KR101981534B1 - 프로텍틴 dx를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

프로텍틴 dx를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101981534B1
KR101981534B1 KR1020170112118A KR20170112118A KR101981534B1 KR 101981534 B1 KR101981534 B1 KR 101981534B1 KR 1020170112118 A KR1020170112118 A KR 1020170112118A KR 20170112118 A KR20170112118 A KR 20170112118A KR 101981534 B1 KR101981534 B1 KR 101981534B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
fatty liver
pdx
protectin
present
composition
Prior art date
Application number
KR1020170112118A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20190025456A (ko
Inventor
손원록
정지훈
정태우
Original Assignee
(주)솔빛피앤에프
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)솔빛피앤에프 filed Critical (주)솔빛피앤에프
Priority to KR1020170112118A priority Critical patent/KR101981534B1/ko
Priority to JP2017180866A priority patent/JP2019043928A/ja
Priority to CA2998772A priority patent/CA2998772A1/en
Priority to US16/115,983 priority patent/US20190070140A1/en
Publication of KR20190025456A publication Critical patent/KR20190025456A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101981534B1 publication Critical patent/KR101981534B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/191—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more hydroxy groups, e.g. gluconic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/3262—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on blood cholesterol
    • Y10S514/893—

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

본 발명은 프로텍틴 DX를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물 및 간 보호용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 발명이다.
본 발명의 프로텍틴 DX를 포함하는 조성물은 ORP150 발현을 증가시켜 ER 스트레스를 감소시키고, 간세포 내 중성지방 축적 감소 및 간 중량을 감소시킨 효과가 있을 뿐만 아니라 HFD 식이 마우스 혈청의 아디포넥틴 수준 또한 감소시킨 특징이 있어, 상기 질환의 예방 및 치료를 위하여 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

프로텍틴 DX를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물{Composition comprising Protectin DX for preventing or treating of Hyperlipidemia or Fatty liver diseases}
본 발명은 프로텍틴 DX를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 발명이다.
최근 영양상태가 좋아지고 성인병이 늘어감에 따라 고지혈증 환자가 늘어나는 추세에 있다. 고지혈증(hyperlipidemia)이란 혈액 속의 지질성분이 보통 이상으로 증가된 상태를 말한다. 혈청 내 콜레스테롤 및 중성지질의 증가가 고지혈증의 가장 일반적인 원인으로 취급되고 있는데 과다한 지방질의 축적으로 혈액순환장애 및 미세순환부전을 일으키는 것이다.
또한, 지방간질환(fatty liver disease)은 고지혈증과 마찬가지로 최근 영양상태가 좋아지고 성인병이 늘어감에 따라 환자가 늘어가는 추세에 있다. 지방간은 간세포에 지방(트리글리세리드 등)이 이상 축적되는 것에 기인하여 간 장해를 초래하는 질환이다. 지방간질환의 초기 병태는 간세포에 지방 침착만을 인정하는 단순성 지방간이며, 그 후에 지방간염(간섬유증을 포함), 또한 간경변이나 간세포암으로 병태가 진행되는 것이 알려져 있다. 일반적으로, 간장에 지방이 침착되는 원인으로서는, 알콜 섭취, 비만, 당뇨병, 지질대사 이상, 약제(스테로이드, 테트라사이클린 등), Cushing 증후군, 중독(황린 등), 고도의 영양 장해 등을 들 수 있다.
지방간질환의 원인은 크게 알콜성과 비알콜성으로 나누어지며, 전자를 원인으로 하는 간 질환을 알콜성 지방간 질환(알콜성 간장해라고도 불린다), 후자를 원인으로 하는 간 질환을 비알콜성 지방간질환(nonalcoholic fatty liver disease: NAFLD)이라고 부른다.
알콜성 지방간질환은, 초기의 단순성 지방간으로부터 진행성으로 지방간염, 간경변으로 이행한다. 비알콜성 지방간질환은, 단순성 지방간에 머물며 병태는 진행되지 않는 것으로 생각되고 있었지만, 최근, 비알콜성 지방성간 질환에 있어서도 단순성 지방간으로부터 지방간염이나 간경변으로 병태가 진행되는 경우가 있는 것으로 밝혀졌다.
비알콜성 지방간질환(Non-Alcoholic Fatty Liver Disease, NAFLD)이란, 간에 유해할 정도로 인정되는 알콜 섭취 병력이 없음에도 불구하고 간 조직 검사에서 알콜성 간염의 특징적인 소견인 지방성 변화(fatty change, steatosis)와 소엽성간염(lobular hepatitis, steatohepatitis)등을 나타내는 경우를 말한다. 간의 병리소견은 단순 지방간으로부터 지방간염(Non-Alcoholic Steatohepatits, NASH), 지방간염과 동반된 섬유화증, 간경변증 등의 다양한 스펙트럼을 나타내는데, 비알콜성 지방간질환은 이 모두를 포함하는 의미로 사용된다.
이러한 비알콜성 지방간질환에서는 대부분 인슐린 저항성, 비만, 당뇨병 및 고지혈증을 동반하고 있다. 이러한 합병증이 존재하는 경우에는, 우선 그 치료를 실시하는 것이 필요하다. 비알콜성 지방간질환에 대한 치료의 원칙은, 식사 요법이나 운동요법 등의 생활 습관의 개선이지만, 확실하게 실행하는 것은 어려운 것이 현실이다.
비알콜성 지방간염(Nonalchollic steatohepatitis; NASH)에 있어서는, 간경변·간세포암으로 진전될 가능성이 높은 점에서, 보다 적극적인 약물 치료가 필요하다. 비알콜성 지방간염의 병태 발증·진행에 중요하다고 생각되고 있는 산화 스트레스나 인슐린 저항성 등의 개선을 목표로 한 치료도 시도되고 있지만, 충분한 과학적 근거가 확립된 치료법이 없는 것이 현실이다.
프로텍틴 DX (Protectin DX, PDX)는 Protectin/neuroprotectin D1의 이성질체로서, 항염증 및 항당뇨성을 지닌 ω-3 지방산 DHA (docosahexaenoic acid)에서 유래된 것이다. PDX는 RNA 수출 기계를 통한 인플루엔자 바이러스 복제를 억제한다고 보고되었다. 그러나, ER 스트레스 및 고지방식이(High Fat Diet, HFD)-유도 간 질환에 대한 PDX의 효과는 아직 밝혀지지 않았다.
여기에서, 본 발명자들은 고지혈증 상태에서 PDX가 지질 대사 및 TG 축적에 미치는 영향을 처음으로 조사하였으며, 또한 HepG2 간세포에서 palmitate 유도ER 스트레스와 지방간에 대해 PDX가 매개하는 보호 메커니즘을 확인하였다. 또한, 동물모델에 대한 실험을 통해, PDX가 ER 스트레스 및 지방간, 고지혈증에 미치는 영향을 조사하였는 바, PDX가 고지혈증, 지방간 질환 및 ER 스트레스 매개 질환의 치료제로 유용하게 쓰일 수 있는 약물임을 최초로 밝혀냈다.
따라서 본 발명의 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
<화학식 1>
Figure 112017085297193-pat00001
본 발명의 또 다른 목적은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
따라서, 하기 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
<화학식 1>
Figure 112017085297193-pat00002
또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 식품 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
<화학식 1>
Figure 112017085297193-pat00003
프로텍틴 DX는 '10S,17S-dihydroxy-docosa-4Z,7Z,11E,13Z,15E,19Z-hexaeonic acid’로도 알려져 있으며, 천연으로부터 분리 정제하거나, 상업적으로 구입하여 사용하거나 또는 당 업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 프로텍틴 DX는 그 자체 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다.
상기에서 ‘약학적으로 허용되는’이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말하여, 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 유리산은 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한, 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 상기 신규 화합물을 단독으로 함유하거나 약학적으로 허용되는 담체와 함께 적합한 형태로 제형화 될 수 있으며, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 상기 담체로는 모든 종류의 용매, 분산매질, 수중유 또는 유중수 에멀젼, 수성 조성물, 리포좀, 마이크로비드 및 마이크로좀이 포함된다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 아울러, 경구투여용으로 사용되는 다양한 약물전달물질을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코오스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸-또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현택제 등을 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다.
경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의 정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA,1995)에 기재되어 있다.
본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1㎏ 당 약 0.01㎍ 내지 10,000mg, 가장 바람직하게는 0.1㎍ 내지 500mg일 수 있다. 그러나 상기 약학적 조성물의 용량은 제제화 방법, 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 본 발명의 조성물의 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 치료 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.
본 발명에서 “고지혈증”이란 중성 지방과 콜레스테롤 등의 지방대사가 제대로 이루어지지 않아 혈액 중에 지방량이 많아 유발되는 질환을 말한다. 보다 구체적으로 고지혈증이란 혈액내에 중성지방, LDL-콜레스테롤, 인지질 및 유리지방산 등의 지질 성분이 증가된 상태로 발생 빈도가 높은 고콜레스테롤혈증을 말한다.
본 발명에서 “지방간 질환”이란 지방간이라고도 불리며 간세포에 지방(트리글리세리드 등)이 이상 축적되는 것에 기인하여 간 장해를 초래하는 질환이다. 상기 지방간 질환은 간염, 간경변, 간세포암, 알콜성 지방간, 비알콜성 지방간, 영양성 지방간, 기아성 지방간 및 비 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 PDX를 함유한 조성물은 상기와 같은 질환의 예방 및 치료 또는 개선하는 활성을 가지고 있다. 즉, 본 발명의 조성물은 간의 형태적, 구조적, 생리학적 기능을 유지하도록 지방간 질환의 진행을 억제하고, 치료할 수 있으며, 더불어 그 발생을 예방하는 효과도 있다. 특히, 본 발명의 조성물은 혈청 및 간 조직 내에 존재하는 지질함량을 감소시킴으로써 고지혈증 및 지방간 질환을 예방 및 치료 또는 개선하는 활성을 가지고 있으며 또한 간 기능 지표 효소의 활성을 정상화하여 간 조직 내의 지방축적을 개선하여 지방간 발생의 예방, 진행 억제 및 질병 상태를 호전시킬 수 있는 효과도 있다.
본 발명의 일실시예에서 본 발명 PDX의 지방 생성 유전자로 알려진 SFEBP1, FAS 및 SCD1 억제 활성이 우수함을 확인하였다. SREBP는 소포체에 존재하고 있다가 활성화가 되면 프로세싱 과정을 거쳐 핵으로 이동하는 basic helix loop helix leucine zipper superfamily에 속하는 전사인자로서, 지방산 및 중성지방의 합성과 관련된 유전자의 발현을 조절한다고 알려져 있으며 간에서는 주로 SREBP-1의 발현이 우세하다. SREBP-1가 조절하는 대표적인 유전자들은 아세틸-CoA 카르복실레이즈 (ACC), 지방산 합성효소 (FAS), 스테아로일-CoA 디사투레이즈 1 (SCD1), 글리세롤-3-포스페이트 아실트랜스퍼레이즈 (GPAT) 등이 있고 이들은 모두 아세틸-CoA가 지방산을 거쳐 중성지방으로 합성되는 과정에서 중요한 효소이다.
본 발명의 다른 일실시예에서는, PDX 투여로 간 세포에서 중성지방(TG) 축적이 유의하게 억제됨을 확인하였다으며, PDX가 ORP150 발현을 유도함으로써 ER 스트레스를 억제함을 확인하였다.
본 발명의 다른 일실시예에서는 PDX 투여시 HFD 식이로 감소한 혈청의 아디포넥틴 수치가 다시 증가함을 확인하였다.
본 발명의 또 다른 일실시예에서 HFD 식이 마우스에 PDX를 함께 투여하는 경우, 마우스의 체중, 간 중량 및 부고환 중량이 유의하게 감소함을 확인하였다.
본 발명의 또 다른 일실시예에서는 본 발명의 실험동물군을 대상으로 간 조직을 채취하여 헤마토크실렌-에오신 염색(H&E)과 Oil-red O염색을 통해 분석한 결과, 본 발명의 PDX를 투여한 그룹에서 대조군보다 체내 축적 지방 비율이 감소하였으며, 간섬유화도 거의 발생하지 않음을 알 수 있었다.
상기 본 발명의 실시예들로부터, PDX가 고지혈증 및 지방간 질환의 예방 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있음을 알 수 있다.
아울러, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물의 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다.
상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 신규한 화합물 자체를 차, 주스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 퇴행성 뇌질환의 예방 및 개선효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
또한, 기능성 식품으로는 음료(알코올성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지, 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 신규한 화합물, 이의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물 중 상기 신규한 화합물의 바람직한 함유량으로는 이에 한정되지 않지만, 예를 들어, 최종적으로 제조된 식품 중 0.001 내지 30 중량% 일 수 있다. 바람직하게는 최종적으로 제조된 식품 중 0.01 내지 20 중량%일 수 있다.
또한, 본 발명의 신규한 화합물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 프로텍틴 DX의 간보호 효과는 프로텍틴 DX 처리로 간 세포 및/또는 조직의 중성 지방 축적을 억제하고, ER 스트레스 및 지방생성과 관련된 유전자들의 발현을 억제하며, 간조직의 섬유화를 억제하는 결과 등으로 인한 것으로 해석될 수 있다.
따라서, 본 발명의 “간 보호용”이란, 간 세포 또는 조직을 보호하는 등에 의하여 건강한 간 또는 손상된 간을 보호하는 모든 용도를 제한없이 포함하는 것이다.상기 간 보호용 조성물은 간 손상을 억제, 간 손상을 방지하거나 간 기능을 개선하는 것을 의미할 수 있으며, 간 질환을 예방하거나 치료하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 프로텍틴 DX는 그 자체 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 이에 대한 설명은 상기 명세서에 전술한 바와 같다.
나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 간 보호 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 이에 대한 설명은 상기 명세서에 전술한 바와 같다.
따라서, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX의 신규한 용도로서, 프로텍틴 DX를 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 프로텍틴 DX를 포함하는 조성물은 ORP150 발현을 증가시켜 ER 스트레스를 감소시키고, 간세포 내 중성지방 축적 감소 및 간 중량을 감소시킨 효과가 있을 뿐만 아니라 HFD 식이 마우스 혈청의 아디포넥틴 수준 또한 감소시킨 특징이 있어, 상기 질환의 예방 및 치료를 위하여 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1은 PDX가 Palmitate 유도 TG 축적 및 지방생성 유전자 발현을 약화시킴을 뒷받침함을 확인하는 실험결과를 나타내는 도면이다.
도 1A는 HepG2 세포에서 24시간 동안 Oil-red O 염색 및 이소 프로필 알콜로 추출하여 TG 축적을 정량한 결과이다. 도 1B는 HepG2 세포에서 SREBP1, FAS 및 SCD1 발현 수준을 측정한 결과이다. 도 1C는 ER 스트레스 마커인 IRE-1, eIF2α 및 CHOP의 인산화 및 발현 수준을 측정한 결과이다. (대조군과 비교하여, ***P<0.001 및 **P <0.01; Palmitate 처리군과 비교하여 !!!P <0.001, !!P<0.01 및 ! P <0.05)
도 2는 HepG2 세포에서 palmitate 유도 ER스트레스 및 TG 축적에 대한 PDX의 영향을 나타낸 결과이다.
도 2A는 ER 스트레스 마커 인산화 및 발현에 대한 웨스턴 블랏 분석결과이다. 도 2B는 HepG2 세포에 대해 Oil-red O 염색 및 이소 프로필 알코올 추출로 TG 축적을 정량화한 결과이다. 도 2C는 siORP150으로 형질감염된 HepG2 세포에서 지방생성 관련 유전자인 SREBP1, FAS 및 SCD1 발현에 대한 웨스턴 블롯 분석 결과이다.(대조군 또는 스크램블 대조군과 비교하여 *** P <0.001, ** P<0.01 및 * P <0.05; Palmitate 또는 PDX 처리 군과 비교하여 !!!P<0.001 및 !! P <0.01; Palmitate+PDX 처리군과 비교하여 ### P<0.001, ## P<0.01 및 #P <0.05)
도 3은 PDX는 FOXO1 탈아세틸화를 통해 ORP150 발현을 증가시키는 것을 나타낸 도면이다.
도 3A는 24시간 동안 2μm의 PDX의 존재 하에서, 스크램블 siRNA 또는 siFOXO1로 형질감염된 HepG2 세포에서 ORP150에 대한 웨스턴 블럿 분석을 수행한 결과이다. 도 3B는 24시간동안 0-2μM PDX의 존재 하에서, 스크램블 siRNA 또는 siAMPK로 형질감염된 HepG2 세포에서 FOXO1의 아세틸화에 대한 웨스턴 블럿 분석을 수행한 결과이다.(스크램블 대조군과 비교하여, ***P <0.001 및 ** P <0.01; PDX 처리군과 비교하여, !!! P<0.001 및! P <0.05)
도 4는 간세포에서 ORP150의 과발현을 통한, 팔미틴산 유도 TG 축적에 대한 억제 효과를 나타낸 결과이다.
도 4A는 24시간동안 200μM palmitate로 처리 및/또는 ORP150 0-4μg을 처리한 HepG2 세포에서 SREBP1 발현에 대한 웨스턴 블럿 분석을 수행한 결과이다. 도 4B는 24시간동안 palmitate로 처리된 HepG2 세포에 대하여 Oil-red O 염색 및 이소프로필 알코올로 TG 추출하여 정량화한 결과이다. (vehicle(대조군) 수준과 비교하여, *** P<0.001; palmitate 처리군과 비교할 때 !!!P<0.001, !!P <0.01 및 !P <0.05)
도 5는 전신 PDX 투여가 간 지방증 및 ORP150 발현을 개선하는 것을 나타내는 도면이다.
도 5A는 좌측 도면은 정상식이 (ND), 고지방식이(HFD), HFD + PDX 투여 마우스의 간에서 H&E 및 Oil-red O 염색한 결과이며, 우측 도면은 TG 분석 키트로 간 TG 축적을 측정한 결과이다. 도 5B는 실험 마우스 간에서 SREBP1(처리), FAS 및 SCD1 발현을 웨스턴 블럿 분석한 결과이다. 도 5C는 ER 스트레스 마커에 해당하는 IRE-1, elF2α, 및 CHOP의 인산화 및 발현을 웨스턴 블럿 분석한 결과이다. 도 5D는 ORP150 발현을 웨스턴 블랏 분석한 결과이다. 도 5E는 실험 마우스의 혈청에서 아디포넥틴 발현 수준을 측정한 결과이다.(ND 투여군과 비교하여, ***P <0.001 및 ** P <0.01; HFD군과 비교하여, !!!P<0.001, !!P<0.01 및 !P<0.05)
도 6은 정상식이(ND), 고지방식이(HFD), HFD+PDX투여 마우스의 체중, 매일 에너지 섭취량, 간 중량 및 부고환 지방량을 측정한 결과이다. (ND군과 비교하여, ***P<0.001 및 ** P <0.01; HFD군과 비교하여 !!P<0.01 및 !P<0.05)
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실험 준비>
세포 배양, 시약 및 항체
인간 간암 세포 HepG2 세포 (ATCC, Manassas, VA, USA)는 10% 태아 소 혈청(FBS, fetal bovine serum, Invitrogen), 100units/mL 페니실린 및 100 ㎍/ml 스트렙토마이신(Invitrogen)을 포함한 고글루코스 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM, Dulbecco;s modified Eagle‘medium, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)에 배양되었다. 세포는 37℃, 5% CO2 조건에서 배양되었다.
Mycoplasma는 HepG2 세포에서 검출되지 않았다. PDX(Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA)는 에탄올에 용해시켰다. 팔미틴산 나트륨 (Sigma, St Louis, MO, USA)을 DMEM에 용해된 2% BSA(지방산 유리 등급; Sigma)에 혼합시켰다. 에탄올의 최종 농도는 세포 생존에 영향을 미치지 않았다. 모든 실험에서, 세포를 팔미틴산 염-BSA 및 PDX로 24시간동안 처리하고, 2% BSA-에탄올을 대조군으로 사용하였다.
항-phospho IRE-1(1:1000), 항-IRE-1(1:2500), 항-phospho eIF2α (1:1000), 항-eIF2α (1:1000), 항-CHOP (1:1000), 항-ORP150 (1:2500) 및 항-P62 (1:2500)는 Cell Signaling(Beverly, MA, USA)에서 구입하였다. 항-LC3 (1:1000)은 Novus Biologicals (Littleton, CO, USA)에서 구입하였다. 항-SREBP1(1:2500), 항-FAS (1:2500), 항-SCD1(1:2500), 항-GPR78 (1:2500), 항-HSP47(1:2500), 항-Calnexin(1:2500), 항-HSP70 및 항-베타액틴(1:5000)은 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입하였다.
실험동물 관리
이 연구는 기관 동물 검토위원회(고려 대학교 기관 동물 보호 및 이용위원회, 서울, 대한민국)의 승인을 받았다. 동물 실험은 실험실 동물의 관리와 사용을 위한 가이드(NIH publication, 8th edition, 2011)에 따라 수행되었다. 대조군과 8주된 수컷 C57BL/6J(B6) 생쥐에 대한 두 그룹에 정상식이(ND, Brogaarden, Gentofte, Denmark)와 HFD(고지방식이, High Fat Diet, Research Diets, New Brunswick, NJ, USA)를 8주간 각각 투여하였다. HFD(High Fat Diet) 식이군에 대하여 PDX를 8주동안 복강 내에 투여하였다 (1㎍/mice/day). 에탄올 주입군을 대조군으로 사용하였다.
웨스턴 블롯 분석
HepG2 세포를 수득하고 단백질을 4℃에서 60분동안 용해완충액 (PRO-PREP; Intron Biotechnology, Seoul Korea)으로 추출하였다. 단백질 시료 (35㎍)를 12% SDS-PAGE에 적용하고 니트로셀룰로오스막(Amersham Bioscience, Westborough, MA, USA)에 옮기고, 1차 항체로 검출한 후, 2차 항체와 홀스래디쉬 퍼옥시다제(Santa Cruz Biotechnology)를 접합시킨 2차 항체로 탐침하였다. 샘플은 ECL키트로 검출되었다.
면역 침전
HepG2 세포의 총 단백질을 면역 침전 완충액(IP 버퍼: 50mM Tris-HCl, pH 7.8, 150 mM NaCl, 1% IGEPAL CA630)으로 추출하고, 1mg/mL의 농도로 희석시켰다. FOXO1(Santa Cruz Biotechnology)에 대한 폴리클로날 항체를 1:150의 희석률로 혼합물에 첨가하고, 샘플을 4℃에서 밤새 배양하였다. 배양 후, 단백질 A/G-Sepharose 비드 현탁액(Santa Cruz Biotechnology) 50μL를 각 시료에 첨가하고 4℃에서 1시간 동안 부드럽게 혼합하였다. 시료들을 12,000rpm에서 30초동안 원심분리하고; 비드를 IP 완충액에서 3회 세척하였다. 분리된 비드를 1X SDS-PAGE 로딩 완충액에 재현탁하고, 95℃에서 5분간 가열하고, 볼텍싱하고, 플래시-원심분리하였다. 상등액을 전기 영동 분리 및 웨스턴 블랏 분석을 위해 12% SDS-폴리 아크릴 아미드 겔 상에 로딩하였다.
유전자 침묵 또는 과발현을 위한 일시적인 형질 감염
70 % 컨플루언스에서, ORP150에 대한 0-20 nmol / L 저간섭 (si)RNA 올리고 뉴클레오타이드를 Santa Cruz Biotechnology에서 구입하고 형질감염하여 유전자발현을 억제 하였다. 스크램블 siRNA를 대조군으로 사용하였다. 2 또는 4μg의 pCMV3-ORP150(Sino Biological, Beijing, China)을 일시적으로 형질감염시켜 ORP150 발현을 과발현시켰다. pCMV3 빈 벡터를 대조군으로 사용 하였다. 제조사의 지시에 따라 리포펙타민 2000(Invitrogen)을 사용하여 형질감염을 수행 하였다.
조직학적 분석
HepG2 세포 및 마우스 간의 절편을 오일 레드 오(Oil Red-O)방법으로 염색하여 세포 중성지방의(TG) 축적을 측정 하였다. 40분동안 10% 포르말린으로 고정시킨 후, 간세포를 Oil-Red-O 용액(Sigma)으로 37℃에서 1시간동안 염색하였다. Oil-Red-O 염색된 TG 함량을 각 샘플에 이소프로판올을 첨가하여 정량화하였다. 혼합물을 8분간 25℃에서 부드럽게 교반하였다. 마지막으로, 100㎕의 이소프로판올 추출 샘플을 510nm에서 분광광도계로 분석 하였다.
TG 측정
총 지질을 2:1 클로로포름:메탄올(2:1, v/v) 혼합물을 사용하여 추출하였다. 유기층을 건조시킨 즉시 60% 메탄올에 용해시켰다. 추출된 TG는 제조사의 지침 (Biovision, Milpitas, CA, USA)에 따라, 비색 TG 분석 키트를 사용하여 측정하였다.
통계 분석
모든 분석은 SPSS/PC 통계 프로그램(Windows 버전 12.0; SPSS, Chicago, IL, USA)을 사용하여 수행되었다. 결과는 가장 높은 값의 배수로 표시되었다(means±모든 in vitro 실험은 적어도 3회 수행되었다. 통계분석에는 Student`s t test 또는 two-way ANOVA를 사용하였다.
<실험결과>
간세포에서 PDX의 ER 스트레스 원인의 Palmitate 유도 TG 축적 억제 효과
200μM palmitate와 PDX(0-2μm)의 존재 하에, HepG2 세포에서 24시간동안 Oil-red O 염색하고, TG 축적은 이소프로필 알콜로 추출하여 정량하였다.
그 결과, 도 1A 및 도 1B에 나타나듯이, HepG2세포(간세포)에서 PDX에 의해 palmitate 유도 TG 축적과 SREBP1, FAS 및 SCD1을 포함한 지방생성 관련 유전자의 발현이 HepG2 세포에서 억제됨을 발견하였다. 이는, Palmitate가 ER스트레스를 증가시킴으로써 SREBP1 매개 경로를 통한 지질 축적을 야기하기 때문에, PDX가 palmitate에 의한 ER 스트레스에 미치는 영향을 평가한 결과이다.
또한, 도 1C에 나타낸 바와 같이, HepG2 세포를 PDX로 처리하면 Palmitate 유도 스트레스 및 관련 유전자 발현이 PDX 투여 용량 의존적으로 유의하게 감소되었다. 구체적으로, ER 스트레스 마커인 IRE-1, eIF2α 및 CHOP 인산화 및 발현을 확인하였으며, PDX 용량 의존적으로 상기 마커 농도가 유의하게 감소하였다.
PDX의 ORP150 발현 유도를 통한 간세포에서 ER 스트레스 및 TG 축적 억제 효과
본 발명자들은 ORP150이 ER 스트레스 및 TG 축적에 대한 PDX의 억제 효과에 관여하는지 여부를 조사하였다.
도 2A 내지 2C에서 확인할 수 있듯이, siRNA 매개 ORP150의 silencing은 HepG2 세포에서 ER stress의 억제를 억제하여 palmitate로 유도된 TG 축적에 미치는 PDX의 효과를 유의하게 감소시켰다.
구체적으로, 도 2A에 나타나듯이, ER 스트레스 마커인 IRE-1, eIF2α 및 CHOP의 발현을 스크램블 대조군 / 스크램블+Palmitate유도군 / 스크램블+Palmitate유도+PDX투여군 / 스크램블+Palmitate유도+PDX투여+siOPR150으로 ORP150을 silencing 시킨 군 에 대하여 각각 측정하였다. 그 결과, PDX는 ER 스트레스 마커의 발현을 감소시키고, siORP150 투여시 다시 마커의 발현이 증가함을 확인하였는 바, ORP150이 ER 스트레스 발현을 억제함을 확인하였다
도 2B에 나타나듯이, PDX 투여 또는 ORP150을 침묵시킨 군에 대하여 TG 축적을 측정한 결과이다. 그 결과 palmitate 유도 TG 축적은 PDX를 투여함으로써 억제되었으며, ORP150 유전자를 침묵시킨 결과 PDX의 TG 축적 억제 효과가 감소하는 것을 확인하였다.
도 2C에 나타나듯이, SREBP1, FAS 및 SCD1을 포함한 지방생성 관련 유전자의 발현이 PDX를 투여함으로써 억제되었으나, ORP150 유전자를 침묵시킨 결과 PDX의 지방생성 관련 유전자 발현 억제 효과가 유의하게 감소하는 것을 확인하였다.
상기 결과들로부터, PDX가 ORP150 발현을 유도하여, ER stress를 억제하고, palmitate 유도 TG 축적을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다.
PDX의 FOXO1 탈아세틸화를 통한 ORP150 발현 증가효과
본 발명자들은 24시간 동안 2μm의 PDX의 존재 하에서, 스크램블 siRNA 또는 siFOXO1로 형질감염된 HepG2 세포에서 ORP150에 대한 웨스턴 블럿 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 3A에 나타나듯이, PDX를 투여한 간세포에서 ORP150의 발현 수준이 증가하였으나, FOXO1 siRNA로 형질감염시킨 간세포는 PDX의 ORP150 발현 촉진 효과가 억제됨을 확인하였다.
또한, 본 발명자들은 24시간동안 0-2μM PDX의 존재 하에에서, 스크램블 siRNA 또는 siAMPK로 형질감염된 HepG2 세포에서 FOXO1의 아세틸화에 대한 웨스턴 블럿 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 3B에 나타나듯이, PDX를 투여한 간세포에서 PDX 농도 의존적으로 FOXO1의 아세틸화가 감소하였으며(탈아세틸화의 증가), AMPKsiRNA로 형질감염된 간세포는 PDX의 아세틸화 감소효과가 억제되었다.
상기 실험결과에 기초할 때, 본 발명 PDX는 FOXO1의 탈아세틸화를 통해 ORP150 발현을 증가시키며, ORP150 발현이 증가하면 ER 스트레스가 억제되어 중성지방 축적 또한 억제됨을 이해할 수 있다.
ORP150의 과발현을 통한, 팔미틴산 유도 TG 축적에 대한 억제 효과
본 발명자들은 24시간동안 200μM palmitate로 처리 및/또는 ORP150 0-4μg을 처리한 HepG2 세포에서 SREBP1 발현에 대한 웨스턴 블럿 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 4A에 나타나듯이, ORP150 처리 농도 의존적으로, palmitate가 유도하는 SREBP1 발현이 억제되었다.
또한, 본 발명자들은 24시간동안 palmitate로 처리된 HepG2 세포에 대하여 Oil-red O 염색을 수행하였다. TG 축적은 이소프로필 알코올로 추출하여 정량화 하였다.
도 4B에 나타나듯이, TG 축적은 ORP150 처리 농도 의존적으로 유의하게 감소됨을 확인하였다.
상기 실험결과에 기초할 때, ORP150이 간세포에서 중성지방 축적을 억제함을 알 수 있으며, 이는 PDX가 ORP150 발현을 증가시켜 간세포에서 중성지방 축적을 억제할 수 있음을 뒷받침하는 결과이다.
PDX 의 HFD 식이 마우스에 대한 간 지방증 치료 효과
본 발명자들은 마우스에서 지질 축적에 대한 PDX의 영향을 평가하였다. 이를 위해, 마우스 간 절편에 대하여 H&E 염색 및 Oil Red-O 염색으로 조직학적 분석 및 웨스턴 블랏 분석을 수행하였으며, TG 축적은 TG 분석 키트를 사용하여 측정했다.
그 결과, 도 5A 및 도 5B에 나타나듯이, HFD 식이는 간의 TG 축적 및 간에서의 지방 형성 관련 유전자인 SREBP1, FAS, 및 SCD1의 발현을 증가시켰다. 그러나 PDX 투여는 이러한 변화를 현저하게 역전시킨 결과를 나타냈다. 즉, PDX를 투여함으로써 간에서 중성 지방 축적이 현저하게 감소하였으며, 지방 형성 관련 유전자의 발현 또한 유의하게 감소한 결과를 나타냈다. 또한, 도 5A의 좌측의 간 절편 염색 결과를 통하여, HFD 식이 군에 PDX를 투여한 마우스군의 체내 축적 지방 비율이 HFD 식이군과 비교해 감소하였으며, 간섬유화도 거의 발생하지 않음을 알 수 있었다.
또한, 도 5C에 나타나듯이, 간 ER 스트레스 마커인 IRE-1, elF2α, 및 CHOP 또한 PDX 투여에 의해 억제되었다. 또한, 도 5D에 나타나듯이, HFD에 의한 간에서의 ORP150 발현 억제는 PDX 처리에 의해 현저하게 회복되었다.
도 5E는 지방조직이 특이적으로 분비하여 통상 혈중에 고농도로 존재하지만, 내장 지방 축적에 따라 그 농도가 감소한다고 알려진 아디포넥틴 수치를 혈청에서 평가한 것이다. PDX 투여는 HFD 식이로 아디포넥틴 농도가 감소된 마우스에서 혈청 아디포넥틴의 수준을 증가시켰다.
PDX의 마우스의 체중 및 간 중량 감소효과
본 발명자들은 8주간 상기 실험방법에 따라 PDX를 투여한 마우스의 체중, 일일 에너지 섭취량, 간 중량 및 부고환 지방량을 각 그룹 당 5 마리씩 측정하였다.
도 6A에 나타나듯이, HFD 식이 마우스와 비교하여, HFD 식이 마우스에 PDX를 투여한 마우스의 체중이 유의하게 감소한 것을 확인할 수 있었으며, 도 6C, 6D에 나타나듯이, PDX 투여 마우스의 간 중량 및 부고환 지방량 또한 HFD 식이 마우스와 비교하여 유의하게 감소한 것을 확인할 수 있었다.
상기 본 발명 실시예들로부터, PDX의 투여가 간 지방 축적 감소에 효과적임을 확인하였는 바, 지방간 질환을 위한 새로운 치료제로 사용될 수 있음을 알 수 있다.
본 발명자들은 프로텍틴 DX가 ORP150 발현 유도를 통해 지질 유도된 ER 스트레스를 억제함으로써 지방간 및 지질대사를 개선함을 입증하였는 바, 프로텍틴 DX가 고지혈증 또는 지방간 질환을 예방 또는 치료하고, 간을 보호할 수 있는 약학적 조성물 또는 식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있어 산업상 이용가능성이 있다.

Claims (6)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

    <화학식 1>
    Figure 112017085297193-pat00004

  2. 제1항에 있어서, 상기 프로텍틴 DX는 간조직의 중성지방 함량을 감소시키는 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 하기 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 또는 지방간 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    <화학식 1>
    Figure 112018115257363-pat00011

  4. 제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 지방간 질환은 간염, 간경변, 간세포암, 알콜성 지방간, 비알콜성 지방간, 영양성 지방간, 기아성 지방간 및 비 지방간으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 삭제
  6. 하기 화학식 1로 표시되는 프로텍틴 DX 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 식품 조성물.
    <화학식 1>
    Figure 112018115257363-pat00013
KR1020170112118A 2017-09-01 2017-09-01 프로텍틴 dx를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물 KR101981534B1 (ko)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170112118A KR101981534B1 (ko) 2017-09-01 2017-09-01 프로텍틴 dx를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물
JP2017180866A JP2019043928A (ja) 2017-09-01 2017-09-21 プロテクチンｄｘを有効成分として含有する高脂血症又は脂肪肝疾患の予防又は治療用組成物
CA2998772A CA2998772A1 (en) 2017-09-01 2018-03-21 Composition comprising protectin dx as active ingredient for preventing or treating hyperlipidemia or fatty liver disease
US16/115,983 US20190070140A1 (en) 2017-09-01 2018-08-29 Composition comprising protectin dx as active ingredient for preventing or treating hyperlipidemia or fatty liver disease

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170112118A KR101981534B1 (ko) 2017-09-01 2017-09-01 프로텍틴 dx를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190025456A KR20190025456A (ko) 2019-03-11
KR101981534B1 true KR101981534B1 (ko) 2019-05-23

Family

ID=65517595

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020170112118A KR101981534B1 (ko) 2017-09-01 2017-09-01 프로텍틴 dx를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20190070140A1 (ko)
JP (1) JP2019043928A (ko)
KR (1) KR101981534B1 (ko)
CA (1) CA2998772A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4054558A4 (en) * 2019-11-08 2023-11-29 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING TYPE 2 DIABETES
WO2022266763A1 (en) * 2021-06-25 2022-12-29 UNIVERSITé LAVAL Derivatives of the protectin 10s,17s-dihda (pdx) and use thereof as antiviral, anti-inflammatory, and anti-diabetic agents

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014113875A1 (en) 2013-01-25 2014-07-31 Universite Laval Use of protectin dx for the stimulation of muscular il-6 secretion

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009120607A (ja) * 2007-10-25 2009-06-04 Kanazawa Univ 新規な肝疾患の予防又は治療薬並びにインスリン抵抗性改善剤
US10568858B2 (en) * 2012-05-10 2020-02-25 Solutex Na Llc Oils with anti-inflammatory activity containing natural specialized proresolving mediators and their precursors
JP6157928B2 (ja) * 2012-05-29 2017-07-05 上野製薬株式会社 肝臓への脂肪蓄積抑制剤
KR101473524B1 (ko) * 2012-05-30 2014-12-17 연세대학교 원주산학협력단 당뇨병 합병증 치료용 또는 예방용 의약 조성물

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014113875A1 (en) 2013-01-25 2014-07-31 Universite Laval Use of protectin dx for the stimulation of muscular il-6 secretion

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Circulation Research. ,119: pp. 1030-1038, 2016.08.16
Journal of Leukocyte Biology, Volume99, Issue2, Pages 231-239, 2016.02.28
Scientific Reports volume 7, Article number: 1397, 2017.05.03*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20190025456A (ko) 2019-03-11
US20190070140A1 (en) 2019-03-07
CA2998772A1 (en) 2019-03-01
JP2019043928A (ja) 2019-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10188690B2 (en) Use of Kaempferia parviflora wall. ex. baker extracts or flavone compound for preventing or treating muscle diseases, or improving muscle function
US20070248705A1 (en) Agents for Activating the Transcription Factor Nrf2 and Foods Having Such Function
JP2019520319A (ja) 小豆を含む筋機能改善又は運動遂行能力向上用組成物
JP2021075551A (ja) 非アルコール性脂肪肝疾患および他の使用のためのブドウ生成物
KR101981534B1 (ko) 프로텍틴 dx를 유효성분으로 함유하는 고지혈증 또는 지방간 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR102095917B1 (ko) 강글리오사이드를 함유하는 근육 질환 예방 또는 치료용, 또는 근 기능 개선용 조성물
US8653143B2 (en) Use of panduratin derivative or Boesenbergia pandurata extract
KR101247802B1 (ko) 피페린 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물
KR102267472B1 (ko) 녹차 카테킨을 포함하는 중성지방 저감용 식품 조성물, 대사성 질환 개선용 식품 조성물 및 대사성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR100891881B1 (ko) 3,4,5-트리히드록시벤즈알데히드를 유효성분으로 포함하는고지혈증 및 ｍｍｐ 과다활성으로 인한 혈관질환 예방 및치료용 조성물
KR20180081222A (ko) 페룰릭산 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 식욕억제용 약학적 조성물
KR101552282B1 (ko) 디하이드로진저론을 함유하는 비만 치료 또는 예방용 조성물
KR102249535B1 (ko) 알카닌을 유효성분으로 포함하는 대사성 질환용 조성물
EP2684566B1 (en) Pharmaceutical composition for preventing and treating complications of diabetes containing a homonoia riparia extract or a fraction thereof as an active ingredient
KR101184343B1 (ko) 피페린 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물
KR101729078B1 (ko) 엔아미드류 화합물을 유효성분으로 함유하는 항비만 조성물
US10426769B2 (en) Pharmaceutical composition for preventing and treating obesity or liver diseases, containg TLR7 agonist
KR20190083071A (ko) 모과나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR102463328B1 (ko) 로즈힙 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20180071158A (ko) 우뭇가사리 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군 예방 또는 치료용 조성물
KR20180034874A (ko) 카테킨 함유 녹차 추출물을 포함하는 손상 근육의 재생을 촉진하는 약학 조성물
KR20210097252A (ko) 백하수오 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물 및 그 제조방법
KR101742237B1 (ko) 로바스틴을 함유하는 동맥경화증 및 염증질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR20210094453A (ko) 구절초 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20230000934A (ko) 커큐민 유도체와 TGF-β 수용체 억제제의 병용투여를 통한 비알코올성 지방간염 치료 방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)