KR101898274B1

KR101898274B1 - 20(S)-진세노사이드 Rg3의 대량 제조 방법

Info

Publication number: KR101898274B1
Application number: KR1020160180729A
Authority: KR
Inventors: 송규용; 이지현; 조수현
Original assignee: 농업회사법인 아레즈 주식회사
Priority date: 2016-12-28
Filing date: 2016-12-28
Publication date: 2018-09-12
Also published as: KR20180076498A

Abstract

본 발명은 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3를 선택적으로 대량 제조하는 방법에 관한 것이다. 상기 20(S)-진세노사이드 Rg3는 백삼 또는 홍삼에는 거의 존재하지 않으며, 미량으로 존재하더라도 S형과 R형의 이성질체로 존재하므로, 단일 물질로 정제되는 양이 매우 적어 이를 이용하기가 쉽지 않았다. 그러나, 본 발명을 통해서는 인삼의 잎으로부터 용이하게 분리 가능한 진세노사이드 Rd만을 이용하여 20(S)-진세노사이드 Rg3를 선택적으로 대량 제조하기 때문에, 인삼, 홍삼 등의 추출물을 이용할 때와 비교하여 상대적으로 Rc, Re, Rf 등으로부터 생성될 수 있는 진세노사이드의 혼입을 막을 수 있고, 20(R)-진세노사이드 Rg3의 상대적인 생산량이 적어, 정제가 쉽고 대량생산이 용이한 20(S)-진세노사이드 Rg3의 제조방법을 제공할 수 있다.

Description

20(S)-진세노사이드 Rg3의 대량 제조 방법 {Manufacturing method for mass-production of 20(S)-ginsenoside Rg3}

본 발명은 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3를 선택적으로 대량 제조하는 방법에 관한 것이다.

인삼(Panax ginseng)은 오갈피나무과(Aralaiaceae) 인삼 속에 속하는 다년생 초본류로, 한국과 중국에서 각종 질병의 예방 또는 치료에 전통적으로 사용되어왔으며, 치료 효과가 우수할 뿐만 아니라 장기간 사용하여도 전혀 부작용이 없다고 알려져 있다.

인삼의 주요 효능을 나타내는 인삼 사포닌(saponin)은 진세노사이드(ginsenoside)로 불리며, 다른 식물에서 발견되는 사포닌과는 다르게 특이한 화학구조와 약리효능을 가진 것으로 알려져 있다. 진세노사이드는 트리테르페노이드(triterpenoid) 계열의 담마란(dammarane) 골격에 글루코즈(glucose), 아라비노즈(arabinose), 자일로즈(xylose), 람노즈(rhamnose) 등이 결합되어 있는 중성배당체이며, 현재 약 30종의 화학 구조가 밝혀졌고, 화학 구조의 특성에 따라 프로토파낙사디올(protopanaxadiol, PPD)계(19종), 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol, PPT)계(10종) 및 올레안(oleanane)계(1종)로 구분된다.

진세노사이드의 주요 효능으로는 면역력강화, 항염증, 항알러지, 항암, 혈압강하, 항콜레스테롤, 항혈전, 항노화, 항산화, 두뇌활동 촉진, 피부미용 효과 등이 알려져 있다(Kim, Y. S. et al., Arch Pharm Res., 2000; Tachikawa, E. et al., Biochem Pharmacol., 2003; Tsai, S. C. et al., Chin J Physiol., 2003; Shibata, S., J Korean Med Sci., 2001). 상기와 같은 약리 효능을 나타내는 주성분은, 특이 진세노사이드인 Rg3, Rg5, Rk1, Rh2, Rk3 등으로 알려져 있으며, 상기 특이 진세노사이드는 다량으로 존재하는 Rb1, Rb2, Rc, Rd, Rg1, Re, Rf 등의 담마란 배당체에서 당의 일부가 떨어져 나가거나 탈수반응이 일어나서 생성되는데, 인삼을 물과 알코올로 추출하는 경우 미량으로 존재한다. 또한, 특이 진세노사이드의 경우, 다량으로 존재하는 진세노사이드와는 다르게 장내 미생물 구성에 별 관계없이 장내에서 흡수율이 우수하여 각종 질환의 약학적 조성물로서 사용되기에 적합하다. 이에, 인삼의 효능 강화 즉, 흡수가 용이한 진세노사이드의 함량이 증가된 인삼 또는 인삼 제품을 제조하기 위해서는, 인삼에는 포함되어 있지 않거나 미량 포함되어 있는 특이 진세노사이드의 함량을 향상시킬 수 있는 방법의 개발이 요구된다.

20(S)-진세노사이드 Rg3의 제조방법과 관련하여, 한국공개특허 제10-2010-0052651호에는 백삼으로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3의 고수율 생산방법에 대해 개시되었으며, 한국공개특허 제10-2011-0052940호에는 인삼으로부터 진세노사이드 Rg3가 강화된 추출물 분획을 제조하는 방법이 개시되었고, 한국등록특허 제10-0635025호에는 식초를 이용한 인삼 제제 및 이의 제조방법에 대해 개시되어 있으나, 진세노사이드 Rd로부터 건조 고온 고압법을 통해 20(S)-진세노사이드 Rg3를 선택적으로 대량 제조하는 방법에 대해서는 아직까지 개시된 바 없다.

한국공개특허 제10-2010-0052651호(백삼으로부터의 20(S)-진세노사이드 Rg3의 고수율 생산방법, 2010년 05월 20일, 공개) 한국공개특허 제10-2011-0052940호(인삼으로부터 진세노사이드 Rg3가 강화된 추출물 분획을 제조하는 방법, 2011년 05월 19일, 공개) 한국등록특허 제10-0635025호(식초를 이용한 인삼 제제 및 이의 제조방법, 2006년 10월 10일, 등록)

Kim, Y. S. et al., Differential expression of protein kinase C subtypes during ginsenoside Rh2-lnduced apoptosis in SK-N-BE(2) and C6Bu-1 cells, Arch Pharm Res., 23(5), 518-524, 2000. Tachikawa, E. et al., In vitro inhibition of adrenal catecholamine secretion by steroidal metabolites of ginseng saponins, Biochem Pharmacol., 66(11), 2213-2221, 2003. Tsai, S. C. et al., Stimulation of the secretion of luteinizing hormone by ginsenoside-Rb1 in male rats, Chin J Physiol., 46(1), 1-7, 2003. Shibata, S., Chemistry and cancer preventing activities of ginseng saponins and some related triterpenoid compounds, J Korean Med Sci., 16(suppl), S28-37, 2001.

본 발명의 목적은 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3를 선택적으로 대량 제조하는 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명은

(1공정) 인삼으로부터 진세노사이드 Rd를 분리 제조하는 단계;

(2공정) 1공정에서 분리 제조된 진세노사이드 Rd를 건조하여 밀봉 처리하는 단계;

(3공정) 2공정에서 처리한 진세노사이드 Rd를 고온 고압 처리하는 단계;

(4공정) 3공정에서 고온 고압 처리된 진세노사이드 혼합물을 크로마토그래피하여 20(S)-진세노사이드 Rg3를 분리 제조하는 단계;

를 포함하는 것을 특징으로 하는 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3를 선택적으로 대량 제조하는 방법에 관한 것이며, 하기 반응식 1의 과정을 통해 생성된다.

[반응식 1]

상기 1공정에 있어, 상기 진세노사이드 Rd는 인삼 추출물로부터 얻을 수 있으며, 상기 인삼 추출물은 인삼의 뿌리, 열매, 잎, 줄기 등의 인삼 유래의 모든 것을 다 이용하여 제조할 수 있으나, 인삼의 잎을 사용하는 것이 다량의 진세노사이드 Rd를 얻을 수 있어 바람직하다.

상기 진세노사이드 Rd의 추출에 이용되는 인삼은 파낙스(Panax) 속에 속하는 다년생 식물로, 고려인삼(Panax ginseng), 화기삼(Panax quinquefolia), 전칠삼(삼칠, Panax notoginseng), 죽절삼(Panax japonicus), 히말라야삼(Panaxa pseudoginseng). 베트남삼(Panax vietnamensis), 파낙스 엘레가티오르(Panax elegatior), 파낙스 완지아누스(Panax wangianus) 및 파낙스 비핀라티피두스(Panax bipinratifidus), 파낙스 안구스티폴리움(Panax angustifolium)에서 선택되는 1종 이상의 인삼을 이용할 수 있고, 사포닌 함량이 많다고 알려진 고려인삼을 사용하는 것이 가장 바람직하나, 인삼 종류가 특별히 이에 한정되는 것은 아니다. 아울러 이들 인삼은 단독으로 또는 이들을 2종 이상 조합하여 사용할 수도 있다.

상기 인삼 추출물은 인삼을 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이들의 혼합용액을 용매로 하여 추출할 수 있으며, 상기 C1 내지 C4의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 인삼 추출물의 제조시 사용되는 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이들의 혼합용액은 인삼 사용 중량 기준 1~40배 부피(1kg 기준 1~40ℓ)를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 5~40배를 사용할 수 있고, 상기 과정은 1~4번까지 반복할 수 있다.

상기 인삼 추출물로부터 진세노사이드 Rd를 추출하기 위해서는 당분야의 통상적인 방법으로서 상기 인삼의 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이들의 혼합용액 추출물을 물에 녹인 후에 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 수포화부탄올 및 n-부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 용매를 사용하여 추가적으로 분획하거나, 또는, 상기 용매를 조합하여 순차적으로 분획한 다음, 컬럼크로마토그래피를 이용하여 정제할 수 있다. 또한, 상기 추출물 또는 이의 분획물의 추출시간은 특별히 제한되는 것은 아니나, 10분 내지 1일 이내에 추출하는 것이 바람직하며, 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.

한편, 상기 인삼 추출물은 상법에 따라, 유기용매(알코올, 에테르, 아세톤 등)에 의한 추출, 헥산과 물의 분배, 크로마토그래피에 의한 방법 등, 식물체 성분의 분리 추출에 이용되는 공지의 방법을 단독 또는 적합하게 조합한 방법을 이용하여 분획 또는 정제함으로서 진세노사이드 Rd를 얻을 수 있다. 상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), LH-20 컬럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 이온교환수지 크로마토그래피(ion exchange resin chromatography), 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 실리카겔 진공 액체 크로마토그래피(silica gel vacuum liquid chromatography) 및 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 중에서 선택될 수 있다.

또한, 상기 2공정에서는, 상기 1공정에서 분리 제조된 진세노사이드 Rd를 완전히 건조하여 측량 후 바이알에 담아 밀봉한다. 그러나, 상기 조건을 벗어나서 진세노사이드 Rd가 완전히 밀봉되지 않고 수분이 유입되는 경우, 20(S)-진세노사이드 Rg3 뿐만 아니라 20(R)-진세노사이드 Rg3가 동시에 생성되므로, 본 발명에서 대량생산하고자 하는 목적 진세노사이드인 20(S)-진세노사이드 Rg3의 생산량도 감소하며, 20(R)-진세노사이드 Rg3로 인해 20(S)-진세노사이드 Rg3의 분리 및 정제 과정이 용이하지 않아 바람직하지 않다.

상기 바이알은 멸균 냉동바이알(PP, Sterile vial)이나 원심분리기 튜브의 바이알이 적합하며, 유리재질은 가급적 피하도록 하고, 뚜껑은 실리콘링(silicone ring) 캡이나 오링(O-ring) 캡 혹은 테프론 라이너 캡 중에서 선택될 수 있다.

상기 3공정의 고온 고압 처리는 2~12시간 동안, 110~140℃의 온도범위 및 0.11~0.16㎫의 압력 조건으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2~6시간 동안, 110~130℃의 온도범위 및 0.12~0.14㎫의 압력 조건으로 수행할 수 있다. 그러나, 상기 조건을 벗어나서, 고온 고압 처리시간이 2시간 미만이거나 또는 압력이 0.11㎫ 미만이거나 또는 온도가 110℃ 미만인 조건으로 20(S)-진세노사이드 Rg3를 제조하는 경우, 특이 진세노사이드로 전환되지 않고 남아있는 진세노사이드 Rd로 인해, 20(S)-진세노사이드 Rg3를 얻는 수율이 현저하게 저하되어 경제적이지 않으므로 바람직하지 않다. 또한, 상기 고온 고압 처리 시간이 12시간을 초과하거나 또는 압력이 0.16㎫의 압력 조건을 초과하거나 또는 온도가 140℃를 초과하는 경우, 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3로 전환되는 전환율을 증가시키는 효과 상승 폭이 크지 않고, 오히려 감소할 수 있어, 제조비용의 손실이 유도되므로 바람직하지 않다.

또한, 상기 4공정에 있어서, 상기 크로마토그래피로는 역상 컬럼 크로마토그래피(C18) 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하는 것이 바람직하며, 상기 크로마토그래피를 통해 정제된 20(S)-진세노사이드 Rg3는 바람직하게는 순도 90% 이상, 보다 바람직하게는 90~99%, 가장 바람직하게는 95~99%의 순도를 가질 수 있다.

도 1은 실시예 1-1 내지 1-3의 조건으로 진세노사이드 Rd를 고온 고압 처리하는 경우, 진세노사이드 Rd로부터 진세노사이드 20(S)-진세노사이드 Rg3로의 전환에 대한 HPLC 분석 결과이다.
도 2는 비교예 1-1, 2-1, 3-1, 3-2 및 4의 조건으로 진세노사이드 Rd를 고온 고압 처리하는 경우, 진세노사이드 Rd로부터 진세노사이드 20(S)-진세노사이드 Rg3로의 전환에 대한 HPLC 분석 결과이다.

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.

< 실시예 1. 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3의 제조>

2015년 5월 금산에서 채취한 건조된 인삼잎 1㎏에 80%(v/v) 에탄올 수용액 10ℓ를 가하여 하루 동안 침출시킨 후, 3시간 동안 초음파 진탕을 실시하고, 여과하였다. 여과 후 잔여 인삼잎은 80%(v/v) 에탄올 8ℓ를 더한 다음 침출 및 초음파 진탕 과정을 2회 더 반복하였으며, 상기 과정에서 획득한 여액을 모두 합한 후, 감압 농축하여 에탄올 추출물 427g을 얻었다. 이후, 상기 에탄올 추출물을 초음파 진탕하여 3ℓ의 물에 완전히 녹인 다음, 2ℓ의 디에틸에테르를 더하여 실온에서 2일간 교반하였다. 교반이 끝난 후, 용액을 분액깔때기로 옮겨 디에틸에테르 층은 제거하고 남은 물층에 5ℓ의 수포화 부탄올을 가하여 교반기에서 2일간 교반하였다. 교반이 끝난 용액을 분액깔때기로 옮겨 하루 이상 층 분리를 한 후, 부탄올 층만 모아 감압 농축하여 부탄올 추출물 162g을 얻었다. 이후, 상기 부탄올 분획물 162g을 메탄올에 녹인 뒤, 실리카겔(250~400mesh) 500g과 혼합 반죽하고, 감압 농축하여 고운 파우더로 제조하였다. 또한, 실리카겔을 클로로포름에 반죽하여 12×50㎝의 오픈 컬럼에 부은 다음, 25㎝ 높이까지 채우고 위에 씨샌드(sea sand : 실리카겔과 반죽한 물질들이 용매와 섞이지 않고 충진되어 있는 상태로 분리할 때 사용)를 2㎝ 올려준 다음, 상기 제조된 파우더를 올려주었다. 분액깔때기에서 클로로포름:메탄올:물을 10:2:0.2(1500㎖:300㎖:30㎖)의 비율로 혼합한 후 하층을 받아, 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 위한 전개 용매로 사용하여 분리정제 함으로써 진세노사이드 Rd가 다량 포함된 컬럼분획을 얻을 수 있었고, 이를 감압농축 하였다. 상기 진세노사이드 Rd가 포함된 컬럼분획을 C18 역상 컬럼크로마토그래피를 수행하였으며, 40%(v/v) 메탄올 수용액으로 반죽한 C18 역상 충진제를 3.5×60㎝ 플래쉬 컬럼에 높이 30㎝까지 채워준 후, 여기에 진세노사이드 Rd 컬럼분획을 90%(v/v) 메탄올 수용액에 녹여 로딩한 다음 전개 용매는 메탄올:물을 1:1(v:v)에서 2:1(v:v), 3:1(v:v) 조건으로 변화시켜 가며 분리 정제하였다. 상기 과정을 통해 최종적으로 11.5g의 순수한 진세노사이드 Rd를 얻을 수 있었다.

상기 과정에서 얻은 진세노사이드 Rd 10㎎을 정확히 취하여 2㎖의 멸균 냉동 바이알(Cryogenic Sterile vial)에 넣은 시료를 각각 5개 준비하고, 뚜껑(Screw Stopper & silicone ring)을 닫은 다음, 125㎖ 광구병에 담았다. 이후, 상기 광구병을 멸균기(SANYO autoclave, MLS-3780 model)에 넣고, 120℃, 0.13~0.15Mpa의 압력 하에서 2시간 동안 증숙하였으며, 2시간 후, 5개의 시료 중 1개의 시료만 꺼낸 뒤, 나머지는 동일한 온도와 압력 조건에서 추가 증숙을 진행하였다. 상기 과정을 반복함으로서 시간(2시간, 4시간, 6시간, 8시간 및 10시간)에 따른 증숙물을 얻었으며, 각 증숙물은 HPLC분석을 실시하여, 진세노사이드 Rd, Rg3-S, Rg3-R의 함량을 표 2에 나타내었다.

< 비교예 1. 비교대상 20(S)-진세노사이드 Rg3의 제조①>

상기 실시예 1에서 얻은 진세노사이드 Rd 중, 10㎎을 정확히 취하여 2㎖의 멸균 냉동 바이알(Cryogenic Sterile vial)에 넣은 시료를 각각 5개 준비하고, 뚜껑(Screw Stopper & silicone ring)이 아닌 은박호일로 상반부를 감싸주었다. 이후, 상기 5개의 시료를 125㎖ 광구병에 담고, 내부에 증류수 5㎖를 추가한 다음, 멸균기에 넣고 120℃, 0.13~0.15Mpa의 압력 하에서 2시간 동안 증숙하였다. 2시간 후, 5개의 시료 중 1개의 시료만 꺼낸 뒤, 나머지는 동일한 온도와 압력 조건에서 추가 증숙을 진행하였다. 상기 과정을 반복함으로서 시간(2시간, 4시간, 6시간, 8시간 및 10시간)에 따른 증숙물을 얻었으며, 각 증숙물은 HPLC분석을 실시하여, 표 2의 비교예 1-1 내지 1-5로 나타내었다.

< 비교예 2. 비교대상 20(S)-진세노사이드 Rg3의 제조②>

상기 실시예 1에서 얻은 진세노사이드 Rd 중, 10㎎을 정확히 취하여 2㎖의 멸균 냉동 바이알(Cryogenic Sterile vial)에 넣은 시료를 각각 5개 준비하고 25㎕의 증류수를 더한 다음, 은박호일로 상반부를 감싸주었다. 이후, 상기 5개의 시료를 125㎖ 광구병에 담고, 내부에 증류수 5㎖를 추가한 다음, 멸균기에 넣고 120℃, 0.13~0.15Mpa의 압력 하에서 2시간 동안 증숙하였다. 2시간 후, 5개의 시료 중 1개의 시료만 꺼낸 뒤, 나머지는 동일한 온도와 압력 조건에서 추가 증숙을 진행하였다. 상기 과정을 반복함으로서 시간(2시간, 4시간, 6시간, 8시간 및 10시간)에 따른 증숙물을 얻었으며, 각 증숙물은 HPLC분석을 실시하여, 표 2의 비교예 2-1 내지 2-5로 나타내었다.

< 비교예 3. 비교대상 20(S)-진세노사이드 Rg3의 제조③>

상기 실시예 1에서 얻은 진세노사이드 Rd 중, 10㎎을 정확히 취하여 2㎖의 멸균 냉동 바이알(Cryogenic Sterile vial)에 넣은 시료를 각각 2개 준비하고 뚜껑(Screw Stopper & silicone ring)을 닫아주었으며, 이를 125㎖ 광구병에 담았다. 이후, 상기 광구병을 멸균기에 넣은 다음, 100℃ 또는 150℃의 온도 조건 하에서 0.13~0.15Mpa의 압력으로 6시간 동안 증숙하여 온도(100℃ 또는 150℃)에 따른 증숙물을 얻었으며, 각 증숙물은 HPLC분석을 실시하여, 표 2의 비교예 3-1 및 3-2로 나타내었다.

< 비교예 4. 비교대상 20(S)-진세노사이드 Rg3의 제조④>

상기 실시예 1에서 얻은 진세노사이드 Rd 중, 10㎎을 정확히 취하여 2㎖의 멸균 냉동 바이알(Cryogenic Sterile vial)에 넣은 시료를 준비하고 시판용 사과식초를 25㎕ 더한 다음, 은박호일로 상반부를 감싸주었다. 이후, 상기 시료를 125㎖ 광구병에 담고, 내부에 증류수 5㎖를 추가한 다음, 멸균기에 넣고 120℃, 0.13~0.15Mpa의 압력 하에서 2시간 동안 증숙하였다. 상기 증숙물은 HPLC분석을 통해 20(S)-진세노사이드 Rg3의 함량을 확인하여 표 2의 비교예 4에 나타내었다.

< 실시예 1. 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3로의 전환 확인>

진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3의 생성량 변화를 측정하기 위해, 상기 실시예 1에서 얻은 증숙 시간별 혼합물인 실시예 1-1 내지 1-5 및 비교예 1 내지 비교예 4를 각각 감압농축함으로서, 증숙과정을 통해 포함된 소량의 물을 제거하였고, 각각의 샘플을 1㎎씩 취하여 HPLC용 메탄올 1㎖에 녹인 후 0.50㎛ 필터로 여과한 여액을 하기 표 1을 참고하여 HPLC 분석을 실시하였다.

	HPLC 수행 조건
컬럼	ACE 5-C₁₈ (250×4.6㎜)
유량(Flow rate)	1.0㎖/min
디텍터(Detector)	UV detector, 205㎚
용매(Solvent)	A; H₂O, B; CH₃CN 0~35분(20% B), 35~85분(40%B), 85~105분(50%B), 105~135분(65% B), 135~145분(85% B), 145~155분(100% B), 155~160분(100% B), 160~163분(20% B), 163~165분(20% B)
온도	40℃

조건		진세노사이드(㎎/㎎)
조건		Rd	Rg3-S	Rg3-R	total
실시예 1-1	건조 증숙, 120℃, 2시간	0.322	0.310	0.011	0.643
실시예 1-2	건조 증숙, 120℃, 4시간	0	0.347	0.012	0.359
실시예 1-3	건조 증숙, 120℃, 6시간	0	0.364	0.016	0.380
실시예 1-4	건조 증숙, 120℃, 8시간	0	0.362	0.010	0.372
실시예 1-5	건조 증숙, 120℃, 10시간	0	0.359	0.017	0.376
비교예 1-1	캡오픈, 120℃, 2시간	0.266	0.212	0.090	0.568
비교예 1-2	캡오픈, 120℃, 4시간	0.231	0.228	0.111	0.570
비교예 1-3	캡오픈, 120℃, 6시간	0.213	0.264	0.127	0.604
비교예 1-4	캡오픈, 120℃, 8시간	0.145	0.251	0.111	0.507
비교예 1-5	캡오픈, 120℃, 10시간	0.010	0.218	0.163	0.391
비교예 2-1	증류수 첨가, 120℃, 2시간	0.318	0.153	0.162	0.633
비교예 2-2	증류수 첨가, 120℃, 4시간	0.162	0.261	0.212	0.635
비교예 2-3	증류수 첨가, 120℃, 6시간	0.112	0.278	0.181	0.571
비교예 2-4	증류수 첨가, 120℃, 8시간	0	0.265	0.208	0.473
비교예 2-5	증류수 첨가, 120℃, 10시간	0	0.246	0.241	0.487
비교예 3-1	건조 증숙, 100℃, 6시간	0.158	0.132	0.084	0.374
비교예 3-2	건조 증숙, 150℃, 6시간	0	0.218	0.075	0.293
비교예 4	산 첨가, 120℃, 2시간	0	0.268	0.136	0.404

도 1, 2 및 표 2를 참고하면, 진세노사이드 Rd를 외부 수분의 접촉을 차단한 건조상태에서 고온 고압으로 처리한 실시예 1-1 내지 1-5의 경우, 대부분의 진세노사이드 Rd는 가수분해되어 남아있는 양이 거의 없었으며, 진세노사이드 Rd 1㎎ 기준, 20(S)-진세노사이드 Rg3가 0.3~0.4㎎이 생성되는 것을 확인 할 수 있었다. 또한, 입체이성질체인 R/S-진세노사이드 Rg3의 경우, 20(S)-진세노사이드 Rg3가 20(R)-진세노사이드 Rg3에 비해 약 30배 더 많은 생성량을 나타내어, 20(S)-진세노사이드 Rg3이 선택적으로 대량 생성됨을 확인할 수 있었다.

그러나, 본 발명과는 다르게 수분이 접촉된 상태에서 고온 고압으로 처리한 비교예 1-1 내지 1-5, 비교예 2-1 내지 2-5 및 건조상태이나 본 발명과는 다르게 고온 고압으로 처리하는 온도가 110~140℃를 벗어나는 비교예 3-1 및 3-2의 경우, 20(S)-진세노사이드 Rg3가 20(R)-진세노사이드 Rg3에 비해 약 1~3배 더 많은 생성량을 나타내어, 20(S)-진세노사이드 Rg3만을 선택적으로 대량 생성하는 본 발명의 실시예에 비해 그 생성량이 현저하게 낮은 것임을 확인할 수 있었다.

또한, 건조상태에서 고온 고압으로 처리하지 않고 유기산을 첨가한 비교예 4의 경우에도, 20(S)-진세노사이드 Rg3가 선택적으로 대량 생성되는 본 발명의 실시예에 비해 현저하게 낮은 생성량을 갖는 것임을 확인할 수 있었고, 상기 표 2에는 나타내지 않았으나 유기산의 첨가 후 고온 고압으로 처리하는 시간이 2시간을 초과하는 경우에도, 20(S)-진세노사이드 Rg3의 생성량은 비교예 4의 결과와 유사하였다.

따라서, 본 발명과 같이 진세노사이드 Rd를 외부 수분의 접촉을 차단한 건조상태에서 고온 고압으로 처리하는 방법이, 20(S)-진세노사이드 Rg3를 대량으로 제조하는데 용이한 방법임을 알 수 있었다.

Claims

(1공정) 인삼으로부터 진세노사이드 Rd를 분리 제조하는 단계;
(2공정) 1공정에서 분리 제조된 진세노사이드 Rd를 건조하여 밀봉 처리하는 단계;
(3공정) 2공정에서 처리한 진세노사이드 Rd를 2~12시간 동안, 110~140℃의 온도범위 및 0.11~0.16㎫의 압력 조건으로 고온 고압 처리하는 단계; 및
(4공정) 3공정에서 고온 고압 처리된 진세노사이드 혼합물을 크로마토그래피하여 20(S)-진세노사이드 Rg3를 분리 제조하는 단계;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3를 제조하는 방법.
삭제
제1항에 있어서,
상기 4공정의 진세노사이드 혼합물을 크로마토그래피하여 순도 90% 이상의 20(S)-진세노사이드 Rg3를 얻는 것을 특징으로 하는 진세노사이드 Rd로부터 20(S)-진세노사이드 Rg3를 제조하는 방법.