KR101966408B1 - 항체，약학적 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하나 이상의 탄수화물 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다. 또한 암 세포의 억제가 필요가 대상체에서 암 세포를 억제하기 위한 약학적 조성물 및 방법이 기재된다. 약학적 조성물은 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다.

Description

항체，약학적 조성물 및 이의 용도{ANTIBODIES, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND USES THEREOF}
관련 출원의 전후 참조
본 출원은 2014년 4월 10일 출원된 U.S. 특허 출원 61/977,824호, 및 2014년 9월 30일 출원된 U.S. 특허 출원 62/057,381호의 이익을 주장하며, 이들 모두의 기재는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
분야
본 발명은 적어도 하나의 종양-관련 탄수화물 항원 또는 이의 단편에 특이적인 부분 또는 특이한 변이체를 포함하는, 종양-관련 탄수화물 항원에 대한 항체, 뿐만 아니라 이러한 항체를 인코딩하는 핵산, 상보적 핵산, 벡터, 숙주 세포 및 항체를 포함하는 치료적 제형 및 약학적 조성물을 포함하는, 이의 제조 및 이용 방법에 관한 것이다. 추가로, 항체를 암 세포를 억제하기에 효과적인 양으로 대상체에 투여하는 방법이 제공된다.
다수의 표면 탄수화물은 악성 종양 세포에서 발현된다. 예를 들어, Globo H (Fuc α1 --> 2Galß1 --> 3GalNAcß1 --> 3Gal α1 --> 4Galß1 --> 4Glc)는 다양한 상피암에서 과발현되는 것으로 밝혀졌고 종양 공격성 및 유방암 및 소세포폐암종에서의 좋지 않은 예후와 관련된다. 종래 연구는 Globo H 및 단계-특이적 배아 항원 3 (SSEA3, Gb5로도 불림)이 유방암 세포 및 유방암 줄기 세포에서 관찰됨을 밝혀 내었다 (WW Chang et al. "Expression of Globo H and SSEA3 in breast cancer stem cells and the involvement of fucosyl transferases 1 and 2 in Globo H synthesis. PNAS, 105(33):11667-11672).
이러한 발견은 암의 효과적인 치료 및/또는 예방에 대한 충족되지 않은 요구가 여전히 존재하므로 종양 관련된 탄수화물 항원에 대한 항체의 개발에 대한 이론적 근거를 지지한다. 본 발명은 상기 및 그 밖의 요구를 만족시키기 위한 종양 관련된 탄수화물 항원에 대한 항체를 제공한다.
발명의 개요
본 발명은 당 분야에 공지된 것과 함께, 본원에서 기재되고 가능한 바와 같이, 탄수화물 항원에 결합하는 가변 도메인을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분, 이러한 항체의 컨쥬게이션된 형태, 인코딩 또는 상보적 핵산, 이와 관련된 벡터, 숙주 세포, 조성물, 제형, 디바이스, 유전자이식 동물, 유전자이식 식물, 및 이를 제조하고 이용하는 방법을 제공한다. 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 약 10E-7 M 또는 그 미만, 약 10E-8 M 또는 그 미만, 약 10E-9 M 또는 그 미만, 약 10E-10 M 또는 그 미만, 약 10E-11 M 또는 그 미만, 또는 약 10E-12 M 또는 그 미만의 해리 상수 (KD)를 지닐 수 있다. 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간화되거나 키메라일 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 3에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 4에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다.
또한 다른 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 3에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 4에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다.
네 번째 구체예에서, 본 발명은 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 5, 6 및 7에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR), CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 예시적 구체예에서, 중쇄는 리더 서열(leader sequence)과 상기 CDR1 사이에 SEQ ID NO: 87과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 추가로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 중쇄는 상기 CDR2와 상기 CDR3 사이에 SEQ ID NO: 89와 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 추가로 포함한다. 또한 다른 예시적 구체예에서, 중쇄는 중쇄의 상기 CDR1과 상기 CDR2 사이에 SEQ ID NO: 11과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 추가로 포함하고, 여기서 프레임워크는 위치 9에 글리신을 함유하고 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Globo H와 같은 탄수화물 항원에 결합한다.
다섯 번째 구체예에서, 본 발명은 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 8, 9 및 10에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 예시적 구체예에서, 경쇄는 리더 서열과 상기 CDR1 사이에 SEQ ID NO: 88과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 추가로 포함한다. 또 다른 예시적 구체예에서, 경쇄는 경쇄의 상기 CDR2와 상기 CDR3 사이에 SEQ ID NO: 90과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 추가로 포함한다. 또한 다른 예시적 구체예에서, 경쇄는 경쇄의 상기 CDR1과 상기 CDR2 사이에 SEQ ID NO: 12와 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 추가로 포함하고, 여기서 프레임워크는 위치 12에 프롤린을 함유하고 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Globo H에 결합한다. 또한 다른 예시적 구체예에서, 경쇄는 경쇄의 상기 CDR1과 상기 CDR2 사이에 SEQ ID NO: 12와 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 추가로 포함하고, 여기서 프레임워크는 위치 13에 트립토판을 함유하고 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Globo H와 같은 탄수화물 항원에 결합한다.
여섯 번째 구체예에서, 본 발명은 중쇄 영역 및 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 5, 6 및 7에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 8, 9 및 10에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 중쇄 영역이 SEQ ID NO: 5, 6 또는 7로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다. 다른 구체예에서, 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 경쇄 영역이 SEQ ID NO: 8, 9 또는 10으로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 13에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 14에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 13에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 14에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다.
예시적 구체예는 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 15, 16 및 17에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 또 다른 예시적 구체예는 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 18, 19 및 20에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
또 다른 예시적 구체예는 중쇄 영역 및 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 15, 16 및 17에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 18, 19 및 20에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 중쇄 영역이 SEQ ID NO: 15, 16 또는 17로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다. 다른 구체예에서, 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 경쇄 영역이 SEQ ID NO: 18, 19 또는 20으로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다.
본 발명의 한 구체예는 SEQ ID NO: 21에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다.
본 발명의 또 다른 구체예는 SEQ ID NO: 22에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다.
또한 본 발명의 다른 구체예는 SEQ ID NO: 21에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 22에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다.
예시적 구체예는 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 23, 24 및 25에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 또 다른 예시적 구체예는 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 26, 27 및 28에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
또 다른 예시적 구체예는 중쇄 영역 및 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 23, 24 및 25에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 26, 27 및 28에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 중쇄 영역이 SEQ ID NO: 23, 24 또는 25로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다. 다른 구체예에서, 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 경쇄 영역이 SEQ ID NO: 26, 27 또는 28로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 29에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 기재한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 30에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 기재한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 29에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 30에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 기재한다.
예시적 구체예는 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 31, 32 및 33에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 또 다른 예시적 구체예는 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 34, 35 및 36에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
또 다른 예시적 구체예는 중쇄 영역 및 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 31, 32 및 33에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 34, 35 및 36에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 중쇄 영역이 SEQ ID NO: 31, 32 또는 33으로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다. 다른 구체예에서, 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 경쇄 영역이 SEQ ID NO: 34, 35 또는 36으로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다.
본 발명의 한 구체예는 SEQ ID NO: 37에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구체예는 SEQ ID NO: 38에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구체예는 SEQ ID NO: 37에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 38에 도시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다.
예시적 구체예는 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 39, 40 및 41에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 또 다른 예시적 구체예는 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 42, 43 및 44에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
또 다른 예시적 구체예는 중쇄 영역 및 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하고, 여기서 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 39, 40 및 41에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 42, 43 및 44에 각각 개시된 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR, CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 구체예에서, 중쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 중쇄 영역이 SEQ ID NO: 39, 40 또는 41로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다. 다른 구체예에서, 경쇄 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 경쇄 영역이 SEQ ID NO: 42, 43 또는 44로부터 선택되는 아미노산 서열과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다.
본 발명은 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 유효량의 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, Globo H 발현 암 세포를 억제하는 방법을 제공하고, 이 때 Globo H 발현 암 세포가 억제된다.
본 발명은 또한 2C2 (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC) 수탁 번호 PTA-121138 하에 기탁됨), 3D7 (ATCC 수탁 번호 PTA-121310 하에 기탁됨), 7A11 (ATCC 번호 PTA-121311 하에 기탁됨), 2F8 (ATCC 수탁 번호 PTA-121137 하에 기탁됨) 및 1E1 (ATCC 수탁 번호 PTA-121312 하에 기탁됨)로서 지정된 하이브리도마 클론, 및 그로부터 생성된 항체 또는 항원-결합 부분을 제공한다.
도 1은 마우스에서의 췌장암 (HPAC) 부피에 대한 PBS, Globo H-VK9 mAb, Globo H-2C2 mAb 및 Globo H-3D7 mAb의 효과를 도시하는 선형 플롯이다.
도 2는 마우스에서의 유방암 (MCF7) 부피에 대한 생리 식염수 및 상이한 용량의 Globo H-2C2 mAb의 효과를 도시하는 선형 플롯이다.
도 3a-3f는 Globo H-2C2 mAb (도 3a), Globo H-7A11 mAb (도 3b), Globo H-3D7 mAb (도 3c), Globo H-2F8 mAb (도 3d), Globo H-1E1 mAb (도 3e) 및 Globo H-VK9 mAb (도 3f)와 다양한 탄수화물 항원의 결합 친화성을 도시하는 막대 그래프이다.
발명의 상세한 설명
본원에서 사용되는 단수 형태는 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나의)의 상기 형태의 문법적 객체를 나타낸다. 예로서, "엘리먼트"는 한 엘리먼트 또는 하나 초과의 엘리먼트를 의미한다.
본원에서 사용되는 "유효량"은 감지할 수 있는 덩어리로서 임상적으로 또는 다양한 영상화 수단을 통해 방사선적으로 검출될 수 있는, 체중 감소, 통증 및 감지할 수 있는 덩어리와 같은 암의 증상 및 징후를 감소시키기에 충분한 백신 또는 약학적 조성물의 용량을 나타낸다. 용어 "유효량" 및 "치료적 유효량"은 상호교환적으로 사용된다.
용어 "대상체"는 암을 지닌 척추동물 또는 암 치료가 필요한 것으로 여겨지는 척추동물을 나타낼 수 있다. 대상체는 모든 온혈 동물, 예컨대 포유동물, 예컨대 영장류, 및 보다 바람직하게는 인간을 포함한다. 인간이 아닌 영장류도 대상체이다. 용어 대상체는 애완 동물, 예컨대 고양이, 개 등, 가축 (예를 들어, 소, 말, 돼지, 양, 염소 등) 및 실험용 동물 (예를 들어, 마우스, 토끼, 랫트, 게르빌루스쥐, 기니 피그 등)을 포함한다. 따라서, 수의적 용도 및 의학적 제형이 본원에서 고려된다.
본원의 모든 숫자는 근사치이며 "약"에 의해 수정될 수 있다.
본 발명은 암 세포의 치료 또는 억제를 위한 약학적 조성물 및 방법을 제공한다. 약학적 조성물은 마우스 모노클로날 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 또는 상기 중 어느 하나의 항원-결합 부분을 포함하는, 탄수화물 항원을 인지하는 항체를 포함한다. 이러한 항체 (또는 이의 항원-결합 부분)는 탄수화물 항원을 중화시키고/거나 암 세포를 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 암 세포의 치료 또는 억제에 이용될 수 있다.
본 발명의 항체는 본원에 기재된 대로 2C2로서 지정된 하이브리도마 (ATCC 수탁 번호 PTA-121138하에 기탁됨), 3D7로서 지정된 하이브리도마 (ATCC 수탁 번호 PTA-121310 하에 기탁됨), 7A11로서 지정된 하이브리도마 (ATCC 수탁 번호 PTA-121311 하에 기탁됨), 2F8로서 지정된 하이브리도마 (ATCC 수탁 번호 PTA-121137 하에 기탁됨), 또는 1E1로서 지정된 하이브리도마 (ATCC 수탁 번호 PTA-121312 하에 기탁됨)에 의해 생성된 항체로부터 유래된, 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 임의의 단백질 또는 펩티드, 또는 이의 리간드 결합 부분을 포함한다. 항체는 항체 단편, 항체 변이체, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 및 재조합 항체 등을 포함한다. 항체는 마우스, 토끼 또는 인간에서 생성될 수 있다.
본 발명의 항체는 또한 본 발명의 항체로부터 생성된 키메라 또는 인간화된 모노클로날 항체를 포함한다.
따라서, 본 발명의 항암 항체는 본 발명의 항체로 혼입될 수 있는 비-뮤린 기원, 바람직하게는 인간 기원의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 영역, 또는 이의 임의의 부분을 함께 포함한다.
본 발명의 항체는 시험관내(in vitro), 동일계내(in situ) 및/또는 생체내(in vivo)에서 적어도 하나의 Globo-H 발현 암 세포 활성을 조절, 감소, 길항, 완화, 경감, 차단, 억제, 폐지 및/또는 간섭할 수 있다.
용어 "항체"는 항체 미메틱을 포함하거나 각각이 본 발명의 항암 항체로부터 유래된 적어도 하나의 CDR을 함유하는 단일쇄 항체 및 이의 단편을 포함하는, 항암 항체 또는 이의 명시된 단편 또는 부분의 구조 및/또는 기능을 모방하는 항체의 부분을 포함하는 항체, 분해 단편, 명시된 부분 및 이의 변이체를 포함하도록 추가로 의도된다. 기능성 단편은 Globo-H 발현 암 세포에 결합하는 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들어, Globo-H 발현 암 세포에 결합할 수 있는 항체 단편 또는 이의 부분, 예를 들어 비제한적으로 Fab (예컨대, 파파인 분해에 의해), Fab' (예컨대, 펩신 분해 및 부분 환원에 의해) 및 F(ab')2 (예컨대, 펩신 분해에 의해), facb (예컨대, 플라스민 분해에 의해), pFc' (예컨대, 펩신 또는 플라스민 분해에 의해), Fd (예컨대, 펩신 분해, 부분 환원 및 재응집에 의해), Fv 또는 scFv (예컨대, 분자 생물학 기법에 의해) 단편이 본 발명에 포함된다 (예컨대, Colligan, Immunology를 참조하라, 상술함).
본원에서 사용되는 2C2는 하이브리도마 클론 또는 상응하는 하이브리도마 클론에 의해 생성된 항체를 나타낸다.
항체의 항원-결합 부분은 탄수화물 항원 (예컨대, Globo H, SSEA-3 또는 SSEA-4)에 특이적으로 결합하는 항체의 부분을 포함할 수 있다.
본 발명의 인간화된 항체는 인간이 아닌 종으로부터의 항체이고 여기서 비-항원 결합 영역 (및/또는 항원-결합 영역)의 아미노산 서열은 항체가 원래의 그 결합 능력을 유지하면서 인간 항체와 더욱 밀접하게 닮도록 변경되었다.
인간화된 항체는 항원 결합에 직접 관여하지 않는 가변 영역의 서열을 인간 가변 영역으로부터의 동등한 서열로 대체함에 의해 생성될 수 있다. 이러한 방법은 중쇄 또는 경쇄 중 적어도 하나로부터의 가변 영역의 전부 또는 일부를 인코딩하는 핵산 서열을 단리, 조작, 및 발현시키는 것을 포함한다. 그러한 핵산의 공급원은 당분야 숙련자에게 잘 알려져 있다. 그 후 인간화된 항체를 인코딩하는 재조합 DNA, 또는 이의 단편은 적절한 발현 벡터로 클로닝될 수 있다.
항체 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 CDR로서 지칭되는 3개의 과가변 영역에 의해 중단된 프레임워크 영역을 포함한다. 한 구체예에서, 인간화된 항체는 인간이 아닌 종으로부터의 1, 2 또는 모든 CDR 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 1, 2 또는 3개 모두의 프레임워크 영역을 갖는 인간이 아닌 종으로부터의 항체 분자이다.
본 발명의 한 양태에 따르면, CDR 및 프레임워크 잔기의 위치는 문헌[Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242]에 기재된 방법에 의해 결정된다. 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 하기 구조를 지닐 수 있다:
리더 서열- FW1-CDR1-FW2-CDR2-FW3 -CDR3-
여기서 프레임워크 영역인 FW1, FW2, FW3 및 CDR인 CDR1, CDR2, CDR3은 표 1에 기재된 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명의 인간화된 항체는 당 분야에 널리 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 일단 비-인간 (예컨대, 뮤린) 항체가 수득되면, 가변 영역을 시퀀싱하고, CDR 및 프레임워크 잔기의 위치를 결정할 수 있다. 문헌[Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242. Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917]. 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 DNA는, 임의로, 상응하는 불변 영역에 라이게이션된 다음 적절한 발현 벡터로 서브클로닝될 수 있다. CDR-그래프팅된 항체 분자는 CDR-그래프팅 또는 CDR 치환에 의해 생성될 수 있다. 면역글로불린 사슬 중 1, 2, 또는 모든 CDR이 대체될 수 있다. 예를 들어, 특정 항체의 CDR 전부는 비-인간 동물의 적어도 일부로부터 비롯될 수 있거나 (예컨대, 마우스 예컨대 표 1에 도시된 CDR) CDR 중 단지 일부가 대체될 수 있다. 소정의 탄수화물 항원 (예컨대, Globo H)에 대한 항체의 결합에 요구되는 CDR을 유지하는 것만이 필요하다. 문헌[Morrison, S. L., 1985, Science, 229:1202-1207. Oi et al., 1986, BioTechniques, 4:214. U.S. Patent Nos. 5,585,089; 5,225,539; 5,693,761 and 5,693,762. EP 519596. Jones et al., 1986, Nature, 321:552-525. Verhoeyan et al., 1988, Science, 239:1534. Beidler et al., 1988, J. Immunol., 141:4053-4060].
또한 본원에 기재된 1 또는 2개의 가변 영역과 함께, 비제한적으로 인간, 토끼, 양, 개, 고양이, 소, 말, 염소, 돼지, 원숭이, 유인원, 고릴라, 침팬지, 오리, 거위, 닭, 양서류, 파충류 및 다른 동물을 포함하는 적어도 하나의 상이한 종으로부터의 서열로 대체된 다른 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 본 발명에 포함된다.
키메라 항체는 상이한 부분이 상이한 동물 종으로부터 유래되는 분자이다. 예를 들어, 항체는 뮤린 mAb 및 인간 면역글로불린 불변 영역으로부터 유래되는 가변 영역을 함유할 수 있다. 키메라 항체는 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 수 있다. 문헌[Morrison, et al., Proc Natl Acad Sci, 81:6851-6855 (1984)]. 예를 들어, 뮤린 (또는 다른 종) 항체 분자를 인코딩하는 유전자를 제한 효소에 의해 분해하여 뮤린 Fc를 인코딩하는 영역을 제거한 다음, 인간 Fc 불변 영역을 인코딩하는 유전자의 동등한 부분을 재조합 DNA 분자로 치환시킨다. 키메라 항체는 또한 뮤린 V 영역을 인코딩하는 DNA가 인간 불변 영역을 인코딩하는 DNA에 라이게이션될 수 있는 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 수 있다. 문헌[Better et al., Science, 1988, 240:1041-1043. Liu et al. PNAS, 1987 84:3439-3443. Liu et al., J. Immunol., 1987, 139:3521-3526. Sun et al. PNAS, 1987, 84:214-218. Nishimura et al., Canc. Res., 1987, 47:999-1005. Wood et al. Nature, 1985, 314:446-449. Shaw et al., J. Natl. Cancer Inst., 1988, 80:1553-1559. International Patent Publication Nos. WO1987002671 and WO 86/01533. European Patent Application Nos. 184, 187; 171,496; 125,023; and 173,494. U.S. Patent No. 4,816,567].
항체는 전장일 수 있거나 항원-결합 부분을 갖는 항체의 단편 (또는 단편들), 예를 들어 비제한적으로 Fab, F(ab')2, Fab', F(ab)', Fv, 단일쇄 Fv (scFv), 이가 scFv (바이-scFv), 삼가 scFv (트리-scFv), Fd, dAb 단편 (예컨대, Ward et al., Nature, 341:544-546 (1989)), 단리된 CDR, 디아보디(diabodies), 트리아보디(triabodies), 테트라보디(tetrabodies), 선형 항체, 단일쇄 항체 분자, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함할 수 있다. 재조합 방법, 또는 합성 링커를 이용하여 항체 단편을 연결시켜 생성된 단일쇄 항체가 또한 본 발명에 포함된다. 문헌[Bird et al. Science, 1988, 242:423-426. Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85:5879-5883].
본 발명의 항체 또는 항원-결합 부분은 단일특이적, 이중특이적 또는 다중특이적일 수 있다. 다중특이적 또는 이중특이적 항체 또는 이들의 단편은 한 표적 탄수화물 (예컨대, Globo H)의 상이한 에피토프에 특이적일 수 있거나 하나 초과의 표적 탄수화물에 특이적인 항원-결합 도메인을 함유할 수 있다 (예컨대, Globo H, SSEA-3 및 SSEA-4에 특이적인 항원-결합 도메인). 한 구체예에서, 다중특이적 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 적어도 2개의 상이한 가변 도메인을 포함하고, 이 때 각각의 가변 도메인은 분리된 탄수화물 항원 또는 동일한 탄수화물 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 문헌[Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69. Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244]. 본 발명의 항체는 또 다른 기능성 분자, 예컨대 또 다른 펩티드 또는 단백질에 연결되거나 공동-발현될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 이의 단편은 하나 이상의 다른 분자 실체, 예컨대 또 다른 항체 또는 항체 단편에 기능적으로 연결되어 (예컨대, 화학적 커플링, 유전자 융합, 비공유 회합 또는 기타에 의해) 제2 결합 특이성을 지닌 이중특이적 또는 다중특이적 항체를 생성할 수 있다.
모든 항체 아이소형, 예를 들어 IgG (예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA (IgA1, IgA2), IgD 또는 IgE (모든 부류 및 서브부류가 본 발명에 포함됨)가 본 발명에 포함된다. 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 포유동물 (예컨대, 마우스, 인간) 항체 또는 이의 항원-결합 부분일 수 있다. 항체의 경쇄는 카파 또는 람다 타입일 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 영역은 비-인간 또는 인간 공급원으로부터 비롯될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 프레임워크는 인간, 인간화, 비-인간 (예컨대, 인간에서 항원성을 감소시키도록 변형된 뮤린 프레임워크), 또는 합성 프레임워크 (예컨대, 컨센서스 서열)일 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및/또는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 약 10E-7 M 미만, 약 10E-8 M 미만, 약 10E-9 M 미만, 약 10E-10 M 미만, 약 10E-11 M 미만, 또는 약 10E-12 M미만의 해리 상수 (KD)로 Globo H에 특이적으로 결합한다. 한 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 1~10 x 10E-9 또는 그 미만의 해리 상수 (KD)를 갖는다. 또 다른 구체예에서, Kd는 표면 플라스몬 공명에 의해 결정된다.
항체는 클론 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역을 지니고, 또한 탄수화물 항원 (예컨대 Globo H)에 결합할 수 있다. 상동성은 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 수준에서 존재할 수 있다.
일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은, 예를 들어, 표 1에 도시된 하이브리도마 2C2, 하이브리도마 3D7, 하이브리도마 7A11, 하이브리도마 2F8 및 하이브리도마 1E1에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄를 포함한다.
관련 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은, 예를 들어, 하이브리도마 2C2, 하이브리도마 3D7, 하이브리도마 7A11, 하이브리도마 2F8 및 하이브리도마 1E1로부터 생성된 항체의 가변 종쇄의 CDR 및/또는 가변 경쇄의 CDR을 포함한다. 이러한 하이브리도마 클론으로부터의 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 프레임워크의 CDR은 표 1에 도시된다.
표 1: 서열 목록: SEQ ID NO. 1 - 90
Figure 112016084959905-pct00001
Figure 112016084959905-pct00002
Figure 112016084959905-pct00003
Figure 112016084959905-pct00004
Figure 112016084959905-pct00005
Figure 112016084959905-pct00006
Figure 112016084959905-pct00007
Figure 112016084959905-pct00008
Figure 112016084959905-pct00009
본 발명은 또한 탄수화물 항원에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 한 구체예에서, 탄수화물 항원은 Globo H이다. 또 다른 구체예에서, 탄수화물 항원은 SSEA-3이다. 또한 다른 구체예에서, 탄수화물 항원은 SSEA-4이다. 핵산은 세포에서 발현되어 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성할 수 있다.
특정 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 하기 중 어느 하나와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역을 포함한다:
a) SEQ ID NO: 3 (하이브리도마 2C2);
b) SEQ ID NO: 13 (하이브리도마 3D7);
c) SEQ ID NO: 21 (하이브리도마 7A11);
d) SEQ ID NO: 29 (하이브리도마 2F8); 또는
e) SEQ ID NO: 37 (하이브리도마 1E1).
특정 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 하기 중 어느 하나와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다:
a) SEQ ID NO: 4 (하이브리도마 2C2);
b) SEQ ID NO: 14 (하이브리도마 3D7);
c) SEQ ID NO: 22 (하이브리도마 7A11);
d) SEQ ID NO: 30 (하이브리도마 2F8); 또는
e) SEQ ID NO: 38 (하이브리도마 1E1).
특정 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 3과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 4와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 13과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 14와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 21과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 22와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 29와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 30과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 SEQ ID NO: 37과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 SEQ ID NO: 38과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함한다.
항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 하기 중 어느 하나와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있다:
a) 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 5, 6 및 7);
b) 하이브리도마 3D7에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 15,16 및 17);
c) 하이브리도마 7A11에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 23, 24 및 25);
d) 하이브리도마 2F8에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 31, 32 및 33); 또는
e) 하이브리도마 1E1에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID No: 39, 40 및 41).
항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 하기 중 어느 하나와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있다:
a) 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 8, 9 및 10);
b) 하이브리도마 3D7에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 18, 19 및 20);
c) 하이브리도마 7A11에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 26, 27 및 28);
d) 하이브리도마 2F8에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 34, 35 및 36); 또는
e) 하이브리도마 1E1에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 42, 43 및 44).
항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 5, 6, 7) 또는 하이브리도마 3D7에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 15,16 및 17)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 8, 9 및 10) 또는 하이브리도마 3D7에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 18, 19 및 20)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 83 (2C2 항체의 중쇄 프레임워크 1) 또는 SED ID NO: 87 (인간화된 2C2 항체의 중쇄 프레임워크 1, 표 1 참조)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 프레임워크를 추가로 포함하고, 프레임워크는 리더 서열 및 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR1 사이에 있다. 또 다른 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 84 (2C2 항체의 경쇄 프레임워크 1) 또는 SED ID NO:88 (인간화된 2C2 항체의 경쇄 프레임워크 1, 표 1 참조)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 프레임워크를 추가로 포함하고, 상기 프레임워크는 리더 서열 및 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR1 사이에 있다.
한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR1 및 CDR2 사이에 프레임워크를 추가로 포함하고, 프레임워크는 SEQ ID NO: 11 (표 1의 중쇄 프레임워크 2)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동이다. 예시적 구체예에서, SEQ ID NO: 11과 약 80% 내지 약 100% 상동인 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 영역의 CDR1 및 CDR2 사이에 있는 프레임워크는 위치 9에 글리신을 함유한다. SEQ ID NO: 11의 아미노산의 위치는 하기 예시된다:
Figure 112016084959905-pct00010
*FW2 (W)의 위치 1의 아미노산은 CDR1에 인접한 잔기이다.
**FW2 (A)의 위치 14의 아미노산은 CDR2에 인접한 잔기이다.
또 다른 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR1 및 CDR2 사이에 프레임워크를 추가로 포함하고, 프레임워크는 SEQ ID NO: 12 (표 1의 경쇄 프레임워크 2)와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동이다. 예시적 구체예에서, 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR1 및 CDR2 사이의 프레임워크는 위치 12에 프롤린을 함유한다. 또 다른 예시적 구체예에서, 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR1 및 CDR2 사이의 프레임워크는 위치 13에 트립토판을 함유한다. 또한 다른 예시적 구체예에서, 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR1 및 CDR2 사이의 프레임워크는 위치 12에 프롤린 및 위치 13에 트립토판을 함유한다. SEQ ID NO: 12의 아미노산의 위치는 하기 예시된다:
Figure 112016084959905-pct00011
*FW2 (W)의 위치 1의 아미노산은 CDR1에 인접한 잔기이다.
**FW2 (Y)의 위치 15의 아미노산은 CDR2에 인접한 잔기이다.
한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 85 (중쇄 프레임워크 3) 또는 SED ID NO: 89 (인간화된 항체의 중쇄 프레임워크 3, 표 1 참조)와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 프레임워크를 추가로 포함하고. 프레임워크는 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR2 및 CDR3 사이에 있다. 또 다른 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 86 (경쇄 프레임워크 3) 또는 SEQ ID NO: 90 (인간화된 항체의 경쇄 프레임워크 3, 표 1 참조)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 프레임워크를 추가로 포함하고, 상기 프레임워크는 하이브리도마 2C2에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR2 및 CDR3 사이에 있다.
항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 하이브리도마 7A11에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 23, 24 및 25)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 하이브리도마 7A11에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 26, 27 및 28)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있다.
항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 중쇄 영역은 하이브리도마 2F8에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 31, 32 및 33) 또는 하이브리도마 1E1에 의해 생성된 항체의 가변 중쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 39, 40 및 41)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있고, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 가변 경쇄 영역은 하이브리도마 2F8에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 34, 35 및 36) 또는 하이브리도마 1E1에 의해 생성된 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR (SEQ ID NO: 42, 43 및 44)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동인 아미노산 서열을 포함하는 1, 2, 3 또는 그 초과의 CDR을 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 표 1의 가변 영역에 상응하는 가변 영역은 서열 변동을 갖는다. 예를 들어, 중쇄 가변 영역에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개 잔기, 또는 40% 미만, 약 30% 미만, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2% 또는 약 1% 아미노산 잔기가 치환되거나 결실되었으나, 이는 탄수화물 항원에 결합하는 것을 비제한적으로 포함하는 동일한 면역학적 특성을 본질적으로 보유한다.
특정 구체예에서, 표 1의 CDR에 상응하는 CDR은 서열 변동을 갖는다. 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개 잔기, 또는 CDR의 총 잔기의 20% 미만, 30% 미만, 또는 약 40% 미만이 치환되거나 결실된 CDR이 탄수화물 항원에 결합하는 항체 (또는 이의 항원-결합 부분)에 존재할 수 있다.
항체 또는 항원-결합 부분은 펩티드일 수 있다. 그러한 펩티드는, 예컨대 탄수화물 항원에 결합하는 생물학적 활성을 나타내는 변이체, 유사체, 오솔로그(orthologs), 호몰로그(homologs) 및 펩티드의 유도체를 포함할 수 있다. 펩티드는 아미노산의 하나 이상의 유사체 (예를 들어, 비-천연 발생 아미노산, 관련없는 생물학적 시스템에서만 천연으로 발생하는 아미노산, 포유동물 시스템으로부터 변형된 아미노산 등 포함), 치환된 결합을 갖는 펩티드, 뿐만 아니라 당 분야에 공지된 다른 변형을 함유할 수 있다.
특정 아미노산이 치환, 결실 또는 첨가된 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 예시적 구체예에서, 이러한 변동은 결합 친화성과 같은 펩티드의 생물학적 특성에 실질적인 영향을 주지 않는다. 또 다른 예시적 구체예에서, 항체는, 예컨대 항원에 대한 항체의 결합 친화성을 개선시키기 위해, 프레임워크 영역에 아미노산 치환을 지닐 수 있다. 또한 다른 예시적 구체예에서, 선택된 소수의 억셉터 프레임워크 잔기는 상응하는 공여체 아미노산으로 대신될 수 있다. 공여체 프레임워크는 성숙 또는 생식계열(germline) 인간 항체 프레임워크 서열 또는 컨센서스 서열일 수 있다. 표현형 침묵 아미노산 치환을 만드는 방법에 대한 지침은 문헌[Bowie et al., Science, 247: 1306-1310 (1990). Cunningham et al., Science, 244: 1081-1085 (1989). Ausubel (ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (1994). T. Maniatis, E. F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989). Pearson, Methods Mol. Biol. 243:307-31 (1994). Gonnet et al., Science 256:1443-45 (1992)]에 제공된다.
항체 또는 이의 항원-결합 부분은 유도체화되거나 또 다른 기능성 분자에 연결될 수 있다. 예를 들어, 항체는 하나 이상의 다른 분자 실체, 예컨대 또 다른 항체, 검출가능한 작용제, 세포독성제, 약학적 작용제, 또 다른 분자 (예컨대 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)와의 결합을 매개할 수 있는 단백질 또는 펩티드, 아미노산 링커, 신호 서열, 면역원성 담체, 또는 단백질 정제에 유용한 리간드, 예컨대 글루타치온-S-트랜스퍼라제, 히스티딘 태그, 및 스타필로코커스 단백질 A에 기능적으로 연결될 수 있다 (화학적 커플링, 유전자 융합, 비공유 상호작용 등에 의해). 한 유형의 유도체화된 단백질은 2개 이상의 단백질 (동일한 유형 또는 상이한 유형의)을 가교시킴에 의해 생성된다. 적합한 가교제는 적절한 스페이서 (예컨대, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르)에 의해 분리된 2개의 별개의 반응기를 갖는 헤테로이기능성 또는 동종이기능성 (예컨대, 디석신이미딜 수베레이트)인 것들을 포함한다. 그러한 링커는 Pierce Chemical Company (Rockford, Ill)로부터 이용가능하다. 단백질이 유도체화(또는 표지)될 수 있는 유용한 검출가능한 작용제는 형광 화합물, 다양한 효소, 보결분자단, 발광 물질, 바이오발광 물질, 및 방사성 물질을 포함한다. 비제한적인 예시적 형광성 검출가능한 작용제는 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 및 피토에리트린을 포함한다. 단백질 또는 항체는 또한 검출가능한 효소, 예컨대 예컨대 알칼리 포스파타제, 호스래디쉬 퍼옥시다제, 베타-갈락토시다제, 아세틸콜린에스테라제, 글루코스 옥시다제 등으로 유도체화될 수 있다. 단백질은 또한 보결분자단 (예컨대, 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴)으로 유도체화될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 기능적 활성 변이체를 인코딩하는 핵산이 또한 본 발명에 포함된다. 이러한 핵산 분자는 중간 엄격, 높은 엄격 또는 매우 높은 엄격한 조건 하에서 임의의 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산과 하이브리드화될 수 있다. 하이브리드화 반응을 수행하기 위한 지침은 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. 6.3.1-6.3.6, 1989]에서 찾아볼 수 있고, 이는 본원에 참조로서 포함된다. 본원에서 언급된 특수한 하이브리드화 조건은 다음과 같다: 1) 중간 엄격한 하이브리드화 조건: 약 45℃에서 6 X SSC, 이어서 60℃에서 0.2 X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상의 세척; 2) 높은 엄격한 하이브리드화 조건: 약 45℃에서 6 X SSC, 이어서 65℃에서 0.2 X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상의 세척; 및 3) 매우 높은 엄격한 하이브리드화 조건: 0.5 M 소듐 포스페이트, 65℃에서 7% SDS, 이어서 65℃에서 0.2 X SSC, 1% SDS에서 1회 이상의 세척.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산을 적합한 발현 시스템에서 발현될 수 있는 발현 벡터로 혼입시킨 다음, 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 단리하거나 정제할 수 있다. 임의로, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산은 세포-비함유 번역 시스템에서 번역될 수 있다 [U.S. Patent No. 4,816,567. Queen et al., Proc Natl Acad Sci USA, 86:10029-10033 (1989)].
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 요망되는 항체의 경쇄 및 중쇄 (또는 이의 일부)를 인코딩하는 DNA로 형질전환된 숙주 세포에 의해 생성될 수 있다. 항체는 이러한 배양 상청액 및/또는 세포로부터 표준 기법을 이용하여 단리되고 정제될 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 항체의 경쇄, 중쇄, 또는 둘 모두를 인코딩하는 DNA로 형질전환될 수 있다. 재조합 DNA 기법은 또한, 예컨대 불변 영역에 결합하는데 불필요한 경쇄 및 중쇄 중 어느 하나 또는 둘 모두를 인코딩하는 DNA의 일부 또는 전부를 제거하기 위해 이용될 수 있다.
본 발명의 핵산은 원핵생물 및 진핵생물 세포, 예컨대, 박테리아 세포 (예컨대, E. 콜라이(E. coli)), 효모 세포, 식물 세포, 곤충 세포, 및 포유동물 세포를 포함하는 다양한 적합한 세포에서 발현될 수 있다. 다수의 포유동물 세포주가 당 분야에 공지되어 있고 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC)으로부터 이용가능한 무한증식 세포주를 포함한다. 세포의 비제한적인 예는 포유동물 기원 또는 포유동물-유사 특징의 모든 세포주, 예를 들어, 비제한적으로 원숭이 신장 세포의 부모 세포, 유도체 및/또는 공학처리된 변이체 (COS, 예컨대, COS-1, COS-7), HEK293, 새끼 햄스터 신장 (BHK, 예컨대, BHK21), 차이니스 햄스터 난소 (CHO), NS0, PerC6, BSC-1, 인간 간세포 암종 세포 (예컨대, Hep G2), SP2/0, HeLa, Madin-Darby 소 신장 (MDBK), 골수종 및 림프종 세포를 포함한다. 공학처리된 변이체는, 예컨대, 글리칸 프로파일 변형되고/거나 부위-특이적 통합 부위 유도체를 포함한다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 핵산을 포함하는 세포를 제공한다. 세포는 하이브리도마 또는 트랜스펙턴트(transfectant), 예컨대 2C2로서 지정된 하이브리도마일 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 당 분야에 널리 공지된 고체상 절차에 의해 합성될 수 있다 [Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach by E. Atherton and R. C. Sheppard, published by IRL at Oxford University Press (1989). Methods in Molecular Biology, Vol. 35: Peptide Synthesis Protocols (ed. M. W.Pennington and B. M. Dunn), chapter 7. Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984). G. Barany and R. B. Merrifield, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, editors E. Gross and J. Meienhofer, Vol. 1 and Vol. 2, Academic Press, New York, (1980), pp. 3-254. M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin (1984).
본 발명은 탄수화물 항원 (예컨대, Globo H)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제조하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 비-인간 동물을 탄수화물 항원 (예컨대, Globo H)을 포함하는 조성물로 면역시킨 다음, 특이적 항체를 동물로부터 단리시킨다. 상기 방법은 탄수화물 항원에 대한 항체의 결합을 평가하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
임의의 다양한 탄수화물 항원, 특히 Globo H가 본 발명의 실시에 이용될 수 있다. 탄수화물 항원의 예는 비제한적으로 Globo 항원, 예컨대 Globo H, 단계-특이적 배아 항원 3 (SSEA-3) (또한 Gb5로 불림), 단계-특이적 배아 항원 4 (SSEA-4), Gb-4 및 Gb-3, 루이스(Lewis) 항원, 예컨대 sLex, Lex, sLea, Lea 및 Ley, 다당류 항원, 예컨대 폴리시알산 (PSA), sTn(c) amd Tn(c), 톰젠-프리덴라이히(Thomsen-Friedenreich) 항원 (TF(c)), 강글리오사이드, 예컨대 GD1, GD2, GD3, 푸코실 GM1, GM1, GM2, GM3, GD1α 및 GM2, 설피타이드 항원, 예컨대 6Gal-HSO3-SiaLex 및 6GluNAc-HSO3-SiaLex를 포함한다. 다른 탄수화물 항원은 비제한적으로 α-갈락토스, α-Man-6-포스페이트, α-L-람노스, α-GalNAc(Tn), α-NeuAc-OCH2C6H4-p-NHCOOCH2, Fucα1-2Galβ1-4GalNAcβ (H 타입3), NeuAcα2-8NeuAcα,(NeuAcα2-8)2 폴리시알산, NeuAca2-6Galb, NeuAcb2-6Gala(STn), Gala1-3Galb1-4GlaNAcb (NeuAca2-8)3, GalNAcαa-3(Fucα1-2)Galβ (혈액형 A), Galα1-3(Fucα1-2)Galβ (혈액형 B), 6Gal-HSO3-SiaLex, 6GluNAc-HSO3-SiaLex 및 α2-6 시알릴화된 디안테너리 N-글리칸을 포함한다.
한 구체예에서, 항-Globo H 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 도 3a 및 도 3b에 예시된 대로, 높은 선택성으로 다른 탄수화물 항원과 교차 반응하거나 이에 결합할 수 있다. 탄수화물 항원의 비제한적인 예는 SSEA-3, SSEA-4, 루이스 항원이다.
한 구체예에서, 본 발명은 탄수화물 항원 (예컨대, Globo H)에 특이적으로 결합하는 항체를 발현시키는 하이브리도마를 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 하기 단계를 포함한다: 탄수화물 항원 (예컨대, Globo H)을 포함하는 조성물로 동물을 면역시키는 단계; 동물로부터 비장세포를 단리시키는 단계; 비장세포로부터 하이브리도마를 생성하는 단계; 및 Globo H에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하는 하이브리도마를 선택하는 단계. 문헌[Kohler and Milstein, Nature, 256: 495, 1975. Harlow, E. and Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988].
한 구체예에서, 탄수화물 항원은 마우스를 피하 면역시키기 위해 이용된다. 하나 이상의 부스터가 제공되거나 제공되지 않을 수 있다. 혈장에서 항체의 역가는, 예컨대, ELISA (효소-결합된 면역흡수 검정) 또는 유동세포계수법에 의해 모니터될 수 있다. 충분한 역가의 항-탄수화물 항원 항체를 지니는 마우스를 융합에 이용한다. 마우스를 희생시켜 비장을 제거하기 3일 전에 마우스는 항원으로 부스터되거나 부스터되지 않을 수 있다. 마우스 비장세포를 단리시키고 PEG로 마우스 골수종 세포주에 융합시킨다. 그 후 생성된 하이브리도마를 항원-특이적 항체의 생성을 위해 스크리닝한다. 세포를 플레이팅한 다음, 선택적 배지에서 인큐베이션한다. 그 후 개별 웰로부터의 상청액을 인간 항-탄수화물 항원 모노클로날 항체에 대해 ELISA에 의해 스크리닝한다. 항체 분비 하이브리도마를 재플레이팅하고, 다시 스크리닝하고, 여전히 항-탄수화물 항원 항체에 대해 양성인 경우, 제한 희석에 의해 서브클로닝할 수 있다.
하나 이상의 탄수화물 항원의 면역원성을 증가시키기 위해 애쥬번트를 이용할 수 있다. 애쥬번트의 비제한적인 예는 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 하이드록사이드, MF59 (4.3% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v 폴리소르베이트 80 (Tween 80), 0.5% w/v 소르비탄 트리올레에이트 (Span 85)), CpG-함유 핵산, QS21 (사포닌 애쥬번트), α-갈락토실-세라마이드 또는 이의 합성 유사체 (예컨대, C34, US 8,268,969 참조), MPL (모노포스포릴 지질 A), 3DMPL (3-O-데아세틸화된 MPL), 아퀼리아(Aquilla)로부터의 추출물, ISCOMS (예컨대, 문헌[Sjolander et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 64:713; WO90/03184; WO96/11711; WO 00/48630; WO98/36772; WO00/41720; WO06/134423 and WO07/026190] 참조), LT/CT 돌연변이체, 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) (PLG) 미세입자, Quil A, 인터루킨, 프로인트(Freund's), N-아세틸-무라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민 (thr-MDP), N-아세틸-노르-무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민 (CGP 11637, 노르-MDP로서 언급됨), N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민 (CGP 19835A, MTP-PE로서 언급됨), 및 2% 스쿠알렌/Tween 80 에멀젼에 박테리아로부터 추출된 3개의 성분인 모노포스포릴 지질 A, 트레할로스 디마이콜레이트 및 세포벽 골격 (MPL+TDM+CWS)을 함유하는 RIBI를 포함한다.
면역된 동물은 면역원이 투여된 회수가능한 항체를 생성할 수 있는 임의의 동물일 수 있고, 예컨대, 비제한적으로, 토끼, 마우스, 랫트, 햄스터, 염소, 말, 원숭이, 개코원숭이 및 인간이다. 한 양태에서, 숙주는 유전자이식되고 인간 항체, 예컨대, 마우스 발현 인간 면역글로불린 유전자 세그먼트를 생성한다. U.S. 특허 제8,236,311호; 제7,625,559호 및 제5,770,429호, 각각의 기재는 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 문헌[Lonberg et al., Nature 368(6474): 856-859, 1994. Lonberg, N., Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101, 1994. Lonberg, N. and Huszar, D., Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93, 1995. Harding, F. and Lonberg, N., Ann. N.Y. Acad. Sci., 764:536-546, 1995].
숙주가 면역되고 항체가 생성된 후에, 항체는 이들이 관심 항원에 특이적인 지를 확인하고 이들이 다른 항원과 임의의 교차 반응성을 나타내는 지를 결정하기 위해 검정된다. 그러한 검정을 수행하는 한 방법은 U.S. 특허 공개 제2004/0126829호에 기재된 혈청 스크린 검정이다. 항-탄수화물 항원 항체는 다양한 공지된 기법에 의해 탄수화물에 대한 결합에 대해 특성규명될 수 있다. 예를 들어, ELISA에서, 미세역가 플레이트는 PBS에서 독소 또는 톡소이드 항원으로 코팅된 다음, 비가역적 단백질, 예컨대 PBS에서 희석된 소 혈청 알부민 (BSA)으로 차단된다. 독소-면역된 마우스로부터 혈장의 희석액을 각 웰에 첨가하고 인큐베이션한다. 플레이트를 세척한 다음 효소 (예컨대, 알칼리 포스파타제)에 컨쥬게이션된 이차 항체와 인큐베이션한다. 세척 후, 플레이트를 효소의 기질 (예컨대, ABTS)로 현상하고, 특정 OD에서 분석한다. 다른 구체예에서, 선택된 모노클로날 항체가 표적 탄수화물 항원 또는 에피토프에 결합하는 지를 결정하기 위해, 항체를 바이오티닐화시킨 다음 이것을 스트렙타비딘 표지된 프로브로 검출할 수 있다. 항-탄수화물 항원 항체는 웨스턴 블롯팅에 의해 탄수화물과의 반응성에 대해 시험될 수 있다.
그 후, 바람직하게는 높은 친화성으로, 탄수화물 항원에 결합하는 항체를 생성하는 하이브리도마를 서브클로닝하고 추가로 특성규명할 수 있다. 그 후 부모 세포의 반응성을 보유하는 (ELISA에 의해) 각 하이브리도마로부터의 한 클론을 세포 뱅크를 제조하기 위해, 그리고 항체 정제를 위해 선택할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체는 또한 항원에 대한 이들의 결합 친화성에 관해 기재되거나 명시될 수 있다. 탄수화물 항원에 대한 항체의 친화성은 임의의 적합한 방법을 이용하여 실험적으로 결정될 수 있다 (예컨대, 문헌[Berzofsky et al., "Antibody-Antigen Interactions," In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, N.Y. (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, N.Y. (1992); 및 본원에 기재된 방법] 참조). 특정 항체-탄수화물 항원 상호작용의 측정된 친화성은 상이한 조건 (예컨대, 염 농도, pH) 하에 측정되는 경우 달라질 수 있다. 따라서, 친화성 및 다른 항원-결합 파라미터 (예컨대, KD, Ka, Kd)의 측정은 바람직하게는 항체 및 항원의 표준화된 용액, 및 표준화된 완충제로 이루어진다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 시험관내 및 생체내 치료적, 예방적, 및/또는 진단적 유용성을 지닌다. 예를 들어, 이러한 항체는 배양액 중 세포에, 예컨대 시험관내 또는 생체외 투여될 수 있거나, 대상체에, 예컨대 생체내 투여되어, 암을 치료, 억제, 재발 방지 및/또는 진단할 수 있다.
항체 또는 이의 항원-결합 부분은 배양액 중 세포에 대해, 예컨대 시험관내 또는 생체외 이용될 수 있다. 예를 들어, 세포는 배양 배지에서 시험관내 배양될 수 있고 항-Globo H 항체 또는 이의 단편과 접촉할 수 있다. 상기 방법은 생체내 (예컨대, 치료적 또는 예방적) 프로토콜의 일부로서, 대상체에 존재하는 세포에 대해 수행될 수 있다. 생체내 구체예에서, 접촉 단계가 대상체에서 수행되며 이는 대상체의 하나 이상의 암 세포, 예컨대 유방암 세포에서 발현되는 탄수화물 항원 (예컨대, Globo H)에 대한 항체 또는 이의 부분의 결합을 허용하기에 효과적인 조건 하에 대상체에 항-독소 항체 또는 이의 부분을 투여하는 것을 포함한다.
항체 또는 이의 항원-결합 부분은 단독으로 또는 또 다른 치료제, 예컨대, 제2 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 부분 또는 화학치료제와 함께 투여될 수 있다. 조합 생성물은 2개 화합물의 혼합물일 수 있거나 이들은 공유적으로 부착될 수 있다. 일례에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Globo H에 특이적으로 결합하고 VEGF에 특이적으로 결합하는 항체 (모노클로날 또는 폴리클로날) 또는 이의 항원-결합 부분과 조합된다. 또 다른 예에서, 제2 작용제는 화학요법제이다 (예컨대, 사이클로포스파미드, 5-플루오로우라실 또는 액티노마이신-D). 항체는 또한 암 백신, 예컨대, 디프테리아 독소 및 사포닌 애쥬번트와 컨쥬게이션된 Globo H와 함께 투여될 수 있다.
암 세포를 억제하는 방법
본 발명은 또한 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공하고, 여기서 세포, 예컨대 암 세포는 본원에 기재된 유효량의 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 접촉한다. 병리학적 세포 또는 조직, 예컨대 과증식성 세포 또는 조직은 세포 또는 조직을 유효량의 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 접촉시킴에 의해 치료될 수 있다. 세포, 예컨대 암 세포는 일차 암 세포일 수 있거나 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC)과 같은 조직 뱅크로부터 이용가능한 배양된 세포일 수 있다. 병리학적 세포는 Glolob H 발현 암, 신경아교종, 수막종, 뇌하수체 샘종, 또는 전신 암으로부터 CNS 전이, 폐암, 전립선암, 유방암, 조혈암 또는 난소암의 세포일 수 있다. 세포는 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 인간에서 비롯될 수 있다. 문헌[U.S. Patent Publication No. 2004/0087651. Balassiano et al. (2002) Intern. J. Mol. Med. 10:785-788. Thorne, et al. (2004) Neuroscience 127:481-496. Fernandes, et al. (2005) Oncology Reports 13:943-947. Da Fonseca, et al. (2008) Surgical Neurology 70:259267. Da Fonseca, et al. (2008) Arch. Immunol. Ther. Exp. 56:267-276. Hashizume, et al. (2008) Neuroncology 10:112-120]. 한 구체예에서, 암은 Globo H 발현 암이다. 또 다른 구체예에서, 암은 SSEA-3 발현 암이다. 또한 다른 구체예에서, 암은 SSEA-4 발현 암이다. Globo H 발현 암, SSEA-3 발현 암 및 SSEA-4 발현 암은 비제한적으로 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암 및 자궁내막암 및 결장암, 간암, 비인두암, 피부암, 구강암, 신장암, 뇌암, 자궁경부암 및 방광암을 포함한다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 시험관내 효능은 당 분야에 널리 공지된 방법을 이용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 세포독성은 MTT [3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸륨 브로마이드] 세포독성 검정에 의해 연구될 수 있다. MTT 검정은 분광학적으로 판독될 수 있는 청색 프로마잔 생성물로 대사되는 대사적으로 활성인 세포에 의한 MTT, 테트라졸륨 염의 흡수 원리에 기반한다. 문헌[J. of Immunological Methods 65: 55 63, 1983]. 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 세포독성은 집락 형성 검정에 의해 연구될 수 있다. Globo H 항원과의 결합에 대한 기능적 검정은 ELISA를 통해 수행될 수 있다. 항체 또는 이의 항원-결합에 의한 세포 주기 차단은 표준 프로피듐 아이오다이드 (PI) 염색 및 유동세포계수법에 의해 연구될 수 있다. 침습 억제는 Boyden 챔버에 의해 연구될 수 있다. 이러한 검정에서 재구성된 기저막, Matrigel이 화학주성 필터 상에 코팅되어 Boyden 챔버에서 세포의 이동에 대한 장벽의 역할을 한다. 침습 능력을 지닌 세포만이 Matrigel 장벽을 통과할 수 있다. 다른 검정은 비제한적으로 세포 생육성 검정, 아폽토시스 검정, 및 형태학적 검정을 포함한다.
검정은 또한 뮤린 모델을 이용하여 생체내 수행될 수 있다. 예컨대, 문헌[B. Teicher, Tumor Models for Efficacy Determination. Mol Cancer Ther 2006;5: 2435-2443."]을 참조하라.
약학적 조성물
한 구체예에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 약학적 조성물은 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 단리된 핵산, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 약학적으로 허용되는 담체는 생리학적으로 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 한 구체예에서, 조성물은 대상체에서 암 세포를 억제하기에 효과적이다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 비제한적으로 정맥내, 근내, 비내, 피하, 경구, 국소, 피하, 피내, 경피, 피하(subdermal), 비경구, 직장, 척수, 또는 표피 투여를 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 주사가능 물질로서, 액체 용액 또는 현탁액으로서, 또는 주사 전에 액체 비히클에서 용해되거나 현탁되기 적합한 고체 형태로서 제조될 수 있다. 약학적 조성물은 또한 고체 형태, 에멀젼화되거나 리포솜 비히클 또는 지속적 전달에 이용되는 다른 미립자 담체에 캡슐화된 활성 물질로 제조될 수 있다. 예를 들어, 약학적 조성물은 오일 에멀젼, 유중수 에멀젼, 수중유중수 에멀젼, 부위-특이적 에멀젼, 장기 체류 에멀젼, 점착에멀젼, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 리포솜, 미세입자, 미세구체, 나노구체, 나노입자 및 다양한 천연 또는 합성 폴리머, 예컨대 비재흡수성 불침투성 폴리머, 예컨대 에틸렌비닐 아세테이트 코폴리머 및 Hytrel® 코폴리머, 팽윤성 폴리머, 예컨대 하이드로겔, 또는 재흡수성 폴리머, 예컨대 콜라겐 및 특정 폴리산 또는 폴리에스테르, 예컨대 약학적 조성물의 지속적인 방출을 가능하게 하는, 재흡수성 봉합사를 만드는데 이용되는 것들의 형태일 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 포유동물 대상체로의 전달을 위해 약학적 조성물로 제형화된다. 약학적 조성물은 단독으로 투여되고/거나 약학적으로 허용되는 비히클, 부형제 또는 담체와 혼합된다. 적합한 비히클은, 예를 들어 물, 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등, 및 이의 조합물이다. 또한, 비히클은 미량의 보조 물질, 예컨대 습윤 또는 에멀젼화제, pH 완충제, 또는 애쥬번트를 함유할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 본 발명의 약학적 조성물의 흡수 또는 제거율을, 예컨대 안정화, 또는 증가 또는 감소시키는데 작용하는 생리학적으로 허용되는 화합물을 함유할 수 있다. 생리학적으로 허용되는 화합물은 예컨대, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스, 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타치온, 킬레이팅제, 저분자량 단백질, 세척제, 리포솜 담체, 또는 부형제 또는 다른 안정화제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 다른 생리학적으로 허용되는 화합물은 습윤제, 에멀젼화제, 분산제 또는 보존제를 포함한다. 예컨대, 문헌[the 21st edition of Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton, Pa. ("Remington's")]을 참조하라. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 보조적 물질, 예컨대 약리적 작용제, 사이토카인, 또는 다른 생물학적 반응 개질제를 포함할 수 있다.
더욱이, 약학적 조성물은 중성 또는 염 형태의 약학적 조성물로 제형화될 수 있다. 약학적으로 허용되는 염은 산부가염 (활성 폴리펩티드의 유리 아미노기로 형성됨)을 포함하고 이는 무기산, 예컨대, 예를 들어, 염산 또는 인산, 또는 유기산, 예컨대 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 만델산 등으로 형성된다. 유리 카르복실기로부터 형성되는 염은 또한 무기 염기, 예컨대, 예를 들어, 소듐, 포타슘, 암모늄, 칼슘, 또는 수산화제이철, 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기 염기로부터 유래될 수 있다.
상기 투여 형태를 제조하는 실제 방법은 당분야 숙련자에게 공지되어 있거나, 자명할 것이다. 예컨대, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 21st edition]을 참조하라.
약학적 조성물은 대상체의 연령, 체중 및 상태, 사용된 특정 조성물, 및 투여 경로, 약학적 조성물이 예방적 또는 치유적 목적으로 사용되는지 여부 등에 따라 적절한 스케쥴 및 시간 간격 동안 단일 용량 치료 또는 다중 용량 치료로 투여될 수 있다. 예를 들어, 한 구체예에서, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 한 달에 한 번, 한 달에 두 번, 한 달에 세 번, 격주(qow), 1주일에 한 번 (qw), 1주일에 두 번 (biw), 1주일에 세 번 (tiw), 1주일에 네 번, 1주일에 5번, 1주일에 6번, 격일 (qod), 매일 (qd), 하루에 두 번 (qid), 또는 하루에 세 번 (tid) 투여된다.
본 발명에 따른 항체의 투여 지속기간, 예컨대, 약학적 조성물이 투여되는 시간의 기간은 대상체 반응 등과 같은 다양한 임의의 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 약학적 조성물은 약 1초 이상 내지 1시간 이상, 1일 내지 약 1주, 약 2주 내지 약 4주, 약 1개월 내지 약 2개월, 약 2개월 내지 약 4개월, 약 4개월 내지 약 6개월, 약 6개월 내지 약 8개월, 약 8개월 내지 약 1년, 약 1년 내지 약 2년, 또는 약 2년 내지 약 4년, 또는 그 초과 범위의 시간의 기간 동안 투여될 수 있다.
투여 용이성 및 용량 균일성을 위해, 투여 단위 형태의 경구 또는 비경구 약학적 조성물을 이용할 수 있다. 본원에서 사용되는 투여 단위 형태는 치료되는 대상체에 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 언급한다; 각각의 단위는 필요한 약학적 담체와 함께 요망되는 치료 효과를 제공하도록 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터를 인간에 사용되는 투여량의 범위를 공식화하는데 이용할 수 있다. 한 구체예에서, 그러한 화합물의 투여량은 독성이 거의 또는 전혀 없는 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 이용된 투여 형태 및 활용된 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 달라질 수 있다. 또 다른 구체예에서, 치료적 유효 용량은 세포 배양 검정으로부터 초기에 추정될 수 있다. 용량은 세포 배양액에서 결정되는 IC50 (즉, 증상의 반-최대 억제를 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 동물 모델에서 공식화될 수 있다. 문헌[Sonderstrup, Springer, Sem. Immunopathol. 25: 35-45, 2003. Nikula et al., Inhal. Toxicol. 4(12): 123-53, 2000].
본 발명의 항체 또는 항원-결합 부분의 치료적 또는 예방적 유효량에 대한 예시적 비제한적인 범위는 약 0.001 내지 약 60 mg/체중 kg, 약 0.01 내지 약 30 mg/체중 kg, 약 0.01 내지 약 25 mg/체중 kg, 약 0.5 내지 약 25 mg/체중 kg, 약 0.1 내지 약 20 mg/체중 kg, 약 10 내지 약 20 mg/체중 kg, 약 0.75 내지 약 10 mg/체중 kg, 약 1 내지 약 10 mg/체중 kg, 약 2 내지 약 9 mg/체중 kg, 약 1 내지 약 2 mg/체중 kg, 약 3 내지 약 8 mg/체중 kg, 약 4 내지 약 7 mg/체중 kg, 약 5 내지 약 6 mg/체중 kg, 약 8 내지 약 13 mg/체중 kg, 약 8.3 내지 약 12.5 mg/체중 kg, 약 4 내지 약 6 mg/체중 kg, 약 4.2 내지 약 6.3 mg/체중 kg, 약 1.6 내지 약 2.5 mg/체중 kg, 약 2 내지 약 3 mg/체중 kg, 또는 약 10 mg/체중 kg이다.
약학적 조성물은 유효량의 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 함유하도록 제형화되고, 이 ? 상기 양은 치료되는 동물 및 치료되는 상태에 의존적이다. 한 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 약 0.01 mg 내지 약 10 g, 약 0.1 mg 내지 약 9 g, 약 1 mg 내지 약 8 g, 약 2 mg 내지 약 7 g, 약 3 mg 내지 약 6 g, 약 10 mg 내지 약 5 g, 약 20 mg 내지 약 1 g, 약 50 mg 내지 약 800 mg, 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 0.01 μg 내지 약 10g, 약 0.05 μg 내지 약 1.5 mg, 약 10 μg 내지 약 1 mg 단백질, 약 30 μg 내지 약 500 μg, 약 40 μg 내지 약 300 μg, 약 0.1 μg 내지 약 200 μg, 약 0.1 μg 내지 약 5 μg, 약 5 μg 내지 약 10 μg, 약 10 μg 내지 약 25 μg, 약 25 μg 내지 약 50 μg, 약 50 μg 내지 약 100 μg, 약 100 μg 내지 약 500 μg, 약 500 μg 내지 약 1 mg, 약 1 mg 내지 약 2 mg 범위의 용량으로 투여된다. 임의의 특정 대상체에 대한 특수한 용량 수준은 특정 펩티드의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강상태, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 및 분비율, 약물 조합물 및 치료를 받고 있는 특정 질환의 중증도를 포함하는 다양한 인자에 의존적이고 과도한 실험 없이 당분야 숙련자에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 항체, 이의 항원-결합 부분, 약학적 조성물 및 방법은 인간, 마우스, 랫트, 기니 피그, 햄스터, 개, 고양이, 소, 말, 염소, 양, 돼지, 원숭이, 유인원, 고릴라, 침팬지, 토끼, 오리, 거위, 닭, 양서류, 파충류 및 다른 동물을 포함하는 모든 척추동물, 예컨대, 포유동물 및 비-포유동물에 이용될 수 있다.
본 발명을 수행하기 위한 특수한 양태의 하기 실시예는 단지 예시를 목적으로 제공되며, 이는 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
실시예
실시예 1: 하이브리도마 융합 및 스크리닝
전통적인 하이브리도마 융합을 수행하였다. 마우스는 사포닌 애쥬번트에 컨쥬게이션된 Globo H-KLH (키홀 림펫 헤모시아닌)에 의한 이들의 첫 번째 면역화 그리고 7, 14, 및 24일에 3회의 후속 부스터를 수용하였다. 10, 17, 21, 및 24일에 채혈 임상을 수행하였고 혈청을 시험하여 항-Globo H 항체의 역가에 대해 조사하였다. 5마리의 마우스는 높은 항-Globo H IgG 및 항-Globo H IgM 역가를 생성하는 것으로 나타났고 하이브리도마 생성에 이용되었다. 마우스 골수종 세포를 마우스 비장세포와의 융합에 이어 KOhler 및 Milstein의 절차에 이용하였다 (KOhler G. and Milstein C, 1975). 하이브리도마 상청액을 0.2 μg Globo H-ceramide/웰과의 친화성 ELISA에 의해 스크리닝하였다. 항-Globo H Vk9 mAb는 양성 대조군의 역할을 하였다. 희석하지 않은 상청액에 의한 하이브리도마 클론의 OD > 배경 x 2를 선택하였다. 상위 5개 하이브리도마 클론은 1E1, 2C2, 2F8, 3D7, 7A11이었다.
실시예 2: 마우스 모노클로날 항체의 동역학 분석
동역학 결합 실험은 25℃에서 Biacore T100 (GE Healthcare)을 이용하여 단일-주기 동역학 (SCK) 방법 및 다중-주기 동역학 (MCK) 방법에 의해 수행되었다.
Globo H를 제조업체의 지시에 따라 아민 커플링에 의해 고정시켰다. Globo H-아민을 고정 완충제 (10 mM 소듐 아세테이트 pH4.5)에서 15 mg/ml로 희석시키고 5 μl/분의 유량을 이용하여 25℃에서 고정시켰다.
항-Globo H 항체 (Globo H-Vk9 mab, Globo H-2C2 mAb 및 Globo H-3D7 mAb)를 진행 완충제에서 200 nM (50 nM)으로 희석시켰다. 200 μl의 200 nM (50 nM) 용액을 200 μl의 진행 완충제와 혼합시켜 100 nM (25 nM) 용액을 수득하였다. 하기 희석 시리즈를 위해 계속 희석하였다: 200, 100, 50, 25 및 12.5 nM (분석물 농도: 50 nM, 25 nM, 12.5 nM, 6.25 nM, 3.125 nM). 희석 샘플을 랙 위치(Rack Positions)에 두고 MCK 및 SCK 방법에 의해 시험하였다. MCK 및 SCK 시리즈에 대한 샘플을 420초 해리 시간으로 처리하였다. 표면을 10 mM 글리신 pH2.0/1.5 (v/v=1) 용액의 40초 주입에 의해 재생시켰다. SCK 및 MCK 데이터를 Biacore Evluation software 2.0에 의해 1:1 결합 모델에 핏팅시켰다.
결과를 항체 및 항원 사이의 결합 강도를 기재하기 위해 이용되는 척도인 해리 상수 (KD), kon(1/Ms), 항체 항원 복합체가 형성되는 온-레이트(on-rate), koff(1/s), 항체 항원 복합체가 해리되는 오프-레이트(off-rate), Rmax, 분석물 반응의 최대 양에 대해 분석하였다. 표 2는 하기 하이브리도마: VK9, 2C2 및 3D7로부터의 항-Globo H 항체에 대한 친화성 및 동역학 데이터를 나타낸다. 3D7 항체 및 2C2 항체는 VK9 항체 보다 높은 결합 친화성을 지닌다.
표 2. 항-Globo H 항체에 대한 동역학 데이터
Figure 112016084959905-pct00012
실시예 3: 항-Globo H 항체의 친화성 분석
하기 항-Globo H 항체를 EC50 및 세포 결합의 %에 대해 시험하였다: Globo H-VK9 mAb, Globo H-1E1 mAb, Globo H-2C2 mAb, Globo H-2F8 mAb, Globo H-3D7 mAb, Globo H-7A11 mAb.
절차:
EC50에 대한 친화성 ELISA: 웰을 얼음 위에서 웰 당 0.2 μg Globo H-세라마이드로 코팅시켰다. 차단 후에, 6.2 ng/ml 내지 51200 ng/ml의 시험 항체를 웰에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 인큐베이션 후에, 과량의 항체를 3회 세척에 의해 제거하였다. 염소 항-마우스 IgG-HRP (1:533)를 첨가하였다. 발색을 490nm의 플레이트 판독기에서 정량하였다. EC50을 Prism 5.0 Software에 의해 결정하였다.
항체와의 세포 결합 %에 대한 FACS: 튜브 당 50 μl FACS 완충제에서 총 200,000개 세포에 대한 암 세포주를 제조하였다. 지시된 항체를 첨가하여 1 μg/ml의 최종 농도에 도달하였다. 부드러운 볼텍싱 후에, 튜브를 얼음 위에 두고 약 1시간 동안 인큐베이션시켰다. FACS 완충제로 세척한 후에, FACS 완충제 중 항-마우스 IgG-PE를 첨가하여 4 μg/ml의 최종 농도에 도달하였다. 부드러운 볼텍싱 후에, 튜브를 얼음 위에 두고 약 30분 동안 인큐베이션시켰다. FACS 완충제로 세척한 후에, 시험 세포를 200 μl의 FACS 완충제에 재현탁시켰다. 유동세포계수법을 수행한 후에, WinMDI 소프트웨어에 의해 세포 결합의 퍼센트를 분석하였다. 히스토그램 플롯에서, 이차 항체만의 인큐베이션을 이용하여 배경 (M1) 및 결합 (M2) 영역을 규정하였다. 배경 (M1)으로서 이차 항체만의 환경에 기반하여, 지시된 항체의 결합 영역 (M2)의 백분율을 결정하였다.
유방암 세포주 (MCF-7), 폐암 세포주 (LLC1) 및 췌장암 세포주 (HPAC)에서 Globo H에 대한 항체 결합을 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 분석을 이용하여 평가하였다.
결과: 표 3은 Globo H-2C2 mAb, Globo H-2F8 mAb, Globo H-3D7 mAb, Globo H-7A11 mAb, 및 Globo H-1E1 mAb의 EC50 데이터를 요약한다. 결과는 Globo H-2C2 mAb, Globo H-2F8 mAb, Globo H-3D7 mAb, 및 Globo H-7A11 mAb가 Globo H-VK9 mAb에 비해 Globo H 항원을 중화시키는데 더욱 효과적임을 보여준다. FACS 분석은 Globo H-2C2 mAb 및 Globo H-3D7 mAb가 유방암 세포주에서 Globo H VK9 mAb에 비해 Globo H 항원에 더 높은 결합 친화성을 지님을 보여준다. 또한, Globo H-2C2 mAb 및 Globo H-3D7은 mAb는 Globo H VK9 mAb에 비해 췌장암 세포주 (HPAC) 상의 Globo H 항원에 더 높은 결합 친화성을 지닌다. 더욱이, Globo H-1E1 mAb, Globo H-2C2 mAb, Globo H-3D7 mAb 및 Globo H-7A11 mAb는 Globo H VK9 mAb에 비해 폐암 세포주 (LLC1) 상의 Globo H 항원에 더 높은 결합 친화성을 지닌다.
표 3. 항-Globo H 항체의 EC 50 및 결합 친화성
Figure 112016084959905-pct00013
EC50 값은 Globo H의 50%를 중화시키는 항체의 농도이다.
실시예 4: 항-Globo H 항체의 생체내 항-종양 평가
인간 췌장암 (HPAC) 이종이식편을 지닌 33g 중량의 누드 마우스를 하기 6개 연구 그룹으로 무작위화하였다:
Figure 112016084959905-pct00014
마우스를 종양 부피에 대해 29일의 기간 동안 관찰하고 결과를 도 1에 기록하고 요약하였다.
결과: 29일에, 종양 부피는 다음 순서로 감소하였다: VK9=3D7<2C2 그룹, 2C2 그룹의 종양 부피는 대조군에 비해 현저하게 감소하였다 (P<0.05).
실시예 5: 항-Globo H 항체의 생체내 항-종양 평가
인간 유방암 (MCF7) 이종이식편을 지닌 27g 중량의 누드 마우스를 하기 5개 연구 그룹으로 무작위화하였다:
Figure 112016084959905-pct00015
마우스를 종양 부피에 대해 18일의 기간 동안 관찰하고 결과를 도 2에 기록하고 요약하였다.
결과: 도 2에 도시된 대로, 종양 부피는 대조군에 비해 하기 그룹에서 감소하였다: 15일 후 2C2 (4 mg/kg)>2C2 (0.4 mg/kg). 8일 이후, 2C2의 종양 부피 (4 mg/kg)는 대조군에 비해 현저하게 감소하였다 (P<0.05).
실시예 6: 항-Globo H 항체의 교차 반응성
항-Globo H 항체 (Globo H 2C2 , 7A11, 3D7, 2F8, 1E1 mAb 및 Globo H Vk9)의 시험관내 교차 반응성 평가를 수행하였다.
절차:
GlycoDx 카트리지에 620 μL 세척 완충제, 100 μL의 희석된 항-Globo H 항체, 100 μL 차단 완충제, 120 μL 컨쥬게이트 완충제, 및 120 μL 기질 완충제를 첨가하였다. 카트리지를 CCD 분석기로 검출하고, 데이터를 추가 분석을 위해 엑셀 스프레드시트에 출력하였다.
결과: 도 3a에 도시된 대로, Globo H 2C2 mAb는 Globo H에 결합하고 다른 탄수화물 항원, 예컨대 the 루이스 항원 (sLex 및 sLea) 및 S15-S27 항원 (탄수화물 항원의 목록에 대해 표 4를 참조하라)에 대해 교차 반응성을 나타낸다. Globo H 7A11 mAb는 Globo H에 결합하고 다른 탄수화물 항원, 예컨대 루이스 항원 (sLex 및 sLea) 및 S15-S17, S19-S22 항원에 대해 교차 반응성을 나타낸다 (도 3b를 참조하라). Globo H 3D7 mAb는 Globo H에 결합하고 다른 탄수화물 항원, 예컨대 루이스 항원 (sLex, sLea, 및 Ley) 및 S15-S22 항원에 대해 교차 반응성을 나타낸다 (도 3c를 참조하라). Globo H 2F8 mAb는 Globo H에 결합하고 다른 탄수화물 항원, 예컨대 루이스 항원 (sLex 및 sLea) 및 S15, S17 및 S21 항원에 대해 교차 반응성을 나타낸다 (도 3d를 참조하라). Globo H 1E1 mAb는 Globo H에 결합하고 다른 탄수화물 항원, 예컨대 루이스 항원 (sLex) 및 S16, S17 및 S20-S22 항원에 대해 교차 반응성을 나타낸다 (도 3e를 참조하라). 대조적으로, Globo H VK9 mAb만이 Globo H에 결합하고 다른 탄수화물 항원에 대해 교차 반응성을 나타내지 않는다 (도 3f를 참조하라).
표 4. 도 3a-3c의 탄수화물 항원의 목록
Figure 112016084959905-pct00016
실시예 7: 항-Globo H 항체의 결합 친화성
하기 항-Globo H 인간화된 항체의 시험관내 평가를 수행하였다. 표 5는 하이브리도마 2C2로부터의 인간화된 항체의 중쇄 영역 및 경쇄 영역의 아미노산 서열을 나열한다.
표 5. 2C2 인간화된 항체의 아미노산 서열
Figure 112016084959905-pct00017
Figure 112016084959905-pct00018
ELISA 방법에 의한 결합 친화성의 결과를 표 6-9에 나열한다.
표 6: 키메라 경쇄 및 인간화된 중쇄를 지닌 항체의 결합 친화성
Figure 112016084959905-pct00019
이러한 결과는 중쇄의 FW2에서 위치 9에 있는 아미노산의 변동 (G에서 A)이 항체의 결합 친화성을 0.4에서 0.17로 감소시킴을 보여준다.
표 7: 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄를 지닌 항체의 결합 친화성
Figure 112016084959905-pct00020
표 8: 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄를 지닌 항체의 결합 친화성
Figure 112016084959905-pct00021
표 9: 인간화된 경쇄 및 인간화된 중쇄를 지닌 항체의 결합 친화성
Figure 112016084959905-pct00022
이러한 결과는 경쇄의 FW2의 위치 12에 있는 아미노산의 변동 (P에서 L)이 결합 친화성을 0.32-0.53에서 0.07-0.08로 감소시키고, 경쇄의 FW2의 위치 13에 있는 아미노산의 변동 (W에서 L)이 결합 친화성을 0.32-0.53에서 0.08-0.12로 감소시킴을 보여준다.
본 발명의 특정 양태가 기재되고 예시되었으나, 그러한 양태는 본 발명의 예시일 뿐이며 첨부된 청구범위에 따라 해석되는 바와 같은 본 발명을 제한하는 것으로 고려되어선 안 된다. 본 명세서에 인용된 모든 간행물 및 특허 출원은 각각의 개별적인 간행물 또는 특허 출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로서 포함된다고 지시된 것처럼 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다. 비록 전술한 발명이 명확한 이해를 목적으로 예시 및 실시예에 의해 일부 상세히 기재되었지만, 특정 변경 및 변형이 첨부된 청구범위의 사상 또는 범위를 벗어나지 않으며 이에 대해 이루어질 수 있음이 본 발명의 교시에 비추어 당분야 숙련자에게 용이하게 자명할 것이다.
서열 목록: SEQ ID NO. 1 - 90
Figure 112016084959905-pct00023
Figure 112016084959905-pct00024
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Figure 112016084959905-pct00031
SEQUENCE LISTING <110> OBI Pharma Inc. Yu, Cheng-Der Tony <120> ANTIBODIES, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND USES THEREOF <130> 5076-0014-PCT <150> 61/977,824 <151> 2014-04-10 <150> 62/057,381 <151> 2014-09-30 <160> 90 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 348 <212> DNA <213> mouse <400> 1 tctggccctg ggatattgca gccctcccag accctcagtc tgacttgttc tttctctgga 60 ttttcactgt acacttttga tatgggtgta ggctggattc gtcagccttc agggaagggt 120 ctggagtggc tggcacacat ttggtgggat gatgataagt actataaccc agccctgaag 180 agtcggctca cagtctccaa ggatacctcc aaaaaccagg tcttcctcaa gatccccaat 240 gtggacactg cagatagtgc cacatactac tgtgctcgag taaggggcct ccatgattat 300 tactactggt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctct 348 <210> 2 <211> 282 <212> DNA <213> mouse <400> 2 gcatctccag gggagaaggt cacaatgact tgcagggcca gttcaagtgt aagttacatg 60 cactggtacc agcagaagcc aggatcctcc cccaaaccct ggatttatgc cacatccaac 120 ctggcgtctg gagtccctgc tcgcttcagt ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc 180 acaatcagca gagtggaggc tgaagatgct gccacttatt tctgccagca gtggagtcga 240 aacccattca cgttcggctc ggggacaaag ttggaaataa ga 282 <210> 3 <211> 116 <212> PRT <213> mouse <400> 3 Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys 1 5 10 15 Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Tyr Thr Phe Asp Met Gly Val Gly Trp 20 25 30 Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp 35 40 45 Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr 50 55 60 Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Pro Asn 65 70 75 80 Val Asp Thr Ala Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Arg Gly 85 90 95 Leu His Asp Tyr Tyr Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser 115 <210> 4 <211> 94 <212> PRT <213> mouse <400> 4 Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser 1 5 10 15 Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys 20 25 30 Pro Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg 35 40 45 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg 50 55 60 Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 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Leu Ser Leu Thr Cys 1 5 10 15 Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Tyr Thr Phe Asp Met Gly Val Gly Trp 20 25 30 Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp 35 40 45 Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr 50 55 60 Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Pro Asn 65 70 75 80 Val Asp Thr Ala Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Arg Gly 85 90 95 Leu His Asp Tyr Tyr Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser 115 <210> 14 <211> 94 <212> PRT <213> mouse <400> 14 Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser 1 5 10 15 Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys 20 25 30 Pro Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg 35 40 45 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg 50 55 60 Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Arg 65 70 75 80 Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg 85 90 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> mouse <400> 15 Tyr Thr Phe Asp Met Gly Val Gly 1 5 <210> 16 <211> 16 <212> PRT <213> mouse <400> 16 His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 17 <211> 13 <212> PRT <213> mouse <400> 17 Val Arg Gly Leu His Asp Tyr Tyr Tyr Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> mouse <400> 18 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 1 5 10 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> mouse <400> 19 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> mouse <400> 20 Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Phe Thr 1 5 <210> 21 <211> 116 <212> PRT <213> mouse <400> 21 Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys 1 5 10 15 Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Tyr Thr Phe Asp Met Gly Val Gly Trp 20 25 30 Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala Gln Ile Trp 35 40 45 Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Gly Leu Lys Ser Arg Leu Thr 50 55 60 Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Pro Asn 65 70 75 80 Val Asp Thr Ala Asp Ser Ala 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Ser Val Ser Tyr Met His 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> mouse <400> 27 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> mouse <400> 28 Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Phe Thr 1 5 <210> 29 <211> 117 <212> PRT <213> mouse <400> 29 Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys 1 5 10 15 Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe Gly Leu Gly Val Gly Trp 20 25 30 Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp 35 40 45 Trp Asp Asp Asp Lys Ser Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr 50 55 60 Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Met Ile Ala Asn 65 70 75 80 Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Gly Pro 85 90 95 Lys Trp Ser Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser 115 <210> 30 <211> 94 <212> PRT <213> mouse <400> 30 Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser 1 5 10 15 Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys 20 25 30 Pro Tyr Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ser Ser Gly Val Pro Ala Arg 35 40 45 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg 50 55 60 Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser 65 70 75 80 Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 85 90 <210> 31 <211> 8 <212> PRT <213> mouse <400> 31 Ser Thr Phe Gly Leu Gly Val Gly 1 5 <210> 32 <211> 16 <212> PRT <213> mouse <400> 32 His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Ser Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 33 <211> 14 <212> PRT <213> mouse <400> 33 Ile Gly Pro Lys Trp Ser Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Cys Asp Tyr 1 5 10 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> mouse <400> 34 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 1 5 10 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> mouse <400> 35 Ala Thr Ser Asn Leu Ser Ser 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> mouse <400> 36 Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr 1 5 <210> 37 <211> 117 <212> PRT <213> mouse <400> 37 Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys 1 5 10 15 Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe Gly Leu Gly Val Gly Trp 20 25 30 Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp 35 40 45 Trp Asp Asp Asp Lys Ser Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser Gln Leu Thr 50 55 60 Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Leu Leu Lys Ile Ala Asn 65 70 75 80 Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Gly Pro 85 90 95 Lys Trp Ser Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser 115 <210> 38 <211> 94 <212> PRT <213> mouse <400> 38 Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser 1 5 10 15 Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys 20 25 30 Pro Tyr Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ser Ser Gly Val Pro Ala Arg 35 40 45 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg 50 55 60 Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser 65 70 75 80 Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 85 90 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> mouse <400> 39 Ser Thr Phe Gly Leu Gly 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cacatttggt gggatgatga taagtactat aacccagccc tgaagagt 48 <210> 55 <211> 39 <212> DNA <213> mouse <400> 55 gtaaggggcc tccatgatta ttactactgg tttgcttac 39 <210> 56 <211> 30 <212> DNA <213> mouse <400> 56 agggccagtt caagtgtaag ttacatgcac 30 <210> 57 <211> 21 <212> DNA <213> mouse <400> 57 gccacatcca acctggcgtc t 21 <210> 58 <211> 27 <212> DNA <213> mouse <400> 58 cagcagtgga gtcgaaaccc attcacg 27 <210> 59 <211> 348 <212> DNA <213> mouse <400> 59 tctggccctg ggatattgca gccctcccag accctcagtc tgacttgttc tttctctgga 60 ttttcactgt acacttttga tatgggtgta ggctggattc gtcagccttc agggaagggt 120 ctggagtggc tggcacaaat ttggtgggat gatgataagt actataaccc aggcctgaag 180 agtcggctca caatctccaa ggatacctcc aaaaaccagg tattcctcaa gatccccaat 240 gtggacactg cagatagtgc cacatactac tgtgctcgaa taaggggcct ccgtgattat 300 tactactggt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctct 348 <210> 60 <211> 282 <212> DNA <213> mouse <400> 60 gcatctccag gggagaaggt cacaatgact tgcagggcca gctcaagtgt aagttacatg 60 cactggtacc agcagaagcc aggatcctcc cccaaaccct ggatttatgc cacatccaac 120 ctggcttctg gagtccctgc tcgcttcagt ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc 180 acaatcagca gagtggaggc tgaagatgct gccacttatt tctgccagca gtggagtcga 240 aacccattca cgttcggctc ggggacaaag ttggaaataa ga 282 <210> 61 <211> 24 <212> DNA <213> mouse <400> 61 tacacttttg atatgggtgt aggc 24 <210> 62 <211> 48 <212> DNA <213> mouse <400> 62 caaatttggt gggatgatga taagtactat aacccaggcc tgaagagt 48 <210> 63 <211> 39 <212> DNA <213> mouse <400> 63 ataaggggcc tccgtgatta ttactactgg tttgcttac 39 <210> 64 <211> 30 <212> DNA <213> mouse <400> 64 agggccagct caagtgtaag ttacatgcac 30 <210> 65 <211> 21 <212> DNA <213> mouse <400> 65 gccacatcca acctggcttc t 21 <210> 66 <211> 27 <212> DNA <213> mouse <400> 66 cagcagtgga gtcgaaaccc attcacg 27 <210> 67 <211> 351 <212> DNA <213> mouse <400> 67 tctggccctg ggatattgca gccctcccag accctcagtc tgacttgttc tttctctggg 60 ttttcgctga gcacttttgg tttgggtgta ggctggattc gtcagccttc agggaagggt 120 ctggagtggc tggcacacat ttggtgggat gatgataagt cctataaccc agccctgaag 180 agtcggctca caatctccaa ggatacctcc aaaaaccagg tcttcctcat gatcgccaat 240 gtggacactg cagatactgc cacatactac tgtgctcgaa taggcccgaa atggagcaac 300 tactactact actgtgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc c 351 <210> 68 <211> 282 <212> DNA <213> mouse <400> 68 gcatctccag gggagaaggt cacaatgact tgcagggcca gctcaagtgt tagttacatg 60 cactggtacc agcagaagcc aggatcctcc cccaaaccct acatttatgc cacatccaac 120 ctgtcttctg gagtccctgc tcgcttcagt ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc 180 acaatcagca gagtggaggc tgaagatgct gccacttatt actgccagca gtggagtagt 240 aaccccttca cgttcggctc ggggacaaag ttggaaataa aa 282 <210> 69 <211> 24 <212> DNA <213> mouse <400> 69 agcacttttg gtttgggtgt aggc 24 <210> 70 <211> 48 <212> DNA <213> mouse <400> 70 cacatttggt gggatgatga taagtcctat aacccagccc tgaagagt 48 <210> 71 <211> 42 <212> DNA <213> mouse <400> 71 ataggcccga aatggagcaa ctactactac tactgtgact ac 42 <210> 72 <211> 30 <212> DNA <213> mouse <400> 72 agggccagct caagtgttag ttacatgcac 30 <210> 73 <211> 21 <212> DNA <213> mouse <400> 73 gccacatcca acctgtcttc t 21 <210> 74 <211> 27 <212> DNA <213> mouse <400> 74 cagcagtgga gtagtaaccc cttcacg 27 <210> 75 <211> 351 <212> DNA <213> mouse <400> 75 tctggccctg ggatattgca gccctcccag accctcagtc tgacttgttc tttctctggg 60 ttttcgctga gcacttttgg tttgggtgta ggctggattc gtcagccttc agggaagggt 120 ctggagtggc tggcacacat ttggtgggat gatgataagt cctataaccc agccctgaag 180 agtcagctca caatctccaa ggatacctcc aaaaaccagg tactcctcaa gatcgccaat 240 gtggacactg cagatactgc cacatactac tgtgctcgaa taggcccgaa atggagcaac 300 tactactact actgtgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc c 351 <210> 76 <211> 282 <212> DNA <213> mouse <400> 76 gcatctccag gggagaaggt cacaatgact tgcagggcca gctcaagtgt tagttacatg 60 cactggtacc agcagaagcc aggatcctcc cccaaaccct acatttatgc cacatccaac 120 ctgtcttctg gagtccctgc tcgcttcagt ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc 180 acaatcagca gagtggaggc tgaagatgct gccacttatt actgccagca gtggagtagt 240 aaccccttca cgttcggctc ggggacaaag ttggaaataa aa 282 <210> 77 <211> 24 <212> DNA <213> mouse <400> 77 agcacttttg gtttgggtgt aggc 24 <210> 78 <211> 48 <212> DNA <213> mouse <400> 78 cacatttggt gggatgatga taagtcctat aacccagccc tgaagagt 48 <210> 79 <211> 42 <212> DNA <213> mouse <400> 79 ataggcccga aatggagcaa ctactactac tactgtgact ac 42 <210> 80 <211> 30 <212> DNA <213> mouse <400> 80 agggccagct caagtgttag ttacatgcac 30 <210> 81 <211> 21 <212> DNA <213> mouse <400> 81 gccacatcca acctgtcttc t 21 <210> 82 <211> 27 <212> DNA <213> mouse <400> 82 cagcagtgga gtagtaaccc cttcacg 27 <210> 83 <211> 23 <212> PRT <213> mouse <400> 83 Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys 1 5 10 15 Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 20 <210> 84 <211> 11 <212> PRT <213> mouse <400> 84 Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys 1 5 10 <210> 85 <211> 32 <212> PRT <213> mouse <400> 85 Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys 1 5 10 15 Ile Pro Asn Val Asp Thr Ala Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 86 <211> 32 <212> PRT <213> mouse <400> 86 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys 20 25 30 <210> 87 <211> 23 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> human-mouse sequence <400> 87 Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys 1 5 10 15 Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu 20 <210> 88 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> human-mouse sequence <400> 88 Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 1 5 10 <210> 89 <211> 32 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> human-mouse sequence <400> 89 Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 90 <211> 32 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> human-mouse sequence <400> 90 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30

Claims (49)

  1. SEQ ID NO: 5 또는 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1),
    SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 24 또는 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR2),
    SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 25 또는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 갖는 제3 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR3),
    SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 갖는 제1 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1),
    SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 갖는 제2 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR2), 및
    SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 갖는 제3 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분은, Globo H, sLex, sTn, Tn, sLea, α-NeuAc-OCH2C6H4-p-NHCOOCH2, Fucα1-2Galβ1-4GalNAcβ, NeuAca2-6Galb, Gala1-3Galb1-4GlaNAcb, (NeuAca2-8)3, 6Gal-HSO3-SiaLex, 6GluNAc-HSO3-SiaLex, α2-6 시알릴화된 디안테너리 N-글리칸 또는 폴리시알산으로부터 선택된 탄수화물 항원에 결합하는 것인, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  2. 제 1항에 있어서,
    HCDR1이 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 갖고,
    HCDR2가 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 갖고,
    HCDR3이 SEQ ID NO: 7 또는 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 갖고,
    LCDR1이 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 갖고,
    LCDR2가 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 갖고,
    LCDR3이 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 갖는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  3. 제 1항에 있어서,
    HCDR1이 SEQ ID NO: 5이고,
    HCDR2가 SEQ ID NO: 6이고,
    HCDR3이 SEQ ID NO: 7이고,
    LCDR1이 SEQ ID NO: 8이고,
    LCDR2가 SEQ ID NO: 9이고,
    LCDR3이 SEQ ID NO: 10인, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  4. 제3항에 있어서,
    HCDR1 및 HCDR2 사이에 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 가지는 프레임워크, 및
    LCDR1 및 LCDR2 사이에 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 가지는 프레임워크를 추가로 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  5. 제 1항에 있어서,
    HCDR1이 SEQ ID NO: 5이고,
    HCDR2가 SEQ ID NO: 24이고,
    HCDR3이 SEQ ID NO: 25이고,
    LCDR1이 SEQ ID NO: 8이고,
    LCDR2가 SEQ ID NO: 9이고,
    LCDR3이 SEQ ID NO: 10인, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  6. 제 1항에 있어서,
    HCDR1이 SEQ ID NO: 31이고,
    HCDR2가 SEQ ID NO: 32이고,
    HCDR3이 SEQ ID NO: 33이고,
    LCDR1이 SEQ ID NO: 8이고,
    LCDR2가 SEQ ID NO: 35이고,
    LCDR3이 SEQ ID NO: 36인, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  8. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  9. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  10. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  11. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  12. 제 1항에 있어서,
    항체가 ATCC 수탁 번호 PTA-121138 하에 기탁된 2C2로서 지정된 하이브리도마, ATCC 수탁 번호 PTA-121310 하에 기탁된 3D7로서 지정된 하이브리도마, ATCC 수탁 번호 PTA-121311 하에 기탁된 7A11로서 지정된 하이브리도마, ATCC 수탁 번호 PTA-121137 하에 기탁된 2F8로서 지정된 하이브리도마 및 ATCC 수탁 번호 PTA-121312 하에 기탁된 1E1로서 지정된 하이브리도마로 이루어진 군으로부터 선택된 하이브리도마에 의해 생성된, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  13. 제 1항에 있어서,
    상기 탄수화물 항원이 종양 관련된 탄수화물 항원들 (TACAs)인, 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  14. (a) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3의 3개 HCDR들;
    리더 서열 및 HCDR1 사이에 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 갖는 프레임워크; 및
    HCDR2 및 HCDR3 사이에 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 포함하는 중쇄 영역, 및
    (b) SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3의 3개 LCDR들;
    리더 서열 및 LCDR1 사이에 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 갖는 프레임워크; 및
    LCDR2 및 LCDR3 사이에 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 갖는 프레임워크를 포함하는 경쇄 영역을 포함하는, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  15. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 암 치료용 약학적 조성물.
  16. 제 15항에 있어서,
    상기 암은 유방암, 폐암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 자궁내막암, 결장암, 간암, 비인두암, 피부암, 구강암, 신장암, 뇌암, 자궁경부암 또는 방광암인, 암 치료용 약학적 조성물.
  17. 삭제
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