KR101970990B1 - 백년초 열매의 유산균 고상 발효물을 이용한 여드름균에 대한 항균 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 백년초 열매의 유산균 고상 발효물을 이용한 여드름균에 대한 항균 조성물을 개시한다. 상기 고상 발효물은 백년초 열매 분말을 이용한 고상(solid phase)의 환(pills)을 제조하고 여기에 유산균인 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)를 접종하여 배양하여 얻어진 것이다.

Description

백년초 열매의 유산균 고상 발효물을 이용한 여드름균에 대한 항균 조성물{Composition having Antimicrobial Effects on Acnes Bacteria Using Solid Phase Lactobacillus-fermentation Product of Prickly Pear Fruits}

본 발명은 백년초(Opuntia ficus-indica, 손바닥선인장) 열매의 유산균 고상 발효물을 이용한 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 조성물에 관한 것이다.

손바닥 선인장이라고 불리기도 하는 백년초는 선인장과(Cactaceae)의 선인장속(Opuntia)에 속하는 열대성 귀화 식물로 우리나라에서는 제주도, 신안군 등 남해안 지방에 자생하고 있으며, 현재 제주도를 중심으로 백년초의 재배가 증가하고 있다.

백년초는 가뭄 저항성이 강하고 그 열매는 식용으로 이용된다. 백년초는 항궤양 효과, 이뇨 효과, 고혈압 예방 효과, 콜레스테롤 저하 효과, 혈당 저하 효과, 항당뇨 효과, 상처 치유 효과, 항염증 효과, 항산화 효과 등이 알려져 있다(Molecules 19: 14879-14901, 2014; Korean J. Food Preserv. 16: 953-958, 2009; Korean J. Food Preserv. 6: 345-349, 1999; J. Fd Hyg. Safety 27: 401-405, 2012; J Ethnopharmacol 76:1-9, 2001).

여드름은 모든 연령대에서 대부분의 사람들에게 발생하고 얼굴, 가슴, 어깨 부위 등에 면모, 농포, 구진, 결절 등의 형태로 나타나는 다형성 피부질환으로 2차

성숙이 있는 청소년기에 주로 발병한다. 11세에서 30세 사이에 약 80%가 발병하고, 30대 이후에서도 약 6%의 환자가 있는 것으로 보고되었으나 최근 들어 스트레스에 의한 성인 여드름의 발병 비율이 높아지고 있다. 이 질환은 환자에게 불쾌감을 주며 흉터 및 피부착색으로 인한 미관 손상을 일으킬 수 있다.

여드름의 발생원인은 정확한 원인은 밝혀져 있지 않았으며, 생리적 및 환경적 측면에서 [0003] 다양한 병인을 가지고 있기 때문에, 다양한 유형으로 발병하는 여드름에 대한 알맞은 치료에는 어려움이 있다.

일반적으로 피지선에서의 과도한 피지분비, 호르몬 불균형, 유전적 소질, 비정상적인 모낭 내 이상 각화 및 P. acnes의 증식 및 염증 반응 등 복합적인 요인으로 발생하며(Acne: Inflammation. Clin. Dermatol. 22: 380-384, 2004; An overview of acne. J. Invest. Dermatol. 62: 268-287, 1974), 이에 따라 여드름을 치료하기 위한 기본적인 방법으로 모낭 각화로 인한 형질 변화 교정, 피지선의 활동성을 감소, 여드름 유발 주요 균주에 대한 항균작용, 피부 항염작용 등이 적용되고 있다.

정상 피부에는 호기성 세균인 Staphylococci, Micrococci와 혐기성 세균인 Propionibacterium 속에 속하는 균등이 상주하고 있으며 이들 균주들의 활성에 의하여 여드름이 발생하게 될 수 있다. 특히 지방 친화를 지니는 혐기성 균주인 P. acnes가 여드름의 주요 원인균으로 지목되고 있다(Postgrad. Med. J. 75: 328, 1999).

여드름 주요 병원체인 P. acnes는 피부 내에 존재하는 혐기성 상재균으로써 피부 모낭 내에서 성장하는 지방 친화성 미생물이다. P. acnes는 남성호르몬인 androgen이나 다른 요인에 의해 생성된 피지의 트리글리세라이드(triglycerides)를 가수분해한 후 지방분해효소(lipase)와 화학주성인자의 분비를 통해 유리지방산을 생성하며 염증 반응을 일으킨다. 염증 반응이 진행됨에 따라 모낭 세포의 파괴가 나타나며 최종적으로 진피까지 염증 반응이 진행되게 된다. P. acnes와 같이 세균감염에 의한 여드름 발병에 대해 전신적인 치료 방법인 항생제 투여가 가장 큰 효과를 나타낸다(Pediatr. Dermatol. 14(6): 480-488, 1997).

여드름을 치료하기 위해 사용되는 항생제로는 테트라사이클린(tetracycline), 클린다미신(clindamycin) 등이 사용된다. 하지만 장기간 항생제를 사용할 경우 내성이 생겨 치료효과가 떨어질 수 있다(Kor. J. Dermatol. 33: 437-444, 1995).

최근 여드름의 예방 또는 치유를 위해 생약 등 천연물을 이용한 항균 활성 대한 많은 연구가 진행되고 있다(Kor. J. Microbiol. Biotechnol. 37(1): 80-84, 2009).

본 발명은 백년초 열매의 유산균 고상 발효물의 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 활성을 개시한다.

본 발명의 목적은 백년초(Opuntia ficus-indica, 손바닥선인장) 열매의 유산균 고상 발효물을 이용한 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 백년초 열매 분말을 이용한 고상(solid phase)의 환(pills)을 제조하고 여기에 유산균인 락토바실러스 플란타럼 KCCM 80077(Lactobacillus plantarum KCCM 80077)를 접종하여 백년초 열매 고상 발효물을 제조할 경우 그것의 추출물이 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 활성을 가짐을 확인함으로써 완성된 것이다. 백년초 열매 비발효환의 추출물이나 백년초 유산균(Lactobacillus plantarum KCCM 80077) 액상 발효물의 추출물은 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대해 항균 활성을 나타내지 않았으며, 또한 아래의 실험예에서 제시되어 있지 않지만, 락토바실러스 플란타럼 KCCM 80077 배양물 자체의 추출물도 항균 활성을 나타내지 않았다.

본 발명의 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 항균 조성물은 백년초 열매 분말에 정제수를 가하여 제조한 고상물(固狀物, solid phase product)에 유산균인 락토바실러스 플란타럼을 접종하여 얻어진 고상 발효물의 분말이나 그 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, "유효성분"은 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "고상 발효물의 추출물"이란 추출 대상인 그 고상물 자체 또는 그 분말을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등) 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.

본 발명에서, 상기 고상물의 형상은 특별한 제한이 없다. 환(pills) 형태, 과립 형태 등일 수 있다.

또 본 발명에서, 상기 고상물은 유산균 열매 분말에 정제수를 가하여 반죽한 후 일정 형상으로 성형하여 얻어질 수 있는데, 이 때 정제수는 백년초 열매 분말 100 중량부 기준 10 내지 30 중량부로 첨가될 수 있다. 10 중량부 이하로 첨가될 경우 그 고상물의 제조를 위한 충분한 반죽이 이루어지지 않을 수 있고 30 중량부를 넘어설 경우 수분 함량이 많아 그 고상물 형태로 제작하는데 어려움이 있을 수 있다. 일정 형상으로 성형한 후에는 자연건조(음건), 열풍건조 등 임의의 방식으로 건조됨으로써 수분의 일부가 제거된 후에(고상물의 수분 함량이 10%(w/w) 이하가 되도록) 유산균 발효에 사용될 수도 있다.

또 본 발명에서 상기 유산균인 락토바실러스 플란타럼은 바람직하게는 아래의 실시예에서 사용된 락토바실러스 플란타럼 KCCM 80077이다.

또 본 발명에서, 상기 유산균은 아래의 실시예에서 처럼 상기 접종 전 백년초 열매 물(열수 포함) 추출물로 활성화된 유산균, 구체적으로 백년초 열매 물 추출물과 당밀 등의 탄소원 등이 포함된 배지에 유산균을 접종·배양하여 얻어진 것을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명자들은 아래의 실험예에서 제시하지는 않았지만 백년초 열매 추출물로 활성화된 유산균을 사용할 경우 환의 심부까지 발효가 진행될 것으로 보고 있다. 이러한 백년초 열매 물(열수 포함) 추출물로 활성화된 유산균은 백년초 열매 물 추출물과 탄소원이 포함된 배지를 제조하고 여기에 유산균을 접종하여 얻어질 수 있는데, 이때 탄소원은 당업계에 공지된 임의의 탄소원, 예컨대 올리고당, 유당, 포도당, 과당, 설탕, 당밀, 덱스트로스, 전분, 글루코오스, 프럭토오스, 만노오스, 갈락토오스, 리보오스, 소르보오스, 리불로오스, 락토오스, 말토오스, 수크로오스, 라피노오스, 이들의 혼합물 등이 사용될 수 있고, 배지에의 첨가량은 1 내지 10%(w/v) 범위일 수 있으며, 또한 배지에는 질소원이나 미량원소가 0.1 내지 3%(w/v) 범위로 더 포함될 수 있는데, 질소원으로서는 암모니아, 암모늄염, 우레아, 아미노산, 대두박, 대두 단백질, 효모 추출물, 육즙 등을 들 수 있고, 미량원소로서는 칼슘, 마그네슘, 나트륨, 코발트, 몰리브덴, 칼륨, 망간, 아연, 구리, 철, 인, 황 등을 들 수 있다. 배양은 25℃ 내지 40℃, 바람직하게는 35 내지 37℃에서 12시간 내지 2일 정도 이루어질 수 있다.

또 본 발명에서, 상기 접종 후의 배양은 15℃~45℃의 온도 조건 특히 30℃~40℃의 온도 조건에서 이루어질 수 있다. 배양 온도가 상기 범위보다 낮을 경우 발효 속도가 느려질 수 있고 또한 원하지 않는 발효 산물이 생겨날 수 있으며, 배양 온도가 상기 범위보다 높을 경우도 발효 미생물의 사멸에 따라 마찬가지로 발효 속도가 느려지거나 원하지 발효 산물이 생겨날 수 있다. 배양 시간은 1 일 내지 7일 정도 이루어질 수 있다.

본 발명의 항균용 조성물은 그 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 그 유효성분인 왜당귀 잎 정유 추출물을, 본 발명의 항균용 조성물이 구체화되는 제품 형태에 따라 0.0001 중량% 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.0001 중량% 내지 15 중량%, 더 바람직하게는 0.0001 중량% 내지 10 중량%의 범위로 함유할 수 있다.

본 발명의 항균용 조성물은 그 유효성분 이외에 분산제와 담체를 포함하여 제조될 수 있다.

그러한 분산제로서 물, 알코올(예: 메틸 알코올, 에틸 알코올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 글리세린 등), 케톤(예: 아세톤, 메틸 에틸 케톤 등), 에테르(예: 디옥산, 테트라하이드로푸란, 셀로솔브, 디에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 등), 지방족 탄화수소(예: 헥산, 케로센 등), 방향족 탄화수소(예:벤젠, 톨루엔, 크실렌, 나프탈렌, 메틸 나프탈렌 등), 할로겐화 탄화수소(예: 클로로포름, 카본 테트라클로라이드 등), 산 아미드(예: 디메틸 포름아디드 등), 에스테르(예: 메틸 아세테이트 에스테르, 에틸 아세테이트 에스테르, 부틸 아세테이트 에스테르, 지방산 글리세린 에스테르 등), 니트롤(예: 아세토니트릴 등), 계면 활성제(고급 알코올 설페이트 에스테르, 알킬 설폰산, 알킬 알릴 설폰산, 4급 암모늄 염, 옥시 알킬 아민, 지방산 에스테르, 폴리알킬렌 옥시드 화합물, 안하이드로 소르비톨 화합물) 등을 들 수 있는데, 상기 분산제는 단독으로 또는 2종 이상의 혼합물로 본 발명의 항균용 조성물에 포함되어 제조될 수 있다.

담체의 경우로서는 점토(예: 카올린, 벤토나이트, 산 점토 등), 활석(예: 활석 분말, 납석 분말 등), 실리카(예: 규조토, 규산 무수물, 운모 분말 등), 알루미나, 황 분말, 활성탄 등이 예시될 수 있으며, 이들 담체도 단독으로 또는 2종 이상의 혼합물로서 본 발명의 항균용 조성물에 포함되어 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다. 본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 파악될 경우 그 약리효과 또는 그 용도는 여드름균에 대한 항균 활성에 의한 여드름 예방 또는 치료로 이해될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.

약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.

약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 피부 트러블 개선, 아토피 피부염 개선 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다. 제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등의 제품 형태를 띨 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 주름 개선 활성을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 항산화 활성이 상승하고 맛, 향, 조직감 등이 기호도가 상승한 백년초 열매의 유산균 발효환을 제공할 수 있다.

도 1은 평판배양 사진이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 백년초 유산균 발효환의 제조

(1) 백년초 유산균 발효환의 제조를 위하여, 미분쇄된 백년초 분말에 백년초 100 중량부 기준 15 중량부 정제수를 가하여 반죽하고 제환기를 이용하여 직경 3~4mm 환 형태로 제조한 후 당의기를 이용하여 균일한 모양의 원형으로 만들고 그 후 65~70℃에서 6~12시간 가량 건조하여 수분을 일부 제거하여(환의 수분 함량 10%(w/w) 이하) 백년초 비발효 환을 만들었다. 다음 이 비발효 환에 멸균된 분무기를 이용하여 유산균 희석액을 분무한 후 밀폐용기에서 30~37℃의 온도로 1~5일간(제조예 1 내지 5, 1일 배양은 제조예 1이고, 배양 기간에 따라 5일 배양은 제조예 5임) 배양하여 발효시키고, 발효 후 65~70℃에서 6~12시간 가량 건조하여 환 형태의 유산균 발효물을 제조하였다.

(2) 상기 유산균 희석액은 백년초 건조 분말에 20배(w/w)에 해당하는 정제수 1ℓ 투입하여 100℃에서 1시간 열수추출하고 그 추출액을 0.45㎛의 마이크로필터를 이용하여 여과한 후, 이 여액에 당밀 4%(w/v), 효모 추출물 1.2%(w/v), 탄산칼슘 0.5%(w/v)를 첨가·혼합하고 121℃에서 15분간 멸균하여 배지를 준비하고, 여기에 미리 MRS(DeMan, Rogosa, and Sharpe) broth 배지에서 준비한 Lactobacillus plantarum KCCM 80077 배양액을 1%(v/v) 접종하여 30℃ 내지 37℃의 온도에서 20시간 정치 배양하고, 배양 후 균체를 회수하기 위하여 10,000rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 제거하고, 생리식염수를 제거된 상층액의 만큼의 양으로 첨가·희석하여 준비하였다.

<비교예> 백년초 비발효환과 백년초 유산균 발효액의 제조

<비교예 1> 백년초 비발효환의 제조

백년초 비발효 환의 제조는, 상기 실시예와 동일하게 제조하였다. 구체적으로 미분쇄된 백년초 분말에 백년초 100 중량부 기준 15 중량부 정제수를 가하여 반죽하고 제환기를 이용하여 직경 3~4mm 환 형태로 제조한 후 당의기를 이용하여 균일한 모양의 원형으로 만들고 그 후 65~70℃에서 6~12시간 가량 건조하여 수분을 일부 제거하여 제조하였다.

<비교예 2> 백년초 유산균 발효액의 제조

백년초 유산균 발효액의 제조는 백년초 건조 분말에 20배(w/w)에 해당하는 정제수 1L 투입하여 100℃에서 1시간 열수추출하고 그 추출액을 0.45 m의 마이크로필터를 이용하여 여과한 후, 이 여액에 당밀 4%(w/v), 효모추출물 1.2%(w/v), 탄산칼슘 0.5%(w/v)를 첨가혼합하고 121℃에서 15분간 멸균하여 배지를 준비하였다. 준비한 배지에 미리 MRS (DeMan, Rogosa, and Sharpe) 평판 배지에서 준비한 Lacobacillus plantarum KCCM 80077의 균체를 취하여 접종하였고, 30 내지 37℃의 온도에서 20시간 정치 배양하였다. 배양액은 다시 121℃에서 15분간 멸균한 후, 동결건조하여 분말상으로 얻었다.

< 실험예 > 여드름 균에 대한 항균 활성 실험-생육저해환의 측정

여드름 균에 대한 항균 활성을 측정하기 위한 시료의 제조를 위해서, 상기 비교예 1의 백년초 비발효환과 상기 제조예 1 내지 5의 백년초 유산균 발효환 각각에, 상온에서 20배(w/v)에 해당하는 70% 주정(에탄올) 1 L를 투입하여 24 시간 추출한 후 0.45 m의 마이크로 필터를 이용하여 여과하는 과정을 3회 반복하고, 그 여액은 감압농축 동결건조하여 분말상의 추출물을 제조하여 사용하였다. 비교예 2의 백년초 유산균 배양액에 대해서도 상기와 동일하게 그 동결건조된 분말에, 상온에서 20배(w/v)에 해당하는 70% 주정(에탄올) 1 L를 투입하여 24 시간 추출한 후 0.45 m의 마이크로 필터를 이용하여 여과하는 과정을 3회 반복하고, 그 여액은 감압농축 동결건조하여 분말상의 추출물을 제조하여 사용하였다.

상기 얻어진 각 분말상의 추출물에 50% 에탄올을 가하여 100 mg/mL 농도의 시료 용액로 제조한 후, 이 100 mg/mL의 시료 용액 100 ㎕와 멸균 정제수 100 ㎕를 1:1(v/v)로 혼합하여, 최종적으로 25% EtOH 용액에 시료 50 mg/mL 농도가 되도록 제조하여, 항균 활성 측정을 위한 시료로 사용하였다.

항균 활성 측정에 이용된 균주는 Propionibacterium acnes로 KCTC(Korea Collection for Type Cultures)로부터 구입 분양받아 사용하였다. P. acnes의 배양 배지는 RCM(Reinforced clostridial medium)를 사용하여 활성화 시켰으며, 균을 배양 배지에 접종한 후 anaerobic jar에서 AnaeroGen (oxoid)를 이용하여 밀봉하여 37℃에서 48시간 동안 혐기성 배양하여 사용하였다.

생육저해환(clear zone) 측정법은 CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute) 표준방법을 변형하여 측정하였다. 구체적으로 평판배지에 순수 분리된 균주를 백금이로 취하여 RCM 액체 배지 10 mL에 현탁한 후 spectrophotometer를 이용하여 600 nm에서 0.08-0.10 범위의 흡광도를 갖도록 stock culture를 제조하였다. Stock culture는 10배 희석하여 working culture를 제조한 후 평판 배지에 100 ㎕ 분주하여 spreader로 균일하게 도말하였다. 균주가 도말된 RCM 고체 평판배지 표면에 멸균된 filter paper disc(8 mm, Tokyo, Japan)를 올려놓은 다음 50 mg/mL 농도의 시료용액 50 ㎕ 분주하여 흡수시킨 후 뒤집어서 37℃에서 48 hr 동안 혐기배양한 후 disc 주위의 clear zone(mm)의 직경을 1 disc당 4회 측정하였다.

대조구는 양성 대조구로 여드름 균주에 대한 항생제로 알려진 clindamycin(대조구 1)과 tetracycline(대조구 2)을 10% 농도로 멸균 정제수에 희석하여 제조하여 사용하였고, 음성 대조구로는 25% EtOH solution(대조구 3)을 제조하여 사용하였다. 결과는 각 농도별 3번 반복 실험에 따른 결과에서 filter paper disc(8 mm) 직경을 제외한 값에 대하여 평균편차를 구하여 아래 [표 1]에 나타내었고 각 군별 대표적인 평판배양 사진을 [도 1]에 나타내었다.

생육저해환

시료	Diameter of clear zone(mm)
대조구 1	26.0 ± 2.4
대조구 2	14.1 ± 4.1
대조구 3	N.D.
비교예 1	N.D.
비교예 2	N.D.
제조예 1	18.8 ± 1.3
제조예 2	17.2 ± 0.1
제조예 3	18.4 ± 1.0
제조예 4	18.3 ± 0.4
제조예 5	15.8 ± 1.3

상기 [표 1]과 [도 1]의 결과에서 확인되듯이, 비교예 1의 비발효 백년초 추출물과 비교예 2의 백년초 유산균 발효액 추출물의 경우 여드름 균주인 P. acnes에 대해서 항균 활성을 보이지 않았다. 25% EtOH(대조구 3)도 항균 활성을 보이지 않았다. 실시예의 백년초 유산균 발효환 추출물(제조예 1~5)의 경우 10% clindamycin (대조구 1)보다 낮은 항균 활성을 보였으나, 10% tetracycline(대조구 2)에 보다 높은 항균 활성을 나타내었다.

비교예 1의 비발효 백년초 추출물이 항균 활성을 보이지 않은데 반하여 실시예의 백년초 유산균 발효환 추출물(제조예 1~5)의 경우 높은 항균 활성을 보인 것은 백년초의 유산 발효에 의해 생성된 발효 산물이 P. acnes에 대하여 항균력을 가지기 때문으로 판단되고, 비교예 2의 백년초 유산균 발효액 추출물이 항균 활성을 보이지 않은 것은 유산균이 액상과 고상에서의 발효 환경 차이로 인하여 생성하는 발효 산물의 차이 때문으로 판단된다.

Claims (6)

1. 백년초 열매 분말에 정제수를 가하여 제조한 고상물(固狀物, solid phase product)에 유산균인 락토바실러스 플란타럼을 접종하여 얻어진 고상 발효물의 물과 에탄올의 혼합용매 추출물을 유효성분으로 포함하는, 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 70% 에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 유산균은 락토바실러스 플란타럼 KCCM 80077인 것을 특징으로 하는 백년초 열매를 이용한 항균 조성물.
   
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
   
5. 백년초 열매 분말에 정제수를 가하여 제조한 고상물(固狀物, solid phase product)에 유산균인 락토바실러스 플란타럼을 접종하여 얻어진 고상 발효물의 물과 에탄올의 혼합용매 추출물을 유효성분으로 포함하되,
   상기 추출물은 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는
   여드름 치료 또는 예방용 약제학적 조성물.
   
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