KR101855900B1 - Setd1a의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Setd1a의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 인체 세포에서 히스톤(histone) H3 라이신 4번 위치를 메틸화 하는 효소 중 하나인 SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 SETD1A가 정상 유방 세포에 비해 유방암 세포에서 과발현 되어 있음을 확인하였고, 유방암 세포에서 에스트로겐 수용체로 유도되는 특이적인 유전자 발현을 조절하며, 세포 내 SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 유방암 세포주의 증식이 억제되며, 세포자살(apoptosis)이 현저하게 유도되고, 세포 이동(cell migration)이 감소됨을 확인하였으며, 타목시펜(tamoxifen)을 세포에 처리하고, SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 타목시펜 단독 처리시보다 암 세포의 증식 억제, 세포자살 유도, 및 세포 이동 억제 효과가 증가함을 확인하였고, 또한, 타목시펜 내성을 갖는 유방암 세포에서 SETD1A의 발현을 억제하였을 때, 세포 증식이 현저하게 억제됨을 확인하여, 본 발명의 SETD1A의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 조성물은 항암제 내성 유방암의 치료를 위해 유용하게 사용될 수 있다.

Description

SETD1A의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating anticancer drug resistant breast cancers comprising expression or activity inhibitor of SETD1A as an active ingredient}
본 발명은 인체 세포에서 히스톤(histone) H3 라이신 4번 위치를 메틸화 하는 효소 중 하나인 SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
유방암은 전세계적으로 여성에게 최다빈도로 발생하는 암 질환 중 하나이다. 임상적으로 유방암은 주요 유전자의 발현 유무에 따라 3개의 세부 그룹으로 분류되는데, 1) 에스트로겐 수용체(estrogen receptor, ER)를 발현하는 에스트로겐 수용체 양성(ER-positive), 2) HER2를 발현하는 HER2 양성(HER2-positive), 3) 그리고 에스트로겐 수용체, 프로제스테론 수용체(progesteron receptor, PR), HER2 세 가지의 유전자를 모두 발현하지 않는 삼중음성 유방암(triple-negative breast cancer)이 그것이다.
이들 3종류의 각기 다른 유방암 세포는 생물학적 동태가 현저하게 달라서 서로 다른 형태의 항암요법을 실시하며, 이에 대한 각각의 치료방법은 임상진료지침에 명시되어 있다(대한의학회 KOMGI Korean Medical Guideline Information Center 임상진료지침 정보센터 국내임상진료지침, National Comprehensive Cancer Network NCCN Practice Guidelines in Oncology).
예를 들어, 에스트로겐 신호 전달은 유방암 세포의 발달 및 증식에 결정적인 작용을 하고, 에스트로겐은 에스트로겐 수용체에 결합하고 활성화하여 세포 증식과 생존에 관련된 유전자의 발현을 유도하기 때문에(Clarke et al., 2003) 에스트로겐 수용체(ER) 양성인 유방암에 대해서는 타목시펜(tamoxifen)과 같은 호르몬 치료제가 오랫동안 사용되어 왔다. 임상적으로 전체 유방암환자의 약 70%가 에스트로겐 수용체 양성인 유방암인 것으로 보고되고 있다(Clark et al., 1984). 따라서 이들에 대한 유방암 치료는 에스트로겐의 양을 감소시키거나 또는 에스트로겐 수용체를 통하여 신호전달을 차단하는 것을 목표로 한다.
에스트로겐 수용체 활성화를 저해하는 약물들은 선택적 에스트로겐 수용체 모듈레이터(SERMs)에 속하며(Miller et al., 2007), 이 중 대표적으로 타목시펜이 에스트로겐 수용체 양성(ER-positive) 유방암의 우수한 치료제로 널리 사용되고 있는다.
반면에 에스트로겐 수용체를 발현하지 않는 에스트로겐 수용체 음성(ER-negative) 유방암 세포의 경우에는 호르몬 치료의 역할이 없기 때문에 타목시펜을 사용하지 못한다. 이때에는 HER2 유전자의 발현 유무를 관찰하는데 HER2 유전자가 과발현된 경우, 분자표적치료제인 트라스트주맙(trastuzumab)을 주로 사용한다. 트라스트주맙은 HER2를 경유하는 신호를 차단하는 단일클론 항체(monoclonal antibody)로서, 전이성 유방암에서 단일요법, 또는 다른 세포 독성 항암제와 병용하여 사용되고 있다.
마지막으로, 에스트로겐 수용체, 프로제스테론 수용체, HER2 이 세가지의 유전자를 모두 발현하지 않는 삼중음성 유방암(Triple-negative breast cancer, TNBC)은 앞서 설명된 약물표적 분자가 없기 때문에 독소루비신(doxorubicin), 파클리탁셀(paclitaxel) 등의 세포독성 항암제를 사용하고 있다(Nabholtz et al., 2003; Piccart-Gebhart et al., 2008; Sledge et al., 2003).
그러나, 항암제 등을 이용한 암치료에 있어서 항암제 내성 세포의 발생은 큰 장애가 된다. 대부분의 암세포들은 유전자 변이 억제와 관련된 기능이 이미 상실된 상태에 있으므로, 하나의 암 덩어리 안에 있는 세포들 각각도 다양한 유전자발현 패턴을 가지게 된다. 결국 항암제를 이용한 화학적 치료시 대부분의 경우 유전적 다양성으로 인한 항암제 내성을 가진 세포가 선별적으로 살아남게 되며, 살아남은 항암제 내성 세포가 증식을 거듭하여 결국 대부분의 암 덩어리의 세포가 항암제 내성을 가지게 된다. 유전적 다양성 내지 돌연변이로 인한 항암제 내성 외에도, 환자의 부작용이 너무 심하여 충분한 양의 항암제를 투여하지 못한 경우, 경구 투여시 약물 흡수가 비정상적으로 저하된 경우, 또는 생리학적으로 혈관과 암조직 사이에 세포로 이루어진 장벽이 있어 제대로 약물이 침투하지 못한 경우 등에도 항암제 내성 현상을 보일 수 있다.
전술한 바와 같이 전체 유방암환자의 약 70%에 이르는 에스트로겐 수용체 양성 유방암에 타목시펜 등과 같은 항호르몬 요법이 오랫동안 사용되어 왔으나, ER 양성 유방암 말기 환자의 약 50%는 처음부터 타목시펜에 반응하지 않으며(de novo resistance), 반응을 보이는 유방암의 상당 비율은 일정기간 후 타목시펜에 내성을 획득(acquired resistance)하게 된다(Gradishar, 2004; Ring and Dowsett, 2004). 또한 다수의 보고에 따르면 타목시펜의 장기 투약시 자궁내막암 발생율이 급격히 증가한다고 알려져 타목시펜의 사용에 제한이 있는 실정이다(Assikis and Jordan, 1995; Assikis et al., 1996; Nishimura et al., 2001).
SETD1A(SET domain containing 1A)는 히스톤 메틸화효소(histone methyltransferase) 중의 하나로 특히 histone H3 Lys4 잔기를 선택적으로 메틸화하는 효소이다. 최근 SETD1A 유전자가 정신분열증의 발병 위험을 높일 수 있음이 보고되었고(Takata, Atsushi, et al. 2014), B 세포의 발달에 역할을 함이 알려져 있으며(Tusi, Betsabeh Khoramian, et al. 2015), 유방암의 전이를 촉진함에 대해서 보고된 바 있으나((Salz et al., 2015), 전체 유방암의 70% 이상에 해당하는 에스트로겐 수용체 양성 유방암 세포에서 항암제 내성을 갖는 유방암에 대한 SETD1A의 임상적 중요성에 대해서는 알려진 바가 없다.
이에, 본 연구자는 항암제 내성을 갖는 유방암의 치료 방법을 찾고자 노력하던 중, SETD1A가 정상 유방세포에 비해 유방암 세포에서 과발현되어있고, 유방암세포에서 에스트로겐 수용체로 유도되는 특이적인 유전자 발현을 조절하며, 세포 내 SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 유방암 세포주의 증식이 억제되며, 세포자살(apoptosis)이 현저하게 유도되고, 세포 이동(cell migration)이 감소됨을 확인하였으며, 타목시펜(tamoxifen)을 세포에 처리하고, SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 타목시펜 단독 처리시보다 암 세포의 증식 억제, 세포자살 유도, 및 세포 이동 억제 효과가 증가함을 확인하였고, 타목시펜 내성을 갖는 유방암 세포에서 SETD1A의 발현을 억제하였을 때, 세포 증식이 현저하게 억제됨을 확인하여, 본 발명의 SETD1A의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 조성물은 항암제 내성 유방암의 치료를 위해 유용하게 사용될 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
아울러, 본 발명은
1) 항암제 내성 유방암 세포에 피검 물질을 처리하는 단계;
2) 상기 피검물질이 처리된 항암제 내성 유방암 세포의 SETD1A의 발현 또는 활성수준을 측정하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)에서 피검물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 SETD1A의 발현 또는 활성수준을 감소시킨 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 항암제 내성 유방암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명에서 SETD1A(SET domain containing 1A)가 정상 유방 세포에 비해 유방암 세포에서 과발현 되어 있음을 확인하였고, 유방암 세포에서 에스트로겐 수용체로 유도되는 특이적인 유전자 발현을 조절하며, 세포 내 SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 유방암 세포주의 증식이 억제되며, 세포자살(apoptosis)이 현저하게 유도되고, 세포 이동(cell migration)이 감소됨을 확인하였으며, 타목시펜(tamoxifen)을 세포에 처리하고, SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 타목시펜 단독 처리시보다 암 세포의 증식 억제, 세포자살 유도, 및 세포 이동 억제 효과가 증가함을 확인하였고, 타목시펜 내성을 갖는 유방암 세포에서 SETD1A의 발현을 억제하였을 때, 세포 증식이 현저하게 억제됨을 확인하여, 본 발명의 SETD1A의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 조성물은 항암제 내성 유방암 치료를 위해 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 SETD1A(SET domain containing 1A)에 선택적인 shRNA를 이용하여 세포 내 SETD1A 단백질 발현을 억제함을 나타낸 도이다.
도 2는 MCF-7 세포주에 에스트로겐 (E2) 처리로 유도된 TFF1, GREB1 및 MYC, PgR mRNA의 발현증가가 SETD1A이 knockdown된 세포주에서 현저히 억제됨을 보여주는 결과 이다.
도 3은 shRNA를 이용하여 MCF-7 유방암 세포주내의 SETD1A의 양을 감소시켰을 때 세포 증식이 유의성 있게 억제됨을 보여주는 결과이다.
도 4는 shRNA를 이용하여 MCF-7 유방암 세포주 내의 SETD1A의 양을 감소시켰을 때 apoptosis가 현저히 증가됨을 보여주는 결과이다.
도 5는 shRNA를 이용하여 MCF-7 유방암 세포주 내의 SETD1A의 양을 감소시켰을 때 MCF-7 유방암 세포주의 세포이동(cell migration)이 유의성 있게 감소됨을 나타낸 도이다.
도 6은 임상유전체 빅데이터 분석 결과 정상 유방조직에 비하여 전이성 유방암세포, 또는 소엽성 유방암세포에서 SETD1A의 발현이 유의성 있게 높음을 나타낸 도이다.
도 7은 타목시펜처리 또는 shSETD1A처리 각각의 경우에 비하여 타목시펜 처리와 shSETD1A처리를 함께한 경우에, MCF-7 유방암 세포주의 증식 억제능이 동반 상승효과를 보이며 유의적으로 증가함을 나타낸 도이다.
도 8은 타목시펜처리 또는 shSETD1A처리 각각의 경우에 비하여 타목시펜 처리와 shSETD1A처리를 함께한 경우에, MCF-7 유방암 세포주의 apoptosis 유도능이 동반 상승효과를 보이며 현저히 증가함을 나타낸 도이다.
도 9은 타목시펜처리 또는 shSETD1A처리 각각의 경우에 비하여 타목시펜 처리와 shSETD1A처리를 함께한 경우에, MCF-7 유방암 세포주의 세포이동 억제능이 상승효과를 보이며 유의적으로 증가함을 나타낸 도이다.
도 10은 타목시펜 내성 MCF-7 세포주(Tam-R)에 SETD1A를 knockdown으로 타목시펜 내성 MCF-7 세포주의 증식이 현저하게 억제됨을 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 SETD1A는 서열번호 13의 아미노산을 갖는 것을 특징으로 하고, 일반적 으로 알려진 SETD1A 유전자 또는 이의 가능한 모든 돌연변이 서열일 수 있다.
상기 SETD1A의 발현 또는 활성 억제제는 SETD1A 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
상기 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA는 내지 중 어 느 하나의 서열을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 동일한 활성을 갖는 한, 하나 또는 몇 개의 염기가 첨가, 결실, 치환되는 염기서열로 구성될 수 있고, SETD1A mRNA에 상보적으로 결합할 수 있는 모든 서열이 될 수 있다.
상기 siRNA는 상기 표적서열에 상동인 독립적인 센스 RNA 가닥 및 이에 상보적인 안티센스 RNA 가닥을 포함하거나 상기 센스 RNA 가닥 및 안티센스 RNA 가닥이 루프에 의해 연결된 스템-루프 구조의 단일 RNA 가닥일 수 있다.
더불어, 본 발명에 따른 siRNA에서, 센스 RNA 가닥 및/또는 안티센스 RNA가닥은 이의 당 부분, 뉴클레오베이스 부분 또는 인터뉴클레오타이드 구조 내에 최소한 1개의 화학적 변형을 포함하는 것이 가능하다. 이러한 변형은 생체 내에서 뉴클레아제에 의해 siRNA의 파괴를 저해하는 것을 가능하게 할 수 있다. 본 발명에 따른 siRNA의 안정성과 생적합성을 생체 내에서 향상시킬 수 있는 모든 화학적 변형이 본 발명의 범위에 포함된다. 당 부분에 대한 바람직한 변형 중에서, 언급될 수 있는 것은 2'-데옥시, 2'-플루오로, 2'-아미노, 2'-티오, 또는 2'-O- 알킬과 같은 리보오스의 포지션 2', 그리고 바람직하게는 리보뉴클레오타이드 상의 정상 2'-OH 그룹을 대체하는 2'-O-메틸 또는 LNA의 포지션 2' 및 4' 사이에 있는 메틸렌 브릿지의 존재에서 일어나는 변형이다. 뉴클레오베이스의 경우, 5-브로모-유리딘, 5-이오도-유리딘, N3-메틸-유리딘, 2,6-디아미노퓨린(DAP, 5-메틸-2'-데옥시시 티딘, 5-(1-프로피닐)-2'-데옥시-유리딘(pdU), 5-(1-프로피닐)-2'-데옥시시티딘(pdC)과 같은 변형된 염기 또는 콜레스테롤과 결합한 염기를 이용하는 것이 가능하다. 마지막으로, 인터뉴클레오타이드 골격의 바람직한 변형은 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 메틸포스포네이트, 포스포로디아미데이트 그룹에 의한 골격에 있는 포스포디에스터 그룹을 치환하는 것을 포함하거나, 펩타이드 결합에 의해 연결된 N-(2-아미노에틸)-글리신(PNA, 펩타이드 핵산)으로 구성되는 골격을 이용한다. 다양한 변형(염기, 당, 골격)은 몰포리노(morpholino) 타입의 변형된 핵산(몰포린 링에 고정되고 포스포로디아미데이트 그룹에 의해 연결된 염기) 또는 PNA(펩타이드 결합에 의해 연결된 N-(2-아미노에틸)-글리신 단위에 고정된 염기)에 결합될 수 있다.
본 발명에 따른 siRNA는 "분리된 것"이며, 이는 자연 상태에 있지 않은 것을 의미하지만 인간의 개입과 관련된 모든 수단에 의해 얻어질 수 있는 것을 의미한다. 특히, 본 발명에 따른 siRNA는 화학적 합성, 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의한 요구되는 뉴클레오타이드 서열의 증폭, 또는 재조합 합성에 의해 이미 존재하는 siRNA를 정제함으로써 얻어질 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상기 조성물의 총 중량에 대하여 본 발명의 SETD1A siRNA를 0.1 내지 99.9 중량%를 유효성분으로 함유하고, 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
또한, 상기 SETD1A의 발현 또는 활성 억제제는 SETD1A 단백질에 상보적으로 결합하는 펩티드, 펩티드 미메틱스, 기질유사체, 앱타머 및 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하고, 상기 항암제는 타목시펜(tamoxifen), 라록시펜(raloxifene), 토레미펜(toremifene). 클로미펜(clomiphene), 독소루비신(doxorubicin), 파클리탁셀(paclitaxel), 5-에프유(5-FU), 메쏘트렉세이트(Methotrexate) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것이 바람직하나, 타목시펜인 것이 더욱 바람직하다.
상기 SETD1A 단백질에 상보적으로 결합하는 앱타머(Aptamer)는 그 자체로 안정된 삼차구조를 가지면서 표적분 자에 높은 친화성과 특이성으로 결합할 수 있는 특징을 가진 단일가닥 핵산 (DNA, RNA 또는 변형핵산)이다. 앱타머는 SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment)라는 앱타머 발굴 기술이 처음 개발된 이후(Ellington, AD and Szostak, JW., Nature 346:818-822, 1990), 저분자 유기물, 펩타이드, 막 단백질까지 다양한 표적분자에 결합할 수 있는 많은 앱타머들이 계속해서 발굴되어 왔다. 앱타머는 고유의 높은 친화 성(보통 pM 수준)과 특이성으로 표적분자에 결합할 수 있다는 특성 때문에 자주 단일 항체와 비교가 되고, 특히 "화학 항체"라고 할 만큼 대체항체로서의 높은 가능성이 있다.
상기 SETD1A 단백질에 상보적으로 결합하는 항체는 SETD1A의 주입을 통해 제조된 것 또는 시판되어 구입한 것이 모두 사용 가능하다. 또한, 상기 항체는 다클론 항체, 단클론 항체 및 에피토프와 결합할 수 있는 단편 등을 포 함한다. 상기 다클론 항체는 SETD1A를 동물에 주사하고 해당 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 종래의 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 다클론 항체는 당업계에 알려진 어떠한 방법에 의해서든 정제될 수 있고, 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 만들어질 수 있다. 상기 단클론 항체는 연속 세포주의 배양을 통한 항체 분자의 생성을 제공하는 어떠한 기술을 사용하여도 제조할 수 있다. 이러한 기술로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 하이브리도마 기술, 사람 B-세포 하이브리도마 기술 및 EBV-하이브리도마 기술이 포함된다(Kohler G et al., Nature 256:495-497, 1975; Kozbor D et al., J Immunol Methods 81:31-42, 1985; Cote RJ et al., Proc Natl Acad Sci 80:2026-2030, 1983; 및 Cole SP et al., Mol Cell Biol 62:109-120, 1984). 또한, 상기 SETD1A에 대한 특정 결합 부위를 함유한 항체 단편이 제조될 수 있다. 예를 들면 이들로 한정되는 것은 아니지만 F(ab')2 단편은 항체 분자를 펩신으로 분해시켜 제조할 수 있으며, Fab 단편은 F(ab')2 단편의 디설파이드 브릿지를 환원시킴으로써 제조할 수 있다. 다른 방도로서, Fab 발현 라이브러리를 작게 하여 원하는 특이성을 갖는 단클론 Fab 단편을 신속하고 간편하게 동정할 수 있다 (Huse WD et al., Science 254: 1275-1281, 1989).
본 발명의 구체적인 실시예에서, SETD1A(SET domain containing 1A)가 정상 유방 세포에 비해 유방암 세포에서 과발현되어 있음을 확인하였고(도 6 참조), 유방암 세포에서 에스트로겐 수용체로 유도되는 특이적인 유전자 발현을 조절하며(도 2 참조), 세포 내 SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 유방암 세포주의 증식이 억제되며(도 3 참조), 세포자살(apoptosis)이 현저하게 유도되고(도 4 참조), 세포 이동(cell migration)이 감소됨을 확인하였으며(도 5 참조), 타목시펜(tamoxifen)을 세포에 처리하고, SETD1A의 발현을 감소시켰을 때, 타목시펜 단독 처리시보다 암 세포의 증식 억제, 세포자살 유도, 및 세포 이동 억제 효과가 증가함을 확인하였고(도 8 및 도 9 참조), 타목시펜 내성을 갖는 유방암 세포에서 SETD1A의 발현을 억제하였을 때, 세포 증식이 현저하게 억제됨을 확인하였다(도 10 참조).
따라서, 본 발명의 SETD1A의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 조성물은 항암제 내성 유방암 치료를 위해 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파 드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산 알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학 적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물은 본 발명에 따른 siRNA의 생적합성과 전달성을 향상시키는 것을 가능하게 하는 당업자에게 잘 알려진 모든 운반체를 추가로 포함할 수 있다. 특히, siRNA와 함께 사용될 수 있는 운반체는 세포막을 투과할 수 있는 리포좀 및 펩타이드("세포-투과성 펩타이드")를 포함한다.
즉, 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 PKM2의 발현 또는 활성 억제제에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose), 락토오스(Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또 한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이 트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배를 함유하거나 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투약량은 구체적으로 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다. 본 발명의 조성물의 유효용량은 0.0001 ~ 10 g/일 수 있고, 구체적으로 0.001 ~ 1 g/kg일 수 있으며, 하루 1 ~ 6회 투여될 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 항암제 내성 유방암의 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
아울러, 본 발명은
1) 항암제 내성 유방암 세포에 피검 물질을 처리하는 단계;
2) 상기 피검물질이 처리된 항암제 내성 유방암 세포의 SETD1A의 발현 또는 활성수준을 측정하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)에서 피검물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 SETD1A의 발현 또는 활성수준을 감소시킨 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 항암제 내성 유방암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
상기 단계 1)의 시료는 혈청, 혈장 및 혈액일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
상기 단계 2)의 SETD1A의 발현 수준 측정은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅, DNA 칩에 의한 mRNA 발현 수준 측정일 수 있으며, 또한 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, 방사선 면역분석, 방사 면역확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 웨스턴 블랏, ELISA(enzyme linked immunosorbentassay) 및 샌드위치 ELISA에 의한 단백질 발 현 수준 측정일 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 당업계에 알려진 모든 유전자 발현 수준 분석 방법일 수 있다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
단 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예 및 실험예에 의해서 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> MCF -7 유방암 세포주에서 SETD1A 의 발현 억제
SETD1A의 발현을 억제하기 위하여, 에스트로겐 수용체 양성 유방암 세포주인 MCF-7를 10% FBS를 함유한 DMEM 배지에서 배양하고, 렌티바이러스(lenti virus) 시스템(Sigma Aldrich 사, MISSION shRNA)을 이용하여 SETD1A를 표적하는 shRNA (shSETD1A) 또는 비 특이적 shRNA(shNS)으로 세포 내 SETD1A의 발현을 knockdown 시켰다. 사용한 shRNA의 염기서열은 표 1에 나타내었고, shSETD1A의 처리에 따른 세포내 SETD1A 단백질 발현의 감소는 SETD1A 선택적인 항체(Bethyl, USA)를 이용하여 웨스턴 블롯으로 분석하였다. ER 및 -actin(Thermo Scientific)은 내부 대조물질로 사용하였고, shRNA를 처리하지 않은 MCF-7(none)은 음성 대조군으로 사용하였다.
그 결과, shSETD1A 처리에 의해 MCF-7 세포 내 SETD1A 단백질 양이 현저히 감소되는 것을 관찰하여, SETD1A의 발현이 효과적으로 억제되었음을 확인하였다(도 1).
shRNA 서열
shNS CCGGCAACAAGATGAAGAGCACCAACTCGAGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTTT (서열번호 1)
shSETD1A CCGGCGGAAGAAGAAGCTCCGATTTCTCGAGAAATCGGAGCTTCTTCTTCCGTTTTTTG (서열번호 2)
< 실험예 1> SETD1A 의 유방암 관련 유전자 발현에 미치는 영향 확인
상기 <실시예 1>에서 제작한 SETD1A 발현 감소 세포주에서 에스트로겐(E2)에 의하여 유도되는 유방암 관련 유전자의 발현 변화를 확인하기 위하여, 상기 shNS 및 shSETD1A 세포를 FBS가 포함되고 phenol red가 결핍된 DMEM 배지에서 Charcoal-dextran를 처리하여 3일간 배양 한후, 에스트로겐(E2)에 의하여 유도되는 유방암 유전자, TFF1, GREB1, PgR 및 MYC 발현 변화를 측정하였다.
구체적으로, 상기 세포로부터 총 RNA는 Trizole reagent(Invitrogen)를 사용하여 세포로부터 분리하였으며, 상기 총 RNA를 Nanodrop(Thermo Scientific)을 이용하여 정량한 후, 0.5의 RNA를 이용하여 cDNA를 합성하였고, 이를 주형으로 하여 하기 표 2에 기재된 프라이머(primer) 및 실시간 유전자 증폭기 LC480(Roche)를 이용하여 증폭하였다(PCR 조건: 변성- 95, 10초, 프라이머 결합- 60, 10초, 신장- 72, 10초).
유전자 프라이머(forward) 프라이머(reverse)
18S GAGGATGAGGTGGAACGTGT (서열번호 3) TCTTCAGTCGCTCCAGGTCT (서열번호 4)
TFF1 GAACAAGGTGATCTGCG (서열번호 5) TGGTATTAGGATAGAAGCACCA (서열번호 6)
GREB1 CAAAGAATAACCTGTTGGCCCTGC (서열번호 7) GACATGCCTGCGCTCTCATACTTA (서열번호 8)
PgR GTGCCTATCCTGCCTCTCAATC (서열번호 9) CCCGCCGTCGTAACTTTCG (서열번호 10)
MYC CTCTCAACGACAGCAGCTCG (서열번호 11) CAACATCGATTTCTTCCTCATCTTC (서열번호 12)
이때, 18S에 대한 PCR 결과를 대조군으로 이용해, 유방암 유전자의 상대적 양을 보정하였다.
그 결과, SETD1A를 정상발현하는 대조구(shNS)에서 에스트로겐 (E2) 처리에 의해 TFF1, GREB1, MYC 및 PgR 유전자의 mRNA의 발현이 증가되었으나, shSETD1A 세포주에서는 발현이 감소되었음을 확인하였다.
< 실험예 2> SETD1A 가 유방암 세포 증식에 미치는 영향 확인
SETD1A가 유방암세포 증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 라이브 세포 이미지 시스템을 이용하여 측정하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>의 shNS 또는 shSETD1A가 도입된 MCF-7세포주를 각각 6 웰 플레이트에 3 104 세포/웰로 배양하면서 IncuCyteTM Life-Cell Imaging System (ESSEN BIOSCIENCE)을 이용하여 72시간 동안 세포증식 정도를 측정하였다. 측정한 결과는 상대적인 세포수(도 3좌) 및 사진(도 3우)으로 나타냈다.
그 결과, SETD1A의 발현이 억제된 세포주에서 유방암 세포의 성장이 유의하게 감소됨을 확인하였다.
<실험예 3> SETD1A 가 유방암세포자살( apoptosis )에 미치는 영향 확인
SETD1A가 유방암 세포의 사멸에 미치는 영향을 확인하기 위하여, caspase-9 및 PARP 단백질의 절단을 측정하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>의 shNS 또는 shSETD1A가 도입된 MCF-7 세포주를 6 웰 플레이트에 3 104 세포/웰로 배양 후 RIPA buffer[50mMTris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1% SDS, 1% sodium deoxycholate, 0.1% NP-40]를 이용하여 세포파쇄액(cell lysate)을 얻은 후, caspase-9 특이적인 항체(Abcam), PARP 항체(Cell Signaling) 및 -actin 항체(Thermo Scientific)로 웨스턴 블롯을 수행하여, caspase-9 및 PARP의 절단 정도를 측정하였으며, beta-actin 은 내부대조군으로 사용되었다.
그 결과, SETD1A의 발현이 억제된 세포주의 세포자살이 현저히 증가 됨을 확인하였다(도 4).
< 실험예 4> SETD1A 가 유방암 세포 이동(migration)에 미치는 영향 확인
SETD1A가 유방암세포의 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여, -Dish(ibidi Cell infocus)를 이용하여 세포이동을 측정하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>의 shNS 또는 shSETD1A로 처리된 MCF-7 세포 부유액 (4 105 세포/mL)을 세포배양용 플레이트 위에 놓여진 -Dish 의 양쪽 챔버에 담고 24시간 배양한 후, -Dish 를 플레이트로부터 제거하였다. 그런 다음, 8시간 및 16시간 후 양쪽 챔버 사이의 빈 공간의 거리를 측정하여 세포가 이동하는 정도를 측정하였다.
그 결과, SETD1A의 발현이 억제된 세포주의 이동이 유의성 있게 감소됨을 확인하였다(도 5).
< 실험예 5> 정상 세포와 암세포에서 SETD1A 의 발현 비교
임상 샘플에서 정상 세포와 유방암세포 사이의 SETD1A 발현 비교를 위하여 공개된 데이터베이스상의 big data 분석을 수행하였다. 전사체 빅데이터 분석은 The Cancer Genome Atlas(TCGA, National Institute of Health, National Cancer Institute)자료 및 선행연구 결과(Curtis et al., 2012; Zhao et al., 2004)를 이용하였다. 정상 유방조직과 전이성 유방암세포(invasive breast carcinoma), 소엽성 유방암세포(lobular breast carcinoma), 및 전이성 관내 유방암세포(invasive ductal carcinoma)에서 SETD1A 발현 데이터를 추출하여 분석하였으며, 그 결과 도 6에 나타난 바와 같이, 정상 유방조직에 비하여 전이성 유방암세포, 또는 소엽성 유방암세포에서 SETD1A의 발현이 유의성있게 증가되어 있음을 확인하였다.
< 실험예 6> SETD1A 의 발현 억제에 의한 타목시펜의 민감성 증진 효과 확인
<6-1> SETD1A 의 발현 억제에 의한 타목시펜의 유방암 세포 증식 억제 효과의 상승 확인
SETD1A의 발현 억제가 유방암 치료제인 타목시펜의 유방암세포 증식 억제능에 대하여 동반상승효과(synergy)가 있는지 확인하고자, MCF-7세포주에 shNS 또는 shSETD1A를 도입한 뒤, 타목시펜을 처리하여 세포 증식에 미치는 효과를 <실험예 2>에 기재된 방법과 동일한 방법으로 라이브 세포 이미지 시스템을 이용하여 측정하였다.
구체적으로, shNS 또는 shSETD1A가 도입된 MCF-7 세포주를 6 웰 플레이트에 3104 세포/웰 농도로 배양하면서, 4-hydroxytamoxifen (4-HT, 10 nM) 또는 용매인 에탄올을 처리한 후, IncuCyteTM Life-Cell Imaging System을 이용하여 5일간 세포 수를 측정하였다.
그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, SETD1A의 발현을 억제시키지 않은 대조군 세포(shNS)에서는 타목시펜 처리군(shNS:4-HT)과 미처리군(shNS:Cont)의 세포 증식에 유의적인 차이가 나타나지 않은 반면, SETD1A의 발현을 억제한 세포에 타목시펜을 처리한 경우(shSETD1A:4-HT), 미처리군(shSETD1A:Cont)에 비하여 세포의 증식이 감소됨을 확인하였다(도 7).
따라서, shSED1A의 발현 억제는 타목시펜의 유방암 세포 증식 억제 효과를 상승시킴을 확인하였다.
<6-2> SETD1A 의 발현 억제에 의한 타목시펜의 유방암세포자살 유도 증진 효과 확인
SETD1A의 발현 억제가 타목시펜의 유방암세포자살 증진에 대하여 동반상승효과가 있는지 확인하고자, MCF-7 세포주에 shNS 또는 shSETD1A를 도입한 뒤 타목시펜을 처리한 후, <실험예 3>에 기재된 방법과 동일한 방법으로 caspase-9 및 PARP 단백질의 절단을 확인하였다.
구체적으로, shNS 또는 shSETD1A가 도입된 MCF-7 세포주를 6 웰 플레이트에 34세포/웰로 배양하면서 4-HT(30 M) 또는 용매인 에탄올로 72시간 처리 후 웨스턴 블롯을 수행하여 caspase-9 및 PARP의 절단 정도를 측정하였다.
그 결과, 도 8에 나타난 바와 같이, shNS를 도입하고 타목시펜을 처리한 경우 또는, shSETD1A만을 도입한 경우에도 shNS만을 도입한 경우에 비하여 caspase-9 및 PARP 단백질의 절단이 증가하였으나, shSETD1A를 도입하고 타목시펜을 처리한 경우에 동반상승효과에 의하여 caspase-9 및 PARP 단백질의 절단이 현저히 증가하는 것을 확인하였다(도 8).
<6-3> SETD1A 의 발현 억제에 의한 타목시펜의 유방암 세포 이동 억제 증진 효과의 확인
SETD1A의 발현 억제가 타목시펜의 유방암 세포 이동 억제에 대하여 동반상승효과가 있는지 확인하고자, <실험예 4>의 방법과 동일한 방법으로 유방암 세포의 이동을 측정하였다.
구체적으로, shNS 또는 shSETD1A가 도입된 MCF-7 세포 100 의 세포 부유액 (4105 세포/ml)을 세포배양용 플레이트에 놓여진 -Dish 의 양쪽 챔버에 담고 24시간 배양한 후, -Dish를 플레이트로부터 제거하고, 4-hydroxytamoxifen(10 nM) 또는 용매인 에탄올을 처리하였다. 그리고 16시간 후에 양쪽 챔버 사이의 빈 공간의 거리를 측정하여 세포가 이동하는 정도를 측정하였다.
그 결과, 도 9에 나타난 바와 같이, shNS를 도입하고 타목시펜을 처리한 경우는 타목시펜을 처리하지 않은 미처리군과 비교하여 세포 이동에 큰 차이를 보이지 않았고, shSETD1A만을 도입한 경우는 shNS에 비하여 세포 이동이 다소 억제되었으며, shSETD1A가 도입된 MCF-7 세포에 타목시펜을 처리한 경우에는 shNS에 타목시펜을 처리한 경우 또는 shSETDA1 도입하고 타목시펜을 처리하지 않은 경우에 비하여 세포의 이동이 현저히 감소한 것을 확인하여(도 9), shSETD1A의 발현 억제는 타목시펜의 효과를 상승시킴을 확인하였다.
< 실험예 7> 타목시펜 내성 유방암 세포주의 성장에 대한 SETD1A 의 영향
SETD1A의 발현 억제가 타목시펜에 내성을 가지는 유방암 세포의 증식에 미치는 영향을 측정하기 위하여 타목시펜 내성 MCF-7 세포주인 TAM-R을 이용하여 <실험예 2>의 방법과 동일한 방법으로 유방암세포의 증식능을 측정하였다.
그 결과, 도 10에 나타난 바와 같이, 정상 MCF-7 세포주에 4-HT를 5 M 처리하였을 때 MCF-7 세포의 증식이 억제되었으나, 타목시펜 내성 MCF-7 세포주인 TAM-R은 타목시펜(4-HT)에 의해 유의한 증식 억제효과가 나타나지 않았다. 반면, 타목시펜 내성 TAM-R에 SETD1A 선택적인 siRNA를 처리하여 SETD1A의 발현을 억제하였을 때, 세포 증식이 현저하게 억제되는 것을 관찰하였다.
<110> Gachon University of Industry-Academic cooperation Foundation <120> Pharmaceutical composition for preventing or treating anticancer drug resistant breast cancers comprising expression or activity inhibitor of SETD1A as an active ingredient <130> 2016p-09-003 <160> 13 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> shNS <400> 1 ccggcaacaa gatgaagagc accaactcga gttggtgctc ttcatcttgt tgttttt 57 <210> 2 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> shSETD1A <400> 2 ccggcggaag aagaagctcc gatttctcga gaaatcggag cttcttcttc cgttttttg 59 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 gaggatgagg tggaacgtgt 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 tcttcagtcg ctccaggtct 20 <210> 5 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 gaacaaggtg atctgcg 17 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 tggtattagg atagaagcac ca 22 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 caaagaataa cctgttggcc ctgc 24 <210> 8 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 gacatgcctg cgctctcata ctta 24 <210> 9 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 gtgcctatcc tgcctctcaa tc 22 <210> 10 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 cccgccgtcg taactttcg 19 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 ctctcaacga cagcagctcg 20 <210> 12 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 12 caacatcgat ttcttcctca tcttc 25 <210> 13 <211> 1707 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Met Asp Gln Glu Gly Gly Gly Asp Gly Gln Lys Ala Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Trp Arg Asn Tyr Lys Leu Ile Val Asp Pro Ala Leu Asp Pro Ala Leu 20 25 30 Arg Arg Pro Ser Gln Lys Val Tyr Arg Tyr Asp Gly Val His Phe Ser 35 40 45 Val Asn Asp Ser Lys Tyr Ile Pro Val Glu Asp Leu Gln Asp Pro Arg 50 55 60 Cys His Val Arg Ser Lys Asn Arg Asp Phe Ser Leu Pro Val Pro Lys 65 70 75 80 Phe Lys Leu Asp Glu Phe Tyr Ile Gly Gln Ile Pro Leu Lys Glu Val 85 90 95 Thr Phe Ala Arg Leu Asn Asp Asn Val Arg Glu Thr Phe Leu Lys Asp 100 105 110 Met Cys Arg Lys Tyr Gly Glu Val Glu Glu Val Glu Ile Leu Leu His 115 120 125 Pro Arg Thr Arg Lys His Leu Gly Leu Ala Arg Val Leu Phe Thr Ser 130 135 140 Thr Arg Gly Ala Lys Glu Thr Val Lys Asn Leu His Leu Thr Ser Val 145 150 155 160 Met Gly Asn Ile Ile His Ala Gln Leu Asp Ile Lys Gly Gln Gln Arg 165 170 175 Met Lys Tyr Tyr Glu Leu Ile Val Asn Gly Ser Tyr Thr Pro Gln Thr 180 185 190 Val Pro Thr Gly Gly Lys Ala Leu Ser Glu Lys Phe Gln Gly Ser Gly 195 200 205 Ala Ala Thr Glu Thr Ala Glu Ser Arg Arg Arg Ser Ser Ser Asp Thr 210 215 220 Ala Ala Tyr Pro Ala Gly Thr Thr Ala Val Gly Thr Pro Gly Asn Gly 225 230 235 240 Thr Pro Cys Ser Gln Asp Thr Ser Phe Ser Ser Ser Arg Gln Asp Thr 245 250 255 Pro Ser Ser Phe Gly Gln Phe Thr Pro Gln Ser Ser Gln Gly Thr Pro 260 265 270 Tyr Thr Ser Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Ser Gln Asp Ser Ala Tyr Ser 275 280 285 Ser Ser Thr Thr Ser Thr Ser Phe Lys Pro Arg Arg Ser Glu Asn Ser 290 295 300 Tyr Gln Asp Ala Phe Ser Arg Arg His Phe Ser Ala Ser Ser Ala Ser 305 310 315 320 Thr Thr Ala Ser Thr Ala Ile Ala Ala Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ser 325 330 335 Ser Ser Ala Ser Ser Ser Ser Leu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser 340 345 350 Ser Ser Ser Ser Ser Gln Phe Arg Ser Ser Asp Ala Asn Tyr Pro Ala 355 360 365 Tyr Tyr Glu Ser Trp Asn Arg Tyr Gln Arg His Thr Ser Tyr Pro Pro 370 375 380 Arg Arg Ala Thr Arg Glu Glu Pro Pro Gly Ala Pro Phe Ala Glu Asn 385 390 395 400 Thr Ala Glu Arg Phe Pro Pro Ser Tyr Thr Ser Tyr Leu Pro Pro Glu 405 410 415 Pro Ser Arg Pro Thr Asp Gln Asp Tyr Arg Pro Pro Ala Ser Glu Ala 420 425 430 Pro Pro Pro Glu Pro Pro Glu Pro Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 435 440 445 Pro Ser Pro Glu Arg Glu Glu Val Arg Thr Ser Pro Arg Pro Ala Ser 450 455 460 Pro Ala Arg Ser Gly Ser Pro Ala Pro Glu Thr Thr Asn Glu Ser Val 465 470 475 480 Pro Phe Ala Gln His Ser Ser Leu Asp Ser Arg Ile Glu Met Leu Leu 485 490 495 Lys Glu Gln Arg Ser Lys Phe Ser Phe Leu Ala Ser Asp Thr Glu Glu 500 505 510 Glu Glu Glu Asn Ser Ser Met Val Leu Gly Ala Arg Asp Thr Gly Ser 515 520 525 Glu Val Pro Ser Gly Ser Gly His Gly Pro Cys Thr Pro Pro Pro Ala 530 535 540 Pro Ala Asn Phe Glu Asp Val Ala Pro Thr Gly Ser Gly Glu Pro Gly 545 550 555 560 Ala Thr Arg Glu Ser Pro Lys Ala Asn Gly Gln Asn Gln Ala Ser Pro 565 570 575 Cys Ser Ser Gly Asp Asp Met Glu Ile Ser Asp Asp Asp Arg Gly Gly 580 585 590 Ser Pro Pro Pro Ala Pro Thr Pro Pro Gln Gln Pro Pro Pro Pro Pro 595 600 605 Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Tyr Leu Ala Ser Leu Pro Leu Gly 610 615 620 Tyr Pro Pro His Gln Pro Ala Tyr Leu Leu Pro Pro Arg Pro Asp Gly 625 630 635 640 Pro Pro Pro Pro Glu Tyr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro His Ile 645 650 655 Tyr Asp Phe Val Asn Ser Leu Glu Leu Met Asp Arg Leu Gly Ala Gln 660 665 670 Trp Gly Gly Met Pro Met Ser Phe Gln Met Gln Thr Gln Met Leu Thr 675 680 685 Arg Leu His Gln Leu Arg Gln Gly Lys Gly Leu Ile Ala Ala Ser Ala 690 695 700 Gly Pro Pro Gly Gly Ala Phe Gly Glu Ala Phe Leu Pro Phe Pro Pro 705 710 715 720 Pro Gln Glu Ala Ala Tyr Gly Leu Pro Tyr Ala Leu Tyr Ala Gln Gly 725 730 735 Gln Glu Gly Arg Gly Ala Tyr Ser Arg Glu Ala Tyr His Leu Pro Met 740 745 750 Pro Met Ala Ala Glu Pro Leu Pro Ser Ser Ser Val Ser Gly Glu Glu 755 760 765 Ala Arg Leu Pro Pro Arg Glu Glu Ala Glu Leu Ala Glu Gly Lys Thr 770 775 780 Leu Pro Thr Ala Gly Thr Val Gly Arg Val Leu Ala Met Leu Val Gln 785 790 795 800 Glu Met Lys Ser Ile Met Gln Arg Asp Leu Asn Arg Lys Met Val Glu 805 810 815 Asn Val Ala Phe Gly Ala Phe Asp Gln Trp Trp Glu Ser Lys Glu Glu 820 825 830 Lys Ala Lys Pro Phe Gln Asn Ala Ala Lys Gln Gln Ala Lys Glu Glu 835 840 845 Asp Lys Glu Lys Thr Lys Leu Lys Glu Pro Gly Leu Leu Ser Leu Val 850 855 860 Asp Trp Ala Lys Ser Gly Gly Thr Thr Gly Ile Glu Ala Phe Ala Phe 865 870 875 880 Gly Ser Gly Leu Arg Gly Ala Leu Arg Leu Pro Ser Phe Lys Val Lys 885 890 895 Arg Lys Glu Pro Ser Glu Ile Ser Glu Ala Ser Glu Glu Lys Arg Pro 900 905 910 Arg Pro Ser Thr Pro Ala Glu Glu Asp Glu Asp Asp Pro Glu Gln Glu 915 920 925 Lys Glu Ala Gly Glu Pro Gly Arg Pro Gly Thr Lys Pro Pro Lys Arg 930 935 940 Asp Glu Glu Arg Gly Lys Thr Gln Gly Lys His Arg Lys Ser Phe Ala 945 950 955 960 Leu Asp Ser Glu Gly Glu Glu Ala Ser Gln Glu Ser Ser Ser Glu Lys 965 970 975 Asp Glu Glu Asp Asp Glu Glu Asp Glu Glu Asp Glu Asp Arg Glu Glu 980 985 990 Ala Val Asp Thr Thr Lys Lys Glu Thr Glu Val Ser Asp Gly Glu Asp 995 1000 1005 Glu Glu Ser Asp Ser Ser Ser Lys Cys Ser Leu Tyr Ala Asp Ser Asp 1010 1015 1020 Gly Glu Asn Asp Ser Thr Ser Asp Ser Glu Ser Ser Ser Ser Ser Ser 1025 1030 1035 1040 Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser 1045 1050 1055 Ser Ser Glu Ser Ser Ser Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Arg Pro Ala 1060 1065 1070 Ala Leu Pro Ser Ala Ser Pro Pro Pro Arg Glu Val Pro Val Pro Thr 1075 1080 1085 Pro Ala Pro Val Glu Val Pro Val Pro Glu Arg Val Ala Gly Ser Pro 1090 1095 1100 Val Thr Pro Leu Pro Glu Gln Glu Ala Ser Pro Ala Arg Pro Ala Gly 1105 1110 1115 1120 Pro Thr Glu Glu Ser Pro Pro Ser Ala Pro Leu Arg Pro Pro Glu Pro 1125 1130 1135 Pro Ala Gly Pro Pro Ala Pro Ala Pro Arg Pro Asp Glu Arg Pro Ser 1140 1145 1150 Ser Pro Ile Pro Leu Leu Pro Pro Pro Lys Lys Arg Arg Lys Thr Val 1155 1160 1165 Ser Phe Ser Ala Ile Glu Val Val Pro Ala Pro Glu Pro Pro Pro Ala 1170 1175 1180 Thr Pro Pro Gln Ala Lys Phe Pro Gly Pro Ala Ser Arg Lys Ala Pro 1185 1190 1195 1200 Arg Gly Val Glu Arg Thr Ile Arg Asn Leu Pro Leu Asp His Ala Ser 1205 1210 1215 Leu Val Lys Ser Trp Pro Glu Glu Val Ser Arg Gly Gly Arg Ser Arg 1220 1225 1230 Ala Gly Gly Arg Gly Arg Leu Thr Glu Glu Glu Glu Ala Glu Pro Gly 1235 1240 1245 Thr Glu Val Asp Leu Ala Val Leu Ala Asp Leu Ala Leu Thr Pro Ala 1250 1255 1260 Arg Arg Gly Leu Pro Ala Leu Pro Ala Val Glu Asp Ser Glu Ala Thr 1265 1270 1275 1280 Glu Thr Ser Asp Glu Ala Glu Arg Pro Arg Pro Leu Leu Ser His Ile 1285 1290 1295 Leu Leu Glu His Asn Tyr Ala Leu Ala Val Lys Pro Thr Pro Pro Ala 1300 1305 1310 Pro Ala Leu Arg Pro Pro Glu Pro Val Pro Ala Pro Ala Ala Leu Phe 1315 1320 1325 Ser Ser Pro Ala Asp Glu Val Leu Glu Ala Pro Glu Val Val Val Ala 1330 1335 1340 Glu Ala Glu Glu Pro Lys Pro Gln Gln Leu Gln Gln Gln Arg Glu Glu 1345 1350 1355 1360 Gly Glu Glu Glu Gly Glu Glu Glu Gly Glu Glu Glu Glu Glu Glu Ser 1365 1370 1375 Ser Asp Ser Ser Ser Ser Ser Asp Gly Glu Gly Ala Leu Arg Arg Arg 1380 1385 1390 Ser Leu Arg Ser His Ala Arg Arg Arg Arg Pro Pro Pro Pro Pro Pro 1395 1400 1405 Pro Pro Pro Pro Arg Ala Tyr Glu Pro Arg Ser Glu Phe Glu Gln Met 1410 1415 1420 Thr Ile Leu Tyr Asp Ile Trp Asn Ser Gly Leu Asp Ser Glu Asp Met 1425 1430 1435 1440 Ser Tyr Leu Arg Leu Thr Tyr Glu Arg Leu Leu Gln Gln Thr Ser Gly 1445 1450 1455 Ala Asp Trp Leu Asn Asp Thr His Trp Val His His Thr Ile Thr Asn 1460 1465 1470 Leu Thr Thr Pro Lys Arg Lys Arg Arg Pro Gln Asp Gly Pro Arg Glu 1475 1480 1485 His Gln Thr Gly Ser Ala Arg Ser Glu Gly Tyr Tyr Pro Ile Ser Lys 1490 1495 1500 Lys Glu Lys Asp Lys Tyr Leu Asp Val Cys Pro Val Ser Ala Arg Gln 1505 1510 1515 1520 Leu Glu Gly Val Asp Thr Gln Gly Thr Asn Arg Val Leu Ser Glu Arg 1525 1530 1535 Arg Ser Glu Gln Arg Arg Leu Leu Ser Ala Ile Gly Thr Ser Ala Ile 1540 1545 1550 Met Asp Ser Asp Leu Leu Lys Leu Asn Gln Leu Lys Phe Arg Lys Lys 1555 1560 1565 Lys Leu Arg Phe Gly Arg Ser Arg Ile His Glu Trp Gly Leu Phe Ala 1570 1575 1580 Met Glu Pro Ile Ala Ala Asp Glu Met Val Ile Glu Tyr Val Gly Gln 1585 1590 1595 1600 Asn Ile Arg Gln Met Val Ala Asp Met Arg Glu Lys Arg Tyr Val Gln 1605 1610 1615 Glu Gly Ile Gly Ser Ser Tyr Leu Phe Arg Val Asp His Asp Thr Ile 1620 1625 1630 Ile Asp Ala Thr Lys Cys Gly Asn Leu Ala Arg Phe Ile Asn His Cys 1635 1640 1645 Cys Thr Pro Asn Cys Tyr Ala Lys Val Ile Thr Ile Glu Ser Gln Lys 1650 1655 1660 Lys Ile Val Ile Tyr Ser Lys Gln Pro Ile Gly Val Asp Glu Glu Ile 1665 1670 1675 1680 Thr Tyr Asp Tyr Lys Phe Pro Leu Glu Asp Asn Lys Ile Pro Cys Leu 1685 1690 1695 Cys Gly Thr Glu Ser Cys Arg Gly Ser Leu Asn 1700 1705

Claims (7)

  1. SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 SETD1A의 발현 억제제는 SETD1A 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되고,
    상기 항암제는 타목시펜(tamoxifen), 라록시펜(raloxifene) 및 토레미펜(toremifene)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 SETD1A는 서열번호 13의 아미노산을 갖는 것을 특징으로 하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. SETD1A(SET domain containing 1A)의 발현 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 개선용 건강기능식품으로서,
    상기 SETD1A의 발현 억제제는 SETD1A 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드, siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되고,
    상기 항암제는 타목시펜, 라록시펜 및 토레미펜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 건강기능식품.
  7. 1) 항암제 내성 유방암 세포에 피검 물질을 처리하는 단계;
    2) 상기 피검물질이 처리된 항암제 내성 유방암 세포의 SETD1A의 발현수준을 측정하는 단계; 및
    3) 상기 단계 2)에서 피검물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 SETD1A의 발현수준을 감소시킨 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는 항암제 내성 유방암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법으로서,
    상기 항암제는 타목시펜, 라록시펜 및 토레미펜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 스크리닝 방법.
KR1020160128998A 2016-04-29 2016-10-06 Setd1a의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 KR101855900B1 (ko)

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