KR101807328B1

KR101807328B1 - 경구용 ｄｎａ 손상 수복 촉진제 및 엘라스타아제 활성 억제제

Info

Publication number: KR101807328B1
Application number: KR1020127017366A
Authority: KR
Inventors: 사호 스기모토; 도시로 소네; 가츠요시 지바
Original assignee: 가부시키가이샤 야쿠르트 혼샤
Priority date: 2010-01-06
Filing date: 2010-12-28
Publication date: 2017-12-08
Also published as: TWI565471B; JP5688376B2; WO2011083738A1; EP2522355A1; EP2522355B1; EP2522355A4; MX2012007873A; KR20120112510A; TW201130496A; US20130004463A1; JPWO2011083738A1; BR112012016676A2

Abstract

경구용 DNA 손상 수복 촉진제 및 경구용 엘라스타아제 활성 억제제의 제공.
비피도박테리움속 세균을 유효 성분으로서 함유하는 경구용 DNA 손상 수복 촉진제 및 경구용 엘라스타아제 활성 억제제.

Description

경구용 ＤＮＡ 손상 수복 촉진제 및 엘라스타아제 활성 억제제 {DNA DAMAGE REPAIR PROMOTER FOR ORAL APPLICATION, AND ELASTASE ACTIVITY INHIBITOR FOR ORAL APPLICATION}

본 발명은 경구용 DNA 손상 수복 촉진제 및 엘라스타아제 활성 억제제에 관한 것이다.

DNA 의 손상은 여러 가지 외적 또는 내적 요인에 의해서 야기되는 것으로, 일상적으로 끊임없이 발생하고 있다. 그러나, DNA 손상의 방치는 복제나 전사 등의 중요한 기능을 저해할 뿐만 아니라, 돌연변이가 야기됨에 따라서 암이나 노화 등의 원인이 될 수 있는 것이다.

따라서, 생체는 DNA 손상의 종류에 대응하는 여러 가지 수복 기구에 의해서 보편적으로 DNA 의 손상을 수복하고, 게놈 정보 및 그 기능을 유지하고 있다. 이 수복 기구의 대표예로는, DNA 의 2 본쇄 절단에 대한 상동적 재조합 수복 기구, 활성 산소종에 의한 산화적 염기 손상에 대한 염기 제거 수복 기구, 자외선에 의해서 생성되는 피리미딘 이량체에 대한 뉴클레오티드 제거 수복 기구, 복제 에러에 대한 미스매치 수복 기구 등이 있다.

그러나, 어떠한 원인에 의해서, 수복 기구의 이상이나 기능 저하, 또는 수복 능력을 넘어선 손상이 발생하는 경우가 있다. 이러한 경우에는, 세포는 아포토시스를 일으켜 죽기 쉬워지고, 또한 돌연변이가 유발됨으로써, 장기적인 암화나 노화 등의 프로세스가 촉진되게 된다.

이에 대하여, 손상 요인을 경감시키는 소재가 개발되어 있다. 구체적으로는, 발암성 물질에서 기인하는 대장·간장 중의 DNA 손상 억제에 관한 것으로서, 락토바실러스 가세리 (P79), 락토바실러스 콘프서스 (DSM20196), 스트렙토코쿠스 써모필루스 (NCIM50083), 비피도박테리움 브레브 또는 비피도박테리움 롱검이 대장 내에서 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘에서 기인하는 DNA 손상을 억제하는 것 (비특허문헌 1), 비피도박테리움 애니멀리스 DN-173 010 또는 스트렙토코쿠스 써모필루스 DN-001 158 로 발효시킨 밀크가 대장 내에서 복소환 방향족 아민에서 기인하는 DNA 손상을 억제하는 것 (비특허문헌 2), 및 락토바실러스 불가리쿠스 291, 스트렙토코쿠스 써모필루스 F4, 스트렙토코쿠스 써모필루스 V3 또는 비피도박테리움 롱검 BB536 이 대장이나 간장에 있어서 복소환 방향족 아민에서 기인하는 DNA 손상을 억제하는 것 (비특허문헌 3) 이 보고되어 있다.

그러나, DNA 손상 억제와 DNA 손상 수복과는 상이한 것으로, 상기한 바와 같은 발암성 물질에서 기인하는 DNA 손상 억제는, 경구 섭취한 세균을 소화관의 표면에 흡착시킴으로써, 또는 발암성 물질을 세균 균체로 흡착시켜 배출함으로써, 경구 투여한 여러 가지 발암성 물질의 생체로의 접촉·흡수를 억제하는 것인 점에서, DNA 손상의 수복을 촉진시키는 것은 아닌 것으로 생각되고 있다.

한편, 자외선에서 기인하는 DNA 손상은 피부 세포 중에서의 시클로부탄피리미딘 다이머나 6-4 형 광산물 등이 자외선 노출에 의해 형성됨으로써 생기는 것으로, 최근의 오존층 파괴에 의한 자외선량 증가의 영향에 따라, 당해 DNA 손상의 예방·억제에 관한 개발이 진행되고 있다.

당해 DNA 손상의 예방 방법으로는, 선스크린제 등에 의해 자외선을 흡수 또는 산란시키는 방법이 알려져 있지만, 이 방법에서는 자외선에 의한 피부 장애의 경감이 가능할 뿐으로, 자외선 노출에 의해 DNA 가 손상된 경우에 그 손상의 수복을 촉진시키는 것은 불가능하다. 또한, 자외선 노출에서 기인하는 DNA 손상을 억제하는 화장 조성물로서, 비피도박테리움속 세균의 불활성화 배양물로 이루어지는 제 1 성분과, 당단백질, 탄수화물 폴리머 및 아라비노갈락탄 단백질로 이루어지는 식물 세포외 매트릭스의 추출물인 제 2 성분을 함유하는, UV 조사 유발성 피부 손상에 대항하기 위한 국소 적용의 화장 조성물이 알려져 있다 (특허문헌 1).

그런데, 자외선의 노출은 DNA 의 손상뿐만 아니라, 주름의 형성이나 탄력성 저하 등의 피부의 광 노화를 야기하는 것이다. 이 광 노화 현상의 메카니즘은 완전하게는 해명되어 있지 않지만, 진피 세포외 매트릭스 성분의 변화가 중요한 인자의 하나인 것으로 생각되고 있다. 당해 진피 세포외 매트릭스 성분에는, 콜라겐, 엘라스틴, 글리코사미노글리칸 등이 있고, 이 중 엘라스틴은 탄성 섬유의 주요 단백질이다.

그리고, 자외선에 노출된 피부에서는, 엘라스틴 분해 효소인 호중구 엘라스타아제나 섬유아세포 엘라스타아제 활성이 항진되어 있는 것이 보고되어 있고, 이들 엘라스타아제에 의한 엘라스틴의 양적 질적 변성이 주름 형성이나 탄력성 저하에 기여하고 있는 것으로 생각된다.

이에 대하여, 피부 노화의 방지·개선을 목적으로 한 여러 가지 엘라스타아제 활성 저해제가 제안되어 있으며, 예를 들어, 미용 효과를 목적으로 한 차조기잎의 발효물 (특허문헌 2), 파슬리의 발효물 (특허문헌 3) 또는 피망의 발효물 (특허문헌 4) 을 함유하는 엘라스타아제 활성 저해제가 알려져 있다.

그러나, 상기 발효물의 엘라스타아제 활성 저해는 인간 호중구 유래 엘라스타아제나 돼지 췌장 유래 엘라스타아제 용액에 피험 물질을 첨가하여 실시하는 in vitro 시험에 의해 평가된 것으로, in vivo 시험에서 엘라스타아제 활성 저해가 확인된 것은 아니다. 실제로 피부에 도포한 물질이 엘라스타아제 활성 억제 작용을 발휘하기 위해서는, 유효 성분이 각층과 표피를 투과하여 진피층에 도달할 필요가 있기 때문에, in vivo 에서의 당해 작용이 확인된 엘라스타아제 활성 억제제가 요망되고 있었다.

일본 공개특허공보 2002-255777호 일본 공개특허공보 2006-61091호 일본 공개특허공보 2006-75085호 일본 공개특허공보 2006-76926호

Pool-Zobel BL. et al., Nutr Cancer, 26, 365-80, 1996 Tavan E. et al., Carcinogenesis., 23, 477-83, 2002 Zsivkovits M. et al., Carcinogenesis., 24, 1913-1918, 2003

그러나, 지금까지 비피도박테리움속 세균을 경구 투여함으로써, DNA 손상의 수복을 촉진시킬 수 있는 것이나, 엘라스타아제 활성을 억제할 수 있는 것은 알려져 있지 않았다.

본 발명의 과제는 경구용 DNA 손상 수복 촉진제 및 경구용 엘라스타아제 활성 억제제를 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은 DNA 손상의 수복 촉진, 엘라스타아제 활성의 억제에 관해서 검토한 결과, 생각치 않게도 비피도박테리움속 세균을 경구 섭취함으로써 DNA 손상의 수복을 촉진시킬 수 있는 것 및 엘라스타아제의 활성을 억제할 수 있는 것을 알아내었다.

i) 즉, 본 발명은 비피도박테리움속 세균을 유효 성분으로서 함유하는 경구용 DNA 손상 수복 촉진제를 제공하는 것이다.

ii) 또한 본 발명은 비피도박테리움속 세균을 유효 성분으로서 함유하는 경구용 시클로부탄피리미딘 다이머량 저하 촉진제를 제공하는 것이다.

iii) 그리고 본 발명은 비피도박테리움속 세균을 유효 성분으로서 함유하는 경구용 엘라스타아제 활성 억제제를 제공하는 것이다.

iv) 또 본 발명은 피부 노화 방지·개선제인 상기 iii) 에 기재된 엘라스타아제 활성 억제제를 제공하는 것이다.

v) 그리고 본 발명은 비피도박테리움속 세균을 경구 투여하는 것을 특징으로 하는 DNA 손상 수복 촉진 방법을 제공하는 것이다.

vi) 또한 본 발명은 비피도박테리움속 세균을 경구 투여하는 것을 특징으로 하는 시클로부탄피리미딘 다이머량 저하 촉진 방법을 제공하는 것이다.

vii) 그리고 본 발명은 비피도박테리움속 세균을 경구 투여하는 것을 특징으로 하는 엘라스타아제 활성 억제 방법을 제공하는 것이다.

viii) 또 본 발명은 피부 노화 방지·개선 방법인 상기 vii) 에 기재된 방법을 제공하는 것이다.

ix) 또 본 발명은 경구 투여에 의해 DNA 의 손상을 수복 촉진하기 위해서 사용하는 비피도박테리움속 세균을 제공하는 것이다.

x) 그리고 본 발명은 경구 투여에 의해 시클로부탄피리미딘 다이머량의 저하를 촉진하기 위해서 사용하는 비피도박테리움속 세균을 제공하는 것이다.

xi) 또한 본 발명은 경구 투여에 의해 엘라스타아제 활성을 억제하기 위해서 사용하는 비피도박테리움속 세균을 제공하는 것이다.

xii) 또 본 발명은 피부 노화를 방지·개선하기 위해서 사용하는 것인 상기 xi) 에 기재된 세균을 제공하는 것이다.

xiii) 그리고 본 발명은 경구용 DNA 손상 수복 촉진제 제조를 위한 비피도박테리움속 세균의 사용을 제공하는 것이다.

xiv) 또한 본 발명은 경구용 시클로부탄피리미딘 다이머량 저하 촉진제 제조를 위한 비피도박테리움속 세균의 사용을 제공하는 것이다.

xv) 그리고 본 발명은 경구용 엘라스타아제 활성 억제제 제조를 위한 비피도박테리움속 세균의 사용을 제공하는 것이다.

xvi) 또 본 발명은 피부 노화 방지·개선제 제조를 위한 것인 상기 xv) 에 기재된 사용을 제공하는 것이다.

본 발명에 의하면, 경구 투여함으로써 DNA 손상의 수복을 촉진할 수 있다. 따라서, 본 발명의 경구용 DNA 손상 수복 촉진제는 DNA 손상의 수복을 촉진하기 위한 의약품, 음식품 등으로서 유용하다.

또한, 본 발명에 의하면, 경구 투여함으로써 엘라스타아제의 활성을 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 경구용 엘라스타아제 활성 억제제는 피부의 노화를 방지·개선하기 위한 의약품, 음식품 등으로서 유용하다.

도 1 은 균체의 경구 투여에 의해 DNA 손상의 수복을 촉진시킬 수 있음을 나타내는 도면이다.
도 2 는 균체의 경구 투여에 의해 DNA 손상의 수복을 촉진시킬 수 있음을 나타내는 도면이다.
도 3 은 균체의 경구 투여에 의해 엘라스타아제 활성을 억제할 수 있음을 나타내는 도면이다.
도 4 는 균체의 경구 투여에 의해 엘라스타아제 활성을 억제할 수 있음을 나타내는 도면이다.

본 발명의 경구용 DNA 손상 수복 촉진제 (이하, DNA 손상 수복 촉진제라고도 한다) 및 경구용 엘라스타아제 활성 억제제 (이하, 엘라스타아제 활성 억제제라고도 한다) 의 유효 성분은 비피도박테리움속 세균이다. 이러한 비피도박테리움속 세균에 관해서, 먼저 설명한다.

상기 비피도박테리움속 세균으로는, 예를 들어, 비피도박테리움 브레브 (Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 비피덤 (Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 롱검 (Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 아돌레센티스 (Bifidobacterium adolescentis), 비피도박테리움 카테눌라툼 (Bifidobacterium catenulatum), 비피도박테리움 슈도카테눌라툼 (Bifidobacterium pseudocatenulatum), 비피도박테리움 애니멀리스 (Bifidobacterium animalis) 등을 들 수 있고, 이들 균종의 1 종 또는 2 종 이상이어도 된다. 이들 중에서도, DNA 손상 수복 촉진 작용 및 엘라스타아제 활성 억제 작용의 점에서 비피도박테리움 브레브가 바람직하다.

상기 비피도박테리움 브레브로는, 비피도박테리움 브레브 YIT4063 (FERM BP-2823), 비피도박테리움 브레브 YIT 4064 (FERM BP-2824), 비피도박테리움 브레브 YIT 4065 (FERM BP-6223 (독립행정법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터 구명칭 : 통상 산업성 공업 기술원 생명 공학 공업 기술 연구소) (주소 : 우편번호 305 일본국 이바라기현 쯔꾸바시 히가시 1 쵸메 1 반 3 고) 에 1996년 2월 29일에 기탁), 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 (FERM BP-11320 독립행정법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터 (주소 : 우편 번호 305-8566 일본국 이바라기현 쯔꾸바시 히가시 1 쵸메 1 반찌 1 츄오 다이6) 에 2010년 2월 16일에 기탁), 이들 비피도박테리움 브레브를 부모주로 하는 자손주가 바람직하다. 이들 중에서도, DNA 손상 수복 촉진 작용 및 엘라스타아제 활성 억제 작용의 점에서, 비피도박테리움 브레브 YIT 4065, 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 가 특히 바람직하다. 또, 본 발명에 있어서 「자손주」란, 자연 변이주, 변이 처리에 의한 변이주, 유전자 조작에 의한 변이주 등을 포함하는 개념이다.

또한, 상기 비피도박테리움속 세균은 세균 균체 (생균) 및 당해 세균 균체의 처리물 중 어느 것이어도 된다. 그 처리물은 통상적인 방법의 처리에 의해서 얻어지는 것이면 특별히 한정되는 것이 아니라, 예를 들어, 가열 균체 (사균체), 그 동결 건조물, 이들을 함유하는 배양물, 세균의 초음파 등에 의한 파쇄액, 세균의 효소 처리액, 이들을 여과나 원심분리 등의 고액 분리 수단에 의해 분리한 고체 잔류물 등 ; 세포벽을 효소 혹은 기계적 수단에 의해 제거한 처리액, 당해 처리액의 농축물, 그들의 희석물, 그들의 건조물 등 ; 세균을 계면 활성제 등에 의해서 용해시킨 후, 에탄올 등에 의해 침전시켜 얻어지는 핵산 함유 획분 ; 상기 세균의 초음파 등에 의한 파쇄액이나 세포의 효소 처리액 등에 대하여, 각종 크로마토그래피 등에 의한 분리 등의 분리·정제 처리를 실시한 것 등을 들 수 있다.

상기 비피도박테리움속 세균으로는, 세균 균체 (생균) ; 가열 균체 (사균체), 그 동결 건조물, 세균의 초음파 등에 의한 파쇄액, 세균의 효소 처리액이 바람직하다. 이 중에서도, DNA 손상 수복 촉진 작용 및 엘라스타아제 활성 억제 작용의 점에서, 세균 균체 (생균), 상기 동결 건조물이 특히 바람직하다.

또, 상기 사균체는, 예를 들어, 가열 처리, 항생 물질 등의 약물에 의한 처리, 포르말린 등의 화학 물질에 의한 처리, 자외선에 의한 처리, γ 선 등의 방사선에 의한 처리에 의해서 얻을 수 있다.

다음으로, 본 발명의 「DNA 손상 수복 촉진제」에 관해서 상세히 설명한다.

본 발명에 있어서, 「DNA 손상 수복 촉진」이란, 손상된 DNA 분자의 수복을 촉진하는 것을 의미한다. 본 발명의 비피도박테리움속 세균은, 후기 실시예에 나타내는 바와 같이, 경구 투여에 의해 시클로부탄피리미딘 다이머 (이하, CPD 라고도 한다) 량의 저하를 촉진하기 때문에, DNA 손상에 대한 우수한 수복 촉진 작용을 갖는다.

따라서, 비피도박테리움속 세균은 DNA 손상 수복 촉진제로서 사용할 수 있고, 또한, DNA 손상 수복 촉진제를 제조하기 위해서 사용할 수 있다.

그리고, DNA 손상의 수복을 촉진함으로써 암 및 노화를 예방·치료할 수 있는 점에서, 비피도박테리움속 세균은 암 또는 노화의 예방·치료제로도 될 수 있어, 상기 DNA 손상 수복 촉진제는 암이나 노화를 예방·치료하기 위한 인간 또는 동물용의 의약품, 의약 부외품, 음식품, 애완 동물 사료 등으로서 유용하다.

또, 본 발명의 DNA 손상 수복 촉진제는 자외선 노출에 의해서 발생한 DNA 손상의 수복을 촉진시킬 수 있다는 점에서, 비피도박테리움속 세균은 피부암 또는 피부 노화의 예방·치료제로도 될 수 있다.

또한, 전술한 바와 같이, 본 발명의 비피도박테리움속 세균은 CPD 량 저하 촉진 작용을 갖는다. 따라서, 비피도박테리움속 세균은 CPD 량 저하 촉진제로서 사용할 수 있으며, 또, CPD 량 저하 촉진제를 제조하기 위해서 사용할 수 있다.

본 발명의 CPD 량 저하 촉진제는 DNA 손상의 지표인 CPD 량을 저하시키는 점에서, 비피도박테리움속 세균은 암 또는 노화의 예방·치료제로도 될 수 있으며, CPD는 자외선 노출에 의해 발생되는 것인 점에서, 본 발명의 CPD 량 저하 촉진제는 특히 피부암 또는 피부 노화의 예방·치료제로서 유용하다.

다음으로, 본 발명의 「엘라스타아제 활성 억제제」에 관해서 상세히 설명한다.

본 발명의 비피도박테리움속 세균은, 후기 실시예에 나타내는 바와 같이, 경구 투여함으로써 자외선 노출에 의해 항진된 피부 중의 엘라스타아제의 활성을 억제하는 작용을 갖는다. 따라서, 비피도박테리움속 세균은 엘라스타아제 활성 억제제로서 사용할 수 있고, 또한, 엘라스타아제 활성 억제제를 제조하기 위해서 사용할 수 있다.

그리고, 엘라스타아제 활성을 억제하는 것은 피부의 노화를 방지·개선하는 점에서, 비피도박테리움속 세균은 피부 노화 방지·개선제로도 될 수 있으며, 상기 엘라스타아제 활성 억제제는 피부 노화를 방지·개선하기 위한 인간 또는 동물용의 의약품, 의약 부외품, 음식품, 애완 동물 사료 등으로서 유용하다. 또, 「피부 노화 방지·개선」이란, 피부의 주름 예방·개선, 처짐 방지, 탄력성 개선, 항노화를 포함하는 것이다.

다음으로, 상기 DNA 손상 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제의 사용 양태 등에 관해서 설명한다.

DNA 손상 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제의 투여 형태는 경구 투여이다. 당해 투여는 자외선 노출 전, 자외선 노출 중, 자외선 노출 후 중 어느 때에 실시해도 된다. 그 중에서도, DNA 손상 수복 촉진 작용, 엘라스타아제 활성 억제 작용 및 피부 노화 방지·개선 작용의 점에서, 적어도 자외선 노출 전에 투여하는 것이 바람직하고, 자외선 노출 전 및 자외선 노출 중에 투여하는 것이 보다 바람직하다. 또한, 자외선 노출 전부터 투여하는 경우, 당해 폭로 전의 투여 기간은 DNA 손상 수복 촉진 작용, 엘라스타아제 활성 억제 작용 및 피부 노화 방지·개선 작용의 점에서 5 일간 이상이 바람직하고, 5 ∼ 10 일간이 보다 바람직하다. 또, 10 일간 이상 장기적으로 투여해도, DNA 손상 수복 촉진 작용, 엘라스타아제 활성 억제 작용 및 피부 노화 방지·개선 작용을 기대할 수 있다.

DNA 손상 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제를 의약품으로서 사용하는 경우에 있어서의 경구 투여 제제의 제형으로는, 예를 들어, 정제, 캡슐제, 과립제, 당의정, 환제, 세립제, 산제, 분말제, 서방성 제제, 현탁액, 에멀전제, 시럽제, 동결 건조제, 액제, 엘릭시르제 등을 들 수 있다.

또한, 상기 제제는 통상적인 방법에 의해서 제조할 수 있으며, 또한, 비피도박테리움속 세균을 단독으로 사용해도 되고, 약학적으로 허용되는 담체와 조합하여 사용해도 된다. 그 담체로는, 예를 들어, 부형제, 결합제, 붕괴제, 계면 활성제, 활택제, 유동성 촉진제, 교미제, 착색제, 향료, 희석제, 살균제, 침투압 조정제, pH 조정제, 유화제, 방부제, 안정화제, 흡수 보조제, 산화 방지제, 자외선 흡수제, 습윤제, 증점제, 광택제, 활성 증강제, 항염증제, 등장화제, 무통화제, 교취제 등을 들 수 있다.

상기 결합제로는, 예를 들어, 전분, 덱스트린, 아라비아검 분말, 젤라틴, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 결정 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 마크로골 등을 들 수 있다.

상기 붕괴제로는, 예를 들어, 하이드록시프로필 스타치, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 카르복시메틸셀룰로오스칼슘, 카르복시메틸셀룰로오스, 저치환 하이드록시프로필셀룰로오스 등을 들 수 있다.

상기 계면 활성제로는, 예를 들어, 라우릴황산나트륨, 대두 레시틴, 자당 지방산에스테르, 폴리소르베이트 80 등을 들 수 있다.

상기 활택제로는, 예를 들어, 탤크, 왁스류, 수소 첨가 식물유, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 스테아르산알루미늄, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

상기 유동성 촉진제로는, 예를 들어, 경질 무수 규산, 건조 수산화 알루미늄겔, 합성 규산알루미늄, 규산마그네슘 등을 들 수 있다.

상기 희석제로는, 예를 들어, 주사용 증류수, 생리식염수, 포도당 수용액, 올리브유, 참기름, 땅콩기름, 대두유, 옥수수유, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

또한, 본 발명의 DNA 손상 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제는 상기한 바와 같은 의약품으로서 사용하는 것 뿐만 아니라, 음식품, 의약 부외품, 애완 동물 사료 등으로서 사용할 수도 있다. 이 경우에는, 상기 비피도박테리움속 세균을 그대로, 또는 여러 가지 영양 성분을 첨가하여, 상기 음식품 등에 함유시키면 된다. 이 음식품은 암이나 노화의 예방·치료에 유용한 보건용 식품 또는 식품 소재, 혹은 피부 노화의 방지·개선에 유용한 보건용 식품 또는 식품 소재로서 이용할 수 있고, 이들 음식품들 또는 그 용기에는, 상기한 효과를 갖는다는 취지의 표시를 붙여도 된다.

DNA 손상 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제를 음식품에 배합하는 경우에는, 음식품으로서 사용 가능한 첨가제를 적절히 사용하여, 관용적인 수단을 사용하여 식용에 적합한 형태, 예를 들어 과립상, 입상, 정제, 캡슐, 페이스트 등으로 성형해도 되고, 또한 여러 가지 식품, 예를 들어, 햄, 소시지 등의 식육 가공품, 어묵, 관 모양 어묵 등의 수산 가공품 ; 빵, 과자, 버터, 분유, 발효 음식품에 첨가하여 사용하고, 또는 물, 과즙, 우유, 청량 음료, 차음료 등의 음료에 첨가하여 사용해도 된다. 이들 음식품 중에서도, 유효 성분인 비피도박테리움속 세균을 함유하는 발효유, 유산균 음료, 발효 두유, 발효 과 즙, 발효 식물액 등의 발효 제품이 바람직하다.

또한, 이들 발효 음식품의 제조는 통상적인 방법에 따라서 제조할 수 있다. 예를 들어 발효유는 살균한 젖 배지에 비피도박테리움속 세균을 접종 배양하고, 이것을 균질화 처리하여 발효유 베이스를 얻는다. 이어서 별도 조제한 시럽 용액을 첨가 혼합하고, 호모지나이저 등으로 균질화하여, 다시 플레이버를 첨가해서 최종 제품으로 할 수 있다. 이렇게 해서 얻어지는 발효유는 플레인 타입, 소프트 타입, 후루츠 플레이버 타입, 고형상, 액상 등의 어떠한 형태의 제품으로도 할 수 있다.

다음으로, 비피도박테리움속 세균의 투여량 등에 관해서 설명한다.

본 발명의 DNA 손상 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제의 유효 성분인 비피도박테리움속 세균을 사용할 때의 투여량에 엄격한 제한은 없다. 대상자나 적용 질환 등의 여러 가지 사용 양태에 의해 얻어지는 효과가 상이하기 때문에 적절히 투여량을 설정하는 것이 바람직하지만, DNA 손상 수복 촉진 작용, 엘라스타아제 활성 억제 작용 및 피부 노화 방지·개선 작용의 점에서, 비피도박테리움속 세균의 균수를, 1×10³ CFU 이상을 1 일량으로서 함유하는 양이 바람직하고, 1×10³ ∼ 1×10¹³ CFU 를 1 일량으로서 함유하는 양이 보다 바람직하며, 1×10⁶ ∼ 1×10¹⁰ CFU 를 1 일량으로서 함유하는 양이 특히 바람직하다.

또한, 상기 자외선의 파장은 특별히 한정되지 않지만, 280 ∼ 400 ㎚ 파장의 자외선은 DNA 손상을 발생시키는 비율이 높기 때문에 피부암이나 피부 노화의 원인이 되기 쉽고, 또한 엘라스타아제의 활성을 보다 항진시키기 때문에 피부 노화의 원인이 되기 쉬운 것이므로, 본 발명의 DNA 손상 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제는 280 ∼ 400 ㎚ 파장의 자외선 노출에 의해 발생한, DNA 손상의 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성의 항진의 억제제 및 피부 노화 방지·개선제로서 바람직하게 사용된다. 또한, 자외선량은 특별히 한정되지 않지만, 1 일당 20 mJ/㎠ 이상, 특히 40 mJ/㎠ 이상인 경우에, 본 발명의 DNA 손상의 수복 촉진제, 엘라스타아제 활성 억제제 및 피부 노화 방지·개선제가 바람직하게 사용된다.

또한, 본 발명의 DNA 손상 수복 촉진제 및 시클로부탄피리미딘 다이머량 저하 촉진제는 식경험이 풍부한 비피도박테리움속 세균을 경구로 사용하는 것이므로, 종래의 정맥 주사 등에 의해 사용되어 심각한 부작용을 동반하는 것인 암화학 요법제와 비교하여 그 안전성은 매우 높고, 대상자에 대한 부담을 현저히 경감시킬 수 있다.

실시예

이하, 실시예를 나타내어 본 발명을 상세히 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다. 또, 이하 실시예에 있어서, ％ 는 특별히 언급하지 않는 한 모두 mass/vol％ 를 의미한다.

실시예 1 (균체 용액의 조제)

Rogosa 들의 배지 (Eftymiou C. et al., J infect dis., 110, 258-267, 1962) 를 개변한 하기 조성의 배지를 121 ℃, 15 분간 가열 살균하였다. 이 배지에 비피도박테리움 브레브 YIT 4065 주 (FERM BP-6223) 을 1 v/v％ 접종하고, 37 ℃ 에서 약 20 시간 혐기적으로 배양하여 배양액을 얻었다. 이 배양액을 3500×G 으로 원심 분리하여, 비피도박테리움속 세균의 균체를 집균하였다. 이 균체를 1.0×10¹⁰ CFU/㎖ 가 되도록 생리식염수에 현탁시켜, 균체 용액을 얻었다.

배지의 조성

Trypticase : 1 ％, Yeast extract : 0.5 ％, Tryptose : 0.3 ％, 인산 (I) 칼륨 : 0.3 ％, 인산 (II) 칼륨 : 0.39 ％, 시트르산암모늄 : 0.2 ％, 유당 : 1 ％, L-시스테인염산염 : 0.03 ％, Tween 80 : 0.1 ％, 염 용액 0.5 ％ (MgSO₄·7H₂O : 11.5 g, FeSO₄·7H₂O : 0.68 g, MnSO₄·2H₂O : 2.4 g 을 100 ㎖ 의 물에 용해시킨 것)

시험예 1 (CPD 량 측정 시험)

상기 균체 용액에 관해서, CPD 량을 측정함으로써 DNA 수복 촉진 효과를 검토하였다.

헤어리스 마우스 Hos : HR-1 (6 주령) 을, 반입 후 1 주일 순화 (馴化) 시킨 후, 6 마리씩 합계 8 군으로 나눠, 각각 제 1 군 ∼ 제 8 군으로 하였다.

상기 마우스군 중 제 1 군, 제 3 군, 제 5 군 및 제 7 군 (이하, 대조군이라고도 한다) 에는 생리식염수를, 제 2 군, 제 4 군, 제 6 군 및 제 8 군 (이하, 균체군이라고도 한다) 에는 실시예 1 에서 조제한 균체 용액을, 각각 9 일간 0.1 ㎖/day 경구 투여하였다.

또한, 상기 제 1 군 및 제 2 군에 대해서는 자외선을 조사하지 않고, 제 3 군 ∼ 제 8 군에 대해서는 투여 개시로부터 6 일째 이후 4 일간, 상기 투여와 함께 자외선 조사 장치 (도시바 SE-FL-20) 에 의해, 280 ∼ 400 ㎚ 를 포함하는 자외선을 1 일당 40 mJ/㎠ 조사하였다.

그리고, 제 1 군 및 제 2 군에 대해서는 최후 투여로부터 24 시간 후, 제 3 군 및 제 4 군에 대해서는 최후 조사로부터 6 시간 후, 제 5 군 및 제 6 군에 대해서는 최후의 조사로부터 12 시간 후, 제 7 군 및 제 8 군에 대해서는 최후 조사로부터 24 시간 후에, 각각 등부의 피부를 채취하였다.

또, 하기 표 1 에 있어서, UV+ 는 자외선 조사한 것, UV- 는 자외선 조사하지 않은 것을 나타낸다.

자외선 비조사	제 1 군 : 대조군 (UV-, 생리식염수)
	제 2 군 : 균체군 (UV-, 균체)
최후의 자외선 조사로부터 6 시간 후에 피부 채취	제 3 군 : 대조군 (UV+, 생리식염수)
	제 4 군 : 균체군 (UV+, 균체)
최후의 자외선 조사로부터 12 시간 후에 피부 채취	제 5 군 : 대조군 (UV+, 생리식염수)
	제 6 군 : 균체군 (UV+, 균체)
최후의 자외선 조사로부터 24 시간 후에 피부 채취	제 7 군 : 대조군 (UV+, 생리식염수)
	제 8 군 : 균체군 (UV+, 균체)

상기 채취한 각 등부 피부로부터 게놈 DNA 를 정제하여 (QIAamp (등록상표) DNA mini kit), 일정량을 96 웰 플레이트에 코트하고, 시클로부탄피리미딘 다이머 항체 (TDM-2) 를 결합시킨 후, 비오틴 표지 2 차 항체 및 효소 표지 스트렙토아비딘으로 시그널을 증폭시켜, 마지막에 기질을 첨가하여 착색시키고 492 ㎚ 의 흡광도를 측정하였다 (ELISA 법). 측정 결과를 도 1 에 나타낸다.

도 1 에 나타내는 바와 같이, 최후의 자외선 조사로부터 6 시간 후의 피부 중의 CPD 량을 측정한 경우에는, 대조군 (제 3 군) 과 균체군 (제 4 군) 에 있어서 같은 정도의 CPD 가 확인되고 있었지만, 24 시간 후에 채취한 피부 중의 CPD 량을 측정하면 균체군 (제 8 군) 에서는 대조군 (제 7 군) 과 비교하여 유의하게 CPD 량이 저하되었다. 따라서, 비피도박테리움 브레브 YIT 4065 주 (FERM BP-6223) 의 투여에 의해, 자외선에서 기인하는 DNA 손상의 수복을 촉진시킬 수 있는 것이 인정되었다.

실시예 2 (균체 시료의 조제)

미네랄액 (1 w/v％), 효모 엑기스 (1 w/v％), 유당 (3 w/v％) 및 유단백질 (5 w/v％) 을 사용하여 조제한 배지를 2 ℓ 플라스크에 1.5 ℓ 제작하여, 121 ℃ 에서 15 분간 가열 살균하였다. 이 배지에 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 주 (FERM BP-11320) 를 1 v/v％ 접종하고, 수산화나트륨으로 pH 를 5.5 로 유지하면서 36 ℃ 에서 약 20 시간 혐기적으로 배양하여 배양액을 얻었다. 이 배양액을 15,000×G 로 원심분리하여, 비피도박테리움속 세균의 균체를 집균하였다. 또, 상기 미네랄액의 조성은 인산 (I) 칼륨 (10 w/v％), 인산 (II) 칼륨 (20 w/v％), 아세트산나트륨 (30 w/v％) 및 황산암모늄 (30 w/v％) 이다.

한편, 유단백질 8 w/v％ 및 당질 4 w/v％ 를 분산시킨 분산액을 100 ㎖ 조제하여, 121 ℃ 에서 15 분간 가열 살균하였다. 이 분산액에, 상기 집균한 비피도박테리움속 세균의 균체를 습중량 당 15 ％ 분산시키고, 그 후 동결 건조시켜, 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 주 (FERM BP-11320) 의 동결 건조 균체를 얻었다. 이 동결 건조 균체를 4×10⁹ CFU/㎖ 가 되도록 생리식염수 10 ㎖ 에 현탁하여, 균체 시료를 얻었다.

시험예 2 (CPD 량 측정 시험)

헤어리스 마우스 Hos : HR-1 (6 주령) 을, 반입 후 1 주일 순화시킨 후, 3 마리씩 합계 3 군으로 나눠, 각각 제 1 군 ∼ 제 3 군으로 하였다.

상기 마우스군 중 제 1 군 및 제 2 군에는 생리식염수를, 제 3 군에는 실시예 2 에서 조제한 균체 시료를, 각각 9 일간 0.1 ㎖/day 경구 투여하였다.

또한, 상기 제 1 군에 대해서는 자외선을 조사하지 않고, 제 2 군 및 제 3 군에 대해서는 투여 개시로부터 6 일째 이후 4 일간, 상기 투여와 함께 자외선 조사 장치 (도시바 SE-FL-20) 에 의해 280 ∼ 400 ㎚ 를 포함하는 자외선을 1 일당 50 mJ/㎠ 조사하였다.

그리고, 상기 마우스군 중, 생리식염수를 투여하고, 자외선 조사하지 않은 마우스군을 blank 군으로 하고, 생리식염수를 투여하고, 자외선 조사한 마우스군을 대조군으로 하며, 균체 시료를 투여하고, 자외선 조사한 마우스군을 균체군으로 하였다 (표 2). 하기 표 2 에 있어서, UV+ 는 자외선 조사한 것, UV- 는 자외선 조사하지 않은 것을 나타낸다.

제 1 군	blank 군 (UV-, 생리식염수)
제 2 군	대조군 (UV+, 생리식염수)
제 3 군	균체군 (UV+, 균체)

상기 채취한 각 등부 피부로부터 게놈 DNA 를 정제하여 (QIAamp (등록상표) DNA mini kit), 일정량을 96 웰 플레이트에 코트하고, 시클로부탄피리미딘 다이머 항체 (TDM-2) 를 결합시킨 후, 비오틴 표지 2 차 항체 및 효소 표지 스트렙토아비딘으로 시그널을 증폭시켜, 마지막에 기질을 첨가하여 착색시키고 492 ㎚ 의 흡광도를 측정하였다 (ELISA 법). 측정 결과를 도 2 에 나타낸다.

도 2 에 나타내는 바와 같이, 대조군에서는, blank 군과 비교하여 자외선 조사에 의해 현저한 CPD 의 증가가 확인되었지만, 균체군에서는, 이 대조군과 비교하여 CPD 량이 저하되어 있었다. 따라서, 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 주 (FERM BP-11320) 의 투여에 의해 자외선에서 기인하는 DNA 손상의 수복을 촉진시킬 수 있는 것이 인정되었다.

실시예 3 (균체 시료의 조제)

미네랄액 (1 w/v％), 효모 엑기스 (1 w/v％), 유당 (3 w/v％) 및 유단백질 (5 w/v％) 을 사용하여 조제한 배지를 2 ℓ 플라스크에 1.5 ℓ 제작하여, 121 ℃ 에서 15 분간 가열 살균하였다. 이 배지에 비피도박테리움 브레브 YIT 4065 주 (FERM BP-6223) 를 1 v/v％ 접종하고, 수산화나트륨으로 pH 를 5.5 로 유지하면서 36 ℃ 에서 약 20 시간 혐기적으로 배양하여 배양액을 얻었다. 이 배양액을 15,000×G 로 원심분리하여, 비피도박테리움속 세균의 균체를 집균하였다. 또, 상기 미네랄액의 조성은 인산 (I) 칼륨 (10 w/v％), 인산 (II) 칼륨 (20 w/v％), 아세트산나트륨 (30 w/v％) 및 황산암모늄 (30 w/v％) 이다.

한편, 유단백질 8 w/v％ 및 당질 4 w/v％ 를 분산시킨 분산액을 100 ㎖ 조제하여, 121 ℃ 에서 15 분간 가열 살균하였다. 이 분산액에, 상기 집균한 비피도박테리움속 세균의 균체를 습중량 당 15 ％ 분산시키고, 그 후 동결 건조시켜, 비피도박테리움 브레브 YIT 4065 주 (FERM BP-6223) 의 동결 건조 균체를 얻었다. 이 동결 건조 균체를 1.0×10¹⁰ CFU/㎖ 가 되도록 생리식염수 10 ㎖ 에 현탁하여, 균체 시료를 얻었다.

시험예 3 (엘라스타아제 활성 억제 시험)

헤어리스 마우스 Hos : HR-1 (6 주령) 을, 반입 후 1 주일 순화시킨 후, 5 마리씩 합계 3 군으로 나눠, 각각 제 1 군 ∼ 제 3 군으로 하였다.

상기 마우스군 중 제 1 군 및 제 2 군에는 생리식염수를, 제 3 군에는 실시예 3 에서 조제한 균체 시료를, 각각 9 일간 0.1 ㎖/day 경구 투여하였다.

또한, 상기 제 1 군에 대해서는 자외선을 조사하지 않고, 제 2 군 및 제 3 군에 대해서는 투여 개시로부터 6 일째 이후 4 일간, 상기 투여와 함께 자외선 조사 장치 (도시바 SE-FL-20) 에 의해 280 ∼ 400 ㎚ 를 포함하는 자외선을 1 일당 40 mJ/㎠ 조사하고, 그 후, 등부 피부를 채취하였다.

그리고, 상기 마우스군 중, 생리식염수를 투여하고, 자외선 조사하지 않은 마우스군을 blank 군으로 하고, 생리식염수를 투여하고, 자외선 조사한 마우스군을 대조군으로 하며, 균체 시료를 투여하고, 자외선 조사한 마우스군을 균체군으로 하였다 (표 3). 하기 표 3 에 있어서, UV+ 는 자외선 조사한 것, UV- 는 자외선 조사하지 않은 것을 나타낸다.

상기 채취한 각 등부 피부에 50 mM Tris-HCl (pH 7.5) 을 첨가하여 Polytron 으로 호모제네이트하고, 14,000×G 로 원심한 후, 상청을 96 웰 플레이트에 100 ㎕ 씩 분주하고, 엘라스틴을 대신하는 인공 기질로서 합성 기질인 숙시닐-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닌-p-니트로아닐리드 6.25 mM 을 20 ㎕ 첨가하여, 37 ℃ 에서 24 시간 인큐베이션하였다. 그 후, 405 ㎚ 의 흡광도를 측정하였다. 스탠다드에는 p-니트로아닐린을 사용하여, 피부 호모제네이트 중의 엘라스타아제 활성을 나타내었다. 결과를 도 3 에 나타낸다.

도 3 에 나타내는 바와 같이, blank 군과 대조군을 비교하면, 자외선 조사에 의해 엘라스타아제 활성의 현저한 증가가 확인되었지만, 균체군에서는 대조군과 비교하여 엘라스타아제 활성이 억제되는 것을 알 수 있었다.

실시예 4 (균체 시료의 조제)

시험예 4 (엘라스타아제 활성 억제 시험)

헤어리스 마우스 Hos : HR-1 (6 주령) 을, 반입 후 1 주일 순화시킨 후, 6 마리씩 합계 3 군으로 나눠, 각각 제 1 군 ∼ 제 3 군으로 하였다.

상기 마우스군 중 제 1 군 및 제 2 군에는 생리식염수를, 제 3 군에는 실시예 4 에서 조제한 균체 시료를, 각각 9 일간 0.1 ㎖/day 경구 투여하였다.

또한, 상기 제 1 군에 대해서는 자외선을 조사하지 않고, 제 2 군 및 제 3 군에 대해서는 투여 개시로부터 6 일째 이후 4 일간, 상기 투여와 함께 자외선 조사 장치 (도시바 SE-FL-20) 에 의해 280 ∼ 400 ㎚ 를 포함하는 자외선을 1 일당 50 mJ/㎠ 조사하고, 그 후, 등부 피부를 채취하였다.

그리고, 상기 마우스군 중, 생리식염수를 투여하고, 자외선 조사하지 않은 마우스군을 blank 군으로 하고, 생리식염수를 투여하고, 자외선 조사한 마우스군을 대조군으로 하며, 균체 시료를 투여하고, 자외선 조사한 마우스군을 균체군으로 하였다 (표 4). 하기 표 4 에 있어서, UV+ 는 자외선 조사한 것, UV- 는 자외선 조사하지 않은 것을 나타낸다.

상기 채취한 각 등부 피부에 PBS (인산 완충 생리식염수) 를 첨가하여 Polytron 으로 호모제네이트하고, 14,000×G 로 원심한 후, 상청을 96 웰 플레이트에 100 ㎕ 씩 분주하고, 엘라스틴을 대신하는 인공 기질로서 합성 기질인 숙시닐-L-알라닐-L-알라닐-L-알라닌-p-니트로아닐리드 6.25 mM 을 20 ㎕ 첨가하여, 37 ℃ 에서 24 시간 인큐베이션하였다. 그 후, 405 ㎚ 의 흡광도를 측정하였다. 스탠다드에는 p-니트로아닐린을 사용하여, 피부 호모제네이트 중의 엘라스타아제 활성을 나타내었다. 결과를 도 4 에 나타낸다.

도 4 에 나타내는 바와 같이, blank 군과 대조군을 비교하면, 자외선 조사에 의해 엘라스타아제 활성의 현저한 증가가 확인되었지만, 균체군에서는 대조군과 비교하여 엘라스타아제 활성이 억제되는 것을 알 수 있었다.

독립행정법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터

FERMBP-6223

19960229

독립행정법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터

FERMBP-11320

20100216

Claims

비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를 유효 성분으로 하여, 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를, 1×10³ CFU 이상을 1 일량으로서 함유하고, 시클로부탄피리미딘 다이머 수복을 촉진하는, 피부의 주름 예방 또는 개선, 처짐 방지, 또는 탄력성 개선을 위한 약학적 조성물.
삭제
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삭제
제 1 항에 있어서,
시클로부탄피리미딘 다이머 수복이 자외선 노출에 의해서 야기되는 피부 중의 시클로부탄피리미딘 다이머에 대한 수복인 약학적 조성물.
제 5 항에 있어서,
적어도 자외선 노출 전에 경구 투여하는 것인 약학적 조성물.
삭제
비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를 유효 성분으로 하여, 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를, 1×10³ CFU 이상을 1 일량으로서 함유하고, 엘라스타아제 활성을 억제하는, 피부의 주름 예방 또는 개선, 처짐 방지, 또는 탄력성 개선을 위한 약학적 조성물.
삭제
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삭제
제 8 항에 있어서,
자외선 노출에 의해 항진된 피부 중의 엘라스타아제 활성을 억제하는 것인 약학적 조성물.
제 12 항에 있어서,
적어도 자외선 노출 전에 경구 투여하는 것인 약학적 조성물.
비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를 유효 성분으로 하여, 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를, 1×10³ CFU 이상을 1 일량으로서 함유하고, 시클로부탄피리미딘 다이머 수복을 촉진하는, 피부의 주름 예방 또는 개선, 처짐 방지, 또는 탄력성 개선을 위한 식품 조성물.
제 14 항에 있어서,
시클로부탄피리미딘 다이머 수복이 자외선 노출에 의해서 야기되는 피부 중의 시클로부탄피리미딘 다이머에 대한 수복인 식품 조성물.
제 15 항에 있어서,
적어도 자외선 노출 전에 경구 투여하는 것인 식품 조성물.
비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를 유효 성분으로 하여, 비피도박테리움 브레브 YIT 12272 를, 1×10³ CFU 이상을 1 일량으로서 함유하고, 엘라스타아제 활성을 억제하는, 피부의 주름 예방 또는 개선, 처짐 방지, 또는 탄력성 개선을 위한 식품 조성물.
제 17 항에 있어서,
자외선 노출에 의해 항진된 피부 중의 엘라스타아제 활성을 억제하는 것인 식품 조성물.
제 18 항에 있어서,
적어도 자외선 노출 전에 경구 투여하는 것인 식품 조성물.
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