KR102028731B1

KR102028731B1 - 집속초음파 기술을 이용하여 수득된 신규 c24 세라마이드를 포함하는 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102028731B1
Application number: KR1020190076494A
Authority: KR
Inventors: 문형인
Original assignee: (주)클래시스
Priority date: 2019-06-26
Filing date: 2019-06-26
Publication date: 2019-10-04

Abstract

본 발명은 화학식 1로 표시되는 C24 세라마이드를 포함하는 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 C24 세라마이드는 집속초음파 처리를 이용하여 유채씨로부터 고수율 및 고순도로 수득할 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 자외선으로부터 유도된 피부 손상에 대한 피부재생 및 주름개선 효과를 나타낸다.

Description

집속초음파 기술을 이용하여 수득된 신규 C24 세라마이드를 포함하는 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR SKIN REGENERATION AND WRINKLE IMPROVEMENT COMPRISING NOVEL C24 CERAMIDE OBTAINED BY USING FOCUSED ULTRASONIC TREATMENT}

본 발명은 화학식 1로 표시되는 C24 세라마이드를 포함하는, 자외선으로부터 유도된 피부 손상에 대한 피부재생 및 주름개선 효과를 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부 노화는 호르몬 변화, 체내 대사 등과 같은 내적 인자와 태양광 조사, 화학물질 노출, 환경 오염 등과 같은 외적 인자 모두에 의하여 영향받는 복합적 원인에 의한 과정이다.

이러한 다양하고 복합적인 인자 중에서 자외선 노출은 주요 외적 인자로서, 피부에 광노화를 유도하며, 광노화는 매트릭스 메탈로프로테나아제-1(MMP-1)의 증가 및 콜라겐의 감소와 연관된다.

자외선은 그 파장에 따라 315-400 nm(UVA), 280-315 nm(UVB) 및 100-280 nm(UVC)로 나뉜다. 이 중에서 UVB는 대부분 피부의 상피에서 흡수되며, 심각하고 만성적인 UVB 조사는 세포 구조를 손상시킴으로써, 매트릭스 메탈로프로테나아제-1(MMP-1)를 발현시키고, 제1형 프로콜라겐의 열화를 유도하면서 광노화를 야기한다.

구체적으로는, MMP-1, 즉 간질성의 콜라게나제 또는 섬유아세포 콜라게나제가 변형 성장 인자-β1(TGF-β1), 콜라겐 및 세포외기질(ECM)에서 엘라스틴을 분해시킴으로써, 피부의 노화, 주름, 손상을 야기한다.

한편, 유채(Brassica napus L.)는 세계에서 경제적으로 가장 중요한 오일씨드 생산물 중 하나로, 카놀라유의 원료가 되며, 항산화 효과 및 DNA 보호 효과가 있음이 알려져 있다.

유채는 중국에서 수십년간 전립선비대증을 치료하는 데에 사용되어져 왔다. 이전의 연구들에서, 유채로부터의 에틸 아세테이드 추출물, 단리된 스테롤, 터페노이드, 플라본류, 장쇄 탄화수소 및 브라시놀라이드, 스핑고리피드, 예컨대 세라마이드, 세레브로시드는 세포막의 중요한 구성요소들이며, 세포 주기 억류, 분화, 노화, 세포사멸과 같은 다양한 세포적 프로세스에서 중요한 2차 전달자이다.

그러나 종전의 연구에도 불구하고, 자외선으로부터 유도된 피부 손상에 대한 유채의 피부 보호 활성, 피부재생 및 주름개선 효과는 연구된 바 없다.

본 발명자들은 자외선으로부터 유도된 피부 손상을 개선하기 위한 피부재생 및 주름개선의 효과를 갖는 천연 추출물을 장기간 연구한 결과 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명에 있어서, 정상 인간 피부 섬유아세포(normal human dermal fibroblasts; 이하, "NFS"로 약칭하기도 함)에서 자외선 조사로부터 유도된 피부 노화에 대해, 유채씨로부터 추출된 C24 세라마이드가 우수한 피부재생 및 주름개선 효과를 나타내었음을 확인하였다.

구체적으로, 자외선 조사에 의해 NFS에서 매트릭스 메탈로프로테나아제-1(MMP-1)의 증가 및 제1형 프로콜라겐의 감소가 나타났으며, 본 발명에 따른 C24 세라마이드를 처리함으로써 피부재생 및 주름개선 효과가 나타났다. 따라서, C24 세라마이드가 매트릭스 메탈로프로테나아제-1의 감소 및 제1형 프로콜라겐의 증가를 유도함으로써 피부세포를 개선하며, 자외선 조사에 의한 광노화를 감소 및 지연시킬 수 있다는 내용에 기초하여 본 발명이 완성되었다.

본 발명의 일구현예에 따르면, 본 발명에 따른 C24 세라마이드를 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 또 다른 일구현예에 따르면, 본 발명의 C24 세라마이드가 함유된 유채씨 추출물을 포함하는 화장료 조성물이 제공된다. 또 다른 일구현예에 따르면, 집속초음파를 이용하여 본 발명의 C24 세라마이드가 고순도 및 고수율로 함유된 유채씨 추출물을 포함하는 화장료 조성물이 제공된다. 상기 화장료 조성물은 자외선으로부터 유도된 피부 손상에 대한 피부재생 및 주름개선 효과를 나타낸다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "유채"는 쌍떡잎식물 양귀비목 십자과에 속하는 두해살이풀을 가리키며, 학명은 Brassica Napus L.이다. 우리나라에서는 남부 도서지방과 제주도를 중심으로 주로 재배되고 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "유채씨(rapeseed)는 상기 유채의 종자이며, 35 내지 45%의 기름을 함유하고, 대표적인 불포화 지방산인 올레인산의 함량이 높기 때문에 식용유 이외에 피부 보습을 위한 화장품, 바이오연료 등으로 폭넓게 사용되고 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "세라마이드"는 스핑고신 또는 파이토스핑고신에 지방산이 연결되어 있는 구조를가지고 있는 스핑고 지질의 일종으로서, 세라마이드는 피부 각질층을 구성하는 각질 세포간 지질 중 약 40% 이상을 차지하며 각질층의 구조 형성이나 기능을 나타내는 데 필수적인 구성 요소이다.

본 발명에 있어서 "C24 세라마이드"는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물이다.

[화학식 1]

본 명세서에서 사용되는 용어 "추출물"은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물, 또는 분획물이 포함되는 것으로 해석된다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "집속초음파"는 집속 영역 강도에 따라 1,000 W/cm² 이상의 고강도 집속초음파(HIFU, High Intensity Focused Ultrasound)와 10 mW/cm² 내지 50 W/cm² 범위의 저강도 집속초음파(LIFU, Low Intensity Focused Ultrasound)로 분류될 수 있다. 본 발명의 방법에서 사용되는 집속초음파는 고강도 집속초음파인 것이 바람직하다. 특히, 본 발명의 방법에서 사용되는 집속초음파는 1,500 W/cm³ 내지 2,000 W/cm³의 고강도 집속초음파인 것이 더욱 바람직하다.

본 발명자들은 고강도 집속초음파를 사용한 경우, 유채씨 추출물을 제조할 때 본 발명에 따른 화학식 1의 C24 세라마이드의 수율이 현저하게 증가하는 동시에, 비활성성분들이 더 많은 양으로 제거되어 최종 생성물 내 생리활성성분의 순도가 증가한다는 것을 확인하였다.

본 발명자들은 UVB를 조사시킨 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에서, 본 발명의 C24 세라마이드가 세포 생존성을 개선시키고, MMP-1의 분비를 감소 조절시키고, 제1형 프로콜라겐의 생성을 증가 조절시키는 것을 확인하였다.

본 발명자들은, 자외선으로 인해 손상된 피부에서 C24 세라마이드의 피부재생 및 주름개선 효과를 알아보기 위하여, 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)의 세포 생존성을 연구하였다.

상기 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)는 어린아이의 포피(包皮) 또는 성인의 얼굴, 흉부, 복부 또는 허벅지의 피부로부터 분리되고, 상처 치료 연구에 사용되거나, 피부 경화증, 섬유육종, 섬유증, 피부 건조증, 색소 건피증, 조직구 종양, 암과 같은 질병의 연구에 사용된다. 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 UVB를 조사하면 심각한 세포 생존성 감소를 야기한다.

본 발명자들의 연구 결과, 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 UVB를 조사시켜 세포 생존성이 감소된 후에, 본 발명의 C24 세라마이드를 처리하면 세포 생존성이 현저하게 개선되는 것을 알아내었다(도 1 참조).

또한, 본 발명의 C24 세라마이드를 처리하여도 세포 독성과 같은 역효과가 발견되지 않았다.

한편, 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 류는 칼슘-의존성, 아연-함유 엔도펩티다아제 패밀리이며, 세포외기질(ECM) 내의 대부분의 단백질 종류를 분해할 수 있다.

특히 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 UVB를 조사한 후, 매트릭스 메탈로프로테나아제-1(MMP-1)의 분비가 3배 이상 증가(도 2a에서 301.5% 증가됨 참조)되며, 콜라겐의 분해를 촉진하여 광노화가 진행된다. 또한, 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 UVB를 조사한 후, 제1형 프로콜라겐의 생성은 절반 정도 감소하였다(도 2b에서 50.6% 감소됨 참조).

즉, UVB 조사는 MMP-1을 활성화시키고, 이어서 모든 콜라겐 유형을 쪼개어 버린다. 다시 말해, UVB 조사는 MMP-1의 생성을 증가시키는 반면, 제1형 프로콜라겐의 생성은 감소시킨다.

본 발명자들은, UVB 조사에 의하여 MMP-1의 생성이 증가되고, 제1형 프로콜라겐의 생성이 감소된 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 있어서, 본 발명의 C24 세라마이드를 처리하면 MMP-1의 생성이 현저하게 감소되고, 제1형 프로콜라겐이 생성이 회복되어 UVB 조사되기 전의 수준으로 회복되는 것을 확인하였다(도 2a 및 2b 참조).

특정 이론에 얽매이지 않고, NFS는 피부의 재생 및 탄력성에서 핵심적인 역할을 하며, 피부의 표면에서 증식하고 분화하여, ECM을 합성하는 역할을 하기 때문에, UVB가 조사되지 않은 NFS 세포에서는 C24 세라마이드의 처리에 의하여 세포 생존성에 대한 명확한 변화를 야기하지 않았지만, UVB가 조사된 NFS 세포에서는 C24 세라마이드의 처리에 의하여 NFS의 재생 및 분화 능력이 현저하게 개선된 결과라고 여겨진다.

따라서, 본 발명의 C24 세라마이드는 자외선으로 인해 광노화된 피부에서 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물의 유효한 성분이 될 수 있다.

상기 본 발명의 C24 세라마이드는 화장료 조성물의 전체 중량을 기준으로 1 - 99 중량%의 양으로 포함될 수 있다. 피부재생 및 주름개선의 수준, 사용 기간, 피부 손상 상태, 제형의 종류, 투여 경로, 대상체의 피부 상태 등 다양한 요인을 고려하여 적합하게 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형 등의 형태로 제조될 수 있다. 이때, 본 발명의 화장료 조성물은 패치류, 연고류, 피부접착용 겔류, 크림류, 팩류, 화장수류, 에센스류, 스프레이류, 마스크류, 파운데이션류, 메이크업베이스류, 세정제류, 수(W)형, 유(O)형, 실리콘(S)형, 수중유(O/W)형, 유중수(W/O)형, 실리콘중수(W/S)형, 수중실리콘(S/W)형, 고체상, 액상 등의 다양한 제형으로 제조될 수 있으며, 통상적으로 사용되는 화장료 제조방법이 적용될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 효능 증진을 위해 상기 화학식 1의 C24 세라마이드 및 이를 포함하는 유채씨 추출물 이외에 추가 성분을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 추가 성분은 생리활성성분의 효능을 상쇄시키거나 감소시키지 않는다면 제한이 없다. 선택적으로, 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 담체 등을 추가로 포함할 수 있다. 선택적으로, 화장품 기능을 부가하거나 증대시키기 위하여 전형적으로 사용되는 성분들이 또한 추가될 수 있다. 예를 들면, 안정화제, 유화제, 점증제, 보습제, 액정 막강화제, pH 조절제, 항균제, 수용성 고분자, 피막제, 금속 이온 봉쇄제, 아미노산, 유기 아민, 고분자 에멀션, pH 조정제, 피부 영양제, 산화 방지제, 산화 방지조제, 방부제, 향료 등에서 선택되는 하나 이상의 수성 첨가제; 및 유지류, 왁스류, 탄화 수소유, 고급 지방산유, 고급 알콜, 합성 에스테르유 및 실리콘유 등에서 선택되는 하나 이상의 유성 첨가제 등일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 화학식 1로 표시되는 C24 세라마이드를 생리활성성분으로 포함함으로써, UVB를 조사시킨 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에서 세포 생존성을 개선시키고, MMP-1의 분비를 감소 조절시키고, 제1형 프로콜라겐의 합성을 증가 조절시킨다.

따라서, 화학식 1로 표시되는 C24 세라마이드를 생리활성성분으로 함유하는 유채씨 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 자외선으로부터 유도된 피부 손상에 대한 피부재생 및 주름개선 효과가 탁월하다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물의 생리활성성분은 천연물로부터 유래된 것이기 때문에 부작용이 거의 없거나 전혀 없이, 프리 라디칼을 제거하여 UVB 유래의 광노화를 방지할 수 있다.

도 1은 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에서 UVB를 조사한 경우 저하되는 세포 생존성이 본 발명에 따른 C24 세라마이드에 의해 회복될 수 있는지 여부를 확인하기 위한 것이다(비조사 대조군에 대하여 * p　< 0.05).
도 2a는 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 UVB를 조사한 경우 현저하게 증가한 매트릭스 메탈로프로테나아제-1(MMP-1)의 분비량이 본 발명에 따른 C24 세라마이드에 의해 정상 수준으로 회복, 즉 감소될 수 있는지 여부를 확인하기 위한 것이다.
도 2b는 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 UVB를 조사한 경우 현저하게 감소한 제1형 프로콜라겐의 분비량이 본 발명에 따른 C24 세라마이드에 의해 정상 수준으로 회복, 즉 증가될 수 있는지 여부를 확인하기 위한 것이다.
도 2a 및 2b에서, 수치들은 평균±표준편차이며, UVB 비조사 대조군에 대하여 *　p　< 0.05, **　p　< 0.01, ***　p　< 0.001이고, UVB 조사 대조군에 대하여 #　p　< 0.05, ##　p　< 0.01이다.

이하 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 명세서에서 특별히 정의되지 않은 용어들에 대해서는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것으로 이해되어야 할 것이다.

실험 재료 및 측정 방법

유채씨(seeds of Brassica napus L)는 대한민국 서울에서 2018년 11월에 구입하였다. 실리카 겔(200-300 mesh)은 Merck Co. Ltd로부터 구입하였다. Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM), 페니실린-스트렙토마이신 및 소태아혈청(FBS)은 모두 Gibco(Grand Island, NY, USA)사로부터 구입하였다. 2,2-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산) 디암모늄 염(ABTS), 포타슘 퍼설페이트, 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT), 및 술폭시드(DMSO)는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였다. 제1형 프로콜라겐 및 MMP-1에 대한 효소결합면역흡착제 검정법(ELISA) 키트는 ABcam (Cambridge, UK)로부터 구입하였다.

NMR 스펙트럼은 Varian Inova-400 FT-NMR spectrometer(CA, USA)에 의하여 측정하였다(내부 표준 TMS, δ in ppm, J in Hz). HR-ESI-MS는 Bruker APEXII mass spectrometer에 의하여 측정하였다(m/z). EI-MS는 VG ZABHS mass spectrometer(70 eV)에 의하여 측정하였다.

모든 데이터는 평균±표준 편차로서 제시하였다. 통계적 분석은 Dunnett's 테스트에 따라 일원 변량 분석하였다. *　p　< 0.05, **　p　< 0.01, 및 ***　p　< 0.001는 통계학적으로 유의적으로 고려되었다.

추출 및 단리

공기로 건조된 유채씨 2kg을 70% 에탄올(3x20 L, 7 hours)로 상온에서 1,800 Watt의 집속초음파(30분 1회)에 의하여 추출하였다.

그 후, 에탄올은 감압 하에 제거하여 잔류물(612 g)을 수득하였으며, 이는 증류수 내 현탁시켰다가 n-헥산 및 EtOAc로 각각 추출하였다.

EtOAc 추출물(36 g)은 실리카 겔(200-300 메쉬)에서 컬럼 크로마토그래피를 적용하였으며, CHCl₃, CHCl₃-MeOH (95/5), (80/20), (70/30), (60/40), (10/90) 및 MeOH로 용출시켜 7개 분획을 수득하였다. 이들을 분획 1 내지 분획 7로 지칭하였다. 분획 2 내지 4는 각각 실리카 겔 컬럼으로 주입하여 CHCl₃-MeOH(19/1)로 용출시켜, 무정형의 백색 분말로서 화합물(26 mg)을 수득하였다. 본 실험과 달리 집속초음파를 사용하지 않을 경우 화학식 1의 C24 세라마이드는 수득되지 않거나, 또는 수득되더라도 그 순도가 너무 낮아 비효율적인 정제 공정을 거쳐야 되는 단점이 있었으며, 이에 대한 구체적인 데이터는 본 명세서에 포함시키지 않았다.

하기 표 1은 DMSO-d6에서 C24 세라마이드의 ¹H 및 ¹³C NMR 스펙트럼 데이터(TMS, δ in ppm, J in Hz)를 나타낸 것이다. 표 1에 나타낸 ¹H 및 ¹³C NMR 스펙트럼 데이터를 바탕으로, 그리고 추가적으로 HR-ESI-MS [M+H]⁺, m/z 680.6173(C₄₂H₈₂NO₅ 계산값 680.6188)을 분석하여, 상기 화합물의 분자식은 C₄₂H₈₁NO₅로 확인되었다.

또한, C24 세라마이드의 화학적 분해 유사성에 기초하여, 사슬의 길이 및 이중결합의 위치가 세레브로시드(1-O-(β-D-glucopyranosyl)-(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-hydroxytetracosenoilamino]-8-octadecene-1,3,4-triol)와 동일하다는 것을 추가적으로 확인하였다.

이에 따라, 상기 화합물은 (2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-hydroxytetracosenoilamino]-8-octadecene-1,3,4-triol)이며, 하기 화학식 1로 표시되는 C24 세라마이드인 것으로 확인되었다.

[화학식 1]

실시예 및 비교예

건강하고 젊은 남성 공여자(MCTT Bio, Inc., Seoul, Korea)로부터 피부 생검에 의해 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)를 수득하였다.

상기 NFS 세포는 1% 페니실린-스트렙토마이신 및 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 37℃, 5% CO₂　가습 인큐베이터에서 배양하였다. 세포가 80~90% 컨플루언시(confluency)에 이르렀을 때, Bio-Link BLX-312 (Vilber Lourmat GmbH, Vilber Lourmat, Marne-la-Vallee, France)를 사용하여 UVB (140 mJ/cm²)를 조사하였다. 그후, 세포를 인산완충용액(PBS)으로 세척하고, 상기 유채씨로부터 추출된 C24 세라마이드(1, 5, 10 μM)를 무혈청 DMEM에서 처리하였다. UVB가 비조사된 세포는 무혈청 DMEM 배지에서 배양하였다.

NFS 세포에 UVB를 조사하였는지 여부와 C24 세라마이드의 처리 농도 및 처리 여부에 따라 실시예와 비교예로 나누고, 하기 표 2와 같이 명명하였다.

	처리
실시예 1	UVB 조사된 NFS + C24 세라마이드 1 μM
실시예 2	UVB 조사된 NFS + C24 세라마이드 5 μM
실시예 3	UVB 조사된 NFS + C24 세라마이드 10 μM
비교예 1	UVB 조사된 NFS
비교예 2	UVB 비조사된 NFS
비교예 3	UVB 비조사된 NFS + C24 세라마이드 1 μM
비교예 4	UVB 비조사된 NFS + C24 세라마이드 5 μM
비교예 5	UVB 비조사된 NFS + C24 세라마이드 10 μM

실험예 1

UVB 조사 후 C24 세라마이드로 처리된 NFS 세포의 생존성은 MTT 검정을 사용하여 평가하였다.

NFS 세포(2×10⁵/35 mm²　디쉬)를 UVB (140 mJ/cm²) 조사시킨 후, C24 세라마이드로 72시간 동안 처리하였다. 1 mL MTT (100 μg/mL)를 첨가하고, 37℃에서 3시간 동안 배양하였다. 이어서, MTT 용액을 폐기하고, 보라색 포르마잔 결정이 800 μL의 살균 DMSO에서 용해되었다. 마지막으로, 디쉬를 10분 동안 상온에서 흔들었다. DMSO에 용해된 포르마잔 100-μL 부분의 광학 밀도 값은 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices FilterMax5; San Francisco, CA, USA)를 사용하여 측정하였다.

그 결과, 도 1에서는 UVB (140 mJ/cm²)를 72시간 동안 조사한 경우와 조사하지 않은 경우 각각에 대하여, C24 세라마이드를 처리하지 않은 경우, 1, 5, 10 μM로 처리한 경우의 NFS 세포의 생존성을 비교하여 도시하였다.

도 1에서 알 수 있는 바와 같이, 비교예 1은 비교예 2에 비하여 74.3%의 세포 생존성을 보였다. 이는 UVB의 조사에 기인하여 세포 생존성이 74.3%로 감소함을 의미한다. 실시예 1 내지 3은 UVB 조사한 후의 NFS 세포에 C24 세라마이드를 1, 5, 10 μM의 농도로 각각 처리하였을 때, UVB 비조사된 NFS 세포의 수준으로 재생되는 것을 확인할 수 있다.

실험예 2

C24 세라마이드를 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에 대해 72시간 동안 처리한 후, 배양 상청액에서 MMP-1 및 제1형 프로콜라겐의 생성량을 측정하였다. 이때 측정은 ELISA 키트를 사용하여 수행되었으며, 모든 실험 과정은 제조사의 프로토콜에 따라 이루어졌다.

MMP-1 및 제1형 프로콜라겐의 분비량에 대한 C24 세라마이드의 효과는 각각 도 2a 및 도 2b에 나타내었다.

도 2a는 UVB를 조사한 경우와 비조사한 경우에 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에서 MMP-1의 분비량을 나타낸다. 도 2a에서 알 수 있는 바와 같이, 비교예 1은 비교예 2에 비하여 301.5%의 MMP-1의 분비량이 확인되었다. 이는 UVB의 조사에 기인하여 NFS에서 MMP-1가 훨씬 많은 양이 분비되고, 이로 인해 피부손상이 심각하게 야기된다는 것을 의미한다.

반면, UVB 조사한 후의 NFS 세포에 C24 세라마이드를 1, 5, 10 μM의 농도로 각각 처리한 실시예 1 내지 3에서는 MMP-1의 생성이 감소 조절되었다. 특히, 이러한 효과는 농도 의존적으로 나타났으며, 10 μM의 C24 세라마이드에서 증가된 MMP-1의 43.2% 수준으로 감소 조절된 것은 매우 유의적인 것으로 판단된다.

한편, 도 2b는 UVB를 조사한 경우와 비조사한 경우에 정상 인간 피부 섬유아세포(NFS)에서의 제1형 프로콜라겐의 분비량을 나타낸다. 도 2b에서 알 수 있는 바와 같이, 비교예 1은 비교예 2에 비하여 제1형 프로콜라겐의 분비량이 50.6% 감소하였다. 여기서, 프로콜라겐은 콜라겐의 전구 물질에 해당하며, 프로콜라겐으로부터 만들어지는 콜라겐은 인간을 포함한 동물의 피부와 뼈에 존재하는 단백질로서 콜라겐의 함량이 감소할 경우 피부탄력에 악영향을 미친다.

반면, UVB 조사한 후의 NFS 세포에 C24 세라마이드를 1, 5, 10 μM의 농도로 각각 처리한 실시예 1 내지 3에서는 제1형 프로콜라겐의 분비량이 증가 조절되었다. 특히, 이러한 효과는 농도 의존적으로 나타났으며, 10 μM의 C24 세라마이드에서 제1형 프로콜라겐의 분비량은 85.4% 수준으로 회복한 것은 매우 유의적인 것으로 판단된다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 C24 세라마이드를 함유하는 화장료 조성물로서, 자외선으로부터 유도된 피부 손상에 대한 피부재생 및 주름개선용 화장료 조성물:
[화학식 1]

.
제1항에 있어서,
상기 C24 세라마이드는 유채씨 추출물로부터 유래된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제2항에 있어서,
상기 C24 세라마이드는 유채씨를 에탄올 용매에 의해 추출하여 수득된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제2항에 있어서,
상기 C24 세라마이드는 유채씨를 집속초음파에 의해 추출하여 수득된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제4항에 있어서,
상기 집속초음파는 1,000 W/cm² 이상의 고강도 집속초음파인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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