KR20190047629A - 홍화의 상황버섯 발효물을 함유하는 피부개선 조성물 - Google Patents

홍화의 상황버섯 발효물을 함유하는 피부개선 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 홍화를 상황버섯으로 발효시킨 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부개선 화장료 조성물, 의약외품 및 기능성식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 홍화의 상황버섯 발효물을 피부개선 기능성소재로 사용함으로써, 자연친화적이면서 부작용이 적은 천연물 유래의 제품에 대한 소비자들의 수요를 충족시킬 수 있음은 물론, 홍화를 상황버섯으로 발효시킴으로써 발효에 의한 홍화와 상황버섯의 두 가지 장점의 시너지 효과에 의한 기술경쟁력을 갖춘 제품을 개발할 수 있다.

Description

홍화의 상황버섯 발효물을 함유하는 피부개선 조성물 {Skincare composition comprising safflower Ferment Extract fermented by Phellinus linteus}
본 발명은 홍화를 상황버섯으로 발효시킨 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부개선 화장료 조성물, 의약외품 및 기능성식품 조성물에 관한 것이다.
최근 들어, 자연친화적이면서 부작용이 적은 천연물을 소재로 한 기능성화장품에 대한 소비자들의 관심이 높아지고 있으며, 이에 국내 화장품 회사는 물론 세계적인 화장품 회사에서도 천연물 유래의 각종 기능성 천연소재를 이용한 화장품을 개발해오고 있다.
이와 같이 천연물 유래 미백 기능성화장품, 주름개선 기능성화장품 등의 연구개발이 국내외에서 활발히 진행됨에 따라, 대부분의 단순 천연소재에 대한 국내외 연구가 포화상태에 이르고 있으며, 이에 바이오 컨버전(bio-conversion)에 의한 효능의 시너지효과를 근거한 연구개발로 연구방향이 전환되고 있는 추세이나, 아직까지 이와 관련된 연구는 미비한 실정이다.
바이오 컨버전의 구체적 예로는 상황버섯 종균을 인삼에 배양함에 따라 인삼 사포닌의 조성을 변화시킴으로써 인삼의 항암효과, 항암제의 내성억제 활성, 혈관 이완과 수축 효과, 혈소판 응집 억제, 및 뇌신경세포 보호효과를 현저히 향상시킬 수 있음을 개시하고 있다(대한민국 등록특허 제10-0706696호).
홍화(safflower)는 강원도 등 지역에 재배 및 분포하는 국화과 잇꽃(carthamus tinctorous Linne)의 관상화로써 식품, 생약, 한약제제, 화장품의 재료로 사용되어 오고 있다. 색소성분인 safflomin A, 플라보노이드 계열의 Kaempferol 등의 성분을 함유하는 것으로 보고되고 있다. 의약분야에서는 L-DOPA와 함께 중추신경 퇴행성 질환, 항신경염증제제(neroinflammation) 제제로 개발하는 연구가 진행되고 있다. 홍화의 70% 에탄올 추출물은 LPS에 의한 iNOS protein 및 mRNA 발현을 모두 억제하는 항암작용이 있는 것으로 보고되고 있다. 특히 전사인자 NF-kB DNA binding 억제활성실험 (Electrophoretic Mobility Shift Assay)에서 홍화 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 억제활성이 있는 것으로 보고되고 있다. 홍화의 hydroxysafflor yellow A는 외상성 뇌손상 랫드 모델에서 항산화효과와 섬유아세포의 TGF-β1 유도 활성 등이 보고되고 있으며, 홍화의 플라보노이드계 물질들이 파킨슨병의 로테논 유도 랫드 모델에 대한신경보호 효과 등 항산화, 항염, 항노화가 보고되고 있다.
한편 상기 언급한 홍화를 상황버섯으로 발효시켜 효능의 시너지효과를 발생시키는 방법 등에 대하여는 전혀 개시된 바가 없다.
이에, 본 발명자들은 천연물로부터 유래하여 자연친화적이면서 부작용이 적은 피부개선 기능성 조성물을 찾고자 예의 노력한 결과, 홍화를 상황버섯으로 발효시킴으로써 바이오 컨버전에 의한 홍화와 버섯의 두 가지 장점의 시너지 효과가 있는 것을 확인하고 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은, 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 홍화의 상황버섯 발효 추출물을 포함할 수 있으며, 보다 구체적으로 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물을 포함할 수 있다.
본 발명에서 "홍화(safflower)"는 국화과 잇꽃(carthamus tinctorous Linne)의 관상화로써 식품, 생약, 한약제제, 화장품의 재료로 사용되어 오고 있다.
본 발명에서 "홍화"는 홍화 꽃과 이것을 포함하는 건조물, 추출액, 이의 희석액 또는 농축액, 또는 추출액의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함할 수 있다.
상기 홍화를 상황버섯으로 발효시킴으로써 본 발명의 조성물의 유효성분인 홍화의 상황버섯 발효물을 제조할 수 있다.
본 발명에서 "발효"는 미생물 등이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해시키는 과정을 포함한다. 발효는 무산소호흡 중의 하나로서, 무산소호흡을 하는 생물들은 유기물을 완전히 분해시키지 못하고 다른 종류의 유기물을 만들어내기도 한다. 이러한 발효를 통해 미생물 및 미생물이 분비하는 효소에 의해 유기물이 자연 분해됨으로써 크기가 평균 80nm 이하로 작아져 피부흡수가 용이해지며, 발효에 따른 기존 성분의 강화와 더불어 새로운 유기물이 생성되어 영양성분이 증가되는 장점을 가질 수 있다. 또한, 미생물에 의해 인체에 유해한 중금속, 잔류농약 등과 같은 독성물질이 완전히 분해되어 인체에 무해하며, 발효 산물은 열과 이산화탄소에 강하고 잘 변질되지 않아 유효성분의 보존성이 증가될 수도 있다.
본 발명에서는 홍화, 구체적으로는 홍화 꽃을 미생물 균주를 이용하여 발효시키는 것일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 미생물은 상황버섯(Phellinus Linteus) 균사체일 수 있다. 본 명세서 내에서 상기 상황버섯 균사체는 상황버섯 종균과 혼용될 수 있다. 본 발명에서 용어 "발효물"은 발효 과정을 거쳐 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다.
본 발명의 발효에 이용되는 미생물은 소나무 비늘버섯과에 속하는 상황버섯(Phellinus Linteus)일 수 있다. 상기 "상황버섯"은 베타글루칸, 플라보노이드, 에르고스테롤 등 활성물질을 포함하여 항암, 면역 증강, 항산화 등의 생리활성이 있다고 알려져 있다.
또한, 본 발명의 발효방법에는 통상의 발효방법이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 발효 대상 유기물을 발효용 배지에 첨가하고, 상기 발효에 이용되는 미생물을 접종한 후 일정 조건 하에서 배양함으로써 이루어질 수 있다.
본 발명의 홍화는 미생물에 의해 발효되는 과정에서 독성 성분이 제거되고, 상황버섯에서 만들어 내는 우수한 유효성분들을 상당량 얻을 수 있을 뿐만 아니라, 발효에 의해 유효성분들이 저분자화 되면서 피부에 침투가 용이해지도록 하는 효과를 제공할 수 있다.
한편, 본 발명에서 용어 "추출물"은 목적하는 물질을 다양한 용매에 침지한 다음,상온, 저온 또는 가온 상태에서 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다.
상기 추출물은 천연, 잡종, 변종식물로부터 제한없이 추출될 수 있으며, 물(정제수), C1 내지 C6의 알코올 및 이들의 혼합용매를 이용하여 추출하여 수득될 수 있다. 또한, 상기 추출물을 수득하기 위한 방법은 본 발명의 추출물을 수득할 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로는 상기 홍화 또는 홍화 꽃의 발효물 등을 상기 용매에 침지하고 상온에서 추출하는 냉침추출법, 가열추출법, 초음파를 가하여 추출하는 초음파추출법, 환류 냉각기를 이용한 환류추출법 등의 방법을 사용할 수 있다.
또한, 상기 분획물은 이에 제한되지는 않으나, 물, 헥산, 에틸 아세테이트, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로 분획한 것일 수 있다.
본 발명에서 용어 "발효 추출물"은 상기 발효물을 추출하여 생성된 유용한 물질 자체를 의미할 수 있으며, 보다 구체적으로 발효 균주 및 발효물이 공존하는 발효 균주 배양 배지로부터 발효 균주를 원심분리하여 제거한 발효물, 상기 배양 배지로부터 발효 균주를 여과시킨 발효물, 상기 배양 배지로부터 발효 균주를 멸균 처리하고 이를 여과시킨 발효물, 상기 발효물을 희석시킨 희석액, 상기 발효물을 건조시킨 건조물을 추출하여 생성된 물질을 모두 포함할 수 있다. 본 명세서 내에서 용어 발효 추출물은 홍화 발효 추출물, 또는 홍화 꽃의 발효 추출물과 혼용될 수 있다.
본 발명에서 있어서, 상기 발효 추출물은 홍화 발효물의 추출물일 수 있고, 구체적으로 홍화 꽃 발효물의 추출물일 수 있으며, 보다 구체적으로 홍화 꽃 상황버섯 균사체 발효물의 추출물일 수 있다.
본 발명에서 "피부 개선"은 피부 상태를 개선시키는 것을 총칭하는 의미로 사용될 수 있다. 구체적으로 상기 피부 개선은 피부 주름 개선, 탄력 증가, 피부 재생, 상처 치유 또는 피부 항산화일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명에서 "주름 개선"은 피부의 주름의 수를 감소시키거나 깊이를 감소시키는 작용을 의미할 뿐만 아니라, 주름 개선을 통하여 피부 노화를 억제하는 것도 포함하는 것으로 해석된다. 피부 주름을 개선하기 위하여, 피부 섬유아세포를 활성화시키고 진피내 콜라겐 생성을 촉진하는 물질을 포함할 수 있다. 본 발명의 목적상 상기 주름 개선은 홍화의 상황버섯 발효물에 의하여 콜라겐 생성 등을 통해 수행될 수 있지만, 특별히 이에 제한되지는 않고, 이때, 사용되는 홍화의 상황버섯 발효물의 함량 역시 특별히 제한되지 않는다.
본 발명의 실시예에서는 인간 섬유아세포에 주름개선 효과가 있는 것으로 알려진 아스코르브산을 첨가하였을 때 보다, 홍화의 상황버섯 발효물을 첨가하여 배양하였을 때 더 높은 흡광도를 보임으로써 가장 우수한 피부세포 증식효능을 나타내었음을 확인하였고, 이에 홍화의 상황버섯 발효물이 우수한 주름개선 효능을 확인하였다(도 3a 내지 3d). 또한, 이는 비교군인 다른 상황버섯 발효물에 비해서도 우수한 수준이었다.
또한, 본 발명에서는 홍화의 상황버섯 발효물이 피부 주름 개선 뿐만 아니라 상처 치유 및 피부 재생 효능이 있음을 확인하였다. 상기 상처 치유(wound healing)는 임상적으로 피부가 완전하게 봉합되는 것을 의미하며, 각질세포(keratinocyte), 섬유모세포(fibroblast), 혈관내피세포(endothelial cell), 대식세포(macrophage), 혈소판(platelet) 등 여러 종류의 세포가 상호작용하며 조절하는 복잡한 과정이다. 또한, 이를 통해 피부 재생에 이를 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 wound healing assay를 통해 본 발명의 홍화 상황버섯 발효물이 우수한 상처 치유 및 피부 재생능이 있음을 확인하였다(도 5).
또한, 본 발명에서는 홍화의 상황버섯 발효물이 항산화 효능이 있음을 확인하였다(도 4).
종합하면, 본 발명의 홍화 상황버섯 발효물은 다양한 피부 상태 개선에 효과적이며, 단순 홍화 추출물 또는 상황버섯 발효물에 비하여 이들을 조합하였을 때 나타나는 시너지 효과가 있음을 알 수 있었다.
본 발명의 화장료 조성물은 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 내지 50 중량%의 홍화의 상황버섯 발효물을 포함할 수 있으며, 구체적으로는 0.0001 내지 20 중량%, 보다 구체적으로는 0.001 내지 10 중량%, 보다 더 구체적으로는 0.1 내지 5 중량%의 홍화의 상황버섯 발효물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 홍화의 상황버섯 발효물이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 뚜렷한 피부 섬유아세포 증식 효과를 기대하기 어렵고, 홍화의 상황버섯 발효물이 50 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나기 어렵고 제형상 및 제품의 안정성에 다소 문제를 일으킬 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 통상적으로 허용되는 성분들을 제한없이 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이 등의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 이용될 수 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알콜, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시테이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 오일, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
구체적으로, 본 발명의 홍화의 상황버섯 발효물을 의약외품 조성물에 포함시킬 수 있다.
상기 홍화 추출물 및 이의 발효물에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미하며, 피부 외용제 및 개인위생용품도 포함한다.
본 발명의 조성물을 피부 개선 등을 목적으로 의약외품에 포함시킬 경우, 상기 조성물을 그대로 포함하여 사용하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.
상기 피부외용제는 특별히 이에 제한되지 않으나, 예를 들어 연고제, 로션제, 스프레이제, 패치제, 크림제, 산제, 현탁제 또는 젤제의 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 식품 조성물, 건강보조식품, 기능성식품, 식품첨가제 조성물을 제공한다.
구체적으로, 본 발명의 홍화 추출물의 상황버섯 발효물을 기능성식품 조성물에 포함시킬 수 있다.
상기 홍화 및 이의 발효물에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 용어, "기능성식품"이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 가공한 식품을 의미한다. 본 발명의 조성물을 피부 개선 등을 목적으로 기능성식품에 포함시킬 경우, 상기 조성물을 그대로 포함하여 사용하거나 다른 기능성식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.
상기 기능성식품의 제형은 특별히 이에 제한되지 않으나, 예를 들어 액제, 과립제, 분말제, 캡슐제, 정제, 환제, 현탁제 또는 젤제의 형태로 제조되어 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 홍화의 상황버섯 발효물을 피부개선 기능성소재로 사용함으로써, 자연친화적이면서 부작용이 적은 천연물 유래의 제품에 대한 소비자들의 수요를 충족시킬 수 있음은 물론, 홍화를 상황버섯으로 발효시킴으로써 발효에 의한 홍화와 상황버섯의 두 가지 장점의 시너지 효과에 의한 기술경쟁력을 갖춘 제품을 개발할 수 있다.
도 1은 홍화 꽃 상황버섯 발효물의 추출 및 분획 프로세스를 도시한 도이다.
도 2는 홍화추출물과 홍화추출물의 상황버섯 발효물의 처리농도에 따른 콜라겐형성세포에서의 세포독성을 나타낸 도이다.
도 3a는 홍화 꽃 상황버섯 발효물(PH-10)의 에탄올 조추출물의 콜라겐 형성세포 증식능의 변화를 나타낸 도이다.
도 3b는 홍화 꽃 상황버섯 발효물(PH-10)의 헥산 분획물의 콜라겐 형성세포 증식능의 변화를 나타낸 도이다.
도 3c는 홍화 꽃 상황버섯 발효물(PH-10)의 에틸 아세테이트 분획물의 콜라겐 형성세포 증식능의 변화를 나타낸 도이다.
도 3d는 홍화 꽃 상황버섯 발효물(PH-10)의 부탄올 분획물의 콜라겐 형성세포 증식능의 변화를 나타낸 도이다.
도 4는 홍화 꽃 추출물 및 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 항산화 활성을 나타낸 도이다.
도 5는 홍화 꽃 추출물 및 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 상처 치유 효능을 확인한 도이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 홍화 발효 추출물의 제조
1-1: 홍화 꽃 발효물의 제조
먼저 홍화 꽃의 발효물을 제조하기 위해, 곡류(현미, 보리, 쌀)와 홍화 꽃을 준비하여 세척 후, 12시간 동안 침지하였다. 이후 총 중량을 기준으로 90 중량%(w/w)의 곡류와 홍화 꽃 10 중량%(w/w) 비율로 첨가하여 약 500 g 씩 비닐에 담아 기본 배지를 준비하였다. 상기 배지는 습열로 121℃에서 1시간 동안 멸균하였다. 이후, 황설탕 3%, 물엿 1%, 콩가루 0.3%의 비율로 혼합하여 제조된 영양액을 멸균하여 액체 종균(상황버섯 균사체, Phellinus Linteus)을 접종하였고, 이를 10일 간 통기배양발효하여 종균 배지를 제조하였다. 상황버섯 종균은 상기 기본 배지 500g 당 약 10ml씩 접종하여 고체배양하였다. 접종한 상황버섯 종균은 25-28℃에서 40-50일간 배양하였고, 이후 55℃에서 24시간 동안 열풍 건조하여 발효물을 제조하였다.
1-2: 홍화 꽃 발효 추출물의 제조
상기 실시예 1-1에서 제조된 발효물을 100% 에탄올(주정)을 이용하여 상온에서 24시간 동안 추출하였고, 에탄올을 증발시켜 홍화 꽃의 상황버섯 발효 추출물을 제조하였다.
1-3: 홍화 꽃 발효 추출물의 분획물의 제조
상기 실시예 1-2에서 제조된 홍화 꽃 발효 추출물을, 이후 헥산, 에틸 아세테이트, 및 부탄올을 차례로 이용하여 각각의 분획물을 제조하였다(도 1).
실시예 2: 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 세포독성조사
홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 세포독성을 조사하기 위하여, 피부 진피층의 콜라겐 형성세포인 인간 섬유아세포(human fibroblast)에 대한 세포독성효과를 조사하였다. 구체적으로 DMEM 배지에서 배양한 인간 섬유아세포를 96웰-플레이트에 각 웰당 10,000개 세포씩 씨딩(seeding)하였다. 여기에 상기 실시예 1에서 제조한 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물과 발효시키지 않은 홍화 꽃 추출물을 각각 0.125%부터 8%까지 첨가하고 72시간동안 배양하였다. 배양 후 살아있는 세포를 염색시키는 Easytox kit 시약을 처리하였고, 1시간 후 ELISA reader를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 경우 가장 높은 농도인 8% 첨가시에도 독성이 나타나지 않은 반면, 홍화 꽃 추출물의 경우 8% 첨가시 섬유아세포가 사멸하는 높은 세포독성을 나타내었다. 이는, 홍화를 상황버섯 발효하는 경우 세포독성을 나타내는 물질들이 분해되거나 변환됨으로써 본래 홍화가 갖고 있던 세포독성이 거의 없어지는 것을 시사하는 것이다. 오히려, 홍화 꽃 상황버섯 발효물을 0.125% 첨가시부터 8% 첨가시까지 증가시키는 경우, 섬유아세포 증식률이 100%에서 150%로 농도 의존적으로 증가하였으며, 이를 통하여 주름개선 효능이 우수함을 확인할 수 있다(도 2).
실시예 3: 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 주름개선효과 확인
상기 실시예 2에서 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물이 세포 독성이 없으며 오히려 세포 증식을 촉진함을 확인하였는바, 이를 보다 구체적으로 확인하고자 하였다.
피부 진피층의 콜라겐 형성세포인 인간 섬유아세포(human fibroblast)의 증식능을 측정함으로써 이의 주름개선효과를 시험하였다. 구체적으로 DMEM 배지에서 배양한 인간 섬유아세포를 96웰-플레이트에 각 웰당 10,000개 세포씩 씨딩(seeding)하였다. 여기에 양성대조군으로 피부 주름개선효과가 있는 것으로 알려진 아스코르브산(ascorbic acid)을 최적농도인 0.005%로 희석하여 첨가하고, 실험군으로 상기 실시예 1에서 제조한 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물(PH) (에탄올 추출물) 과 헥산 분획물, 에틸 아세테이트 분획물, 부탄올 분획물을 각각 농도별(10 ㎍/ml, 3.3 ㎍/ml 및 1.1 ㎍/ml)로 희석하여 첨가하고 상기 실시예 2의 방법으로 섬유아세포의 증식능을 조사하였다. 아울러, 비교군으로서 갈대 뿌리 상황버섯 발효 추출물(PG), 오디 상황버섯 발효 추출물(PO), 일반 곡류의 상황버섯 발효 추출물(P)을 이용하였다.
그 결과, 본 발명의 상기 실시예 1에서 제조한 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 첨가시에 가장 높은 흡광도를 보임으로써 우수한 피부세포 증식효능을 나타내었고, 이는 양성대조군으로 사용한 아스코르브산을 첨가하였을 때 보다도 더 높게 나타났다. 아울러, 이는 에탄올 조추출물(도 3a), 헥산 분획물(도 3b), 에틸 아세테이트 분획물(도 3c), 부탄올 분획물(도 3d)에서도 모두 마찬가지 였으며, 다른 상황버섯 발효 추출물인 비교군과 비교해서도 우수한 수준이었다. 이는 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물이 피부세포를 증식시키고 이를 통한 주름개선 효능이 우수함을 시사하는 것이다.
실시예 4: 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 항산화 효능 확인
홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 항산화 활성을 확인하고자 cell free ABST 방법으로 항산화 활성을 비교하였다.
구체적으로, 홍화 꽃 추출물 및 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물을 각 농도별로 희석한 것과, 1.0 M H2O2 를 20 ㎕ 섞은 후, 37℃에서 5분간 반응시킨 후, 이를 다시 1.25 mM ABTS와 1 U/ml peroxidase 를 30 ㎕ 넣고, 37℃에서 10분간 반응시켜 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 홍화 추출물 자체는 별다른 항산화 활성을 갖지 않으나, 발효시킨 추출물이 훨씬 우수한 항산화 활성을 갖는 것을 확인할 수 있었다. 구체적으로, 100 ㎍/ml 농도에서 홍화 추출물은 0.59%, 홍화 상황버섯 발효 추출물은 8.73%의 소거능을 나타내었다. 아울러, IC50 값으로 비교 측정하였을 때, 홍화 추출물은 12.15 mg/ml 이고, 홍화 상황버섯 발효 추출물은 0.65 mg/ml로 나타남으로써, 홍화 상황버섯 발효 추출물의 항산화 활성이 우수함을 확인할 수 있었다.
실시예 6: 홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 상처 치유 재생 효능 확인
홍화 꽃 상황버섯 발효 추출물의 상처 치유 및 피부 재생능 등을 확인하고자, 인간각질형성세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포를 이용한 wound healing assay를 수행하였다.
구체적으로, 인간각질형성세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포를 6-well plate에 8×105 cells/well 이 되도록 분주하고, 18시간 동안 starvation 시켜주었다. 각 well에 200 ㎕의 pipet tip 종단을 이용하여 세포의 '긁힘-손상' 방법의 항상을 단회로 유도한 다음, 농도별로 희석한 홍화 추출물 또는 홍화 상황버섯 발효 추출물을 처리 후 24시간 배양하였다. 배양하는 동안, 12시간마다 현미경용 카메라 (Olympus, Japan)를 이용하여 촬영하고, 촬영한 이미지는 image J 프로그램을 이용하여 창상의 회복 정도를 수치화하여 측정하였다.
상처치유는 세포 단층에 물리적 자극으로 스크래치를 만들고 시간 경과에 따라서 현미경으로 세포가 이동하여 스크래치 부위를 닫히게 하는 이미지를 포착하는 방법으로, 시간별로 일정 간격을 측정하여 창상의 회복 또는 세포의 이동 정도를 측정하였다. 홍화 추출물 및 홍화 상황버섯 발효 추출물을 1~50 μg/mL을 처리하였을 때, 두 추출물에서 모두 상처 닫힘(wound closure)에 대하여 효과를 나타내었는데, 특히 홍화 상황버섯 발효 추출물이 홍화 추출물보다 상처 닫힘에 대한 세포 이동 효과가 유의성 있게 나타났다. 따라서 홍화 상황버섯 발효 추출물이 우수한 피부장벽보호 및 재생효과가 있음을 확인하였다(도 5).
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

  1. 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 홍화는 홍화 꽃인 것인, 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 발효는 상황버섯(Phellinus Linteus) 균사체를 이용한 발효인 것인, 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 피부 개선은 피부 주름 개선, 피부 재생, 상처 치유 또는 피부 항산화인 것인, 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 물, 헥산, 에틸 아세테이트, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로 분획한 것인, 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 홍화의 발효 추출물은 전체 조성물 중량 대비 0.0001 내지 50 중량%인 것인, 화장료 조성물.
  8. 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 의약외품 조성물.
  9. 홍화의 발효 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 개선용 식품 조성물.
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