KR101814065B1 - 멜라닌 분해 촉진용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 천남성 추출물을 포함하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명에 따른 천남성 추출물을 포함하는 조성물은 새로운 기전인 오토파지를 통해 기 생성된 멜라닌의 분해를 효과적으로 촉진할 수 있으며, 멜라닌 분해가 필요한 화장품, 식품, 의약품 등의 다양한 분야에 적용된다.

Description

멜라닌 분해 촉진용 조성물{COMPOSITION FOR PROMOTING DECOMPOSITION OF MELANIN}
본 발명은 천남성 추출물을 포함하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명에 따른 천남성 추출물을 포함하는 조성물은 새로운 기전인 오토파지를 통해 기 생성된 멜라닌의 분해를 효과적으로 촉진할 수 있으며, 멜라닌 분해가 필요한 화장품, 식품, 의약품 등의 다양한 분야에 적용된다.
인간의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리화학적 변화가 일어나며, 노화는 그 원인에 따라 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 크게 구분될 수 있다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감 등에 따라 자유라디칼이 활성화되어 피부 노화가 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고 세포 및 조직을 손상시키는데 이를 수 있다. 즉, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류, 핵산 등이 산화되어 피부세포 및 조직이 파괴됨에 따라, 피부 노화가 더 심해지게 된다. 특히, 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글리칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응을 일으키고 피부 탄력을 저하시키며, 이것이 더 심해질 경우 DNA 변이에 의해 돌연변이, 암 유발, 면역기능 저하를 야기한다.
피부의 노화 과정에서 색소 침착에 의한 피부 변화가 수반되며, 이때 피부색에 영향을 주는 색소에는 멜라닌, 멜라조이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있다. 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로, 멜라닌의 생합성에 영향을 미치는 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비 정도이다. 멜라닌은 특별한 최대 흡수 파장이 없으며 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한, 멜라닌은 활성산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조 내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다. 따라서, 멜라닌은 UV를 흡수하는 역할을 통해 피부세포를 UV에 의한 손상으로부터 보호하는 역할도 하지만, 멜라닌형성(melanogenesis)이 과도하게 진행되면 멜라닌이 피부에 과다 침착하여 기미, 주근깨, 흑색종과 같은 피부색소침착 질환을 야기하므로, 멜라닌의 양의 균형을 적정 수준으로 유지하는 것이 요구된다.
따라서, 멜라닌을 효과적으로 조절할 수 있는 물질을 찾아내기 위하여, 약학, 화장학, 식품 등 다양한 분야에서 연구가 활발히 진행 중이다. 그러나, 현재까지 연구된 결과는 멜라닌의 생합성 과정에 있어서 멜라닌의 생성을 저해하는 효능, 즉 예방학적 효능을 나타내는 물질에 대한 것들이 대부분이다. 반면, 기 생성된 멜라닌을 효율적으로 분해할 수 있는 물질, 즉 예방적인 효능에 그치지 않고 치료적인 효능도 나타낼 수 있는 물질에 대해서는 미충족 수요가 크게 존재한다.
오토파지(autophagy)는 세포 내에서 손상되거나 불필요하게 된 구성요소 또는 세포 소기관을 분해하여 에너지원으로 재생산하는 과정을 일반적으로 지칭한다. 세포 내에서 더 이상 필요없게 된 단백질 또는 세포 구성성분들은 오토파지 활성이 증가됨에 따라 오토파고좀(autophagosome) 막으로 둘러쌓여 자가소포체를 형성한다. 여기에 리소좀이 융합한 후, 리소좀 내의 가수분해효소가 자가소포체 내의 물질을 분해하여 방출한다. 이와 같이 방출된 산물은 새로운 세포 소기관을 생성할 때 사용된다.
최근 오토파지에 대한 관심이 높아지면서 다양한 연구가 진행되고 있으며, 피부 노화 과정에서 중요한 역할을 하는 멜라닌이 오토파지에 의해 분해될 수 있다는 점에 대해서도 보고되고 있다. 그러나, 멜라노사이트에서 기 생성된 멜라닌을 오토파지에 의해 효과적으로 분해할 수 있는 물질에 대해서는 아직까지도 밝혀진 바 없다.
종래기술의 문제점을 해결하기 위하여 본 발명자들은 오랜 기간 동안 연구한 결과, 단독 유효성분으로서 천남성 추출물이 새로운 기전인 오토파지를 통해 기 생성된 멜라닌의 분해를 효과적으로 촉진할 수 있다는 것을 실험적으로 입증하여, 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명의 일구현예에 따르면, 천남성 추출물을 포함하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물이 제공된다.
상기 천남성이란 천남성과의 여러해살이 풀로서 산지의 습지에서 자라며, 높이 15~50cm로 외대로 자라고 굵고 육질이다. 알줄기는 편평한 공 모양이며, 주위에 작은 알줄기가 2~3개 달리고 윗부분에서 수염뿌리가 사방으로 퍼진다. 줄기의 겉은 녹색이지만 때로는 자주색 반점이 있고, 1개의 잎이 달리는데 5~11개의 작은 잎으로 갈라진다. 작은 잎은 달걀 모양의 바소꼴 또는 달걀을 거꾸로 세운 모양의 바소꼴로 가장자리에 톱니가 있다. 꽃은 5~7월에 피고 단성화이며, 포의 통부는 녹색이고 윗부분이 앞으로 구부러진다. 꽃대 상부가 곤봉 모양이나 회초리 모양으로 발달하는 것도 있다. 열매는 장과(漿果)로 옥수수처럼 달리고 10월에 붉은색으로 익는다. 알줄기는 거담, 진경, 소종, 거풍 등의 효능이 있어 중풍, 반신불수, 상풍, 종기 등에 사용되는 것으로 알려져 있다.
본 발명에 따른 조성물에 있어서, 천남성은 재배한 것, 채취한 것 또는 시판되는 것 등이 제한 없이 사용될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 천남성 추출물은 천남성의 뿌리 추출물이다.
본 발명에 사용되는 용어 "추출물"은 생약을 적절한 추출용매로 추출하고 추출용매를 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 여기에는 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물, 또는 분획물이 포함되는 것으로 해석된다. 본 발명에 따른 천남성 추출물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법을 이용하여 제조할 수 있으며, 예를 들어 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 천남성 추출물을 제조하기 위해 사용되는 추출용매로는 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가알코올; 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합 형태가 포함될 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 천남성 추출물을 포함하는 멜라닌 분해 촉진용 화장료 조성물이 제공된다.
본 발명에 따른 화장료 조성물에 유효성분으로서 포함되는 천남성 추출물의 양은 사용 목적, 사용 기간, 대상체의 멜라닌 축적 정도 등에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 천남성 추출물의 함량은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.0001% 내지 100% 중량일 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 패치류, 연고류, 피부접착용 겔류, 크림류, 팩류, 화장수류, 에센스류, 스프레이류, 마스크류, 파운데이션류, 메이크업베이스류, 세정제류, 수(W)형, 유(O)형, 실리콘(S)형, 수중유(O/W)형, 유중수(W/O)형, 실리콘중수(W/S)형, 수중실리콘(S/W)형, 고체형 등의 다양한 제형으로 제조될 수 있으며, 통상적으로 사용되는 화장료 제조방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 효능 증진을 위해 천남성 추출물 이외에 추가 성분을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 추가 성분은 천남성 추출물의 효능을 상쇄시키거나 감소시키지 않는 한, 기 생성된 멜라닌의 분해를 억제하는 효과를 나타내는 성분 또는 제제, 멜라닌의 생성을 차단 또는 억제하는 효과를 나타내는 성분 또는 제제 등일 수 있다. 선택적으로, 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 담체 등을 추가로 포함할 수 있다. 선택적으로, 화장품 기능을 부가하거나 증대시키기 위하여 전형적으로 사용되는 성분들이 또한 추가될 수 있다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 천남성 추출물을 포함하는 멜라닌 분해 촉진용 식품 조성물이 제공된다.
상기 식품은 건강기능성 식품일 수 있다. 상기 용어 "건강기능성 식품"이란, 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환제 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 의미한다 . 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 식품 조성물은 천연 식물 추출물에 해당하는 천남성 추출물을 유효성분으로서 포함하므로 의약품의 장기 복용 시 일반적으로 발생할 수 있는 부작용 또는 내성이 없다. 따라서, 본 발명에 따른 식품 조성물은 단독으로 사용하는 것도 가능할 뿐만 아니라, 멜라닌 분해 효과를 극대화하기 위한 목적으로 본 발명에서 제공하는 화장료 조성물 및/또는 약학 조성물의 사용과 동시에 또는 순차적으로 사용하는 것도 가능하다.
본 발명에 따른 식품 조성물에 유효성분으로서 포함되는 천남성 추출물의 양은 사용 목적, 사용 기간, 대상체의 멜라닌 축적 정도, 원하는 효과 발생 시기 등에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 천남성 추출물은 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 약 0.0001 내지 약 100 중량%의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 효능 증진을 위해 천남성 추출물 이외에 추가 성분을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 추가 성분은 천남성 추출물의 효능을 상쇄시키거나 감소시키지 않는 한, 기 생성된 멜라닌의 분해를 억제하는 효과를 나타내는 성분 또는 제제, 멜라닌의 생성을 차단 또는 억제하는 효과를 나타내는 성분 또는 제제 등일 수 있다.
상기 식품 조성물은 환제, 정제, 과립, 분말, 캡슐, 액상 등의 제형일 수 있다. 또한, 상기 식품의 종류는 특별한 제한되지 않는다. 상기 식품 조성물이 첨가될 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료, 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 조성물은 통상의 식품에 사용되는 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드, 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제, 또는 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 또다른 구현예에 따르면, 천남성 뿌리 추출물을 포함하는 피부색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물이 제공된다.
멜라닌은 UV를 흡수하는 역할을 통해 피부세포를 UV에 의한 손상으로부터 보호하는 역할을 하므로, 인간에게 필수적인 성분이다. 본 발명에서 사용되는 용어 "피부색소침착 질환"이란, 멜라닌 색소와 같은 피부색소가 적정 수준보다 과다 생성됨에 따라 피부에 침착되어 야기되는 질환을 의미한다. 예를 들어, 피부암, 잡티, 기미, 주근깨, 검버섯, 흑색종, 일광흑색증(solar tigines), 노인성 색소반, 반점, 유전적 요인의 과색소침착, 대사 또는 약물 관련 기원의 과색소침착 등이 포함될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 피부색소침착 질환의 증상이 호전되거나 완치되는 모든 행위를 의미한다. 또한, 용어 "예방"은 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 피부색소침착 질환의 증상을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 따른 약학 조성물에 유효성분으로서 포함되는 천남성 추출물의 양은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태, 연령, 성별 등에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 천남성 추출물은 약학 조성물 전체 중량을 기준으로 약 0.0001 내지 약 100 중량%의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 의약품의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물에 함유될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제는 예를 들어 락토오스, 덱스트로오스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 경구 투여 제형일 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 약학 조성물은 당업자에게 잘 알려진 기술을 이용하여 국소 투여를 위한 적합한 투여 제형으로 제형화될 수 있고, 상기 제형은 외용제, 발포정, 좌제 등을 포함할 수 있다. 일구현예에서, 본 발명의 약학 조성물은 상기 추출물을 당해 기술분야에서 잘 알려지고 일반적으로 사용되는 기제(base)와 혼합하여 외용제로 제형화될 수 있다. 상기 외용제는 에멀젼, 겔, 연고, 크림, 패치, 리니먼트, 파우더, 에어로졸, 스프레이, 로션, 세럼, 페이스트, 폼, 점적제, 현탁액 또는 팅크 등일 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 대상체에게 투여된다. 본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여되거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 또한, 단일 또는 다중 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 환자의 연령, 성별, 체중, 투여 경로, 질병의 정도 등에 따라 0.1 내지 100 mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있으며, 상기 범위에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 대해서는 하기의 실시예와 본 명세서에 첨부된 도면에 기초하여 보다 상세하게 설명될 것이나, 이는 본 발명의 권리범위를 제한하려는 것이 아니다. 또한, 당업계에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 취지를 해하지 않는 범위 내에서 본 발명에 대해 다양한 변형 및 수정을 가할 수 있을 것이다.
본 발명에 따른 천남성 추출물을 포함하는 조성물은 피부 내 오토파지 활성을 유의적으로 증진시킬 수 있으며, 이에 따라 기 생성된 멜라닌의 분해를 촉진하는 것이 가능하다.
특히, 기 생성된 멜라닌의 분해 속도가 매우 빠르므로, 과다 생성된 멜라닌으로 인해 발생하는 상태 또는 질환의 개선 또는 치료 효과를 신속하게 나타낼 수 있다. 따라서, 미용 효과를 조기에 향유하고자 하는 대상체, 또는 멜라닌 과다침착으로 인한 질환을 앓고 있는 환자에게 유용하다.
더욱이, 본 발명에 따른 조성물에 유효성분으로서 포함되는 천남성 추출물은 후술하는 임상시험에서 과색소침착병변 피험자의 멜라닌을 독성 없이 분해한다는 것이 입증되었는바, 인체에 대한 안전성이 보장된다.
이와 같은 본 발명의 조성물은 멜라닌 분해가 필요한 다양한 분야에 적용될 수 있는바, 화장품의 형태로 제공될 수도 있으며, 또다르게는 기능성 식품 또는 식품보충제의 형태로 제공될 수도 있으며, 의약품의 형태로 제공될 수도 있다.
도 1은 실시예 1에서 80% 에탄올을 추출용매로 사용하였을 때 대조군과 비교하여 오토파지 팩터(Autophagy factor) 활성을 나타내는 형광염색 현미경 사진이다.
도 2는 과색소침착증 병변 임상시험에서 천남성 뿌리 추출물의 멜라닌 분해 효과를 나타내는 그래프이다.
실시예 1
천남성 뿌리 50g을 둥근 플라스크에 정확히 계량한 후, 각각 물, 10% 에탄올 수용액, 20% 에탄올 수용액, 30% 에탄올 수용액, 40% 에탄올 수용액, 50% 에탄올 수용액, 60% 에탄올 수용액, 70% 에탄올 수용액, 80% 에탄올 수용액, 90% 에탄올 수용액, 100% 에탄올 용액 950g을 이용하여 추출하였다. 추출 후 1.2 μm, 0.45 μm 필터를 이용하여 여과를 수행하고 농축건조하였으며, 이에 따라 수득된 생성물을 후술하는 시험예에 사용하였다.
비교예 1
천남성 풀 50g을 둥근 플라스크에 정확히 계량한 후, 각각 물, 10% 에탄올 수용액, 20% 에탄올 수용액, 30% 에탄올 수용액, 40% 에탄올 수용액, 50% 에탄올 수용액, 60% 에탄올 수용액, 70% 에탄올 수용액, 80% 에탄올 수용액, 90% 에탄올 수용액, 100% 에탄올 용액 950g을 이용하여 추출하였다. 추출 후 1.2 μm, 0.45 μm 필터를 이용하여 여과를 수행하고 농축건조하였으며, 이에 따라 수득된 생성물을 후술하는 시험예에 사용하였다.
비교예 2
천남성 잎 50g을 둥근 플라스크에 정확히 계량한 후, 각각 물, 10% 에탄올 수용액, 20% 에탄올 수용액, 30% 에탄올 수용액, 40% 에탄올 수용액, 50% 에탄올 수용액, 60% 에탄올 수용액, 70% 에탄올 수용액, 80% 에탄올 수용액, 90% 에탄올 수용액, 100% 에탄올 용액 950g을 이용하여 추출하였다. 추출 후 1.2 μm, 0.45 μm 필터를 이용하여 여과를 수행하고 농축건조하였으며, 이에 따라 수득된 생성물을 후술하는 시험예에 사용하였다.
비교예 3
천남성 줄기 50g을 둥근 플라스크에 정확히 계량한 후, 각각 물, 10% 에탄올 수용액, 20% 에탄올 수용액, 30% 에탄올 수용액, 40% 에탄올 수용액, 50% 에탄올 수용액, 60% 에탄올 수용액, 70% 에탄올 수용액, 80% 에탄올 수용액, 90% 에탄올 수용액, 100% 에탄올 용액 950g을 이용하여 추출하였다. 추출 후 1.2 μm, 0.45 μm 필터를 이용하여 여과를 수행하고 농축건조하였으며, 이에 따라 수득된 생성물을 후술하는 시험예에 사용하였다.
비교예 4
천남성 꽃 50g을 둥근 플라스크에 정확히 계량한 후, 각각 물, 10% 에탄올 수용액, 20% 에탄올 수용액, 30% 에탄올 수용액, 40% 에탄올 수용액, 50% 에탄올 수용액, 60% 에탄올 수용액, 70% 에탄올 수용액, 80% 에탄올 수용액, 90% 에탄올 수용액, 100% 에탄올 용액 950g을 이용하여 추출하였다. 추출 후 1.2 μm, 0.45 μm 필터를 이용하여 여과를 수행하고 농축건조하였으며, 이에 따라 수득된 생성물을 후술하는 시험예에 사용하였다.
비교예 5
천남성 열매 50g을 둥근 플라스크에 정확히 계량한 후, 각각 물, 10% 에탄올 수용액, 20% 에탄올 수용액, 30% 에탄올 수용액, 40% 에탄올 수용액, 50% 에탄올 수용액, 60% 에탄올 수용액, 70% 에탄올 수용액, 80% 에탄올 수용액, 90% 에탄올 수용액, 100% 에탄올 용액 950g을 이용하여 추출하였다. 추출 후 1.2 μm, 0.45 μm 필터를 이용하여 여과를 수행하고 농축건조하였으며, 이에 따라 수득된 생성물을 후술하는 시험예에 사용하였다.
시험예 1: 오토파지 활성 측정
오토파지 활성 마커로 사용되는 LC3 단백질에 GFP 형광 단백질을 tagging하여, B16F1 흑색종 세포주로부터 GFP-LC3 세포주(B16F1/GFP-LC3)를 획득하였다. 이어서, B16F1/GFP-LC3 세포주에 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 5에서 수득된 생성물을 각각 10 ppm∼10,000 ppm의 농도로 처리하였다.
오토파지 활성 기작 동안, LC3Ⅰ 단백질은 LC3Ⅱ 단백질로 변환되어 자식포 활성에 관여한다. 즉, LC3Ⅰ 단백질이 LC3Ⅱ 단백질로 전환되면서 오토파고좀(autophagosome)이 형성되어 형광을 띄는 구형 베지클(vesicle)이 생성되며, 이에 따라 형광값이 증폭된다.
오토파고좀 막으로 둘러쌓인 형태의 세포 형광세기를 A.U.(arbitrary unit)로 환산하여 그 값을 하기 표 1에 나타내었다.
A.U. 값의 기준은 무처리 상태의 B16F1/GFP-LC3 세포의 형광세기 값이며, 그 값을 1로 기준을 잡았다. A.U. 값이 높을수록 기 생성된 멜라닌이 오토파고좀에 의해 개별 아미노산으로 더 많이 분해되었다는 것을 의미한다. 반면, 세포주에 처리된 물질이 효과가 없다면, A.U.는 기준값 1.0을 나타낸다.
추출용매
물 10%
에탄올		 20%
에탄올		 30%
에탄올		 40%
에탄올		 50%
에탄올		 60%
에탄올		 70%
에탄올		 80%
에탄올		 90%
에탄올		 100%
에탄올

실시예1
(뿌리 추출물)		 농도
10 ppm		 3 3 3 3 3 3 5 4 5 4 3
농도
100 ppm		 10 11 11 11 12 11 16 15 17 14 12
농도
10,000 ppm		 >20 >20 >20 >20 >20 >20 >20 >20 >20 >20 >20
비교예1
(풀 추출물)		 농도
10∼10,000 ppm		 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
비교예2
(잎 추출물)		 농도
10∼10,000 ppm		 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
비교예3
(줄기 추출물)		 농도
10∼10,000 ppm		 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
비교예4
(꽃 추출물)		 농도
10∼10,000 ppm		 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
비교예5
(열매 추출물)		 농도
10∼10,000 ppm		 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
상기 표 1의 시험결과에서 보여지는 바와 같이, 천남성 뿌리 추출물은 비극성 용매 물에서 극성 용매 100% 에탄올에 이르기까지 모든 용매에서 멜라닌 세포 모델의 오토파지 활성을 증가시킨 반면(실시예 1), 천남성의 풀, 잎, 줄기, 꽃 또는 열매에서 유래된 추출물은 오토파지를 활성화시키지 못하였음이 입증되었다(비교예 1 내지 5).
B16F1/GFP-LC3 세포를 무처리한 군의 형광 현미경 촬영사진을 도 1의 좌측에 나타내었으며, 이와 대비하기 위하여 상기 실시예 1 중에서 80% 에탄올을 사용하여 추출한 농도 10 ppm의 천남성 뿌리 추출물로 B16F1/GFP-LC3 세포를 처리한 군의 형광 현미경 촬영사진을 도 1의 우측에 나타내었다.
시험예 2: 멜라닌 분해능 측정
천남성의 추출용매와 추출부위에 따른 멜라닌 분해능을 비교하기 위하여, Melanoderm 인공조직 모델을 준비하였다.
적응 단계로서 고체 배지에 담겨 있는 조직(Transwell)을 핀셋으로 들어서, 조직 주위의 agar를 제거한다. 6-웰 플레이트에 배지 900 ㎕를 넣고, 조직을 옮겨 37℃, CO2 5% 조건하에 1시간 동안 배양하였다. 새로운 6-웰 플레이트에 핀셋으로 washer의 둥근 면이 밑으로 가도록 2개씩 포개어 각 웰에 놓았다. 1시간 후에 washer를 넣은 6-웰 플레이트의 각 웰마다 배지를 5 ㎖씩 넣고, washer 위에 조직을 올린 후 37℃, CO2 5% 조건하에 배양하였다.
이어서, 새로운 24-웰 플레이트에 배지 400 ㎕를 넣고, 6-웰 플레이트에서 배양되고 있는 조직을 옮겼다. 조직 세포 독성이 있는지 확인하기 위해 현미경으로 관찰하였다. Washer는 DPBS가 충분히 담긴 50㎖ 튜브에 넣어서 씻고, 알코올이 충분히 담긴 50㎖ 튜브로 옮겼다. Washer를 몇 개씩 핀셋으로 집어서 알코올 램프의 불을 붙인 후 호일 위에 놓았다. 24-웰 커버에 적힌 조직 번호를 찍고, 새로운 6-웰 플레이트에 washer의 둥근 면이 밑으로 가도록 2개씩 포개어 각 웰에 놓았다. Washer를 넣은 6-웰 플레이트의 각 웰마다 배지를 5㎖씩 넣고, washer 위에 조직을 놓았다.
실시예 1 및 비교예 1 내지 5의 추출물을 각각 30 ㎕씩 조직 위에 직접 처리하고, 37℃, CO2 5% 조건하에 배양하였다. 처리 후 3일 간격으로 인공조직을 사진촬영하였으며, 처리 전후의 L(brightness parameter) 값의 차이(△L)를 측정하였다.
△L 값은 하기 표 2에 나타내었다. 본 시험예에서 제작된 인공 조직은 시간이 경과함에 따라 자연적으로 흑화된다. 따라서, △L 값이 클수록 조직이 더 흑화되었다는 것을 의미한다. 반면, △L 값이 작을수록 조직에서 생성되는 멜라닌이 분해되어 흑화 진행을 저지하고 백화된다는 것을 나타낸다.
추출용매
물 10%
에탄올		 20%
에탄올		 30%
에탄올		 40%
에탄올		 50%
에탄올		 60%
에탄올		 70%
에탄올		 80%
에탄올		 90%
에탄올		 100%
에탄올
실시예1
(뿌리 추출물)		 10 10 9 9 10 9 5 6 5 8 9
비교예1
(풀 추출물)		 19 18 19 20 22 19 19 20 19 20 20
비교예2
(잎 추출물)		 19 20 23 22 20 25 19 20 20 21 22
비교예3
(줄기 추출물)		 22 21 20 23 23 20 24 23 20 19 20
비교예4
(꽃 추출물)		 20 20 20 21 23 20 25 21 21 22 18
비교예5
(열매 추출물)		 23 22 20 20 25 20 19 20 23 19 21
대조군
(용매, DMSO)
18
상기 표 2의 시험결과에서 보여지는 바와 같이, 천남성 뿌리 추출물은 비극성 용매 물에서 극성 용매 100% 에탄올에 이르기까지 모든 용매에서 3D 인공 조직 모델의 멜라닌 분해 효과가 뚜렷하게 나타난 반면(실시예 1), 천남성의 풀, 잎, 줄기, 꽃 또는 열매에서 유래된 추출물은 멜라닌 분해 효과를 나타내지 못하였다(비교예 1 내지 5).
시험예 3: 과색소침착증 병변에서 기 생성 멜라닌 분해능의 임상학적 측정
하기 표 3의 조성 및 함량(중량%)에 따라 실시예 2 및 비교예 6의 크림을 각각 제조하였다.
성분 실시예 2 비교예 6
1 친유형 모노스테아린산글리세린 2.0 2.0
2 스테아린산 1.5 1.5
3 세테아릴 알콜 2.2 2.2
4 밀납 1.0 1.0
5 스쿠알란 3.0 3.0
6 경화식물유 1.0 1.0
7 소르비탄 스테아레이트 0.6 0.6
8 광물유 5.0 5.0
9 폴리솔베이트 60 1.5 1.5
10 디메치콘 1.0 1.0
11 트리옥타노인 5.0 5.0
12 베타인 3.0 3.0
13 트리에탄올아민 1.0 1.0
14 글리세린 5.0 5.0
15 소듐히알루로네이트 3.0 3.0
16 천남성 뿌리 추출물(80%에탄올) 0.05 -
17 증류수 잔량 잔량
18 방부제, 방향제, 색소 미량 미량
보다 구체적으로는, 상기 표 3에서 먼저 원료 12 내지 17의 수성성분을 80℃로 가온하여 완전 용해시킨 후, 원료 1 내지 11을 80℃로 가온하여 상기 원료 12 내지 17의 용액에 투입하고, 호모믹서(Homo Mixer Mark Ⅱ, Primix, JPN)를 이용하여 3000 rpm에서 15분 동안 유화시켰다. 그 후, 원료 18을 투입하여 5분 동안 교반시킨 후 실온으로 냉각하였다. 이에 따라 실시예 2 및 비교예 6의 크림을 수득하였다.
과색소침착증 병변을 가지고 있는 30대 이상 여성 22명을 대상으로 실시예 2 및 비교예 6의 크림을 4주간 얼굴 부위에 사용하도록 하였다. 그 후, 2주, 4주 간격으로 피부과 전문의의 육안평가와 Mexameter를 이용하여 기 생성된 멜라닌 분해 효과를 측정하였다. 그 결과는 도 2에 그래프로 나타내었다.
도 2의 그래프에서 볼 수 있듯이, 천남성 뿌리 추출물이 첨가되지 않은 비교예 6의 크림은 멜라닌 분해에 대해 유의적인 효과를 나타내지 못한 반면, 천남성 뿌리 추출물이 첨가된 실시예 2의 크림은 매우 우수한 멜라닌 분해 효과를 나타내었다. 특히, 놀랍게도 2주만에 유의적인 멜라닌 분해 효과가 관찰되었으며, 이는 본 발명에 따른 조성물이 기 생성된 멜라닌을 단시간내에 분해할 필요성이 있는 경우에 매우 유용할 것이라는 점을 시사한다.
더욱이, 임상시험에서 과색소침착증 병변을 가진 피험자의 멜라닌이 분해될 때, 피부 트러블과 같은 어떠한 부작용이나 독성도 발견되지 않았다.
이하, 본 발명의 제형예로서 유연 화장수, 수렴화장수, 영양 화장수, 마사지 크림, 에센스 및 팩을 예시한다. 다만, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형은 이에 제한되는 것으로 해석해서는 안 되며, 본 발명의 범위 내에서 당업자의 통상적인 변화가 가능한 것으로 이해되어야 한다.
제형예 1: 유연화장수
성분 중량(%)
1 글리세린 5.00
2 1,3-부틸렌 글라이콜 3.00
3 PEG 1500 1.00
4 알란토인 0.10
5 DL-판테놀 0.30
6 EDTA-2Na 0.02
7 벤조페논-9 0.04
8 에탄올 10.00
9 옥틱도데세스-16 0.20
10 폴리솔베이트 20 0.20
11 천남성 뿌리 추출물 5.0
12 방부제, 방향제, 색소 미량
13 증류수 잔량
제형예 2: 수렴화장수
성분 중량(%)
1 글리세린 2.00
2 1,3-부틸렌 글라이콜 2.00
3 알란토인 0.10
4 DL-판테놀 0.30
5 EDTA-2Na 0.02
6 벤조페논-9 0.04
7 에탄올 15.00
8 폴리솔베이트 20 0.20
9 천남성 뿌리 추출물 3.0
10 구연산 미량
11 방부제, 방향제, 색소 미량
12 증류수 잔량
제형예 3: 영양화장수
성분 중량(%)
1 세테아릴 알콜 1.00
2 글리세릴스테아레이트 0.50
3 폴리소르베이트 60 1.00
4 소르비탄세스퀴올리에이트 0.30
5 세틸옥타노에이트 6.00
6 스쿠알란 4.00
7 샤플라워오일 4.00
8 부틸렌글라이콜 4.00
9 글리세린 4.00
10 카보머 0.10
11 트리에탄올아민 0.10
12 천남성 뿌리 추출물 1.00
13 방부제, 방향제, 색소 미량
14 증류수 잔량
제형예 4: 에센스
성분 중량(%)
1 글리세린 10.00
2 베타인 5.00
3 PEG 1500 2.00
4 알란토인 0.10
5 DL-판테놀 0.30
6 EDTA-2Na 0.02
7 벤조페논-9 0.04
8 히드록시에틸 셀룰로오스 0.10
9 카르복시비닐 폴리머 0.20
10 트리에탄올아민 0.18
11 옥틸도데칸올 0.30
12 옥틸도데세스-16 0.40
13 에탄올 6.00
14 천남성 뿌리 추출물 5.00
15 방부제, 방향제, 색소 미량
16 증류수 잔량
제형예 5: 팩
성분 중량(%)
1 폴리비닐 알콜 15.00
2 셀룰로오스 검 0.15
3 글리세린 3.00
4 PEG 1500 2.00
5 시이크데스트린 0.15
6 DL-판테놀 0.30
7 알란토인 0.10
8 글리시리진산 모노암모늄 0.20
9 니코틴 아미드 0.40
10 에탄올 5.00
11 PEG 40 경화피마자유 0.30
12 천남성 뿌리 추출물 1.00
13 방부제, 방향제, 색소 미량
14 증류수 잔량

Claims (9)

  1. 천남성 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물로서,
    상기 조성물은 기 생성된 멜라닌을 오토파지에 의해 분해하는 것을 특징으로 하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 천남성 뿌리 추출물은 물, 알코올, 또는 이들의 혼합물 중에서 선택된 용매를 이용하여 수득된 것을 특징으로 하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 피부암, 잡티, 기미, 주근깨, 검버섯, 흑색종, 일광흑색증, 노인성 색소반, 반점, 유전적 요인의 과색소침착, 또는 대사 또는 약물 관련 기원의 과색소침착 중에서 선택되는 피부색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물인 것을 특징으로 하는 멜라닌 분해 촉진용 조성물.
  5. 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1항에 따른 멜라닌 분해 촉진용 조성물을 제조하는 방법:
    a) 물, 알코올, 또는 이들의 혼합물 중에서 선택된 용매를 이용하여 천남성 뿌리를 추출하는 단계; 및
    b) 상기 a) 단계에서 수득한 추출물을 필터를 통해 여과하여 멜라닌 분해 촉진용 조성물을 수득하는 단계.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
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