KR101833199B1

KR101833199B1 - 왜성정향나무의 추출물로부터 분리한 시린진

Info

Publication number: KR101833199B1
Application number: KR1020160020918A
Authority: KR
Inventors: 김지숙
Original assignee: 김지숙
Priority date: 2016-02-23
Filing date: 2016-02-23
Publication date: 2018-02-28
Also published as: KR20170099050A

Abstract

본 발명은 라일락의 일종인 왜성정향나무의 줄기와 잎을 용매를 사용하여 얻은 추출물로부터 분리한 시린진에 관한 것이다. 왜성정향나무의 잎과 줄기를 용매로써 추출하여 얻은 추출물로부터 크로마토그래피로 분리한 결과 다량의 시린진이 함유되어 있음을 확인할 수 있다.

Description

왜성정향나무의 추출물로부터 분리한 시린진{Syringin separated by Extracts of Syringa velutina var. kamibayashii}

본 발명은 왜성정향나무(Syringa velutina var. kamibayashii)의 추출물로부터 분리한 시린진(syringin, Eleutheroside B)에 관한 것으로, 보다 상세하게는 라일락의 일종인 왜성정향나무의 줄기와 잎을 용매를 사용하여 얻은 추출물로부터 분리한 시린진에 관한 것이다.

시린진(syringin)은 페놀 배당체의 하나로서, 분자식은 C₁₇H₂₆O₁₀이고, 분자량은 385.33 이며, CAS Number는 [118-34-3]이고, 그 구조식은 다음 화학식 1과 같다.

(화학식 1)

시린진은 가시오가피, 라일락, 광나무의 수피(樹皮)나 잎에 많이 포함되어 있으며, 백색 바늘 모양 결정으로서, 녹는점(MP) 192℃, 115℃로 가열하면 결정수를 방출한다. 찬물에 잘 녹지 않으며, 뜨거운 물, 에탄올에 녹으며, 에테르에 녹지 않는다. 수용액 또는 에탄올 용액에 같은 양의 진한 황산을 가하면 암청색이 되며, 진한 질산에는 혈적색으로 녹는다. 묽은 무기산 또는 에물신에서 가수 분해하면 시링게닌과 글루코오스를 얻는다.

또한 시린진은 엘레우테로사이드 B(Eleutheroside B)로도 알려져 있고, 성선(性腺) 촉진, 전낭, 전립선의 중량을 증가시키며, 거세된 동물의 정낭과 전립선의 위축을 예방하는 작용이 있어 정력을 증강시키며, 노화 예방 및 시력과 청력 개선에 도움을 준다, 또한 시린진은 항피로작용, 흥분작용은 인삼의 사포닌과 비슷하며, 특히 간 손상에 대해 효과적인 것으로 알려져 있으며, 혈관 확장과 피로 회복, 항경련, 항스트레스 작용에 효과적인 것으로 보고되고 있다.

한편, Siberian Ginseng이라 불리기도 하는 가시오가피는 다양한 신체의 부조화에 확실한 치료약의 재료로 쓰였고, 그 성분 중 Eleutheroside E는 다양한 알레르기 질병의 치료제로 아시아에서 고대부터 쓰여 졌으나, 시린진에 대해서는 여전히 그 기전을 명확히 밝힌 연구는 없었다.

시린진과 관련한 종래기술로서, 하기 비특허문헌 001에 시린진은 가시오가피의 잎에 45.6㎎/kg, 줄기에 85.8㎎/kg, 뿌리에 225㎎/kg 가 함유되어 있음을 고성능 액체크로마토그래피(HPLC) 성분분리 실험으로부터 밝히고 있다.

그러나 현재까지 왜성정향나무, 특히 그의 잎과 줄기는 그 사용방법에 관한 연구가 전무하여 사용방법을 알 수 없었고, 그에 관한 약리 효과에 대한 연구는 시도된 바도 없는 실정이다.

따라서, 본 발명자들은 시린진을 다량으로 채취할 수 천연재료를 찾아 연구를 계속하던 중 왜성정향나무의 잎, 줄기 추출물이 시린진을 다량으로 함유하고 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

"Effects of the Extracts from Eleotherococcus senticosus Maxim. on Histamine-release from Rat's Mast Cell"Korean J. Plant Res. 24(3) : 324~329(2011)

본 발명은 왜성정향나무의 잎, 줄기를 용매 추출하여 얻은 추출물로부터 분리한 시린진의 제공을 그 과제로 한다.

본 발명은 왜성정향나무의 추출물로부터 분리한 화학식 1의 시린진(Syringin)을 제공한다.

(화학식 1)

한편, 본 발명에 의한 그 밖의 구체적인 과제의 해결수단은 발명의 상세한 설명에 기재되어 있다.

본 발명에 의한 왜성정향나무의 추출물로부터 분리한 시린진은 왜성정향나무의 잎과 줄기를 용매로써 추출하여 얻은 추출물로부터 크로마토그래피로 분리한 결과 다량의 시린진이 함유되어 있음을 확인할 수 있다. 또한 본 발명에 의한 왜성정향나무의 추출물로부터 시린진을 분리하는 방법은 왜성정향나무의 잎과 줄기에 함유되어 있는 시린진을 다량으로 분리할 수 있다.

도1은 왜성정향나무 잎 추출물의 HPLC/UV 크로마토그램이다.

이하에서는 본 발명을 실시예, 비교예, 도면 등을 참고하여 상세하게 설명하기로 한다.

먼저, 본 발명은 왜성정향나무의 추출물로부터 분리한 화학식 1의 시린진(Syringin)을 특징으로 한다.

(화학식 1)

본 발명에 의한 왜성정향나무 잎과 줄기 추출물은 각 재료를 유기용매로써 추출하여 얻을 수 있는데, 그 종류로서는 저급 알콜, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 헥산 등을 예시할 수 있다. 저급 알콜로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 예시할 수 있으며, 그 중 에탄올이 가장 바람직하고, 그 농도는 95%의 것을 사용할 수 있다.

구체적으로는 왜성정향나무의 잎과 줄기를 음건(陰乾) 세절하여 95% 에탄올에 3일간 침지한 후에 50℃에서 20분간 추출할 수 있다. 이어서 추출액을 여과하고 감압 건조하여 얻어진 추출여액을 Freezing dryer(Biotrn Co., USA)에서 cold trap 70℃와 chamber 온도 40℃에서 24시간 동안 동결 건조하여 왜성정향나무 추출물을 얻을 수 있다.

계속하여 왜성정향나무의 추출물 분석을 위한 HPLC(Waters 2695 system, Waters Co. USA)는 Agilent 1200 시리즈로서 autosampler, column oven, binary pump, DAD detector(Agilent Technologies, Germany), degasser(Agilent Technologies, Japan)를 사용할 수 있으며, 소프트웨어는 Agilent사의 Chemstation software(Agilent Technologies, USA)를 사용한다. HPLC 조건으로 컬럼 오븐의 온도는 25℃, 분석파장은 250㎚, 유속은 0.3㎖/min를 사용하고, 컬럼은 Luna C18 column(250㎜ⅹ4.6㎜ particle size 5㎛, Phenomenex, USA)를 사용한다. 용매로서는 100% 3차 증류수 및 100% 아세토니트릴에 각각 0.1% 포름산을 첨가하여 사용할 수 있다.

이렇게 하여 본 발명에 의한 왜성정향나무의 추출물로부터 분리한 화학식 1의 시린진(Syringin)과 별도로 다음 화학식 2로 표시되는 이수리엔틴(Isoorientin, Eleutheroside E라고도 함)을 얻을 수 있다. 이수리엔틴은 화학식 C₃₄H₄₆O₁₈이고, 분자량은 742.71이며, CAS Number는 [39432-56-9]이다.

(화학식 2)

나아가 왜성정향나무의 추출물로부터 화학식 1의 시린진(Syringin)을 분리하는 방법은 1) 왜성정향나무의 잎과 줄기를 에탄올에 3일간 침지한 후에 50℃에서 20분간 추출하는 제 1단계; 2) 제 1단계에서 추출 후 여과하고 감압 건조하여 추출여액을 얻는 제2단계; 3) 제 2단계에서 얻어진 추출여액을 동결 건조하여 추출물을 얻는 제 3단계; 4) 제 3단계에서 얻어진 추출물을 크로마토그래피로 분리하여 시린진을 얻는 제 4단계;를 포함하는 것을 특징으로 한다.

이하에서는 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 하는 예시적인 것일 뿐이고, 이에 의해 본 발명의 기술적 사상의 본질이 변하거나 범위가 축소되는 것은 아니다. 하기 실시예에서 제시되지 않은 여러 가지 실시예 및 적용예들이 가능함은 당업자에게 있어 당연할 것이다.

<실시예 1> 왜성정향나무의 추출물

왜성정향나무에서 음건(陰乾)된 잎과 줄기 총 200g을 적절한 크기로 세절하고 나서 추출기(ASE 300, DIONEX Co., USA)에 투입하여 95% 에탄올 1.5L에 3일간 침지한 후에 50℃에서 20분간 추출하여 추출액을 얻었다. 이어서 추출액을 종이 필터인 Watman #2 로 여과하고 감압 건조하여 얻어진 추출여액을 Freezing dryer(Biotrn Co., USA)에서 cold trap 70℃와 chamber 온도 40℃에서 24시간 동안 동결 건조하여 왜성정향나무의 잎과 줄기 추출물 28.81㎎/g을 얻었다.

<실시예 2> 지표성분에 대한 규격 및 실험방법에 관한 자료

<2-1> 지표성분의 특징

지표성분은 시린진(Eleutheroside B), 이수리엔틴(Eleutheroside E)으로 설정하였다. 실험에 사용한 왜성정향나무(분양번호 003-088, Syringa velutina var. kamibayashii 'Miss Kim', SV_KBS)는 한국생명공학연구원의 한국식물추출물은행으로부터 분양받은 시료로서, 2001년 4월19일에 채집된 물푸레나무과 식물인 왜성정향나무의 잎과 줄기 혼합 추출물이다.

<2-2> 지표성분의 실험방법

고성능 액체 크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography)를 이용하여 상기 추출물 성분은 표준물질의 동정으로 함유된 지표성분량을 분석하였다.

상기 추출물의 주요성분으로는 시린진과 이수리엔틴표준시료 시린진 (Eleutheroside B) Cat No.90974 sigma-aldrich, 이수리엔틴 Cat No.78109 sigma-aldrich이 알려져 있고, 그 중 항아토피 개선 활성성분의 함량분석을 위하여 HPLC-DAD를 통해서 머무름 시간(Retention time)을 비교 분석함으로써 항아토피 개선 활성성분의 패턴을 확인하여 표준물질을 동정하였다.

<2-3> 분석장비

왜성정향나무 추출물 분석을 위한 HPLC(Waters 2695 system, Waters Co. USA)는 Agilent 1200 시리즈로서 autosampler, column oven, binary pump, DAD detector(Agilent Technologies, Germany), degasser(Agilent Technologies, Japan)를 사용하였으며, 소프트웨어는 Agilent사의 Chemstation software(Agilent Technologies, USA)를 사용하였다.

HPLC 조건으로 컬럼 오븐의 온도는 25℃, 분석파장은 250㎚, 유속은 0.3㎖/min를 사용하였고, 컬럼은 Luna C18 column(250㎜ⅹ4.6㎜ particle size 5㎛, Phenomenex, USA)를 사용하였다. 용매로서는 100% 3차 증류수 및 100% 아세토니트릴에 각각 0.1% 포름산을 첨가하여 사용하였으며 용매계는 용매기울기 조건으로서 다음 [표 1]과 같다. 지표성분으로 시린진(Eleutheroside B)과 이수리엔틴을 표준시료(시린진, Eleutheroside B, Cat No.90974 sigma-aldrich, 이수리엔틴 Cat No.78109 sigma-aldrich)와 왜성정향나무 추출물에서의 성분분석을 하였다.

HPLC-DAD의 용매 기울기 조건

시간/분	100% 3차 증류수(%)	100% 아세트니트릴(%)
0~10	92	8
30	78	22
31	0	100
45	0	100
46	92	8
60	92	8

* 상기 용매는 각각 0.1% 포름산을 첨가하여 사용

<실시예 3> 지표성분 함량

[도 1]에 왜성정향나무 추출물 성분에 함유된 표준물질의 동정에 있어 HPLC-DAD를 통해서 머무름 시간의 일치를 통하여 표준물질 왜성정향나무 추출물의 패턴[도 1B]과 시린진[도 1A]을 확인하여 동정하였으며, 왜성정향나무 추출물의 시린진 함량은 15.252㎎/ｇ이고, 미리 표준분석에 의하여 동정한 이수리엔틴은 왜성정향나무 추출물에서의 함량이 6.06㎎/ｇ으로 분석되었다(표 2).

왜성정향나무 추출물의 성분분석 결과

	용량 (㎎/㎖)	Rt(min)	면적	화합물(%)	화합물 (㎎/ｇ)
시린진	0.1	11.401	4,956,683	100
왜성정향나무 추출물 (시린진)	30.0	11.571	22,679,787	1.5252	15.252
이수리엔틴	0.1	25.211	4,584,361	100
왜성정향나무 추출물 (이수리엔틴)	20.0	25.217	11,205,617	0.606	6.06

<비교예>

실시예와 비교하여 왜성정향나무의 잎과 줄기를 사용하는 대신에 가시오가피 나무의 잎, 줄기를 사용하는 점만 다를 뿐 나머지는 동일하게 하여 추출한 후에 거성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 분리한 결과, 시린진 0.1314㎎/g을 얻을 수 있었다.

<실험예>

1. 왜성정향나무 추출물의 지표성분 분석

본 발명의 실험에 사용한 왜성정향나무(분양번호 003-088, Syringa velutina var. kamibayashii 'Miss Kim')는 한국생명공학연구원의 한국식물추출물은행으로부터 분양받은 시료로서, 2001년 04월19일에 채집된 물푸레나무과 식물인 왜성정향나무의 잎과 줄기 추출물이고, HPLC를 이용하여 상기 추출물의 성분은 표준물질의 동정으로 함유된 지표성분량을 분석하였다. 상기 추출물의 주요성분으로 시린진과 이수리엔틴표준시료, Syringin(Eleutheroside B) Cat No.90974 sigma-aldrich, 이수리엔틴 Cat No.78109 sigma-aldrich이 알려져 있고, 그 중 항아토피 개선 활성성분의 함량분석을 위하여 HPLC-DAD를 통해서 머무름 시간을 비교 분석함으로써 항아토피 개선 활성성분의 패턴을 확인하여 표준물질을 동정하였다.

<실험분석 결과>

실시예에서 얻은 왜성정향나무 추출물에 대한 HPLC 성분분리 실험 결과 시린진의 함량은 15.252㎎/g이고(표 2), 비교예의 가시오가피 추출물에 의한 시린진의 함량은 0.1314㎎/g으로 확인되었다. 이는 왜성정향나무의 잎과 줄기 추출물의 시린진의 함유량이 비교예에 의한 가시오가피의 잎과 줄기로부터 얻은 시린진의 함유량 보다 116배나 많은 함유량임을 처음으로 입증한 것이다.

Claims

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1) 왜성정향나무 잎과 줄기를 95% 에탄올에 3일간 침지한 후에 50℃에서 20분간 추출하는 제 1단계;
2) 제 1단계에서 추출 후 여과하고 감압 건조하여 추출여액을 얻는 제2단계;
3) 제 2단계에서 얻어진 추출여액을 동결 건조하여 추출물을 얻는 제 3단계;
4) 제 3단계에서 얻어진 추출물을 크로마토그래피로 분리하여 시린진을 얻는 제 4단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 왜성정향나무의 추출물로부터 화학식 1의 시린진(Syringin)을 분리하는 방법.

(화학식 1)
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