KR101761877B1

KR101761877B1 - 버크홀데리아 라타 씨에비13001 균주를 이용한 식물병 방제제

Info

Publication number: KR101761877B1
Application number: KR1020150040998A
Authority: KR
Inventors: 함수상; 한광섭; 김병련; 권미경; 남윤규
Original assignee: 충청남도
Priority date: 2015-03-24
Filing date: 2015-03-24
Publication date: 2017-07-26
Also published as: KR20160114461A

Abstract

본 발명은 새롭게 분리, 동정된 버크홀데리아 라타 CAB13001(Burkholderia lata CAB13001)를 유효성분으로 포함하는 식물병 방제용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)를 유효성분으로 포함하는 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides), 스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum), 스클레로티움 세피보룸(Sclerotium cepivorum), 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea), 또는 스템필리움속(Stemphylium sp.)의 증식 억제 또는 사멸용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)는 식물병 방제를 위한 농약으로 활용될 수 있고, 항생제 대신 사용될 수 있으므로, 항생제 내성균 출현 가능성을 감소시키고, 환경 안정성을 높일 수 있다.

Description

버크홀데리아 라타 씨에비13001 균주를 이용한 식물병 방제제{Composition for controlling plant disease using Burkholderia lata CAB13001}

본 발명은 식물병균 억제 효과를 가지는 새롭게 분리, 동정된 신규 버크홀데리아(Burkholderia)속 균주 및 이들을 이용한 식물병 방제용 조성물에 관한 것이다.

최근에 식물병의 생물학적 방제에 대한 관심이 증대되고 있다. 생물학적 방제는 소비자의 안전한 농산물 요구증대에 부응하여, 환경에 유해한 화학적 농약을 사용하는 대신에 미생물 또는 식물 추출물을 이용하여 환경, 다른 식물 및 인축에는 영향을 미치지 않으면서 대상 병을 선택적으로 방제한다.

따라서 최근에는 미생물 살균제를 이용한 친환경 농업을 추구하는 재배농가들이 급속히 증가하는 추세이고 효율적이며 보다 안전한 농산물 생산을 위한 방제기술 개발이 요구되고 있다.(Dennis and Davis, 1979; Hunter et al., 1987; Katan, 1980; Kim et al., 1995).

한편 탄저병(anthracnose)은 사과, 포도, 고추, 수박 등의 작물에 나타나는 식물병으로서 온난다습한 지역의 식물에서 발생하며, 주로 콜레토트리쿰(Colletotrichum) 속이 원인이다. 이들 곰팡이는 분생자층에서 포자를 만들어낸다. 이 병에 걸리면 식물의 잎, 줄기, 열매, 꽃에 여러 색의 반점들이 생겨나는데, 이 반점들은 점점 커져 조직을 위축시키고 식물을 시들어 죽게 한다. 탄저병을 예방하기 위해서는 병든 부분을 제거하거나 살균제를 살포하거나 식물 사이에 탄저병균을 전파시키는 진드기류와 곤충들을 제거한다.

현재 고추 재배농가는 탄저병 방제를 위하여 과실이 달린 7월 이후에 방제가 집중되어 작기당 10회 이상의 약제 방제로 농약내성 뿐만 아니라 잔류농약에 의한 인체 위해성 문제가 대두되고 있어 국내 고추 생산농가의 품질 고급화 달성을 위해서는 친환경 재배가 유력한 대안으로 대두되고 있다. 생물농약 등록규정이 2001년 마련되었고, 지금까지 친환경 재배를 위한 병해관리 기술로 역병과 탄저병 저항성 고추품종 육종이 진행중이지만, 병해방제를 위한 전용 생물농약(미생물 제제)은 전무한 상태이므로 고추의 주요 병해에 효과가 탁원한 생물농약 개발이 절실한 상황이다. 종래 고추 역병 생물적 방제 근권 세균인 슈도모나스 아우란티아카(Pseudomonas aurantiaca)를 선발하여 근권정착 능력을 검토한 바 있으며(Chang et al., 2010), 토양에서 분리한 방선균 스트렙토마이세스 그리세오퓨스쿠스 200401(Streptomyces griseofuscus 200401)을 이용하여 고추의 생육촉진 뿐만 아니라 역병 발생억제 효과를 증명한 바 있고(Lim et al., 2006), 믹소코커스(Mixococcus)속 균을 이용하여 고추 탄저병균에 길항 효과가 있는지를 검토하였다(Kim et al., 2011). 하지만 친환경 유기농자재로 등록된 품목으로는 아인산염을 포함하여 미생물제제 7종, 미생물추출물 2종, 식물추출물 2종이 전부이며, 이 또한 상용되고 있지 않은 실정이다.

김성택, 윤성철. 2011. 점액세균 Myxococcus sp. KYC1126을 이용한 고추 역병 생물적 방제 효능. 한국식물병리학회. 17(2) : 124-128.

이에 본 발명은 식물병균의 사멸을 유도할 수 있는 새로운 균주를 분리하고, 이를 함유하는 식물병 방제용 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 식물병 조성물을 이용한 식물병의 방제 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 식물병에 대해 방제 효과를 발휘하는 새롭게 분리, 동정된 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)를 제공한다.

상기 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)는 하기의 특성 중 하나 이상 가질 수 있다:

i) 적정 생육 온도는 25℃~30℃;

ii) 적정 생육 pH는 6~7;

iii) 당 이용성에 있어서 트레할로스(Trehalose), 아라비노스(Arabinose), 및 글루코오즈(Glucose)를 이용하여 증식하며, 수크로오스(Sucrose), 파라티노스(Paratinose), 및 만니톨(Mannitol)을 이용하여 증식하지 못함;

iv) 젤라틴 액화(Gelatic liquefaction)에 양성반응; 또는

v) 서열번호 1의 16S rRNA를 포함.

본 발명자들은 충청남도 예산, 홍성, 서산, 아산 등 5개 지역의 대나무 숲과 야산의 부엽토 중에 존재하는 미생물을 분리, 동정하였으며, 분리된 미생물의 식물병균 항균활성, 생물학적 방제 효과 검정 등을 평가하여 우수한 효과를 가지는 미생물을 선별하였고, 이를 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)로 명명하였다.

버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)는 2015년 01월 19일자로 KACC(농업생명공학연구원)에 기탁하였고 기탁번호 KACC92026P를 부여받았다.

본 발명자들은 선발 균주를 16S rRNA 유전자의 염기서열 분석을 통하여 NCBI GeneBank의 DNA 데이터베이스와 상동성 검색을 수행하고, CLUSTAL X 프로그램 및 PHYLIP 프로그램을 이용하여 계통학적 위치를 확인한 결과, 버크홀데리아 라타 FJ7841281과 98%의 유사도를 갖는 버크홀데리아 라타(Burkholderia lata)로 확인되었다(Thompson JD et al., Nuc. Acid. Res. 25: 4867-82, 1997)(도 4 및 5).

본 발명의 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)는 식물병균에 대해 우수한 항균활성 및 생물적 방제 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 특히, 본 발명의 버크홀데리아속은 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides)에 우수한 효과가 있다는 사실을 실험을 통해 확인할 수 있었다. 상기 진균은 탄저병의 발병 원인이 되고, 특히 고추 탄저병의 발병 원인이 된다.

또한, 본 발명은 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P), 균주, 균체, 포자, 이의 배양액, 이러한 배양물의 건조물 또는 이러한 배양물의 추출물을 제공한다.

본 발명의 명세서에 있어서, 용어 '균체'는 균주의 파쇄된 세포벽 분획, 사균, 또는 건조균을 포함하는 의미이다. 배양액 중의 배양배지를 제거하고 농축된 균체만을 회수하기 위해 원심분리 또는 여과과정을 거칠 수 있으며 이러한 단계는 통상의 기술자의 필요에 따라 수행할 수 있다. 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 냉동하거나 냉동 건조하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다.

본 발명의 명세서에 있어서, 용어 '배양물의 추출물'은 배양물을 다양한 유기용매를 이용해 다양한 생리활성물질이 포함되도록 추출한 것을 의미하며, 이에 한정되는 것은 아니지만, C_1-4 알코올(예를 들어, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 아세톤 및 에틸아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 유기용매를 단독으로 사용하거나 2종 이상을 순차적으로 사용하여 추출을 수행할 수 있다.

본 발명의 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주는 통상적인 바실러스 속 미생물의 배양법에 의해 대량으로 배양할 수 있다. 배양 배지로는 탄소원, 질소원, 비타민 및 미네랄로 구성된 배지를 사용할 수 있다. 상기 배양을 위한 배지에는 고체배지 및 액체배지가 모두 포함될 수 있다. 예를 들어, NA(Nutrient Agar) 또는 TSA(Tryptic Soy Agar) 와 같은 고체배지를 사용할 수 있으며, 액체 배지로는 균주가 포함되어 있는 NB(Nutrient Broth), KB(King's medium B Broth), PSB(Peptone Sucrose Broth), 또는 TSB(Tryptic Soy Broth)를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직한 배지로는 NB 배지를 사용할 수 있다. 배양은 통상의 배양 조건으로 수행할 수 있다.

또한, 본 발명은 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)를 유효성분으로 포함하는 식물병 방제용 조성물을 제공한다.

아울러, 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)의 균주, 균체, 포자, 이의 배양액, 이러한 배양물의 건조물 또는 이러한 배양물의 추출물이 상기 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)를 대체하거나 또는 상기 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)에 추가하여 처리될 수 있다. 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)의 생균, 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)의 균주, 균체, 포자, 이의 배양액, 이러한 배양물의 건조물 또는 이러한 배양물의 추출물 중 어느 것을 1 이상 선택하여 처리할지 여부는 육묘 환경, 대상 식물의 종류 또는 경제성 등을 고려하여, 통상의 기술자가 적절히 선택할 수 있다.

본 발명은 또한 식물병 원인균인 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides), 스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum), 스클레로티움 세피보룸(Sclerotium cepivorum), 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea), 스템필리움속(Stemphylium sp.), 특히 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides) 증식 억제 및 사멸 효과가 뛰어난 조성물을 제공할 수 있으며, 이러한 조성물은 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주, 균체, 포자, 이의 배양액, 이러한 배양물의 건조물 또는 이러한 배양물의 추출물 중 어느 것을 하나 이상 선택한 것을 유효성분으로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 식물병 방제용 조성물은 식물병이 발생할 수 있는 채소 및 과일들, 예를 들어, 고추, 벼, 콩, 오이, 시금치, 쑥갓, 마, 감나무, 매화나무, 복숭아나무, 감귤나무, 밤나무, 사과나무 등에 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 특히, 본 발명은 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides)로 인해 발병되는 고추 탄저병의 방제에 효과적이다.

또한, 본 발명은 식물병 방제용 조성물을 살포 또는 도포하는 단계를 포함하는 식물병 방제 방법을 제공한다.

본 발명의 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)는 예컨대 식물 전체에의 처리, 식물근(root) 처리, 식물 종자 처리, 번식기 중의 식물 조직 처리, 또는 식물 파종이나 식수 전후에 식물 병해 방제용 매체에 포함시켜 처리하는 방법이 포함될 수 있으며, 이에 제한되지 않고, 당업계 공지된 다양한 방법으로 상기 식물 내지 식물 주변 토양에 처리될 수 있다. 또한, 상기 식물 내지 식물 주변 토양에의 처리는 살포, 도포, 관주, 인필트레이션, 분무, 주사, 코팅, 더스팅 또는 침지 등 당업계 공지된 다양한 방법으로 수행될 수 있으며, 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)의 상태, 육묘 환경, 계절, 대상 식물의 종류, 대상 병원균의 종류 또는 경제성 등을 고려하여 통상의 기술자가 적절히 선택할 수 있다.

한편, 본 발명의 조성물은, 실제 포장에서 사용하기 적합한 안정적인 제제화를 목적으로 생화학 농약으로 사용가능한 계면활성제 또는 증량제 등을 사용하여 수화제, 입상수화제, 액상수화제, 액제, 수용제, 수용성입제 또는 캡슐화제의 형태로 제조될 수 있다. 상기 계면활성제의 일예로 알킬(C₈～C₁₂)아릴설포네이트, 디알킬(C₃～C₆)아릴설포네이트, 디알킬(C₈～C₁₂)설포숙시네이트, 리그닌설포네이트, 나프탈렌설포네이트축합물, 나프탈렌설포네이트포르말린축합물, 알킬(C₈～C₁₂)나프탈렌설포네이트포르말린축합물, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐설포네이트와 같은 설포네이트 화합물의 나트륨염 또는 칼슘염, 알킬(C₈～C₁₂)설페이트, 알킬(C₈～C₁₂)아릴설페이트, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)설페이트, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐설페이트와 같은 설페이트 화합물의 나트륨염 또는 칼슘염, 폴리옥시알킬렌숙시네이트와 같은 숙시네이트화합물의 나트륨염 또는 칼슘염, 나트륨 벤조에이트, 알킬카르복실레이트 등의 음이온성 계면활성제, 폴리옥시에틸렌알킬(C₁₂～C₁₈)에테르, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐에테르, 폴리옥시에틸렌알킬(C₈～C₁₂)페닐폴리머, 에틸렌옥사이드 프로필렌옥사이드 코폴리머와 같은 비이온성 계면활성제, 폴리카복실레이트, 트리톤 100 및 트윈 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상이 혼합되어 사용될 수 있으며, 이들 이외의 다른 계면활성제들도 사용될 수 있음은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 갖은 자에게는 용이하게 이해될 수 있을 것이다.

증량제로는 벤토나이트(bentonite), 활석, 클레이, 카올린, 탄산칼슘, 규사, 경석, 규조토, 산성 백토, 제올라이트, 펄라이트, 화이트 카본, 암모늄 설페이트, 요소, 포도당, 덱스트린(dextrin), 콩가루, 쌀, 밀, 황토, 포도당 및 전분, 물 등이 단독으로 또는 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있으며, 이들 이외의 다른 증량제들도 사용될 수 있음은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 갖은 자에게는 용이하게 이해될 수 있을 것이다.

또한, 본 발명은 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주를 배양하는 단계를 포함하는 식물병 방제용 조성물의 제조 방법을 제공한다. 상기 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주의 배양 방법 및 식물의 종자 전염병 방제용 조성물의 제조 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있으며, 특정 방법에 특별히 제한되는 것은 아니다.

상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명에서 새롭게 분리한 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)는 여러 가지 식물병에 대해 우수한 방제 활성을 나타내므로 환경친화적인 천연물 살균제의 개발 및 고부가가치의 유기농산물 생산에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주와 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides)를 대치배양하였을 때 병원균의 증식을 억제하는 것을 나타낸 사진이다.
도 2는 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주를 NA(Nutrien Agar, Difco USA) 배지에 배양하였을 때의 콜로니를 나타낸 사진이다.
도 3은 선발 길항미생물을 고추 탄저병에 감염된 생과실에 처리하여 탄저병 억제 효과를 확인한 사진이다.
도 4는 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주의 16S rRNA gene의 염기서열이다.
도 5는 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주의 16S rRNA gene의 계통학적 위치를 나타낸 그림이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

<실시예 1>

길항미생물 분리 및 선발

탄저병 및 역병이 발생한 식물이 재배되고 있는 토양으로부터 탄저병균 및 역병균에 대한 미생물을 분리하고자 하였다. 미생물의 분리를 위해 토양시료는 충남의 예산, 홍성, 서산, 아산 등 5개 지역의 대나무 숲과 야산에서 부엽토 250점을 채집하여 분리하였고, 미생물의 선발은 탄저병균, 역병균, 풋마름병균과의 대치배양에 의한 길항력 검정에 의해 1차 선발하였다. 길항력 검정에 의해 1차로 선발된 길항미생물의 분리는 NA(Nutrient Agar) 배지에서 희석평판배양법에 의하여 분리하였고, 선발된 균주는 유기용매를 이용하여 항균활성 물질의 생성 유무를 확인하였다.

분리된 미생물을 탄저병균, 역병균, 잿빛곰팡이병균, 풋마름병균과 대치배양한 결과 버크홀데리아 CAB13001 균주의 경우, 탄저병균에 대해 직경 25mm의 균사생육 저지원을 보였고(표 1, 도 1) 흑색썩음균핵병(Sclerotinia cepivorum), 균핵병(Sclerotinia sclerotiorum), 잿빛곰팡이병(Botrytis cineres), 잎마름병속균(Stemphylium sp.)에도 각각 20mm의 길항력을 나타냈다. 또한, 고추 탄저병균을 고추의 과실에 접종하여 병반을 형성시킨 후 선발된 균주의 배양액을 살포한 경우에도 병반억제 효과를 확인하였다(도 3). 따라서 본 시험에서 선발한 길항미생물은 고추 탄저병의 생물학적 방제 효과가 우수할 것으로 판단되었다.

<실시예 2>

선발된 길항미생물의 동정 및 생육특성 조사

선발된 길항미생물의 동정은 16s rRNA gene의 계통학적 위치로 확인하였고, 길항미생물의 특성조사는 트레할로스(Trehalose), 파라티노스(Paratinose), 만니톨(Mannitol), 수크로오스(Sucrose), 아라비노스(Arabinose) 및 글루코오즈(Glucose) 등에 대한 당 이용성, 젤라틴 액화 및 황산 스트렙토마이신(Streptomycin) 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm 농도에서의 내성 등을 조사하였다.

분자생물학적 동정은 DNA를 분리하여 16S rRNA의 염기서열을 구명하여 계통분류학적 위치를 확인하였다. 길항미생물의 16S rRNA를 증복하기 위해 하기 표 2의 프라이머를 사용하였으며, 16S rRNA 유전자의 염기서열은 NCBI GeneBank의 DNA 데이터베이스와 상동성 검색을 수행하고, CLUSTAL X 프로그램 및 PHYLIP 프로그램을 이용하여 계통학적 위치를 확인하였다(Thompson JD et al., Nuc. Acid. Res. 25: 4867-82, 1997) 16S rRNA의 염기서열에 기초한 분자계통학적 분석 결과, 서열번호 1의 16S rRNA의 염기서열을 나타내는 것을 특징으로 하며(도 4), 버크홀데리아속(Burkholderia)의 종을 포함하는 계통학적 그룹에 속하는 균주로서 버크홀데리아 라타(Burkholderia lata)와 높은 유사도를 나타내는 것으로 확인되었다(도 5).

구분	프라이머 서열
27F (서열번호 2)	5'-GTG CTG CAG AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3'
1492R (서열번호 3)	5'-CAC GGA TCC TAC GGG TAC CTT GTT ACG ACT T-3'

길항미생물은 황산 스트렙토마이신(Streptomycin) 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm 등 모든 농도에서 내성을 확인할 수 있었고, 당 이용성 검정결과 트레할로스(Trehalose), 아라비노스(Arabinose) 및 글루코오즈(Glucose)를 이용하여 증식하는 특성을 가지고 있었고, 젤라틴 액화(Gelatin liquefaction)에 양성반응이었다. 이러한 결과를 통해 본 시험에 사용된 길항미생물이 항생제에 대하여 내성을 가지고 있고, 여러 가지 당을 이용하여 증식하는 특성 등을 고려할 때 매우 우수한 길항미생물이라고 판단된다.

당 종류	Trehalose	Gelatin liquefaction	Sucrose	Paratinose	Arabinose	Glucose	Mannitol
당분해여부	+	+	-	-	+	+	-

한편, 선발된 버크홀데리아 라타 CAB13001 균주의 적정 생육온도는 25~30℃이며, 적정 pH는 6~7에서 세포 증식이 활발하였다. 선발된 길항미생물의 배양은 대표적인 세균배양 배지인 NB(Nutrient Broth, Difco USA), PSB(Peptone Sucrose Broth, Difco USA), KB(King's medium B Broth, Difco USA), LB(Luria-Bertani, Difco USA) 배지에서 모두 1×10⁷ 이상의 세포 농도로 증식하였다.

<실시예 3>

포장방제 효과검정

선발된 균주의 고추 탄저병 방제 효과를 검정하기 위하여 in vitro 간이 검정과 포장검정을 수행하였다. 기내 간이검정은 고추 생과에 상처를 낸 뒤 PDA에서 7일간 자란 균총을 절단하여 고추과실의 상처부위에 접종하였다. 접종 24시간 후 균총을 떼어내고 길항균을 분무처리한 후, 병반의 저지 효과를 조사하였다. 한편, 포장에서의 방제시험은 병징이 관찰되는 즉시 NB 배지에서 자란 배양액을 1×10⁷ 세포수/ml 농도로 희석하여 7일 간격으로 3회 식물체 전면에 살포하였다. 시험에 사용된 고추의 품종은 "배로따"를 사용하였으며, 길항미생물 처리구와 무처리, 대조약제 처리구를 3반복으로 수행하였고 발병 정도는 병든과율로 조사하였다.

선발된 길항미생물의 고추 탄저병 방제 효과를 간이적으로 검정하기 위하여 고추 생과에 탄저병균을 접종하고 길항미생물을 살포한 결과 도 3에서 나타낸 것과 같이 무처리와 비교하여 병반이 억제되는 효과를 확인하였다. 포장에서의 방제효과 시험에서는 길항미생물을 처리한 시험구의 방제가는 무처리 대비 84.2%로 높은 방제효과를 나타내었다(표 4).

[수학식]

방제가(%) = {(1-처리구의 병반면적율/무처리구의 병반면적율)×100}

국립농업과학원 농업유전자원센터

KACC92026P

20150119

<110> CHUNGCHEONGNAMDO(PROVINCE) <120> Composition for controlling plant disease using Burkholderia lata CAB13001 <130> P14-412 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1423 <212> DNA <213> Burkholderia lata CAB13001 <400> 1 aatctacgtg gtgaccgtcc tccttgcggt tagactagcc acttctggta aaacccactc 60 ccatggtgtg acgggcggtg tgtacaagac ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat 120 ccgcgattac tagcgattcc agcttcatgc actcgagttg cagagtgcaa tccggactac 180 gatcggtttt ctgggattag ctccccctcg cgggttggca accctctgtt ccgaccattg 240 tatgacgtgt gaagccctac ccataagggc catgaggact tgacgtcatc cccaccttcc 300 tccggtttgt caccggcagt ctccttagag tgctcttgcg tagcaactaa ggacaagggt 360 tgcgctcgtt gcgggactta acccaacatc tcacgacacg agctgacgac agccatgcag 420 cacctgtgta tcggttctct ttcgagcact cccacctctc agcgggattc cgaccatgtc 480 aagggtaggt aaggtttttc gcgttgcatc gaattaatcc acatcatcca ccgcttgtgc 540 gggtccccgt caattccttt gagttttaat cttgcgaccg tactccccag gcggtcaact 600 tcacgcgtta gctacgttac taaggaaatg aatccccaac aactagttga catcgtttag 660 ggcgtggact accagggtat ctaatcctgt ttgctcccca cgctttcgtg catgagcgtc 720 agtattggcc cagggggctg ccttcgccat cggtattcct ccacatctct acgcatttca 780 ctgctacacg tggaattcta cccccctctg ccatactcta gcctgccagt caccaatgca 840 gttcccaggt tgagcccggg gatttcacat cggtcttagc aaaccgcctg cgcacgcttt 900 acgcccagta attccgatta acgctcgcac cctacgtatt accgcggctg ctggcacgta 960 gttagccggt gcttattctt ccggtaccgt catcccccga ctgtattaga gccaaggatt 1020 tctttccgga caaaagtgct ttacaacccg aaggccttct tcacacacgc ggcattgctg 1080 gatcaggctt tcgcccattg tccaaaattc cccactgctg cctcccgtag gagtctgggc 1140 cgtgtctcag tcccagtgtg gctggtcgtc ctctcagacc agctactgat cgtcgccttg 1200 gtaggccttt accccaccaa ctagctaatc agccatcggc caaccctata gcgcgaggcc 1260 cgaaggtccc ccgctttcat ccgtagatcg tatgcggtat taatccggct ttcgccgggc 1320 tatcccccac tacaggacat gttccgatgt attactcacc cgttcgccac tcgccaccag 1380 gtgcaagcac ccgtgctgcc gttcgactgc atgttaagcn gcc 1423 <210> 2 <211> 29 <212> DNA <213> primer <400> 2 gtgctgcaga gagtttgatc ctggctcag 29 <210> 3 <211> 31 <212> DNA <213> primer <400> 3 cacggatcct acgggtacct tgttacgact t 31

Claims

식물병에 대해 방제 효과를 발휘하는 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P).
제1항에 있어서,
상기 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P)는 하기의 특성 중 하나 이상 갖는 것을 특징으로 하는 버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P):
i) 적정 생육 온도는 25℃~30℃;
ii) 적정 생육 pH는 6~7;
iii) 당 이용성에 있어서 트레할로스(Trehalose), 아라비노스(Arabinose), 및 글루코오즈(Glucose)를 이용하여 증식하며, 수크로오스(Sucrose), 파라티노스(Paratinose), 및 만니톨(Mannitol)을 이용하여 증식하지 못함;
iv) 젤라틴 액화(Gelatic liquefaction)에 양성반응; 또는
v) 서열번호 1의 16S rRNA를 포함.
버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주, 그의 배양액 또는 배양액 추출물을 유효성분으로 포함하며,
콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides)에 의한 탄저병, 스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum)에 의한 균핵병, 스클레로티움 세피보룸(Sclerotium cepivorum)에 의한 흑색썩음균핵병 및 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea)에 의한 잿빛곰팡이병으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 식물병 방제용 조성물.
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제3항에 있어서,
상기 배양액 추출물은, 배양액을 C_1-4 알콜, 아세톤 및 아틸아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 유기용매를 단독으로 사용하거나 2종 이상을 순차적으로 사용하여 배양액을 추출함으로써 얻어진 것임을 특징으로 하는, 식물병 방제용 조성물.
제3항의 식물병 방제용 조성물을 살포 또는 도포하는 단계를 포함하는 식물병 방제 방법.
버크홀데리아 라타 CAB13001(KACC92026P) 균주를 배양하는 단계를 포함하며,
콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides)에 의한 탄저병, 스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum)에 의한 균핵병, 스클레로티움 세피보룸(Sclerotium cepivorum)에 의한 흑색썩음균핵병 및 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea)에 의한 잿빛곰팡이병으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 식물병 방제용 조성물의 제조 방법.