KR101939151B1 - 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

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    • Y10S514/866—
    • Y10S514/909—

Abstract

본 발명은 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 플라즈마를 처리하여 생성된 플로리진 반응물은 플라즈마가 처리되지 않은 플로리진에 비해 항산화 활성은 증가되고, α-글루코시다아제 활성 또는 췌장 리파아제 활성은 저해하는 효과가 우수하므로, 대사성 질환의 치료제 또는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품으로 사용될 수 있다.

Description

플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing, improving or treating metabolic diseases comprising plasma-treated phloridzin as effective component}
본 발명은 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
최근 생활습관성 및 각종 퇴행성 질환이 현대인들의 건강을 위협하고 있으며, 이는 과도한 산화적 스트레스에 노출된 것이 그 원인 중 하나이다. 인체에서는 산화촉진물질과 산화억제물질이 균형을 유지하기 위하여 자유라디칼의 생성과 항산화 방어체계가 유지되며, 자외선, 흡연, 매연, 약물, 스트레스 및 방사선 등에 의하여 그 균형이 붕괴된다. 과도하게 생성된 초과산화물(superoxide, O2-), 산화질소(nitric oxide, NO), 이산화질소(nitrogen dioxide, NO2), 수산기(hydroxyl, OH), 과산화질산염(peroxynitrite, NO3-) 등과 같은 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 산화적 스트레스를 유발하며 세포의 구성성분인 지질, 단백질, 당, DNA 등에 비선택적이고 비가역적 파괴를 촉진시키며, 노화, 암, 뇌질환, 심혈관계질환, 피부질환 등의 각종 질병을 유발하는 원인이 된다. 항산화물질은 체내에서 활성산소종이나 자유라디칼을 중화시켜 노화방지, 성인병 예방 등의 기능을 하는 성분을 말하며, BHA(butylated hydroxy anisol), BHT(butylated hydroxy toluene) 등의 합성 항산화제가 광범위하게 사용되었으나, 암 유발 및 지질대사 불균형 등의 부작용으로 인하여 사용 제한이 권고되고 있다.
한편, 당뇨병은 현대인들에게 가장 많이 발생되는 만성 대사성 질환으로서, 최근 우리나라에서는 경제성장 및 생활수준의 향상으로 인한 식습관의 변화가 가속화됨으로써 당뇨병 환자가 급격하게 증가되고 있으며, 발병연령도 점차 낮아져 앞으로 더 많은 인구가 당뇨병으로 인해 고통받을 것으로 예측된다. 당뇨병은 크게 두 가지로 나뉘며 제1형은 췌장 베타세포의 병변에 따른 인슐린 결핍으로 인한 인슐린 의존성, 제2형은 인슐린 저항성으로 인한 인슐린 비의존성 당뇨로 정의된다. α-글루코시다아제(α-Glucosidase)는 소장점막에 존재하는 당 분해 효소로서 이를 저해하면 탄수화물의 소화를 방해하여 소장에서의 흡수가 지연되므로 식후 급격한 혈당상승을 막아준다. 대표적인 α-글루코시다아제 저해제로는 아카보즈(acarbose) 및 보글리보스(voglibose)가 있으나, 이들을 장기 복용할 경우 염증성 장질환 등의 각종 부작용을 야기할 수 있어 사용이 제한되고 있다. 따라서 보다 안전하며 효능이 우수한 천연 기능성 소재의 탐색이 필요하다.
한편, 서구화된 식습관과 잘못된 생활습관에 의해 비만 인구가 급격하게 증가하고 있다. 비만은 섭취에너지와 소비에너지의 불균형에 의한 에너지 대사이상으로 지방세포에 중성지방이 과도하게 축적된 상태이다. 비만은 단순한 외형상의 문제 외에도 고혈압, 고지혈증, 제2형 당뇨병, 고혈압, 실장질환, 뇌졸중, 관절염, 동맥경화와 밀접한 연관이 있다. 비만의 치료와 예방에 있어 식이요법을 동반한 운동이 가장 적절한 방법이나 최근에는 식욕억제제, 지방흡수 억제제 등의 개발이 진행되고 있다. 대표적인 항비만 의약품으로 오르리스타트(orlistat)가 있으나, 위장장애, 과민증, 담즙분비장애, 지용성 비타민 흡수억제 등의 부작용이 있는 것이 보고됨에 따라 새로운 항비만 물질의 개발이 요구되고 있다.
한편, 플로리진(phloridzin)은 플로레틴(phloretin)에 포도당(glucose)이 결합한 형태의 칼콘(chalcone) 배당체 화합물로서 사과의 과육보다는 비식용부인 껍질이나 씨에 많이 함유되어 있어, 사람들의 직접적인 섭취는 적은 편이다. 따라서 다양한 생물전환 방법을 이용하여 버려지는 비식용부로부터 새로운 천연 생리활성 물질을 개발한다면, 버려지는 원료를 자원화하여 환경문제를 방지할 수 있고, 새로운 소득원이 될 수 있다.
한편, 전리된 가스 상태인 플라즈마에는 전자, 양이온, 음이온, 자유라디칼 및 광자 등을 포함하는 활성산소종이 존재한다. 최근에는 기존의 식품 살균 기술이 갖고 있는 문제점들을 최소화시키기 위하여 다양한 기술들이 개발되고 있으며, 그중에서도 비열 플라즈마 처리기술이 주목을 끌고 있다. 비열 플라즈마 기술은 식품의 미생물을 저해하는 기술 이외에 환경, 의료 분야에서 살균 및 소독기술로 개발되고 있으나, 식품의 성분에 화학적, 기능적 변화에 대한 연구는 아직 미흡한 상황이다.
한편, 한국등록특허 제1492277호에는 나트륨 글루코즈 공-전달체 2의 억제제로서의 플로리진 유사체가 개시되어 있지만, 본 발명의 플라즈마 처리된 플로리진반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상기 조성물이 항산화 활성은 증진되고, α-글루코시다아제(α-glucosidase) 및 췌장 리파아제(pancreatic lipase)의 활성을 저해하는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 플라즈마 처리된 플로리진 반응물은 플라즈마가 처리되지 않은 플로리진에 비해 항산화 활성은 증가되고, α-글루코시다아제 활성 또는 췌장 리파아제 활성은 저해하는 효과가 우수하므로, 대사성 질환의 치료제 또는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품의 소재로 활용할 수 있다.
도 1은 시간별로 플라즈마를 처리한 플로리진 반응물을 역상 HPLC(reversed phase high performance liquid chromatography)로 분석한 결과이다. A는 플로리진에 플라즈마를 20분 동안 처리한 결과이고, B는 플로리진에 플라즈마를 40분 동안 처리한 결과이며, C는 플로리진에 플라즈마를 60분 동안 처리한 결과이다. 새로 생성된 물질 UI1~5는 미확인 화합물(unidentified compounds)1~5를 의미한다.
본 발명은 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 '대사성 질환'은 비만 또는 당뇨병을 의미한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 플라즈마는 유전장벽 방전, 코로나 방전, 마이크로파 방전 또는 아크 방전 플라즈마일 수 있으며, 예를 들면 유전체 장벽 방전의 방식으로 200~300W 전력 및 10~20㎑ 주파수 조건에서 플로리진에 30~80분 동안 처리하는 것이고, 바람직하게는 유전체 장벽 방전의 방식으로 250W 전력 및 15㎑ 주파수 조건에서 플로리진에 40~60분 동안 처리하는 것이고, 가장 바람직하게는 유전체 장벽 방전의 방식으로 250W 전력 및 15㎑ 주파수 조건에서 플로리진에 60분 동안 처리하는 것이지만, 이에 제한되지 않는다.
상기 플라즈마가 처리된 플로리진 반응물은 α-글루코시다아제(α-glucosidase) 및 췌장 리파아제(pancreatic lipase)의 활성을 저해하고, 항산화 활성은 증진되는 것이지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있으며, 이러한 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
본 발명의 약학조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여의 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약학조성물은 대사성 질환의 억제 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선치료, 호르몬치료, 화학치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 농도는 치료 목적, 환자의 상태, 필요기간 등을 고려하여 결정할 수 있으며 특정 범위의 농도로 한정되지 않는다.
본 발명의 약학조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 주사제, 크림, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 플라즈마 처리 플로리진 반응물의 제조
플라즈마 처리를 위해 유전체 장벽 방전(dielectric barrier discharge, DBD)(250W, 15kHz, ambient air) 플라즈마 기기(137×104×53mm)를 사용하였다. 플로리진 100㎎을 메탄올(MeOH) 500㎖에 녹인 후, DBD 플라즈마 기기에서 20, 40 및 60분 동안 처리한 후 즉시 농축하였다. 그 후, 각각의 시간별로 플라즈마가 처리된 플로리진을 10%(v/v) 메탄올 100㎖에 현탁하고, 현탁액을 에틸아세테이트(EtOAc)로 분획하여, 플라즈마가 20, 40 및 60분 동안 처리된 플로리진 반응물의 에틸아세테이트 가용분획을 각각 56.0, 48.6 및 52.4mg 얻었다.
실시예 1. 플라즈마 처리된 플로리진 반응물의 변화 분석
제조예 1의 플라즈마 처리된 플로리진 반응물을 역상 HPLC(reversed phase high performance liquid chromatography)를 통해 분석하였다. HPLC 분석의 이동상 용매로는 1% 포름산(formic acid, A)과 아세토나이트릴(acetonitrile, B)을 사용하였다. 물질 분석은 0-5분 동안은 95%(v/v)의 A 용매와 5%(v/v)의 B 용매 조성으로, 5-10분 동안은 85%(v/v)의 A 용매와 15%(v/v)의 B 용매 조성으로, 10-15분 동안은 70%(v/v)의 A 용매와 30%(v/v)의 B 용매 조성으로, 15-20분 동안은 50%(v/v)의 A 용매와 50%(v/v)의 B 용매 조성으로, 20-30분 동안은 100%(v/v) B 용매 조성으로 물질 분석을 하였으며, 이동상의 유속은 분당 1.0㎖를 유지하였고, 280nm의 파장에서 화합물을 검출하였다. HPLC 분석용 칼럼은 YMC-Pack ODS A-302 column(4.6mm i.d.×150mm; YMC Co., Ltd., Tokyo, Japan)을 사용하였다.
그 결과, 도 1 및 표 1에 나타난 바와 같이 플라즈마를 처리한 플로리진 반응물에서 새로운 생성물이 검출되었다. 20분 동안 플라즈마 처리한 플로리진 반응물에서는 새로운 물질 1종(UI1), 40분 동안 플라즈마 처리한 플로리진 반응물에서는 새로운 물질 2종(UI1 및 UI3) 및 60분 동안 플라즈마 처리한 플로리진 반응물에서 새로운 물질 5종(UI1~5)이 생성되는 것을 확인하였으며, 플라즈마 처리 시간이 경과함에 따라 새로운 물질의 생성이 증가하였다.
화합물 머무름 시간(분)
(Retention time)		 함량(%)
20분 40분 60분
플로리진 14.0 93.5 78.8 47.1
UI1 16.6 6.5 16.6 24.2
UI2 16.9 - - 6.1
UI3 19.4 - 4.6 13.9
UI4 20.4 - - 3.3
UI5 27.9 - - 5.4
20분, 40분 및 60분은 플로리진에 플라즈마를 처리한 시간을 의미하며, 새로 생성된 물질 UI1~5는 미확인 화합물(unidentified compounds)1~5를 의미한다.
실시예 2. 플라즈마 처리된 플로리진 반응물의 항산화 활성 측정
제조예 1의 플라즈마 처리된 플로리진 반응물의 항산화 활성은 Blois 방법에 따라 측정하였다. 플라즈마 처리된 제조예 1의 플로리진 반응물 120㎕에 0.45mM의 희석한 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액 60㎕를 넣고 교반한 후 15분 동안 방치한 다음 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로는 (+)-카테킨을 사용하였다. 전자공여능은 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 차이를 백분율로 나타내었다.
그 결과, 표 2에 나타난 바와 같이 플로리진의 IC50 값은 500㎍/㎖ 이상으로 라디칼 소거능이 상대적으로 낮은 반면, 40분 동안 플라즈마를 처리한 플로리진 반응물의 IC50 값은 198.3±2.1㎍/㎖, 60분 동안 플라즈마를 처리한 플로리진 반응물은 100.5±2.9㎍/㎖로 플라즈마 처리시간이 경과할수록 라디칼 소거 활성이 증가하는 것을 확인하였으며, 특히 플라즈마를 60분 동안 처리한 플로리진 반응물은 플라즈마를 처리하지 않은 플로리진에 비해 약 5배 이상의 우수한 항산화 활성을 나타내었다.
샘플 플라즈마 처리시간
(분)		 억제율(%)
500㎍/㎖ 250㎍/㎖ 125㎍/㎖ 62.5㎍/㎖ 31.3㎍/㎖
(처리농도)		 IC50
(㎍/㎖)
플로리진 0 10.4±0.5 6.5±0.4 3.9±0.3 2.4±0.3 0.5±0.1 >500
20 23.5±1.1 10.8±0.8 6.1±0.9 4.8±1.2 3.6±0.5 >500
40 78.5±1.5 54.5±1.3 38.0±1.2 20.5±0.9 8.7±0.7 198.3±2.1
60 84.3±1.8 73.9±1.7 56.0±1.3 39.4±0.8 21.2±0.9 100.5±2.9
(+)-카테킨 99.9±1.1 95.7±1.3 91.5±1.3 88.2±1.0 74.0±1.0 13.0±1.0
실시예 3. 플라즈마 처리된 플로리진 반응물의 α-글루코시다아제 저해 활성 측정
α-글루코시다아제 저해활성은 Eom 등이 행한 방법을 변형하여 효소-기질반응을 이용한 분광학적 방법으로 측정하였다. 1U/㎖의 α-글루코시다아제 90㎕에 제조예 1의 플라즈마 처리된 플로리진 반응물 혹은 0.1M 인산나트륨 완충용액(sodium phosphate buffer, pH 6.8) 10㎕를 첨가하여 혼합한 후, 37℃에서 15분 동안 반응시켰다. 그 후, 100㎕의 1mM p-NPG를 기질로 첨가하고, 5분 동안 반응시켰다. 반응물의 기질로부터 유리되어 나오는 파라니트로페놀(p-nitrophenol)을 측정하기 위해 405nm에서 ELISA 리더(reader)를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로는 α-글루코시다아제 저해제로 알려진 아카보즈(acarbose)를 사용하였으며, α-글루코시다아제 저해활성은 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.
그 결과, 표 3에 나타난 바와 같이 플라즈마를 처리하지 않은 플로리진의 경우 IC50 값이 300㎍/㎖ 이상으로 비교적 낮은 저해활성을 나타내었고, 플라즈마를 20분 동안 처리한 플로리진 반응물의 경우도 IC50 값이 300㎍/㎖ 이상으로 낮은 저해활성을 나타내었으나, 40분 동안 플라즈마를 처리한 플로리진 반응물의 IC50 값은 71.5±2.3㎍/㎖, 60분 동안 플라즈마를 처리한 플로리진 반응물의 IC50 값은 43.5±2.2㎍/㎖를 나타내어 저해활성이 증가하는 것을 확인하였다.
샘플 플라즈마 처리시간
(분)		 억제율(%)
200㎍/㎖ 100㎍/㎖ 50㎍/㎖ 25㎍/㎖ 12.5㎍/㎖
(처리농도)		 IC50
(㎍/㎖)
플로리진 0 31.2±1.3 21.6±1.1 6.1±0.5 3.2±0.8 0.4±0.1 >300
20 34.2±0.6 26.1±0.6 8.3±0.3 5.3±1.1 2.4±0.9 >300
40 88.8±1.6 68.9±0.7 29.5±0.5 11.2±0.5 4.3±0.2 71.5±2.3
60 98.2±1.1 84.7±1.1 53.7±1.0 27.0±0.9 12.9±0.3 43.5±2.2
아카보즈 38.8±2.1 29.9±2.1 24.1±1.5 17.4±2.1 14.4±1.1 541.3±1.9
실시예 4. 플라즈마 처리된 플로리진 반응물의 췌장 리파아제 저해 활성 측정
췌장 리파아제 저해활성 측정은 Kim 등이 행한 방법을 변형하여 실시하였다. 즉 효소 완충용액(10mM MOPS, 1mM EDTA, pH 6.8)에 돼지 췌장 리파아제(porcine pancreatic lipase)를 0.5g/200㎖의 농도로 4℃를 유지하면서 용해하고, 상기 용해물을 4000rpm으로 원심 분리한 후, 상층액에 트리스 완충용액(100mM Tris-HCl, 5mM CaCl2, pH 7.0)과 효소 완충용액(enzyme buffer)을 혼합하였다. 제조예 1의 플라즈마 처리된 플로리진 반응물은 DMSO로 용해하여 최종 농도가 3%(w/v)가 되도록 한 후 200, 100, 50, 25 및 12.5㎍/㎖의 농도로 희석하고, 37℃에서 15분 동안 상기 돼지 췌장 리파아제 효소와 함께 교반하였다. 그 후, 10mM이 되게 DMF에 용해한 기질용액 p-NPB(p-nitrophenyl butyrate)를 첨가하여 37℃에서 35분 동안 재반응시켰다. 반응물은 진탕한 후, ELISA 리더를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 오르리스타트(orlistat)는 양성대조군으로 사용하였다. 췌장 리파아제 저해활성은 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.
그 결과, 표 4에 나타난 바와 같이 플라즈마 처리를 하지 않은 플로리진의 경우 IC50 값이 300㎍/㎖ 이상으로 비교적 낮은 저해활성을 나타내었고, 플라즈마를 20분 동안 처리한 플로리진 반응물의 경우도 IC50 값이 300㎍/㎖ 이상으로 낮은 저해활성을 나타내었다. 반면, 40분 동안 플라즈마 처리한 플로리진 반응물의 IC50 값은 65.5±2.1㎍/㎖, 60분 동안 플라즈마 처리한 플로리진 반응물의 IC50 값은 29.8±2.0㎍/㎖를 나타내어 저해활성이 증가하는 것을 확인하였다.
샘플 플라즈마 처리시간
(분)		 억제율(%)
200㎍/㎖ 100㎍/㎖ 50㎍/㎖ 25㎍/㎖ 12.5㎍/㎖
(처리농도)		 IC50
(㎍/㎖)
플로리진 0 27.9±1.0 20.5±1.2 19.3±0.5 17.4±0.9 12.1±0.1 >300
20 25.3±1.1 18.4±0.8 16.2±0.3 15.0±1.1 14.6±0.6 >300
40 57.3±1.2 54.1±0.5 51.0±0.5 48.3±0.5 29.7±0.1 65.5±2.1
60 75.8±1.1 65.9±1.1 64.3±1.0 46.4±0.7 36.0±0.2 29.8±2.0
오르리스타트 99.8±1.1 94.2±1.2 90.3±1.1 87.8±1.1 81.0±1.1 0.2±0.1

Claims (6)

  1. 200~300W 범위의 플라즈마를 30~80분 동안 처리한 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 비만 또는 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 상기 플라즈마 처리된 플로리진 반응물은 α-글루코시다아제(α-glucosidase)의 활성을 저해하고, 췌장 리파아제(pancreatic lipase)의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 비만 또는 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 플라즈마 처리된 플로리진 반응물은 항산화 활성이 증진되는 것을 특징으로 하는 비만 또는 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 200~300W 범위의 플라즈마를 30~80분 동안 처리한 플로리진 반응물을 유효성분으로 함유하는 비만 또는 당뇨병의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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