KR101826673B1 - 더덕 추출물을 함유하는 장 건강 개선용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 명세서에는 신규한 용도로 사용되는, 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물이 개시된다. 일 측면에서 있어서, 본 발명의 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 장내 유익균의 증식을 촉진하고, 유해균의 증식을 억제하고, 장내 단쇄 지방산의 함량을 증가시키키며, 장내 균총을 개선할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을 이용하면, 장 건강 또는 장 기능을 개선할 수 있으며, 배변 기능을 개선할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을 프로바이오틱스와 병용하면, 프로바이오틱스와의 시너지 효과를 얻을 수 있다. 한편, 본 발명의 더덕 추출물을 포함하는 조성물은, 천연 재료를 이용하여 제조되기 때문에, 인체에 부작용이 없는 장점이 있다.

Description

더덕 추출물을 함유하는 장 건강 개선용 조성물{Composition for improving intestinal health containing Codonopsis lanceolata}
본 명세서에는 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물의 신규한 용도가 개시된다.
최근 인체 내 미생물, 그 중에서도 장내미생물과 인체질병과의 밀접한 상관관계가 지속적으로 보고되고 있다. 따라서, 장내 미생물을 이용하여 인간의 건강을 개선시키고자 하는 연구가 계속되고 있다. 특히, 체내에서 유익한 효과를 주는 것으로 알려진 프로바이오틱스에 대한 연구가 활발히 진행 중이며, 장 건강과 관련된 것으로 알려진 유산균이 효과적으로 작용할 수 있도록 유산균을 장까지 전달하기 위한 기술, 장내에서의 생존력을 증강시키기 위한 기술 등이 그 예시이다.
Hossen et al., Phytotherapy Research, 30, 347-356, 2016
일 측면에서, 본 발명의 목적은, 장내 균총을 개선하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 장내 유익균의 증식을 촉진하고, 유해균의 증식을 억제하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 프로바이오틱스의 효과를 증강시키는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 장 건강 또는 장 기능을 개선시키는 것이다.
일 측면에서, 본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 균총 개선용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은, 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연 프리바이오틱스(natural prebiotics) 조성물 혹은 프로바이오틱스(probiotics) 효능 증강용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은, 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 장건강 개선용 또는 장기능 개선용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은, 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물 및 설명서를 포함하는 장 건강 개선용 키트를 제공한다.
일 측면에서 있어서, 본 발명의 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 장내 유익균의 증식을 촉진하고, 유해균의 증식을 억제하고, 장내 단쇄 지방산의 함량을 증가시키며, 장내 균총을 개선할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을 이용하면, 장 건강 또는 장 기능을 개선할 수 있으며, 배변 기능을 개선할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을 프로바이오틱스와 병용하면, 프로바이오틱스와의 시너지 효과를 얻을 수 있다. 한편, 본 발명의 더덕 추출물을 포함하는 조성물은, 천연 재료를 이용하여 제조되기 때문에, 인체에 부작용이 없는 장점이 있다.
도 1은 프락토올리고당(FOS), 클로람페니콜, 더덕추출물을 투여 시, 정상배지 조건에서 장내미생물의 생장을 확인한 도이다.
도 2는 프락토올리고당(FOS), 클로람페니콜, 더덕추출물을 투여 시, 고단백섭취 모사 조건에서 장내미생물의 생장을 확인한 도이다.
도 3는 프락토올리고당(FOS), 클로람페니콜, 더덕추출물을 투여 시, 베타-글루쿠로니데이즈 (β-glucuronidase) 효소 활성을 확인한 도이다.
도 4은 프락토올리고당 (FOS), 클로람페니콜, 더덕추출물을 투여 시, 트립토파네이즈(tryptopanase) 효소 활성을 확인한 도이다.
더덕 (Codonopsis lanceolata (Siebold & Zucc.) Trautv.)은 초롱꽃과에 속하는 여러해살이 덩굴식물로, 뿌리, 줄기, 잎 모두가 식용 가능한 식품이다. 더덕은 생약으로도 이용되는데, 생약명은 사엽삼(四葉參, Codonopsidis Radix), 양유(羊乳)이다. 더덕은 다양한 약효를 가지고 있는 것으로 알려져 있는데, 대표적으로 기관지염, 감기, 경련, 신경증, 암, 비만, 고지혈증, 부종, 간염 등에 치료효과가 있는 것으로 알려져 있다. 하지만 아직까지 더덕 혹은 더덕추출물이 장내균총 개선효과 또는 장기능 개선 효과가 있는지에 대해서는 전혀 알려진 바가 없다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
일 측면에서, 본 발명은, 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 균총 개선용 조성물이다.
본 명세서에서 장내 균총 개선이란, 장내 유익균의 생장은 촉진하고, 장내 유해균의 생장은 억제하되, 장내 유익균과 유해균의 균형을 유지하는 것을 의미할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은, 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 프로바이오틱스 효능 증강용 조성물이다.
본 명세서에서 프로바이오틱스는 체내에서 건강에 좋은 영향을 미치는 미생물을 의미할 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 본 발명의 조성물은, 프리바이오틱스로써 기능할 수 있다. 프리바이오틱스란, 유익균을 포함하는 미생물에 의해 이용되어 미생물의 생육이나 활성을 촉진함으로써 숙주의 건강에 좋은 효과를 나타내게 하는 성분을 의미할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은, 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 장건강 개선용 또는 장기능 개선용 조성물이다.
본 명세서에서 추출물은, 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 또한 천연물의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이며, 구체적으로 상기 가공 또는 처리는 추출물을 추가적으로 발효, 또는 효소처리 하는 것일 수 있다. 따라서 본 명세서에서 추출물은 발효물, 농축물, 건조물을 포함하는 광범위한 개념이다.
본 명세서에 사용된 더덕 추출물을 제조하는 방법은 특별히 제한되지 않으며 본 명세서에서 더덕 추출물은 더덕으로부터 침출, 전출하여 얻은 침출액, 그 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물, 다시 그 농축물을 건조시켜 제조한 추출 엑기스, 또는 추출액 중에 포함되고 있는 주된 효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.
더덕을 용매로 추출 시, 더덕의 약 1 내지 15배 정도에 해당하는 용매를 가하여 추출할 수 있으며, 구체적으로 약 10 배의 용매를 가하여 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출은 가열 추출, 냉침 추출, 환류냉각 추출, 또는 초음파 추출 등이 이용될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없다. 상기 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 약 40 내지 100℃, 더욱 바람직하게는 약 80℃의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 바람직하게는 약 2 내지 4시간, 더욱 바람직하게는 약 3 시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 3회 연속 추출하여 합한 추출액을 이용할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 더덕은 추출물의 형태로 포함되거나, 생약 자체의 분쇄물, 또는 생약의 건조 분쇄물로서 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 아울러 본 명세서에서 사용되는 더덕은 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
상기와 같은 측면에서, 상기 조성물은, 장내 유익균의 증식 또는 생장을 촉진할 수 있고, 또는, 장내 유해균의 증식 또는 생장을 억제할 수 있다.
본 명세서에서 장내 유익균이란, 장내에 서식하고 있으면서 인체에 유익한 효능을 미치는 미생물을 총칭할 수 있다. 예컨대, 장내 유익균은 프로바이오틱스를 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 장내 유익균은 제한되지 않고, 비피도박테리움(Bifidobacterium), 락토바실러스(Lactobacillus), 락토코커스(Lactococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 아커멘시아(Akkermansia), 패컬리박테리움(Faecalibacterium), 또는 엔테로코커스(Enterococcus)를 포함할 수 있다.
한편, 본 명세서에서 장내 유해균이란, 장내에서 서식하고, 장염 등과 같이 인체에 해로운 효과를 미치는 미생물을 총칭할 수 있다. 예컨대, 상기 장내 유해균은, 제한되지 않고, 대장균(Escherichia coli), 푸소박테리움(Fusobacterium), 또는 클로스트리듐(Clostridium), 또는 포피로모나스 (Porphyromonas)를 포함할 수 있다.
일 측면에서, 상기 조성물은, 베타-글루쿠로니데이즈의 활성을 억제할 수 있다. 베타-글루쿠로니데이즈는, 장내 유해균의 마커로서, 베타-글루쿠로니데이즈의 활성이 감소하면, 장내 유해균의 생장이 억제된 것임을 알 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 상기 조성물은 트립토파네이즈(tryptophanase)의 활성을 억제할 수 있다. 트립토파네이즈는, 장내 유해균의 마커로서, 트립토파네이즈의 활성이 감소하면, 장내 유해균의 생장이 억제된 것임을 알 수 있다.
일 측면에서, 상기 조성물은, 장내 단쇄 지방산의 함량을 증가시킬 수 있다. 본 명세서에서 단쇄 지방산(Short-chain fatty acids)이란, 6개 이하의 탄소 원자를 포함하는 지방산을 의미할 수 있다. 상기 단쇄 지방산은, 아세테이트, 프리피오네이트(propionate), 이소부티레이트(isobutyrate), 부티레이트(butyrate), 이소발레이트(isovalerate) 및 발레이트(valerate)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
또한, 상기와 같은 측면에서 상기 조성물은, 배변 기능을 개선할 수 있다. 배변 기능 개선이란, 예컨대 불규칙한 배변을 규칙적으로 하거나, 변비 또는 설사 증세를 개선하는 것을 포함할 수 있다.
일 측면에서, 상기 더덕 추출물은, 건조 중량으로, 조성물 총 중량을 기준으로, 0.1 내지 100% 포함될 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 상기 조성물은, 건강 식품 조성물 또는 약학적 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 건강 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료, 특히 프로바이오틱스 함유 조성물과 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
본 발명의 일 관점인 약학적 조성물에 있어서, 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 상기 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 1 내지 2000 mg/kg/day로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
본 발명의 일 관점에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 상기 더덕 추출물은, 더덕의 지상부 또는 지하부의 추출물을 포함할 수 있다. 더덕의 지상부는 더덕의 줄기, 잎, 꽃 및 열매를 포함할 수 있고, 지하부는 뿌리를 포함할 수 있다. 상기 더덕 추출물은 상기 더덕의 지상부의 일 부위 또는 지상부의 2 이상의 부위를 포함하는 추출물일 수 있고, 지상부 및 지하부 혼합물을 추출한 것일 수 있다.
일 측면에서, 상기 더덕 추출물은, 물 추출물, 유기용매 추출물 또는 유기용매 수용액 추출물을 포함할 수 있다. 일 측면에서, 상기 유기용매는, 유기 용매로는 헥산, 메틸렌클로라이드, 알코올 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기에서 물은 증류수 또는 정제수를 포함하고, 유기 용매는 C1~C5의 저급 알코올을 예로 들 수 있는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 메탄올, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기와 같은 측면에서, 상기 유기용매 수용액의 농도는 0.1% 내지 99%(v/v)일 수 있다. 예컨대, 1% 이상, 5% 이상, 10 % 이상, 20 % 이상, 25 % 이상, 50 % 이상, 55 % 이상, 60 % 이상, 65 % 이상, 70 % 이상, 75 % 이상, 80 % 이상, 85 % 이상, 90 % 이상, 95 % 이상 또는 97 % 이상의 유기용매 수용액일 수 있고, 99% 이하, 95% 이하, 90% 이하, 85% 이하, 80% 이하, 75% 이하, 70% 이하, 65% 이하, 60% 이하, 55% 이하, 50% 이하, 45% 이하 또는 40% 이하의 유기용매 수용액일 수 있으나, 이제 제한되는 것은 아니다. 예컨대, 85~99%의 에탄올 추출물일 수 있다.
일 구현 예에서, 상기 더덕 추출물은 95% 에탄올 추출물일 수 있다.
본 발명은 일 측면에서, 상기 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물 및 설명서를 포함하는, 장 건강 개선용 키트이다.
상기 설명서에는, 상기 조성물을 1 내지 2000 mg/kg/day의 투여량으로 경구투여하는 내용을 포함할 수 있다. 또한, 상기와 같은 측면에서, 상기 설명서에는 프로바이오틱스를 포함하는 조성물과 병용 투여할 것을 포함할 수 있다.
상기 프로바이오틱스를 포함하는 조성물은, 프로바이오틱스를 포함하는 건강 식품 조성물 또는 약학적 조성물을 포함할 수 있고, 예컨대, 유산균을 함유하는 유발효물일 수 있다.
또한, 본 명세서에서 병용은, 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물과 프로바이오틱스를 함유하는 조성물을 동시에 투여하는 것, 또는 둘 중 어느 하나를 먼저 투여한 후 나머지 하나를 투여하는 것을 모두 포함하는 의미로 사용된다.
일 구현예에서, 상기 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물과 프로바이오틱스를 함유하는 조성물은 객체에 동시에 투여될 수 있다.
이하, 하기의 실시예 및 실험예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1] 더덕 추출물의 제조
농가에서 구입(강원도 평창)한 더덕을 물로 깨끗하게 세척한 후 껍질째 적당한 크기로 분쇄하여, 추출용기에 더덕 2.0 kg 과 95% 에탄올 총 3 L를 가하여 상온에서 24시간 1회 추출하였음. 추출액을 거름종이로 여과 후 용매를 감압 농축하여 85.49 g의 95% 에탄올 추출물을 수득하였다.
[시험예 1] 인체 대변 시료의 확보
장내 미생물 배양을 위해 3개월 내에 항생제 처방을 받은 적이 없는 7명의 건강한 한국인 청년들로부터 10-30 g의 대변 시료를 확보하였고, 이를 30분 이내에 혐기성 작업대로 옮겨 신속하게 섞어주었다. 동결보존을 위한 첨가제로 글리세롤을 넣어준 후 40 mL씩 분주하여 초저온 냉동고에 보관하였고 이를 장내 미생물 배양을 위한 접종용 시료로 사용하였다.
[시험예 2] 장내미생물 연속식 혐기 배양
장내 미생물의 배양 상태를 안정적으로 일정하게 유지하기 위해 생물반응기를 이용한 연속식 혐기 배양을 수행하였다. 배양에 사용한 기본 배지는 표 1과 같고 고단백질 섭취군의 배지를 모사하기 위해서는 표 2의 배지를 사용하였다.
기본 배지 조성
성분 함량 (g/L)
Peptone 1.3
Yeast extract 2
NaHCO3 2
L-Cystein-HCl 0.5
Bile salts 0.5
Hemin 0.005
NaCl 0.8
KH2PO4 0.04
K2HPO4 0.04
MgSO4 0.01
CaCl2 0.01
Mucin 4
Arabinogalactan 5
Starch 5
Vitamin K1 10 (μL)
고단백질 섭취 모사 배지
성분 함량 (g/L)
Peptone 1.3
Yeast extract 2
NaHCO3 2
L-Cystein-HCl 0.5
Bile salts 0.5
Hemin 0.005
NaCl 0.8
KH2PO4 0.04
K2HPO4 0.04
MgSO4 0.01
CaCl2 0.01
Mucin 4
Casein 8
Starch 2
Vitamin K1 10 (μL)
300 mL의 배지가 담긴 각 생물반응기는 멸균 후 질소 가스 주입을 통해 혐기 상태로 유지된 후 시험예 1의 미리 준비된 장내 미생물 시료가 접종되었다. 24시간 동안 회분식 배양을 수행한 후 같은 조성의 배지를 이용하여 연속식 배양을 수행하였으며 배지의 총 머무름 시간은 24 시간으로 유지되었다. 배양온도는 37℃로 유지되었고, pH는 1N 염산 용액과 1N 수산화나트륨 용액을 이용하여 5.5로 유지되었다. 배양용액은 매일 1회씩 시료를 회수하여 안정화 여부 확인을 위한 단쇄 지방산 (short chain fatty acid, SCFA) 분석에 이용하였고 총 30 일 이상 배양을 유지하였다.
[시험예 3] 장내균총/배변기능 개선 효능 탐색
후보 소재의 장내 미생물총 개선 효능을 신속하게 평가하기 위해 96웰 플레이트를 이용하여 배양을 수행하였다. 연속식 혐기 배양을 통해 안정적으로 유지되고 있는 장내 미생물 배양액 10 μL를 표 3과 같은 조성의 탐색용 배지 1 mL에 접종하였다. 이때 장내 미생물총 개선 효능 평가를 위한 더덕추출물은 100 μg/mL의 농도 (0.2% DMSO)로 처리되었고 48시간 동안 37℃의 온도에서 배양되었다. 이때 양성대조군으로써는 장내균총 개선효과가 잘 알려져 있는 대표적인 프리바이오틱스 소재인 프락토올리고당 (Fructooligosaccharides, FOS, 1 mg/mL)을 사용하였으며, 이와 동시에 장내균총을 망가뜨리는 것으로 알려져 있는 항생제인 클로람페니콜 (10 or 40 μg/mL)을 사용하여 장내균총 개선효과를 비교하였다. 이후 미생물 배양액을 이용하여, 장내미생물 생장정도 측정, 유해균 효소활성 측정, 단쇄지방산 함량 측정 등을 통해 장내균총 개선 효능을 검증하였다.
탐색용 배지 조성
성분 함량 (g/L)
Peptone 1.3
Yeast extract 2
NaHCO3 2
L-Cystein-HCl 0.5
Bile salts 0.5
Hemin 0.005
NaCl 0.8
KH2PO4 0.04
K2HPO4 0.04
MgSO4 0.01
CaCl2 0.01
Mucin 0.8
Arabinogalactan 1
Starch 1
Vitamin K1 10 (μL)
[시험예 3-1] 장내 미생물 생장정도 측정
프락토올리고당 (FOS), 항생제, 더덕추출물이 처리된 배양액을 100 μL씩 96웰 플레이트로 옮긴 다음, Plate reader기를 이용하여 흡광도 600 nm를 측정하여, 상대적인 미생물 생장을 측정하였다. 그 결과, 더덕추출물은 장내균의 생장을 높여주는 효과가 있음을 확인하였다. 구체적으로, 기존에 장내균총 개선효과가 입증된 프리바이오틱스 소재인 프락토올리고당(FOS)은 장내균의 생장을 높이는 반면, 장내균총을 망가뜨리는것으로 알려져있는 항생제(클로람페니콜) 투여 시 장내균의 생장이 낮아짐을 확인할 수 있었다. 더덕추출물 투여 시에는 장내균의 생장이 높아졌으며 따라서 더덕추출물은 장내균총 개선효과가 있음을 확인 할 수 있었다. 더덕추출물의 장내균총 생장촉진 효과는 정상배지조건(도 1) 뿐만아니라 고단백질 섭취모사 배양조건(도 2)에서도 동시에 확인 할 수 있었다.
[시험예 3-2] 장내 미생물 배양액의 β-glucuronidase 활성측정
프락토올리고당 (FOS), 항생제, 더덕추출물이 처리된 장내 미생물배양액을 이용하여 베타-글루쿠로니데이즈의 활성을 측정하였다. 베타-글루쿠로니데이즈 활성 측정은 장건강 효능을 검증하기 위해 이용되는 표준 시험항목이다. 장내 미생물배양액은 배양용액과 함께 퍼멘터에서 혐기조건으로 배양, 유지하였다. 혐기배양용액 1.0 mL에 프락토올리고당 (FOS), 항생제, 더덕추출물을 처리한 후 장내 미생물 배양액 10 μL를 접종하였다. 혐기적 배양기에서 37℃로 48 시간 배양 후 효소액 시료로 사용하였다. 96-웰 플레이트에 20 mM 4-nitrophenyl-β-D-glucuronide 20 μL를 첨가하고, 효소액 80 μL를 첨가하여 37℃에서 60분간 반응시킨다. 0.5N NaOH 100 μL를 가하여 반응을 종결시킨 후 3500 rpm에서 10분간 원심분리하였으며, 상층액을 취하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이후 장내미생물의 생장 정도를 보정하기 위해 효소활성을 장내균생장 정도 (OD600)값으로 나눠줌으로써 최종 상대적인 베타-클루쿠로니데이즈 활성(%)을 계산하였다. 그 결과, 기존에 장내균총 개선효과가 입증된 프리바이오틱스 소재인 프락토올리고당(FOS)은 베타-글루쿠로니데이즈 활성을 낮추는 반면, 장내균총을 망가뜨리는 것으로 알려져있는 항생제(클로람페니콜) 투여 시 장내균 배양액에서 베타-글루쿠로니데이즈 활성을 높임을 확인할 수 있었다. 더덕추출물 투여 시 베타-글루쿠로니데이즈 활성이 낮아졌으며 따라서 더덕추출물은 장내균총 개선효과가 있음을 확인 할 수 있었다(도 3).
[시험예 3-3] 장내 미생물 배양액의 tryptophanase 활성측정
프락토올리고당 (FOS), 항생제, 더덕추출물이 처리된 장내 미생물배양액을 이용하여 tryptophanase (트립토파네이즈) 활성을 측정하였다. 트립토파네이즈 활성 측정은 장건강 효능을 검증하기 위해 이용되는 표준 시험항목이다. 장내 미생물배양액은 배양용액과 함께 퍼멘터에서 혐기조건으로 배양, 유지하였다. 혐기 배양용액 1.0 mL에 천연물 시료를 처리한 후 장내 미생물 배양액 10 μL를 접종하였다. 혐기적 배양기에서 37℃로 48시간 배양 후 효소액 시료로 사용하였다. Prydoxal phosphate 2.75 mg, disodium EDTA dehydrate 19.6 mg, bovine serum albumin 10 mg을 0.05 M potassium phosphate buffer (pH 7.5) 100 mL에 녹여 반응혼합용액을 제조하였다. 96-웰 플레이트에 이 반응 혼합용액 40 μL와 배양시료 20 μL, 40 mM 트립토판 40 μL를 잘 혼합하여 37℃에서 60분간 반응시킨다. 발색시약 (p-demethylaminobenzaldehyde 14.7 g, 95% 에탄올 948 mL, H2SO4 52 mL) 100 μL를 가하여 반응을 종결시킨 후 3500 rpm에서 10 분간 원심 분리하였으며, 상층액을 취하여 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이후 장내미생물의 생장 정도를 보정하기 위해 효소활성을 장내균생장 정도 (OD600)값으로 나눠줌으로써 최종 상대적인 트립토파네이즈 활성 (%)을 계산하였다. 그 결과, 기존에 장내균총 개선효과가 입증된 프리바이오틱스 소재인 프락토올리고당 (FOS)은 트립토파네이즈 활성을 낮추는 반면, 장내균총을 망가뜨리는 것으로 알려져있는 항생제 (클로람페니콜) 투여 시 장내균 배양액에서 트립토파네이즈 활성을 높임을 확인할 수 있었다. 이때 더덕추출물 투여 시 트립토파네이즈 활성이 낮아졌으며 따라서 더덕추출물은 장내균총 개선효과가 있음을 확인 할 수 있었다(도 4).
[시험예 3-4] 단쇄지방산 함량 분석
프락토올리고당 (FOS), 항생제, 더덕추출물이 처리된 장내 미생물배양액에서 단쇄지방산 (short chain fatty acid, SCFA) 함량분석을 위하여, 가스크로마토그래피 (GC) 분석을 실시 하였다. 분석시료는 96웰 플레이트를 3500 rpm에서 10 분간 원심분리하여 얻은 상징액 400 μL 에 50% 황산 (sulfuric acid) 20 μL 를 넣어주어 안정화를 시킨 후, 표준물질 (internal standard, 1% 2-methyl pentanic acid) 40 μL 를 넣고 여기에 에틸에테르 (ethyl ether) 400 μL 를 첨가 후 약 2분간 볼텍스(vortex) 이용 혼합하였다. 이 시료를 원심분리 한 후 상층부에 있는 에틸에테르 층을 회수 GC 분석을 실시하였다. 분석에 사용된 기기는 Bruker 450-GC 모델이며, 컬럼은 Supelco사의 Nukol Fused silica capillary column (30 mm × 0.25 mm × 0.25 μm)을 사용하였으며, 분석 조건은 표 4와 같다.
가스크로마토그래피 분석조건
실험조건
Injector 225℃
Oven Initial 110℃, 5.5℃/min, 15 min
Detector FID, 225℃
Carrier gas 2.0 mL/min, helium flow 30 mL/min
injection 2 μL, 3:1 split
그 결과, 무처리 대조군에서는 단쇄지방산 함량이 18.6 mM로 측정되었다. 반면, 기존에 장내균총 개선효과가 입증된 프리바이오틱스 소재인 프락토올리고당(FOS) 처리시 단쇄지방산 함량은 25.41 mM로 높아졌으며, 장내균총을 망가뜨리는 것으로 알려져있는 항생제 (클로람페니콜) 투여 시에는 단쇄지방산 함량이 2.03 mM로 현저히 낮아짐을 확인할 수 있었다. 이때 더덕추출물 투여 시 단쇄지방산 함량은 19.28 mM로 높아짐을 확인할 수 있었다. 따라서 더덕추출물은 장내균총 개선효과가 있음을 확인 할 수 있었다 (표 5).
프락토올리고당(FOS), 클로람페니콜, 더덕추출물을 투여 시 단쇄 지방산 함량변화

단쇄 지방산 비율 (%) 총함량 (mM)
acetate propionate isobutyrate butyrate isovalerate valerate
대조군 46.25
±4.32
15.36
±0.10
4.35
±0.55
25.06
±1.76
8.28
±0.44
0.71
±0.04
18.60
±1.21
프락토올리고당
(FOS)
46.44
±1.79
23.54
±0.33
2.97
±0.54
21.57
±1.37
5.48
±0.25
무검출 25.41
±0.55
항생제
(클로람페니콜)
54.36
±3.23
25.40
±0.89
 무검출 20.24
±0.64
 무검출 무검출  2.03
±0.06
더덕추출물 45.87
±1.16
16.79
±1.16
4.24
±0.84
24.21
±2.30
8.06
±0.59
0.83
±0.002
19.28±1.16

Claims (18)

  1. 더덕의 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 장내 균총 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은,
    프로바이오틱스 효능을 증강시키는 것인, 장내 균총 개선용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은,
    장건강을 개선하거나 장기능을 개선하는 것인, 장내 균총 개선용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은,
    장내 유익균의 증식 또는 생장을 촉진하거나, 장내 유해균의 증식 또는 생장을 억제하는, 장내 균총 개선용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은,
    베타-글루쿠로니데이즈 활성 억제; 트립토파네이즈 활성 억제; 및 장내 단쇄 지방산의 함량 증가 중 어느 하나 이상의 특징을 갖는 것인, 장내 균총 개선용 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 단쇄 지방산은,
    아세테이트, 프리피오네이트(propionate), 이소부티레이트(isobutyrate), 부티레이트(butyrate), 이소발레이트(isovalerate) 및 발레이트(valerate)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인, 장내 균총 개선용 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은, 배변 기능을 개선하는 것인, 장내 균총 개선용 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은, 프리바이오틱스인, 장내 균총 개선용 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 더덕의 에탄올 추출물은, 건조 중량으로, 조성물 총 중량을 기준으로, 0.1 내지 100% 포함되는, 장내 균총 개선용 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은, 건강 식품 조성물인, 장내 균총 개선용 조성물.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 더덕의 에탄올 추출물은, 더덕의 지상부 또는 지하부의 추출물인, 장내 균총 개선용 조성물.
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 제1항에 있어서,
    상기 에탄올의 농도는, 85% 내지 99%(v/v)인, 장내 균총 개선용 조성물.
  17. 제1항 내지 제11항 및 제16항 중 어느 한 항의 조성물; 및 설명서를 포함하고,
    상기 설명서에는, 상기 조성물을 1 내지 2000 mg/kg/day의 투여량으로 경구투여하는 내용을 포함하는, 장 건강 개선용 키트.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 설명서에는, 상기 조성물을 프로바이오틱스를 포함하는 조성물과 병용 투여하는 내용을 포함하는, 장 건강 개선용 키트.
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