KR101817512B1 - 옥수수수염 추출물 또는 메이신을 포함하는 피부 세포 보호용 조성물 - Google Patents

옥수수수염 추출물 또는 메이신을 포함하는 피부 세포 보호용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 메이신을 포함하는 피부 세포보호용 조성물에 관한 것으로, 메이신을 포함하는 피부세포 보호용 조성물은 자외선에 의한 세포 사멸 억제 또는 세포의 성장을 촉진을 통해 자외선에 의한 피부세포를 보호하고, 피부손상을 억제, 개선 또는 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 피부 자극이 없는 것을 확인하였으므로 다양한 화장품 또는 의약품 등으로 활용될 수 있다.

Description

옥수수수염 추출물 또는 메이신을 포함하는 피부 세포 보호용 조성물{Composition for protecting keratinocytes comprising corn-silk extract or maysin}
본 발명은 옥수수수염 추출물 또는 메이신을 포함하는 피부 세포보호용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 옥수수 유래 메이신은 자외선으로 인한 세포 손상에 대해 세포를 보호할 수 있으므로, 자외선에 의한 피부 세포 보호용 화장품 및 의약품으로 제조 및 응용될 수 있다.
일반적으로 피부는 표피, 진피, 피하조직으로 구성되어 있으며 외부로부터 보호 및 장벽기능, 온도조절기능, 호흡기능, 배설기능 등 중요한 역할을 담당하고 있다.
대부분의 사람들이 성장기에는 일광에 대하여 피부가 쉽게 대응을 하지만, 연령이 높아지면서 피부 조직이 점차 변화함에 따라 일광으로 인한 거칠어짐, 주름, 착색 반점, 혈색이 나쁨, 설사, 모세혈관확장, 흑점, 자반 및 쉬운 타박상, 위축, 섬유증 탈색 부위 및 극심하게는 전암성 종양 및 악성 종양 등의 현상이 발생하게 된다.
자외선은 UV-A (320~400 nm), UV-B (280~320 nm), UV-C (200~280 nm) 영역으로 나누어지며 이 중 지표에 도달하여 인체에 영향을 주는 자외선은 UV-A 및 UV-B로 알려져 있다. 자외선에 의한 피부 세포의 영향을 살펴보면 다음과 같다. 먼저, 피부세포 중 케라티노사이트 (keratinocyte)는 자외선이 조사되면 염증성 사이토카인 (cytokine)들을 분비하고 또한 산화적 스트레스가 유발되어 세포내에서 여러 종류의 단백질 키나제 및 포스포리파제가 활성화된다. 자외선 양이 증가됨에 따라 사멸되기도 하며 DNA가 손상되어 궁극적으로는 피부암을 발생시키고 노화를 촉진한다. 즉, 자외선은 피부의 발적, 면역억제, 주름 생성 및 궁극적으로는 피부노화와 피부암을 일으킬 수 있으므로, 자외선 조사의 차단 및 방지는 피부암의 예방 및 노화의 지연에 중요한 요소가 된다.
최근 들어 대기오염 등 환경오염으로 인한 오존층의 파괴로 지상에 도달되는 자외선 양이 증가함에 따라, 자외선으로부터 피부를 보호하는 것이 화장품 분야에서 매우 중요한 부분을 차지하고 있으며, 많은 화장품 제조회사에서 관련 상품을 출시하기 위해 많은 연구를 하고 있다. 현재 이용되고 있는 방법으로서는 단순한 자외선 차단제 혹은 자외선 흡수제를 사용하여 자외선으로부터의 피해를 방지하고 있는 실정이며 최근에는 이들 자외선 차단제 자체가 돌연변이를 유발하여 피부암 발생 가능성을 가지고 있다는 보고가 있다.
따라서, 자외선에 의한 피부 손상을 방지할 수 있는 화장료 조성물들에 대한 연구가 이루어지고 있다. 자외선에 의한 피부손상 방지를 목적으로 사용되고 있는 자외선차단제는 크게 화학적 자외선차단제와 물리적 자외선차단제로 분류되고 있다. 자외선의 화학적 흡수를 메커니즘으로 하는 화학적 차단제는 신남산계, 살리실산계, 벤조페논계 등의 유기차단제가 잘 알려져 있으며, 자외선의 물리적 산란 및 차폐를 메커니즘으로 하는 물리적 차단제는 이산화티탄, 산화아연과 같은 무기차단제가 잘 알려져 있다. 화학적 차단제의 경우, 자외선차단 효과가 뛰어난 장점을 갖고 있으나 적용되는 파장범위가 좁고, 화장료에 적용함에 있어 끈적이고 번들거리는 사용감과 분자형태로 피부에 흡수되므로 피부자극을 유발하는 단점을 가지고 있다. 물리적 차단제의 경우, 피부자극은 화학적 차단제에 비해 상대적으로 낮지만 무거운 사용감과 백화현상 및 광독성을 유발하는 단점을 갖고 있다.
상기한 화학적 차단제와 물리적 차단제의 단점을 보완하고자 자외선차단제에 대한 다양한 연구가 진행되어 왔으며, 특히 피부안전성에 장점을 갖는 천연 자외선차단 성분에 대한 연구가 활발히 진행되어 왔다. 이와 관련하여 개발된 기술로서, 대한민국특허 제10-0526637호, 제10-0858630호, 제10-0114124호 및 제10-0162282호 등에서는도화, 녹두, 커피, 팬지, 대황 등에서 추출한 천연성분을 함유한 자외선차단용 화장료조성물이 개발된 바 있다.
상기한 기술들은 피부안전성이 우수한 천연 자외선차단 성분들을 포함하고 있지만, 직접적인 자외선차단 효과가 낮아 천연추출물 단일 성분이 아니라 기존의 합성 유기 자외선차단 성분과 천연추출물을 혼합하여 사용해야 하는 단점을 갖고 있다. 또한 상기와 관련하여 개발된 기술로서, 미국특허 제5552135호에서는 오트, 옥수수, 밀, 쌀 등의 곡물류에서 페룰산(ferulic acid)과 에틸페룰레이트(ethylferulate)를 함유하는 자외선차단 천연성분을 개발하였으나, 단일성분이 아니라 유기 자외선차단 성분과 혼합하여 사용했을 때 자외선차단 효과가 증가되는 기술을 제시하였다.
일반적으로 메이신(maysin)은 옥수수, 특히 옥수수수염에 포함되어 있는 것으로 알려져 있다. 옥수수수염 유래 플라보노이드류로는 메이신, 에피메이신(apimaysin), 메톡시메이신(methoxymaysin) 등이 있으며, 이중 메이신은 옥수수수염에 특이적으로 함유되어 있는 대표적인 물질로 옥수수 해충인 조명나방의 유충(corn earworm)의 생육억제 작용, 종양세포주에대한 세포독성 효과 및 라디칼 소거능 등 항산화 활성이 보고되어 있으나, 이들 효능에 대한 세포 및 인체 내에서의 작용기전이나 보다 다양한 생리 기능성에 대한 연구는 우리나라 뿐 만아니라 전세계적으로도 많이 이루어지지 않고 있는 실정이다.
메이신은 자연상태에서는 산화에 안정적인 물질이며 그 효과는 주로 어글리콘(aglycone)의 B환에 위치한 다이하이드록시(O-dihydroxy)에 의함이 구명되었고, 특히 메이신의 항생효과가 주로 어글리콘인 루티올린(luteolin)의 작용에 의한 것으로 알려졌다.
종래의 기술에서, 메이신은 지질대사 개선효과, 항비만, 항암, 면역증강, 항염증 및 알러지성 항천식, 항치매 등의 다양한 생리활성이 있는 것으로 알려져 있으나(대한민국 등록특허 제1201628호; Shun-Cheng Ren et al ., Journal of Medicinal Plants Research , 3(12): 1009, 2009), 메이신 단일물질의 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 피부 세포보호 효과에 대해서는 연구된 바가 없다.
이에, 본 발명에서는 자외선에 의한 피부 세포 보호 효과가 우수할 뿐만 아니라, 피부 자극이 없는 천연추출물을 개발하기 위해 예의 노력한 결과, 옥수수수염에서 C18 컬럼으로 분리한 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 단일물질인 메이신은 자외선에 의한 피부 손상 억제 및 피부 세포보호 효과를 가질 뿐만 아니라, 피부 자극 없는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 옥수수수염에서 C18 컬럼으로 분리된 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신을 포함하는 자외선에 의한 피부 세포 보호용 화장료 조성물 또는 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 세포 보호용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 세포 보호용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신은 옥수수 유래일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 조성물은 각질형성 세포 성장 촉진; 자외선에 의한 세포사멸 억제; 자외선에 의한 DNA 손상 억제; 및 자외선에 의한 염증성 사이토카인 발현억제;로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 효능을 통해 피부 손상 억제, 개선/치료 또는 피부세포를 보호할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 조성물은 자외선 흡수능을 가질 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신은 총 조성물 100중량부에 대하여 0.0001중량부 내지 20중량부 포함될 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 약학적 조성물은 피부외용제 제형으로, 파우더(power), 젤(gel), 연고(ointment), 크림(cream), 액체(liquid), 및 에어로졸(aerosol)로 구성된 군으로부터 선택되는 제형일 수 있다.
본 발명의 이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신을 포함하는 피부세포 보호용 조성물은 자외선에 의한 세포 사멸 억제 또는 세포의 성장을 촉진을 통해 자외선에 의한 피부세포를 보호하고, 피부손상을 억제, 개선 또는 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 피부 자극이 없는 것을 확인하였으므로 다양한 화장품 또는 의약품 등으로 활용될 수 있다.
도 1은 인간 각질형성세포인 HaCaT 세포에서 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신 처리 농도에 따른 세포독성 여부를 나타낸 데이터이다.
도 2는 각질형성세포(HaCaT cell)에 자외선(UVB)를 조사하였을 때, 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신 처리 농도에 따른 세포보호 효능을 나타낸 데이터이다.
도 3은 각질형성세포(HaCaT cell)에 자외선(UVB)를 조사하였을 때, 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신 처리 농도에 따른 세포사멸정도를 관찰한 사진이다 (x200).
도 4는 옥수수수염 추출물(NICS-1)의 자외선 흡광도 스펙트럼을 나타낸 데이터이다.
도 5는 메이신의 자외선 흡광도 스펙트럼을 나타낸 데이터이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
상술한 바와 같이, 자외선에 의한 피부 손상을 방지할 수 있는 화장료 조성물들에 대한 연구가 지속적으로 이루어지고 있으며, 화학적 차단제와 물리적 차단제의 단점을 보완하고자 자외선차단제에 대한 다양한 연구가 진행되고 있으나, 직접적인 자외선차단 효과가 낮아 천연추출물 단일 성분이 아니라 기존의 합성 유기 자외선차단 성분과 천연추출물을 혼합하여 사용해야 하는 단점을 갖고 있다.
이에, 본 발명에서는 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신을 포함하는 피부세포 보호용 조성물을 제공함으로써 상술한 문제의 해결을 해결을 모색하였다. 이를 통해 피부 자극 없이 자외선에 의한 세포 사멸 억제 또는 세포의 성장을 촉진을 통해 자외선에 의한 피부세포를 보호하고, 피부손상을 억제, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물을 제공할 수 있으므로, 자외선에 의한 피부세포 보호, 피부손상 억제 및 개선을 목적으로 하는 화장품 또는 의약품으로 활용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 메이신을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로,
상기 조성물은 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 개선용 화장료 조성물, 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 치료용 약학적 조성물, 자외선에 의한 피부 세포 보호용 화장료 조성물 또는 자외선에 의한 피부 세포 보호용 약학적 조성물이다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염을 추가적으로 포함할 수 있다. "약학적으로 허용 가능한 염"은 독성이 없거나 적은 산 또는 염기로 제조된 염들을 말한다. 본 발명의 화합물이 상대적으로 산성일 경우 염기(base) 부가 염들은 충분한 양의 원하는 염기와 적당한 비활성(inert)용매로 그러한 화합물의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염기 부가 염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 마그네슘 또는 유기 아미노로 이루어진 염을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 화합물이 상대적으로 염기성일 경우 산(acid) 부가 염들은 충분한 양의 원하는 산과 적당한 비활성 용매로 그러한 화합물들의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산 부가 염은 프로피온산, 이소부틸산, 옥살산, 사과산, 말론산, 안식향산, 호박산, 수버릭(suberic), 푸마르산, 만데릭산, 프탈릭산, 벤젠설폰산, p-토릴설폰산, 구연산, 주석산, 메탄설폰산, 염산, 브롬산, 질산, 탄산, 일수소탄산(monohydrogencarbonic), 인산, 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소, 아인산(phosphorous acid) 등으로 형성된 염을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 알지네이트(arginate) 같은 아미노산의 염 및 글루쿠로닉(glucuronic) 또는 갈락투노릭(galactunoric) 산들과 같은 유기산의 유사체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 메이신은 옥수수, 테오신테(teosinte) 및 센티페드그라스에서 발견되는 황색의 식물 색소 플라보노이드(flavonoid) 계열의 물질로서 항산화작용과 항암작용이 있다고 알려져 있다.
본 발명의 메이신을 70% 이상 함유하는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 단일물질인 메이신은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 옥수수 유래, 더 바람직하게는 옥수수수염 유래인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함된 옥수수수염 추출물(NICS-1) 또는 메이신의 순도 및 함량은 특별히 제한되지 않으나, 본 발명에서는 바람직하게 70% 이상의 고순도 메이신을 사용하였으며, 상기 메이신은 총 조성물 100중량부에 대하여 0.0001중량부 내지 20중량부, 바람직하게는 0.001중량부 내지 10중량부, 더 바람직하게는 0.001중량부 내지 5중량부로 포함될 수 있다.
상기 조성물의 용매로는 메이신의 자외선에 의한 피부세포 보호 효과를 방해하지 않는 것이라면 특별히 제한되지 않으며, 메이신이 총 조성물 100중량부에 대하여 0.0001중량부 보다 낮은 농도로 포함되는 경우, 자외선에 의한 피부세포 보호 효과 및 피부세포 손상 억제 또는 개선/치료 효과 등의 효능이 감소할 수 있으며, 20중량부 보다 높은 농도로 포함되는 경우에는 농도 증가에 따른 효능이 월등하게 나타나지 않거나, 세포독성이 발생할 수도 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 각질형성 세포 성장 촉진; 자외선에 의한 세포사멸 억제; 자외선에 의한 DNA 손상 억제; 및 자외선에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제;로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 피부 손상을 억제 또는 개선할 수 있으며, 또한 피부세포를 보호할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 자외선 흡수를 통해 피부 손상을 억제 또는 개선할 수 있으며, 또한 피부세포를 보호할 수 있다.
도 1은 인간 각질형성 세포인 HaCaT 세포에 메이신을 10ppm ~ 100ppm으로 처리하였을 때, 세포 독성 여부를 확인한 것으로, 도 1에 나타난 바와 같이 메이신에 의한 세포 독성은 관찰되지 않았으며, 메이신 농도에 의존적으로 각질형성세포의 성장이 촉진되는 것을 확인하였다.
또한, NICS-1과 단일물질인 메이신의 세포독성 또는 각질형성 세포 성장 여부를 비교한 결과, 본 발명의 메이신은 옥수수수염 추출물(NICS-1)에 비해 각질형성세포의 성장 촉진 효능이 우수한 것을 확인하였다. 일반적으로 옥수수수염에는 메이신이 포함된 것으로 알려져 있지만, 메이신 단일물질에 대한 각질형성세포 촉진능에 대해서는 연구된 바가 없다.
각질형성세포는 표피의 90% 이상을 차지하는 주요 구성세포로서, 표피의 모든 층에서 발견되며, 케라틴(keratin)을 형성하는 것이 가장 주된 기능이고, 데스모솜(desmosome) 의해 세포들이 서로 강하게 결합되어 있습니다. 각질형성세포는 약 2주간 핵을 보유한 상태로 여러 단계의 분화 과정을 거친 후, 최종적으로 두껍고 단단한 각질세포막을 가진 호산성 각화세포로 구성된 각질층이 된다. 표피의 가장 바깥층인 각질층은 각질세포와 각각의 세포를 둘러싸는 세포외 지질바탕질로 구성되어 있으며, 피부의 기계적 보호 및 외부환경으로부터 수용성 물질의 흡수 및 수분 손실을 막는 피부장벽 기능을 수행하게 된다.
만약, 자외선에 의해 각질세포가 손상되어 사멸되거나 성장이 제대로 이루어 지지 않으며, 결과적으로 표피의 두께가 얇아지게 되고, 피부장벽으로서의 기능을 제대로 수행하지 못하게 된다.
즉, 본 발명의 메이신을 포함하는 조성물은 각질형성 세포의 성장을 촉진시켜 표피층의 두께를 개선시킬 수 있으므로, 자외선에 의한 피부손상 억제 또는 개선을 위한 화장료 조성물 또는 자외선에 의한 피부손상 억제 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 활용될 수 있다.
도 2는 인간 각질형성 세포인 HaCaT 세포에 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신을 5ppm, 10 ppm, 50 ppm으로 처리한 다음, 자외선(UVB 70mJ/cm2)를 조사하여 자외선에 의한 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신의 세포보호 효능을 확인한 결과로, 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신 처리 농도 의존적으로 자외선에 의한 각질형성세포의 사멸율이 감소하는 것을 확인하였다.
도 3은 상기 도 2의 각질형성 세포를 실제 현미경으로 관찰한 사진으로, 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신 처리 없이 자외선을 조사한 각질형성 세포는 대부분 사멸이 유도된 것을 확인한 반면, 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신을 처리한 세포는 자외선 조사에 의해서도 세포사멸이 효과적으로 억제되는 것을 확인하였다.
본 발명의 일양태에서 메이신의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 확인한 결과, 표 3에 나타난 바와 같이, 5ppm, 10 ppm, 50 ppm 및 100 ppm농도의 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신을 처리한 경우, 옥수수수염 추출물(NICS-1)은 각각 114.21%, 96.18%, 73.73%, 42.65%의 IL-1생성량을 보였으며, 메이신은 각각 96.54%, 86.78%, 52.31%, 32.35%의 IL-1생성량을 보여 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신은 농도 의존적으로 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인의 발현이 감소하는 것을 확인하였고, 메이신은 옥수수수염 추출물(NICS-1)에 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인의 발현을 감소시키는 효과가 더 큰 것을 확인 하였다..
본 발명의 다른 일양태에서 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신의 자외선 조사에 의한 DNA 손상 억제 효과를 확인한 결과, 표 4에 나타난 바와 같이, 5ppm, 10 ppm, 50 ppm, 및 100 ppm 농도의 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신을 처리한 경우, 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신 농도 의존적으로 DNA 꼬리 길이가 감소하는 것을 확인하였으며, 이는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신이 자외선에 의한 DNA 손상을 억제하는 것을 의미하며, 메이신은 옥수수수염 추출물(NICS-1)에 자외선 조사에 DNA 손상을 억제시키는 효과가 더 큰 것을 확인하였다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신이 자외선 흡수능이 있는지 확인한 결과, 도 4 및 도 5에서 나타난 바와 같이 옥수수수염 추출물(NICS-1)은 343nm, 271nm에서 최대 흡수 파장을 나타내었고, 메이신은 352nm, 271nm에서 최대 흡수파장을 나타냄으로써 UV-B (280~320 nm)의 자외선 영역뿐만 아니라, UV-A (320~400 nm) 영역, UV-C (200~280 nm) 영역에 대하여 강한 흡수능을 보이는 것을 확인하였다.
또한, 본 발명에서는 메이신을 포함하는 피부세포 보호용 조성물이 실제로 자외선으로부터 피부 세포를 보호하고, 자외선에 의한 피부 손상 억제 및 개선/치료 효능이 있는지 확인하기 위해 메이신을 포함하는 영양크림을 제조하여 피부 자극 및 자외선에 의한 피부 보호 효과를 확인하였다.
먼저, 피부자극 실험을 수행하여, 표 6에 따른 판정기준에 따라 판정한 결과, 대부분 자극이 없거나 경미한 정도인 것을 확인하였다 (표 7).
본 발명의 일양태에서 또한, 본 발명의 다른 일양태에서 메이신이 포함된 조성물의 자외선에 의한 피부 보호를 확인하기 위해 홍반 생성 정도를 확인한 결과, 표 8에 나타난 바와 같이 옥수수 수염 추출물이 포함된 영양크림은 비교예 1과 유사한 수준의 피부보호효과를 보이는 반면, 메이신이 포함된 영양크림은 자외선 조사에 의한 홍반생성정도를 현저하게 감소시키는 것을 확인하였다. 이는 메이신이 포함된 조성물은 자외선에 의한 피부 손상을 억제하는 효과가 매우 우수한 것을 확인하였다.
즉, 본 발명의 메이신을 포함하는 자외선에 의한 피부세포 보호용 조성물 또는 자외선에 의한 피부손상 억제 또는 개선용 조성물은 각질형성 세포 성장을 촉진하고 자외선에 의한 세포 사멸을 억제할 뿐만 아니라, 자외선에 의한 DNA 손상을 억제하고, 자외선에 의한 염증성 사이토카인 발현을 억제할 수 있는 것을 확인하였다. 또한, 피부자극 없이 실제로 자외선에 의한 피부 손상을 억제하여 피부를 보호하는 것을 확인하였다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형일 수 있으며, 메이신 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분 1종 이상을 함유할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 상기 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 상기 가용화 제형으로는 유연화장수 등이 있다. 적합한 제형은 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 바이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태일 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태일 수 있다.
나아가, 상기 화장료 조성물은 통상적으로 화장품에 첨가되는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 등을 첨가할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 피부외용제 제형으로, 파우더(power), 젤(gel), 연고(ointment), 크림(cream), 액체(liquid) 및 에어로졸(aerosol)로 구성된 군으로부터 선택되는 제형일 수 있으며, 메이신 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분 1종 이상을 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 피부 외용제의 적용가능한 다른 하나의 형태는 의약 국소제제이다. 본 발명의 피부 외용제는 자외선에 의한 피부세포 보호 및 피부손상 억제 또는 개선/치료 효과를 가지기 위하여, 메이신 이외에 추가로 약학적으로 허용가능한 담체를 1종 이상 포함하여 의약 국소제제로 제조할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 통상적인 방법에 따라 연고, 크림, 젤, 피부 유화액, 피부 현탁액, 패치 또는 분무제 등의 국소제제로 제형화하여 사용할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제형화 할 수 있다. 나아가, 본 발명에 따른 피부 외용제의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
이하 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.
옥수수 추출물( NICS -1) 및 메이신의 준비
자외선에 의한 피부세포 보호 및 피부손상 억제 또는 개선/치료에 대한 메이신의 효능을 확인하기 위해 옥수수수염으로부터 추출 및 분리된 물질을 사용하였으며, 상기 물질은 농촌진흥청 국립식량과학원에서 옥수수수염으로부터 C18 컬럼을 이용하여 분리된 70% 이상의 메이신이 함유된 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 NICS-1를 정제시켜 순도가 높은 메이신 고형물을 사용하였다.
메이신의 효능 비교를 위해 C18 컬럼을 이용하여 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신을 각각 제조하였다.
옥수수 수염 시료는 농촌진흥청 국립식량과학원에서 재배 생산된 '광평옥'의 옥수수수염을 채취하여 사용하였으며, 채취 즉시 약 5~10 cm의 크기로 세절하였고, 세절된 옥수수수염 1kg 에 95% 프레타놀 A(덕성산업) 2000 ml를 투입하여 직사광선이 비추지 않는 곳에서 25℃의 온도로 9일간 추출하였다. 상기 추출물을 탈지면으로 1차 여과 후 No. 3여과지로 2차 여과한 후 감압농축하였으며, 감압농축 시 가열 온도는 40로 하고, 환류냉각관의 온도는 10℃로 하여 감압농축된 옥수수수염 추출물을 수득하였다.
얻어진 옥수수수염 조추출물은 C18(preparative C18reverse phase bulk packing material, 125, 55-105, Waters, Milford, MA) 분말로 충진된 컬럼에 주입하여 초순수 100 중량%의 초기조성에서 에탄올(ethanol) 100 중량%만으로 된 기울기법으로 이동상을 흘려주어 옥수수수염 추출물(NICS-1)을 분리하였다.
상기의 과정을 거쳐 얻어진 옥수수수염 추출물(NICS-1)은 순도가 높은 메이신을 얻기 위해 C18 컬럼에 재주입시켜 메이신을 다량 함유하고 있는 분취물(fraction)을 취하고 이를 다시 감압농축시킨 후 순도가 높은 메이신 고형물을 얻었다.
메이신의 세포 독성 확인
본 발명에서는 70% 이상의 메이신을 포함하는 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신이 세포독성을 보이는지 확인하기 위해 세포 생존율을 측정하였다.
먼저, 인간 각질 형성세포인 HaCaT 세포(Human Keratinocyte, HaCaT, ATCC)는 10% FBS(fetal bovine serum), 100 units/ml 페니실린(penicillin) 및 100 mg/ml 스트렙토마이신(streptomycin)이 포함된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium; WelGENE Inc., 한국)에서 37℃를 유지하여 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기내에서 배양하였다.
실시예 1에서 수득한 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신은 증류수를 이용하여 200mg/ml 농도로 스탁(stock)을 제조한 다음, FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지에 첨가하여 시료용액을 제조하였다.
그 다음, 상기 HaCaT 세포를 5×104 개/웰(cell/well)이 되도록 96-웰 플레이트(96-well plate)에 분주한 다음, 24 시간 동안 상기와 동일한 배지에서 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 12 시간의 기아상태를 유지한 뒤, 상기에서 준비한 메이신 시료용액을 사용하여 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신이 10 ppm, 50 ppm, 100 ppm의 농도가 되도록 처리한 다음, 24시간 동안 배양하였다.
세포 생존율은 WST-1 반응액(Cell proliferation reagent WST-1, Roche, cat. No. 1644-807, 스위스)을 아무것도 첨가되지 않은 DMEM 배지에 1/10로 희석하고 이를 각 웰당 100씩 처리하여 1시간 동안 반응시킨 후, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
옥수수 수염 추출물은 200 ppm 농도가 되도록 처리한 다음 상기와 같은 방법으로 세포 생존율을 측정하였으며, 아무것도 처리하지 않은 군을 음성 대조군(control)으로 하였다.
모든 통계 분석은 SAS ver. 9.2 (SAS Institute, Cary, 미국)을 사용하여 수행하였으며, 차이의 유의성은 Duncan의 다중 테스트 및 ANOVA을 사용하여 결정하였으며, p<0.05에서 유의한 차이를 평가하였다. 모든 데이터는 5% 범위에서 유의성이 있었으며, 평균값표준편차로 표기하였다
옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신의 각질형성 세포에 대한 독성 여부 확인
시료 농도 % control
Control 100.00 0.458
옥수수수염 추출물
(NICS-1)		 10ppm 100.05 2.532
50ppm 104.33 7.960
100ppm 109.51 7.587
메이신 10ppm 96.34 5.386
50ppm 104.11 7.524
100ppm 129.17 7.078
그 결과, 표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이 C18컬럼으로 분리한 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 NICS-1으로부터 분리정제된 메이신에 의한 세포 독성은 관찰되지 않았으며, 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신 농도에 의존적으로 각질형성세포의 성장이 촉진되는 것을 확인하였다. 즉, 본 발명의 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신을 포함하는 조성물은 각질형성 세포의 성장을 촉진시켜 표피층의 두께를 개선시킬 수 있으므로, 피부장벽 손상의 개선 또는 강화를 위한 화장료 조성물 또는 피부장벽 손상의 개선 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 활용될 수 있다.
옥수수수염 추출물( NICS -1) 및 메이신의 자외선에 의한 세포 손상 억제 효과 확인
본 발명에서는 각질형성세포에서 자외선에 유도되는 세포 손상 억제효과를 확인하여 C18 컬럼으로 분리한 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신의 피부 세포 보호 능력을 평가하고자 하였다.
HaCaT 세포 및 메이신은 실시예 2와 동일한 방법으로 준비한 다음, HaCaT 세포를 1×104 개/웰(cell/well)이 되도록 96-웰 플레이트(96-well plate)에 분주하고, 24 시간 동안 상기와 동일한 배지에서 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 상기에서 준비한 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신 시료용액을 사용하여 NICS-1 및 메이신의 농도가 각각 5ppm, 10ppm, 50ppm이 되도록 하였고, 배지와 함께 처리한 후 24시간 동안 배양하였다.
이후 자외선B(UVB) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki,일본)를 이용하여 UVB를 70mJ/cm2를 조사하고 메이신을 다시 농도별로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다.
세포 생존율은 WST-1 반응액(Cell proliferation reagent WST-1, Roche, cat. No. 1644-807, 스위스)을 아무것도 첨가되지 않은 DMEM 배지에 1/10로 희석하고 이를 각 웰당 100씩 처리하여 1시간 동안 반응시킨 후, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 자외선 비조사군의 세포 생존율을 100%로 보았을 대, 상대적인 세포 생존율을 측정하였는데, 아무것도 처리하지 않은 군을 음성 대조군(control)으로 하였다
메이신에 의한 피부세포 손상 억제 확인
시료 농도 % of UV-
UVB
70mJ/cm2 		- - 100.00 2.823
+ 54.72 1.987
옥수수수염 추출물
(NICS-1)		 5ppm 56.83 2.249
10ppm 61.25 1.112
50ppm 71.88 3.321
메이신 5ppm 59.55 1.497
10ppm 76.08 1.399
50ppm 80.67 0.400
그 결과, 표 2 및 도 2에 나타난 바와 같이, HaCaT세포에 UVB 70mJ/cm2를 조사한 결과 UVB 비조사군에 비해 세포 생존율이 54.7%로 측정되어 HaCaT세포는 UVB 70mJ/cm2에의해 세포손상이 유발됨을 확인하였다.
5ppm, 10 ppm, 50 ppm 농도의 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신을 처리한 경우, 옥수수수염 추출물(NICS-1)은 각각 56.83%, 61.25%, 71.88%의 세포 생존율을 보였고, 메이신은 각각 59.55%, 76.08%, 80.67%의 세포생존율을 보여, 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신모두 농도 의존적으로 자외선 조사에 의한 피부세포 손상 보호 및 세포 회복이 되는 것을 확인하였는데, 옥수수수염 추출물(NICS-1)에 비해 메이신의 세포 손상 보호 효과가 더 크게 나타났다.
메이신의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과
본 발명에서는 메이신의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 평가하였다.
HaCaT 세포 및 메이신은 실시예 3과 동일한 방법으로 준비한 다음, HaCaT 세포를 1×104 개/웰(cell/well)이 되도록 96-웰 플레이트(96-well plate)에 분주하고, 24 시간 동안 상기와 동일한 배지에서 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 상기에서 준비한 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신 시료용액을 사용하여 각각이 5ppm, 10 ppm, 50 ppm, 100 ppm의 농도가 되도록 배지와 함께 처리한 후 24시간 동안 배양하였다.
이후 자외선B(UVB) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki,일본)를 이용하여 UVB를 10 mJ/cm2를 조사하고 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신을 다시 농도별로 처리한 후 5시간 동안 배양하였으며, 아무것도 처리하지 않은 군을 음성 대조군(control)으로 하였다.
배양 상층액을 150㎕ 취하여 IL-1를 정량함으로서 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신의 염증성 사이토카인 발현억제효과를 판단하였다. IL-1의 양은 효소면역분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)를 이용하여 정량화하였으며, 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1생성량을 100%로 보았을 대, 상대적인 IL-1 생성량을 측정하였다.
자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제효과
시료 농도 % control
UVB 10mJ/cm2
(-)		 - 100.00 4.554
UVB 10mJ/cm2
(+)		 대조군 - 157.57 7.465
옥수수수염 추출물
(NICS-1)		 5ppm 114.21 1.472
10ppm 96.18 9.830
50ppm 73.73 10.838
100ppm 42.65 11.134
메이신 5ppm 96.54 3.345
10ppm 86.78 11.176
50ppm 52.31 9.114
100ppm 32.35 8.105
그 결과, 표 3에 나타난 바와 같이, HaCaT세포에 UVB 10 mJ/cm2를 조사한 결과 UVB 비조사군에 비해 IL-1생성량이 157.57%로 측정되어 HaCaT세포는 UVB에 의해 염증성 사이토카인이 발현됨을 확인하였다.
5ppm, 10 ppm, 50 ppm 및 100 ppm 농도의 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신을 처리한 경우, 옥수수수염 추출물(NICS-1)은 각각 114.21%, 96.18%, 73.73%, 42.65%의 IL-1 생성량을 보였고, 메이신은 각각 96.56%, 86.78%, 52.31%, 32.35%의 IL-1 생성량을 보여 옥수수수염추출물(NICS-1) 및 메이신이 농도 의존적으로 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인의 발현이 감소하는 것을 확인하였는데, 옥수수수염 추출물(NICS-1)에 비해 메이신의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인의 발현을 감소시키는 효과가 더 큰 것으로 나타났다.
옥수수수염 추출물( NICS -1) 및 메이신의 자외선 조사에 의한 DNA 손상 억제 효과
본 발명에서는 옥수수수염 추출물(NICS-1) 및 메이신의 자외선 조사에 의한 DNA 손상 억제 효과를 확인하였다.
HaCaT 세포 및 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신은 실시예 3과 동일한 방법으로 준비한 다음, HaCaT 세포를 4×104 개/웰(cell/well)이 되도록 24-웰 플레이트(24-well plate)에 분주하고, 24 시간 동안 상기와 동일한 배지에서 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 상기에서 준비한 옥수수수염추출물(NICS-1)과 메이신 시료용액을 사용하여 각각 5ppm, 10 ppm, 50 ppm, 100 ppm의 농도가 되도록 배지와 함께 처리한 후 24시간 동안 배양하였다.
이후 자외선B(UVB) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki,일본)를 이용하여 UVB를 10 mJ/cm2를 조사하였다. 다시 배지를 새로 첨가한 다음, 2시간 후에 단세포 전기영동 (일명 Comet assay)을 실시하고 영상분석기(image analyzer: Comet 3.1, Kinetic imaging, England)를 이용하여 테일 길이(tail length: )를 척도로 하여 DNA 손상도를 분석하였는데, 아무것도 처리하지 않은 군을 음성 대조군(control)으로 하였다.
자외선 조사에 의한 DNA 손상 억제 효과
시료 농도 평균 꼬리 길이()
UVB 10mJ/cm2
(-)		 - 54.7
UVB 10mJ/cm2
(+)		 대조군 - 167.8
옥수수수염 추출물
(NICS-1)		 5ppm 136.5
10ppm 124.7
50ppm 95.3
100ppm 86.1
메이신 5ppm 121.6
10ppm 103.8
50ppm 89.4
100ppm 67.1
상기 표 4에 나타난 바와 같이, HaCaT세포에 UVB 10 mJ/cm2를 조사한 결과 UVB 비조사군에 비해 DNA 꼬리 길이가 증가한 것으로 보아, 자외선에 의해 DNA 가 손상됨을 확인하였다.
5ppm, 10 ppm, 50 ppm, 및 100 ppm 농도의 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신을 처리한 경우, 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신 농도 의존적으로 DNA 꼬리 길이가 감소하는 것을 확인하였으며, 이는 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신이 자외선에 의한 DNA 손상을 억제하는 것을 의미한다. 또한 상기 표 4에 나타난 바와 같이 메이신은 옥수수수염 추출물(NICS-1)을 처리한 경우에 비해 DNA 손상 억제 효능이 더 크게 나타남을 확인하였다.
옥수수수염 추출물( NICS -1)과 메이신의 자외선 흡수능 측정
본 발명에서는 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신의 자외선 흡수능을 평가하기 위하여 UV 분광광도계(Shimadzu, UV-1800, Japan)를 이용하여 자외선영역(200~400 nm)에서 흡광도를 측정하였다.
도 4에 나타난 바와 같이 옥수수수염 추출물은 343nm, 271nm에서 최대 흡수 파장을 나타내었고,
도 5에 나타난 바와 같이 메이신은 352nm, 271nm에서 최대 흡수 파장을 나타내었다. 따라서 옥수수수염 추출물(NICS-1)과 메이신은 UV-B (280~320 nm)의 자외선 영역뿐만 아니라, UV-A (320~400 nm) 영역, UV-C (200~280 nm) 영역에 대하여 강한 흡수능을 보이는 것을 확인하였다.
메이신을 유효성분으로 포함하는 크림제형 제조
본 발명에서는 실제 메이신을 포함하는 화장품을 제조하기 위해 하기 표 5와 같이 영양크림을 제조하였다.
메이신을 포함하는 영양크림의 성분(중량%)
비교예 1 비교예 2 제형예 1 제형예 2 제형예 3
스테아린 산 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
스테알리 알콜 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
글리세릴 모노스테아레이트 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2
밀납 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
폴리옥시에틸렌솔비탄모노라우린산에스테르 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
파라옥시안식향산 메틸 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
파라옥시안식향산 프로필 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
트리글리세라이드 5 5 5 5 5
사이클로메티콘 2 2 2 2 2
글리세린 3 3 3 3 3
트리에탄올아민 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15
폴리아크릴산 중합체 0.12 0.12 0.12 0.12 0.12
증류수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
방부제, 향, 색소 미량 미량 미량 미량 미량
메이신 - - 0.02 0.2 1.0
옥수수 추출물 - 1.0 - - -
메이신은 총 조성물 100 중량부에 대하여 각각 0.02 중량부, 0.2 중량부, 1.0 중량부를 첨가하였으며, 아무것도 첨가하지 않은 군을 비교예 1로, 옥수수수염 추출물(NICS-1)이 0.2 중량부 포함된 군을 비교예 2로 하였다.
피부자극 실험
상기 실시예 7에서 제조된 비교예 1, 비교예 2 및 제형예 1 내지 3의 영양크림에 대한 피부자극을 측정하기 위하여 다음과 같은 방법을 이용하여 측정하였다.
건강한 성인 남녀 20명을 대상으로 CTFA 가이드라인 (The Cosmetic, Toility and Fragrance Association, Inc. Washington D.C., 20036, 1991)에 따라 실시하였다. 핀 쳄버(finn chamber)에 시료 및 용액 15mg/15ml를 적하시킨 후, 이것을 시험 부위인 인체의 팔에 얹어 테이프로 고정시켰다. 이어서 24시간 동안 첩포한 후, 첩포를 제거하고 다시 2시간 경과한 다음 시험 부위의 피부 반응을 하기 표 6의 기준에 따라 판정하였다.
피부결과에 따른 판정 기준
구분 점수 판정기준
자극없음 0 무반응
경미한 자극 0.5 희미하거나 가벼운 홍반
1 명확한 홍반이나 약한 홍반
강한 자극 2 구진 및 부종을 동반한 뚜렷한 홍반
3 심한 홍반이며 수포가 형성
제형의 피부자극 실험
구분
구		 자극발생인원 평균자극지수
자극없음 경미한 자극 강한자극 평균자극지수
비교예 1 20 0 0 0
비교예 2 20 0 0 0
제형예 1 20 0 0 0
제형예 2 20 0 0 0
제형예 3 20 0 0 0
그 결과, 표 7에 나타난 바와 같이, 메이신이 포함된 제형예 1 내지 3 및 옥수수 수염 추출물(NICS-1)이 포함된 비교예 2는 피부 자극이 없는 것을 확인하였다.
제형의 자외선에 의한 피부 보호 효과
본 발명의 메이신이 포함된 조성물의 자외선에 의한 피부 보호를 확인하기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 우선, 인위적으로 사람의 피부에 자외선을 조사한 후(1.5MED) 실시예 7에서 제조된 비교예 1, 비교예 2 및 제형예 1 내지 3의 영양크림을 6시간 간격으로 도포하여 주었다. 실험은 20명을 대상으로 하였으며 자외선 조사 후 48시간 후 홍반 생성 정도를 피부 색도계(Skin colorimeter, Minolta사, 일본)를 이용하여 측정하였다.
자외선에 의한 피부보호효과 확인 (20명 평균값)
구분 홍반생성 정도
사용전 사용후
비교예 1 4.2명 17.8명
비교예 2 4.2명 15.7명
제형예 1 4.2명 8.7명
제형예 2 4.2명 5.5명
제형예 3 4.2명 4.7명
(사용전 : 자외선 조사전; 사용 후 : 자외선 조사 후 48 시간 경과 후)
상기 표 8에 나타난 바와 같이, 옥수수수염 추출물(NICS-1)이 포함된 영양크림은 비교예 1과 유사한 수준의 피부보호효과를 보이는 반면, 메이신이 포함된 영양크림은 자외선 조사에 의한 홍반생성정도를 현저하게 감소시키는 것을 확인하였다. 이는 메이신이 포함된 조성물은 자외선에 의한 피부 손상을 억제하는 효과가 매우 우수한 것을 확인하였다.
[제형예 4] 유연 화장수
유연 화장수의 구성성분 (단위 : 중량 %)
성분 함량(%)
글리세린 5.0
1,3-부틸렌 글라이콜 3.0
PEG 1500 1.0
알란토인 0.2
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.03
에탄올 10.0
옥틱도데세스-16 0.2
폴리솔베이트 20 0.2
메이신 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
상기 표 9에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 유연 화장수를 제조하였다.
[제형예 5] 수렴 화장수
수렴 화장수의 구성성분 (단위 : 중량 %)
성분 함량(%)
글리세린 2.0
1,3-부틸렌 글라이콜 2.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.03
에탄올 15.0
폴리솔베이트 20 0.3
메이신 1.0
구연산 미량
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
상기 표 10에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 수렴 화장수를 제조하였다.
[제형예 6] 영양 화장수
영양 화장수의 구성성분 (단위 : 중량 %)
성분 함량(%)
세테아릴 알콜 1.0
글리세릴스테아레이트 0.5
폴리소르베이트 60 1.0
소르비탄세스쿼올리에이트 0.3
세틸옥타노에이트 6.0
스쿠알란 4.0
샤플라워오일 4.0
부틸렌글라이콜 4.0
글리세린 4.0
카보머 0.1
트리에탄올아민 0.1
메이신 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
상기 표 11에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양 화장수를 제조하였다.
[제형예 7] 에센스
에센스의 구성성분 (단위 : 중량 %)
성분 함량(%)
글리세린 10.0
베타인 5.0
PEG 1500 2.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.03
히드록시에틸 셀룰로오스 0.1
카르복시비닐 폴리머 0.2
트리에탄올아민 0.2
옥틸도데칸올 0.3
옥틸도데세스-16 0.4
에탄올 6.0
메이신 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
상기 표 12에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 에센스를 제조하였다.
[제형예 8] 마사지 크림
마사지 크림의 구성성분 (단위 : 중량 %)
성분 함량(%)
글리세린 1.0
1,3-부틸렌 글라이콜 3.0
유동파라핀 45.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
밀납 4.0
세테아릴 글루코사이드 2.0
세스쿼올레인산 소르비탄 1.0
파라핀 1.5
메이신 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
상기 표 13에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 마사지 크림을 제조하였다.
[제형예 9] 팩
팩의 구성성분 (단위 : 중량 %)
성분 함량(%)
폴리비닐 알콜 15.0
셀룰로오스 검 0.2
글리세린 3.0
PEG 1500 2.0
시이크데스트린 0.2
DL-판테놀 0.3
알란토인 0.1
글리시리진산 모노암모늄 0.2
니코틴 아미드 0.4
에탄올 5.0
PEG 40 경화피마자유 0.3
메이신 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
상기 표 14에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.
[제형예 10] 피부외용제용 연고
피부외용제용 연고의 구성성분 (단위 : 중량 %)
성분 함량(%)
에피프리델라놀 0.2
디에틸 세바케이트 10.0
경납 5.0
폴리옥시에틸렌올레일에테르 포스페이트 5.0
벤조산 나트륨 1.0
메이신 1.0
방부제, 향, 색소 미량
바셀린 잔량
상기 표 15에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 피부외용제용 연고를 제조하였다.
상기 제형예 들의 조성비는 화장료 또는 피부외용제 제형에 적합한 성분을 바람직한 제조예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
이상으로, 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (10)

  1. 메이신을 유효성분으로 포함하고,
    상기 메이신은 옥수수수염을 프레타놀 A로 1차 추출하고, 에탄올 및 물로 2차 추출한 추출물에 포함된 것이며,
    상기 메이신은 총 조성물 100 중량부에 대하여 0.001 중량부 내지 5 중량부인 것을 특징으로 하는
    각질형성 세포 성장 촉진을 통한 피부 표피층의 두께 개선 및 자외선에 대한 피부 세포 보호용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은
    자외선에 의한 세포사멸 억제;
    자외선에 의한 DNA 손상 억제; 및
    자외선에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제;로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 효능을 통해 자외선에 대한 피부세포를 보호하는 것을 특징으로 하는 자외선에 대한 피부 세포 보호용 화장료 조성물.
  5. 메이신을 유효성분으로 포함하고,
    상기 메이신은 옥수수수염을 프레타놀 A로 1차 추출하고, 에탄올 및 물로 2차 추출한 추출물에 포함된 것이며,
    상기 메이신은 총 조성물 100 중량부에 대하여 0.001 중량부 내지 5 중량부인 것을 특징으로 하는
    각질형성 세포 성장 촉진을 통한 피부 표피층의 두께 개선 및 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 개선용 화장료 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 조성물은
    자외선에 의한 세포사멸 억제;
    자외선에 의한 DNA 손상 억제; 및
    자외선에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제;로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 효능을 통해 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 개선하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 개선용 화장료 조성물.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 메이신을 유효성분으로 포함하고,
    상기 메이신은 옥수수수염을 프레타놀 A로 1차 추출하고, 에탄올 및 물로 2차 추출한 추출물에 포함된 것이며,
    상기 메이신은 총 조성물 100 중량부에 대하여 0.001 중량부 내지 5 중량부인 것을 특징으로 하는
    각질형성 세포 성장 촉진을 통한 피부 표피층의 두께 개선 및 자외선에 의한 피부 손상 억제 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 메이신을 유효성분으로 포함하고,
    상기 메이신은 옥수수수염을 프레타놀 A로 1차 추출하고, 에탄올 및 물로 2차 추출한 추출물에 포함된 것이며,
    상기 메이신은 총 조성물 100 중량부에 대하여 0.001 중량부 내지 5 중량부인 것을 특징으로 하는
    각질형성 세포 성장 촉진을 통한 피부 표피층의 두께 개선 및 자외선에 대한 피부 세포 보호용 약학적 조성물.
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