 0.028 mmol)로서 수득하였다.
순수한 생성물을 분석용 HPLC (분석 방법 A: tR=5.11분) 및 UPLC-MS (분석 방법 B; 측정치: [M+3]3+=567.0; 계산치: [M+3]3+=567.0)에 의해 분석하였다.
실시예 28 pE-R-P-C-L-C-C-K-G-P-Nle-C-F-OH (서열식별번호: 35) (디술피드 C4-C7 및 C6-C12) 합성
하기 실시예 28은 서열식별번호: 35를 개시한다.
Figure 112014079668487-pct00054
·중간체 28a의 제조
(Fmoc-F-OH로의 2-클로로트리틸 클로라이드 수지의 로딩, Fmoc 제거 및 수지의 로딩의 결정)
2-클로로트리틸 클로라이드 수지 (10.0 g, 16.0 mmol)를 상기에 기재된 일반적 절차와 유사하게 DCM (100 mL) 및 DIPEA (11.2 mL, 64.0 mmol) 중 Fmoc-F-OH (6.20 g, 16.0 mmol)의 용액과 반응시켜 중간체 28a (11.6 g, 로딩 = 0.87 mmol/g)를 수득하였다.
·중간체 28b의 제조
(선형 펩티드의 조립)
중간체 28a (115 mg, 0.100 mmol)를 프리루드™ 펩티드 합성기 상에서 고체 상 펩티드 합성에 적용하였다. 커플링을 하기와 같이 수행하였다:
Figure 112014079668487-pct00055
·중간체 28c의 제조
(부분적 보호기 제거를 수반하는 수지로부터의 절단)
중간체 28b (0.100 mmol)를 DCM (4x)으로 조심스럽게 세척하였다. 95% 수성 TFA/EDT (4:1) (0.750 mL)의 혼합물을 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. TFA/H2O (95:5) (2.18 mL)의 혼합물 및 TIS (75 μL)를 현탁액에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 계속 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (3 mL)의 혼합물을 수지에 첨가하였다. 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시키고, 절단 용액을 여과하였다. 새로운 용액 (3 mL)을 첨가하고, 현탁액을 1시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하였다. 합한 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (35 mL)에 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (10 mL)로 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 세척 단계를 1회 반복하였다. 잔류물을 고진공 하에 건조시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 중간체 28c를 백색 고체 (51.1 mg, 0.028 mmol)로서 수득하였다.
·실시예 28의 제조
(2개의 디술피드의 원-폿(one-pot) 형성)
중간체 28c (51.1 mg, 0.028 mmol)를 AcOH (48 mL) 및 H2O (12 mL) 중에 용해시켰다. AcOH (1.12 mL, 56 μmol) 중 I2의 50 mM 용액을 첨가하고, 황색 용액을 실온에서 교반하였다. 추가로 AcOH (5.61 mL, 0.281 mmol) 중 50 mM I2를 4시간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 21시간 후에, 반응 혼합물을 진공 하에 2 mL로 농축시키고, H2O (6 mL) 중 1 M 아스코르브산을 첨가하여 과량의 I2를 켄칭하였다. 생성물을 정제용 HPLC에 의해 단리시키고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 실시예 28을 백색 고체 (19.3 mg, 0.012 mmol)로서 수득하였다.
순수한 생성물을 분석용 HPLC (분석 방법 A: tR=4.16분) 및 UPLC-MS (분석 방법 C; 측정치: [M+2]2+=723.7; 계산치: [M+2]2+=723.8)에 의해 분석하였다.
실시예 62 pE-R-P-R-L-C-H-K-G-P-Nle-C-F-NH2 (서열식별번호: 69) (디술피드 C6-C12)의 합성
하기 실시예 62는 서열식별번호: 69를 개시한다.
Figure 112014079668487-pct00056
·중간체 62a의 제조
(선형 펩티드의 조립)
Fmoc 보호된 링크-아미드-AM-PS-수지 (217 mg, 0.100 mmol)를 프리루드™ 펩티드 합성기 상에서 고체 상 펩티드 합성에 적용하였다. 커플링을 하기와 같이 수행하였다:
Figure 112014079668487-pct00057
·중간체 62b의 제조
(보호기 제거를 수반하는 수지로부터의 절단)
95% 수성 TFA/EDT/TIS (95:2.5:2.5) (3 mL)의 혼합물을 중간체 62a (0.1 mmol)에 첨가하고, 현탁액을 1.5시간 동안 실온에서 진탕시켰다. 절단 용액을 여과하고, 새로운 절단 용액 (2 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 45분 동안 실온에서 진탕시킨 다음, 절단 용액을 여과하였다. 새로운 용액 (2 mL)을 첨가하고, 현탁액을 45분 동안 실온에서 진탕시켰다. 합한 절단 용액을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (35 mL)의 혼합물에 부어 침전물을 제공하였다. 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 잔류물을 차가운 헵탄/디에틸 에테르 (1:1) (10 mL)로 세척하고, 현탁액을 원심분리하고, 상청액을 따라내었다. 고체를 고진공 하에 건조시켰다. 조 생성물 중간체 62b를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
·실시예 62의 제조
(고리화 및 정제)
중간체 62b (0.100 mmol)를 H2O (20 mL) 중에 용해시켰다. AcOH (2.4 mL, 0.120 mmol) 중 50 mM I2의 용액을 교반된 용액에 한 번에 첨가하고, 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. H2O (0.30 mL, 0.300 mmol) 중 0.5 M 아스코르브산을 첨가하여 과량의 I2를 켄칭하였다. 용액을 거의 농축 건조시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, ACN/H2O로부터 동결건조시켜 실시예 62를 백색 고체 (50.5 mg, 0.025 mmol)로서 수득하였다.
순수한 생성물을 분석용 HPLC (분석 방법 C: tR=3.22분) 및 UPLC-MS (분석 방법 C; 측정치: [M+3]3+=512.3; 계산치: [M+3]3+=512.3)에 의해 분석하였다.
다른 실시예를 유사하게 합성하였다:
·실시예 2 내지 4는 실시예 1과 유사하게 합성하였다.
·실시예 6은 실시예 5와 유사하게 합성하였다.
·실시예 9 내지 25, 및 27은 실시예 26과 유사하게 합성하였다.
·실시예 29는 실시예 28과 유사하게 합성하였다.
·실시예 30 내지 61은 실시예 8과 유사하게 합성하였다.
·실시예 63은 실시예 62와 유사하게 합성하였다.
실시예 64: 위치 6 및 12에서의 시스테인 사이에 -S-CH2-C(O)CH2-S- 연결 [C6-C12]을 갖는 pE-R-P-R-L-C-H-K-G-P-Nle-C-F-OH (서열식별번호: 71)
분석 방법
방법 D (HRMS);
용리액 A: 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, 용리액 B: 아세토니트릴 + 0.04% 포름산.
구배: 4.4분 내 2 → 98% B - 유량 1.0mL/분. 칼럼: 액퀴티 CSH 1.7μm 2.1*50mm 50℃
Figure 112014079668487-pct00058
실시예 8 ((S)-2-((3S,6R,11R,14S,17S,25aS)-14-((1H-이미다졸-5-일)메틸)-17-(4-아미노부틸)-3-부틸-11-((S)-2-((S)-5-구아니디노-2-((S)-1-((S)-5-구아니디노-2-((S)-5-옥소피롤리딘-2-카르복스아미도)펜타노일)피롤리딘-2-카르복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜탄아미도)-1,4,12,15,18,21-헥사옥소도코사히드로-1H-피롤로[2,1-j][1,2,5,8,11,14,17,20]디티아헥사아자시클로트리코신-6-카르복스아미도)-3-페닐프로판산) (12 mg, 6.76 μmol)을 50mM 인산나트륨 완충제 pH6.5 (1.5 ml) 중에 용해시키고, 이것에 TCEP HCl ((트리스(2-카르복시에틸)포스핀) (2.91 mg, 10.13 μmol)을 실온에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 용액에 1,3-디클로로프로판-2-온 (4.29 mg, 0.034 mmol)을 실온에서 첨가하고, 이것을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 0.1% TFA를 포함하는 15-60% MeCN/물로 용리시키면서 RP-HPLC로 실시예 64 ((S)-2-((3S,6R,14R,17S,20S,28aS)-17-((1H-이미다졸-5-일)메틸)-20-(4-아미노부틸)-3-부틸-14-((S)-2-((S)-5-구아니디노-2-((S)-1-((S)-5-구아니디노-2-((S)-5-옥소피롤리딘-2-카르복스아미도)펜타노일)피롤리딘-2-카르복스아미도)펜타아미도)-4-메틸펜탄아미도)-1,4,10,15,18,21,24-헵타옥소헥사코사히드로피롤로[2,1 i][1,23,4,7,10,13,16,19]디티아헥사아자시클로헥사코신-6-카르복스아미도)-3-페닐프로판산) (6 mg, 2.93 μmol, 43.4 % 수율)를 수득하였다. HRMS (방법 D) [M+1]; 1590.7911 (관측치), 1590.7912 (예상치). 체류 시간; 3.08분.
실시예 65: 위치 6 및 12에서의 2개의 시스테인 사이에 모노술피드 연결 [C6-C12]을 갖는 pE-R-P-R-L-C-H-K-G-P-Nle-C-F-OH (서열식별번호: 72)
Figure 112014079668487-pct00059
PBS pH 9.2 완충제 (1 mL) 중 실시예 8 (S)-2-((3S,6R,11R,14S,17S,25aS)-14-((1H-이미다졸-5-일)메틸)-17-(4-아미노부틸)-3-부틸-11-((S)-2-((S)-5-구아니디노-2-((S)-1-((S)-5-구아니디노-2-((S)-5-옥소피롤리딘-2-카르복스아미도)펜타노일)피롤리딘-2-카르복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜탄아미도)-1,4,12,15,18,21-헥사옥소도코사히드로-1H-피롤로[2,1-j][1,2,5,8,11,14,17,20]디티아헥사아자시클로트리코신-6-카르복스아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염 (30 mg, 0.15 mmol) 및 N,N,N',N',N",N"-헥사메틸포스핀트리아민 (12.3 mg, 0.75 mmol)의 혼합물을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC (선파이어 C18, 물/MeCN 중 0.1% TFA)에 의해 2회 정제하고, 생성물 분획을 백색 분말 (실시예 65: 4 mg, 13.4%)로 동결건조시켰다. [M+2H]2+ (계산치)=752.88, [M+2H]2+ (측정치)=752.40, [M+3H]3+ (계산치)=502.26, [M+3H]3+ (측정치)=501.94. HPLC (분석 방법 C), Tr 분=6.93.
실시예 66: 위치 6 및 12에서의 2개의 시스테인 사이에 -S-CH2-C(=Z)-CH2-S- 연결 [C6-C12]을 갖고, Z는 하기와 같은 것인, pE-R-P-R-L-C-H-K-G-P-Nle-C-F-OH (서열식별번호: 73)
Figure 112014079668487-pct00060
분석 방법
방법 D (HRMS);
용리액 A: 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, 용리액 B: 아세토니트릴 + 0.04% 포름산.
구배: 4.4분 내 2 → 98% B - 유량 1.0mL/분. 칼럼: 액퀴티 CSH 1.7μm 2.1*50mm 50℃
Figure 112014079668487-pct00061
실온에서 100nM Na 포스페이트 완충제 pH6.0 (1ml) 중 실시예 64 ((S)-2-((3S,6R,14R,17S,20S,28aS)-17-((1H-이미다졸-5-일)메틸)-20-(4-아미노부틸)-3-부틸-14-((S)-2-((S)-5-구아니디노-2-((S)-1-((S)-5-구아니디노-2-((S)-5-옥소피롤리딘-2-카르복스아미도)펜타노일)피롤리딘-2-카르복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜탄아미도)-1,4,10,15,18,21,24-헵타옥소헥사코사히드로피롤로[2,1-i][1,23,4,7,10,13,16,19]디티아헥사아자시클로헥사코신-6-카르복스아미도)-3-페닐프로판산) (11.5 mg, 5.62 μmol) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산을 포함하는 (S)-1-(아미노옥시)-19-카르복시-2,7,16,21-테트라옥소-9,12-디옥사-3,6,15,20-테트라아자옥타트리아콘탄-38-산 화합물 (1:1) (9.19 mg, 0.011 mmol)의 용액에 아닐린 (2.051 μl, 0.022 mmol)을 첨가하였다. DMSO (50 μl)를 첨가하여 균질 용액을 제공하였다. 상기 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 0.1% TFA를 포함하는 15-60% MeCN/물로 용리시키면서 RP-HPLC로 실시예 66 (1-((Z)-((3S,6R,14R,17S,20S,28aS)-17-((1H-이미다졸-5-일)메틸)-20-(4-아미노부틸)-3-부틸-6-((S)-1-카르복시-2-페닐에틸카르바모일)-14-((S)-2-((S)-5-구아니디노-2-((S)-1-((S)-5-구아니디노-2-((S)-5-옥소피롤리딘-2-카르복스아미도)펜타노일)피롤리딘-2-카르복스아미도)펜탄아미도)-4-메틸펜탄아미도)-1,4,15,18,21,24-헥사옥소도코사히드로피롤로[2,1-i][1,23,4,7,10,13,16,19]디티아헥사아자시클로헥사코신-10(1H,9H,11H)-일리덴)아미노옥시)-19-카르복시-2,7,16,21-테트라옥소-9,12-디옥사-3,6,15,20-테트라아자옥타트리아콘탄-38-산) (4.5 mg, 1.646 μmol, 29.3 % 수율)을 수득하였다. HRMS (방법 D) [(M+3)/3]; 759.7487 (관측치), 759.7462 (예상치). 체류 시간; 4.12분.
2,2,2-트리플루오로아세트산을 포함하는 (S)-1-(아미노옥시)-19-카르복시-2,7,16,21-테트라옥소-9,12-디옥사-3,6,15,20-테트라아자옥타트리아콘탄-38-산 화합물 (1:1)의 합성:
Figure 112014079668487-pct00062
100mL 유리용기 중의 1-클로로트리틸 클로라이드 수지 (1.55mmol/g) (0.500 g, 0.775 mmol)를 DCM (20 ml) 중에서 30분 동안 팽창시키고, 이를 배수시켰다. NMP (7 ml)/DCM (4 ml) 중 2-(아미노옥시)아세트산 헤미히드로클로라이드 (0.338 g, 3.10 mmol) 및 DIPEA (1.354 ml, 7.75 mmol)의 현탁액을 수지에 첨가하고, 이것을 5시간 동안 진탕시켰다. 용매를 배수시켰다. 수지를 DCM/MeOH/DIPEA (17/2/1, 40mL), DCM (50ml), NMP (50ml), DCM (50ml)으로 각각 헹구었다. 생성된 수지를 밤새 KOH/NaOH로 건조시켰다.
Figure 112014079668487-pct00063
100mL 유리용기 중의 수지 (0.775 mmol)를 30분 동안 DCM (20 ml) 중에서 팽창시키고, 이를 배수시켰다. NMP (8 ml) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 2-아미노에틸카르바메이트 히드로클로라이드 (0.081 g, 0.775 mmol), HOAt (0.422 g, 3.10 mmol) 및 DIPEA (1.354 ml, 7.75 mmol)의 현탁액에 NMP (2.5 ml) 중 HBTU (1.176 g, 3.10 mmol)를 첨가하고, 이것을 실온에서 2시간 동안 진탕시켰다. 용매를 배수시켰다. 수지를 NMP (10ml), DCM (10ml)으로 각각 헹구었다. 생성된 수지를 밤새 건조시켰다.
Figure 112014079668487-pct00064
수지 (0.775 mmol)를 반응 용기 내에 충전하였다. 20% 피페리딘/NMP 10mL를 수지 내에 첨가하고, 현탁액을 5분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 배수시킨 후에, 추가의 20% 피페리딘/NMP 10mL를 첨가하고, 실온에서 20분 동안 교반하였다. NMP (8 ml) 중 HOAt (0.316 g, 2.325 mmol) 및 1-(9H-플루오렌-9-일)-3-옥소-2,7,10-트리옥사-4-아자도데칸-12-산 (0.896 g, 2.325 mmol)의 용액을 수지 내에 첨가하고, NMP (1 ml) 중 DIC (0.362 ml, 2.325 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 수지를 여과하고, NMP (10 ml)로 4회 헹구었다. 생성된 수지를 밤새 건조시켰다.
Figure 112014079668487-pct00065
수지 (0.775 mmol)를 반응 용기 내에 충전하였다. 20% 피페리딘/NMP 10mL를 수지 내에 첨가하고, 현탁액을 5분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 배수시킨 후에, 추가의 20% 피페리딘/NMP 10mL를 첨가하고, 실온에서 20분 동안 교반하였다. NMP (8 ml) 중 HOAt (0.316 g, 2.325 mmol) 및 Fmoc-Glu-OtBu (0.989 g, 2.325 mmol)의 용액을 수지 내에 첨가하고, NMP (2.00 ml) 중 DIC (0.362 ml, 2.325 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 수지를 여과하고, NMP (10 ml)로 4회 헹구었다. 생성된 수지를 밤새 건조시켰다.
Figure 112014079668487-pct00066
수지 (0.775 mmol)를 반응 용기 내에 충전하였다. 20% 피페리딘/NMP 10mL (0.775 mmol)를 수지 내에 첨가하고, 현탁액을 5분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 배수시킨 후에, 추가의 20% 피페리딘/NMP 10 mL (0.775 mmol) (0.775 mmol)를 첨가하고, 실온에서 20분 동안 교반하였다. NMP (8 ml) 중 18-tert-부톡시-18-옥소옥타데칸산 (0.862 g, 2.325 mmol) 및 HOAt (0.316 g, 2.325 mmol)의 용액을 수지 내에 첨가하고, NMP (2.00 ml) 중 DIC (0.362 ml, 2.325 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 수지를 여과시키고, NMP (10 ml)로 4회 헹구었다. 생성된 수지를 밤새 건조시켰다.
Figure 112014079668487-pct00067
수지 (0.775 mmol)를 절단 칵테일 (TFA/TIPS/물 = 95/2.5/2.5) 20mL로 실온에서 1.5시간 동안 처리하였다. 수지를 여과에 의해 제거하고, TFA로 헹구었다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 0.1% TFA를 포함하는 15-50% MeCN/물로 용리시키면서 C18 칼럼을 포함하는 RP-HPLC로 2,2,2-트리플루오로아세트산을 포함하는 (S)-1-(아미노옥시)-19-카르복시-2,7,16,21-테트라옥소-9,12-디옥사-3,6,15,20-테트라아자옥타트리아콘탄-38-산 (1:1) (207 mg, 0.294 mmol, 37.9% 수율)을 수득하였다. HRMS (방법 D) [M+1]; 704.4459 (관측치), 704.4486 (예상치). 체류 시간; 2.63분.
실시예 1 내지 66의 폴리펩티드는 상기에 기재된 바와 같이, 및/또는 통상의 정제 기술, 예컨대 용매 추출, 칼럼 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피 및 재결정화의 조합에 의해 정제 및 단리될 수 있다. 상기 실시예에서 단리된 폴리펩티드가 유리 화합물인 경우에는, 그것을 공지된 방법에 의해 적합한 염으로 전환시킬 수 있다. 따라서, 실시예 1 내지 66의 펩티드를 폴리펩티드:염 비가 1:1 내지 1:4 범위이도록 그의 상응하는 염 (예를 들어, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 술페이트, 포스페이트, 시트레이트, 아세테이트, 락테이트 또는 주사에 적합한 또 다른 제약 염)으로 전환시킬 수 있다. 예를 들어, 실시예 1 내지 66의 폴리펩티드를 물 중에 용해시키고, 이온-교환 수지를 사용하여 염으로 전환시킬 수 있다. 반대로, 단리된 펩티드가 염인 경우에는, 그것을 공지된 방법에 의해 유리 펩티드로, 또는 이온-교환 수지의 보조에 의해 직접적으로 다양한 염으로 전환시킬 수 있다.
하기 실시예의 폴리펩티드는 APJ 수용체 효력에 대해 약 0.01 nM 내지 약 1100 nM 범위의 EC50 값을 갖는 것으로 밝혀졌다. 하기 실시예의 폴리펩티드는 2분 초과, 5분 초과, 10분 초과, 20분 초과, 50분 초과, 및 60분 초과의 혈장 안정성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 폴리펩티드는 APJ 수용체의 효능제로서 유용하고, 따라서 APJ 수용체의 활성화에 반응성인 질환 및 상태, 예컨대 본원에 개시되어 있는 질환의 치료에 유용하다는 것을 알 수 있다.
이에 따라, 본 발명의 예시적 실시양태를 기재하였지만, 그 안의 개시내용은 단지 예시적인 것이고, 본 발명의 범위 내에서 다른 다양한 변경, 응용 및 변형이 이루어질 수 있다는 것을 당업자는 주의해야 한다. 따라서, 본 발명은 그 안에 예시된 바와 같은 구체적 실시양태에 제한되지 않는다.
SEQUENCE LISTING <110> NOVARTIS AG <120> SYNTHETIC APELIN MIMETICS FOR THE TREATMENT OF HEART FAILURE <130> PAT054961-WO-PCT <140> PCT/IB2013/050666 <141> 2013-01-25 <150> 61/731,697 <151> 2012-11-30 <150> 61/717,760 <151> 2012-10-24 <150> 61/591,557 <151> 2012-01-27 <160> 94 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="PyroGlu" or "Gln" or "Isn" or " " <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> /replace="Cha" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or "Dab" or "Glu" <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> /replace="Aib" or "Phe" or "Lys(Lauroyl)" or "Lys(palmitoyl)" <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> /replace="Phe" or "4-amino-Isn" <220> <221> VARIANT <222> (9)..(9) <223> /replace="Aib" <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Nle <220> 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sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 78 Arg Arg Pro Arg Leu Cys His Lys Gly Pro Met Cys Phe 1 5 10 <210> 79 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="PyroGlu" or "Isn" or "Gln" or "Ala" or "Lys" or "5-amino-valeric acid" or " " <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> /replace="Cha" or "Ala" or "D-Leu" or "N-Me-Leu" or "Lys" or "Asp" or "4-PhF" or "Phe" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or "Dab" or "Glu" <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> /replace="D-His" or "Ala" or "N-Me-Ala" or "D-Ala" or "Aib" or "Lys" or "Nal" or "Phe" or "Pro" or "Dap" or "Asn" or "Glu" or "Cys" or "Lys(Lauroyl)" or "Lys(palmitoyl)" <220> <221> VARIANT <222> (11)..(11) <223> /replace="D-Nle" or "Nle" or "N-Me-Nle" or "M(O)" or 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Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="PyroGlu" or "Isn" or "Gln" or "Ala" or "Lys" or "5-amino-valeric acid" or " " <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Lys" or "His" or "homoPhe" or "HomoLys" or "Phe" or "Glu" or "Orn" <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> /replace="Ala" or "D-Ala" or "D-Pro" or "4-PhP" or "Lys" or "Asp" or "pipecolic acid" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Phe" or "Glu" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> /replace="Cha" or "Ala" or "D-Leu" or "N-Me-Leu" or "Lys" or "Asp" or "4-PhF" or "Phe" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or "Dab" or "Glu" <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> /replace="D-His" or "Ala" or "N-Me-Ala" or "D-Ala" or "Aib" or "Lys" or "Nal" or "Phe" or "Pro" or "Dap" or "Asn" or "Glu" or "Cys" or 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variant positions" <400> 90 Arg Arg Pro Arg Leu Cys His Lys Gly Pro Met Cys Phe 1 5 10 <210> 91 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="PyroGlu" or "Isn" or "Gln" or "Ala" or "Lys" or "5-amino-valeric acid" or " " <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Lys" or "His" or "homoPhe" or "HomoLys" or "Phe" or "Glu" or "Orn" <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> /replace="Ala" or "D-Ala" or "D-Pro" or "4-PhP" or "Lys" or "Asp" or "pipecolic acid" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Phe" or "Glu" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> /replace="Cha" or "Ala" or "D-Leu" or "N-Me-Leu" or "Lys" or "Asp" or "4-PhF" or "Phe" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or 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sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 91 Arg Arg Pro Arg Leu Cys His Lys Gly Pro Met Cys Phe 1 5 10 <210> 92 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="PyroGlu" or "Isn" or "Gln" or "Ala" or "Lys" or "5-amino-valeric acid" or " " <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Lys" or "His" or "homoPhe" or "HomoLys" or "Phe" or "Glu" or "Orn" <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> /replace="Ala" or "D-Ala" or "D-Pro" or "4-PhP" or "Lys" or "Asp" or "pipecolic acid" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Phe" or "Glu" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> /replace="Cha" or "Ala" or "D-Leu" or "N-Me-Leu" or "Lys" or "Asp" or "4-PhF" or "Phe" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> 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"His" or "Glu" or "Lys(Lauroyl)" or "Lys(palmitoyl)" or " " <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 92 Arg Arg Pro Arg Leu Cys His Lys Gly Pro Met Cys Phe 1 5 10 <210> 93 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="PyroGlu" or "Isn" or "Gln" or "Ala" or "Lys" or "5-amino-valeric acid" or " " <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Lys" or "His" or "homoPhe" or "HomoLys" or "Phe" or "Glu" or "Orn" <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> /replace="Ala" or "D-Ala" or "D-Pro" or "4-PhP" or "Lys" or "Asp" or "pipecolic acid" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Phe" or "Glu" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> /replace="Cha" or "Ala" or "D-Leu" or "N-Me-Leu" or "Lys" or "Asp" or "4-PhF" or "Phe" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or "Dab" or "Glu" <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> /replace="D-His" or "Ala" or "N-Me-Ala" or "D-Ala" or "Aib" or "Lys" or "Nal" or "Phe" or "Pro" or "Dap" or "Asn" or "Glu" or "Cys" or "Lys(Lauroyl)" or "Lys(palmitoyl)" <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> /replace="D-Lys" or "Phe" or "D-Phe" or "Ala" or "homoPhe" or "N-Me-Arg" or "Glu" or "4-amino-Isn" <220> <221> VARIANT <222> (10)..(10) <223> /replace="Ala" or "D-Pro" or "4-PhP" or "pipecolic acid" <220> <221> VARIANT <222> (11)..(11) <223> /replace="D-Nle" or "Nle" or "N-Me-Nle" or "M(O)" or "Ala" or "Phe" or "Tyr" or "Leu" or "Lys" or "3-PyA" or "Cha" <220> <221> VARIANT <222> (12)..(12) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or "Dab" or "Glu" or "Phe" or "D-Phe" <220> <221> VARIANT <222> (13)..(13) <223> /replace="D-Phe" or "N-Me-Phe" or "Nal" or "D-Nal" or "3-Br-Phe" or "(S)-Beta-3-Phe" or "Ile" or "Ala" or "D-Ala" or "Lys" or "Dap" or "His" or "Glu" or "Lys(Lauroyl)" or "Lys(palmitoyl)" or " " <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 93 Arg Arg Pro Arg Leu Cys His Lys Gly Pro Met Cys Phe 1 5 10 <210> 94 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="PyroGlu" or "Isn" or "Gln" or "Ala" or "Lys" or "5-amino-valeric acid" or " " <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Lys" or "His" or "homoPhe" or "HomoLys" or "Phe" or "Glu" or "Orn" <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> /replace="Ala" or "D-Ala" or "D-Pro" or "4-PhP" or "Lys" or "Asp" or "pipecolic acid" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> /replace="Ala" or "D-Arg" or "N-Me-Arg" or "Phe" or "Glu" or "Cys" <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> /replace="Cha" or "Ala" or "D-Leu" or "N-Me-Leu" or "Lys" or "Asp" or "4-PhF" or "Phe" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or "Dab" or "Glu" <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> /replace="D-His" or "Ala" or "N-Me-Ala" or "D-Ala" or "Aib" or "Lys" or "Nal" or "Phe" or "Pro" or "Dap" or "Asn" or "Glu" or "Cys" or "Lys(Lauroyl)" or "Lys(palmitoyl)" <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> /replace="D-Lys" or "Phe" or "D-Phe" or "Ala" or "homoPhe" or "N-Me-Arg" or "Glu" or "4-amino-Isn" <220> <221> VARIANT <222> (9)..(9) <223> /replace="N-Me-Gly" or "Ala" or "Asp" or "Leu" or "Arg" or "Aib" <220> <221> VARIANT <222> (10)..(10) <223> /replace="Ala" or "D-Pro" or "4-PhP" or "pipecolic acid" <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Nle <220> <221> VARIANT <222> (12)..(12) <223> /replace="D-Cys" or "homoCys" or "D-homoCys" or "Lys" or "Asp" or "Orn" or "Dab" or "Glu" or "Phe" or "D-Phe" <220> <221> VARIANT <222> (13)..(13) <223> /replace="D-Phe" or "N-Me-Phe" or "Nal" or "D-Nal" or "3-Br-Phe" or "(S)-Beta-3-Phe" or "Ile" or "Ala" or "D-Ala" or "Lys" or "Dap" or "His" or "Glu" or "Lys(Lauroyl)" or "Lys(palmitoyl)" or " " <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 94 Arg Arg Pro Arg Leu Cys His Lys Gly Pro Leu Cys Phe 1 5 10

Claims (36)

  1. 하기 화학식 II를 갖는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
    <화학식 II>
    Figure 112019132393780-pct00088

    상기 식에서,
    X1은 부재하거나, pE, R, Q 또는 Isn이고;
    X5는 L 또는 Cha이고;
    X7은 H, Aib, F, K(라우로일) 또는 K(팔미토일)이고;
    X8은 K, F 또는 4-아미노-Isn이고;
    X9는 G 또는 Aib이고;
    X11은 Nle 또는 Cha이고;
    X13은 부재하거나, 또는 F, f, K(라우로일) 또는 K(팔미토일)이고;
    X6 및 X12는 독립적으로 C, c, hC 및 D-hC로부터 선택된 천연 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 X6 및 X12의 측쇄는 공유 결합을 통해 함께 연결되어 디술피드 결합을 형성하고;
    여기서,
    Nle는 L-노르류신이고;
    D-hC는 D-호모시스테인이고;
    hC는 L-호모시스테인이고;
    Aib는 α-아미노이소부티르산이고;
    Cha는 (S)-β-시클로헥실알라닌이고;
    Isn은 이소니페코티노일이고;
    pE는 L-피로글루탐산이다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식 III을 갖는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
    <화학식 III>
    Figure 112019132393780-pct00089
  3. 제1항에 있어서, 하기 화학식 IV를 갖는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
    <화학식 IV>
    Figure 112019132393780-pct00090
  4. 제1항에 있어서, 하기 화학식 V를 갖는 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
    <화학식 V>
    Figure 112019132393780-pct00091
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X1이 pE인 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X13이 F인 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X5가 L인 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, X7이 H인 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X11이 Nle인 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
  10. 제1항에 있어서,
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 15);
    pE-R-P-R-L-C*-Aib-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 16);
    pE-R-P-R-L-C*-Aib-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 17);
    H-Isn-R-P-R-L-C*-Aib-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 18);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-페네틸아민 (서열식별번호: 19);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 20);
    pE-R-P-R-Cha-C*-H-K-G-P-Cha-C*-F-OH (서열식별번호: 21);
    pE-R-P-R-L-C*-F-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 22);
    H-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 23);
    H-R-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 24);
    H-Isn-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 25);
    pE-R-P-R-L-C*-H-F-G-P-Nle-C*-페네틸아민 (서열식별번호: 26);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-Aib-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 27);
    pE-R-P-R-L-C*-H-(4-NH-Isn)-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 28);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-K(팔미토일)-OH (서열식별번호: 29);
    pE-R-P-R-L-C*-K(팔미토일)-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 30);
    팔미토일-O2Oc-Q-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 31);
    라우로일-O2Oc-Q-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 32);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-K(라우로일)-OH (서열식별번호: 33);
    pE-R-P-R-L-C*-K(라우로일)-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 34);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-NH2 (서열식별번호: 70);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-NH2 (서열식별번호: 69);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-OH (서열식별번호: 57);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-hC*-F-OH (서열식별번호: 58);
    pE-R-P-R-L-hC*-H-K-G-P-Nle-hC*-F-OH (서열식별번호: 59);
    pE-R-P-R-L-c*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 60);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-(D-hC)*-F-OH (서열식별번호: 61);
    pE-R-P-R-L-(D-hC)*-H-K-G-P-Nle-(D-hC)*-F-OH (서열식별번호: 62);
    미리스토일O2OcO2OcQ-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 65);
    미리스토일O2OcO2OcO2OcQ-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 66);
    미리스토일O2OcO2OcO2OcO2OcQ-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C-f-OH (서열식별번호: 67);
    pE-R-P-R-L-C*H-K-G-P-Nle-c*-F-OH (서열식별번호: 63);
    pE-R-P-R-L-c*-H-K-G-P-Nle-c*-F-OH (서열식별번호: 64); 및
    pE-R-P-R-L-C*-H-K(Myr)-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 68);
    로부터 선택되며; 여기서 "*"로 표지된 2개의 아미노산은 그들의 측쇄를 통해 디술피드 결합을 형성하는 아미노산을 나타내는 것인 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
  11. 제10항에 있어서,
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 15);
    pE-R-P-R-L-C*-Aib-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 16);
    pE-R-P-R-L-C*-Aib-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 17);
    H-Isn-R-P-R-L-C*-Aib-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 18);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-페네틸아민 (서열식별번호: 19);
    pE-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-f-OH (서열식별번호: 20);
    pE-R-P-R-Cha-C*-H-K-G-P-Cha-C*-F-OH (서열식별번호: 21);
    pE-R-P-R-L-C*-F-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 22);
    H-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 23);
    H-R-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 24);
    H-Isn-R-P-R-L-C*-H-K-G-P-Nle-C*-F-OH (서열식별번호: 25); 및
    pE-R-P-R-L-C*-H-F-G-P-Nle-C*-페네틸아민 (서열식별번호: 26)
    으로부터 선택되며; 여기서 2개의 시스테인 아미노산 C*의 측쇄는 함께 디술피드 결합을 형성하는 것인 폴리펩티드, 또는 폴리펩티드의 아미드, 에스테르 또는 염.
  12. 치료 유효량의 제1항 내지 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염을 포함하는, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물로서, 상기 질환 또는 장애가 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다(Brugada) 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병, 임신성 당뇨병, 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상, 일광화상 및 전자간증으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  13. 치료 유효량의 제1항 내지 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 1종 이상의 치료 활성 공동-작용제를 포함하는, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 조합물로서, 상기 질환 또는 장애가 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다(Brugada) 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병, 임신성 당뇨병, 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상, 일광화상 및 전자간증으로부터 선택되는 것인 조합물.
  14. 제13항에 있어서, 공동-작용제가 수축촉진제, 베타 아드레날린성 수용체 차단제, HMG-Co-A 리덕타제 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제, 칼슘 채널 차단제 (CCB), 엔도텔린 길항제, 레닌 억제제, 이뇨제, ApoA-I 모방체, 항당뇨병제, 비만감소제, 알도스테론 수용체 차단제, 엔도텔린 수용체 차단제, 알도스테론 신타제 억제제 (ASI), CETP 억제제, 항응고제, 렐락신, BNP (네시리티드), 및 NEP 억제제로부터 선택되는 것인 조합물.
  15. 치료 유효량의 제1항 내지 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 또는 그의 아미드, 에스테르 또는 염, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는, APJ 수용체의 효능작용에 반응성인 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물로서, 상기 질환 또는 장애가 급성 비대상성 심부전 (ADHF), 만성 심부전, 폐고혈압, 심방 세동, 브루가다(Brugada) 증후군, 심실성 빈맥, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 재협착, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 부정맥, 수분 저류, 당뇨병, 임신성 당뇨병, 비만, 말초 동맥 질환, 뇌혈관 사고, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 화상 손상, 일광화상 및 전자간증으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
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