KR101891868B1 - 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합 조성물, 이를 포함하는 천연 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합 조성물, 이를 포함하는 천연 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차, 울금 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연복합 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 천연복합 조성물은 항산화 활성이 우수하고 일산화 질소 저해활성이 우수하며, 모든 농도에서 세포의 생존율에 영향을 미치지 않으므로, 부작용이 없고, 항산화, 항염증, 피부안전성이 우수하므로 천연 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

피부노화 방지 및 항염증용 천연복합 조성물, 이를 포함하는 천연 화장료 조성물 {Natural complex extract composition for preventing skin aging and anti-inflammatory, natural cosmetic composition comprising that}

본 발명은 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합 조성물, 이를 포함하는 천연 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차, 울금 추출물을 포함하는 천연 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근 생활환경과 식생활의 변화 등으로 각종 성인병 및 노화에 관여하는 활성산소에 대한 관심이 증가하고 있다. 인체 내에는 안정한 상태의 산소가 생화학적 기전에 의하여 초과산화물 음이온기 라디칼(superoxide anion radical), 과산화수소 라디칼(hydrogen peroxide radical), 일중항산소(singlet oxygen)와 같은 반응성이 큰 활성산소(reactive oxygen species)로 전환된다(Kwon, G. J., D. S. Choi, and M. H. Wang. 2007. Biological activities of hot water extracts from euonymus alatus leaf. Korean J. Food Sci. Technol. 39, 569-574.).

생체 내 정상적인 세포내 활성작용 과정에서 생성되거나 환경오염, 화학물질의 노출 등에 의해 생성되는 슈퍼옥사이드라디칼(superoxide radical anion, O2-·), 과산화수소(hydrogen peroxide, H2O2), 하이드록시 라디칼(hydroxylradicals, ·OH) 등을 활성 산소종(reactiveoxygen species, ROS)이라 한다. 활성 산소는 자유 라디칼(free radical)을 가진 산소를 의미하며 불안정한 성격을 가지고 있으며, 주위의 물질과 반응성이 강해 세포의 산화적 스트레스를 유발하는 것으로 알려져 있다(Kim, Y. C., Hong, H. D., Rho, J. H., Cho, C. W., Rhee, Y. K. and Yim, J. H. 2007. Changes of phenolic acid contents and radical scavenging activities of ginseng according to steaming times. J Ginseng Res 31, 230-236.). 초과산화물 음이온기 라디칼, 과산화수소 라디칼, 일중항산소 등의 활성산소는 생체 내에서 산화를 촉진시키며 인지질의 불포화지방산의 과산화반응을 일으켜 세포막의 투과성을 항진시키고, 세포독성을 초래하여 노화, 염증 및 각종 질환의 병리현상을 유도한다(Meneghini, R., Martins, E. A. L. and Calderaro, M. 1993. DNA damage by reactive oxygen species : The role of metal. pp. 102-112, In: Free Radicals : From Basic Science to Medicine : Molecular and cell biology updates. In Poli, G., Albano, E. and Dianzani, M. U. (eds.), Birkhauser Verlag. Basel, Switzerland.). 현재 활성산소의 산화적 촉진으로부터 세포를 보호하는 천연소재 및 염증에 관여한 단백질 발현을 조절하여 생체를 보호할 수 있는 소재에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다.

승마 추출물은 화장품 약리활성 실험을 통해, in vitro에서 항산화능이 우수하고, 세포 모델 실험에서 항염증효과가 있는 것으로 확인되었으나, 그 활성이 두드러지게 주목되지 않았다. 따라서, 승마 추출물에 다른 추출물을 혼합하는 연구가 많이 이루어지고 있다. 예를 들어, 대한민국 공개특허 제10-2014-0145278호에서는 피부 수렴 및 탄력효과를 갖는 승마추출물, 산수유 추출물 및 현초 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하고 있으며, 대한민국 등록특허 제10-1047644호에서는 포공영, 승마, 산약 또는 고본 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물을 제공하고 있다.

대한민국 공개특허공보 제10-2014-0145278호 대한민국 등록특허공보 제10-1047644호

Kim, Y. C., Hong, H. D., Rho, J. H., Cho, C. W., Rhee, Y. K. and Yim, J. H. 2007. Changes of phenolic acid contents and radical scavenging activities of ginseng according to steaming times. J Ginseng Res 31, 230-236. Valko, M., D. Leibfritz, J. Moncol, M. Cronin, M. Mazur, and J. Telser. 2007. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J. Biochem. Cell Biol. 39, 44-84.

본 발명자들은 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차, 울금 추출물 총 6가지의 천연 소재를 복합하여 더 우수한 항산화, 항염증활성을 토대로 천연복합 조성물로써의 적합함을 제시하고, 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차, 울금 추출물을 유효성분으로 하는 천연 화장료 조성물의 안정성 및 안전성을 검증함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차, 울금 추출물을 유효성분으로 하는 천연 화장료 조성물을 제공함에 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차 및 울금을 포함하는 천연복합 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 천연복합 조성물은 조성물 총 중량에 대하여, 승마 10 내지 30중량%, 블루베리 10 내지 30중량%, 감초 10 내지 30중량%, 지초 10 내지 20중량%, 우롱차 10 내지 20중량% 및 울금 10 내지 20중량%을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 천연복합 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 상기 천연복합 조성물을 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 20중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스. 미스트, 선크림, 샴푸, 클렌저, 파우더, 헤어토닉 및 마스크팩으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 피부노화 방지 또는 항염증용일 수 있다.

또한, 본 발명은 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차 및 울금을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계(S1); 상기 혼합물을 용매로 추출하는 단계(S2); 및 여과 및 농축하는 단계(S3);를 포함하는 천연복합 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 S1 단계에서, 혼합물은 승마 10 내지 30중량%, 블루베리 10 내지 30중량%, 감초 10 내지 30중량%, 지초 10 내지 20중량%, 우롱차 10 내지 20중량% 및 울금 10 내지 20중량%을 혼합할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 S2 단계에서, 상기 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매일 수 있다.

본 발명에 따른 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차, 울금 추출물은 항산화능이 우수하고 일산화 질소(nitric oxide) 저해활성이 우수하며, 모든 농도에서 세포의 생존율에 영향을 미치지 않으므로, 부작용이 없으면서, 항산화, 항염증, 피부안전성이 우수하므로, 천연 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합물 조성물의 전자공여능을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합물 조성물의 과산화수소 소거능을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합물 조성물의 세포독성을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합물 조성물의 대식세포(macrophage) RAW 264.7 세포에서 일산화 질소 생성 저해능을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 피부노화 방지 및 항염증용 천연복합물 조성물의 대식세포 RAW 264.7 세포에서 웨스턴 블롯 분석(western blot analysis)에 의한 iNOS, COX-2 발현량 측정한 결과를 나타낸 것이다.

본 발명은 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차 및 울금을 포함하는 천연복합 조성물 및 상기 천연복합 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 천연복합 조성물은 조성물 총 중량에 대하여, 승마 10 내지 30중량%, 블루베리 10 내지 30중량%, 감초 10 내지 30중량%, 지초 10 내지 20중량%, 우롱차 10 내지 20중량% 및 울금 10 내지 20중량%을 포함하는 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

상기 승마는 여러해살이 풀로 높이 약 1m이며 주요성분은 페놀카르본산류인 페룰산(ferulic acid), 이소페룰산(isoferulic acid), 시미틴(cimitin), cimicifugine, 살리실산(salicylic acid), 카페산(caffeic acid) 등이 함유되어있으며, 승양, 발표, 투진, 해독의 효능이 있다. 본 발명에서 승마는, 혼합되는 조성물의 전체 건조 중량 대비 10 내지 30중량%로 혼합되는 것이 바람직하며, 10중량% 미만으로 혼합되면 효과가 거의 나타나지 않으며, 30중량% 초과로 혼합되면 제품의 변색 및 점도 저하 등의 물성 문제가 발생한다.

상기 블루베리는 블루베리의 열매에서 추출한 것으로, 안토시아닌, 페놀, 기타 플라보노이드와 같은 피토케미칼 등의 성분이 함유되어 있어 피부의 산화적 손상을 예방한다. 본 발명에서 블루베리는, 혼합되는 조성물의 전체 건조 중량 대비 10 내지 30중량%로 혼합되는 것이 바람직하며, 10중량% 미만으로 혼합되면 효과가 거의 나타나지 않으며, 30중량% 초과로 혼합되면 제품의 변색 및 점도 저하 등의 물성 문제가 발생한다.

상기 감초는 비타민 A, B를 비롯한 비타민 C가 풍부하며 여드름, 습진에 효과가 있으며, 미백효과 및 피부 진정효과도 가지고 있다. 본 발명에서 감초는 혼합되는 조성물의 전체 건조 중량 대비 10 내지 30중량%로 혼합되는 것이 바람직하며, 10중량% 미만으로 혼합되면 효과가 거의 나타나지 않는 문제가 있으며, 30중량% 초과로 혼합되면 제품의 변색 및 점도 저하 등의 물성 문제가 발생한다.

상기 지초는 영지버섯이라고도 불리어지며, 항암효과가 뛰어나고 성인병 예방에 효과가 뛰어나다. 본 발명에서 지초는 혼합되는 조성물의 전체 건조 중량 대비 10 내지 20중량%로 혼합되는 것이 바람직하며, 10중량% 미만으로 혼합되면 효과가 거의 나타나지 않는 문제가 있으며, 20중량% 초과로 혼합되면 제품의 변색 및 점도 저하 등의 물성 문제가 발생한다.

상기 우롱차는 지방대사 촉진을 통한 비만억제, 혈중 콜레스테롤 및 중성지방 억제, 아토피성 피부염 완화 등에 효과가 있다. 본 발명에서 우롱차는 혼합되는 조성물의 전체 건조 중량 대비 10 내지 20중량%로 혼합되는 것이 바람직하며, 10중량% 미만으로 혼합되면 효과가 거의 나타나지 않는 문제가 있으며, 20중량% 초과로 혼합되면 제품의 변색 및 점도 저하 등의 물성 문제가 발생한다.

상기 울금은 생강과에 속하는 다년생 초본식물로써, 주요성분은 커큐민으로, 항산화작용 및 피부색소 침착과 피부흑화현상을 억제하는 데에 효과가 있다. 본 발명에서 울금은 혼합되는 조성물의 전체 건조 중량 대비 10 내지 20중량%로 혼합되는 것이 바람직하며, 10중량% 미만으로 혼합되면 효과가 거의 나타나지 않는 문제가 있으며, 20중량% 초과로 혼합되면 제품의 변색 및 점도 저하 등의 물성 문제가 발생한다.

본 발명의 화장료 조성물에서 유효성분인 천연복합 조성물은,

승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차 및 울금을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계(S1); 상기 혼합물을 용매로 추출하는 단계(S2); 및 여과 및 농축하는 단계(S3);를 포함하여 제조된다.

상기 S1 단계에서, 상기 혼합물은 승마 10 내지 30중량%, 블루베리 10 내지 30중량%, 감초 10 내지 30중량%, 지초 10 내지 20중량%, 우롱차 10 내지 20중량% 및 울금 10 내지 20중량%을 혼합하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 S1 단계에서, 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차 및 울금은 물로 세척하고 건조한 후 세절하여 혼합하는 것이 바람직하다.

상기 S2 단계에서, 상기 혼합물에 8 내지 10배 부피의 물과 알코올의 혼합용매를 넣고 20 내지 25℃에서 20 내지 24시간 동안 용매 추출하는 것이 바람직하다. 상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올이 바람직하며, 본 발명에서는 에탄올이 가장 바람직하다. 이때, 탄소수 1 내지 4의 알코올과 물이 7:3의 부피비로 이루어지는 것이 바람직하다. 또한, 상기 에탄올 용매 추출은 3회 반복하여 추출하는 것이 바람직하다.

상기 S3 단계에서, 상기 여과는 상기 추출물을 여과지에 통과시켜 잔여물을 제거하는 것이 바람직하며, 상기 농축은 상기 여과된 추출물을 회전감압농축기를 이용하여 40 내지 45℃에서 6 내지 8시간 동안 농축하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 6종 추출물은 전자공여능 및 과산화수소 저해능이 우수하고 일산솨질소 저해활성이 우수하며, 모든 농도에서 세포의 생존율에 영향을 미치지 않으므로, 부작용이 없으면서, 항산화, 항염증이 우수하므로, 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 피부노화 방지 및 항염증 화장료 조성물은, 상기 화장료 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 20 중량%의 6종 추출물을 함유하여 제조될 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 10 중량%의 6종 추출물을 함유하여 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조된 화장품으로 이용될 수 있다. 유화제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 항염증 및 항산화 활성을 갖는 화장품으로 다양하게 이용될 수 있다. 예를 들어 스킨, 로션, 크림, 에센스. 미스트, 선크림, 샴푸, 클렌저, 파우더, 헤어토닉, 마스크팩 등이 있다.

이하, 본 발명은 실시예 및 실험예를 통하여 상세히 설명된다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 1] 천연복합 조성물의 제조

승마 100g, 블루베리 100g, 감초 100g, 지초 50g, 우롱차 100g, 울금 50g을 각각 물로 세척한 뒤 수분함량 10% 이하로 건조하였다. 상기 건조된 천연원료들을 각각 3 내지 5㎝의 크기로 세절한 후 이를 혼합하였다. 상기 혼합물에 10배 부피의 에탄올 수용액 (에탄올 : 물 = 7 : 3 부피비)을 첨가하여 25℃에서 24시간 동안 에탄올 추출하였다. 추출은 3회 반복하여 실시하였다. 상기 추출물을 여과지(Adventec No.e)에 통과시켜 잔여물을 제거한 후 회전감압농축기(HS-10P, Hanshin)를 이용하여 45℃에서 8시간 동안 농축하여 천연복합 조성물을 제조하였다.

[ 실험예 1] 항산화 효과 측정

상기 실시예 1의 천연복합 조성물의 항산화 효과를 알아보기 위하여, 전자공여능과 과산화수소 소거능을 측정하였다.

1. 전자공여능 측정

상기 실시예 1에서 제조한 천연복합 조성물의 전자공여능을 측정하였다. 대조군은 합성 항산화제인 부틸레이티드 하이드록시아니솔 (butylated hydroxyanisole; BHA)을 사용하였다. 상기 천연복합 조성물의 전자공여능(EDA, electon donating abilities)은 Blois 등의 방법(Blois, M. S. : Antioxidant determination by the use of a stable free radical. Nature, 181, 1190-1200, 1958)을 변형하여 다음과 같이 측정하였다. 일정 농도의 시료용액 100㎕에 0.2mM의 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 50㎕를 가하고 교반한 후 30분간 실온에서 반응하였으며, 이의 흡광도를 517㎚의 파장에서 측정하였다. 이의 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 천연복합 조성물은 대조군인 BHA와 유사한 항산화 활성을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 천연복합 조성물은 우수한 항산화 활성을 가지는 것으로 판단된다.

2. 과산화수소 소거능 측정

상기 실시예 1에서 제조한 천연복합 조성물의 과산화수소 소거능 (hydrogen peroxide scavenging activity)을 측정하였다. 대조군은 비타민 C(vitamin C)를 사용하였다. 상기 천연복합추출물의 과산화수소 저해활성능은 Jayaprakasha 등의 방법 (Jayaprakasha, G.K., Jaganmohan Rao, L., Sakariak, K.K. (2004). Antioxidant activities of flavidin in different in vitro moder system. Bioorganic & Medicinal Chemistry 12, 5141-5146)을 이용하여 다음과 같이 측정하였다. 일정 농도의 시료용액 500㎕에 PBS 500㎕와 40mM 과산화수소 500㎕를 가하여 37℃에서 10분간 반응시킨 후, 230㎚에서 측정하였다. 이의 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 천연복합 조성물은 대조군인 비타민 C와 유사한 항산화 활성을 나타내었으며, 우수한 과산화수소 소거능을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 천연복합 조성물은 우수한 항산화 활성을 가지는 것으로 판단된다.

[ 실험예 2] 세포 독성 평가

본 발명의 천연복합 조성물의 안정성을 검증하기 위하여 세포독성 평가시험을 진행하였다.

상기 실시예 1의 천연복합 조성물을 시료로 이용하였으며, 상기 시료가 Raw 264.7 세포에 미치는 영향은 Carmichael 등 (Carmichael, J., De. Graff, W. G., Gazdar, A. F., Minna, J. D. and Mitchell, J. B. : Evaluation of a tetrazolium based semiautomated colorimetric assay: assessment of chemosensitivity testing. Cancer Res., 47, 936-942, 1987)의 MTT 검색법을 통해 평가되었다. 96 웰 플레이트 (well plate)에 5x104 세포/웰 (cells/well)로 분주한 후, 80%의 밀집상태(confluency)에 도달할 때 원 배지를 제거하고 혈청이 제거된 최소영양배지(serum free EMEM)로 교체하였다. 12시간 동안 배양한 후, 시료를 농도별로 첨가하고 이산화탄소를 37.5%로 포함하는 배양기에서 배양하였다. 대조군은 첨가된 시료 대신 동량의 증류수를 첨가한 후 동일한 조건으로 배양시켰다. 여기에 5㎎/㎖ 농도로 제조한 MTT용액 0.02㎖를 첨가하였다. 4시간 후 상층액을 제거하고 각 웰(well) 당 DMSO와 에탄올을 1:1 (v/v 부피비)로 가하여 실온에서 30분간 반응시켰으며, ELISA 리더로 550㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이의 결과를 도 5에 나타내었다.

도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 천연복합 조성물은 대식세포의 생존율에 영향을 미치지 않았으며, 모든 농도에서 동일한 결과를 나타내었다. 따라서, 본 발명의 천연복합 조성물은 세포에 영향을 미치지 않으므로, 세포 독성이 없는 것으로 판단된다.

[ 실험예 3] 항염증 효과 측정

상기 실시예 1의 천연복합 조성물의 항염증 효과를 알아보기 위하여, 일산화 질소 저해 활성을 측정하였다. 염증을 일으키는 자극원은 리포폴리사카라이드 (Lipopolysccharide; LPS)를 사용하였다(대조군).

대식세포인 Raw 264.7 세포로부터 생성된 일산화 질소의 양은 Byun 등의 방법 (Byun, S. H., Yang, C. H. and Kim, S. C. : Inhibitory effect of Scrophulariae Radix extract on TNF-a, IL-1, IL-6 and NO production in lipopolysaccharide-activated mouse macrophage Raw 264.7 cells. Kor. J. Ori. Herbology., 20, 7-16, 2005)에 준하여 다음과 같이 측정하였다. 세포 배양액 중에 존재하는 아질산이온(NO2-)을 Griess 시약을 이용하여 측정하였다. 세포배양 상등액 100㎕와 griess 시약 100㎕를 혼합하여 10분 동안 반응시킨 후 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. 아질산이온(NO2-)의 양은 아질산나트륨(NaNO2)의 표준곡선을 이용하여 정량하였다. 이의 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타난 바와 같이, 본 발명의 천연복합 조성물은 우수한 일산화 질소 저해활성을 나타내었으며, 천연복합 조성물의 함량을 증가시킬수록 더 우수한 일산화 질소 저해활성을 나타내었다. 따라서 본 발명의 천연복합 조성물은 우수한 항염증 효과를 가지는 것으로 판단된다.

[ 실험예 4] Western blot analysis에 의한 iNOS , COX-2 발현량 측정

웨스턴 블롯 분석에 의한 iNOS, COX-2 발현량 측정은 Towbin의 W웨스턴 블롯팅(Stirpe, F. and Corte, E. D. 1969. The regulation of rat liver xanthine oxidase. J. Biol. Chem. 244, 3855-3863.)을 이용하여 다음과 같이 측정하였다. 마우스 대식세포 RAW 264.7 세포에 리포폴리사카라이드(LPS)와 각 농도의 시료를 처리한 후 세포를 용해하여 15,000× g으로 15분간 원심분리 하여 단백질을 얻어 Bradford 방법 (Bradford, M. M. 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. Anal. Biochem. 72, 248-254.) 으로 정량 하였다. 얻어 진 단백질은 SDS-폴리아크릴아마이드 겔을 이용하여 전기영동 시킨 후, NC 막으로 이동(transfer) 하였다. iNOS, COX-2 다클론항체(polyclonal antibody)를 이용하여 막에 처리한 후 2차 항체를 가하여 ECL 탐지를 이용하여 iNOS, COX-2의 발현을 확인하였다.

[ 제제예 ] 본 발명의 천연복합 조성물을 함유하는 로션 제조

상기 실시예 2의 천연복합 조성물을 유효성분으로 함유하는 로션을 제조하였으며, 이의 제조기준은 하기 표 1에 나타내었다.

[ 비교제제예 ] 본 발명의 천연복합 조성물을 함유하지 않는 로션의 제조

본 발명의 천연복합 조성물을 함유하지 않는 로션을 제조하였으며, 이의 제조기준은 하기 표 1에 나타내었다.

성분 (중량%)	제제예	비교제제예
정제수	Top to 100	Top to 100
글리세릴 스테아레이트	1	1
벤닐알코올	0.7	0.7
스테아릭산	0.3	0.3
하이드로제네이티드 폴리데센	6	6
트리에칠헥사노인	5	5
디메치콘	2	2
소르비탄 올리베이트	0.8	0.8
프로필파라벤	0.1	0.1
글리세린	5.4	5.4
부틸렌 글라이콜	6	6
메틸파라벤	0.2	0.2
디소디움 이디티에이	0.02	0.02
히아루론산	0.5	0.5
베테인	0.1	0.1
나이아신아마이드	1	1
카보폴 941	0.12	0.12
트리에탄올아민	0.12	0.12
페녹시에탄올	0.2	0.2
천연복합 조성물	1	0

[ 실험예 5] 로션의 피부 자극도 평가

상기 제제예의 로션의 피부 자극도를 알아보기 위하여, 상기 로션을 핀 챔버(finn chamber)에 도포한 후, 팔 안쪽 부위에 수직으로 부착하고 24시간 후 육안으로 피부 반응을 관찰하였다. 피시험자는 20~40대의 성인남녀 20명을 대상으로 하였다. 시험결과는 국제 접촉피부염 연구위원회(International Contact Dermatitis Research Group)의 기준을 적용하여 평가하였으며 이의 평균값을 계산하였다. 이의 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

	시험 패치 수		24시간 경과 후
그룹	제제예	비교제제예	제제예	비교제제예
남성	20	20	-	-
여성	20	20	-	-
(- : 반응없음)

표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 천연복합 조성물을 함유하는 로션을 도포한 성인 남녀 각 20명은 모두 발진, 홍반 및 가려움 등의 피부 트러블이 전혀 일어나지 않아, 본 발명의 천연복합 조성물을 함유하는 로션의 피부 안전성이 검증되었다.

따라서, 본 발명의 천연복합 조성물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 피부 부작용이 전혀 없으며, 항산화, 항염증 및 피부진정 효과가 우수하여, 천연 화장료 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

Claims (9)

1. 승마, 블루베리, 감초, 지초, 우롱차 및 울금이 1:1:1:0.5:1:0.5의 중량비로 혼합된 천연복합 조성물을 포함하는 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물.
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4. 제1항에 있어서, 상기 천연복합 조성물은 상기 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 20 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스. 미스트, 선크림, 샴푸, 클렌저, 파우더, 헤어토닉 및 마스크팩으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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