KR101842521B1 - 부화액 효소 및 그 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 어류 부화액으로부터의 다양한 폴리펩타이드, 이를 암호화하는 핵산 서열, 상기 폴리펩타이드 및 핵산 분자를 포함하는 약학적 조성물, 및 피부에 다양한 의료 및 화장품 적용, 특히 동물 내 피부 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하기 위하여 피부 보습 및/또는 피부 각질층 박리를 위한 그 용도에 관한 것이다.

Description

부화액 효소 및 그 용도{HATCHING FLUID ENZYMES AND USES THEREOF}
본 발명은 피부에 다양한 화장품 및 의료 적용을 위한, 어류 부화액으로부터 유도가능한 코리올리신 및 강산성 단백질(VAPs) 단독 또는 조합의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 그 용도에 대하여 기재되는 강산성 단백질에 관한 것이다.
피부는 신체의 더 취약한 기관 중 하나이다. 생명을 위협하는 일은 거의 드물지만, 피부 질환 또는 상태는 불편할 수 있으며 만성 장애를 야기할 수 있다. 또한, 피부는 매우 가시적이므로, 피부 질환 및 상태는 정신적 스트레스를 초래할 수 있다. 따라서, 피부 상태 및 질환의 효과적인 치료가 끊임없이 요구되고 있다.
피부는 신체의 최대 기관을 형성하며, 체중의 약 12-16%를 차지한다. 이는 외부 세계와 체 내의 조절된 환경 사이의 조절 효과 및 장벽으로서 많은 필수적인 역할을 수행한다.
피부는 3 층, 즉 표피, 진피 및 피하 조직으로 구성된다. 표피는 피부의 최상부의 상피층이다. 이는 신체로부터 수분 손실을 방지하고 체내로 물질 및 작은 생물들이 진입하는 것을 방지하는 물리적 장벽으로서 작용한다.
표피는 중층 표피 상피로 구성된다, 즉 이는 편평 세포 층들로 구성된다. 피부, 모발 및 손톱은 각질화되며, 이는 이들이 케라틴이라 불리우는 단백질로 이루어지는 죽은 경화된 소수성 표면을 가짐을 의미한다. 표피는 특히 표피의 중간층 (투명층) 내에 각질세포와 관련되는 세포외 지질 함량으로 인하여 불침투성으로 된다. 점막 (예를 들어, 식도, 인두강, 생긱기 등의)은 주로 비-각질화되며 촉촉하다. 표피는 세 가지 주요 형태의 세포, 즉, 각질 세포 (피부 세포), 멜라닌 세포 (색소 생산 세포) 및 랑게르한스 세포 (면역 세포)를 가진다. 메켈 세포는 네번째의 덜 퍼져 있는 표피 세포이다.
각질 세포는 밖을 향하여 이동함에 따라 케라틴 축적과 함께 성숙하고 분화된다. 이들은 결국 떨어지거나 벗겨진다. 이들은 네 개 또는 다섯 개의 구분되는 층을 형성하며, 이는 표면상으로부터 가장 깊은 곳까지 (i) 핵이 없는 죽은 바싹 마른 딱딱한 세포의 각질층, (ii) 호염기성 과립을 함유하고 얇은 투명층에 의하여 각질층으로부터 밖을 향하여 분리되는 과립층, (iii) 그 안에서 세포가 상향 이동함에 따라 점점 편평화되는 유극층 (가시 또는 유극 세포층), 및 (iv) 원주 (키가 높은) 재생 세포를 가지는 기저층이다.
표피 바로 아래에, 표피와 진피 사이에 놓이는 특화 구조인 기저막이 있다.
상기 진피는 피부의 섬유성 결합 조직 또는 지지층이다. 주요 섬유는 콜라겐 섬유 및 엘라스틴으로 이들은 서로 섞여 있다.
피하 조직은 상기 진피 및 표피 바로 아래 지방층이다. 이는 또한 하피 또는 피하 지방층으로도 불리운다. 상기 피하 조직은 주로 지방 세포, 신경 및 혈관으로 구성된다.
새로운 상피 피부 세포가 피부의 하부층, 과립층 내에서 형성된다. 시간이 경과함에 따라, 세포는 피부 표면으로 이동하며 더 산성으로 된다. 30일 동안, 이들은 죽고 케라틴으로 포화된다. 케라틴 및 관련 지질은 외부 요소들로부터 피부를 보호하므로 중요하다.
질환, 손상, 환경 요인, 연령, 호르몬 수준, 약물 치료, 외용 또는 먹는 물질, 유전적 상태 또는 다양한 기타 요인들이 피부의 비정상적 기능을 초래하여 이상 또는 비정상을 야기할 수 있다. 이들 이상 또는 비정상 중 일부는 예를 들어 피부 건조증, 주름 또는 변화된 색소침착과 같이 특성상 순수히 미용에 관한 것이거나, 또는 습진 및 건선과 같이 통증 또는 불편함을 초래하는 보다 심각한 것일 수 있다.
피부 건조증은 가장 흔한 피부 질환 또는 이상 중 하나이다. 일부 개인들은 피부 건조증에 더 취약하나, 상기 질환은 연령, 성별 또는 피부 유형과 상관없이 누구에게나 발생할 수 있다.
피부 건조증은 피부의 외부층 (투명층과 함께 각질층)이 수분 고갈시 일어난다. 이러한 층이 잘 보습되면, 피부를 통한 수분 손실을 최소화하며, 자극 물질, 알레르겐 및 세균이 들어가지 않게 하는 것을 보조한다. 그러나, 각질층이 말라버리면, 그 보호 기능이 감소된다. 이는 더 큰 수분 손실을 허용하여, 피부가 환경적 요인에 취약하게 한다.
정상적인 상태에서, 각질층은 10% 내지 30% 수분 함량을 가진다. 이러한 수분은 피부에 그 유연하고 부드럽고 유연한 감촉을 부여한다. 이러한 수분은 대기, 하부의 피부층들 및 땀으로부터 온다. 피부샘에 의하여 생산되는 오일 및 피부 세포에 의하여 생산되는 지방 물질은 천연 보습제로 작용하여, 각질층이 물 내에 밀봉되도록 한다.
신체는 계속해서 증발에 의하여 피부 표면으로부터 수분을 손실한다. 정상적인 조건 하에, 수분 손실 속도는 느리며, 수분은 적절하게 교체된다. 수분 손실이 수분 교체를 초과하고 각질층의 수분 함량이 10% 이하로 되면, 피부 건조증의 특징적 증상 및 신호가 일어난다.
피부 건조증을 개선 또는 근절시키는 보습제가 매우 바람직하다. 많은 보습제가 공지되어 있으나, 효과적이면서 순한 천연 제품에 대한 요구가 남아 있다.
또 다른 통상적인 피부 이상 또는 질환은 과도한 양의 피부 각질층이다. 이는 각질층이 벗겨지지 못함으로 인하여 또는 각질층 내 과도한 케라틴 침착으로 인하여 초래될 수 있다. 전자는 피부 침식의 자연적인 과적이 불균일할 때 초래될 수 있으며, 이는 피부를 건조하고 거칠게 한다. 양성 과증식 질환은 표피박리각화과다증 (또는 갈라진 피부) 및 모공 각화증을 포함한다. 한가지 통상적인 양성 과증식 상태는 반흔 주변 비대 및/또는 켈로이드 형성이다. 기타 과증식 상태는 티눈, 굳은살, 과각화형 사마귀 (특히 veruca vulgaris), 어린선 및 손발바닥 각화증이다.
현재 치료는 박리 및 매우 심한 경우 수술을 수반한다. 과각화증은 대개 각질층을 연화하고 두꺼워진 피부를 제거함으로써 치료된다.
박리는 또한 손상된 표피 세포, 예를 들어 색소 침착 질환, 예를 들어 간반을 나타내는 표피로부터의 표피 세포를 제거하는데 사용될 수 있다.
박리는 표피의 외부층을 제거하여 바로 아래의 더 새로운 피부 세포를 드러낸다. 박리는 물리적 수단 (즉, 피부의 마모) 또는 화학적 수단에 의하여 달성될 수 있다. 화학적 박리제는 살리실산, 글리콜산, 과일 효소, 시트르산 또는 말산을 함유하는 스크럽을 포함하며, 피부과 전문의에 의하여 고농도로 적용되거나 또는 처방전 없이 살 수 있는 제품 내 저농도로 적용될 수 있다. 화학적 박리는 알파 히드록시산 (AHAs) 또는 베타 히드록시산 (BHAs)를 함유하는 제품, 또는 세포 결합 지점에서 세포들을 함께 지지하는 글루와 같은 물질을 느슨하게 하여 이들을 가볍게 하도록 작용하는 효소의 사용을 수반할 것이다. 이러한 유형의 박리는 여드름을 치료하는 사람들에게 권고된다.
박리의 최대 불리한 점은 이를 달성하기 위하여 사용하는 제품 및 방법들 중 일부의 고비용이다. 박리는 어떠한 경우 초기에 피부 붉어짐을 초래할 것이다. 화학적 박리의 거의 끝에, 피부는 차가우며 색상은 피부 표면상에서 밝은 백색으로부터 회색으로 변화할 것이다. 따라서, 피부에 더 순한 더 효과적인 방법이 따라서 바람직하다.
따라서, 피부 보습 및/또는 피부 각질층 박리에 적합한 치료가 여전히 요구된다.
이제, 어류 부화액 중에 발견되는 일부 분자, 즉 코리올리신 및 강산성 단백질(VAPs)의 새롭게 확인된 군이 놀랍게도 현저히 효과적인 보습제 및 박리제인 것으로 밝혀졌다.
어류 배아의 부화는 적어도 부분적으로 소위 부화 효소, 코리올리신에 의하여 달성된다. 코리올리신은 어류 부화액 내에 발견되는 메탈로프로티나아제이며, 일반적으로 두 가지 형태, 즉 고-코리올리신 효소 (코리올리신 H, HCE) 및 저-코리올리신 효소 (코리올리신 L, LCE)로 발견되며, 이들은 몇몇 구조적 및 촉매적 특성에 있어 유사하며 아스타신 류에 속하나, 현저히 다른 기질 선호도를 가진다.
연어 내에서, LCE는 다른 어류 종으로부터 알려진 코리올리신과 비교하여 비교적 흔치 않으며, 이하 기재되는 목적을 위하여 적용될 수 있다. 연어 LCE의 서열은 이하 서열 번호 1에 기재된다.
상기한 바와 같이, 이제, 실시예에 기재되는 바와 같이, 강산성 단백질 (VAPs: very acidic proteins)이 기타 성분들로부터 80% 아세톤 내 침전 및 원심분리된 펠릿의 증발에 의한 아세톤 제거에 의하여 어류 부화액 내에서 확인되었다.
이들 VPAs는 부화 중 효소를 부화함으로써 중합 및 가교 결합된 난각 또는 장막의 단백질 분해성 절단에 의하여 생성되고, 이하 더욱 상세히 기재되는 바와 같은 코리오게닌 (choriogenin) H 및 L과 같은 난형성 중 장막 내로 혼입되는 성분들의 단편들이다. 이들 코리오게닌 단백질들의 단편들은 본원에서 VAPs로 명명되며, 부화 중 위란액 내로 분비되어 부화액의 성분이 된다. VAPs는 다양한 형태로 나타난다. 등전 집중에 의하여 분석할 때 (실시예 참조), VAPs I, II 및 III (이하 논의되는 바와 같은)는 각각 적어도 2, 6 및 3 이소폼으로 나타난다.
본원에서 동정되고 놀랍게도 이하와 같은 특성을 가지는 세 가지 VAPs가 개시된다. 이들 VAPs의 서열들은 실시예에 기재되는 바와 같은 질량 분석기에 의하여 결정되며, 서열 번호 2-4에 제시된다.
본원에서 VAPs I, II 및 III은 각각 서열 번호 2, 3 및 4에 기재되는 서열을 가진다.
VAP I은 117 아미노산 크기이고 약 15.5 kDa의 분자량 및 약 3.5 pl을 가진다. 이 VAP는 439 아미노산의 단편, 57kDa 난각 단백질 (방사대 단백질(zona radiata protein)로도 명명됨, 서열 번호 5)이다. VAP I은 대안적으로 467 아미노산 잔기를 포함하는 상동 방사대 단백질로부터 유도될 수 있다 (서열 번호 8).
VAP II는 261 아미노산 크기이며, 약 35kDa의 분자량 및 약 4.0 pl을 가진다. 이 VAP는 524 아미노산 단백질의 단편, 68 kDa 코리오게닌 H 베타이다 (서열 번호 6).
VAP III은 224 아미노산 크기이며, 약 29kDa 분자량 및 약 5.2 pl을 가진다. 이 VAP는 438 아미노산 단백질의 단편, 57kDa 코리오게닌 L이다 (서열 번호 7).
실시예에 기재되고 상기 논의되는 바와 같이, 각각의 VAP는 다양한 이소폼으로 존재할 수 있다.
본 발명에 의하면, 코리올리신 및 강산성 단백질(VAPs)의 새롭게 확인된 군이 놀랍게도 현저히 효과적인 보습제 및 박리제인 것으로 밝혀졌다.
도 1은 그 정제 후 VAPs의 등전 집중을 도시한다.
도 2a 내지 도 2c는 인간 상피에 대한 대서양 연어 VAPs의 영향을 도시하며, 여기서 도 2a 및 도 2b는 VAPs에 노출된 피부 배양물, 및 도 2c는 대조 피부 배양물을 도시한다.
도 3a 및 도 3b는 인간 상피에 대한 대서양 연어 코리올리신 L의 영향을 도시하며, 여기서 도 3a는 코리올리신 L에 노출된 피부 배양물을, 도 3b는 대조 피부 배양물을 도시한다.
따라서, 제1 측면에서, 본 발명은
(i) 서열 번호 2-4 중 어느 하나에 기재되는 아미노산 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 상기 서열들 중 임의의 것의 일부; 및 임의로
(ii) 1 내지 100 아미노산 길이인 (i)의 아미노산 서열의 N 및/또는 C 말단의 플랭킹 아미노산 서열로 구성되는 폴리펩타이드를 제공한다.
본원에서 "폴리펩타이드"는 바람직하게 50, 100, 150, 200 또는 250 이상 및/또는 400, 300, 200 또는 100 미만 또는 이로부터 선택되는 범위를 가지는 분자이다. 본원에서 "일부"는 바람직하게 그것이 유도되는 서열의 적어도 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 또는 그 이상의 아미노산을 포함한다. 바람직한 측면에서, 상기 일부는 바람직하게 N-말단으로부터 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5 아미노산 잔기가 제거된 그것이 유도되는 전장 서열로 구성된다.
본원에서 "플랭킹 서열"은 중간 아미노산 서열의 N 또는 C 말단에 정상적인 펩타이드 결합을 통하여 부착되어 연속 아미노산 서열을 형성하는 (이하 논의되는 바와 같은 기능적 동등물 내에 변형되는 것을 제외하고) 아미노산 서열이다. 플랭킹 서열은 중간 아미노산 서열의 N 또는 C 말단에 존재하거나 또는 양 말단 모두에 존재할 수 있다. 상기 플랭킹 서열은 1 아미노산과 같이 짧거나 또는 100 아미노산, 바람직하게 1-50 (또는 5-100 또는 10-50), 예를 들어, 1-25, 예를 들어 1-5 아미노산 길이일 수 있다. 플랭킹 서열이 N 및 C 말단 모두에 존재할 때, 이들은 동일하거나 다른 서열일 수 있으며 동일 또는 다른 길이일 수 있다. 상기 플랭킹 서열은 해당 VAP가 그의 단편인 천연 서열로부터 유도되거나, 또는 비교 부분에서 상기 천연 서열과 80, 70, 60 또는 50% 미만 동일성을 가질 수 있다 (예를 들어, 서열번호 5-7에 각각 제공되는 서열 번호 2-4에 대한 천연 서열, 서열 번호 8은 서열 번호 2에 대한 대안적인 천연 서열을 제공함).
바람직하게, 상기 (i) 서열은 그것이 비교되는 서열 (서열 번호 2-8)과 적어도 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일성을 가진다.
서열 동일성은 예를 들어, 가변 팸팩터(pamfactor)를 가지고 갭 크리에이션 페널티(gap creation penalty)가 12.0에 설정되고 갭 익스텐션 페널티(gap extension penalty)가 4.0에 설정되고 2 아미노산의 윈도우를 가지는 FASTA pep-cmp를 이용하는 SWISS-PROT 단백질 서열 데이터뱅크를 이용하여 결정될 수 있다. 바람직하게, 상기 비교는 전장 서열에 걸쳐 이루어지나, 더 적은 비교 창에 걸쳐, 예를 들어, 200, 100 또는 50 연속 아미노산에 대하여 행하여질 수 있다.
바람직하게, 이러한 서열 동일성 관련 폴리펩타이드는 인용되는 서열 번호들에 기재되는 폴리펩타이드와 기능적으로 동등하다. 이러한 기능적으로 동등한 폴리펩타이드는 이하 기재되는 유도체 형태를 취할 수 있다. 유사하게, 상기 서열 번호들에 기재되는 서열을 가지는 폴리펩타이드는 이하 기재되는 바와 같이 폴리펩타이드의 서열에 영향을 미치지 않고 변형될 수 있다.
또한, 본원에서 "일부"는 기능적으로 동등할 수 있다. 바람직하게, 이러한 일부들은 본원에 언급되는 동일성 (비교 영역에 대한) 조건을 충족시킨다. 상기 플랭킹 서열을 포함하는 일부 및 폴리펩타이드를 포함하는 바람직한 본원의 폴리펩타이드는 바람직하게 산성, 예를 들어 3 내지 5.5, 바람직하게 3.5 내지 5.2 pl을 가진다.
본원에서, "기능정 동등성"을 달성하기 위하여, 폴리펩타이드는 모 분자(즉, 예를 들어 아미노산 치환에 의하여, 그것이 유도되는 분자)에 대하여 의료 또는 화장품 기능을 수행함에 있어 다소 감소된 효능을 나타낼 수 있으나, 바람직하게 동일하게 효율적이거나 더 효율적이다. 따라서, 기능적 동등성은 상태 또는 질환을 치료하거나 본원에 언급되는 피부의 상태 및/또는 외관을 개선시키기에, 즉 환자의 하나 이상의 증상, 예를 들어, 피부의 외관, 감촉, 두께 또는 수분 함량을 감소시키기에 효과적인 폴리펩타이드에 관한 것이다. 이는 예를 들어 실시예에 기재되는 분석을 수행함으로써, 그것이 유도되는 폴리펩타이드에 대하여 유도 폴리펩타이드의 효과를 품질 또는 양적 방식으로 비교함으로써 시험될 수 있다. 양적 결과가 가능한 경우, 유도체는 모 폴리펩타이드에 대하여 적어도 30, 50, 70 또는 90% 효과적이다.
천연 발생 단백질과 관련되거나 이로부터 유도되는 기능적으로 동등한 단백질은 분자의 기능을 파괴하지 않고 천연 아미노산 서열을 단일 또는 복수 (예를 들어, 2-20, 바람직하게 2-10) 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실 (단, 이들이 상기 서열 동일성 요건을 충족시킴)에 의하여 변형시킴으로써 얻어질 수 있다. 이러한 단백질은 하나 이상의 염기의 적합한 치환, 부가 및/또는 결실에 의하여 발생되는 "기능적으로 동등한 핵산 분자"에 의하여 암호화된다.
바람직한 기능적 동등물은 모 폴리펩타이드에 융합되는 부가 단백질 또는 폴리펩타이드를 포함하는, 아미노 및/또는 카복시 말단 융합 단백질 또는 폴리펩타이드가 생성되는 "부가" 변이체이다. 상기한 바와 같이, 중간 폴리펩타이드에 부가되어 연속 아미노산 서열을 형성하는 임의의 서열은 상기한 바와 같은 플랭킹 서열에 제한된다.
추가적인 바람직한 기능적 동등물은 아미노 및/또는 카복시 말단 잔기가 중간 폴리펩타이드로부터 제거된 경우 단백질 또는 폴리펩타이드가 생성되는 "결실" 또는 "절단" 변이체이다. 특히 바람직하게 구현예에서, 잔기는 아미노 말단으로부터 제거되며, 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5 아미노산 잔기가 제거된다. 이러한 기능적 동등물은 앞서 기재된 바와 같은 일부이다.
특히 바람직한 기능적으로 동등한 변이체는 자연적 생물학적 변이체 (예를 들어, 종 내에 또는 대안적으로 상이한 속, 예를 들어, 식물, 동물 또는 세균, 특히 어류, 특히 연어과, 특히 아과 Salmo 및 Oncorhynchus 내에 대립유전자 변이체 또는 지리적 변이체), 및 공지 기술을 이용하여 제조되는 유도체이다. 예를 들어, 기능적으로 동등한 단백질을 암호화하는 핵산 분자들은 화학적 합성에 의하여 또는 결실, 임의 돌연변이 유발, 또는 효소적 절단 및/또는 핵산 결찰을 포함하는 부위 지정 돌연변이의 공지 기술을 이용하여 재조합 형태로 생산될 수 있다.
본 발명은 또한 상기 폴리펩타이드 또는 이의 상보적 서열만을 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 구성되는 핵산 분자를 제공한다.
바람직한 측면에서, 본 발명은
(i) 서열 번호 10-12 중 어느 하나에 기재되는 뉴클레오티드 서열, 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 실온에서 6 x SSC/50% 포름아미드의 비-엄격 결합 조건 및 매우 엄격한 조건, 예를 들어, 2 X SSC, 65℃, 여기서 SSC = 0.15 M NCl, 0.015 M 시트르산 나트륨, pH 7.2, 하에 세척 하에 상기 서열에 혼성화하는 서열, 또는 상기 서열들 중 임의의 것에 상보적인 서열, 또는 이의 일부; 및 임의로
(ii) 1 내지 300 뉴클레오티드 길이의 (i)의 뉴클레오티드 서열의 5' 또는 3' 말단의 플랭킹 뉴클레오티드 서열,
또는 이의 상보적 서열
로 구성되는 핵산 분자를 제공한다.
바람직하게, 상기 핵산 분자는 앞서 기재한 바와 같은 폴리펩타이드를 암호화한다.
본원에서 "핵산 분자"는 바람직하게 150, 300, 450, 600 또는 750을 초과하는 염기 및/또는 1200, 900, 600 또는 300 미만의 염기 또는 이로부터 선택되는 범위를 가지는 분자이다. 본원에서 "일부"는 바람직하게 그것이 유도되는 서열의 적어도 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 450 또는 600 뉴클레오티드 염기를 포함한다. 바람직하게, 상기 일부는 앞서 기재한 N-말단, 중간 또는 C-말단 펩타이드를 암호화한다. 바람직한 측면에서, 상기 일부는 바람직하게 5' 말단으로부터 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 염기가 제거된 그것이 유도되는 전장 서열로 구성된다.
본원에서 "플랭킹 서열"은 중간 뉴클레오티드 서열의 5' 또는 3' 말단에 포스포디에스테르 결합을 통하여 부착되어 연속 뉴클레오티드 서열을 형성하는 뉴클레오티드 서열이다 (앞서 논의된 바와 같은 기능적 동등물 내 변형을 제외함). 플랭킹 서열은 중간 뉴클레오티드 서열의 5' 또는 3' 말단에 존재하거나 또는 양 말단에 모두 존재할 수 있다. 상기 플랭킹 서열은 1 뉴클레오티드와 같이 짧거나, 또는 300 뉴클레오티드, 바람직하게 1-150 (또는 15-300 또는 30-150), 예를 들어, 1-75, 예를 들어 1-15 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 플랭킹 서열이 5' 및 3' 말단에 모두 존재하는 경우, 이들은 동일하거나 다른 서열일 수 있으며 동일하거나 다른 길이일 수 있다. 플랭킹 서열은 해당 서열을 암호화하는 VAP가 그의 단편인 천연 서열로부터 유도되거나, 또는 비교 부분에서 천연 암호화 서열에 80, 70, 60 또는 50% 미만의 동일성을 가질 수 있다 (예를 들어, 서열 번호 13-15에 각각 제공되는 서열 번호 10-12에 대한 천연 서열, 서열 번호 16은 서열 번호 10에 대한 대안적 천연 서열을 제공함).
바람직하게, 상기 (i) 서열은 그것이 비교되는 서열 (서열 번호 10-16)과 적어도 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일하다.
서열 동일성은 예를 들어, 디폴트 값 및 가변 pamfactor 및 12.0으로 설정되는 갭 크리에이션 페널티 및 4.0으로 설정되는 갭 익스텐션 페널티 및 6 뉴클레오티드의 창으로 GCG 패키지를 이용하여 FASTA Search에 의하여 결정될 수 있다.
바람직하게, 이러한 서열 동일성 관련 또는 혼성화 핵산 분자는 인용되는 서열 번호에 기재되는 핵산 분자와 기능적으로 동등하다. 이와 같은 기능적으로 동등한 핵산 분자는 이하 기재되는 바와 같은 유도체 형태를 취할 수 있으며, 앞서 기재한 시험에 따라 기능적 동등물로 간주되는 폴리펩타이드를 암호화한다면 기능적으로 동등한 것으로 간주된다. 바람직한 기능적 동등물은 상기한 바와 같은 바람직한 폴리펩타이드를 암호화하는 것들, 예를 들어 본원에 언급되는 특정 분자 이외의 다른 속 또는 종 내에서 발견되는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자들이다.
또한, 본원에서 "일부"는 기능적으로 동등할 수 있다. 바람직하게, 이들 일부들은 본원에 기재되는 동일성 (비교 영역에 대한) 또는 혼성화 조건을 충족시킨다. 바람직하게, 상기 플랭킹 서열을 포함하는 일부 및 핵산 서열을 포함하는 본 발명의 핵산 분자는 바람직하게 앞서 기재한 바와 같은 산성 폴리펩타이드를 암호화한다.
본 발명에 따른 및 본 발명에 따른 용도를 위한 핵산 분자는 단일 또는 이중 가닥 DNA, cDNA 또는 RNA, 바람직하게 DNA이며, 상기한 바와 같은 축퇴, 실질적으로 동일한 혼성화 서열을 포함한다. 그러나, 이상적으로 상기 분자는 DNA 또는 cDNA이다.
본 발명의, 또는 본 발명에 따른 용도를 위한 폴리펩타이드는 예를 들어 탈글리코실화 또는 글리코실화를 포함하는 화학적 변형에 의하여 폴리펩타이드 서열에 영향을 미치지 않고 변형되는 것들을 포함한다. 이러한 폴리펩타이드는 기능성에 영향을 미치지 않고 폴리펩타이드의 후-합성/분리 변형, 예를 들어, 특정 잔기의 일부 글리코실화, 메틸화 등에 의하여 제조될 수 있다.
본 발명의, 또는 본 발명에 따른 용도를 위한 폴리펩타이드는 또한 그 폴리펩타이드의 기능적 특징이 유지되나 상이한, 예를 들어, 비-펩타이드 구조에 있어서 제시되지 않는 유도체로 간주될 수 있는 펩티도미메틱 형태를 취할 수 있다. 이러한 펩티도미메틱이 성공적으로 개발되었으며 기타 특정 의료 적용을 위하여 사용되었다.
펩티도미메틱, 특히 비-펩타이드 분자는 구조에 근거한 약물 디자인, 스크리닝, 집중 라이브러리 디자인 및 전통적 의약 화학을 포함하는 다양한 공정을 통하여 제조될 수 있다. 비천연 아미노산의 올리고머 또는 기타 유기 빌딩 블록을 사용할 수 있을뿐 아니라, 탄수화물, 헤테로시클릭 또는 매크로시클릭 화합물 또는 펩타이드의 3-차원 구조와 동일한 특성을 모방하는 분자 정전기 표면을 제공하는 구조적 요소 및 구성을 포함하는 유기 분자 또한 당업계에 공지된 방법에 의하여 사용될 수 있다.
따라서, 펩티도미메틱은 펩타이드 백본과 유사성이 거의 없거나 전혀 없다. 펩티도미메틱은 전적으로 합성 비-펩타이드 형태이거나 (예를 들어, 적절합 치환체를 가지는 탄수화물 백본에 근거함) 또는 하나 이상의 아미노산을 유도체화하거나 하나 이상의 아미노산을 대안적 비-펩타이드 성분으로 교체함으로써 그것이 근거하는 펩타이드의 하나 이상의 구성 요소를 보유할 수 있다. 펩타이드형 주형은 유사펩타이드 (pseudopeptides) 및 시클릭 펩타이드를 포함한다. 펩타이드 기능을 위하여 중복인 것으로 간주되는 구조적 요소들을 최소화하여 스캐폴드 기능만을 유지하거나 또는 적절한 경우 이를 제거할 수 있다.
펩티도미메틱이 하나 이상의 펩타이드 요소, 즉 2 이상의 아미노산을 보유하는 경우, 이러한 아미노산은 그의 비-표준 또는 구조적 유사체로 대체될 수 있다. 서열 내 보유되는 아미노산은 또한, 본 발명의 또는 본 발명에 따른 용도를 위한 폴리펩타이드의 기능적 특성이 유지되는 한, 유도체화 또는 변형될 수 있다 (예를 들어, 표지, 글리코실화 또는 메틸화). 상기 펩티도미메틱은 특정 폴리펩타이드 서열로부터 "유도가능한" 것으로 언급된다. 이는 그 펩티도미메틱이 소정의 폴리펩타이드 서열을 기준으로, 그 기능에 필수적인 펩타이드의 구조적 특징을 보유하도록 설계됨은 의미한다. 이는 폴리펩타이드의 특정 측쇄 또는 구조의 수소 결합 포텐셜일 수 있다. 이러한 특징들은 비-펩타이드 성분 또는 하나 이상의 아미노산 잔기에 의하여 제공되거나, 그 기능에 필수적인 폴리펩타이드의 구조적 특징을 유지하면서 안정성 또는 프로테아제 저항성과 같은 폴리펩타이드의 일부 기능을 개선시키도록 폴리펩타이드의 상기 아미노산 잔기를 연결하는 결합을 변형시킬 수 있다.
사용가능한 비-표준 또는 구조적 유사체 아미노산의 예는 D 아미노산, 아미드 동배체 (N-메틸 아미도, 레트로-인버스 아미드, 티오아미드, 티오에스테르, 포스포네이트, 케토메틸렌, 히드록시메틸렌, 플루오로비닐, (E)-비닐, 메틸렌아미노, 메틸렌티오 또는 알칸과 같은), L-N 메틸아미노산, D-α메틸아미노산, D-N-메틸아미노산이다. 비-전형적 아미노산의 예를 표 1에 열거한다.
Figure 112012052169684-pct00001
Figure 112012052169684-pct00002
Figure 112012052169684-pct00003
사용가능한 비-표준 아미노산은 구조적으로 제한된 유사체, 예를 들어, Tic (F를 대체), Aib (A를 대체) 또는 피페콜산 (Pro를 대체)을 포함한다.
상기 논의된 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 또한, 예를 들어 친유성을 개선시키고 세포 수소, 용해도 및/또는 안정성을 보조하기 위하여, 예를 들어 표적 또는 작용기의 첨가에 의하여, 예를 들어 약학적 적용에 있어서 (이하 논의될) 그 용도를 촉진시키도록 변형된 유도체들을 포함한다. 따라서, 올리고사카라이드, 지방산, 지방 알콜, 아미노산, 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 상기 폴리펩타이드 또는 핵산 분자에 접합시킬 수 있다. 핵산 분자는 이하 기재되는 바와 같이 바이러스 담체 내에 존재할 수 있다.
폴리펩타이드는 또한 추가되는 성분이 일단 투여되면 절단에 의하여, 예를 들어 에스테라아제의 작용에 의하여 제거될 수 있는 에스테르화를 통하여 첨가된 치환체의 절단에 의하여, 제거될 수 있도록, "프로드러그" 또는 "프로펩타이드" 형태의 유도체를 포함한다. 이러한 프로드러그는 예를 들어 단백질 분해에 의하여 절단되어 해당 폴리펩타이드를 생산하는 천연 발생 단백질의 천연 전구체를 포함한다. 이러한 전구체는 전구체 형태에서 불활성이나 단백질분해성 절단에 의하여 활성화될 수 있다. 그러나, 중간 폴리펩타이드에 첨가되어 연속 아미노산 서열을 형성하는 서열은 상기한 바와 같은 플랭킹 서열에 제한된다. 대안적으로, 이들은 VAP 단편이 유도되는 천연 서열 (예를 들어, 아미노산 서열에 대하여 서열 번호 5-8 및 핵산 서열에 대하여 서열 번호 13-16) 또는 그 서열에 비교 부분에서 적어도 50, 60, 70, 80 또는 90% 서열 동일성을 가지는 서열인 분자로 연장하지 않는다면, 더 긴 플랭킹 서열을 가질 수 있다.
본 발명의 또는 본 발명에 따른 용도를 위한 핵산 분자는, 따라서, 이러한 프로드러그 또는 전구체를 암호화하는 분자를 유사하게 포함한다. 그러나, 중간 폴리뉴클레오티드에 첨가되어 연속 뉴클레오티드 서열을 형성하는 서열은 상기한 바와 같이 플랭킹 서열에 제한된다. 대안적으로, 이들은 VAP 서열이 유도되는 천연 서열 또는 그 서열에 비교 부분에서 적어도 50, 60, 70, 80 또는 90% 서열 동일성을 가지는 서열인 분자로 연장하지 않는다면, 더 긴 플랭킹 서열을 가질 수 있다.
상기한 바와 같이 변형된 폴리펩타이드 또는 핵산 분자를 시험하여, 이들이 동일 또는 유사한 의료 또는 화장품 효과를 가지는지를 결정함으로써, 비변형 분자에 대하여 기능적 활성을 유지하는지를 보증할 수 있다.
상기 핵산 분자는 발현 조절 서열, 또는 그러한 재조합 DNA 분자를 함유하는 재조합 DNA 클로닝 베히클 또는 벡터에 작동가능하게 연결될 수 있다. 이는 본 발명의 또는 본 발명의 용도를 위한 폴리펩타이드의 유전자 생성물로서 세포내 발현을 허용하며, 그 발현은 해당 세포 내로 도입되는 유전자(들)에 의하여 지시된다. 유전자 발현은 해당 세포 내에서 활성인 프로모터로부터 지시되며, 게놈 내 혼입 또는 독립적 복제 또는 일시적 형질감염/발현을 위하여 선형 또는 환형 DNA 벡터 형태 내로 삽입될 수 있다. 적합한 형질전환 또는 형질감염 기술은 문헌에 잘 기재되어 있다. 대안적으로, 네이키드 DNA 분자를 본원에 기재되는 용도를 위하여 세포 내로 직접 도입할 수 있다.
적합한 발현 벡터는 이하 기재되는 본 발명의 방법의 실행을 위하여 요구되는 핵산 분자와 매칭 리딩 프레임 내에 연결되는, 예를 들어 번역 (예를 들어, 시작 및 정지 코돈, 리보솜 결합 부위) 및 전사 조절 요소 (예를 들어, 프로모터-오퍼레이터 영역, 종결 정지 서열)와 같은 적절한 조절 서열을 포함한다. 적합한 벡터는 플라스미드 및 바이러스 (박테리오파지, 진핵세포 바이러스를 모두 포함)를 포함한다. 적합한 바이러스 벡터는 배큘로바이러스 및 또한 아데노바이러스, 아데노-결합 바이러스, 헤르페스 및 백시니아/폭스 바이러스를 포함한다. 많은 기타 벡터가 종래 기술에 기재되어 있다. 바람직한 벡터는 세균 및 포유동물 발현 벡터 pGEX-KG, pEF-neo 및 pEF-HA를 포함한다. 핵산 분자가 추가 폴리펩타이드, 예를 들어 글루타티온-S-트랜스퍼라아제를 암호화하는 DNA와 편리하게 융합되어 발현시 융합 단백질을 생산할 수 있다.
따라서, 추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 정의한 핵산 분자를 포함하는 벡터, 바람직하게 발현 벡터를 제공한다.
본 발명의 기타 측면들은 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화하는 본 발명의 핵산 서열을 벡터 핵산 내로 삽입하는 단계를 포함하는 본 발명에 따른 재조합 핵산 분자의 제조 방법을 포함한다.
이하 기재되는 방법에서, 폴리펩타이드는 세포를 본 발명의 또는 본 발명의 용도를 위한 핵산 분자로 형질감염시킴에 의하여 투여될 수 있다. 상기한 바와 같이, 본 발명은 따라서 본원에 기재되는 바와 같은 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화하는 서열로 구성되거나 이를 포함하는 핵산 분자, 본원에 기재되는 방법에 있어서 이들의 용도에까지 연장된다. 바람직하게, 상기 핵산 분자는 벡터, 예를 들어 발현 벡터 내에 함유된다.
바람직하게 벡터 내에 함유되는 본 발명의 또는 본 발명에 따른 용도에 사용하기 위한 핵산 분자는 적합한 수단에 의하여 세포 내로 도입될 수 있다. 적합한 형질전환 또는 형질감염 기술은 문헌에 잘 기재되어 있다. 다양한 기술들이 공지되어 있으며, 이러한 벡터를 발현을 위하여 원핵 또는 진핵 세포 내로 도입하는데에 이용될 수 있다. 이러한 목적을 위한 바람직한 숙주 세포는 곤충 세포주, 진핵세포주 또는 균주 BL21/DE3과 같은 E. coli를 포함한다. 본 발명은 또한 핵산 분자를 함유하는 형질전환되거나 형질감염된 원핵 또는 진핵 숙주 세포, 특히 상기 정의한 바와 같은 벡터에까지 연장된다.
본 발명의 추가적인 측면은 앞서 정의된 본 발명의 폴리펩타이드를 제조하는 방법을 제공하며, 이는 상기 정의된 핵산 분자를 함유하는 숙주 세포를 상기 폴리펩타이드가 발현되는 조건 하에 배양하는 단계, 및 이와 같이 하여 생산되는 분자를 회수하는 단계를 포함한다. 발현된 폴리펩타이드는 본 발명의 추가적인 측면을 구성한다.
본 발명은 또한 앞서 기재한 핵산 분자에 의하여 암호화되는 폴리펩타이드에까지 연장된다. 이는 상기한 바와 같은 숙주 세포의 발현에 의하여 생산될 수 있다.
본 발명의 폴리펩타이드를 생산하고 분비하나 암호화 핵산 물질의 발현에 의하여 천연 세포에 대하여 변형된 세포는 본 발명의 추가적인 측면을 구성한다.
이하 기재되는 바와 같은 본 발명의 조성물 및 용도 내에 사용되는 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 천연 발생원으로부터 수득 또는 유도될 수 있거나 또는 전적으로 또는 부분적으로 합성에 의하여 생성될 수 있다.
편리하게, 상기 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 실시예 및 이하 또는 코리올리신에 대하여 Yasumasu et al ., 1989, J. Biochem., 105, p212-218 (특히 분리 방법에 대하여 본원에 참조로 통합됨)에 기재되는 프로토콜에 따라 분리된다. 이러한 방법 및 이러한 방법의 생성물은 본원에 기재되는 VAPs와 관련되므로 본 발명의 추가적인 측면을 구성한다.
따라서, 추가적인 측면에서, 본 발명은 본원에 정의되는 하나 이상의 폴리펩타이드 (VAPs 또는 관련 서열)를 부화액 (예를 들어, 연어의)으로부터 분리하는 방법으로서, 적어도
a) 최소 부피의 (예를 들어, 난의 부피 미만) 물 내에서 난을 현탁시키는 단계;
b) 상기 난의 동조, 신속한 부화를 (바람직하게 부화가 배아의 95% 이상에 대하여 3 시간 미만 이내에 완료되도록) 유도하는 단계;
c) 상기 부화난을 여과하여 부화액을 수득하는 단계;
d) 상기 부화액에 아세톤을 80% v/v의 최종 농도로 첨가하는 단계;
e) 상기 액을 저속 원심분리하는 단계로서, 이와 같이 하여 형성되는 펠릿 내에 상기 폴리펩타이드(들)가 존재하도록 하는 단계; 및 임의로
f) 단계 e)의 펠릿 내에 존재하는 폴리펩타이드를 분리하여 예를 들어 이온 교환 컬럼의 사용에 의하여 개별 폴리펩타이드를 분리하는 단계
를 포함하는 방법을 제공한다.
바람직한 이온 교환 컬럼은 DEAE-Sepharose® CL-6B 컬럼이나, 적합한 대안을 쉽게 이용할 수 있다.
바람직하게, 상기 부화액은 어류, 특히, 연어과(Salmonidae), 특히 Salmo , 예를 들어 Salmo salar (대서양 연어) 및 Oncorhynchus (태평양 연어) 로부터이다.
본 발명은 나아가 상기 방법에 의하여 제조되는 폴리펩타이드에까지 연장된다.
본 발명의 또는 본 발명의 용도에 사용하기 위한 폴리펩타이드 또는 핵산 분자는 바람직하게 그 분리 절차 또는 합성적 제조에 사용되는 급원 물질 또는 물질들로부터 유도되는 오염 성분들을 실질적으로 함유하지 않는다. 특히 바람직하게, 상기 화합물은 50 또는 60% 이상의 순도로, 예를 들어 >70, 80 또는 90%, 바람직하게 95 또는 99% 이상으로 정제된다 (순도는 w/w (건조 중량)으로 산정됨). 이러한 순도 수준은 해당하는 특정 분자에 상응하나, 그 분해 산물을 포함한다. 적절한 경우, 더 낮은 순도를 가지는, 예를 들어 1, 2, 5 또는 10% 이상의 해당 분자, 예를 들어 20 또는 30% 이상의 해당 분자를 함유하는 강화된 제제를 이용할 수 있다. 본 발명의 또는 본 발명의 용도에 사용하기 위한 폴리펩타이드는 예를 들어 크로마토그래피 (예를 들어, HPLC, 크기 배제, 이온 교환, 친화성, 소수성 상화작용, 역상) 또는 모세관 전기영동에 의하여 정제될 수 있다.
본 발명의 또는 본 발명의 용도에 사용하기 위한 폴리펩타이드는 예를 들어 더 작은 합성적으로 생성된 펩타이드들의 결찰에 의하여 또는 보다 편리하게 앞서 기재된 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자의 재조합 발현에 의하여 합성적으로 생산될 수 있다.
본 발명의 또는 본 발명의 용도에 사용하기 위한 핵산 분자는 예를 들어 본원에 기재되는 핵산 서열의 증폭에 의하여 합성적으로 생산될 수 있다. 본원에 기재되는 VAP 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 이하 기재되는 바와 같이 다양한 화장품 및/또는 의료 효과를 실행하는데에 이용될 수 있으며, 이러한 목적을 위한 바람직한 분자를 형성한다.
또한, 전장 천연 단백질과 같은 상기 단편을 포함하는 더 긴 단백질 (및 그 암호화 서열)을 이하 기재되는 공정에 사용할 수 있다. 따라서, 이하 기재하는 용도를 위하여 사용가능한 폴리펩타이드는 서열 번호 2-8 중 어느 하나에 기재되는 아미노선 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 상기 서열들 중 어느 하나의 일부에까지 연장된다.
폴리펩타이드, 일부, 서열 동일성 및 기능적으로 동등한 단백질에 대한 정의는 유사하게 적용되며, 상기한 바와 같은 바람직한 서열 동일성 값 또한 적용가능하다. 바람직하게, 폴리펩타이드는 앞서 기재한 바와 같은 천연 단백질 (임의로 플랭킹 서열을 가지는)의 단편들이다. 유사하게, 이하 기재되는 용도를 위하여 사용가능한 핵산 분자는 본 발명의 폴리펩타이드 또는 상기한 바와 같은 더 긴 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열 또는 이의 상보적 서열을 포함하는 핵산 분자에까지 연장된다. 바람직하게, 상기 용도는 앞서 기재한 천연 암호화 서열 (임의로 플랭킹 서열을 가지는)의 단편들을 이용하여 수행된다.
따라서, 이하 기재하는 용도를 위하여 사용가능한 핵산 분자는 서열 번호 10-16 중 어느 하나에 기재되는 핵산 서열 또는 상기 서열에 적어도 50% 동일한 서열, 또는 실온에서 6 x SSC/50% 포름아미드의 비-엄격 결합 조건 및 매우 엄격한 조건, 예를 들어 2 x SSC, 65℃, 여기서 SSC = 0.15M NaCl, 0.015M 시트르산 나트륨, pH 7.2, 하에 세척 하에 상기 서열에 혼성화하는 서열, 또는 상기 서열들 중 임의의 것에 상보적인 서열, 또는 상기 서열들 중 임의의 것이 일부를 포함하는 핵산 분자에까지 연장된다.
이하 본 발명의 용도와 관련하여, 폴리펩타이드 및 핵산 분자에 대한 언급은 보다 넓은 정의를 의미한다, 즉 상기한 바와 같은 플랭킹 서열을 임의로 함유하는 천연 분자의 단편만이 아니다.
상기 VAPs 외에도, 어류 부화액 내에서 발견되는 추가적인 단백질이 VAPs, 즉 앞서 논의된 코리올리신 L과 상보적인 유리한 화장품 및/또는 의료 용도를 가지는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 본원에 개시되는 폴리펩타이드 또는 핵산 분자는, 특히 그들이 유도되는 신체 내로 예를 들어 피부 이식 형태로 재도입될 것으로 생각될 때, 동물의 부분 또는 생성물, 예를 들어 피부 표본에 대하여, 생체외 또는 시험관내 사용될 수 있다.
그러나, 본원에 개시되는 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 이하 보다 상세히 논의되는 바와 같이 생체내 사용이 바람직하다.
본원에 기재되는 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 이하 기재하는 다양한 이상, 질환 또는 상태의 치료를 위한 용도를 가진다.
따라서, 본 발명은 앞서 기재한 폴리펩타이드 또는 핵산 분자 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물에까지 연장된다.
달리 기재하면, 본 발명은
(i) 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 상기 서열 중 임의의 것의 일부를 포함하는 폴리펩타이드;
(ii) 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 상기 서열 중 임의의 것의 일부를 포함하는 폴리펩타이드;
(iii) 서열번호 3에 기재된 아미노산 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 상기 서열 중 임의의 것의 일부를 포함하는 폴리펩타이드; 및/또는
(iv) 서열번호 4에 기재된 아미노산 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 상기 서열 중 임의의 것의 일부를 포함하는 폴리펩타이드; 및
하나 이상의 약학적으로 또는 화장품으로 허용되는 부형제 및/또는 희석제
를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
바람직한 측면에서, 상기 목록에서 서열 번호 2-4에 제시되는 것들보다 더 긴 서열의 이용이 고려되는 경우, 서열 번호 2-4는 서열 번호 5-7로 각각 대체될 수 있으며, 여기서 서열 번호 2는 서열 번호 8로 대안적으로 대체될 수 있다.
바람직한 폴리펩타이드는 특히 임의로 플랭킹 서열을 함유하는 VAPs, 천연 서열의 단편에 대하여 앞서 기재한 바와 같다. 본원의 약학적 조성물에 대한 언급은 화장품 조성물을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
대안적으로, 또는 부가적으로, 상기 조성물은 상기 폴리펩타이드의 암호화 서열, 즉 앞서 기재한 핵산 분자 (예를 들어, (v) 상기 (i) 내지 (iv) 중 어느 하나에 기재되는 폴리펩타이드를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자 또는 이의 상보적 서열)를 포함할 수 있다. 바람직한 핵산 분자는 서열 번호 9-16, 바람직하게 9-12를 참조로 앞서 기재한 바와 같다.
바람직한 측면에서, 상기 조성물은 상기 성분들의 조합, 예를 들어 성분 (ii) 내지 (iv) (즉, 기재된 모든 VAPs) 또는 상기 4 성분들의 임의의 조합을 포함한다.
"약학적으로 허용가능한" 또는 "생리학적으로 허용가능한"은 그 성분이 조성물 내 다른 성분들과 상용가능하여야 하며 수령체에 생리학적으로 허용가능하여야 함을 의미한다.
투여를 위한 활성 성분들은 약학적 조성물 내 사용을 위하여 적절하게 변형될 수 있다. 예들 들어, 본 발명에 따라 사용하기 위한 화합물을 상기한 바와 같이 유도체의 이용에 의하여 분해에 대하여 안정화할 수 있다.
상기 활성 성분들은 또한 예를 들어 염 또는 비-전해질, 아세테이트, EDTA (VAPs 및 관련 폴리펩타이드에 대하여), 시트레이트 (VAPs 및 관련 폴리펩타이드에 대하여), Tris, 포스페이트 또는 아세테이트 버퍼, 만니톨, 글리신, HSA (인간 혈청 알부민) 또는 폴리소르베이트와 같은 적절한 첨가제를 사용하여 조성물 내에서 안정화될 수 있다.
본원에 기재되는 핵산 분자 또는 폴리펩타이드는 상기 조성물 내에 유일한 활성 성분으로서 존재하거나, 또는 예를 들어 그 치료 효과를 증대시키거나 그 조성물을 소비자에게 더 매력적으로 하도록 하기 위하여 기타 성분들, 특히 기타 활성 성분과 조합될 수 있다. 상기 기타 성분들은 상기한 4 임의 성분들 중 하나 또는 대안적 성분일 수 있다.
본원에 기재되는 하나 이상의 폴리펩타이드 또는 핵산 분자를 포함하는 조성물은 또한 예를 들어 본 발명의 하나 이상의 폴리펩타이드 또는 핵산 분자의 천연 급원으로부터의 제조 후, 불순물을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 하나 이상의 폴리펩타이드 또는 핵산 분자를 포함하는 조성물 내에, 상기 폴리펩타이드(들) 또는 핵산 분자(들) 각각은 약학적 조성물의 0.0001 내지 30% w/w 범위 내로 존재할 수 있다. 바람직하게, 상기 폴리펩타이드(들) 또는 핵산 분자(들)은 0.01-10% 범위로 또는 이하 기재되는 바와 같이 존재할 수 있다.
본 발명의 추가적인 측면에서, 본원에 기재되는 조성물은 치료에 사용하기 위한 것이다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 피부를 보습 및/또는 박리함으로써 피부 이상, 질환 또는 상태 치료에 있어서 치료 특성을 나타낸다.
바람직한 치료될 피부 이상, 상태 또는 질환은 예를 들어 과각화증 상태의 각질층이 바람직한 것 보다 두꺼운 피부 건조증, 또는 표피 내 바람직하지 않은 색소침착, 예를 들어 간반, 검버섯, 선스팟, 브라운스팟을 가지는 피부이다. 치료는 예를 들어 정상이나 건조한 피부 또는 두꺼운 피부의 치료 (굳은살, 티눈, 과각화형 사마귀) 또는 간반과 같은 색소침착 질환 치료를 위한 화장품, 또는 예를 들어 통증을 초래하는 여드름, 습진 건선 또는 사마귀 치료를 위한 치료제일 수 있다.
본원에서 "질환(disorder)"은 예를 들어 감염 또는 후천적 또는 유전적 결함으로부터 초래될 수 있는, 정상적인 유기체에 대하여 증상이 있는 또는 무증상 유기체 내 근본적인 병적 장애를 의미한다. "이상(abnormality)" 또는 "상태(condition)"는 정상적인 최적의 피부에 대하여 피부 내 이상 또는 결함이 있으나 병적 장애의 결과로서가 아닌 것을 의미한다. 상기 결함/이상은 그 대신 연령, 부상, 환경적 요인, 호르몬 수준, 의약 치료, 외용 또는 섭취된 물질, 유전적 상태 또는 피부의 비정상적 기능을 야기하여 이상을 초래할 다양한 기타 요인들로부터일 수 있다.
상기 질환, 이상 또는 상태는 단순히 화장품적 또는 의료적 치료를 요하는 비-화장품적, 또는 이들의 조합일 수 있다.
본원에 사용되는 "화장품적(cosmetic)"은 질환 또는 장애를 치유, 치료 또는 예방하는 것이 아니지만 그 대신 스킨케어 제품으로서 작용하는 처리 또는 피부 외관, 예를 들어 피부의 색상, 촉감 또는 수분 함량을 변형 또는 개선시키는 것을 의미하는 것으로 의도된다.
본원에 기재되는 의료 처리에 사용되는 "비-화장품적" (또는 의약적) 성분은 장애의 하나 이상의 증상, 예를 들어 통증 또는 불편함을 치유, 완화, 치료 또는 예방하는 작용을 한다.
본원에 기재되는 치료의 근본은 본원에 개시되는 VAPs 및/또는 코리올리신의 피부 보습 및 박리 효과이다. 이러한 효과들은 본원에 제공되는 실시예에서 입증된다.
따라서, VAPs 및/또는 코리올리신의 보습 및/또는 박리 특성에 근거한 치료가 고려된다.
따라서, 본 발명은 동물의 피부를 박리 및/또는 보습하는 화장품 또는 비-화장품 방법으로서, 앞서 기재한 폴리펩타이드, 핵산 분자 또는 약학적 조성물을 상기 동물에 투여하는 방법을 제공한다.
따라서, 본 발명은 동물의 피부를 박리 및/또는 보습하는 화장품 또는 비-화장품 방법으로서, 폴리펩타이드, 핵산 분자 또는 약학적 조성물을 상기 동물에 투여하고, 상기 폴리펩타이드는 서열 번호 1-8 (바람직하게 1-4) 중 어느 하나에 기재되는 아미노산 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 상기 서열들 중 임의의 것의 일부를 포함하고; 상기 핵산 분자는 상기 폴리펩타이드를 암호화하거나 그의 상보적 서열 (예를 들어, 서열 번호 9-16 (바람직하게 9-12) 중 어느 하나에 기재된 뉴클레오티드 서열 또는 상기 서열과 적어도 50% 동일한 서열, 또는 실온에서 6 x SSC/50% 포름아미드의 비-엄격 결합 조건 및 매우 엄격한 조건, 예를 들어 2 X SSC, 65℃, 여기서 SSC = 0.15 M NaCl, 0.015M 시트르산 나트륨, pH 7.2, 하에서 세척 하에 상기 서열에 혼성화하는 서열, 또는 상기 서열들 중 임의의 것에 상보적인 서열, 또는 상기 서열들 중 임의의 것의 일부)이고, 상기 약학적 조성물은 하나 이상의 상기 폴리펩타이드 또는 핵산 분자 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 것인 방법을 제공한다.
상기한 바와 같은 및 본원에 인용되는 바와 같은, 서열 번호 2-8 및 10-16을 참조로 하여 정의되는 폴리펩타이드 및 핵산 서열은 VAPs 또는 관련 서열이며, 서열 번호 1 및 9를 참조로 하여 정의되는 것들은 코리올리신 또는 관련 서열이다.
본원에서 "박리(exfoliating)"는 피부 내에서 표피의 각질층의 스케일링 또는 박리와 동일한 상피 표면의 표층 세포의 제거를 의미한다. "보습(moisturizing)"은 본원에서 피부로부터 수분 손실을 방지하는 보습제 및 피부에 적용시 수분을 끌어당기고 유지시키는 보습제 (습윤제) 및 진정제 (불완전 박리를 개선시키는)를 커버한다.
달리 기재하면, 본 발명은 동물 피부의 박리 및/또는 보습에 사용하기 위한, 본원에 기재되는 폴리펩타이드, 핵산 분자 또는 약학적 조성물을 제공한다. (상기 화합물 또는 조성물은 대안적으로 이 목적을 위한 의약 제조에 사용될 있다).
상기 언급한 바와 같이, 이러한 박리 및/또는 보습 특성은 다양한 피부 이상, 장애 또는 상태를 치료 또는 예방하는데에 유리하다.
바람직한 측면에서, 치료 또는 예방될 피부 이상, 상태 또는 질환은 피부 건조증이다. 이는 보습 및/또는 박리에 의하여 치료될 수 있다.
본원에서 "피부 건조증"은 종종 잔주름의 패턴, 벗겨짐 및 가려움을 특징으로 하는 수분 또는 피지가 부족한 표피를 의미한다. 피부 건조증은 피부 상태 그 자체로서 (예를 들어, 연령, 열/냉각/건조 손상으로 인하여) 일어날 수 있거나, 또는 햇볕 손상, 흡진, 접촉성 피부염, 건선 또는 어린선 (현저한 피부 박리를 야기하는 유전적 상태)와 같은 피부 장애 또는 상태의 증상일 수 있다.
추가적인 바람직한 측면에서, 치료 또는 예방될 이상, 상태 또는 질환은 피부의 두꺼워진 각질층이다. 이는 보습 및/또는 박리에 의하여 치료될 수 있다.
이러한 두꺼워진 피부 각질층은 반복되는 문지름으로 인한 피부의 두꺼워진 상부층으로 이루어지는 보호 패드인 굳은살 또는 티눈, 또는 피부 사마귀와 같은 상태에서 일어날 수 있다. 이러한 방법은 그 병리에 있어서 각질화를 수반하는 여드름 치료 또는 예방에도 사용될 수 있다. 피부의 두꺼워진 각질층은 상태 자체이거나 또는 피부 상태 또는 장애의 증상일 수 있다.
추가적인 바람직한 측면에서, 상기 치료 또는 예방될 이상, 상태 또는 질환은 피부의 색소침착 장애 또는 이상이다. 이는 박리에 의하여 치료될 수 있다.
피부 색소침착 장애 또는 이상은 연령, 호르몬 변화, 유전적 요인, 질환 또는 햇볕 또는 기타 손상의 결과로서 일어날 수 있다. 변경된 색소침착이 멜라닌 세포의 국소적 과량 또는 멜라닌 세포 활성 증가 또는 이들 모두로부터 초래될 수 있다. 색서침착 장애는 간반, 선스팟 또는 검버섯 (일광성점) 및 주근깨와 같은 기타 결점을 포함한다.
달리 기재하면, 본 발명은 동물 피부의 상태 또는 질환을 치료 또는 예방하기 위한 화장품 또는 비-화장품 방법으로서, 상기 피부는 비정상적으로 건조하거나 상기 피부 각질층이 비정상적으로 두꺼워져있거나 상기 피부가 색소침착 장애를 가지거나, 앞서 기재한 폴리펩타이드, 핵산 분자 또는 약학적 조성물을 상기 동물에 투여하는 방법을 제공한다. 상기 상태 또는 질환은 바람직하게 앞서 기재한 바와 같다.
본원에서 "이상(abnormal)"은 정상적인 최적의 피부, 즉, 건강하고 수화되고 정상적으로 색소침착되고 노화되지 않는 피부에 대하여 결정된다.
추가적으로 달리 기재하면, 본 발명은 동물 피부의 상태 또는 질환을 치료 또는 예방하는 화장품 또는 비-화장품 방법에 사용하기 위한, 본원에 기재되는 폴리펩타이드, 핵산 분자 또는 약학적 조성물을 제공하며, 여기서 상기 피부는 비정상적으로 건조하거나 상기 피부 각질층이 비정상적으로 두꺼워져있거나 상기 피부가 색소침착 장애를 가진다 (상기 화합물 또는 조성물은 대안적으로 이러한 목적을 위한 의약 제조에 사용될 수 있다).
바람직한 측면에서, 상기 의료 및/또는 화장품 용도는 피부에 국소 적용에 의하여 달성된다.
바람직하게, 적어도 부분적으로 활성 성분의 박리 효과에 의존하는 의료 또는 화장품적 징후에 대하여, 이러한 목적으로 사용되는 약학적 조성물은 하나 이상의 VAPs (또는 본원에 기재되는 이들과 관련된 서열) 및/또는 코리올리신 (또는 본원에 기재되는 이들과 관련되는 서열)을 포함한다.
바람직하게, 적어도 부분적으로 활성 성분의 보습 효과에 의존하는 의료 또는 화장품적 징후에 대하여, 이러한 목적으로 사용되는 약학적 조성물은 하나 이상의 VAPs (또는 본원에 기재되는 이와 관련된 서열)을 포함한다.
따라서, 특히 바람직한 측면에서, 하나 이상의 VAPs (또는 본원에 기재되는 이와 관련된 서열) 및/또는 코리올리신 (또는 본원에 기재되는 이와 관련되는 서열)을 피부가 비정상적으로 건조하거나 피부 각질층이 비정상적으로 두꺼워져있거나 색소침착 결함이 존재하는 장애, 예를 들어, 굳은살, 티눈, 사마귀, 습진,접촉성 피부염, 건선, 어린선, 여드름 및 간반 치료에 사용할 수 있다.
추가적으로 특히 바람직한 측면에서, 하나 이상의 VAPs (또는 본원에 기재되는 이와 관련된 서열)을 피부가 비정상적으로 건조한 장애 치료에 사용할 수 있다.
본원에 사용되는 "치료(treating)"는 그 피부가 상기 상태 또는 질환을 겪지 않고 상기 치료를 받지 않는 상기 개체의 신체의 다른 부분에 존재하는 또는 상기 치료를 받지 않는 상응하는 정상적인 개체 내에서의 증상 또는 영향에 대하여, 하나 이상의 증상 또는 상기 상태 또는 질환의 영향, 예를 들어 건조 또는 두꺼워진 피부, 색소침착 면적, 가려움증 또는 통증 등을 바람직하게 정상 수준으로 감소, 경감 또는 제거하는 것을 의미한다.
"예방(preventing)"은 그 증상 또는 영향의 개시의 정도 또는 시기의 절대적인 예방, 감소 또는 경감을 (예를 들어, 지연) 의미한다. 예를 들어, 건조하거나 두꺼워지거나 또는 비정상적으로 색소침착된 피부 상태는 이러한 상태의 출현 전에 본 발명의 조성물의 정기 적용에 의하여 예방할 수 있다.
바람직하게, 상기 치료는 본 발명의 폴리펩타이드 방법을 이용하여 달성된다. 그러나, 그 암호화 폴리뉴클레오티드의 사용 또한 고려된다.
이는 예를 들어 유전자 치료법, 예를 들어 피부 내 원하는 분자의 발현을 허용하기 위한 센스 서열의 이용에 의하여 달성될 수 있다.
본 발명에 따른 치료 또는 예방 방법은 유리하게 상기 장애 또는 상태 치료 또는 예방에 효과적인 및/또는 보습 또는 박리 달성에 효과적인 하나 이상의 활성 성분들의 투여와 조합될 수 있다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 부가적으로 하나 이상의 이러한 활성 성분을 함유할 수 있다.
본 발명의 또 다른 추가적인 측면에 따르면, 본원에 기재되는 하나 이상의 폴리펩타이드 또는 핵산 분자, 및 임의로 하나 이상의 부가적인 활성 성분을 바람직하게 본원에 기재된 바와 같은 인간 또는 동물 치료법에 있어서 동시, 별개 또는 연속 사용을 위한 조합 제제로서 함유하는 제품이 제공된다.
본 발명의 조성물은 용이하게 얻을 수 있는 성분들을 이용하여 당업계에 잘 알려진 기술에 따라 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제와 함께 전형적인 방식으로 제제화된다.
따라서, 상기 활성 성분들은, 임의로 기타 활성 물질들과 함께 조합 제제로서, 하나 이상의 전형적인 담체, 희석제 및/또는 부형제와 혼합되어, 정제, 알약, 분말, 로젠지, 사셰, 캐셰이, 엘릭시르, 현탁액 (주하 또는 주입액으로서), 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸 (고체로서 또는 액체 매질 내), 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌제, 멸균 주사 용액, 멸균 포장 분말 등과 같은 전형적인 제제를 생산할 수 있다. 생분해성 폴리머 (폴리에스테르, 폴리안하이드라이드, 폴리락트산, 또는 폴리글리콜산)를 또한 고체 삽입을 위하여 사용할 수 있다. 상기 조성물을 동결 건조, 과냉각 또는 페모자임 (Permazyme)을 이용하여 안정화할 수 있다.
적합한 부형제, 담체 또는 희석제는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 검 아카시아, 인산칼슘, 탄산칼슘, 칼슘 락토오스, 옥수수 전분, 알지네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물 시럽, 물, 물/에탄올, 물/글리콜, 물/폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌글리콜, 메틸 셀룰로오스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 미네랄 오일 또는 하드 팻과 같은 지방 물질 또는 이의 적합한 혼합물이다. 카르복시폴리메틸렌, 카르복시메틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 또는 폴리비닐아세테이트와 같은 서방형 제제를 얻기 위한 제제 또한 사용가능하다.
상기 조성물은 부가적으로 윤활제, 습윤제, 유화제, 점도 증가제, 과립화제, 붕해제, 결합제, 삼투 활성제, 현탁제, 방부제, 감미제, 향미제, 흡착 증진제 (예를 들어, 표면 침투제, 또는 비(nasal) 전달을 위하여, 예를 들어, 담즙염, 레시틴, 계면활성제, 지방산, 킬레이터), 갈변제, 유기 용매, 항산화제, 안정화제, 완화제, 실리콘, 알파 히드록시산, 완화제, 소포제, 보습제, 비타민, 향수, 이온성 또는 비이온성 점증제, 계면활성제, 충전제, 격리제, 폴리머, 프로펠런트, 알칼리화 또는 산성화제, 유백체, 착색제 및 지방 화합물 등을 포함한다.
본 발명의 조성물은 당업계에 잘 알려진 기술을 이용하여 투여 후 활성 성분의 신속, 지속적, 또는 지연 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다.
상기 조성물은 예를 들어 활성 성분이 흡수, 흡착, 혼입 또는 결합되는 에멀젼으로서 또는 리포좀, 니오좀, 마이크로스피어, 나노입자 등 내에, 전달을 허용하기에 또는 특정 세포 또는 조직을 표적화하기에 적절한 제형일 수 있다. 이는 제품을 불용성 형태로 효과적으로 전환시킬 수 있다. 이들 미립자 형태는 안정성 (예를 들어 분해) 및 전달 문제를 모두 극복할 수 있다.
이들 입자들은 순환 시간을 개선시키기에 적합한 표면 분자 (예를 들어, 혈청 성분, 계면 활성제, 폴리옥사민908, PEG 등) 또는 특정 세포성 수용체에 대한 리간드와 같은 부위 특이적 표적화를 위한 부분을 가진다. 약물 전달 및 표적화에 적합한 기술은 당업계에 잘 알려져 있으며, WO99/62315에 기재되어 있다.
용액, 현탁액, 겔 및 에멀젼의 이용이 바람직하다, 예를 들어, 활성 성분은 물, 기체, 수계 액체, 오일, 겔, 에멀젼, 수중유 또는 유중수 에멀젼, 현탁액 또는 이들의 혼합물 내에 운반될 수 있다.
조성물은 국소적 (즉, 피부에), 경구 또는 비경구 투여용 (예를 들어 주사에 의한)일 수 있다.
그러나, 국소 조성물 및 투여가 바람직하며, 이는 겔, 크림, 연고, 스프레이, 로션, 상처에 바르는 연고(salve), 스틱, 비누, 분말, 필름, 에어로졸, 드롭, 포말, 용액, 에멀젼, 현탁액, 분산액, 예를 들어, 비이온성 베시클 분산액, 밀크 및 기타 전형적인 약학적 또는 화장품 형태를 포함한다.
연고, 겔 및 크림은 예를 들어 수성 또는 유성 기제로 적합한 점증제 및/또는 겔화제를 첨가하여 제제화될 수 있다. 로션은 수성 또는 유성 기제로 제제화될 수 있으며, 일반적으로 하나 이상의 유화제, 분산제, 현탁제, 점증제 또는 착색제를 함유한다. 분말은 임의의 적합한 분말 기제로 형성될 수 있다. 드롭 및 용액은 하나 이상의 분산제, 가용화제 또는 현탁제를 포함하는 수성 및 비-수성 기제로 형성될 수 있다. 에어로졸 스프레이는 가압된 팩으로부터 적합한 프로펠런트를 이용하여 편리하게 전달된다.
대안적으로, 상기 조성물은 경구 또는 비경구 투여용으로 적응된 형태로 제공된다. 따라서, 대안적인 약학적 형태는 활성 성분을 임의로 하나 이상의 불활성 전형적 담체 및/또는 희석제, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 수크로오스, 미세결정성 셀룰로오스, 마그네슘 스테아레이트, 폴리비닐피롤리돈, 시트르산, 타르타르산, 물, 물/에탄올, 물/글리세롤, 물/소르비톨, 물/폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 스테아릴알콜, 카르복시메틸셀룰로오스 또는 하드 팻과 같은 지방 물질 또는 이의 적합한 혼합물과 함께 함유하는, 단순한 또는 코팅된 정제, 캡슐, 현탁액 및 용액을 포함한다.
본 발명의 조성물 내 활성 성분의 농도는 사용되는 화합물(즉, 폴리펩타이드 또는 핵산 분자)의 특성, 투여 방식, 치료 기간, 환자의 연령 및 체중, 의학적 징후, 치료될 신체 또는 신체 면적에 의존하며, 선택에 따라 변화되거나 조정될 수 있다. 그러나, 일반적으로, 본원에 기재되는 화합물에 대한 농도 범위는 0.0001, 0.0005, 0.001 또는 0.01 내지 25%, 예를 들어 0.0005-15%, 예를 들어 0.1 또는 0.5 내지 5, 예를 들어 1-5%와 같은 0.01 내지 10%이다 (최종 투여용 제제, 특히 국소 투여용 제제의 w/w).
2 이상의 화합물, 예를 들어 본원에 기재되는 3 VAPs (또는 관련 분자)가 존재하는 경우, 각각의 화합물은 상기 양으로 존재할 수 있다. 상기 농도는 화합물 자체의 양을 기준으로 결정되며, 따라서 그 조성물의 순도를 고려하도록 적절히 허용하여야 한다. VAPs (및 관련 분자)를 위한 효과적인 단일 투여량은, 국소 적용시, 치료될 동물에 따라 단일 투여로서 고려하여, 0.1-100 mg/cm2/일, 바람직하게 0.1-10mg/cm2/일 범위에 있다. 코리올리신 (및 관련 분자)에 대하여, 효과적인 단일 투여량은 0.1-100mU/cm2/일, 바람직하게 0.5-10, 예를 들어 1-5mU/cm2/일 범위 내에 있다.
투여는 예를 들어 경구, 장내, 경피, 구강, 직장 또는 국소 투여 또는 흡입 투여를 포함하는, 의료계에 공지된 적합한 방법에 의할 수 있다. 바람직한 투여 형태는 경구, 또는 가장 바람직하게 국소 적용이다. 이해되는 바와 같이, 경구 투여는 활성 성분이 소화가능하여야 한다는 제한을 가진다. 이러한 문제의 극복을 위하여, 성분은 앞서 언급된 바와 같이 안정화될 수 있다.
본 발명의 수행을 위한 활성 성분은 다양한 형태, 예를 들어 핵산 분자 (벡터 내에 있을 수 있는) 또는 폴리펩타이드, 를 취하므로, 조성물의 형태 및 전달 경로는 변화할 것이다. 그러나, 바람직하게, 예를 들어 경구 전달 또는 국소 투여를 위하여, 액체 용액, 크림 또는 현탁액이 사용될 것이다.
본 발명의 폴리펩타이드 또는 핵산 분자 모두 상기 언급한 의학적 징후에 대하여 사용될 수 있다. 유전자 치료법에서, 핵산 분자는 바람직하게 의료 적용을 위하여 당업계에 공지된 유전자 치료법을 이용하여, 상기한 바와 같은 형질감염/형질전환에 적합한 벡터 내에, 예를 들어 아데노바이러스와 같은 바이러스 벡터 내에 제공된다.
상기 조성물이 적용되거나 투여되는 동물은 포유동물, 파충류, 조류, 어류, 특히 수경재배 중 어류 (예를 들어, 연어 또는 대구)를 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 조성물이 적용되는 동물은 포유동물, 특히 영장류, 애완용 동물, 가축 및 실험실 동물이다. 따라서, 바람직한 동물은 마우스, 래트, 래빗, 기니아 피그, 고양이, 개, 원숭이, 돼지, 소, 염소, 양 및 말을 포함한다. 특히 바람직하게, 상기 조성물은 인간에 적용 또는 투여된다.
이하 실시예들은 예시를 목적으로 제공된다.
실시예 1: VAPs 의 동정 및 특성규명
단백질 분리
대서양 연어의 부화액 성분 분석 과정 중에, 부화액 내 존재하는 새로운 단백질이 동정되었다.
본 발명의 VAPs (또는 그의 전구체 서열)을 분리하기 위한 출발 물질로서 사용될 수 있는 부분적 부화액 (이로부터 zonase가 제조될 수 있는)을 제조하는 방법이 WO99/29836에 제공되며, 상기 문헌은 (특히, 기재된 방법의 실시예 1, 그러나 임의로 우레아 단계 없이) 본원에 참고로 포함된다.
따라서, 이하 방법을 분리를 위하여 이용하였다. VAPs를 부화액 (조 또는 0.45㎛ 필터를 통하여 여과된)으로부터 분리하였다. 연이어, 실온에서 또는 4℃에서 4 x 부피의 아세톤을 첨가함으로써 상기 VAPs를 침전시켰다. 20-30 분 후, 침전된 VAPs를 저속 (약 5000 x g)에서 원심분리 후 펠릿으로서 회수하고, 적절한 완충액 (예를 들어, 10mM Tris HCl, pH 8.0 또는 PBS) 내에 재현탁시켰다.
도 1은 상기한 바와 같은 정제 후 VAPs의 2D PAGE를 도시한다.
서열 분석
새롭게 동정된 VAPs를 트립신화된 스팟의 MS 분석에 의하여 특성 규명하였다. 상기 MS 분석은 MALDI-TOF-TOF (매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화. 비행 시간 x 2)였다.
다음 결과가 탑 스코어에 의하여 반영되는 바와 같이 최상의 매칭으로 얻어졌다.
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상기 결과로부터, VAP 서열 내 펩타이드를 MS에 의하여 동정한 다음, 비교가 행하여지는 공지의 천연 서열의 적절한 부분을 이용하여 개재 서열을 삽입함으로써, VAPs 서열들을 생성하였다. 이러한 과정에 의하여 동정된 VAP 서열들을 서열 번호 2-4에 기재하고, 이들이 비교되는 천연 서열을 서열 번호 5-8에 제공한다.
실시예 2: VAPs 의 시험관내 의료/화장품 적용
재료 및 방법
실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된 대서양 연어 VAPs를 이용하여 다음 연구를 수행하였다.
분화된 인간 피부 상피 배양물을, 밑으로부터 상피 조직에의 영양소 접근을 허용하는 미세 기공을 가지는 플라스틱 성장 기층 상으로 분주한 후 16일에 SkinEthics (Nice, France)로부터 수득하였다. 이러한 배양물은 37℃에서 배양 기간 동안 분화 후 정상적인 피부 형태를 보인다. 이들 배양물을 시험관 내 2일 더 유지시켜, 상부 각질층이 공기에 노출되고 기저층이 상기 성장 기층에 노출되도록 하였다.
병렬 배양물을 30℃ 습기 분위기로 이동하고, 0.5 mg/ml (OD280으로 측정)의 VAPs의 존재 또는 부재하에 매질 Ca, Mg-함유 인산 완충액을 6 시간 동안 제공하였다. 배양물을 표준 절차에 따라 포르말린 내 고정하고 파라핀 내 매립하고, 헤마톡실린/에오신으로 염색하였다.
결과
A. 보습 효과
결과를 도 2A-C에 도시하며, 여기서 A 및 B는 VAPs에 노출된 피부 배양물을, C는 대조 피부 배양물을 도시한다. 이들 도면은 VAPs가 피부 각질층 라미나의 분리를 야기하여 "박리(delamination)"가 일어나게 함을 보인다. 상기 라미나는 탈착 또는 벗겨지지 않으며, 단순히 서로 분리된다.
이러한 분리는 상기 각질층 내에 삽입되는 고도로 충전되고 그 양쪽성 특성으로 인하여 물을 운반하여 피부 라미나를 분리시키는 양쪽성 단백질에 의하여 야기된다. 따라서, 물이 경-표피 수분 손실 (TEWL)을 감소시키는 VAPs에 의하여 각질층 내로 피기백된다.
실시예 3: 코리올리신 L의 시험관내 의료/화장품 적용
재료 및 방법
연어 부화액으로부터 Yasumasu et al., 1989, supra에 기재된 바와 같이 제조된 대서양 연어 코리올리신 L을 이용하여 이하 연구를 수행하였다.
인간 피부 상피 배양물을 실시예 2에 기재된 바와 같이 제조하고, 연어 부화액으로부터 코리올리신 L을 30℃에서 6 시간 동안 0.15 mU/ml로 적용하였다.
결과
A. 박리 효과
결과를 도 3A 및 B에 도시하며, 여기서 A는 연어 코리올리신 L에 노출된 피부 배양물을, B는 대조 피부 배양물을 도시한다. 이 결과는 코리올리신 L이 박리 및 피부 박층의 파열을 야기함을 보인다.
피부 배양물의 상청액을 평가하여 처리 중 피부 배양물로부터 제거되는 상피 세포의 양을 평가함으로써 박리를 또한 분석할 수 있다. 코리올리신 L은 1mM EDTA에 의하여 억제되므로, 그 효과가 용이하게 억제되어 피부에 대한 작용을 입증할 수 있다.
실시예 4: VAPs 및 코리올리신 L의 생체내 의료/화장품 적용
화장품 적용
피부 건조증 및/또는 박리를 요하는 피부 (예를 들어, 굳은살 또는 티눈)를 겪는 개체에 이하 기재되는 바와 같이 화장품 또는 플라시보 크림을 투여한다. 처리를 주기적으로, 예를 들어 8 시간마다 반복한다.
상기 크림의 피부에 대한 효과를 외관 및 감촉 (예를 들어, 가려움)과 같은 질적 효과에 근거하여 분석하거나, 또는 수분 함량 또는 두께와 같이 보다 양적으로 분석할 수 있다.
의료 적용
여드름, 습진 또는 건선과 같은 피부의 상태 또는 이상을 겪는 개체에 이하 기재되는 바와 같이 치료 또는 플라시보 크림을 투여한다. 치료를 주기적으로, 예를 들어 8 시간마다 반복한다.
상기 크림의 피부에 대한 효과를 외관, 감촉 (예를 들어, 통증) 또는 색상과 같은 질적 효과에 근거하여 분석하거나, 또는 남아 있는 이상의 크기, 감염 정도 또는 두께와 같이 보다 양적으로 분석할 수 있다.
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서열
서열 번호 1: 코리올리신 L - 대서양 연어
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서열 번호 2: VAP I - 대서양 연어
TVTVQCTKDG QFVVVVSRDA TLPNLELDSI SLLGANGAHC TPVGTTSAFA IYQFKVTECG TVVTEEPDTI VYENRMSSSY VVGIGPFGDI TRDSHYDLVF QCRYTGTSVE TLVIEVK
서열 번호 3: VAP II - 연어
AVTVQCTKDG QFVVVVARDA TLPSLELDSI SLLGTNGPHC HAIGTTSVFA
IYQFKVTECG TVMTEETDTI IYENRMSSSY QVGVGPFGSI TRDSQYDLTF
QCRYKGSTIV AVVIDVKPVP PPNPDIAPGP LTVELRLGSG TCLTKGCNEE EVAYTSYYTE ADYPVTKVLR DPVYTEVRIL ARTDPNIVLT LGRCWATTNP NPLSLPQWDL LIDGCPYQDD RYLTTPINVG PSSGLSFPTH YRRFVLKMFT FVDPMSMTPL R
서열 번호 4: VAP III - 연어
AECRENMVHV EAKHDLLGIG QLIQLEDLTL GDCPMSGFDN INQVLIFESP LQSCGSQLRM TTNSLIYIFT LYYKPKPLAN TPLIRTNDAM INIECHYPRK HNVSSLALIP TWTPFSAAKY AEELLYFSMR LMTADWQYER AGNMYVLGDM VNIEASVMQY FHVPLRIFVD SCVATLEPNI NANPRYAFIE NHGCLIDAKM TGSHSQFMPR SADYKLYFQV EAFR
서열 번호 5: 전장 zr-단백질 - 대서양 연어
MKWSAVCLVA VATLGWLCDA QNFLEKPGWP PIQTPPSWPP QTPQRPVQPL PQRPAQPFLQ KPAQPIPQRI PYTEDDTKQT CEVVDKDKVS CGLSGITAAQ CQAISCCFDG RMCFYGKTVT VQCTKDGQFV VVVSRDATLP NLELDSISLL GANGAHCTPV GTTSAFAIYQ FKVTECGTVV TEEPDTIVYE NRMSSSYVVG IGPFGDITRD SHYDLVFQCR YTGTSVETLV IEVKTYPNPN PVVTVDAVLN VELRLANGRC LSKGCDEMQE AYTSYYTVAD YPVTKVLRDP VYAEVRILGM TDPNVVLTLE QCWATIDPTG DRLPRWDLLV NGCPYQDDRY LTVPIASDSS YIPPGEFLSH YKRFVFKMFT FVDPTSMVPL QENVYIHCRA TVCHALAGSC EQRCNRQRRD LSAQGQKKTK GDVVVSSQKV IMIDPSLYA
서열 번호 6: 전장 코리오게닌 H - 태평양 연어
MKWSAVCLVA VATLGWLCDA QIYLEKPGWP PIQTPASWPA QPPEKPVQPP QRPAQPPQWP AQPPQWPAQP PQRPAQPPQR PAQTQQWPGQ PPQRPAQPPQ WPAQPPQRPA QPPQRPAQPP QRPAQPPPRP AQPPQWPVHP PQWPVQPGTP LQRPKFPSDP GSKQSCDVDS QHKVQCGLPD ITAAHCDAIN CCFDGRMCFY GKAVTVQCTK DGQFVVVVAR DATLPSLELD SISLLGTNGP HCHAIGTTSV FAIYQFKVTE CGTVMTEETD TIIYENRMSS SYQVGVGPFG SITRDSQYDLTFQCRYKGST IVAVVIDVKP VPPPNPDIAP GPLTVELRLG SGTCLTKGCN EEEVAYTSYY TEADYPVTKV LRDPVYTEVR ILARTDPNIV LTLGRCWATT NPNPLSLPQW DLLIDGCPYQ DDRYLTTPIN VGPSSGLSFP THYRRFVLKM FTFVDPMSMT PLRETVFIHC NTAVCLPSHG DSCEPRCYRK RRDIPAAVQK TTRIKSNLVS SGELILTDPR ELTN
서열 번호 7: 전장 코리오게닌 L - 태평양 연어
MAMKWSVVCL VAVAMLGCLC VAQIWPPSIK PVQQPFRPNR PPPQQPQQPP YQKPRIPPKD QTQAKQKFET PLDWTYPLDP KPEPKIIGGS EARTPVAANS VRAECRENMV HVEAKHDLLG IGQLIQLEDL TLGDCPMSGF DNINQVLIFE SPLQSCGSQL RMTTNSLIYI FTLYYKPKPL ANTPLIRTND AMINIECHYP RKHNVSSLAL IPTWTPFSAA KYAEELLYFS MRLMTADWQY ERAGNMYVLG DMVNIEASVM QYFHVPLRIF VDSCVATLEP NINANPRYAF IENHGCLIDA KMTGSHSQFM PRSADYKLYF QVEAFRFQSQ RGSDPIIPQK TKIPFQPAAD YPATLDMIFL TCHLKATTIA FPIDFEYKAC SFINTWREAG GNDGVCGCCD STCSNRKGRD TTTHQKPANI WEGDVQLGPI FISEKVEQ
서열 번호 8: 대안적 zr-단백질 - 대서양 연어
KWSYQLPQKL AQPLPQKPAQ PLPQWPVQPL PQRPAEPLPQ RPAQPLPQWP VQPLPQRPAE PLPQRPAQPL PQRPVQPLPQ RPAQPFLQKP AQPIPQRIPY TKDDTKQTCE VVDKDKVSCG LSGITAAQCQ AISCCFDGRM CFYGKTVTFQ CTKDGQFVVV VSRDATLPNL ELDSISLLGA NGAHCTPVGT TSAFAIYQFK VTECGTVVTE EPDTIVYENR MSSSYVVGIG PFGDITRDSH YDLVFQCRYT GTSVETLVIE VKTYPNPNPV VTVDAVLNVE LRLANGRCLS KGCDEMQEAY TSYYTVADYP VTKVLRDPVY AEVRILGMTD PNVVLTLEQC WATTDPTGDR LPRWDLLVNG CPYQDDRYLT VPIASDSSYI PPGEFLSHYK RFVFKMFTFV DPTSMVPLQE NVYIHCRATV CHALAGSCEQ RCNRQRRDLS AQGQKKTKGD VVVSSQKVIM IDPSLYA
서열 번호 9: 뉴클레오티드 서열, 코리올리신 L, 대서양 연어
atggaccacagacccactcttagcctgcttctgctgctgctgctgctgggcctatcacaggccagtggaaatgagttccatgatgagccggaccatgtgtccatcacttcagtaatcctgaagtccaacaacggaaccaatgagctactgctggatggagacattctagctcctagaaccaggaacgccatgaagtgctttagcagccagtacagctgtctctggaagaagtcatctgacggcttggtgtacgtgccttacatcctcagcgctgtatattccagcttggaggtagagactattgagacggccatgaagtacttccaaggcaagacctgcatccgcttcattccacgtaagacacagactgcctacctggacattcagagcagcggcgggtgttttggtaccgtggggactgttggggacaggcagacattgtctcttgcacagtttggctgtgttcaacatggtatcatccagcatgagctgcttcacgccctgggcttctaccacgagcacaacaggagtgaccgtgaacagtatatcaggatcaactggcaatacatctatgactacgccgttgggaacttccagaaggaggacaccaacaacctgcacactgcatacgactactcctctgtcatgcactatgatagaaccgcttacactaacgactacggaaaggaaaccatcactcccatcccagacccatctgtggccattggacagagactgggcatgtccgacattgatgtcctgaaggtcaacaagctctaccaatgctaagaggaagagcgccattgttgaaaatgtgtgatgctggatgtgctgtcatgtgctgatgtattttattgttggaagtttgtatgtatccttttaatcacattggtaataataaagcatggttatggtaaaaaaaaa
서열 번호 10: 서열 번호 2, VAP I를 암호화하는 뉴클레오티드 서열
acagtgactgtccagtgtaccaaggatggccagtttgtggtggtggtttccagggatgccactctgcccaaccttgagctagattccatcagcctgctaggggcaaacggagcccactgcacccctgtcggcaccacatctgcctttgccatctaccagttcaaagttactgaatgtggaactgtggtgacggaggaacctgatactattgtctatgagaacaggatgtcctcttcatatgtagtggggattggacccttcggcgacattaccagggacagccactatgacctggtcttccagtgtcggtatactgggacttccgttgagacattggttatcgaggtgaaa
서열 번호 11: 서열 번호 3, VAP II를 암호화하는 뉴클레오티드 서열
gcagtgactgttcagtgtaccaaggatggccagtttgtggtggtggtggccagggatgccactctgcccagcctggaactggactccatcagcctgctggggacaaacggaccccactgccatgctattggcacaacttctgtctttgccatctaccagtttaaagtcactgaatgtggaactgtcatgacggaggaaactgatactattatctatgagaataggatgtcctcttcatatcaagtgggggttggcccctttggctccatcaccagggacagccaatatgatctaacattccagtgcagatataagggcagtaccattgtggctgtggttattgatgtgaagccggttcctcctccaaatcctgatatagctcctggacccctcacagttgagctcagactcggcagcggaacatgccttaccaagggatgtaatgaagaggaagtggcctacacctcttactacacagaggcagactaccctgtcaccaaggtcctcagggatcctgtgtacactgaggttcgcatcctggcgaggacagatcccaacattgtgctgaccctgggtcgctgctgggctaccacaaacccaaaccctctcagcctgccccagtgggaccttctcattgatggatgtccttaccaggatgaccgttacctgaccactcccatcaatgtgggaccctcttcgggtctgtccttcccaacccactacaggcgcttcgtccttaagatgttcacctttgtggatccaatgtctatgacccccctgagg
서열 번호 12: 서열 번호 4, VAP III를 암호화하는 뉴클레오티드 서열
gctgagtgcagggagaacatggtccacgtggaagcgaagcatgacctgctggggatcggccagttgatccagctagaagacctcactttgggagactgccctatgtctggattcgacaatatcaaccaggtgctcatctttgagtctccgctgcagtcatgtggcagccagctaaggatgactaccaactccctcatctacatcttcactctatattacaaacccaaacctctggcaaacacccccctcatcaggacaaatgacgcgatgatcaatattgagtgccactatccaaggaaacacaatgtgagcagcctggccctgatcccaacctggacccctttctccgctgctaagtatgcagaggaactcctgtacttctccatgaggctcatgactgctgactggcagtatgagagggccggtaacatgtacgtgttgggtgatatggtgaacatcgaggcctctgtcatgcagtacttccacgttcccctgcgtatctttgtggacagctgtgtggccaccctggaacccaacataaacgccaatcccagatatgccttcattgagaatcatgggtgtctgatcgatgccaaaatgacaggttcccactcccagttcatgcctcgttccgcagactacaagctgtatttccaggtggaggctttcagg
서열 번호 13: 서열 번호 5, zr-단백질 대서양 연어를 암호화하는 전장 뉴클레오티드 서열
cgtgcccatcgcctcggacagctcctatatccctccgggagaattcttatcccactacaagcgcttcgtcttcaagatgttcacctttgtggatccgacatctatggtccccctgcaggagaacgtgtacatccactgtcgtgcaacagtgtgccacgctctagcaggatcctgtgaacaaaggtgcaacaggcaaaggagagatctttctgctcaaggccaaaagaagactaaaggagatgttgtggtttccagtcaaaaagtcatcatgattgacccaagtctttatgcttaa
서열 번호 14: 서열 번호 6, 코리오게닌 H - 태평양 연어를 암호화하는 전장 뉴클레오티드 서열
aacatgccttaccaagggatgtaatgaagaggaagtggcctacacctcttactacacagaggcagactaccctgtcaccaaggtcctcagggatcctgtgtacactgaggttcgcatcctggcgaggacagatcccaacattgtgctgaccctgggtcgctgctgggctaccacaaacccaaaccctctcagcctgccccagtgggaccttctcattgatggatgtccttaccaggatgaccgttacctgaccactcccatcaatgtgggaccctcttcgggtctgtccttcccaacccactacaggcgcttcgtccttaagatgttcacctttgtggatccaatgtctatgacccccctgagggagacggtgttcatccattgtaatacagctgtgtgtctgccatcccatggagacagctgtgaaccaagatgctacagaaagaggagagacattcctgctgcagtccagaagaccaccagaatcaagtctaatttggtttccagtggcgaactgatcctgactgacccaagggagctcaccaactag
서열 번호 15: 서열 번호 7, 코리오게닌 L - 태평양 연어를 암호화하는 전장 뉴클레오티드 서열
gataccttttcagcctgcggcagattatcccgctacgctcgacatgatcttccttacctgtcacctgaaggcaaccacaatcgctttccccattgattttgagtacaaggcctgctctttcattaatacgtggagggaggctggtgggaatgatggagtgtgtggctgctgtgactccacctgtagcaacaggaagggacgcgataccactacacatcaaaaaccagcaaatatatgggagggagatgttcagcttggtcccatctttatctcggaaaaggttgagcaataa
서열 번호 16: 서열 번호 8, 대안적 zr-단백질 대서양 연어를 암호화하는 전장 뉴클레오티드 서열
ccaccacagaccccacaggtgataggctgccccggtgggacctactagttaatgggtgtccctaccaggatgaccgttacctgaccgtgcccatcgcctcggacagctcctatatccctccgggagaattcttatcccactacaagcgcttcgtcttcaagatgttcacctttgtggatccgacatctatggtccccctgcaggagaacgtgtacatccactgtcgtgcaacagtgtgccacgctctagcaggatcctgtgaacaaaggtgcaacaggcaaaggagagatctttctgctcaaggccaaaagaagactaaaggagatgttgtggtttccagtcaaaaagtcatcatgattgacccaagtctttatgcttaa
SEQUENCE LISTING <110> Aqua Bio Technology ASA <120> Hatching fluid enzymes and uses thereof <130> 42.20.98087/01 <150> GB0921001.4 <151> 2009-11-30 <160> 46 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 262 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 1 Met Asp His Arg Pro Thr Leu Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Gly Leu Ser Gln Ala Ser Gly Asn Glu Phe His Asp Glu Pro Asp His 20 25 30 Val Ser Ile Thr Ser Val Ile Leu Lys Ser Asn Asn Gly Thr Asn Glu 35 40 45 Leu Leu Leu Asp Gly Asp Ile Leu Ala Pro Arg Thr Arg Asn Ala Met 50 55 60 Lys Cys Phe Ser Ser Gln Tyr Ser Cys Leu Trp Lys Lys Ser Ser Asp 65 70 75 80 Gly Leu Val Tyr Val Pro Tyr Ile Leu Ser Ala Val Tyr Ser Ser Leu 85 90 95 Glu Val Glu Thr Ile Glu Thr Ala Met Lys Tyr Phe Gln Gly Lys Thr 100 105 110 Cys Ile Arg Phe Ile Pro Arg Lys Thr Gln Thr Ala Tyr Leu Asp Ile 115 120 125 Gln Ser Ser Gly Gly Cys Phe Gly Thr Val Gly Thr Val Gly Asp Arg 130 135 140 Gln Thr Leu Ser Leu Ala Gln Phe Gly Cys Val Gln His Gly Ile Ile 145 150 155 160 Gln His Glu 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ccatgaagta cttccaaggc aagacctgca tccgcttcat tccacgtaag 360 acacagactg cctacctgga cattcagagc agcggcgggt gttttggtac cgtggggact 420 gttggggaca ggcagacatt gtctcttgca cagtttggct gtgttcaaca tggtatcatc 480 cagcatgagc tgcttcacgc cctgggcttc taccacgagc acaacaggag tgaccgtgaa 540 cagtatatca ggatcaactg gcaatacatc tatgactacg ccgttgggaa cttccagaag 600 gaggacacca acaacctgca cactgcatac gactactcct ctgtcatgca ctatgataga 660 accgcttaca ctaacgacta cggaaaggaa accatcactc ccatcccaga cccatctgtg 720 gccattggac agagactggg catgtccgac attgatgtcc tgaaggtcaa caagctctac 780 caatgctaag aggaagagcg ccattgttga aaatgtgtga tgctggatgt gctgtcatgt 840 gctgatgtat tttattgttg gaagtttgta tgtatccttt taatcacatt ggtaataata 900 aagcatggtt atggtaaaaa aaaa 924 <210> 10 <211> 351 <212> DNA <213> Salmo salar <400> 10 acagtgactg tccagtgtac caaggatggc cagtttgtgg tggtggtttc cagggatgcc 60 actctgccca accttgagct agattccatc agcctgctag gggcaaacgg agcccactgc 120 acccctgtcg gcaccacatc tgcctttgcc atctaccagt tcaaagttac tgaatgtgga 180 actgtggtga cggaggaacc tgatactatt gtctatgaga acaggatgtc ctcttcatat 240 gtagtgggga ttggaccctt cggcgacatt accagggaca gccactatga cctggtcttc 300 cagtgtcggt atactgggac ttccgttgag acattggtta tcgaggtgaa a 351 <210> 11 <211> 783 <212> DNA <213> Salmo salar <400> 11 gcagtgactg ttcagtgtac caaggatggc cagtttgtgg tggtggtggc cagggatgcc 60 actctgccca gcctggaact ggactccatc agcctgctgg ggacaaacgg accccactgc 120 catgctattg gcacaacttc tgtctttgcc atctaccagt ttaaagtcac tgaatgtgga 180 actgtcatga cggaggaaac tgatactatt atctatgaga ataggatgtc ctcttcatat 240 caagtggggg ttggcccctt tggctccatc accagggaca gccaatatga tctaacattc 300 cagtgcagat ataagggcag taccattgtg gctgtggtta ttgatgtgaa gccggttcct 360 cctccaaatc ctgatatagc tcctggaccc ctcacagttg agctcagact cggcagcgga 420 acatgcctta ccaagggatg taatgaagag gaagtggcct acacctctta ctacacagag 480 gcagactacc ctgtcaccaa ggtcctcagg gatcctgtgt acactgaggt tcgcatcctg 540 gcgaggacag atcccaacat tgtgctgacc ctgggtcgct gctgggctac cacaaaccca 600 aaccctctca gcctgcccca gtgggacctt ctcattgatg gatgtcctta ccaggatgac 660 cgttacctga ccactcccat caatgtggga ccctcttcgg gtctgtcctt cccaacccac 720 tacaggcgct tcgtccttaa gatgttcacc tttgtggatc caatgtctat gacccccctg 780 agg 783 <210> 12 <211> 672 <212> DNA <213> Salmo salar <400> 12 gctgagtgca gggagaacat ggtccacgtg gaagcgaagc atgacctgct ggggatcggc 60 cagttgatcc agctagaaga cctcactttg ggagactgcc ctatgtctgg attcgacaat 120 atcaaccagg tgctcatctt tgagtctccg ctgcagtcat gtggcagcca gctaaggatg 180 actaccaact ccctcatcta catcttcact ctatattaca aacccaaacc tctggcaaac 240 acccccctca tcaggacaaa tgacgcgatg atcaatattg agtgccacta tccaaggaaa 300 cacaatgtga gcagcctggc cctgatccca acctggaccc ctttctccgc tgctaagtat 360 gcagaggaac tcctgtactt ctccatgagg ctcatgactg ctgactggca gtatgagagg 420 gccggtaaca tgtacgtgtt gggtgatatg gtgaacatcg aggcctctgt catgcagtac 480 ttccacgttc ccctgcgtat ctttgtggac agctgtgtgg ccaccctgga acccaacata 540 aacgccaatc ccagatatgc cttcattgag aatcatgggt gtctgatcga tgccaaaatg 600 acaggttccc actcccagtt catgcctcgt tccgcagact acaagctgta tttccaggtg 660 gaggctttca gg 672 <210> 13 <211> 1320 <212> DNA <213> Salmo salar <400> 13 atgaagtgga gtgcagtttg tctagtggca gtggccacgc ttggctggct gtgtgatgct 60 cagaatttct tggaaaaacc agggtggcca cccatccaga caccaccgtc atggcctccc 120 caaacccctc agaggcctgt ccaacccctt cctcagagac ctgctcaacc ctttcttcag 180 aagcctgccc aacccatacc tcaacggata ccctacaccg aagacgacac aaaacagacc 240 tgtgaggttg tggacaagga caaggtgtcg tgtggacttt ctggcatcac tgctgcccaa 300 tgccaggcca tcagctgctg ttttgatgga cggatgtgct tctacgggaa aacagtgact 360 gtccagtgta ccaaggatgg ccagtttgtg gtggtggttt ccagggatgc cactctgccc 420 aaccttgagc tagattccat cagcctgcta ggggcaaacg gagcccactg cacccctgtc 480 ggcaccacat ctgcctttgc catctaccag ttcaaagtta ctgaatgtgg aactgtggtg 540 acggaggaac ctgatactat tgtctatgag aacaggatgt cctcttcata tgtagtgggg 600 attggaccct tcggcgacat taccagggac agccactatg acctggtctt ccagtgtcgg 660 tatactggga cttccgttga gacattggtt atcgaggtga aaacgtatcc aaaccccaac 720 ccagtggtca ctgttgatgc agttctcaac gtggagctcc gactggccaa tggacgttgt 780 ctctccaagg gatgtgatga aatgcaagaa gcatacacct cttactacac ggtggcagac 840 taccctgtca ccaaggtcct cagggatccc gtgtacgctg aggttcgcat cctggggatg 900 acagatccca atgttgtcct gacactggag cagtgctggg ccaccataga ccccacaggt 960 gataggctgc cccggtggga cctactagtt aatgggtgtc cctaccagga tgaccgttac 1020 ctgaccgtgc ccatcgcctc ggacagctcc tatatccctc cgggagaatt cttatcccac 1080 tacaagcgct tcgtcttcaa gatgttcacc tttgtggatc cgacatctat ggtccccctg 1140 caggagaacg tgtacatcca ctgtcgtgca acagtgtgcc acgctctagc aggatcctgt 1200 gaacaaaggt gcaacaggca aaggagagat ctttctgctc aaggccaaaa gaagactaaa 1260 ggagatgttg tggtttccag tcaaaaagtc atcatgattg acccaagtct ttatgcttaa 1320 <210> 14 <211> 1575 <212> DNA <213> Oncorhynchus masou <400> 14 atgaagtgga gtgcagtttg tctagtggca gtggccacgc ttggctggct gtgtgatgct 60 cagatttact tggaaaaacc agggtggcca cccatccaga caccagcgtc atggcctgcc 120 caaccccctg agaagcctgt tcaaccccct cagaggcctg cccagccccc tcagtggcct 180 gcccagcccc ctcagtggcc tgcccagccc cctcagaggc ctgcccagcc ccctcagagg 240 cctgcccaaa cccagcagtg gcctggccaa ccccctcaga ggcctgccca gccccctcag 300 tggcctgccc aaccccctca gaggcctgcc caaccccctc aaagacctgc ccaaccccct 360 cagaggcctg cccaaccccc tccgaggcct gcccaacccc ctcagtggcc tgttcatccc 420 cctcagtggc ctgtccaacc cggtacgccg cttcagaggc ctaaattccc ctctgaccca 480 ggctcaaagc agagctgtga tgttgatagc caacacaagg tgcagtgtgg acttcctgac 540 atcactgccg cccattgtga tgccattaac tgctgttttg atggacggat gtgcttctac 600 ggaaaagcag tgactgttca gtgtaccaag gatggccagt ttgtggtggt ggtggccagg 660 gatgccactc tgcccagcct ggaactggac tccatcagcc tgctggggac aaacggaccc 720 cactgccatg ctattggcac aacttctgtc tttgccatct accagtttaa agtcactgaa 780 tgtggaactg tcatgacgga ggaaactgat actattatct atgagaatag gatgtcctct 840 tcatatcaag tgggggttgg cccctttggc tccatcacca gggacagcca atatgatcta 900 acattccagt gcagatataa gggcagtacc attgtggctg tggttattga tgtgaagccg 960 gttcctcctc caaatcctga tatagctcct ggacccctca cagttgagct cagactcggc 1020 agcggaacat gccttaccaa gggatgtaat gaagaggaag tggcctacac ctcttactac 1080 acagaggcag actaccctgt caccaaggtc ctcagggatc ctgtgtacac tgaggttcgc 1140 atcctggcga ggacagatcc caacattgtg ctgaccctgg gtcgctgctg ggctaccaca 1200 aacccaaacc ctctcagcct gccccagtgg gaccttctca ttgatggatg tccttaccag 1260 gatgaccgtt acctgaccac tcccatcaat gtgggaccct cttcgggtct gtccttccca 1320 acccactaca ggcgcttcgt ccttaagatg ttcacctttg tggatccaat gtctatgacc 1380 cccctgaggg agacggtgtt catccattgt aatacagctg tgtgtctgcc atcccatgga 1440 gacagctgtg aaccaagatg ctacagaaag aggagagaca ttcctgctgc agtccagaag 1500 accaccagaa tcaagtctaa tttggtttcc agtggcgaac tgatcctgac tgacccaagg 1560 gagctcacca actag 1575 <210> 15 <211> 1317 <212> DNA <213> Oncorhynchus masou <400> 15 atggcgatga agtggagtgt agtttgtctc gtggcagtgg ccatgcttgg ctgtctgtgt 60 gttgctcaga tttggccacc ctccattaaa ccagtgcagc aacccttcag acccaatcgt 120 ccaccacctc agcagcctca gcaaccaccg tatcagaaac ccaggatccc accaaaagac 180 caaacccagg ccaagcagaa gtttgagaca ccattggatt ggacctatcc tctggaccca 240 aagccagagc ccaagattat tgggggctca gaggcgagaa cccctgtggc tgccaattca 300 gtgagggctg agtgcaggga gaacatggtc cacgtggaag cgaagcatga cctgctgggg 360 atcggccagt tgatccagct agaagacctc actttgggag actgccctat gtctggattc 420 gacaatatca accaggtgct catctttgag tctccgctgc agtcatgtgg cagccagcta 480 aggatgacta ccaactccct catctacatc ttcactctat attacaaacc caaacctctg 540 gcaaacaccc ccctcatcag gacaaatgac gcgatgatca atattgagtg ccactatcca 600 aggaaacaca atgtgagcag cctggccctg atcccaacct ggaccccttt ctccgctgct 660 aagtatgcag aggaactcct gtacttctcc atgaggctca tgactgctga ctggcagtat 720 gagagggccg gtaacatgta cgtgttgggt gatatggtga acatcgaggc ctctgtcatg 780 cagtacttcc acgttcccct gcgtatcttt gtggacagct gtgtggccac cctggaaccc 840 aacataaacg ccaatcccag atatgccttc attgagaatc atgggtgtct gatcgatgcc 900 aaaatgacag gttcccactc ccagttcatg cctcgttccg cagactacaa gctgtatttc 960 caggtggagg ctttcaggtt ccagagccag agggggagtg acccaattat tccgcagaaa 1020 acaaagatac cttttcagcc tgcggcagat tatcccgcta cgctcgacat gatcttcctt 1080 acctgtcacc tgaaggcaac cacaatcgct ttccccattg attttgagta caaggcctgc 1140 tctttcatta atacgtggag ggaggctggt gggaatgatg gagtgtgtgg ctgctgtgac 1200 tccacctgta gcaacaggaa gggacgcgat accactacac atcaaaaacc agcaaatata 1260 tgggagggag atgttcagct tggtcccatc tttatctcgg aaaaggttga gcaataa 1317 <210> 16 <211> 1405 <212> DNA <213> Salmo salar <400> 16 gaagtggtct taccaactcc ctcagaagct tgcccaaccc cttcctcaga agcctgccca 60 acctcttcct cagtggcctg tccaacccct tcctcagagg cctgctgaac cccttcctca 120 gaggcctgct caaccccttc ctcagtggcc tgtccaaccc cttcctcaga ggcctgctga 180 accccttcct cagaggcctg ctcaacccct tcctcagagg cctgtccaac cccttcctca 240 gagacctgct caaccctttc ttcagaagcc tgcccaaccc atacctcaac ggatacccta 300 caccaaagac gacacaaaac agacctgtga ggttgtggac aaggacaagg tgtcgtgtgg 360 actttctggc atcactgctg cccaatgcca ggccatcagc tgctgttttg atggacggat 420 gtgcttctac gggaaaacag tgactttcca gtgtaccaag gatggccagt ttgtggtggt 480 ggtttccagg gatgccactc tgcccaacct tgagctagat tccatcagcc tgctaggggc 540 aaacggagcc cactgcaccc ctgtcggcac cacatctgcc tttgccatct accagttcaa 600 agttactgaa tgtggaactg tggtgacgga ggaacctgat actattgtct atgagaacag 660 gatgtcctct tcatatgtag tggggattgg acccttcggc gacattacca gggacagcca 720 ctatgacctg gtcttccagt gtcggtatac tgggacttcc gttgagacat tggttatcga 780 ggtgaaaacg tatccaaacc ccaacccagt ggtcactgtt gatgcagttc tcaacgtgga 840 gctccgactg gccaatggac gttgtctctc caagggatgt gatgaaatgc aagaagcata 900 cacctcttac tacacggtgg cagactaccc tgtcaccaag gtcctcaggg atcccgtgta 960 cgctgaggtt cgcatcctgg ggatgacaga tcccaatgtt gtcctgacac tggagcagtg 1020 ctgggccacc acagacccca caggtgatag gctgccccgg tgggacctac tagttaatgg 1080 gtgtccctac caggatgacc gttacctgac cgtgcccatc gcctcggaca gctcctatat 1140 ccctccggga gaattcttat cccactacaa gcgcttcgtc ttcaagatgt tcacctttgt 1200 ggatccgaca tctatggtcc ccctgcagga gaacgtgtac atccactgtc gtgcaacagt 1260 gtgccacgct ctagcaggat cctgtgaaca aaggtgcaac aggcaaagga gagatctttc 1320 tgctcaaggc caaaagaaga ctaaaggaga tgttgtggtt tccagtcaaa aagtcatcat 1380 gattgaccca agtctttatg cttaa 1405 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 17 Asp Gly Gln Phe Val Val Val Val Ser Arg 1 5 10 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 18 Asp Ser His Tyr Asp Leu Val Phe Gln Cys Arg 1 5 10 <210> 19 <211> 14 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 19 Tyr Thr Gly Thr Ser Val Glu Thr Leu Val Ile Glu Val Lys 1 5 10 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 20 Met Ser Ser Ser Tyr Val Val Gly Ile Gly Pro Phe Gly Asp Ile Thr 1 5 10 15 Arg <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 21 Met Ser Ser Ser Tyr Val Val Gly Ile Gly Pro Phe Gly Asp Ile Thr 1 5 10 15 Arg <210> 22 <211> 18 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 22 Thr Val Thr Val Gln Cys Thr Lys Asp Gly Gln Phe Val Val Val Val 1 5 10 15 Ser Arg <210> 23 <211> 20 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 23 Val Thr Glu Cys Gly Thr Val Val Thr Glu Glu Pro Asp Thr Ile Val 1 5 10 15 Tyr Glu Asn Arg 20 <210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 24 Asp Gly Gln Phe Val Val Val Val Ala Arg 1 5 10 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 25 Thr Asp Pro Asn Ile Val Leu Thr Leu Gly Arg 1 5 10 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 26 Val Leu Arg Asp Pro Val Tyr Thr Glu Val Arg 1 5 10 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 27 Asp Ser Gln Tyr Asp Leu Thr Phe Gln Cys Arg 1 5 10 <210> 28 <211> 14 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 28 Met Phe Thr Phe Val Asp Pro Met Ser Met Thr Pro Leu Arg 1 5 10 <210> 29 <211> 14 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 29 Met Phe Thr Phe Val Asp Pro Met Ser Met Thr Pro Leu Arg 1 5 10 <210> 30 <211> 14 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 30 Met Phe Thr Phe Val Asp Pro Met Ser Met Thr Pro Leu Arg 1 5 10 <210> 31 <211> 17 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 31 Met Ser Ser Ser Tyr Gln Val Gly Val Gly Pro Phe Gly Ser Ile Thr 1 5 10 15 Arg <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 32 Met Ser Ser Ser Tyr Gln Val Gly Val Gly Pro Phe Gly Ser Ile Thr 1 5 10 15 Arg <210> 33 <211> 18 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 33 Ala Val Thr Val Gln Cys Thr Lys Asp Gly Gln Phe Val Val Val Val 1 5 10 15 Ala Arg <210> 34 <211> 20 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 34 Val Thr Glu Cys Gly Thr Val Met Thr Glu Glu Thr Asp Thr Ile Ile 1 5 10 15 Tyr Glu Asn Arg 20 <210> 35 <211> 20 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 35 Val Thr Glu Cys Gly Thr Val Met Thr Glu Glu Thr Asp Thr Ile Ile 1 5 10 15 Tyr Glu Asn Arg 20 <210> 36 <211> 13 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 36 Ala Glu Cys Arg Glu Asn Met Val His Val Glu Ala Lys 1 5 10 <210> 37 <211> 13 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 37 Ala Glu Cys Arg Glu Asn Met Val His Val Glu Ala Lys 1 5 10 <210> 38 <211> 14 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 38 Thr Asn Asp Ala Met Ile Asn Ile Glu Cys His Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 39 <211> 14 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 39 Thr Asn Asp Ala Met Ile Asn Ile Glu Cys His Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 40 <211> 11 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 40 Tyr Ala Glu Glu Leu Leu Tyr Phe Ser Met Arg 1 5 10 <210> 41 <211> 11 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 41 Tyr Ala Glu Glu Leu Leu Tyr Phe Ser Met Arg 1 5 10 <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 42 Leu Met Thr Ala Asp Trp Gln Tyr Glu Arg 1 5 10 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 43 Leu Met Thr Ala Asp Trp Gln Tyr Glu Arg 1 5 10 <210> 44 <211> 19 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 44 Ile Phe Val Asp Ser Cys Val Ala Thr Leu Glu Pro Asn Ile Asn Ala 1 5 10 15 Asn Pro Arg <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 45 Met Thr Gly Ser His Ser Gln Phe Met Pro Arg 1 5 10 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Salmo salar <400> 46 Leu Tyr Phe Gln Val Glu Ala Phe Arg 1 5

Claims (21)

  1. (i) 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드; 또는
    (ii) 상기 (i)의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자, 및
    하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제 또는 희석제를 포함하는,
    습진, 접촉성 피부염, 건선, 어린선, 여드름, 굳은살, 티눈, 사마귀, 간반, 또는 양성 과증식 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 양성 과증식 질환은 표피박리각화과다증, 모공 각화증, 반흔 주변 비대 및 켈로이드 형성으로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 핵산 분자는 서열 번호 9에 기재되는 뉴클레오티드 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 다음으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 폴리펩타이드를 더욱 포함하는 것인 약학적 조성물:
    (i) 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드;
    (ii) 서열번호 3에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드; 및
    (iii) 서열번호 4에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드.
  4. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 (i) 내지 (iii)에 각각 기재된 폴리펩타이드를 포함하는 것인 약학적 조성물.
  5. (i) 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드; 또는
    (ii) 상기 (i)의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자, 및
    하나 이상의 화장품으로 허용되는 부형제 또는 희석제를 포함하는,
    동물의 피부 각질 제거를 위한 화장품적(cosmetic) 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 핵산 분자는 서열 번호 9에 기재되는 뉴클레오티드 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장품적 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 다음으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 폴리펩타이드를 더욱 포함하는 것인 화장품적 조성물:
    (i) 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드;
    (ii) 서열번호 3에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드; 및
    (iii) 서열번호 4에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드.
  8. 제7항에 있어서, 상기 조성물은 (i) 내지 (iii)에 각각 기재된 폴리펩타이드를 포함하는 것인 화장품적 조성물.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201110777D0 (en) 2011-06-24 2011-08-10 Aqua Bio Technology Asa Methods and uses
GB201110783D0 (en) * 2011-06-24 2011-08-10 Aqua Bio Technology Asa Methods and uses
JP6007262B2 (ja) * 2012-01-06 2016-10-12 ノーバス・インターナショナル・インコーポレイテッドＮｏｖｕｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ． スルホキシドベース界面活性剤
ES2901975T3 (es) * 2012-01-23 2022-03-24 Restorsea Llc Cosmético que contiene un aislado proteico de desove de peces
GB201223330D0 (en) * 2012-12-21 2013-02-06 Aqua Bio Technology Asa Products, methods and uses
CA2895573C (en) * 2012-12-21 2021-01-12 Aqua Bio Technology Asa Cosmetic composition from fish hatching fluid
KR101505294B1 (ko) * 2013-06-19 2015-03-23 강릉원주대학교산학협력단 켈로이드 또는 흉터 형성을 감소시키기 위한 조성물
EP3091961A4 (en) 2013-12-13 2017-11-15 Restorsea, LLC Exfoliative hair retention-promoting formulation
US9433564B2 (en) 2014-05-16 2016-09-06 Restorsea, Llc Biphasic cosmetic
US10584306B2 (en) 2017-08-11 2020-03-10 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Surfactant microemulsions
JP2022540729A (ja) * 2019-07-05 2022-09-16 レゲニクス アーエス 創傷デブリードマンのシステム
CN110592054B (zh) * 2019-08-29 2021-02-12 中国科学院南海海洋研究所 海马孵化酶基因及其编码蛋白和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002066624A2 (en) 2001-02-20 2002-08-29 Lexicon Genetics Incorporated Novel human protease and polynucleotides encoding the same
US20040101580A1 (en) 1999-04-19 2004-05-27 Laboratoires Pharmascience Peptide extract of lupine and pharmaceutical or cosmetic or nutritional composition comprising the same

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3393559B2 (ja) * 1993-10-15 2003-04-07 株式会社ノエビア 皮膚外用剤
FR2743723B1 (fr) 1996-01-18 1998-04-17 Texinfine Sa Utilisation d'extrait des plantes de la famille des dictyotales en vue de la realisation de preparations destinees a remanier les elements glycosyles de la matrice extracellulaire de tissus vivants
NO314594B1 (no) † 1997-12-11 2003-04-14 Aqua Bio Technology As Ikke-selvdegraderende endoprotease, fremgangsmåte for fremstilling samt anvendelser av denne
EP1080186A2 (en) 1998-05-27 2001-03-07 Lauras AS Method for altering the activity of proteins of the pka signaling pathway
JP4643800B2 (ja) * 2000-06-16 2011-03-02 エム・ディジャパン株式会社 プロテアーゼ阻害剤
US20050074865A1 (en) 2002-08-27 2005-04-07 Compound Therapeutics, Inc. Adzymes and uses thereof
GB0230006D0 (en) * 2002-12-23 2003-01-29 Ares Trading Sa Proteins
US20040180025A1 (en) * 2003-03-12 2004-09-16 New Life Resources, Llc Therapeutic, nutraceutical and cosmetic applications for eggshell membrane and processed eggshell membrane preparations
EP2292641B1 (en) 2003-11-06 2017-12-06 Danisco US Inc. Expression in filamentous fungi of protease inhibitors and variants thereof
WO2005046710A2 (en) * 2003-11-06 2005-05-26 Genencor International, Inc. Tgf-beta binding and supported peptides
WO2006088945A2 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 The Regents Of The University Of California Granulysin peptides and methods of use thereof
JP2008094726A (ja) 2006-10-06 2008-04-24 Towa Koso Kk マイクロバブル洗浄用組成物、マイクロバブル洗浄方法及びマイクロバブル洗浄装置

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040101580A1 (en) 1999-04-19 2004-05-27 Laboratoires Pharmascience Peptide extract of lupine and pharmaceutical or cosmetic or nutritional composition comprising the same
WO2002066624A2 (en) 2001-02-20 2002-08-29 Lexicon Genetics Incorporated Novel human protease and polynucleotides encoding the same

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GenBank, Accession No.FJ824909 (2009. 4.12.).*
UniProtKB, Accession No.C1KG91 (2009. 5.26.).*

Also Published As

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